CN117357539A - 一种丹参酮提取物的药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种丹参酮提取物的药物组合物及其应用，所述药物组合物包含活性组分丹参酮提取物、表面活性剂15‑羟基硬脂酸聚乙二醇酯或聚氧乙烯氢化蓖麻油或其混合物、油相中链甘油三酸酯。本发明具有现行技术无法达到的技术优势，丹参酮提取物被纳米化，其水溶液粒径不超过50nm，体外释放率显著提高，主成分生物利用度大幅提升，表现出显著心脏组织分布优势，具有应用于心脏疾病治疗的潜在用途。因此，本发明可有效改变丹参酮提取物生物利用度低、功能主治单一的诸多缺陷，为丹参酮提取物新制剂开发和临床应用范围的扩展奠定基础。

Description

一种丹参酮提取物的药物组合物及其应用

技术领域

本发明涉及药物制剂技术领域，特别的一种丹参酮提取物的药物组合物及其应用。

背景技术

丹参具有养血安神、通经止痛、活血祛瘀、清心除烦、凉血消肿之功效，临床上可广泛用于动脉疾病、冠心病、心绞痛、动脉粥样硬化、心肌缺血、肝纤维化和肝硬化等疾病的治疗。丹参酮提取物为丹参脂溶性提取物，含有隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB等多种活性成分。现代药理研究表明，丹参酮提取物也具有抗肿瘤、抗氧化、保护心血管、抗菌、消炎等的广泛药理作用。然而，丹参酮提取物水溶性很差，其口服生物利用度很低，受其影响，有关丹参酮提取物的制剂开发、临床应用等相关研究仍非常不充分。

目前，以丹参酮提取物为主要原料获批上市的制剂只有丹参酮胶囊，其功能主治也仅为抗菌消炎，且日口服剂量高达4g，大剂量和长时间口服给药可能表现出食欲增加、胃部不适、皮肤干燥、嗜睡等不良反应。现有丹参酮提取物相关技术涉及改良给药体系和制剂形式、筛选复方制剂、扩展功能主治等方面。CN101518510A将丹参酮制备成平均粒径不超过10nm的胶束，很好解决了丹参酮提取物的水溶性问题；CN102688151A将丹参酮制备成复合微乳，有效解决了丹参酮提取物亲水体系应用于化妆品的稳定性问题；CN107913277A公开了丹参酮在抗尿酸性肾病方面的用途；CN110025664A公开了用于防治脑梗死或血管性痴呆的含丹参酮提取物的药物组合物；CN110859845B公开了丹参酮类化合物在防治幽门螺杆菌感染方面的应用；CN112007005A将丹参酮制备成治疗冠心病的缓释微丸，为减少服药次数，提高患者依从性提供了可能性；CN113679726A公开了丹参提取物丹参酮I、丹参酮IIA、隐丹参酮、二氢丹参酮I等在抗新冠病毒方面的应用；CN115154408A公开了丹参酮提取物微乳水凝胶新型纳米载药体系及其制备方法。然而，现有技术鲜见涉及提高丹参酮提取物生物利用度、改善心脏组织分布等的相关研究。

因此，本发明针对丹参酮胶囊存在的提取物直接口服给药、绝对生物利用度低、功能主治单一、口服剂量大等制剂缺陷，开发一种口服生物利用度显著提高、具有显著心脏组织分布选择性的丹参酮提取物药物组合物，为丹参酮提取物新制剂开发、功能主治扩展、给药剂量降低等奠定良好基础。

发明内容

针对现有技术的上述不足，本发明的目的在于提供一种丹参酮提取物的药物组合物及其应用，解决丹参酮提取物水溶性问题，显著提高丹参酮I、丹参酮IIA等活性组分生物利用度，具有显著心脏组织分布选择性的药物组合物，为丰富丹参酮提取物新型制剂开发、扩展应用于心脏相关疾病治疗等奠定技术基础。

实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种丹参酮提取物的药物组合物，其特征在于，所述组合物包含活性成分丹参酮提取物、油相和表面活性剂；所述油相为中链甘油三酸酯，所述表面活性剂为15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯和聚氧乙烯氢化蓖麻油的任意一种或多种；

