CN117210606A - 芒果细菌性角斑病抗性基因的kasp标记及应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了芒果细菌性角斑病抗性基因的KASP标记及其应用，涉及分子育种技术领域，该KASP标记位于芒果15号染色体第1,299,510位碱基，碱基多态性为G/A。本发明提供的KASP标记与芒果的细菌性角斑病抗性表现显著相关，与表型吻合度高、鉴定准确率高，可用于抗细菌性角斑病的芒果品种快速筛选和育种中。
Description
本申请要求于2022年10月20日提交中国专利局、申请号为202211286279.5、发明名称为“芒果细菌性角斑病抗性基因的KASP标记及应用”的中国专利申请的优先权，其全部内容通过引用结合在本申请中。
技术领域
本发明涉及分子育种技术领域，尤其涉及一种芒果细菌性角斑病抗性基因的KASP标记及其应用、抗细菌性角斑病芒果品种的鉴定方法及鉴定试剂盒。
背景技术
芒果(Mangifera indica Linn.)是一种多年生果树，原产于印度和东南亚，生长在热带和亚热带地区。细菌性角斑病(Xanthomonas citri pv.mangiferaeindicae)是由柑橘黄单胞菌芒果致病变种所引起的一种严重的细菌性病害，分布广泛，发病时危害树梢、树叶以及芒果果实，造成芒果落叶、果面疤痕密布，树枝呈斑点状溃烂。严重危害着芒果的生产和发展，每年导致芒果产量损失40％至80％。目前针对植物病害，进行抗病育种仍是最为经济有效的方式。开发和筛选出与芒果细菌性角斑病抗性基因连锁的分子标记，用于不同芒果品种(系)抗病性检测，能够为芒果细菌性角斑病抗性鉴定和芒果抗病育种提供准确快速的研究方法，确保我国芒果产业可持续发展的重大需求，也可为分子标记辅助选择及分子育种改良芒果抗病性提供重要的参考依据。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供了一种可快速有效鉴定芒果细菌性角斑病抗性基因的KASP标记及其应用和鉴定试剂盒，该KASP标记与芒果的细菌性角斑病抗性表现显著相关，与表型吻合度高、鉴定准确率高，可用于抗细菌性角斑病的芒果品种快速筛选和育种中。
为了实现上述目的，本发明的第一方面提供了一种芒果细菌性角斑病抗性基因的KASP标记，该KASP标记位于芒果15号染色体第1,299,510位碱基，碱基多态性为G/A，由亮氨酸变为缬氨酸，位于HSP83A(热休克蛋白)基因的编码区。抗细菌性角斑病芒果品种的KASP标记为“A”，非抗细菌性角斑病芒果品种的KASP标记位点为“G”。
在本发明的一些具体实施方式中，携带所述的KASP标记的核苷酸序列如SEQ IDNO.1或SEQ ID NO.2所示：
抗病材料‘热农1号’携带所述KASP标记的序列如SEQ ID NO.1(339bp)所示：
CAGACACCACAACTTTCTCTACTTTGTCCCCCAGAATTTCCTTGATTGTCTTACACAGGTTCTCAAAGGACTTCTTCTTTTCCTCCTTTTTCTGCTTATCTTCCTCATCTTCATCAAGCTTTAGCCCTTCTTTGGTGGCCGAAACCAGCTTCTTACCATCATACTCCTTCAATTGACCAACAACATACTCATCAATGGCATCCACCATGTACAGCACTTCATATCCCTTCTTCTTGAGCTTCTCGAGGAAAGGAGAATTCTCAACAGCTTTCTTACTTTCACCAGTGATGTAGTAGATATCCTTTTGGCCCTCCTTCATCCTTGTAACATAGTCTTTC；
其中的第184位为所述KASP标记，多态性为“A”；
感病材料‘凯特’携带所述KASP标记的序列如SEQ ID NO.2(352bp)所示：
