CN117203238A - Cd70结合剂、其偶联物及其使用方法 - Google Patents

Cd70结合剂、其偶联物及其使用方法 Download PDF

Info

Publication number
CN117203238A
CN117203238A CN202280030424.5A CN202280030424A CN117203238A CN 117203238 A CN117203238 A CN 117203238A CN 202280030424 A CN202280030424 A CN 202280030424A CN 117203238 A CN117203238 A CN 117203238A
Authority
CN
China
Prior art keywords
seq
conjugate
binding agent
chain variable
antibody
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202280030424.5A
Other languages
English (en)
Inventor
赵柏腾
王雷
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Profoundbio US Co
Original Assignee
Profoundbio US Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Profoundbio US Co filed Critical Profoundbio US Co
Publication of CN117203238A publication Critical patent/CN117203238A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2875—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the NGF/TNF superfamily, e.g. CD70, CD95L, CD153, CD154
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68037—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being a camptothecin [CPT] or derivatives
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/33—Crossreactivity, e.g. for species or epitope, or lack of said crossreactivity
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/77—Internalization into the cell
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide

Abstract

本公开提供用于治疗癌症及自身免疫疾病的CD70抗体、其抗原结合部分、其他结合剂及其CD70偶联物。

Description

CD70结合剂、其偶联物及其使用方法
关于序列表的声明
与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并且在此通过引用并入说明书中。包含序列列表的文本文件的名称为760270_40101WO_SEQUENCE_LISTING.txt。文本文件大小为23.6KB，创建于2022年4月20日，目前正通过EFS-Web以电子方式提交。
背景技术
CD70为细胞膜结合及分泌分子的肿瘤坏死因子(TNF)家族成员，这些分子由各种正常及恶性细胞类型表达。CD70为跨膜II型蛋白，其羧基端暴露于细胞外，且其氨基端在质膜的细胞质侧(Bowman等人，1994，J.Immunol.152:1756-61；Goodwin等人，1993，Cell 73:447-56)。人类CD70含有20个氨基酸的细胞质域、18个氨基酸的跨膜域及155个氨基酸的细胞外域以及两个潜力N连接糖基化位点(Bowman等人，见上文；Goodwin等人，见上文)基于其与TNF-α及TNF-β的同源性，预测CD70的三聚结构(Petsch等人，1995，MoI.Immunol.32:761-72)。
CD70在人类的正常组织上的表达有限。此使得CD70成为癌症疗法的引人注目的目标。已在多种癌症中鉴别出CD70表达，包括肾细胞癌、大肠癌、卵巢癌、胰脏癌、某些类型的非霍奇金氏淋巴瘤(Non-Hodgkin lymphoma)及多发性骨髓瘤。尽管CD70存在于多种类型的癌症中，但CD70抗体及CD70抗体药物偶联物的临床试验成效甚微。本公开解决此需求及其他需求。
发明内容
本文提供CD70抗体、其抗原结合部分及其他结合剂，以及此类抗体、抗原结合部分及其他结合剂的偶联物。亦提供使用CD70抗体、抗原结合部分及其他结合剂以及其偶联物治疗癌症及其他疾病的方法。本文公开的本发明部分基于特异性结合于CD70且展现改良特性的CD70抗体、其抗原结合部分及其他结合剂以及其偶联物。CD70为治疗某些癌症的重要且有利的治疗目标。CD70抗体、其抗原结合部分、其他结合剂及其偶联物提供基于使用此类抗体、抗原结合部分及相关结合剂以及其偶联物治疗CD70+癌症及其他疾病的组合物及方法。
在一些实施例中，提供一种结合剂，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR具有选自由以下组成的组中所示的氨基酸序列组的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:13、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；分别为SEQ ID NO:21、SEQID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:18；以及分别为SEQID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26。
在一些实施例中，VH及VL区分别具有选自由以下组成的组中所示的氨基酸序列对的氨基酸序列：SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；以及SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12。在一些实施例中，VH及VL区分别具有选自由以下组成的组中所示的氨基酸序列对的氨基酸序列：SEQID NO:3及SEQ ID NO:4；SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；SEQ IDNO:9及SEQ ID NO:10；以及SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12，其中重链及轻链框架区可选择性地经框架区中的1至8个氨基酸取代、缺失或插入来修饰。在一些实施例中，HCDR1、HCDR2及HCDR3以及LCDR1、LCDR2及LCDR3分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22及SEQ ID NO:15以及SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，其中VH及VL的框架区为人类框架区。在一些实施例中，结合剂为抗体或其抗原结合部分。在一些实施例中，结合剂为单克隆抗体、Fab、Fab'、F(ab')、Fv、二硫键连接Fc、scFv、单域抗体、双功能抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。
在一些实施例中，结合剂具有重链可变区，其进一步包括重链恒定区。在一些实施例中，重链恒定区具有IgG同型。在一些实施例中，重链恒定区为IgG1恒定区。在一些实施例中，重链恒定区为IgG4恒定区。在一些实施例中，IgG1恒定区具有SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，结合剂具有轻链可变区，其进一步包括轻链恒定区。在一些实施例中，轻链恒定区具有κ型。在一些实施例中，轻链恒定区具有SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，重链恒定区至少进一步包括降低与人类FcγRIII的结合亲和力的氨基酸修饰。
在一些实施例中，结合剂为单特异性的。在一些实施例中，结合剂为二价的。在一些实施例中，结合剂为双特异性的。
在一些实施例中，提供一种医药组合物，其包括本文所描述的结合剂中的任一者及药学上可接受的载剂。
在一些实施例中，提供编码本文所描述的结合剂中的任一者的核酸。在一些实施例中，提供一种载体，其包括编码本文所描述的结合剂中的任一者的核酸。在一些实施例中，提供一种细胞系，其包括载体，载体包括编码本文所描述的结合剂中的任一者的核酸。
在一些实施例中，提供一种偶联物，其包括如本文所描述的结合剂中的任一者、至少一个连接至结合剂的连接子及至少一种连接至各连接子的药物。在一些实施例中，各药物选自细胞毒性剂、免疫调节剂、核酸、生长抑制剂、PROTAC、毒素及放射性同位素。在一些实施例中，各连接子经由链间二硫键残基、赖氨酸残基、经工程改造的半胱氨酸残基、聚糖、经修饰的聚糖、结合剂的N端残基或连接至结合剂的聚组氨酸残基而连接至结合剂。在一些实施例中，偶联物的平均药物负载为约1至约8、约2、约4、约6、约8、约10、约12、约14、约16、约3至约5、约6至约8或约8至约16。
在一些实施例中，药物为细胞毒性剂。在一些实施例中，细胞毒性剂选自由以下组成的组：奥瑞他汀(auristatin)、类美登素(maytansinoid)、喜树碱(camptothecin)、多卡霉素(duocarmycin)或卡奇霉素(calicheamicin)。在一些实施例中，细胞毒性剂为奥瑞他汀。在一些实施例中，细胞毒性剂为MMAE或MMAF。在一些实施例中，细胞毒性剂为喜树碱。在一些实施例中，细胞毒性剂为依喜替康(exatecan)。在一些实施例中，细胞毒性剂为SN-38。在一些实施例中，细胞毒性剂为卡奇霉素。在一些实施例中，细胞毒性剂为类美登素。在一些实施例中，类美登素为美登素(maytansine)、美登醇(maytansinol)或DM1、DM3及DM4中的美登素类似物，及安沙霉素-2(ansamatocin-2)。
在一些实施例中，连接子为可裂解连接子。在一些实施例中，连接子包括mc-VC-PAB、CL2、CL2A或(丁二酰亚胺-3-基-N)-(CH2)n-C(＝O)-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-CH2-O-CH2-(C＝O)-(SEQ ID NO:34)，其中n＝1至5。在一些实施例中，连接子包括mc-VC-PAB。在一些实施例中，连接子包括CL2A。在一些实施例中，连接子包括CL2。在一些实施例中，连接子包括(丁二酰亚胺-3-基-N)-(CH2)n-C(＝O)-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-CH2-O-CH2-(C＝O)-(SEQ IDNO:34)。在一些实施例中，连接子连接至依喜替康的至少一个分子。
在一些实施例中，药物为免疫调节剂。在一些实施例中，免疫调节剂选自由以下组成的组：TRL7激动剂、TLR8激动剂、STING激动剂或RIG-I激动剂。在一些实施例中，免疫调节剂为TLR7激动剂。在一些实施例中，TLR7激动剂为咪唑并喹啉、咪唑并喹啉胺、噻唑并喹啉、氨基喹啉、氨基喹唑啉、吡啶并[3，2-d]嘧啶-2，4-二胺、嘧啶-2，4-二胺、2-氨基咪唑、1-烷基-1H-苯并咪唑-2-胺、四氢吡啶并嘧啶、杂芳噻二嗪-2，2-二氧化物、苯并萘啶、鸟苷类似物、腺苷类似物、胸苷均聚物、ssRNA、CpG-A、PolyG10及PolyG3。在一些实施例中，免疫调节剂为TLR8激动剂。在一些实施例中，TLR8激动剂选自咪唑并喹啉、噻唑并喹啉、氨基喹啉、氨基喹唑啉、吡啶并[3，2-d]嘧啶-2，4-二胺、嘧啶-2，4-二胺、2-氨基咪唑、1-烷基-1H-苯并咪唑-2-胺、四氢吡啶并嘧啶或ssRNA。在一些实施例中，免疫调节剂为STING激动剂。在一些实施例中，免疫调节剂为RIG-I激动剂。在一些实施例中，RIG-I激动剂选自KIN1148、SB-9200、KIN700、KIN600、KIN500、KIN100、KIN101、KIN400及KIN2000。在一些实施例中，连接子选自由以下组成的组：mc-VC-PAB、CL2、CL2A及(丁二酰亚胺-3-基-N)-(CH2)n-C(＝O)-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-CH2-O-CH2-(C＝O)-(SEQ ID NO:34)，其中n＝1至5。
在一些实施例中，提供一种医药组合物，其包括本文所描述的偶联物中的任一者及药学上可接受的载剂。
在一些实施例中，提供一种治疗CD70+癌症的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本文所描述的结合剂中的任一者、本文所描述的偶联物中的任一者或本文所描述的医药组合物中的任一者。在一些实施例中，CD70+癌症为实体肿瘤或恶性血液病。在一些实施例中，CD70+癌症选自肝细胞癌、结直肠癌、胰脏癌、卵巢癌、惰性非霍奇金氏淋巴瘤(indolent Non-Hodgkin's Lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、B细胞系癌、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、鼻咽喉癌、胸腺癌及神经胶质瘤。在一些实施例中，CD70癌症为实体肿瘤。
在一些实施例中，方法进一步包括向个体施用免疫疗法。在一些实施例中，免疫疗法包括检查点抑制剂。在一些实施例中，检查点抑制剂选自特异性结合于人类PD-1、人类PD-L1或人类CTLA4的抗体。在一些实施例中，检查点抑制剂为帕博利珠单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、西米普利单抗(cemiplimab)或伊匹木单抗(ipilimumab)。在一些实施例中，方法进一步包括向个体施用化学疗法。
在一些实施例中，治疗癌症的方法包括施用本文所描述的偶联物中的任一者或本文所描述的医药组合物中的任一者。在一些实施例中，结合剂、偶联物或医药组合物为静脉内施用。在一些实施例中，结合剂、偶联物或医药组合物以约0.1mg/kg至约12mg/kg的剂量施用。
在一些实施例中，个体的治疗结果得以改善。在一些实施例中，改善的治疗结果为选自稳定疾病、部分反应或完全反应的客观反应。在一些实施例中，改善的治疗结果为肿瘤负荷降低。在一些实施例中，改善的治疗结果为无进展存活期或无疾病存活期。
在一些实施例中，提供本文所描述的结合剂中的任一者或本文所描述的医药组合物中的任一者的用途，其用于治疗个体的CD70+癌症。在一些实施例中，提供本文所描述的偶联物中的任一者或本文所描述的医药组合物中的任一者的用途，其用于治疗个体的CD70+癌症。
在一些实施例中，本文提供一种治疗自身免疫疾病的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的本文所描述的结合剂中的任一者、本文所描述的偶联物中的任一者或本文所描述的医药组合物中的任一者。在一些实施例中，自身免疫疾病为类风湿性关节炎、多发性硬化症或系统性红斑狼疮。在一些实施例中，方法进一步包括向个体施用免疫抑制疗法。在一些实施例中，方法包括施用本文所描述的偶联物中的任一者或本文所描述的医药组合物中的任一者。
在一些实施例中，结合剂、偶联物或医药组合物为静脉内施用。在一些实施例中，结合剂、偶联物或医药组合物以约0.1mg/kg至约12mg/kg的剂量施用。在一些实施例中，个体的治疗结果得以改善。在一些实施例中，改善的治疗结果为疾病进展减缓或疾病严重程度减轻。
在一些实施例中，提供本文所描述的结合剂中的任一者或本文所描述的医药组合物中的任一者的用途，其用于治疗个体的自身免疫疾病。在一些实施例中，提供本文所描述的偶联物中的任一者或本文所描述的医药组合物中的任一者的用途，其用于治疗个体的自身免疫疾病。
参考以下实施方式、特定实施例的非限制性实例及附图，可以更充分地理解本公开的上述内容及其他方面。
附图说明
图1是前述CD70+scFv与人类CD70蛋白的相对结合力的比较。
图2是前述CD70抗体与CD70蛋白的交叉结合。
图3是前述CD70抗体与食蟹猕猴CD70蛋白的交叉结合。
图4是抗CD70抗体与786-O细胞的结合的比较。
图5是抗CD70抗体与Caki-1细胞的结合的比较。
图6是抗CD70抗体与DBTRG-05MG细胞的结合的比较。
图7是抗CD70抗体与U251细胞的结合的比较。
图8是使用786-O细胞的抗CD70抗体内化的比较。
图9是使用Caki-1细胞的抗CD70抗体内化的比较。
图10是抗CD70偶联物对786-O肾细胞癌细胞的细胞毒性的比较。
图11是2E7或同型对照与Raji的结合活性。
图12是2E7或同型对照与MCF-7的结合活性。
图13是肿瘤细胞中的2E7内化。
图14是大鼠中的2E7 PK。
图15是2E7偶联物对786-O的体外细胞毒性。
图16是2E7偶联物对Raji的体外细胞毒性。
图17是2E7偶联物对Caki-1的体外细胞毒性。
图18是2E7偶联物对A498的体外细胞毒性。
图19是2E7偶联物对Caki-1的抗肿瘤活性的多次剂量研究。
图20是2E7偶联物对Caki-1的抗肿瘤活性的单次剂量研究。
图21是2E7偶联物对Raji的抗肿瘤活性的多次剂量研究。
图22是2E7偶联物对Raji的抗肿瘤活性的单次剂量研究。
具体实施方式
定义
为方便起见，此处定义本说明书、实例及权利要求书中的某些术语。除非另有说明或上下文暗示，否则以下术语及短语具有下文所提供的含义。提供这些定义以有助于描述特定实施例，且不希望限制所要保护的发明，因为本公开的范围仅受权利要求的限制。除非另有定义，否则本文所用的所有技术及科学术语具有与本领域技术人员通常所理解相同的含义。
如本文所用且除非另有指示，否则术语“一个”是指“一个/种”、“至少一个/种”或“一个或多个/种”。除非上下文另有需要，否则本文所用的单数术语应包括复数且复数术语应包括单数。
除非上下文另有明确要求，否则贯穿说明书及权利要求书，词语“包括”及其类似者应以包括性意义解释，而非排他性或穷尽性意义解释；换言之，以“包括但不限于”的意义来解释。
术语“减少”、“降低”及“抑制”在本文中皆用以大体上意谓相对于参考具有统计学上显著的量的减少。
本文所用的术语“增加”或“增强”或“活化”在本文中皆用以大体上意谓相对于参考具有静态显著量的增加。
如本文所用，术语“蛋白质”及“多肽”在本文中可互换地使用，以表示相邻残基的α-氨基与羧基之间的肽键各自彼此连接的一系列氨基酸残基。术语“蛋白”及“多肽”亦指氨基酸的聚合物，包括经修饰的氨基酸(例如磷酸化、糖化、糖基化等)及氨基酸类似物，与其大小或功能无关。“蛋白质”及“多肽”通常在提及相对较大的多肽时使用，而术语“肽”通常在提及较小多肽时使用，但在此项技术中此等术语的用法重叠。当提及经编码的基因产物及其片段时，术语“蛋白质”及“多肽”在本文中可互换地使用。因此，示例性多肽或蛋白质包括基因产物、天然存在的蛋白质、同源物、异种同源物、同种同源物、片段及前述的其他等效物、变异体、片段及类似物。