所述药物组合物的水溶液为粒径不超过50nm的红色澄清透明溶液；

所述药物组合物在pH1.2、4.5、6.8和7.4缓冲介质中的12小时释放率均不低于15％；

所述药物组合物具有显著心脏组织分布选择性，主要活性成分隐丹参酮和丹参酮IIA的小鼠心脏组织AUC分别不低于丹参酮胶囊的5倍和3倍。

进一步，按质量百分比计，丹参酮提取物为2～5％、油相为5～12％，余量为表面活性剂。以解决丹参酮提取物水溶性问题，显著提高丹参酮I、丹参酮IIA等活性组分生物利用度，可制备具有显著心脏组织分布选择性的药物组合物。

进一步，所述丹参酮提取物为丹参乙醇提取物，其质量符合中国药典2020年版一部丹参酮提取物的质量要求，其中含隐丹参酮不得少于2.1％(w/w)，丹参酮IIA不得少于9.8％(w/w)。

进一步，所述表面活性剂优化为聚氧乙烯氢化蓖麻油和15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯的混合物；按质量比计，聚氧乙烯氢化蓖麻油：15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯为1：2～6。

进一步，所述聚氧乙烯氢化蓖麻油选自聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油、聚氧乙烯(54)氢化蓖麻油、聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油中的任意一种或多种。

进一步，还包括助溶剂，按质量百分比计为10～40％，使其溶解更充分效果更好。

进一步，所述助溶剂为低分子聚乙二醇，选自聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400和聚乙二醇600的任意一种或多种。以保证使其溶解更充分，并且稳定性更好。

进一步，所述药物组合物采用如下方法制备而成：将所述活性成分丹参酮提取物、油相、表面活性剂和(助溶剂)置于容器中，充分混匀，然后于不超过40℃温度下搅拌至完全溶解。

进一步，所述药物组合物用于制备心脏相关疾病的药物。所述药物为口服溶液、颗粒剂、片剂、胶囊或丸剂。

相比现有技术，本发明具有如下有益效果：

1、本发明提供了一种能有效解决丹参酮提取物水溶性问题的纳米技术方案。本发明制备的丹参酮提取物药物组合物具有很好的水溶性，其水溶液为粒径不超过50nm的红色澄清透明溶液，且稳定性良好，典型粒径分布图详见图1，可见，本发明有效解决了丹参酮提取物的水溶性问题，并使其药物分子纳米化形成粒径不超过50nm的稳定且均一的纳米溶液。然而，已上市丹参酮胶囊为丹参酮提取物粉末直接灌装胶囊而制得，内容物完全不溶于水。因此，本发明可有效改变丹参酮提取物分子的存在状态。

2、本发明提供了一种能稳定释放的口服丹参酮提取物药物组合物。本发明制备的丹参酮提取物药物组合物在pH1.2、4.5、6.8和7.4的缓冲介质中均具有良好的释放行为，12小时累计释放均不低于15％，pH1.2、6.8和7.4的12小时累计释放均超过30％，典型释放曲线详见图2。然而，已上市丹参酮胶囊的内容物粉末在这四种缓冲介质中的12小时累计释放均不超过10％，pH4.5的12小时累计释放不超过5％，典型释放曲线详见图2，可见，本发明较丹参酮胶囊更有助于丹参酮提取物分子以分子状态在溶液中自由扩散。因此，本发明可有效改变丹参酮提取物分子的释放行为。

3、本发明提供了一种重要活性组分生物利用度显著提高的口服丹参酮提取物药物组合物。小鼠试验结果表明，本发明制备的丹参酮提取物药物组合物中丹参酮I和丹参酮IIA的血浆AUC分别约为丹参酮胶囊血浆AUC的1.4倍和9.7倍，典型血浆药时曲线详见图3，可见，本发明较丹参酮胶囊更有助于丹参酮提取物重要活性分子的胃肠道吸收，增加血浆暴露量。因此，本发明可显著提高丹参酮提取物中部分重要活性组分的口服生物利用度。

4、本发明提供了一种具有显著心脏组织分布选择性的口服丹参酮提取物药物组合物。小鼠试验结果表明，本发明制备的丹参酮提取物药物组合物中隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA的心脏组织AUC分别约为丹参酮胶囊血浆AUC的7.5倍、1.7倍和4.6倍，典型心脏组织药时曲线详见图4，可见，本发明较丹参酮胶囊更有助于丹参酮提取物重要活性分子在心脏组织中富集，增加心脏组织的药物浓度。因此，本发明可显著提高丹参酮提取物中重要活性组分的心脏组织分布，具有显著心脏组织分布选择性。