CAACAATCCTATCAGACACCACAACTTTCTCTATTTTGTCCCCCAGAATTTCCTTGATTGTCTTGCACAGGTTCTCAAAGGACTTCTTCTTTTCCTCCTTTTTCTGCTTATCTTCCTCATCTTCATCAAGCTTTAGCCCTTCTTTGGTGGCCGAAACCAGCTTCTTACCATCATACTCCTTCAATTGACCAACAGCATACTCATCAATGGCATCCACCATGTACAGCACTTCATATCCCTTCTTCTTGAGCTTCTCGAGGAAAGGAGAATTCTCAACAGCTTTCTTACTTTCACCAGTGATGTAGTAGATATCCTTTTGGCCCTCCTTCATCCTTGTAACATAGTCTTTCA；
其中的第196位为所述KASP标记，多态性为“G”。
本发明所述的芒果15号染色体序列为芒果全基因重组测序的结果，参见发明人发表的论文《基于全基因重测序的芒果细菌性角斑病抗性相关SNP分析》(徐志豪,周思思,詹儒林等.基于全基因重测序的芒果细菌性角斑病抗性相关SNP分析[J/OL].分子植物育种:1-14[2023-10-10])。
在本发明的一些具体实施方式中，携带所述的KASP标记的核苷酸序列如SEQ IDNO.6或SEQ ID NO.7所示：
抗病材料‘热农1号’携带所述KASP标记的序列如SEQ ID NO.6(111bp)所示：
TCCTCATCTTCATCAAGCTTTAGCCCTTCTTTGGTGGCCGAAACCAGCTTCTTACCATCATACTCCTTCAACTGACCAACAGAGCATACTCATCAATGGCATCCACC；
其中的第83位为所述KASP标记，多态性为“A”；
感病材料‘凯特’携带所述KASP标记的序列如SEQ ID NO.7(111bp)所示：
TCCTCATCTTCATCAAGCTTTAGCCCTTCTTTGGTGGCCGAAACCAGCTTCTTACCATCATACTCCTTCAACTGACCAACAGGGCATACTCATCAATGGCATCCACC；
其中的第83位为所述KASP标记，多态性为“G”。
本发明的第二方面提供了上述技术方案所述KASP标记在鉴定抗细菌性角斑病的芒果品种中的应用。具体的，所述鉴定可以在芒果品种选育中使用。
本发明的第三方提供了一种抗细菌性角斑病的芒果品种鉴定方法，包括以下步骤：
(1)提取待测样本DNA；
(2)利用可包含前述技术方案所述KASP标记的引物组，对待测样本DNA进行PCR扩增，得到扩增产物；
所述引物组中包括第一正向引物、第二正向引物和通用反向引物，第一正向引物可扩增包括KASP标记为A时的序列、第二正向引物可扩张包括KASP标记为G时的序列；第一正向引物、第二正向引物均设置有可与荧光标记结合的特异性序列，第一正向引物、第二正向引物且可结合的荧光标记不同；
(3)使扩增产物与荧光标记结合，检测荧光标记；
若检测到可与第一正向引物结合的荧光，则待测样本的KASP标记多态性为A，鉴定为抗细菌性角斑病的芒果品种；
若若检测到可与第二正向引物结合的荧光，则待测样本的KASP标记多态性为G，鉴定为抗细菌性角斑病的芒果品种。
优选地，步骤(2)所述的引物组包括：
第一正向引物F1：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTAGCTGCTACACACTCGGCCT，核酸序列如SEQ ID NO.3所示；携带有可与HEX荧光标记结合的特异性序列；
第二正向引物F2：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAGCTGCTACACACTCGGCCC，核酸序列如SEQ ID NO.4所示；携带有可与FAM荧光标记结合的特异性序列；
通用反向引物R：GCTGGGGAAAGTTGTTCAATATG，核酸序列如SEQ ID NO.5所示。
优选地，步骤(2)所述的引物组包括：
第一正向引物F3：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGATGCCATTGATGAGTATGCT，核酸序列如SEQ ID NO.8所示；携带有可与HEX荧光标记结合的特异性序列；
第二正向引物F4：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTGGATGCCATTGATGAGTATGCC，核酸序列如SEQ ID NO.9所示；携带有可与FAM荧光标记结合的特异性序列；