CD70为活化但非静息T及B淋巴细胞上的细胞表面抗原。其亦称为CD27L、肿瘤坏死因子(配体)超家族成员7TNFSF7、表面抗原CD70及Ki-24抗原。据报导，其过度表达于某些癌症，如本文进一步描述。人类CD70多肽包括但不限于具有UniProt识别号P32970-1及P32970-2及RefSeq NP_001243.1及NP_001317261.1中所示的氨基酸序列的多肽；这些序列以引用的方式并入本文中。
如本文所用，“抗原决定基”是指传统上由免疫球蛋白VH/VL对结合的氨基酸，例如本文所描述的抗体、其抗原结合部分及其他结合剂。抗原决定基可由蛋白质的三级折叠而并列的相连氨基酸或非相连氨基酸形成于多肽上。由相连氨基酸形成的抗原决定基通常在暴露于变性溶剂后保留，而由三级折叠形成的抗原决定基在变性溶剂处理后通常消失。在独特空间构形中，抗原决定基通常包括至少3个，且更通常至少5个、约9个或约8至10个氨基酸。抗原决定基定义抗体、其抗原结合部分及其他结合剂的最小结合位点，且因此表示抗体、其抗原结合部分或其他基于免疫球蛋白的结合剂的特异性的目标。在单域抗体的情况下，抗原决定基表示由分离的可变域所结合的结构单元。
如本文所用，“特异性结合”是指本文所描述的结合剂(例如抗体或其抗原结合部分)结合目标(例如人类CD70)的能力，其中KD为10-5M(10000nM)或更小，例如10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M或更小。特异性结合可以受到例如抗体、抗原结合部分或其他结合剂的亲和力及亲合力以及目标多肽的浓度影响。本领域技术人员可使用任何适合方法(例如适合细胞结合分析中的抗体或结合剂的滴定)确定本文所描述的抗体、抗原结合部分及其他结合剂选择性结合于CD70的适当条件。特异性结合于CD70的结合剂不会被非类似竞争物取代。在一些实施例中，当CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂在蛋白质和/或大分子的复杂混合物中优先识别其目标抗原CD70时，称其特异性结合于CD70。
在一些实施例中，如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂特异性结合于CD70多肽的解离常数(KD或KD)为10-5M(10000nM)或更小，例如10-6M、10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M或更小。在一些实施例中，如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂特异性结合于CD70多肽的解离常数(KD)为约10-5M至10-6M。在一些实施例中，如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂特异性结合于CD70多肽的解离常数(KD)为约10-6M至10-7M。在一些实施例中，如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂特异性结合于CD70多肽的解离常数(KD)为约10-7M至10-8M。在一些实施例中，如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂特异性结合于CD70多肽的解离常数(KD)为约10-8M至10-9M。在一些实施例中，如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂特异性结合于CD70多肽的解离常数(KD)为约10-9M至10-10M。在一些实施例中，如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂特异性结合于CD70多肽的解离常数(KD)为约10-10M至10-11M。在一些实施例中，如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂特异性结合于CD70多肽的解离常数(KD)为约10-11M至10-12M。在一些实施例中，如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂特异性结合于CD70多肽的解离常数(KD)小于10-12M。
如本文所用，术语“基本上由…组成”是指给定实施例所需的要素。该术语允许不实质上影响实施例的基本的、新颖或功能性特性的要素的存在。
如本文所用，术语“由…组成”是指如本文所描述的组合物、方法及各别组分，其排除实施例的描述中未列举的任何要素。
应理解，实施例中或另有说明的除外，本文所用的表述成分的量或反应条件的所有数字在所有情况下通过术语“约”修饰。术语“约”在结合百分比使用时可意谓+/-1％。
术语“统计学上显著”或“显著”是指统计显著性，且一般表示高于或低于参考值的两个标准差(2SD)差异。
其他术语在本文中定义于本公开的各种方面的描述中。
详细说明
本文提供特异性结合于人类CD70的CD70结合抗体(亦称为CD70抗体)及其抗原结合部分以及其他结合剂。本文亦提供结合于药物(例如细胞毒性剂或免疫调节剂)的CD70抗体及抗原结合部分的偶联物(亦称为CD70偶联物)。在一些实施例中，CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂和/或CD70偶联物特异性结合于个体中的CD70+细胞且减少其数量。在一些实施例中，CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂和/或CD70偶联物特异性结合于个体中的CD70+癌细胞且减少其数量。在一些实施例中，CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂和/或CD70偶联物特异性结合于与个体的疾病或病况(例如自身免疫疾病)相关的CD70+细胞且减少其数量。在一些实施例中，CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂和/或CD70偶联物特异性结合于与个体的疾病或病况相关的CD70+细胞且减少其数量。
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；分别为SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；以及分别为SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQID NO:6中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；分别为SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；以及分别为SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；分别为SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；以及分别为SEQ IDNO:11及SEQ ID NO:12；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。短语“其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰”是指VH及VL CDR不具有氨基酸取代、缺失或插入。
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；其中，重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；其中，重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；分别为SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；以及分别为SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12；其中结合剂特异性结合于CD70。在一些实施例中，结合剂包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ IDNO:4；分别为SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQID NO:9及SEQ ID NO:10；以及分别为SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12；其中结合剂特异性结合于CD70的结合亲和力高于(Kd低于)抗体69A7。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；分别为SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；以及分别为SEQ IDNO:11及SEQ ID NO:12；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；分别为SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；以及分别为SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。如本文所描述，结合剂包括CD70抗体或其抗原结合部分且可选择性地包括共价连接至CD70抗体或其抗原结合部分的其他肽或多肽。在此实施例中的任一者中，结合剂特异性结合于CD70。
在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；其中结合剂特异性结合于CD70。在一些实施例中，结合剂包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；其中结合剂特异性结合于CD70的结合亲和力高于(Kd低于)抗体69A7。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；其中结合剂特异性结合于CD70。在一些实施例中，结合剂包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ IDNO:6中所示的氨基酸序列；其中结合剂特异性结合于CD70的结合亲和力高于(Kd低于)抗体69A7。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；其中结合剂特异性结合于CD70。在一些实施例中，结合剂包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；其中结合剂特异性结合于CD70的结合亲和力高于(Kd低于)抗体69A7。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；其中结合剂特异性结合于CD70。在一些实施例中，结合剂包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；其中结合剂特异性结合于CD70的结合亲和力高于(Kd低于)抗体69A7。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；其中结合剂特异性结合于CD70。在一些实施例中，结合剂包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；其中结合剂特异性结合于CD70的结合亲和力高于(Kd低于)抗体69A7。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经等构架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，提供一种抗体或抗原结合部分，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR具有选自以下的氨基酸序列组中所示的氨基酸序列：(i)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；(ii)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；(iii)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；(iv)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:18；以及(v)分别为SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:25及SEQ ID NO:26。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供一种抗体或抗原结合部分，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供一种抗体或抗原结合部分，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供一种抗体或抗原结合部分，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供一种抗体或抗原结合部分，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供一种结合剂，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。在一些实施例中，提供一种结合剂，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR具有选自以下的氨基酸序列组中所示的氨基酸序列：(i)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:25及SEQ ID NO:26；(ii)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:14、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；(iii)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；(iv)分别为SEQ ID NO:21、SEQ IDNO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:18；以及(v)分别为SEQID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供一种结合剂，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供一种结合剂，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供一种结合剂，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供一种结合剂，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供一种结合剂，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，本文所描述的组合物及方法涉及通过活体内的CD70抗体、其抗原结合部分、其他结合剂或其偶联物来减少个体的CD70+细胞(例如减少癌症或肿瘤中的CD70+细胞或与自身免疫疾病或病症相关的CD70+细胞的数量)。在一些实施例中，本文所描述的组合物及方法涉及通过使用CD70抗体、其抗原结合部分、其他结合剂或其偶联物来治疗个体的CD70+癌症。在一些实施例中，本文所描述的组合物及方法涉及通过使用CD70抗体、其抗原结合部分、其他结合剂或其偶联物来治疗个体的自身免疫病症。在一些实施例中，本文所描述的组合物及方法涉及通过使用CD70抗体、其抗原结合部分、其他结合剂或其偶联物来治疗个体的与CD70+细胞相关的疾病或病症。在这些实施例中的任一者中，该方法进一步包括减少个体中与疾病、病况或癌症相关的CD70+细胞的数量。
如本文所用，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子及免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即含有特异性结合于抗原(例如人类CD70)的抗原结合位点的分子。该术语一般是指包括两个免疫球蛋白重链可变区及两个免疫球蛋白轻链可变区的抗体，包括全长抗体(具有重链及轻链恒定区)。
各重链由可变区(缩写为VH)及恒定区构成。重链恒定区可包括三个域CH1、CH2及CH3及可选择性存在的第四域CH4。各轻链由可变区(缩写为VL)及恒定区构成。轻链恒定区为CL域。VH及VL区可进一步划分为称作互补决定区(CDR)的高变区，且穿插有称作框架区(FR)的保守区。各VH及VL区因此由自N端至C端按以下次序排列的三个CDR及四个FR组成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3及FR4。该结构是本领域技术人员所熟知的。
本文所用的CD70抗体的“抗原结合部分”是指如本文所描述的CD70抗体的具有CD70抗体的VH及VL序列或CD70抗体的CDR且特异性结合于CD70的部分。抗原结合部分的实例包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv、二硫键连接Fv、单域抗体(亦称作VHH、VNAR、sdAb或纳米抗体)或双功能抗体(参见例如Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，85，5879-5883(1988)及Bird等人，Science 242，423-426(1988)，其以引用的方式并入本文中)。如本文所用，在CD70抗体的各情况下，术语Fab、F(ab')2及Fv是指：(i)Fab片段，亦即由VL、VH、CL及CH1域构成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，即包括铰链区中经由二硫桥键彼此连接的两个Fab片段的二价片段；及(iii)由VL及VH域构成的Fv片段。尽管Fv片段的两个域(即VL及VH)由各别编码区编码，但其可进一步使用合成连接子，例如聚G4S氨基酸序列(“(G4S)n”，如SEQID NO:27所示，其中n＝1至5)彼此连接，使得有可能将其制备为单一蛋白质链，其中VL及VH区组合以便形成单价分子(称为单链Fv或scFv)。术语抗体的“抗原结合部分”也包括此类单链抗体。本文同样包括单链抗体的其他形式，例如“双功能抗体”。双功能抗体为二价双特异性抗体，其中VH及VL域表达于单一多肽链上，但使用连接子连接VH及VL域，连接子对于两个域而言过短以致不能组合于同一链上，从而迫使VH及VL域与不同链的互补域(分别为VL及VH)配对，且形成两个抗原结合位点(参见例如Holliger，R等人(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:64446448；Poljak，R.J等人(1994)Structure 2:1121-1123)。
单域抗体为由单一单体可变抗体域组成的抗体部分。单域抗体可来源于骆驼科动物的抗体重链的可变域(例如纳米抗体或VHH部分)。此外，术语单域抗体包括来源于鲨鱼的自主人类重链可变域(aVH)或VNAR部分(参见例如Hasler等人，Mol.Immunol.75:28-37，2016)。