5、本发明提供了一种具有潜在用于心脏相关疾病治疗的口服丹参酮提取物药物组合物。目前，已上市丹参酮胶囊的【功能与主治】仅为“抗菌消炎。用于痤疮、扁桃腺炎、外耳道炎、疖、外伤感染、烧伤感染、乳腺炎、蜂窝组织炎、骨髓炎等”，未涉及心脏相关疾病的治疗。然而，现有涉及丹参酮提取物主要活性组分丹参酮IIA的相关已上市制剂有丹参酮ⅡA磺酸钠注射液和冠心丹参胶囊。丹参酮ⅡA磺酸钠注射液的【适应症】为“用于冠心病、心绞痛、心肌梗死的辅助治疗”。冠心丹参胶囊的质控成分仅为丹参酮IIA，【功能与主治】为“活性化瘀，理气止痛。用于气滞血瘀所致的胸痹，症见胸闷刺痛、心悸气短；冠心病心绞痛见上述证候者”。可见，丹参酮ⅡA对心脏相关疾病的疗效是明确的，只是现行丹参酮胶囊的制剂缺陷无法充分发挥丹参酮提取物对心脏相关疾病的治疗效果。因此，本发明通过有效改变丹参酮提取物分子的存在状态和释放行为，实现显著提高重要活性组分的口服生物利用度和心脏组织分布优势，为丹参酮提取物应用于心脏相关疾病治疗奠定了良好基础。

附图说明

图1为本发明的典型粒径分布图；

图2为本发明和丹参酮胶囊对照的典型释放曲线；

图3为本发明和丹参酮胶囊对照的典型血浆药时曲线；

图4为本发明和丹参酮胶囊对照的典型心脏组织药时曲线。

具体实施方式

下面结合本发明的实施阶段，用具体实施例对本发明作进一步的详细说明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。

实施例1～15：本发明的部分丹参酮提取物药物组合物

以中链甘油三酸酯(MCT)为油相，以15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯(HS15)或/和聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油(RH40)为表面活性剂，以聚乙二醇400(PEG400)为助溶剂，以粒径大小和包封率为评价指标，进行丹参酮提取物增溶体系的研究和优化。

实验步骤：准确称取约7.0mg丹参酮提取物，置于玻璃瓶中，按实施例1～15组分量加入表面活性剂、中链甘油三酸酯和助溶剂，常温磁力搅拌至丹参酮提取物完全溶解，即得本发明药物组合物。

外观和粒径评价：取本发明药物组合物适量(约与7mg丹参酮提取物)，加入2ml水，用肉眼观察溶液状态应为红色澄清透明溶液，采用马尔文激光粒度仪测定溶液平均粒径应不超过50nm，试验结果见表1和表2。可见，本发明可有效增溶丹参酮提取物，所形成的药物组合物的水溶液呈平均粒径应不超过50nm的红色澄清透明溶液。

表1：为本发明的部分实施例(1)

表2：为本发明的部分实施例(2)

实施例16～28：本发明的部分优化及扩展结果

按实施例1～15的实验步骤，采用响应面法对本发明进行优化，并将优化结果扩展到表面活性剂聚氧乙烯(54)氢化蓖麻油(RH54)和聚氧乙烯(60)氢化蓖麻油(RH60)，以及助溶剂聚乙二醇600(PEG600)、聚乙二醇300(PEG300)和聚乙二醇200(PEG200)，结果见表3，典型粒径分布见附图1。可见，本发明有效解决了丹参酮提取物的水溶性问题，并使其药物分子纳米化形成粒径不超过50nm的稳定且均一的纳米溶液。然而，已上市丹参酮胶囊为丹参酮提取物粉末直接灌装胶囊而制得，内容物完全不溶于水。因此，本发明可有效改变丹参酮提取物分子的存在状态。因此，本发明的优化组合物具有良好的可扩展性，所获得水溶液的粒径分布一致性良好。