通用反向引物R1：TCTTCATCAAGCTTTAGCCCTTCT，核酸序列如SEQ ID NO.10所示。
上述引物组中的特异性序列部分仅为示例，本领域技术人员可以根据需要选择或设计可与荧光标记结合的特异性序列。
优选地，步骤(2)所述PCR扩增反应体系包括：待测样本DNA 1μL，PARMS Mix 3μL，引物组0.45μL和ddH2O 1.5μL；
其中，引物组中的第一正向引物、第二正向引物和通用反向引物体积比为1:1:2。
优选地，步骤(2)所述PCR扩增反应程序依次为：94℃15min；94℃20s，65℃1min，10个循环，降温速度为-0.7℃/循环；94℃20s，57℃1min，30-35个循环；35℃1min。
优选地，所述待测样本为纯合子。
本发明的第四方面提供了一种抗细菌性角斑病的芒果品种的鉴定试剂盒，包括用于鉴定的引物组，所述引物组包括：
第一正向引物：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTAGCTGCTACACACTCGGCCT，核酸序列如SEQID NO.3所示；
第二正向引物：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAGCTGCTACACACTCGGCCC，核酸序列如SEQID NO.4所示；
通用反向引物：GCTGGGGAAAGTTGTTCAATATG，核酸序列如SEQ ID NO.5所示。
优选地，还包括DNA提取试剂、PCR扩增试剂、HEX荧光标记和FAM荧光标记中的一种或多种。
本发明的第五方面提供了一种抗细菌性角斑病的芒果品种的鉴定试剂盒，包括用于鉴定的引物组，所述引物组包括：
第一正向引物F3：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGATGCCATTGATGAGTATGCT，核酸序列如SEQ ID NO.8所示；携带有可与HEX荧光标记结合的特异性序列；
第二正向引物F4：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTGGATGCCATTGATGAGTATGCC，核酸序列如SEQ ID NO.9所示；携带有可与FAM荧光标记结合的特异性序列；
通用反向引物R1：TCTTCATCAAGCTTTAGCCCTTCT，核酸序列如SEQ ID NO.10所示。
优选地，还包括DNA提取试剂、PCR扩增试剂、HEX荧光标记和FAM荧光标记中的一种或多种。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
本发明通过细菌性角斑病高抗品种‘热农1号’和高感品种‘凯特’的转录组和重测序分析进行基因功能富集分析筛选获得86个抗病相关KASP标记，根据已发表的25个芒果抗性表型鉴定结果，发现其中一个在15号染色体1,299,510bp处鉴定到了一个芒果细菌性角斑病抗性显著关联的多态性位点，该位点存在于HSP83A(热休克蛋白)基因的编码区，在高感材料‘凯特’为鸟嘌呤(G)，而在高抗材料‘热农1号’中突变为了腺嘌呤(A),由亮氨酸变为缬氨酸。经群体验证，根据表型五种类型高抗(1个)、中抗(1个)、中感(10个)，感病(9个)和高感(4个)五种类型间对细菌性角斑病菌的抗性反应(病情指数)差异达到极显著水平，开发出的KASP标记能将25个单株划分成2类，抗病品种(2个)和感病品种(23个)，能从基因型水平有效区分抗感材料。将上述开发的KASP标记应用在采集的320个自然群体的芒果品种中，发现36个抗病品种，284个感病品种。本发明所提供的分子标记可以作为芒果抗细菌性角斑病育种标记辅助选择，为培育遗传稳定的抗细菌性角斑病芒果新品种提供新的分子标记。
在本发明的一些具体实施方案中，携带所述的KASP标记的核苷酸序列如SEQ IDNO.6或SEQ ID NO.7所示。本发明所述的芒果15号染色体序列为芒果全基因重组测序的结果，参见发明人发表的论文《基于全基因重测序的芒果细菌性角斑病抗性相关SNP分析》(徐志豪,周思思,詹儒林等.基于全基因重测序的芒果细菌性角斑病抗性相关SNP分析[J/OL].分子植物育种:1-14[2023-10-10])。在本发明的一些具体实施方式中，SEQ ID NO.6所示的核苷酸序列可通过SEQ ID NO.8所示的第一正向引物和SEQ ID NO.10所示的通用反向引物扩增得到；SEQ ID NO.7所示的核苷酸序列可通过SEQ ID NO.9所示的第一正向引物和SEQID NO.10所示的通用反向引物扩增得到