产生单域抗体(例如DAB或VHH)的技术为本领域中已知的，例如Cossins等人(2006，Prot Express Purif 51:253-259)及Li等人(Immunol.Lett.188:89-95，2017)中所公开。单域抗体可通过标准免疫接种技术获自例如骆驼、羊驼或骆马。(参见例如Muyldermans等人，TIBS26:230-235，2001；Yau等人，J Immunol Methods 281:161-75，2003；及Maass等人，J Immunol Methods 324:13-25，2007)。VHH可具有强抗原结合能力，且可与常规VH-VL对不可接近的新颖抗原决定基相互作用(参见例如Muyldermans等人，2001)。羊驼血清IgG含有仅约50％骆驼科重链IgG抗体(HCAb)(参见例如，Maass等人，2007)。羊驼可经抗原免疫接种，且可分离结合于目标抗原并中和目标抗原的VHH(参见例如Maass等人，2007)。已鉴别扩增羊驼VHH编码序列的PCR引物，且可将其用于构建羊驼VHH噬菌体展示文库，该文库可用于通过本领域公知的标准生物淘选技术分离抗体片段(参见例如Maass等人，2007)。
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分为双特异性或多特异性结合剂的一部分。双特异性及多特异性抗体包括：scFv1-ScFv2、ScFv12-Fc-scFv22、IgG-scFv、DVD-Ig、三功能抗体(triomab)/杂交瘤(quadroma)、二合一(two-in-one)IgG、scFv2-Fc、TandAb及scFv-HSA-scFv。在一些实施例中，IgG-scFv为IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、svFc-(L)IgG、2scFV-IgG或IgG-2scFv。例如，参见Brinkmann及Kontermann，MAbs 9(2):182-212(2017)；Wang等人，Antibodies，2019，8，43；Dong等人，2011，MAbs 3:273-88；Natsume等人，J.Biochem.140(3):359-368，2006；Cheal等人，Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812，2014；及Bates及Power，Antibodies，2019，8，28。
VH及VL区的修饰
关于VH及VL氨基酸序列，如本领域技术人员所认识到的，改变编码序列中的单一氨基酸或较小百分比的氨基酸、或对多肽中的编码VH或VL的核酸或氨基酸个别取代、缺失或添加(插入)产生“经保守修饰的变异体”，其中改变使得氨基酸经化学上类似的氨基酸取代(保守氨基酸取代)且改变的多肽仍能够特异性结合于CD70。
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分的经保守修饰的变异体可具有框架区中(即除CDR中以外)的改变，例如CD70抗体的经保守修饰的变异体具有VH及VL CDR的氨基酸序列(列于以下氨基酸序列组中：SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:13、SEQ IDNO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:14、SEQID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:18；以及SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26)且具有框架区(FR)中的至少一个保守氨基酸取代。在一些实施例中，相较于未经修饰的VH及VL区的氨基酸序列，VH及VL氨基酸序列在FR中总共具有不超过8或6或4或2或1个保守氨基酸取代。在一些实施例中，相较于未经修饰的VH及VL区的氨基酸序列，VH及VL氨基酸序列在FR中具有8至1个、6至1个、4至1个或2至1个保守氨基酸取代。在这些实施例中的任一者的其他方面中，CD70抗体、其抗原结合部分或其他结合剂的经保守修饰的变异体展现出与CD70的特异性结合。
对于保守氨基酸取代，给定氨基酸可经具有类似生理化学特性的残基取代，例如将一个脂族残基取代为另一个(例如Ile、Val、Leu或Ala彼此取代)，或将一个极性残基取代为另一个(例如Lys与Arg之间；Glu与Asp之间；或Gln与Asn之间)。其他此类保守氨基酸取代，例如具有类似疏水性特性的整个区的取代是本领域所熟知的。可在本文所描述的任一检测方法中测试包括保守氨基酸取代的多肽，以确认其保留了原生或参考多肽(亦即对CD70)的所需活性，例如抗原结合活性及特异性。
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂可进一步优化，以降低潜在免疫原性或优化其他功能特性，同时维持在人类的疗法中的功能活性。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQID NO:4；分别为SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；以及分别为SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；分别为SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；及分别为SEQID NO:11及SEQ ID NO:12；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，本文提供一种CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，本文提供一种CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，本文提供一种CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，本文提供一种CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，其包括重链可变区(VH)轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，本文提供一种CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，本文提供一种CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，本文提供一种CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，本文提供一种CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，本文提供一种CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，本文提供一种结合剂，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，且其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在这些实施例中的任一个中，CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的功能活性包括特异性结合于CD70。其他功能活性包括消耗CD70+细胞(例如癌细胞或自身免疫细胞)。另外，CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂具有功能活性意味着多肽展现的活性类似于或优于如本文所描述的参考抗体或其抗原结合部分(例如，包括(i)具有SEQ IDNO:1中所示的氨基酸序列的重链可变区，及(ii)具有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的轻链可变区的参考CD70结合抗体或其抗原结合部分，或其变异体，如本文所描述)的活性，如特定分析(例如生物分析)所测量的，无论存不存在剂量依赖性。在确实存在剂量依赖性的情况下，其无需与参考抗体或其抗原结合部分的剂量依赖性一致，而是实质上类似或优于如本文所描述的参考抗体或其抗原结合部分在给定活性下的剂量依赖性(即，候选多肽将展现相对于参考抗体更大的活性)。
对于保守取代，氨基酸可根据其侧链特性的类似性分组(在A.L.Lehninger，inBiochemistry，第二版，第73-75页，Worth Publishers，New York(1975))：(1)非极性：Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、Ile(I)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)；(2)不带电极性：Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)；(3)酸性：Asp(D)、Glu(E)；及(4)碱性：Lys(K)、Arg(R)、His(H)。
或者，对于保守取代，天然存在的残基可基于共同侧链特性分组：(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)碱性：His、Lys、Arg；(5)影响链定向的残基：Gly、Pro；及(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。非保守取代将必然伴有交换这些类别中的一者或另一类别的成员。
特定保守取代包括例如：Ala至Gly或至Ser；Arg至Lys；Asn至Gln或至His；Asp至Glu；Cys至Ser；Gln至Asn；Glu至Asp；Gly至Ala或至Pro；His至Asn或至Gln；Ile至Leu或至Val；Leu至Ile或至Val；Lys至Arg、至Gln或至Glu；Met至Leu、至Tyr或至Ile；Phe至Met、至Leu或至Tyr；Ser至Thr；Thr至Ser；Trp至Tyr；Tyr至Trp；和/或Phe至Val、至Ile或至Leu。
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分的经保守修饰的变异体较佳地与参考VH或VL序列具有至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或更高一致性，其中VH及VL CDR未经修饰。参考序列与经修饰序列之间的同源程度(一致性百分比)可以通过使用世界互联网上通常用于此目的可自由获取的计算机程序(例如具有预设设置的BLASTp或BLASTn)比较两个序列来测定。
在一些实施例中，相较于未经修饰的VH及VL区的氨基酸序列，VH及VL氨基酸序列在框架区中总共具有不超过8或6或4或2或1个保守氨基酸取代。在一些实施例中，相较于未经修饰的VH及VL区的氨基酸序列，VH及VL氨基酸序列在框架区中总共具有8至1个、或6至1个、或4至1个、或2至1个保守氨基酸取代。在一些实施例中，相较于未经修饰的VH及VL区的氨基酸序列，VH及VL氨基酸序列在框架区中总共具有不超过8或6或4或2或1个氨基酸取代、缺失或插入。在一些实施例中，相较于未经修饰的VH及VL区的氨基酸序列，VH及VL氨基酸序列在框架区中具有8至1个、6至1个、4至1个或2至1个保守氨基酸取代。在一些实施例中，相较于未经修饰的VH及VL区的氨基酸序列，VH及VL氨基酸序列总共具有不超过8或6或4或2或1个氨基酸取代、缺失或插入。
原生(或参考)氨基酸序列的修饰可通过本领域技术人员已知的多种技术中的任一种实现。例如，在特定基因座处通过合成含有所需突变序列、侧接有能够与原生序列的片段连接的限制位点的寡核苷酸来引入突变。在连接之后，所得重构序列编码具有所需氨基酸插入、取代或缺失的变异体。或者，寡核苷酸定向的位点特异性突变诱发程序可用于提供具有根据所需取代、缺失或插入改变的特定密码子的经改变核苷酸序列。用于进行此类改变的技术已几近完善，且包括由下述等人所公开的技术：Walder等人(Gene42:133，1986)；Bauer等人(Gene 37:73，1985)；Craik(BioTechniques，1985年1月，12-19)；Smith等人(Genetic Engineering:Principles and Methods，Plenum Press，1981)；及美国专利第4,518,584号及第4,737,462号，其以全文引用的方式并入本文中。
恒定区
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂具有完全人类恒定区。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂具有人源化恒定区。在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂具有非人类恒定区。免疫球蛋白恒定区是指重链或轻链恒定区。人类重链及轻链恒定区氨基酸序列是本领域已知的。恒定区可为任何适合类型，其可选自免疫球蛋白、IgA、IgD、IgE、IgG及IgM的类别。若干免疫球蛋白类别可进一步分成同型，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4或IgAl及IgA2。对应于不同类别的免疫球蛋白的重链恒定区(Fc)可分别为α、δ、ε、γ及μ。轻链可为kappa(或κ)及lambda(或λ)中的一者。
在一些实施例中，恒定区可具有IgGl同型。在一些实施例中，恒定区可具有IgG2同型。在一些实施例中，恒定区可具有IgG3同型。在一些实施例中，恒定区可具有IgG4同型。在一些实施例中，Fc域可具有包括两种或更多种同型的恒定区的杂交同型。在一些实施例中，免疫球蛋白恒定区可为IgG1或IgG4恒定区。在一些实施例中，CD70抗体重链具有IgG1同型且具有SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，CD70抗体轻链具有κ型且具有SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列。
此外，CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂可作为通过抗体或抗原结合部分与一种或多种其他蛋白质或肽共价或非共价结合而形成的较大结合剂的部分。与此类结合剂有关的是使用链霉亲和素核心区制备四聚scFv分子(例如，Kipriyanov，S.M.等人，(1995)，Human Antibodies and Hybridomas 6:93-101)及使用半胱氨酸残基、标记肽及C端多组氨酸肽(例如六组氨酸标签(hexahistidinyl tag))(如SEQ ID NO:30所示的“六组氨酸标签”)产生二价及生物素化scFv分子(Kipriyanov，S.M.等人，(1994)Mol.Immunol.31:10471058)。
改变效应功能的Fc域修饰
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的Fc区或Fc域实质上不结合于至少一种选自FcyRI(CD64)、FcyRIIA(CD32a)、FcyRIIB(CD32b)、FcyRIIIA(CD16a)及FcyRIIIB(CD16b)的Fc受体。在一些实施例中，Fc区或域展现与选自FcyRI(CD64)、FcyRIIA(CD32a)、FcyRIIB(CD32b)、FcyRIIIA(CD16a)及FcyRIIIB(CD16b)的任一Fc受体实质上无结合。如本文所用，“实质上无结合”是指与所选一种或多种Fcγ受体的结合较弱至不存在。在一些实施例中，“实质上无结合”是指与Fcγ受体的结合亲和力降低(即Kd提高)至少1000倍。在一些实施例中，Fc域或区为Fc无效区。如本文所用，“Fc无效区”是指展现与Fcγ受体中的任一者的较弱结合至无结合的Fc区或Fc域。在一些实施例中，Fc无效域或区展现与Fcγ受体的结合亲和力降低(亦即Kd提高)至少1000倍。
在一些实施例中，Fc域具有降低的效应功能活性或实质上无效应功能活性。如本文所用，“效应功能活性”是指抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、抗体依赖性细胞吞噬作用(ADCP)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)。在一些实施例中，相较于野生型Fc域，Fc域展现降低的ADCC、ADCP或CDC活性。在一些实施例中，相较于野生型Fc域，Fc域展现ADCC、ADCP及CDC降低。在一些实施例中，Fc域展现实质上无效应功能(即，刺激或影响ADCC、ADCP或CDC的能力)。如本文所用，相较于野生型或参考Fc域，“实质上无效应功能”是指效应功能活性降低至少1000倍。
在一些实施例中，Fc域具有降低的ADCC活性或无ADCC活性。如本文所用，降低的ADCC活性或无ADCC活性是指Fc域的ADCC活性降低至少10、至少20、至少30、至少50、至少100或至少500倍。
在一些实施例中，Fc域具有降低的CDC活性或无CDC活性。如本文所用，降低的CDC活性或无CDC活性是指Fc域的CDC活性降低至少10倍、至少20倍、至少30倍、至少50倍、至少100倍或至少500倍。
可进行活体外和/或活体内细胞毒性分析以确认ADCC和/或CDC活性的降低/消耗。举例而言，可进行Fc受体(FcR)结合分析以确保抗体缺乏Fcγ受体结合(因此可能缺乏ADCC活性)。用于介导ADCC的初代细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核球表达FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR在造血细胞上的表达概述于Ravetch及Kinet，Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)的第464页的表3中。用以评定所关注分子的ADCC活性的活体外分析的非限制性实例描述于美国专利第5,500,362号(参见例如Hellstrom，I.等人Proc.Nat'l Acad.Sci.USA83:7059-7063(1986))及Hellstrom，I等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 82:1499-1502(1985)；美国专利第5,821,337号(参见Bruggemann，M.等人，J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))中。或者，可采用非放射性分析方法(参见例如用于流式细胞术的ACTITM非放射性细胞毒性分析(CellTechnology，Inc.Moun-tain View，Calif.)；及CytoTox 96TM非放射性细胞毒性分析(Promega，Madison，Wis.)。适用于此类分析的效应细胞包括周边血液单核细胞(PBMC)及天然杀手(NK)细胞。或者或另外，可例如在动物模型中，例如Clynes等人，Proc.Nat'l Acad.Sci.USA 95:652-656(1998)中所公开的动物模型中活体内评定所关注分子的ADCC活性。
亦可进行C1q结合分析以确认抗体或Fc域或区不能结合C1q且因此缺乏CDC活性或具有降低的CDC活性。参见例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中的C1q及C3c结合ELISA。为评定补体活化，可进行CDC分析(参见例如Gazzano-Santoro等人，J.Immunol.Methods 202:163(1996)；Cragg，M.S.等人，Blood 101:1045-1052(2003)；及Cragg，M.S.及M.J.Glennie，Blood 103:2738-2743(2004))。