表3：为本发明的部分优化实施例

以下为本发明的实施效果证明试验例。

实施效果试验例1：不同pH释放介质中的释放试验

以实施例11、16、20、24和27为基础开展本发明与对照药丹参酮胶囊在pH1.2、4.5、6.8和7.4缓冲介质中的对比释放试验。

试验步骤：(1)样品处理：将本发明组合物配制成3mg/ml水溶液；取出对照药丹参酮胶囊内容物，用0.5％羧甲基纤维素钠水溶液配制成3mg/ml混悬液。(2)释放试验：分别量取本发明水溶液和对照药内容物混悬液1ml，置于预处理过的分子量500Da的透析袋中，用细线扎紧两端，置于37℃水浴预热的250ml释放介质中，50rpm磁力搅拌，分别于0.5、1、2、3、4、9、12、24h时间点取释放介质3ml，并及时补充3ml同温同质释放介质。(3)样品测定：按照实施例58～83所述丹参酮提取物含量测定方法进行丹参酮提取物含量测定，根据测定结果绘制释放曲线。

试验结果：本发明实施例11、16、20、24和27与对照药丹参酮胶囊在pH1.2、4.5、6.8和7.4缓冲介质中的12小时累计释放率对比结果见表4，典型释放曲线对比详见附图2。对比对照药丹参酮胶囊的释放数据，本发明可显著提高丹参酮提取物分子透过500Da透析袋的效率，12小时累计释放均不低于15％，pH1.2、6.8和7.4的12小时累计释放均超过30％，然而，对照药丹参酮胶囊的内容物粉末在这四种缓冲介质中的12小时累计释放均不超过10％，pH4.5的12小时累计释放不超过5％。可见，本发明丹参酮提取物分子的释放行为完全不同于对照药丹参酮胶囊。

表4：为本发明部分实施例的释放效果

实施效果试验例2：血浆药时曲线测定

开展本发明实施例16与对照药丹参酮胶囊在昆明小鼠中的血浆药时曲线对比。

试验步骤：(1)血浆样品采集与预处理：取20±2g的雄性昆明小鼠，动物房饲养一周，试验前动物禁食不禁水12h，然后随机分为两组，一组为试验组，灌胃口服本发明的水溶液，另一组为对照组，取出适量丹参酮胶囊的内容物混悬于水中后，灌胃口服给药。试验前对动物进行称重编号，按照130mg/kg的剂量口服给药，给药后于0.5、1、2、3、4、6、9、12、24、36h摘眼球取血0.5ml，置于离心管中静置30min以上，然后在6000rpm条件下离心10min，取上层的血清并存储于-80℃冷冻室备用。

(2)血浆样品处理：取出冻存的血浆样品，放置室温溶融后，精密移取血浆200μl于离心管中，加入5μg/ml地西泮内标溶液50μl，涡旋3min后加入2ml丙酮溶液，再次涡旋3min，然后6000rpm离心10min，将上清液转移至另一干净的离心管中，重复上述的萃取操作两次，合并上清液，氮气吹干溶剂后，加入200μl色谱级甲醇复溶，超声3min后涡旋3min，在10000rpm条件下离心10min，取上清液20μl进行HPLC分析。

(3)色谱条件：色谱柱为Agilent Eclipse-C18(4.6mm×250mm，5μm)，流动相A为乙腈，流动相B为0.026％磷酸溶液，检测波长270nm，柱温25℃，流速1.0ml/min，梯度洗脱程序见下表。

(4)数据处理与分析

采用GraphPad Prism 8数据处理软件进行数据分析与血药浓度-时间曲线绘制，采用PKSolver 2.0分析软件进行相关药动学参数计算。

试验结果：本发明实施例16与对照药丹参酮胶囊的小鼠血浆药时曲线对比详见附图3，相关药动学参数对比结果见表5。本发明的丹参酮I和丹参酮IIA血浆AUC分别约为丹参酮胶囊血浆AUC的1.4倍和9.7倍。可见，本发明丹参酮提取物中丹参酮I和丹参酮IIA的口服生物利用度显著高于对照药丹参酮胶囊。

表5：为本发明实施例16与对照药丹参酮胶囊的小鼠血浆药动学参数对比(n＝6)

实施效果试验例3：心脏组织分布试验

开展本发明实施例16与对照药丹参酮胶囊在昆明小鼠中的心脏组织药时曲线对比。

试验步骤：(1)心脏组织样品采集与预处理：取20±2g的雄性昆明小鼠，动物房饲养一周，试验前动物禁食不禁水12h，然后随机分为两组，一组为试验组，灌胃口服本发明的水溶液，另一组为对照组，取出适量丹参酮胶囊的内容物混悬于水中后，灌胃口服给药。试验前对动物进行称重编号，按照130mg/kg的剂量口服给药，给药后于0.5、1、2、3、4、6、9、12、24、36h断颈处死小鼠，立即解剖，用手术镊和手术剪小心取出完整的组织，用生理盐水清洗干净，并用滤纸吸干水渍，置于离心管中，-80℃保存待用。