附图说明
图1是开发的KASP标记对25份芒果分型图；
图2是基于KASP标记320个自然群群体分型图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，显然，所描述的实施例仅是本申请一部分实施方式，而不是全部的实施方式。需要说明的是，基于本发明中的这些实施例，本领域普通技术人员所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
实施例1
本实施例用来说明KASP标记在鉴定芒果细菌性角斑病抗性中的应用。
一、待测样本
25个待测的芒果样品信息如表1所示：
表1
二、鉴定过程
1.KASP标记信息：
芒果细菌性角斑病抗性基因的KASP标记，该KASP标记位于芒果15号染色体第1,299,510位碱基，碱基多态性为G/A，位于HSP83A(热休克蛋白)基因的编码区，由亮氨酸变为缬氨酸。抗细菌性角斑病芒果品种的KASP标记为“A”，非抗细菌性角斑病芒果品种的KASP标记位点为“G”。
2.KASP标记引物组：
第一正向引物F1：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTAGCTGCTACACACTCGGCCT，核酸序列如SEQ ID NO.3所示；携带有可与HEX荧光标记结合的特异性序列；
第二正向引物F2：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAGCTGCTACACACTCGGCCC，核酸序列如SEQ ID NO.4所示；携带有可与FAM荧光标记结合的特异性序列；
通用反向引物R：GCTGGGGAAAGTTGTTCAATATG，核酸序列如SEQ ID NO.5所示。
3.提取叶片DNA
采用CTAB法提取320个自然群体的叶片总DNA。方法为：取单株幼叶放于2mL离心管中，加入两粒钢珠，750uL CTAB提取缓冲溶液(60℃预热)，研磨机60HZ/90s研磨，65℃放置30分钟，中间每5分钟缓慢摇匀1次，采用CTAB快速提取DNA试剂盒完成DNA的提取。用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测其纯度，分光光度计检测其浓度。最终稀释成50ng/uL的浓度，-20℃储存备用。
4.PCR及实时定量荧光检测
PCR反应体系为6μL，包含1μL提取的样品DNA，3μL PARMS Mix，0.45μL Primer Mix(引物组中的第一正向引物、第二正向引物和通用反向引物体积比为1:1:2)和1.5μL ddH2O，。
Touch down反应体系为94℃15min；94℃20s，65℃1min(-0.7℃/循环)，10个循环；94℃20s，57℃1min，30～35个循环；35℃1min。
扩增产物利用Applied BiosystemsTM QuantStudioTM 6进行终点信号读取，并且利用其自带软件进行SNP分型，黑色为阴性对照，红色荧光表示感病基因型，绿色荧光表示中间型，蓝色表示抗病型(具体的荧光信号颜色可根据实验需要选择)。
三、实验结果
结果如图1所示，利用本发明提供的KASP标记对25份芒果样品进行细菌性角斑病抗性的鉴定，能将25个单株划分成2类，抗病品种(2个)和感病品种(23个)，能从基因型水平有效区分抗感材料。
实施例2
本实施例用来说明KASP标记在鉴定芒果细菌性角斑病抗性中的应用。
一、待测样本
待测的320个芒果样品均采集自云南华坪，繁殖方式均为嫁接，品种信息如表2所示：
表2
二、鉴定过程
1.KASP标记信息：
芒果细菌性角斑病抗性基因的KASP标记，该KASP标记位于芒果15号染色体第1,299,510位碱基，碱基多态性为G/A，位于HSP83A(热休克蛋白)基因的编码区，由亮氨酸变为缬氨酸。抗细菌性角斑病芒果品种的KASP标记为“A”，非抗细菌性角斑病芒果品种的KASP标记位点为“G”。