在一些实施例中，Fc域具有降低的ADCP活性或无ADCP活性。如本文所用，降低的ADCP活性或无ADCP活性是指Fc域的ADCP活性降低至少10、至少20、至少30、至少50、至少100或至少500倍。
亦可进行ADCP结合分析以确认抗体或Fc域或区缺乏ADCP活性或具有减少的ADCP活性。参见例如US20190079077及US20190048078及其中所公开的参考文献。
具有降低的效应功能活性的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂包括那些具有一个或多个Fc区残基(例如238、265、269、270、297、327及329)取代的抗体，该Fc区残基根据Kabat的EU编号(参见例如美国专利第6,737,056号)。此类Fc突变体包括具有根据Kabat的EU编号在氨基酸位置265、269、270、297及327中的两个或更多个处的取代的Fc突变体，包括残基265及297取代成丙氨酸的所谓的(DANA)Fc突变体(参见美国专利第7,332,581号)。亦已知具有减弱的FcR结合的某些抗体变异体。(参见例如美国专利第6,737,056号；WO2004/056312，及Shields等人，J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001))。可制备含有此类氨基酸修饰的FcR结合减弱的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂。
在一些实施例中，CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂包括具有一个或多个减弱FcγR结合的氨基酸取代，例如Fc区的位置234及235(残基的EU编号)处的取代的Fc域或区。在一些实施例中，根据Kabat的EU编号，取代为L234A及L235A(LALA)。在一些实施例中，根据Kabat的EU编号，Fc域在来源于人类IgG1 Fc区的Fc区中包括D265A和/或P329G。在一些实施例中，根据Kabat的EU编号，取代为来源于人类IgG1 Fc区的Fc区中的L234A、L235A及P329G(LALA-PG)。(参见例如WO 2012/130831)。在一些实施例中，根据Kabat的EU编号，取代为来源于人类IgG1 Fc区的Fc区中的L234A、L235A及D265A(LALA-DA)。
在一些实施例中，改变发生于Fc区中，从而引起C1q结合和/或补体依赖性细胞毒性(CDC)改变(亦即减弱)，例如如美国专利第6,194,551号、WO 99/51642及Idusogie等人，J.Immunol.164:4178-4184(2000)中所描述。
制备抗体、抗原结合部分及其他结合剂的方法
在各种实施例中，可在人类、鼠类或其他动物源性细胞系中产生CD70抗体、其抗原结合部分及其他结合剂。重组DNA表达可用于产生CD70抗体、其抗原结合部分及其他结合剂。这样就可以在所选宿主物种中产生CD70抗体以及一系列CD70抗原结合部分及其他结合剂(包括融合蛋白)。在细菌、酵母、转殖基因动物及鸡蛋中产生CD70抗体、其抗原结合部分及其他结合剂亦为基于细胞的产生系统的替代方案。转殖基因动物的主要优势为自可再生来源的潜在高产率。
在一些实施例中，具有SEQ ID NO:3、5、7、9或11中所示的氨基酸序列的CD70 VH多肽由核酸编码。在一些实施例中，具有SEQ ID NO:4、6、8、10或12中所示的氨基酸序列的CD70 VL多肽由核酸编码。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:3、5、7、9或11中所示的氨基酸序列的CD70 VH多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:4、6、8、10或12中所示的氨基酸序列的CD70 VL多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:3中所示的氨基酸序列的CD70 VH多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:5中所示的氨基酸序列的CD70 VH多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:7中所示的氨基酸序列的CD70 VH多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:9中所示的氨基酸序列的CD70 VH多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:11中所示的氨基酸序列的CD70 VH多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列的CD70 VH多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列的CD70 VH多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列的CD70 VH多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列的CD70 VH多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列的CD70 VH多肽。
在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:3及4中所示的氨基酸序列的VH及VL多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:5及6中所示的氨基酸序列的VH及VL多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:7及8中所示的氨基酸序列的VH及VL多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:9及10中所示的氨基酸序列的VH及VL多肽。在一些实施例中，核酸编码具有SEQ ID NO:11及12中所示的氨基酸序列的VH及VL多肽。
如本文所用，术语“核酸”或“核酸序列”或“聚核苷酸序列”或“核苷酸”是指并入有核糖核酸、去氧核糖核酸或其类似物的单元的聚合分子。核酸可为单链或双链。单链核酸可为变性双链DNA中的一条链核酸。在一些实施例中，核酸可为cDNA，例如缺乏内含子的核酸。
可通过本领域已知的各种方法制备编码CD70抗体、其抗原结合部分以及其他结合剂的氨基酸序列的核酸分子。这些方法包括但不限于制备编码CD70抗体、抗原结合部分或其他结合剂的合成核苷酸序列。另外，寡核苷酸介导(或定点)的突变诱发、PCR介导的突变诱发及盒式突变诱发可用于制备编码CD70抗体或抗原结合部分以及其他结合剂的核苷酸序列。至少编码如本文所描述的CD70抗体、其抗原结合部分、结合剂或其多肽的核酸序列可根据常规技术，例如用于连接的钝端或交错端末端、提供适当末端的限制酶消化、按需要填充黏性端、避免不合需要的接合的碱性磷酸酶处理及与适当接合酶连接或本领域中已知的其他技术来与载体DNA重组。用于此类操纵的技术例如由Maniatis等人，MolecularCloning，Lab.Manual(Cold Spring Harbor Lab.Press，NY，1982and 1989)及Ausubel等人，Current Protocols in Molecular Biology(John Wiley&Sons)，1987-1993公开且可用以构建编码CD70抗体或其抗原结合部分或其VH或VL多肽或其他结合剂的核酸序列及载体。
若例如DNA的核酸分子含有含转录及翻译调控信息的核苷酸序列且此类序列“可操作地连接”至编码多肽的核苷酸序列，则称核酸分子“能够表达”多肽。可操作连接为试图表达的调控DNA序列及DNA序列(例如CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂)以准许多肽或抗原结合部分以可复原量进行基因表达的方式连接的连接。基因表达所需的调控区的确切性质可因生物体而不同，如类似技术中所熟知。参见例如Sambrook等人，1989；Ausubel等人，1987-1993。
因此，如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分的表达可发生于原核或真核细胞中。适合的宿主包括细菌或真核宿主，包括活体内或原位的酵母、昆虫、真菌、鸟类及哺乳动物细胞或哺乳动物、昆虫、鸟类或酵母来源的宿主细胞。哺乳动物细胞或组织可来源于人类、灵长类动物、仓鼠、兔、啮齿动物、奶牛、猪、绵羊、马、山羊、狗或猫，但可使用任何其他哺乳动物细胞。此外，通过使用例如酵母泛蛋白水解酶系统，可实现泛蛋白跨膜多肽融合蛋白的活体内合成。如此产生的融合蛋白可活体内处理或活体外纯化及处理，从而允许合成具有指定氨基端序列的如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂。此外，可避免与直接酵母(或细菌)表达中起始密码子源性甲硫氨酸残基相关的问题。(参见例如Sabin等人，7Bio/Technol.705(1989)；Miller等人，7Bio/Technol.698(1989)。可利用一系列酵母基因表达系统中的任一者获得重组CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，这些系统中的启动子和终止元件来自于酵母在富含葡萄糖的培养基中生长时大量产生的编码糖解酶的活跃表达基因。已知的糖解基因亦可提供极有效的转录控制信号。举例而言，可利用磷酸甘油酸激酶基因的启动子及终止子信号。
在昆虫中产生CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，可通过本领域技术人员熟知的如用经工程改造以表达多肽的杆状病毒感染昆虫宿主来实现。参见Ausubel等人，1987-1993。
在一些实施例中，将引入的核酸序列(编码CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其多肽)并入至能够在受体宿主细胞中自主复制的质粒或病毒载体中。多种载体中的任一个可用于此目的，且为一般本领域的技术人员已知且可获得。参见例如Ausubel等人，1987-1993。选择特定质粒或病毒载体的重要因素包括：可从不含载体的受体细胞中识别且选择含有载体的受体细胞的容易性；特定宿主中所需的载体的拷贝数量；及是否需要能够使载体在不同物种的宿主细胞之间“穿梭”。
本领域已知的示例性原核载体包括质粒，例如能够在大肠杆菌中复制的质粒。可用于表达编码CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的DNA的其他基因表达元件包括但不限于(a)病毒转录启动子及其增强子元件，例如SV40早期启动子(Okayama等人，3Mol.Cell.Biol.280(1983))、劳氏肉瘤病毒LTR(Gorman等人，79PNAS 6777(1982))及莫洛尼鼠类白血病病毒LTR(Grosschedl等人，41Cell 885(1985))；(b)剪接区及多腺苷酸化位点，例如来源于SV40晚期区的那些(Okayarea等人，1983)及(c)例如SV40中的多腺苷酸化位点(Okayama等人，1983)。可如Liu等人(见下文)及Weidle等人，51Gene 21(1987)所描述，使用SV40早期启动子及其增强子、小鼠免疫球蛋白H链启动子增强子、SV40晚期区mRNA剪接、兔S-球蛋白插入序列、免疫球蛋白及兔S-球蛋白多腺苷酸化位点及SV40多腺苷酸化元件作为表达元件来表达免疫球蛋白编码DNA基因。
对于编码核苷酸序列的免疫球蛋白，转录启动子可为例如人类巨细胞病毒，启动子增强子可为巨细胞病毒及小鼠/人类免疫球蛋白。
在一些实施例中，对于啮齿动物细胞中DNA编码区的表达，转录启动子可为病毒LTR序列，转录启动子增强子可为小鼠免疫球蛋白重链增强子及病毒LTR增强子以及多腺苷酸化及转录终止区中的任一者或两者。在另一些实施例中，编码其他蛋白质的DNA序列与上文列举的表达元件组合以实现蛋白质在哺乳动物细胞中的表达。
各编码区或基因融合体组装于表达载体中或插入表达载体中。随后，将能够表达CD70可变区或其抗原结合部分或其他结合剂的受体细胞单独用编码CD70抗体或抗体多肽或其抗原结合部分或其他结合剂转染，或与编码VH及VL链编码区或其他结合剂的聚核苷酸共转染。在准许表达所并入编码区且自培养物回收所表达抗体链或完整抗体或抗原结合部分或其他结合剂的条件下培养经转染的受体细胞。
在一些实施例中，含有编码CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的编码区的核酸组装于各别表达载体中，这些表达载体随后用于共转染受体宿主细胞。各载体可含有一个或多个可选基因。举例而言，在一些实施例中，使用两种可选基因，第一可选基因经设计以用于在细菌系统中进行选择且第二可选基因经设计以用于在真核系统中进行选择，其中各载体具有一组编码区。此策略产生首先导引细菌系统中的核苷酸序列的产生且准许其扩增的载体。随后将在细菌宿主中如此产生且扩增的DNA载体用于共转染真核细胞，且允许选择携有所需经转染核酸(例如含有CD70抗体重链及轻链)的共转染细胞。用于细菌系统中的可选基因的非限制性实例为赋予安比西林(ampicillin)抗性的基因及赋予氯霉素(chloramphenicol)抗性的基因。用于真核转染物中的可选基因包括黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶基因(命名为gpt)及来自Tn5的磷酸转移酶基因(命名为neo)。或者，编码VH及VL链的融合核苷酸序列可组装于同一表达载体上。
为了转染表达载体及产生CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，受体细胞系可为中国仓鼠卵巢细胞系(例如DG44)或骨髓瘤细胞。骨髓瘤细胞可合成、组装及分泌由经传染免疫球蛋白基因编码的免疫球蛋白且具有免疫球蛋白的糖基化机制。举例而言，在一些实施例中，受体细胞为重组Ig产生骨髓瘤细胞SP2/0。SP2/0细胞仅产生由经转染基因编码的免疫球蛋白。骨髓瘤细胞可在培养物中或在小鼠腹腔中生长，其中分泌的免疫球蛋白可自腹水液中获得。
编码CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的表达载体可通过多种适合方式中的任一者引入至适当宿主细胞中，这些方式包括生物化学方式，例如转化、转染、原生质体融合、磷酸钙沉淀及施用诸如二乙氨基乙基(DEAE)葡聚糖的聚阳离子；及机械方式，例如电穿孔、直接显微注射及微弹轰击。Johnston等人，240Science 1538(1988)，如本领域技术人员所已知。
酵母具有相对于细菌的某些优势以用于产生免疫球蛋白重链及轻链。酵母会进行包括糖基化的翻译后肽修饰。存在多种重组DNA策略，其利用可用于在酵母中产生所需蛋白质的强启动子序列及高拷贝数质粒。酵母识别经选殖哺乳动物基因产物的前导序列且分泌携带前导序列的多肽(亦即前多肽)。参见例如Hitzman等人，11th Intl.Conf.Yeast，Genetics&Molec.Biol.(Montpelier，France，1982)。
可常规地评估酵母基因表达系统的抗体以及组装CD70抗体及其抗原结合部分及其他结合剂的产生、分泌及稳定性的水平。可利用不同酵母基因表达系统，该系统包括启动子和终止元件，这些启动子和终止元件来自酵母在富含葡萄糖的培养基中生长时大量产生的编码糖解酶的活跃表达基因。已知的糖解基因可提供极有效的转录控制信号。举例而言，可利用磷酸甘油酸激酶(PGK)基因的启动子及终止子信号。另一实例为翻译延伸因子1α启动子，例如来自中国仓鼠细胞的启动子。可采取多种方法来评估用于在酵母中表达免疫球蛋白的最佳表达质粒。参见IIDNA选殖45(Glover编，IRL Press，1985)及例如美国公开案第US2006/0270045 A1号。
细菌菌株亦可用作产生如本文所描述的抗体分子或其抗原结合部分及其他结合剂的宿主。可使用大肠杆菌K12菌株，例如大肠杆菌W3110；芽孢杆菌属；肠内细菌，例如鼠伤寒沙门杆菌(Salmonella typhi-murium)或黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)；及各种假单胞菌属。来源于与宿主细胞相容的物种的含有复制子及控制序列的质粒载体与此等细菌宿主结合使用。载体携带复制位点以及特定基因，这些基因能够在转化细胞中提供表型选择。可采用多种方法评估用于在细菌中产生CD70抗体及其抗原结合部分及其他结合剂的表达质粒(参见Glover，1985；Ausubel，1987，1993；Sambrook，1989；Colligan，1992-1996)。
宿主哺乳动物细胞可活体外或活体内生长。哺乳动物细胞对免疫球蛋白分子提供翻译后修饰，包括前导肽移除、VH及VL链的折叠及组装、抗体分子的糖基化及功能性抗体和/或其抗原结合部分或其他结合剂的分泌。
除上文所描述的淋巴来源的细胞以外，可用作产生抗体蛋白的宿主的哺乳动物细胞包括纤维母细胞来源的细胞，例如Vero或CHO-K1细胞。可用于表达免疫球蛋白多肽的示例性真核细胞包括但不限于COS细胞，包括COS 7细胞；293细胞，包括293-6E细胞；CHO细胞，包括CHO-S及DG44细胞；PERC6TM细胞(Crucell)；及NSO细胞。在一些实施例中，选择特定真核宿主细胞的依据是其对重链和/或轻链进行所需翻译后修饰的能力。举例而言，在一些实施例中，CHO细胞产生多肽，这些多肽的糖基化水平高于293细胞中所产生的相同多肽。
在一些实施例中，可根据任何适合方法在已被一个或多个编码多肽的核酸分子工程改造或转染的动物活体内产生一个或多个CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂。
在一些实施例中，抗体或其抗原结合部分产生于无细胞系统中。非限制性示例性无细胞系统描述于例如Sitaraman等人，Methods Mol.Biol.498:229-44(2009)；Spirin，Trends Biotechnol.22:538-45(2004)；及Endo等人，Biotechnol.Adv.21:695-713(2003)中。
许多载体系统可供用于哺乳动物细胞中VH及VL链的表达(参见Glover，1985)。可遵循各种方法获得完整抗体。如上文所论述，可在相同细胞中共表达VH及VL链以及可选择性地存在的相关恒定区，以实现VH及VL链细胞内结合及连接至完全四聚H2L2抗体或其抗原结合部分中。可通过在相同宿主中使用相同或不同的质粒来进行共表达。编码VH及VL链或其抗原结合部分的核酸可置于同一质粒中，随后将其转染至细胞中，借此直接选择表达两条链的细胞。或者，细胞可首先经编码一条链(例如VL链)的质粒转染，接着用含有第二可选标记的VH链质粒转染所得细胞系。经由任一途径产生抗体、其抗原结合部分的细胞系可用编码肽、VH、VL或VH加VL链的其他拷贝连同其他可选标记的质粒转染，以产生具有增强特性的细胞系，例如更高的组装CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的产量，或增强的经转染细胞系稳定性。
另外，植物已成为用于重组抗体产生的方便、安全且经济的替代表达系统，这些重组抗体是基于微生物或动物细胞的大规模培养。CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂可表达于植物细胞培养物或常规生长的植物中。植物中的表达可为系统性的，限于亚细胞质粒，或限于种子(胚乳)。参见例如美国专利公开案第2003/0167531号；美国专利第6,080,560号；美国专利第6,512,162号；及WO 0129242号。若干种植物源性抗体已达到研发的晚期阶段，包括临床试验(参见例如Biolex，N.C.)。