(2)心脏组织样品处理：取出冻存的心脏组织样品放置室温溶融后，精密称量组织样品重量，放入离心管中，然后用生理盐水稀释一定倍数后进行高速分散，得到各组织的匀浆液。精密移取组织匀浆液300μl，加入5μg/ml地西泮内标溶液50μl，加入2ml丙酮溶液，涡旋3min后，在10000rpm条件下离心10min，取出上清液，再加入2ml丙酮溶液重复上述的萃取操作，并合并上清液，氮气吹干溶剂后，加入200μl甲醇复溶，超声3min后涡旋3min，然后在10000rpm条件下离心10min，取上清液30μl进行HPLC分析。

(3)色谱条件和数据处理：同实施效果试验例2。

试验结果：本发明实施例16与对照药丹参酮胶囊的小鼠心脏组织药时曲线对比详见附图4，相关药动学参数对比结果见表6。本发明的隐丹参酮、丹参酮I和丹参酮IIA的心脏组织AUC分别约为丹参酮胶囊血浆AUC的7.5倍、1.7倍和4.6倍。可见，以丹参酮胶囊为参照，本发明的丹参酮提取物中重要活性组分在心脏组织中具有显著分布优势。

表6：为本发明实施例16与对照药丹参酮胶囊的小鼠心脏组织药动学参数对比(n＝6)

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不以本发明为限制，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种丹参酮提取物的药物组合物，其特征在于，所述组合物包含活性成分丹参酮提取物、油相和表面活性剂；所述油相为中链甘油三酸酯，所述表面活性剂为15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯和聚氧乙烯氢化蓖麻油的任意一种或多种；

所述药物组合物的水溶液为粒径不超过50nm的红色澄清透明溶液；

所述药物组合物在pH1.2、4.5、6.8和7.4缓冲介质中的12小时释放率均不低于15%；

所述药物组合物具有显著心脏组织分布选择性，主要活性成分隐丹参酮和丹参酮IIA的小鼠心脏组织AUC分别不低于丹参酮胶囊的5倍和3倍。

2.根据权利要求1所述药物组合物，其特征在于，按质量百分比计，丹参酮提取物为2～5%、油相为5～12%，余量为表面活性剂。

3.根据权利要求2所述药物组合物，其特征在于，还包括助溶剂，按质量百分比计为10～40%。

4.根据权利要求1所述药物组合物，其特征在于，所述丹参酮提取物为丹参乙醇提取物，其质量符合中国药典2020年版一部丹参酮提取物的质量要求，其中含隐丹参酮不得少于2.1%（w/w），丹参酮IIA不得少于9.8%（w/w）。

5.根据权利要求1所述药物组合物，其特征在于，所述表面活性剂优化为聚氧乙烯氢化蓖麻油和15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯的混合物；按质量比计，聚氧乙烯氢化蓖麻油：15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯为1：2～6。

6.根据权利要求1或5所述药物组合物，其特征在于，所述聚氧乙烯氢化蓖麻油选自聚氧乙烯（40）氢化蓖麻油、聚氧乙烯（54）氢化蓖麻油、聚氧乙烯（60）氢化蓖麻油中的任意一种或多种。

7.根据权利要求3所述药物组合物，其特征在于，所述助溶剂为低分子聚乙二醇，选自聚乙二醇200、聚乙二醇300、聚乙二醇400和聚乙二醇600的任意一种或多种。

8.根据权利要求1～7任一所述药物组合物，其特征在于，采用如下方法制备而成：将所述活性成分丹参酮提取物、表面活性剂、油相和助溶剂置于容器中，充分混匀，然后于不超过40℃温度下搅拌至完全溶解。

9.一种丹参酮提取物的药物组合物的应用，其特征在于，所述药物组合物用于制备心脏相关疾病的药物。

10.根据权利要求9所述丹参酮提取物的药物组合物的应用，其特征在于，所述药物为口服溶液、颗粒剂、片剂、胶囊或丸剂。