2.KASP标记引物组：
第一正向引物F1：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTAGCTGCTACACACTCGGCCT，核酸序列如SEQ ID NO.3所示；携带有可与HEX荧光标记结合的特异性序列；
第二正向引物F2：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTAGCTGCTACACACTCGGCCC，核酸序列如SEQ ID NO.4所示；携带有可与FAM荧光标记结合的特异性序列；
通用反向引物R：GCTGGGGAAAGTTGTTCAATATG，核酸序列如SEQ ID NO.5所示。
3.提取叶片DNA
采用CTAB法提取320个自然群体的叶片总DNA。方法为：取单株幼叶放于2mL离心管中，加入两粒钢珠，750uL CTAB提取缓冲溶液(60℃预热)，研磨机60HZ/90s研磨，65℃放置30分钟，中间每5分钟缓慢摇匀1次，采用CTAB快速提取DNA试剂盒完成DNA的提取。用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测其纯度，分光光度计检测其浓度。最终稀释成50ng/uL的浓度，-20℃储存备用。
4.PCR及实时定量荧光检测
PCR反应体系为6μL，包含1μL提取的样品DNA，3μL PARMS Mix，0.45μL Primer Mix(引物组中的第一正向引物、第二正向引物和通用反向引物体积比为1:1:2)和1.5μL ddH2O，。
Touch down反应体系为94℃15min；94℃20s，65℃1min(-0.7℃/循环)，10个循环；94℃20s，57℃1min，30～35个循环；35℃1min。
扩增产物利用Applied BiosystemsTM QuantStudioTM 6进行终点信号读取，并且利用其自带软件进行SNP分型，黑色为阴性对照，红色荧光表示感病基因型，绿色荧光表示中间型，蓝色表示抗病型(具体的荧光信号颜色可根据实验需要选择)。
三、实验结果
结果如图2所示，利用本发明提供的KASP标记对320份自然群体的芒果样品进行细菌性角斑病抗性的鉴定，发现36个抗病品种，284个感病品种。
实施例3
本实施例用来说明KASP标记在鉴定芒果细菌性角斑病抗性中的应用。
一、待测样本
25个待测的芒果样品信息如表1所示：
表1
二、鉴定过程
1.KASP标记信息：
芒果细菌性角斑病抗性基因的KASP标记，该KASP标记位于芒果15号染色体第1,299,510位碱基，碱基多态性为G/A，位于HSP83A(热休克蛋白)基因的编码区，由亮氨酸变为缬氨酸。抗细菌性角斑病芒果品种的KASP标记为“A”，非抗细菌性角斑病芒果品种的KASP标记位点为“G”。
2.KASP标记引物组：
第一正向引物F3：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGATGCCATTGATGAGTATGCT，核酸序列如SEQ ID NO.8所示；携带有可与HEX荧光标记结合的特异性序列；
第二正向引物F4：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTGGATGCCATTGATGAGTATGCC，核酸序列如SEQ ID NO.9所示；携带有可与FAM荧光标记结合的特异性序列；
通用反向引物R1：TCTTCATCAAGCTTTAGCCCTTCT，核酸序列如SEQ ID NO.10所示。
3.提取叶片DNA
采用CTAB法提取320个自然群体的叶片总DNA。方法为：取单株幼叶放于2mL离心管中，加入两粒钢珠，750uL CTAB提取缓冲溶液(60℃预热)，研磨机60HZ/90s研磨，65℃放置30分钟，中间每5分钟缓慢摇匀1次，采用CTAB快速提取DNA试剂盒完成DNA的提取。用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测其纯度，分光光度计检测其浓度。最终稀释成50ng/uL的浓度，-20℃储存备用。
4.PCR及实时定量荧光检测