对于完整抗体，CD70抗体的可变区(VH及VL区)通常连接至免疫球蛋白恒定区(Fc)或域(通常人类免疫球蛋白的)的至少一部分。人类恒定区DNA序列可根据熟知程序自各种人类细胞(例如永生化B细胞)分离(WO 87/02671)。CD70结合抗体可含有轻链及重链恒定区两者。重链恒定区可包括CH1、铰链、CH2、CH3及可选择性地存在的CH4区。在一些实施例中，CH2域可缺失或省略。
关于产生单链抗体所描述的技术(参见例如美国专利第4,946,778号；Bird，Science 242:423-42(1988)；Huston等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883(1988)；及Ward等人，Nature 334:544-54(1989)；其以全文引用的方式并入本文中)可适于产生特异性结合于CD70的单链抗体。单链抗体是通过氨基酸桥键连接Fv区的重链及轻链可变区，从而产生单链多肽而形成。亦可使用在大肠杆菌中组装功能性Fv部分的技术(参见例如Skerra等人，Science 242:1038-1041(1988)；其以全文引用的方式并入本文中)。
在一些实施例中，抗原结合部分或其他结合剂包括一个或多个scFv。scFv可以是抗体的重链(VH)及轻链(VL)可变区中的可变区与十个至约25个氨基酸的短连接子肽连接的融合蛋白。连接子通常富含甘氨酸以具有可挠性，以及丝氨酸或苏氨酸以具有可溶性，且可连接VH的N端与VL的C端，或反之亦然。尽管移除恒定区且引入连接子，但此蛋白质保留原始抗体的特异性。scFv抗体描述于例如Houston，J.S.，Methods in Enzymol.203(1991)46-96中。制造scFv分子及设计适合肽连接子的方法描述于例如美国专利第4,704,692号；美国专利第4,946,778号；Raag及Whitlow，FASEB 9:73-80(1995)及Bird及Walker，TIBTECH，9:132-137(1991)中。ScFv-Fc已由Sokolowska-Wedzina等人，Mol.Cancer Res.15(8):1040-1050，2017描述。
在一些实施例中，抗原结合部分或其他结合剂为单域抗体，其为由单一单体可变抗体域组成的抗体部分。单域抗体可来源于骆驼科动物的抗体重链的可变域(例如纳米抗体或VHH部分)。此外，单域抗体可为来源于鲨鱼的自主人类重链可变域(aVH)或VNAR部分(参见例如Hasler等人，Mol.Immunol.75:28-37，2016)。
产生单域抗体(DAB或VHH)的技术是本领域已知的，如例如Cossins等人(2006，Prot Express Purif51:253-259)及Li等人(Immunol.Lett.188:89-95，2017)中所公开。单域抗体可通过标准免疫接种技术获自例如骆驼、羊驼或骆马。(参见例如Muyldermans等人，TIBS26:230-235，2001；Yau等人，J Immunol Methods 281:161-75，2003；及Maass等人，JImmunol Methods 324:13-25，2007)。VHH可具有强抗原结合能力且可与常规VH-VL对不可接近的抗原决定基相互作用(参见例如Muyldermans等人，2001)。羊驼血清IgG含有仅约50％骆驼科重链IgG抗体(HCAb)(参见例如，Maass等人，2007)。羊驼可经抗原免疫接种，且可分离结合于目标抗原并中和目标抗原的VHH(参见例如Maass等人，2007)。已鉴别扩增羊驼VHH编码序列的PCR引物且可将其用于构建羊驼VHH噬菌体展示库，其可用于通过本领域熟知的标准生物淘选技术分离抗体片段(参见例如Maass等人，2007)。
用于制备多特异性抗体的技术包括但不限于具有不同特异性的两个免疫球蛋白重链-轻链对的重组共表达(参见Milstein及Cuello，Nature 305:537(1983))；WO 93/08829及Traunecker等人，EMBO J.10:3655(1991))，及“杵-臼结构(knob-in-hole)”工程改造(参见例如美国专利第5,731,168号；Carter(2001)，J Immunol Methods 248，7-15)。多特异性抗体亦可通过以下制备：工程改造静电转向效应制备抗体Fc-异二聚分子(参见例如WO 2009/089004A1)；两个或更多个抗体或其抗原结合部分的交联(参见例如美国专利第4,676,980号及Brennan等人，Science，229:81(1985))；使用亮氨酸拉链来产生双特异性抗体(参见例如Kostelny等人，J.Immunol.，148(5):1547-1553(1992))；使用“双功能抗体”技术制备双特异性抗体部分(参见例如Hollinger等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，90:6444-6448(1993))；及使用单链Fv(scFv)二聚体(参见例如Gruber等人，J.Immunol.，152:5368(1994))；及制备三特异性抗体，例如在Tutt等人J.Immunol.147:60(1991)中所描述。
具有三个或更多个功能性抗原结合位点的经工程改造的抗体，包括(章鱼抗体(Octopus antibody))亦可为结合剂(参见例如US2006/0025576A1)。
本文中的结合剂(例如抗体或抗原结合部分)亦包括“双重作用Fab”或“DAF”，其包括结合于两个不同抗原的抗原结合位点(参见例如US2008/0069820及Bostrom等人，2009，Science 323:1610-14)。本文中亦包括“Crossmab”抗体(参见例如WO2009/080251、WO2009/080252、WO2009/080253、WO2009/080254及WO2013/026833)。
在一些实施例中，结合剂包括融合至Fc域的两个亚单元的一个或另一个的不同抗原结合位点；因此Fc域的两个亚单元可包括于两个不相同多肽链中。这些多肽的重组共表达及随后的二聚化得到两种多肽的若干种可能组合。为了改良双特异性分子在重组产生中的产量及纯度，因此将促进所需多肽结合的修饰引入结合剂的Fc域中将是有利的。
一般而言，此方法涉及用带电氨基酸残基置换两个Fc域的界面处的一个或多个氨基酸残基，使得同二聚体形成在静电上不利，但异二聚化在静电上有利。
在一些实施例中，结合剂为“双特异性T细胞捕获剂”或BiTE(参见例如WO2004/106381、WO2005/061547、WO2007/042261及WO2008/119567)。此方法利用布置于单一多肽上的两个抗体可变域。举例而言，单一多肽链可包括两个单链Fv(scFv)部分，其各自具有通过长度足以允许两个域之间的分子内结合的多肽连接子分离的可变重链(VH)域及可变轻链(VL)域。此单一多肽进一步包括两个scFv之间的多肽间隔子序列。各scFv识别不同抗原决定基，且此等抗原决定基可对不同蛋白质具有特异性，使得两种蛋白质均与BiTE结合。
由于其为单一多肽，双特异性T细胞捕获剂可使用本领域已知的任何原核或真核细胞表达系统(例如CHO细胞系)表达。然而，特定纯化技术(参见例如EP1691833)可为使单体双特异性T细胞捕获剂与其他多聚物种分离所必需，这些其他多聚物种可具有除单体的预期活性外的生物活性。在一个示例性纯化方案中，首先对含有所分泌多肽的溶液进行金属亲和层析，且以一定梯度的咪唑浓度洗脱多肽。使用阴离子交换层析进一步纯化此洗脱液，且使用一定梯度的氯化钠浓度洗脱多肽。最后，对此洗脱液进行尺寸排阻层析以自多聚物中分离单体。在一些实施例中，作为双特异性抗体的结合剂由单一多肽链构成，该单一多肽链包括通过肽连接子彼此融合的两个单链FV部分(scFV)。
在一些实施例中，结合剂为多特异性的，例如IgG-scFV。IgG-scFv型式包括IgG(H)-scFv、scFv-(H)IgG、IgG(L)-scFv、svFc-(L)IgG、2scFV-IgG及IgG-2scFv。这些及其他双特异性抗体型式及其制备方法已描述于例如Brinkmann及Kontermann，MAbs 9(2):182-212(2017)；Wang等人，Antibodies，2019，8，43；Dong等人，2011，MAbs 3:273-88；Natsume等人，J.Biochem.140(3):359-368，2006；Cheal等人，Mol.Cancer Ther.13(7):1803-1812，2014；及Bates and Power，Antibodies，2019，8，28中。
IgG样双可变域抗体(DVD-Ig)已由Wu等人，2007，Nat Biotechnol 25:1290-97；Hasler等人，Mol.Immunol.75:28-37，2016以及WO 08/024188及WO 07/024715描述。三功能抗体(Triomab)已由Chelius等人，MAbs 2(3):309-319，2010描述。二合一-IgG已由Kontermann等人，Drug Discovery Today 20(7):838-847，2015描述。Tanden抗体或TandAb已由Kontermann等人(同上)描述。ScFv-HSA-scFv抗体亦已由Kontermann等人(同上)描述。
完整(例如整个)抗体、其二聚体、个别轻链及重链或其抗原结合部分及其他结合剂可通过已知技术回收及纯化，例如免疫吸附或免疫亲和层析、层析方法如HPLC(高效液相层析)、硫酸铵沉淀、凝胶电泳或此等方法的任何组合。大体上参见Scopes，ProteinPurification(Springer-Verlag，N.Y.，1982)。尤其对于医药用途，同质性为至少约90％至95％的实质上纯CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂是有利的，同质性为98％至99％或更高的结合剂亦如此。一旦经部分纯化或纯化至所需同质性，完整CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂就可在治疗上或在研发及执行检测程序、免疫荧光染色及其类似者中使用。大体上参见第I及II卷Immunol.Meth.(Lefkovits及Pernis编，Acad.Press，NY，1979及1981)。
抗体药物偶联物
在一些实施例中，如本文所描述的CD70抗体、抗原结合部分或其他结合剂为CD70抗体药物偶联物(亦称作CD70偶联物或CD70 ADC)的部分。在一些实施例中，CD70抗体、抗原结合部分或其他结合剂连接至至少一个连接子，且至少一种药物连接至各连接子。如本文所用，在偶联物的情形下，术语“药物”是指细胞毒性剂(例如化学治疗剂或药物)、免疫调节剂、核酸(包括siRNA)、生长抑制剂、毒素(例如细菌、真菌、植物或动物来源的蛋白质毒素、酶活性毒素，或其片段)、放射性同位素、PROTAC及其他在递送至这些细胞时对目标细胞具活性的化合物。
细胞毒性剂
在一些实施例中，CD70偶联物包括至少一种为细胞毒性剂的药物。“细胞毒性剂”是指对细胞具有细胞毒性效果的药剂。“细胞毒性效果”是指消耗、消除和/或杀灭目标细胞。细胞毒性剂包括例如微管蛋白破坏剂、拓扑异构酶抑制剂、DNA小沟结合剂及DNA烷基化剂。
微管蛋白破坏剂包括例如奥瑞他汀、尾海兔素(dolastatin)、微管溶素(tubulysin)、秋水仙碱(colchicine)、长春花生物碱、紫杉烷、念珠藻素(cryptophycin)、类美登素、哈米特林(hemiasterlin)以及其他微管蛋白破坏剂。奥瑞他汀为天然产物尾海兔素10的衍生物。示例性奥瑞他汀包括MMAE(N-甲基缬氨酸-缬氨酸-多拉异亮氨酸-多拉脯氨酸-去甲肾上腺素(N-methylvaline-valine-dolaisoleuine-dolaproine-norephedrine))、MMAF(N-甲基缬氨酸-缬氨酸-多拉异亮氨酸-多拉脯氨酸-苯丙氨酸)及AFP(参见WO2004/010957及WO2007/008603)。其他奥瑞他汀类化合物公开于例如已公开美国申请案第US2021/0008099号、第US2017/0121282号、第US2013/0309192号及第US2013/0157960号中。尾海兔素包括例如尾海兔素10及尾海兔素15(参见例如Pettit等人，J.Am.Chem.Soc.，1987，109，6883-6885；Pettit等人，Anti-Cancer Drug Des.，1998，13，243-277；及已公开美国申请案US2001/0018422)。预期用于本文中的其他尾海兔素衍生物公开于美国专利9,345,785中，专利以引用的方式并入本文中。
微管溶素包括但不限于微管溶素D、微管溶素M、微管苯丙氨酸(tubuphenylalanine)及微管酪氨酸(tubutyrosine)。WO2017/096311及WO/2016-040684描述了包括微管溶素M的微管溶素类似物。
秋水仙碱包括但不限于秋水仙碱及CA-4。
长春花生物碱包括但不限于长春碱(vinblastine；VBL)、长春瑞滨(vinorelbine；VRL)、长春新碱(vincristine；VCR)及长春地辛(vindesine；VOS)。
紫杉烷包括但不限于太平洋紫杉醇(paclitaxel)与多西他赛(docetaxel)。
念珠藻素包括但不限于念珠藻素-1及念珠藻素-52。
类美登素包括但不限于美登素、美登醇、DM1、DM3及DM4中的美登素类似物及安莎霉素-2。示例性类美登素药物部分包括具有经修饰的芳族环的类似物，例如：C-19-去氯(美国专利第4,256,746号)(通过氢化锂铝还原安丝霉素P2来制备)；C-20-羟基(或C-20-去甲基)+/-C-19-去氯(美国专利第4,361,650号及第4,307,016号)(通过使用链霉菌属(Streptomyces)或放线菌属(Actinomyces)去甲基化或使用LAH去氯来制备)；及C-20-去甲氧基、C-20-酰氧基(-OCOR)、+/-去氯(美国专利第4,294,757号)(通过使用酰氯酰化来制备)；及在其他位置具有修饰的化合物。
类美登素药物部分亦包括具有以下修饰的药物，例如：C-9-SH(美国专利第4,424,219号)(通过美登醇与H2S或P2S5的反应来制备)；C-14-烷氧基甲基(去甲氧基/CH2OR)(美国专利第4,331,598号)；C-14-羟甲基或酰氧基甲基(CH2OH或CH2OAc)(美国专利第4,450,254号)(由奴卡菌属(Nocardia)制备)；C-15-羟基/酰氧基(美国专利第4,364,866号)(通过链霉菌属转化美登醇来制备)；C-15-甲氧基(美国专利第4,313,946号及第4,315,929号)(自滑桃木(Trewia nudlflora)分离)；C-18-N-去甲基(美国专利第4,362,663号及第4,322,348号)(通过链霉菌属使美登醇去甲基化来制备)；及4，5-去氧(美国专利第4,371,533号)(通过三氯化钛/LAH还原美登醇来制备)。
哈米特林包括但不限于哈米特林及HTI-286。
其他微管蛋白破坏剂包括根薯酮内酯(taccalonolide)A、根薯酮内酯B、根薯酮内酯AF、根薯酮内酯AJ、根薯酮内酯Al-环氧化物、圆皮海绵内酯(discodermolide)、埃博霉素(epothilone)A、埃博霉素B与劳力马德(laulimalide)。
在一些实施例中，细胞毒性剂可为拓扑异构酶抑制剂，例如喜树碱。示例性喜树碱包括例如喜树碱、伊立替康(irinotecan)(亦称作CPT-11)、贝洛替康(belotecan)、(7-(2-(N-异丙基氨基)乙基)喜树碱)、拓扑替康、10-羟基-CPT、SN-38、依喜替康及依喜替康类似物DXd(参见US20150297748)。其他喜树碱公开于WO1996/021666、WO00/08033、US2016/0229862及WO2020/156189中。
在一些实施例中，细胞毒性剂为倍癌霉素(duocarmcycin)，包括合成类似物KW-2189及CBI-TMI。
免疫调节剂
在一些实施例中，药物为免疫调节剂。免疫调节剂可为例如TLR7和/或TLR8激动剂、STING激动剂、RIG-I激动剂或其他免疫调节剂。
在一些实施例中，药物为免疫调节剂，例如TLR7和/或TLR8激动剂。在一些实施例中，TLR7激动剂是选自咪唑并喹啉、咪唑并喹啉胺、噻唑并喹啉、氨基喹啉、氨基喹唑啉、吡啶并[3，2-d]嘧啶-2，4-二胺、嘧啶-2，4-二胺、2-氨基咪唑、1-烷基-1H-苯并咪唑-2-胺、四氢吡啶并嘧啶、杂芳并噻二-2，2-二氧化物、苯并萘啶、鸟苷类似物、腺苷类似物、胸苷均聚物、ssRNA、CpG-A、PolyG10及PolyG3。在一些实施例中，TLR7激动剂选自咪唑并喹啉、咪唑并喹啉胺、噻唑并喹啉、氨基喹啉、氨基喹唑啉、吡啶并[3，2-d]嘧啶-2，4-二胺、嘧啶-2，4-二胺、2-氨基咪唑、1-烷基-1H-苯并咪唑-2-胺、四氢吡啶并嘧啶、杂芳噻二嗪-2，2-二氧化物或苯并萘啶。在一些实施例中，TLR7激动剂为非天然存在的化合物。TLR7调节剂的实例包括GS-9620、GSK-2245035、咪喹莫德(imiquimod)、瑞喹莫德(resiquimod)、DSR-6434、DSP-3025、IMO-4200、MCT-465、MEDI-9197、3M-051、SB-9922、3M-052、Limtop、TMX-30X、TMX-202、RG-7863、RG-7795以及US20160168164(Janssen)、US20150299194(Roche)、US20110098248(Gilead Sci-ences)、US20100143301(Gilead Sciences)及US20090047249(GileadSciences)中所公开的化合物。
在一些实施例中，TLR8激动剂选自苯并氮呯、咪唑并喹啉、噻唑并喹啉、氨基喹啉、氨基喹唑啉、吡啶并[3，2-d]嘧啶-2，4-二胺、嘧啶-2，4-二胺、2-氨基咪唑、1-烷基-1H-苯并咪唑-2-胺、四氢吡啶并嘧啶或ssRNA。在一些实施例中，TLR8激动剂选自苯并氮呯、咪唑并喹啉、噻唑并喹啉、氨基喹啉、氨基喹唑啉、吡啶并[3，2-d]嘧啶-2，4-二胺、嘧啶-2，4-二胺、2-氨基咪唑、1-烷基-1H-苯并咪唑-2-胺及四氢吡啶并嘧啶。在一些实施例中，TLR8激动剂为非天然存在的化合物。TLR8激动剂的实例包括莫托莫德(motolimod)、瑞喹莫德、3M-051、3M-052、MCT-465、IMO-4200、VTX-763、VTX-1463。
在一些实施例中，TLR8激动剂可为WO2018/170179、WO2020/056198及WO2020056194所描述的化合物中的任一者。
其他TLR7及TLR8激动剂公开于例如WO2016142250、WO2017046112、WO2007024612、WO2011022508、WO2011022509、WO2012045090、WO2012097173、WO2012097177、WO2017079283、US20160008374、US20160194350、US20160289229、美国专利第6043238号、US20180086755(Gilead)、WO2017216054(Roche)、WO2017190669(Shanghai De NovoPharmatech)、WO2017202704(Roche)、WO2017202703(Roche)、WO20170071944(Gilead)、US20140045849(Janssen)、US20140073642(Janssen)、WO2014056953(Janssen)、WO2014076221(Janssen)、WO2014128189(Janssen)、US20140350031(Janssen)、WO2014023813(Janssen)、US20080234251(Array Biopharma)、US20080306050(ArrayBiopharma)、US20100029585(Ventirx Pharma)、US20110092485(Ventirx Pharma)、US20110118235(Ventirx Pharma)、US20120082658(Ventirx Pharma)、US20120219615(Ventirx Pharma)、US20140066432(Ventirx Pharma)、US20140088085(Ventirx Pharma)、US20140275167(Novira Therapeutics)及US20130251673(Novira Therapeu-tics)、WO2018198091(Novartis AG)以及US20170131421(Novartis AG)。