PCR反应体系为6μL，包含1μL提取的样品DNA，3μL PARMS Mix，0.45μL Primer Mix(引物组中的第一正向引物、第二正向引物和通用反向引物体积比为1:1:2)和1.5μL ddH2O，。
Touch down反应体系为94℃15min；94℃20s，65℃1min(-0.7℃/循环)，10个循环；94℃20s，57℃1min，30～35个循环；35℃1min。
扩增产物利用Applied BiosystemsTM QuantStudioTM 6进行终点信号读取，并且利用其自带软件进行SNP分型，黑色为阴性对照，红色荧光表示感病基因型，绿色荧光表示中间型，蓝色表示抗病型(具体的荧光信号颜色可根据实验需要选择)。
三、实验结果
结果如图1所示，利用本发明提供的KASP标记对25份芒果样品进行细菌性角斑病抗性的鉴定，能将25个单株划分成2类，抗病品种(2个)和感病品种(23个)，能从基因型水平有效区分抗感材料。
实施例4
本实施例用来说明KASP标记在鉴定芒果细菌性角斑病抗性中的应用。
一、待测样本
待测的320个芒果样品均采集自云南华坪，繁殖方式均为嫁接，品种信息如表2所示：
表2
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二、鉴定过程
1.KASP标记信息：
芒果细菌性角斑病抗性基因的KASP标记，该KASP标记位于芒果15号染色体第1,299,510位碱基，碱基多态性为G/A，位于HSP83A(热休克蛋白)基因的编码区，由亮氨酸变为缬氨酸。抗细菌性角斑病芒果品种的KASP标记为“A”，非抗细菌性角斑病芒果品种的KASP标记位点为“G”。
2.KASP标记引物组：
第一正向引物F3：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGATGCCATTGATGAGTATGCT，核酸序列如SEQ ID NO.8所示；
第二正向引物F4：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTGGATGCCATTGATGAGTATGCC，核酸序列如SEQ ID NO.9所示；
通用反向引物R1：TCTTCATCAAGCTTTAGCCCTTCT，核酸序列如SEQ ID NO.10所示。
3.提取叶片DNA
采用CTAB法提取320个自然群体的叶片总DNA。方法为：取单株幼叶放于2mL离心管中，加入两粒钢珠，750uL CTAB提取缓冲溶液(60℃预热)，研磨机60HZ/90s研磨，65℃放置30分钟，中间每5分钟缓慢摇匀1次，采用CTAB快速提取DNA试剂盒完成DNA的提取。用0.8％琼脂糖凝胶电泳检测其纯度，分光光度计检测其浓度。最终稀释成50ng/uL的浓度，-20℃储存备用。
4.PCR及实时定量荧光检测
PCR反应体系为6μL，包含1μL提取的样品DNA，3μL PARMS Mix，0.45μL Primer Mix(引物组中的第一正向引物、第二正向引物和通用反向引物体积比为1:1:2)和1.5μL ddH2O，。
Touch down反应体系为94℃15min；94℃20s，65℃1min(-0.7℃/循环)，10个循环；94℃20s，57℃1min，30～35个循环；35℃1min。
扩增产物利用Applied BiosystemsTM QuantStudioTM 6进行终点信号读取，并且利用其自带软件进行SNP分型，黑色为阴性对照，红色荧光表示感病基因型，绿色荧光表示中间型，蓝色表示抗病型(具体的荧光信号颜色可根据实验需要选择)。
三、实验结果
结果如图2所示，利用本发明提供的KASP标记对320份自然群体的芒果样品进行细菌性角斑病抗性的鉴定，发现36个抗病品种，284个感病品种。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种芒果细菌性角斑病抗性基因的KASP标记，其特征在于，该KASP标记位于芒果15号染色体第1,299,510位碱基，碱基多态性为G/A。
2.根据权利要求1所述的KASP标记，其特征在于，包括权利要求1所述的KASP标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.6或SEQ ID NO.7所示：
SEQ ID NO.6：
TCCTCATCTTCATCAAGCTTTAGCCCTTCTTTGGTGGCCGAAACCAGCTTCTTACCATCAT ACTCCTTCAACTGACCAACAGAGCATACTCATCAATGGCATCCACC；其中的第83位为权利要求1所述的KASP标记；
SEQ ID NO.7：
TCCTCATCTTCATCAAGCTTTAGCCCTTCTTTGGTGGCCGAAACCAGCTTCTTACCATCAT ACTCCTTCAACTGACCAACAGGGCATACTCATCAATGGCATCCACC；
其中的第83位为权利要求1所述的KASP标记。
3.权利要求1或2所述KASP标记在鉴定抗细菌性角斑病的芒果品种中的应用。
4.一种抗细菌性角斑病的芒果品种鉴定方法，包括以下步骤：
(1)提取待测样本DNA；
(2)利用可包含权利要求1或2所述KASP标记的引物组，对待测样本DNA进行PCR扩增，得到扩增产物；
所述引物组中包括第一正向引物、第二正向引物和通用反向引物，第一正向引物可扩增包括KASP标记为A时的序列、第二正向引物可扩增包括KASP标记为G时的序列；第一正向引物、第二正向引物均设置有可与荧光标记结合的特异性序列，第一正向引物、第二正向引物且可结合的荧光标记不同；
(3)使扩增产物与荧光标记结合，检测荧光标记；
若检测到可与第一正向引物结合的荧光，则待测样本的KASP标记多态性为A，鉴定为抗细菌性角斑病的芒果品种；
若若检测到可与第二正向引物结合的荧光，则待测样本的KASP标记多态性为G，鉴定为感细菌性角斑病的芒果品种。
5.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)所述的引物组包括：
第一正向引物：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTGGATGCCATTGATGAGTATGCC，核酸序列如SEQID NO.8所示；
第二正向引物：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGATGCCATTGATGAGTATGCT，核酸序列如SEQID NO.9所示；
通用反向引物：TCTTCATCAAGCTTTAGCCCTTCT，核酸序列如SEQ ID NO.10所示。
6.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR扩增反应体系包括：待测样本DNA 1μL，PARMS Mix 3μL，引物组0.45μL和dd H2O 1.5μL；
其中，引物组中的第一正向引物、第二正向引物和通用反向引物体积比为1:1:2。
7.根据权利要求4或6所述的鉴定方法，其特征在于，步骤(2)所述PCR扩增反应程序依次为：94℃15min；94℃20s，65℃1min，10个循环，降温速度为-0.7℃/循环；94℃20s，57℃1min，30-35个循环；35℃1min。
8.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，所述待测样本为纯合子。
9.一种抗细菌性角斑病的芒果品种的鉴定试剂盒，其特征在于，包括用于鉴定的引物组，所述引物组包括：
第一正向引物：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTGGATGCCATTGATGAGTATGCC，核酸序列如SEQID NO.8所示；
第二正向引物：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTGGATGCCATTGATGAGTATGCT，核酸序列如SEQID NO.9所示；
通用反向引物：TCTTCATCAAGCTTTAGCCCTTCT，核酸序列如SEQ ID NO.10所示。
10.根据权利要求8所述的鉴定试剂盒，其特征在于，还包括DNA提取试剂、PCR扩增试剂、HEX荧光标记和FAM荧光标记中的一种或多种。
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