在一些实施例中，免疫调节剂为STING激动剂。STING激动剂的实例包括例如WO2020059895、WO2015077354、WO2020227159、WO2020075790、WO2018200812及WO2020074004中所公开的那些。
在一些实施例中，免疫调节剂为RIG-I激动剂。RIG-I激动剂的实例包括KIN1148、SB-9200、KIN700、KIN600、KIN500、KIN100、KIN101、KIN400及KIN2000。
毒素
在一些实施例中，药物为酶活性毒素或其片段，包括但不限于白喉A链(diphtheria A chain)、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自绿脓杆菌(Pseudomonas aeruginosa))、蓖麻毒素A链(ricin Achain)、相思子毒素A链(abrin Achain)、莫迪素A链(modeccin A chain)、α-帚曲菌素(alpha-sarcin)、油桐(Aleuritesfordii)蛋白、康乃馨(dianthin)蛋白、洋商陆(Phytolaca americana)蛋白(PAPI、PAPII及PAP-S)、苦瓜(momordica charantia)抑制剂、麻疯树毒蛋白(curcin)、巴豆毒素(crotin)、肥皂草(sapaonaria officinalis)抑制剂、白树素(gelonin)、有丝分裂素(mitogellin)、侷限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、伊诺霉素(enomycin)及霉菌毒素(tricothecenes)。
放射性同位素
在一些实施例中，药物为放射性原子。各种放射性同位素可用于产生放射性偶联物。实例包括I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi213、P32、Pb212及镏的放射性同位素(例如Lu177)。
PROTAC
在一些实施例中，药物为蛋白分解靶向嵌合体(PROTAC)。PROTAC描述于已公开美国申请案，例如第20210015942号、第20210015929号、第20200392131号、第20200216507号、第US20200199247号及第US20190175612号中；其公开内容以引用的方式并入本文中。
连接子
CD70偶联物通常包括至少一个连接子，各连接子具有至少一种药物与其连接。通常，偶联物包括CD70抗体(或其抗原结合部分或其他结合剂)与药物之间的连接子。在各种实施例中，连接子可为蛋白酶可裂解连接子、酸可裂解连接子、二硫化物连接子、含二硫化物连接子或具有邻接二硫键的二甲基基团的含二硫化物连接子(例如SPDB连接子)(参见例如，Jain等人，Pharm.Res.32:3526-3540(2015)；Chari等人，Cancer Res.52:127-131(1992)；美国专利第5,208,020号)；自稳定连接子(参见例如WO2018/031690及WO2015/095755，以及Jain等人，Pharm.Res.32:3526-3540(2015))、不可裂解连接子(参见例如WO2007/008603)、光不稳定连接子和/或亲水性连接子(参见例如W02015/123679)。
在一些实施例中，连接子为在细胞内条件下可裂解的可裂解连接子，使得连接子的裂解在细胞内环境中自抗体(或其抗原结合部分或其他结合剂)和/或连接子释放药物。举例而言，在一些实施例中，连接子可通过细胞内环境中(例如溶酶体或内质体或胞膜窖内)存在的裂解剂裂解。连接子可为例如肽基连接子，其由细胞内肽酶或蛋白酶(包括但不限于溶酶体或内体蛋白酶)裂解(参见例如WO2004/010957、US20150297748、US2008/0166363、US20120328564及US20200347075)。通常，肽基连接子为至少一个氨基酸长或至少两个氨基酸长。细胞内裂解剂可包括组织蛋白酶B及组织蛋白酶D以及纤维蛋白溶酶，已知其均水解二肽药物衍生物，使得活性药物在目标细胞内部释放(参见例如Dubowchik及Walker，1999，Pharm.Therapeutics 83:67-123)。最典型的肽基连接子为可由存在于目标抗原表达细胞中的酶裂解的肽基连接子。举例而言，可使用可由在癌组织中高度表达的硫醇相关蛋白酶组织蛋白酶B裂解的肽基连接子(例如Phe-Leu或Gly-Phe-Leu-Gly连接子)。其他此类连接子描述于例如美国专利第6,214,345号中。在特定实施例中，可由细胞内蛋白酶裂解的肽基连接子为Val-Cit连接子或Phe-Lys连接子(参见例如美国专利第6,214,345号，其描述多柔比星(doxorubicin)与val-cit连接子的合成)或Gly-Gly-Phe-Gly(SEQ IDNO:35)连接子(参见例如US2015/0297748)。使用细胞内蛋白分解释放药物的一个优势为药物在结合时通常减弱且偶联物的血清稳定性通常较高。参见美国专利9,345,785。
如本文所用，术语“细胞内裂解(intracellularly cleaved及intracellularcleavage)”是指抗体药物偶联物在细胞内的代谢过程或反应，由此药物(例如细胞毒性剂)与抗体之间的共价连接(例如连接子)断裂，产生游离药物，或在细胞内自抗体解离的偶联物的其他代谢物。因此，偶联物的裂解部分为细胞内代谢物。
在一些实施例中，可裂解连接子为pH敏感的，即在某些pH值下对水解敏感。通常，pH敏感连接子在酸性条件下可水解。举例而言，可使用可在溶酶体中水解的酸不稳定连接子(例如腙、半卡腙(semicarbazone)、硫半卡腙(thiosemicarbazone)、顺式乌头酸酰胺、原酸酯、缩醛、缩酮或其类似物)。(参见例如美国专利第5，122，368号；第5,824,805号；及第5,622,929号；Dubowchik及Walker，1999，Pharm.Therapeutics 83:67-123；Neville等人，1989，Biol.Chem.264:14653-14661)。此类连接子在中性pH条件下(例如血液中的pH值条件下)相对稳定，但在低于pH5.5或5.0(近似溶酶体的pH)下不稳定。在一些实施例中，可水解连接子为硫醚连接子(例如经由酰腙键连接至药物的硫醚(参见例如美国专利第5,622,929号))。
在一些实施例中，连接子在还原条件下可裂解(例如二硫化物连接子)。已知各种二硫化物连接子，包括例如可使用SATA(N-丁二酰亚胺基-5-乙酰基硫基乙酸酯)、SPDP(N-丁二酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯)、SPDB(N-丁二酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丁酸酯)及SMPT(N-丁二酰亚胺基-氧基羰基-α-甲基-α-(2-吡啶基-二硫基)甲苯)、SPDB及SMPT形成的连接子(参见例如Thorpe等人，1987，Cancer Res.47:5924-5931；Wawrzynczak等人，In lmmunoconjugates:Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy ofCancer(C.W.Vogel编，Oxford U.Press，1987。参见美国专利第4,880,935号)。
在一些实施例中，连接子为丙二酸酯连接子(Johnson等人，1995，AnticancerRes.15:1387-93)、顺丁烯二酰亚胺基苯甲酰基连接子(Lau等人，1995，Bioorg-Med-Chem.3(10):1299-1304)或3'-N-酰胺类似物(Lau等人，1995，Bioorg-Med-Chem.3(10):1305-12)。在一些实施例中，连接子单元不可裂解，例如顺丁烯二酰亚胺基己酰基连接子，且药物通过抗体降解释放。(参见美国公开案第2005/0238649号)。
在一些实施例中，连接子对细胞外环境实质上不敏感。如本文所用，“对细胞外环境实质上不敏感”在连接子的情形下是指当抗体药物偶联物(ADC)存在于细胞外环境(例如血浆中)时，ADC的样本中不超过约20％、通常不超过约15％、更通常不超过约10％且甚至更通常不超过约5％、不超过约3％或不超过约1％的连接子被裂解。连接子在细胞外环境中是否实质上不敏感可通过以下确定：用血浆独立地培育(a)ADC(“ADC样本”)及(b)等摩尔量的未结合抗体或药物(“对照样本”)达预定时段(例如2、4、8、16或24小时)，且随后将ADC样本中存在的未结合抗体或药物的量与对照样本中存在的量进行比较，例如通过高效液相层析测量。
在一些实施例中，连接子促进细胞内化。在一些实施例中，连接子在与例如细胞毒性剂的药物结合时(即，在如本文中所描述的ADC的连接子-药物部分的环境中)促进细胞内化。在另一些实施例中，连接子在与药物及CD70抗体两者结合时(即，在如本文所描述的ADC的环境中)促进细胞内化。
可用于本公开组合物及方法的多种连接子描述于WO 2004010957中。在一些实施例中，蛋白酶可裂解连接子包括硫醇反应性间隔子及二肽。在一些实施例中，蛋白酶可裂解连接子由硫醇反应性顺丁烯二酰亚胺基己酰基间隔子、缬氨酸-瓜氨酸二肽及对氨基苯甲氧羰基间隔子组成。
在一些实施例中，酸可裂解连接子为肼连接子或季铵盐连接子(参见WO2017/096311及WO2016/040684)。
在一些实施例中，连接子为如美国专利9,504,756中所描述的包括顺丁烯二酰亚胺基的自稳定连接子。
在一些实施例中，连接子为亲水性连接子，例如W02015/123679中的亲水性肽及WO2013/012961及WO2019/213046中所公开的基于糖醇聚合物的连接子。
在另一些实施例中，可使用各种双功能蛋白偶合剂制备CD70抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)与药物的偶联物，这些双功能蛋白偶合剂例如N-丁二酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、丁二酰亚胺基-4-(N-顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)、亚氨基硫杂环戊烷(IT)、亚胺基酯的双功能衍生物(例如二亚胺代己二酸二甲酯HCl)、活性酯(例如辛二酸二丁二酰亚胺酯)、醛(例如戊二醛)、双叠氮基化合物(例如双(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮衍生物(例如双(对重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(例如甲苯2，6-二异氰酸酯)及双活性氟化合物(例如1，5-二氟-2，4-二硝基苯)。用于将放射性核苷酸与抗体、其抗原结合部分或其他结合剂结合的螯合剂已描述于例如WO94/11026中。
CD70抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)的偶联物包括但不限于用交联剂试剂制备的此类偶联物，这些交联剂试剂包括但不限于市售的BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC及磺基-SMPB，及SVSB(丁二酰亚胺基-(4-乙烯基砜)苯甲酸酯)，这些交联剂试剂为可商购的(例如购自Pierce Biotechnology，Inc.，Rockford，IL.，U.S.A)。
在一些实施例中，连接子连接至抗体、抗原结合部分或其他结合剂的氨基酸序列的末端，或可连接至抗体、抗原结合部分或其他结合剂的侧链修饰，例如赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬氨酸、非天然氨基酸残基、谷氨酰胺或谷氨酸残基的侧链。抗体、抗原结合部分或其他结合剂与连接子或药物之间的连接可经由许多键中的任一者进行，例如但不限于酰胺键、酯键、醚键、碳-氮键、碳-碳单键或三键、二硫键或硫醚键。可形成此类键的官能团包括例如氨基、羧基、醛基、叠氮基、炔基及烯烃基、酮、碳酸酯、键结至离去基团的羰基官能团(例如氰基及丁二酰亚胺基)及羟基。
在一些实施例中，连接子在链间二硫键连接至抗体、抗原结合部分或其他结合剂。在一些实施例中，连接子在铰链半胱氨酸残基处连接至抗体、抗原结合部分或其他结合剂。在一些实施例中，连接子在经工程改造的半胱氨酸残基处连接至抗体、抗原结合部分或其他结合剂。在一些实施例中，连接子在赖氨酸残基处连接至抗体、抗原结合部分或其他结合剂。在一些实施例中，连接子在经工程改造的谷氨酰胺残基处连接至抗体、抗原结合部分或其他结合剂。在一些实施例中，连接子在经工程改造至重链中的非天然氨基酸处连接至抗体、抗原结合部分或其他结合剂。
在一些实施例中，连接子经由硫氢基连接至抗体、抗原结合部分或其他结合剂。在一些实施例中，连接子经由伯胺连接至抗体、抗原结合部分或其他结合剂。在一些实施例中，连接子经由抗体、抗原结合部分或其他结合剂上的非天然氨基酸之间产生的连接通过与肟键反应而连接，肟键通过在药物上用烷氧基胺修饰酮基来形成。
在一些实施例中，连接子经由分选酶A(Sortase A)连接子连接至抗体、抗原结合部分或其他结合剂。分选酶A连接子可通过分选酶A将LPXTG识别基序(SEQ ID NO:33)融合至N端GGG基序以再生原生酰胺键而产生。
示例性连接子药物组合
在一些实施例中，诸如微管蛋白破坏剂(例如奥瑞他汀)的药物是通过C端羧基连接至连接子，C端羧基与连接子(例如以引用的方式并入本文中的美国专利9,463,252中所描述的连接子单元(LU))形成酰胺键。在一些实施例中，连接子包括至少一个氨基酸。
在一些实施例中，连接子还包括延伸子单元和/或氨基酸单元。示例性延伸子单元及氨基酸单元描述于美国专利第9,345,785号及美国专利第9,078,931号中，其各自以引用的方式并入本文中。
在一些实施例中，抗体药物偶联物包括经由mc-val-cit-PAB连接子共价连接于MMAE的抗CD70抗体。
在一些实施例中，CD70偶联物具有下式：
或其药学上可接受的盐；其中：mAb为CD70抗体、其抗原结合部分或其他结合剂，S为抗体、抗原结合部分或其他结合剂的硫原子，A为延伸子单元，且p为约3至约5或约3至约8。
药物负载由p表示，即偶联物中每抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)的药物分子(例如细胞毒性剂)的平均数量。举例而言，若p为约4，则考虑组合物中所存在的全部抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)的平均药物负载为约4。在一些实施例中，p在约3至约5、约3.6至约4.4或约3.8至约4.2范围内。在一些实施例中，p可为约3、约4或约5。在一些实施例中，p在约6至约8，更佳约7.5至约8.4范围内。在一些实施例中，p可为约6、约7或约8。
制剂中每抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)的平均药物数量可通过常规手段，例如质谱、ELISA分析及HPLC来表征。还可就p而言来测定抗体-药物偶联物的定量分布。在一些情况下，可通过诸如反相HPLC或电泳的手段，将p为特定值的均相抗体-药物偶联物与具有其他药物负载的抗体-药物偶联物进行分离、纯化及表征。
在一些实施例中，延伸子单元能够经由抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)的硫氢基将抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)连接至氨基酸或肽(例如缬氨酸-瓜氨酸肽)。硫氢基可例如通过还原CD70抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)的链间二硫键来产生。举例而言，延伸子单元可经由由还原抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)的链间二硫键产生的硫原子连接至抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)。在一些实施例中，延伸子单元仅通过由还原抗体的链间二硫键产生的硫原子连接至抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)。在一些实施例中，硫氢基可通过使CD70抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)的赖氨酸部分的氨基与2-亚氨基硫杂环戊烷(特劳特试剂(Traut's reagent))或其他硫氢基产生试剂反应来产生。在一些实施例中，CD70抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)为重组抗体且经工程改造以携带一个或多个赖氨酸。在一些实施例中，重组CD70抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)经工程改造以携带额外的硫氢基，例如额外的半胱氨酸，例如经工程改造的半胱氨酸。
MMAE的合成与结构描述于美国专利第6,884,869号中，其以全文引用的方式并入本文中且用于所有目的。示例性延伸子单元的合成及结构以及用于制备抗体药物偶联物的方法描述于例如美国公开案第2006/0074008号及第2009/0010945号中，其各自以全文引用的方式并入本文中。
代表性延伸子单元描述于美国专利9,211,319的式IIIa及IIIb的方括号内，且以引用的方式并入本文中。
在一些实施例中，CD70偶联物包括单甲基奥瑞他汀E(MMAE)及蛋白酶可裂解连接子。考虑蛋白酶可裂解连接子包括硫醇反应性间隔子及二肽。在各种实施例中，蛋白酶可裂解连接子包括硫醇反应性顺丁烯二酰亚胺基己酰基间隔子、缬氨酸-瓜氨酸(val-cit)二肽及对氨基苯甲氧基羰基或PAB间隔子。
缩写“PAB”是指自分解(self-immolative)间隔子。
缩写“MC”是指延伸子顺丁烯二酰亚胺己酰基：
在其他示例性实施例中，偶联物具有以下通式：
Ab-[L3]-[L2]-[L1]m-AAn-药物
其中Ab为CD70抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)；药物为例如细胞毒性剂，例如微管蛋白破坏剂或拓扑异构酶抑制剂；L3为连接子的组分，包括抗体偶合部分(例如延伸子单元)及乙炔(或叠氮)基中的一或多者；L2包括一端的与L3中的乙炔(或叠氮)部分互补的可选择性存在的PEG(聚乙二醇)叠氮化物(或乙炔)及另一端的诸如甲酸基或羟基的反应性基团；L1包括可折叠单元(例如自分解基团)，或可选择性连接至可折叠单元的肽酶可裂解部分，或酸可裂解部分；AA为氨基酸；m为值为0或1的整数，且n为值为0、1、2、3或4的整数。此类连接子可经由点击化学组装。(参见例如美国专利第7,591,944号及第7,999,083号)。
在一些实施例中，药物为喜树碱或喜树碱(CPT)类似物，例如伊立替康(亦称作CPT-11)、贝洛替康、拓扑替康、10-羟基-CPT、依喜替康、DXd或SN-38。代表性结构展示如下。
在一些实施例中，提及偶联物式Ab-[L3]-[L2]-[L1]m-AAn-药物，m为0。在一些实施例中，提及偶联物式Ab-[L3]-[L2]-[L1]m-AAn-药物，L2不存在。在此类实施例中，酯部分首先形成于氨基酸(AA)(例如甘氨酸、丙氨酸或肌氨酸)的羧酸或肽(例如甘氨酰甘氨酸)的羧酸与药物(例如细胞毒性剂)的羟基之间。在此实例中，氨基酸或多肽的N端可保护为Boc或Fmoc或单甲氧基三苯甲基(MMT)衍生物，其在与细胞毒性剂的羟基形成酯键之后去保护。在含有其他羟基的细胞毒性剂的羟基位置处的BOC保护基存在下，可使用单甲氧基三苯甲基(MMT)作为用于参与酯形成的氨基酸或多肽的氨基的保护基来实现氨保护基的选择性移除，因为“MMT”可通过诸如不会裂解BOC基团的二氯乙酸的弱酸处理而移除。在氨基酸或多肽的氨基(与药物的羟基形成酯键)经去掩蔽之后，使氨基与L2的PEG部分上COOH基团(若存在)的活化形式在标准酰胺形成条件下反应。在一个优选的实施例中，L3包括连接至抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)的硫醇基的硫醇反应性基团。硫醇反应性基团可选择性地为顺丁烯二酰亚胺或乙烯基砜或溴乙酰胺或碘乙酰胺，其连接至抗体的硫醇基。在一些实施例中，携带硫醇反应性基团的试剂由丁二酰亚胺基-4-(N-顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)或由丁二酰亚胺基-(ε-顺丁烯二酰亚胺基)己酸酯产生，例如其中硫醇反应性基团为顺丁烯二酰亚胺基。
在另一些实施例中，m为0，且AA包括可由细胞内肽酶(例如组织蛋白酶B)裂解的肽部分，较佳地为二肽、三肽或四肽。组织蛋白酶B-可裂解肽的实例为：Phe-Lys、Val-Cit(Dubowchick，2002)、Ala-Leu、Leu-Ala-Leu、Ala-Leu-Ala-Leu(SEQ ID NO:36)(Trouet等人，1982)及Gly-Gly-Phe-Gly(SEQ ID NO:35)(参见例如WO2014/057687)。
在一些实施例中，L1由在肽的C端处连接至可折叠单元(例如对氨基苯甲醇(或对氨基苯甲氧羰基))的细胞内可裂解肽(例如组织蛋白酶B可裂解肽)构成，可折叠单元的苯甲醇部分又以氯甲酸酯形式直接连接至细胞毒性剂的羟基。在此实施例中，n为0。或者，当“n”非零时，对氨基苯甲醇(或对氨基苯甲氧羰基)部分的苯甲醇部分经由对氨基苯甲醇的活化形式(即PABOCOPNP，其中PNP为对硝基苯基)连接至在药物(例如细胞毒性剂)的羟基处连接的氨基酸或肽的N端。在一些实施例中，连接子包括连接至抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)的硫醇基的硫醇反应性基团。硫醇反应性基团可选择性地为顺丁烯二酰亚胺或乙烯基砜或溴乙酰胺或碘乙酰胺，其连接至抗体的硫醇基。在一个优选的实施例中，携带硫醇反应性基团的组分由丁二酰亚胺基-4-(N-顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)或由丁二酰亚胺基-(ε-顺丁烯二酰亚胺基)己酸酯产生，例如其中硫醇反应性基团为顺丁烯二酰亚胺基。
在一些实施例中，在药物为具有20-羟基的细胞毒性剂(例如喜树碱或其类似物或衍生物)的情况下，L1由在肽的C端处连接至可折叠连接子对氨基苯甲醇(或对氨基苯甲氧羰基)的细胞内可裂解肽(例如组织蛋白酶B可裂解肽)构成，可折叠连接子的苯甲醇部分又直接连接至CPT-20-O-氯甲酸酯。在此实施例中，n为0。或者，当“n”非零时，对氨基苯甲醇部分的苯甲醇部分经由对氨基苯甲醇的活化形式(亦即PABOCOPNP，其中PNP为对硝基苯基)连接至在CPT的20位置处连接的氨基酸或多肽的N端。在一个优选的实施例中，连接子包括连接至抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)的硫醇基的硫醇反应性基团。硫醇反应性基团可选择性地为顺丁烯二酰亚胺或乙烯基砜或溴乙酰胺或碘乙酰胺，其连接至抗体的硫醇基。在一个优选的实施例中，携带硫醇反应性基团的组分由丁二酰亚胺基-4-(N-顺丁烯二酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)或由丁二酰亚胺基-(ε-顺丁烯二酰亚胺基)己酸酯产生，例如其中硫醇反应性基团为顺丁烯二酰亚胺基。
在一些实施例中，偶联物的L2组分存在且含有大小可为至多约MW 5000的聚乙二醇(PEG)间隔子，且在一个优选的实施例中，PEG为具有(1至12或1至30个)重复单体单元的限定PEG。在一些实施例中，PEG为具有1至12个重复单体单元的限定PEG。PEG的引入可涉及使用可商购的异双官能化PEG衍生物。异双官能PEG通常含有叠氮基或乙炔基。含有8个重复单体单元的异双官能限定PEG(其中“NHS”为丁二酰亚胺基)的实例在下文给出于下式中：
在一些实施例中，L3具有复数个乙炔(或叠氮)基(范围为2至40个，但较佳为2至20个，且更佳为2至5个)及单一抗体结合部分。
下文给出代表性偶联物，其中药物为用含顺丁烯二酰亚胺的SN-38连接子衍生物制备的细胞毒性剂，例如SN-38(CPT类似物)，其中与抗体(命名为MAb)的键结表示为丁二酰亚胺。此处，m＝0，且键结至SN-38的20-O-AA酯为甘氨酸酯；L2与L3的叠氮基-乙炔偶合接合产生如图所示的三唑部分。
在下文展示用含顺丁烯二酰亚胺的SN-38连接子衍生物制备的另一代表性偶联物，其中与抗体(MAb)的键结表示为丁二酰亚胺。此处，通式2中n＝0；“L1”含有组织蛋白酶B可裂解二肽Phe-Lys，其连接至可折叠对氨基苯甲醇部分，且后者在20位置处以碳酸酯键结形式连接至SN-38；接合“L2”及“L3”部分的叠氮基-乙炔偶合产生如下图所示的三唑部分。
在下文给出用含顺丁烯二酰亚胺的SN-38连接子衍生物制备的另一代表性SN-38偶联物mAb-CL2-SN-38，其中与抗体的键表示为丁二酰亚胺。此处，键结至SN-38的20-O-AA酯为甘氨酸酯，其经由对氨基苯甲醇部分及组织蛋白酶B可裂解二肽连接至L1部分；后者又经由酰胺键连接至“L2”，而“L2”及“L3”部分经由叠氮基-乙炔“点击化学”偶合。
在另一代表性实例中，“L1”含有连接至可折叠对氨基苯甲醇部分的单一氨基酸，其中对氨基苯甲醇为经取代或未经取代的(R)，其中偶联物通式Ab-[L3]-[L2]-[L1]m-AAn-药物中m＝1且n＝0，且药物例示为SN-38。结构表示于下文(称作MAb-CLX-SN-38)。AA的单一氨基酸可选自以下L-氨基酸中的任一者：丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸及缬氨酸。4-氨基苯甲醇部分上的取代基R为氢或选自C1-C10烷基的烷基。
下文展示mAb-CLX-SN-38(如上)的一实施例，其中单一氨基酸AA为L-赖氨酸且R＝H，且药物为由SN-38示例的细胞毒性剂(称作mAb-CL2A-SN-38)：
在另一些实施例中，药物为连接至包括延伸子单元(Z)的连接子的细胞毒性剂，延伸子单元连接至氨基酸单元(AA)，氨基酸单元(AA)连接至间隔子单元(Y)，其中延伸子单元连接至抗体(或其抗原结合部分或其他结合剂，命名为Ab或MAb)且间隔子单元连接至细胞毒性剂的氨基。此类连接子具有下式：
Ab-Z-AA-Y-细胞毒性剂，
其中Z是选自-(丁二酰亚胺-3-基-N)-(CH2)n 2-C(＝O)-、-CH2-C(＝O)-NH--(CH2)n3-C(＝O)-、-C(＝O)-cycHex(1,4)-CH2-(N-ly-3-diminiccuS)-或-C(＝O)--(CH2)n4-C(＝O)--，其中n2表示2至8的整数，n3表示1至8的整数，且n4表示1至8的整数；cycHex(1，4)表示1，4-亚环己基；及(N-ly-3-diminiccuS)-具有下式表示的结构：
在一些实施例中，AA为具有2至7个氨基酸的肽。在一些实施例中，间隔子单元Y为-NH-(CH2)b-(C＝O)-或-NH-CH2-O-CH2-(C＝O)-，其中b为1至5的整数。
在一些实施例中，细胞毒性剂为依喜替康。在一些实施例中，氨基酸单元(AA)为-Gly-Gly-Phe-Gly-(SEQ ID NO:35)。在一些实施例中，间隔子单元Y为-NH-CH2-O-CH2-(C＝O)-。
在一些实施例中，连接子-细胞毒性剂具有以下结构：
其中释放的细胞毒性剂为DXd(参见美国专利第9,808,537号)。药物-连接子与抗体、抗原结合部分及其他结合剂的连接。
使药物经由连接子连接至抗体(或其抗原结合部分或其他结合剂)的技术为本领域熟知的。参见例如Alley等人，Current Opinion in Chemical Biology 2010 14:1-9；Senter，Cancer J.，2008，14(3):154-169。在一些实施例中，连接子首先连接至药物(例如细胞毒性剂)且随后药物-连接子连接至抗体或其抗原结合部分或其他结合剂。在一些实施例中，连接子首先连接至抗体或其抗原结合部分或其他结合剂，且随后药物连接至连接子。在以下论述中，术语药物-连接子用于例示连接子或药物-连接子与抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的连接；本领域技术人员应了解，可根据连接子及细胞毒性剂或其他药物确定所选连接方法。在一些实施例中，药物经由连接子以降低药物活性直至其自偶联物释放(例如通过水解、通过蛋白分解降解或通过裂解剂)的方式连接至抗体或其抗原结合部分或其他结合剂。
一般而言，偶联物可通过采用本领域技术人员已知的有机化学反应、条件及试剂的几种途径制备，包括：(1)使抗体(或其抗原结合部分或其他结合剂)的亲核基团与二价连接子试剂反应以经由共价键形成抗体-连接子中间物，之后与药物(例如细胞毒性剂)反应；及(2)使药物(例如细胞毒性剂)的亲核基团与二价连接子试剂反应，以经由共价键形成药物-连接物，之后与抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的亲核基团反应。经由后一途径制备偶联物的示例性方法描述于美国专利第7,498,298号中，其以引用的方式明确并入本文中。
抗体、抗原结合部分及其他结合剂上的亲核基团包括但不限于：(i)N端氨基；(ii)侧链氨基，例如赖氨酸；(iii)侧链硫醇基，例如半胱氨酸；及(iv)糖羟基或氨基，其中抗体经糖基化。氨、硫醇及羟基为亲核的且能够与连接子部分及连接子试剂上的亲电子基团反应形成共价键，这些亲电子基团包括：(i)活性酯，例如NHS酯、HOBt酯、卤基甲酸酯及酸卤化物；(ii)烷基及苯甲基卤化物，例如卤乙酰胺；及(iii)醛、酮、羧基及顺丁烯二酰亚胺基。某些抗体(抗原结合部分及其他结合剂)具有可还原链间二硫键，即半胱氨酸桥键。可通过用诸如DTT(二硫苏糖醇)或三羰基乙基膦(TCEP)的还原剂处理抗体(及抗原结合部分及其他结合剂)，使得抗体完全或部分还原，从而具反应性以与连接子试剂结合。理论上，各半胱氨酸桥键将因此形成两个反应性硫醇亲核体。其他亲核基团可经由赖氨酸残基的修饰引入抗体(及抗原结合部分及其他结合剂)中，例如通过使赖氨酸残基与2-亚氨基硫杂环戊烷(特劳特试剂)反应，从而使得胺转化成硫醇。亦可通过引入一个、两个、三个、四个或更多个半胱氨酸残基(例如通过制备包括一个或多个非天然半胱氨酸氨基酸残基的抗体、抗原结合部分及其他结合剂)而将反应性硫醇基引入抗体(及抗原结合部分及其他结合剂)中。
偶联物亦可通过抗体(或其抗原结合部分或其他结合剂)上的亲电子基团(例如醛或酮羰基)与连接子试剂或药物上的亲核基团之间的反应产生。连接子试剂上的适用亲核基团包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、硫半卡腙、肼羧酸酯及芳基酰肼。在一实施例中，抗体(或其抗原结合部分或其他结合剂)经修饰以引入能够与连接子试剂或药物上的亲核取代基反应的亲电子部分。在另一实施例中，糖基化抗体的糖可例如用过碘酸盐氧化试剂氧化，以形成醛基或酮基，其可与连接子试剂或药物部分的胺基反应。所得亚胺希夫碱(Schiffbase)基团可形成稳定键，或可通过例如硼氢化物试剂还原，以形成稳定胺连接。在一个实施例中，糖基化抗体的碳水化合物部分与半乳糖氧化酶或偏高碘酸钠的反应可产生抗体(或其抗原结合部分或其他结合剂)中的羰基(醛及酮)基团，其可与药物上的适当基团反应(参见例如Hermanson，Bioconjugate Tech-niques)。在另一个实施例中，含有N端丝氨酸或苏氨酸残基的抗体可与偏高碘酸钠反应，产生醛代替第一氨基酸(Geoghegan及Stroh，(1992)Bioconjugate Chem.3:138-146；US 5362852)。此类醛可与细胞毒性剂或连接子反应。
药物(例如细胞毒性剂)上的示例性亲核基团包括但不限于：能够与连接子部分及连接子试剂上的亲电基团反应形成共价键的胺、硫醇、羟基、酰肼、肟、肼、硫半卡腙、肼羧酸酯及芳基酰肼基团，这些亲电基团包括：(i)活性酯，例如NHS酯、HOBt酯、卤基甲酸酯及酸卤化物；(ii)烷基及苯甲基卤化物，例如卤乙酰胺；及(iii)醛、酮、羧基及顺丁烯二酰亚胺基。
可用于制备偶联物的非限制性示例性交联剂描述于本文中或为本领域技术人员已知。使用此类交联剂连接两个部分的方法为本领域技术人员已知的，该部分包括抗体(或抗原结合部分或其他结合剂)及化学部分。在一些实施例中，包括抗体及药物的融合蛋白可例如通过重组技术或肽合成来制备。重组DNA分子可包括编码抗体(或其抗原结合部分或其他结合剂)及偶联物的活性部分(例如细胞毒性部分)的区域，该区域彼此相邻或由编码连接子的区域隔开，连接子不会破坏偶联物的所需特性。
在一些实施例中，药物-连接子连接至抗体(或其抗原结合部分或其他结合剂)的链间半胱氨酸残基。参见例如WO2004/010957及WO2005/081711。在此类实施例中，连接子通常包括用于连接至链间二硫键的半胱氨酸残基的顺丁烯二酰亚胺基。在一些实施例中，连接子或药物-连接子连接至抗体或其抗原结合部分的半胱氨酸残基，如美国专利第7,585,491号或第8,080250号中所描述。所得偶联物的药物负载通常在1至8范围内。
在一些实施例中，连接子或药物-连接子连接至抗体(或其抗原结合部分或其他结合剂)的赖氨酸或半胱氨酸残基，如WO2005/037992或WO2010/141566中所描述。所得偶联物的药物负载通常在1至8范围内。
在一些实施例中，经工程改造的半胱氨酸残基、聚组氨酸序列、糖化工程标签或转谷氨酰胺酶识别序列可用于连接子或药物-连接子与抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的位点特异性连接。
在一些实施例中，药物-连接子连接至除链间二硫键外的Fc残基处的经工程改造的半胱氨酸残基。在一些实施例中，药物-连接子连接至经工程改造的半胱氨酸，根据Kabat的EU编号，经工程改造的半胱氨酸引入至重链的位置118、221、224、227、228、230、231、223、233、234、235、236、237、238、239、240、241、243、244、245、247、249、250、258、262、263、264、265、266、267、268、269、270、271、272、273、275、276、278、280、281、283、285、286、291、292、293、294、295、296、297、298、299、300、302、305、313、318、323、324、325、327、328、329、330、331、332、333、335、336、396和/或428处，和/或引入至轻链位置106、108、142(轻链)、149(轻链)和/或位置V205处的IgG(通常IgG1)中。对于使用经工程改造的半胱氨酸的位点特异性结合的示例性取代为S239C(参见例如US20100158909；Fc区的编号是根据EU索引)。
在一些实施例中，连接子或药物-连接子连接至抗体(或其抗原结合部分或其他结合剂)的一个或多个经引入的半胱氨酸残基，如WO2006/034488、WO2011/156328和/或WO2016040856中所描述。
在一些实施例中，使用细菌转谷氨酰胺酶进行位点特异性结合的示例性取代为Fc区的N297S或N297Q。在一些实施例中，连接子或药物-连接子连接至抗体或抗原结合部分或经糖化工程改造的抗体(或其他结合剂)的聚糖或修饰聚糖。参见例如WO2017/147542、WO2020/123425、WO2020/245229、WO2014/072482；WO2014//065661、WO2015/057066及WO2016/022027；其公开内容以引用的方式并入本文中。
药物制剂
CD70抗体及其抗原结合部分或其他结合剂以及任何其他的偶联物的其他方面是关于包括活性成分(即包括如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物或编码如本文所描述的抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的核酸)的组合物。在一些实施例中，组合物为医药组合物。如本文所用，术语“医药组合物”是指活性剂与公认用于医药行业中的药学上可接受的载剂的组合。短语“药学上可接受”在本文中用于指代在合理医学判断范畴内，适用于与人类及动物的组织接触而无过度毒性、刺激、过敏反应或其他问题或并发症，与合理益处/风险比相匹配的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。
含有溶解或分散于其中的活性成分的药理学组合物的制备在此项技术中很好理解且不必基于任何特定调配物而进行限制。通常，此类组合物制备为可注射的液体溶液或悬浮液形式；然而，亦可制备适合于在使用前于液体中再水化或悬浮的固体形式。制剂亦可经乳化或呈现为脂质体组合物。CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物可与药学上可接受且与活性成分相容的赋形剂以适用于本文所描述的治疗方法的量混合。适合的赋形剂为例如水、生理盐水、右旋糖、甘油、乙醇或其类似者及其组合。另外，必要时，医药组合物可含有少量辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH缓冲剂及其类似者，其增强或维持活性成分(例如CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物)的有效性。如本文所描述的医药组合物可包括其中组分的药学上可接受的盐。药学上可接受的盐包括酸加成盐(与多肽的游离氨基形成)，其由无机酸(例如盐酸或磷酸)或有机酸(例如乙酸、酒石酸、扁桃酸及其类似酸)形成。用游离羧基形成的盐亦可衍生自无机碱，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、氢氧化钙或氢氧化铁；及有机碱，例如异丙基胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因(procaine)及其类似碱。生理学上可耐受的载剂为本领域技术人员所熟知。示例性液体载剂为含有活性成分(例如CD70抗体和/或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物)及水的无菌水溶液，且可含有缓冲液，例如生理pH值的磷酸钠、生理盐水或两者，例如磷酸盐缓冲生理盐水。再者，水性载剂可含有超过一种缓冲盐，以及如氯化钠及氯化钾的盐，右旋糖，聚乙二醇，及其他溶质。液体组合物亦可含有不止水及排除水的液相。此类其他示例性液相为甘油、植物油(例如棉籽油)及水油乳液。有效治疗特定病症或病况的活性剂用量取决于病症或病况的性质，且可通过标准临床技术确定。
在一些实施例中，包括如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，或编码如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的核酸的医药组合物可为冻干物。
在一些实施例中，提供一种注射器，其包括治疗有效量的本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其偶联物，或医药组合物。
癌症的治疗
在一些实施例中，如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分、其他结合剂及偶联物可用于方法中，方法包括向有需要的个体(例如患有癌症的个体)使用如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物。
在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；分别为SEQID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ IDNO:10；及分别为SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ IDNO:10中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；分别为SEQID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ IDNO:10；及分别为SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，这些VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；分别为SEQID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ IDNO:10；及分别为SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，其包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQID NO:12中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR具有选自以下的氨基酸序列组中所示的氨基酸序列：(i)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；(ii)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；(iii)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；(iv)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:18；以及(v)分别为SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ IDNO:13、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ IDNO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ IDNO:15、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在治疗癌症的一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供治疗癌症的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ IDNO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，个体需要治疗癌症和/或恶性病。在一些实施例中，个体需要治疗CD70+癌症或CD70+恶性病，例如肝细胞癌、结直肠癌、胰脏癌、卵巢癌、惰性非霍奇金氏淋巴瘤(惰性NHL)(例如滤泡性NHL、小淋巴细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性NHL或边缘区NHL)、非霍奇金氏淋巴瘤(非惰性)、B细胞系癌(包括例如伯基特氏淋巴瘤(Burkitt's lymphoma)及慢性淋巴细胞白血病)、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、鼻咽喉癌、胸腺癌及神经胶质瘤。在一些实施例中，该方法可以用于治疗患有CD70+癌症或恶性病的个体。在一些实施例中，该方法用于治疗个体的肝细胞癌。在一些实施例中，该方法可以用于治疗个体的结直肠癌。在一些实施例中，该方法可以用于治疗个体的胰脏癌。在一些实施例中，方法可以用于治疗个体的卵巢癌。在一些实施例中，该方法可以用于治疗个体的惰性非霍奇金氏淋巴瘤(惰性NHL)，例如滤泡性NHL、小淋巴细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性NHL或边缘区NHL。在一些实施例中，该方法可以用于治疗个体的非霍奇金氏淋巴瘤。在一些实施例中，该方法可以用于治疗个体的B细胞系癌，例如伯基特氏淋巴瘤或慢性淋巴细胞白血病。在一些实施例中，该方法可以用于治疗个体的多发性骨髓瘤。在一些实施例中，该方法可以用于治疗个体的肾细胞癌。在一些实施例中，该方法可以用于治疗个体的鼻咽喉癌。在一些实施例中，该方法可以用于治疗个体的胸腺癌。在一些实施例中，该方法可以用于治疗个体的神经胶质瘤。
本文所描述的方法包括向患有CD70+癌症或恶性病的个体施用治疗有效量的CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物。如本文所用，短语“治疗有效量”、“有效量”或“有效剂量”是指如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或偶联物在癌症或恶性病的治疗、控制或复发预防中提供治疗益处的量，例如在统计学上显著降低肿瘤或恶性病的至少一个症状、体征或标记物的量。治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内。一般而言，治疗有效量可因个体的病史、年龄、病况、性别以及个体的医学病况的严重程度及类型以及其他医药学活性剂的施用而异。
术语“癌症”及“恶性病”是指干扰身体器官及系统正常功能的细胞的不受控生长。癌症或恶性病可为原发性的或转移性的，即其已变得具侵袭性，在远离肿瘤原发部位的组织中散播肿瘤生长。“肿瘤”是指干扰身体器官及系统正常功能的细胞的不受控生长。患有癌症的个体为个体身体中存在可客观可测量的癌细胞的个体。此定义中包括良性肿瘤及恶性癌症以及潜在休眠肿瘤或微小癌转移。自其原发部位转移到其他重要器官的癌症可最终经由受影响器官的功能衰退而导致个体死亡。恶性血液病(血癌)，例如白血病及淋巴瘤，能够例如超越个体中的正常造血分区，由此导致造血功能衰竭(表现为贫血、血小板减少和中性粒细胞减少)，最终引起死亡。
癌症的实例包括但不限于癌瘤、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤及白血病。此类癌症的更具体实例包括但不限于基底细胞癌、胆道癌、膀胱癌、骨癌、脑和中枢神经系统癌、乳腺癌(例如三阴性乳腺癌)、腹膜癌、子宫颈癌；胆管癌、绒毛膜癌、软骨肉瘤、结肠癌和直肠癌(结直肠癌)、结缔组织癌、消化系统癌、子宫内膜癌、食道癌、眼癌、头颈癌、胃癌(包括胃肠癌及胃癌)、神经胶母细胞瘤(GBM)、肝癌、肝肿瘤、上皮内瘤、肾脏癌或肾癌(例如透明细胞癌)、喉癌、白血病、肝癌、肺癌(例如小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺腺癌及肺鳞状细胞癌)、包括霍奇金氏及非霍奇金氏淋巴瘤的淋巴瘤、黑色素瘤、间皮瘤、骨髓瘤、神经母细胞瘤、口腔癌(例如唇癌、舌癌、口腔癌及咽喉癌)、卵巢癌、胰脏癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、横纹肌肉瘤、呼吸系统癌、唾液腺癌、肉瘤、皮肤癌、鳞状细胞癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宫癌或子宫内膜癌、浆液性子宫癌(uterine serious cancer)、泌尿系统癌、外阴癌；以及其他癌瘤及肉瘤；以及B细胞淋巴瘤(包括低恶性度/滤泡性非霍奇金氏淋巴瘤(NHL)、小淋巴细胞(SL)NHL、中等恶性度/滤泡性NHL、中等恶性度弥漫性NHL、高恶性度免疫母细胞NHL、高恶性度淋巴母细胞NHL、高恶性度小非碎裂细胞NHL(high grade small non-cleaved cell NHL)、巨瘤症NHL(bulky disease NHL)、套细胞淋巴瘤、AIDS相关淋巴瘤及瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom's Macroglobulinemia))、慢性淋巴细胞白血病(CLL)、急性淋巴母细胞性白血病(ALL)、毛细胞白血病、慢性骨髓母细胞白血病及移植后淋巴增生症(PTLD)以及与母斑病、水肿(例如与脑瘤相关的水肿)及梅格斯综合征(Meigs'syndrome)相关的异常血管增生。
在一些实施例中，癌症为实体肿瘤。在一些实施例中，癌症可以选自实体肿瘤，包括但不限于肝细胞癌、结直肠癌、肾细胞癌、胰脏癌、卵巢癌、鼻咽喉癌、胸腺癌及神经胶质瘤。在一些实施例中，癌症可以选自血液癌，亦称作恶性血液病。在一些实施例中，癌症可以选自血液癌，例如惰性非霍奇金氏淋巴瘤(惰性NHL)(例如滤泡性NHL、小淋巴细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性NHL或边缘区NHL)；非霍奇金氏淋巴瘤(非惰性)；B细胞系NS癌，包括例如伯基特氏淋巴瘤及慢性淋巴细胞白血病。在一些实施例中，癌症或恶性病为CD70阳性(CD70+)。如本文所用，术语“CD70阳性”或“CD70+”用于描述在细胞表面上表达CD70(膜结合CD70)的癌细胞、癌细胞簇、肿瘤块或转移性细胞。CD70阳性癌的一些非限制性实例包括例如肝细胞癌、结直肠癌、胰脏癌、卵巢癌、惰性非霍奇金氏淋巴瘤(惰性NHL)(例如滤泡性NHL、小淋巴细胞淋巴瘤、淋巴浆细胞性NHL或边缘区NHL)、非霍奇金氏淋巴瘤、B细胞系癌(包括例如伯基特氏淋巴瘤及慢性淋巴细胞白血病)、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、鼻咽喉癌、胸腺癌及神经胶质瘤。
可以设想，本文的方法可以减小个体的肿瘤大小或肿瘤负荷，和/或减少个体中的转移。在各种实施例中，个体的肿瘤大小减小约25-50％、约40-70％或约50-90％或更多。在各种实施例中，所述方法将肿瘤大小减小10％、20％、30％或更多。在各种实施例中，所述方法将肿瘤大小减小10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％。
如本文所用，“个体”是指人类或动物。动物通常是脊椎动物，例如灵长类动物、啮齿动物、驯养动物或狩猎动物。灵长类动物包括黑猩猩、眼镜猴、蜘蛛猴及猕猴(例如恒河猴)。啮齿动物包括小鼠、大鼠、土拨鼠、雪貂、兔及仓鼠。驯养动物及狩猎动物包括奶牛、马、猪、鹿、野牛、水牛、猫类物种(例如家猫)、犬类物种(例如狗、狐狸、狼)、禽类物种(例如鸡、鸸鹋、鸵鸟)，及鱼类(例如鳟鱼、鲶鱼及鲑鱼)。在一些实施例中，个体为哺乳动物，例如灵长类动物，例如人类。术语“患者”、“个人”及“个体”在本文中可互换使用。
较佳地，个体为哺乳动物。哺乳动物可为人类、非人类灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马或奶牛，但不限于这些实例。除人类外的哺乳动物可有利地用作表示各种癌症的动物模型的个体。另外，本文所描述的方法可用于治疗驯养动物和/或宠物。个体可为雄性或雌性。在一些实施例中，个体为人类。
在一些实施例中，个体可为先前已诊断或鉴别为患有CD70+癌症且需要治疗但未经历CD70+癌症治疗的个体。在一些实施例中，个体亦可为先前尚未诊断为患有需要治疗的CD70+癌症的个体。在一些实施例中，个体可为展现与CD70+癌症相关的病况或者一种或多种并发症的一个或多个风险因素的个体，也可为未展现风险因素的个体。“有治疗CD70+癌症的需要的个体”尤其可为患有病况或经诊断患有病况的个体。在另一些实施例中，“有患病风险”的个体可以指经诊断有患病风险或有再次患病(例如CD70+癌症)风险的个体。
如本文所用，当提及疾病、病症或医学病况使用时，术语“治疗(treat/treatment/treating)”或“改善”可以指病况的治疗性治疗，其中目的在于逆转、减轻、改善、抑制、减缓或终止症状或病况的进展或严重程度。术语“治疗”包括减轻或缓解病况的至少一种不良影响或症状。若一个或多个症状或临床标记减少，则治疗通常为“有效的”。或者，若病况的进展减少或停止，则治疗为“有效”的。即，“治疗”不仅包括症状或标记的改善，而且包括在缺乏治疗的情况下预期的症状的进展或恶化的停止或至少减缓。有益或所需临床结果包括但不限于相较于不存在治疗的情况下所预期，个体中的CD70+癌细胞减少、一个或多个症状减轻、缺陷程度减轻、癌症或恶性病状态稳定(即不恶化)、肿瘤生长和/或转移延迟或减缓及寿命增加。如本文所用，术语“施用”是指通过使得CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或偶联物与CD70+癌细胞或恶性细胞结合的方法或途径，向个体提供如本文所描述的CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或偶联物或编码如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的核酸。类似地，可通过使得有效治疗个体的任何适当途径施用医药组合物，其包括如本文所描述的CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或偶联物或本文所公开的编码如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的核酸。
CD70结合抗体或其抗原结合部分或结合剂或偶联物的剂量范围取决于效力，且涵盖足够大以产生所需效果(例如减缓肿瘤生长或减小肿瘤大小)的量。剂量不应过大以致引起不可接受的不良副作用。一般而言，剂量将因个体的年龄、病况及性别而异且可由本领域的技术人员确定。在出现任何并发症的情况下，亦可由个别医师调整剂量。在一些实施例中，剂量的范围为0.1毫克/公斤体重至10毫克/公斤体重。在一些实施例中，剂量的范围为0.5毫克/公斤体重至15毫克/公斤体重。在一些实施例中，剂量的范围为0.5毫克/公斤体重至5毫克/公斤体重。或者，可滴定剂量范围以使血清含量维持在1ug/mL与1000ug/mL之间。对于全身性施用，可向个体施用治疗量，例如0.1mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、12mg/kg或更多。
可重复施用上文所引述的剂量。在一个优选的实施例中，上文所引述的剂量为每周、每两周、每三周或每月施用，持续数周或数月。治疗持续时间视个体的临床进展及对治疗的反应性而定。
在一些实施例中，剂量可为约0.1mg/kg至约100mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约0.1mg/kg至约25mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约0.1mg/kg至约20mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约0.1mg/kg至约15mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约0.1mg/kg至约12mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约1mg/kg至约100mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约1mg/kg至约25mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约1mg/kg至约20mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约1mg/kg至约15mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约1mg/kg至约12mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约1mg/kg至约10mg/kg。
在一些实施例中，剂量可静脉施用。在一些实施例中，静脉施用可为经约10分钟至约4小时的时段进行的输注。在一些实施例中，静脉施用可为经约30分钟至约90分钟的时段进行的输注。
在一些实施例中，剂量可每周进行施用。在一些实施例中，剂量可每两周施用一次。在一些实施例中，剂量可约每2周进行施用。在一些实施例中，剂量可约每3周进行施用。在一些实施例中，剂量可每四周进行施用。
在一些实施例中，向个体施用总共约2至约10次剂量。在一些实施例中，施用总共4次剂量。在一些实施例中，施用总共5次剂量。在一些实施例中，施用总共6次剂量。在一些实施例中，施用总共7次剂量。在一些实施例中，施用总共8次剂量。在一些实施例中，施用总共9次剂量。在一些实施例中，施用总共10次剂量。在一些实施例中，施用总共超过10次剂量。
可以单位剂量施用含有CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他CD70结合剂或其CD70偶联物的医药组合物。术语“单位剂量”当提及医药组合物使用时可以指适合呈单位剂量用于个体的物理离散单元，各单元含有预定量的活性物质(例如CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物)，量经计算以与所需生理学上可接受的稀释剂(即载剂或媒剂)结合产生所需治疗效果。
在一些实施例中，与免疫疗法一起施用CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，或任何医药组合物。如本文所用，“免疫疗法”是指经设计以诱导或增强个体自身免疫系统以对抗癌症或恶性病的治疗性策略。免疫疗法的实例包括但不限于抗体，例如检查点抑制剂。
在一些实施例中，免疫疗法涉及施用检查点抑制剂。在一些实施例中，免疫检查点抑制剂包括抑制CTLA-4、PD-1、PD-L1及其类似物的药剂。适合的抗CTLA-4抑制剂包括例如伊匹木单抗、曲美单抗(tremelimumab)、PCT公开案第WO 2001/014424号中所公开的抗体、PCT公开案第WO 2004/035607号中所公开的抗体、美国公开案第2005/0201994号中所公开的抗体及经授与欧洲专利第EP1212422B 1号中所公开的抗体。其他抗CTLA-4抗体描述于美国专利第5,811,097号、第5,855,887号、第6,051,227号及第6,984,720号中；PCT公开案第WO 01/14424号及第WO 00/37504号中；以及美国公开案第2002/0039581号及第2002/086014号中。可用于本公开方法中的其他抗CTLA-4抗体包括例如以下文献中所公开的抗体：WO 98/42752；美国专利第6,682,736号及第6,207,156号；Hurwitz等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，95(17):10067-10071(1998)；Camacho等人，J.Clin.Oncology，22(145):Abstract No.2505(2004)(抗体CP-675206)；Mokyr等人，Cancer Res，58:5301-5304(1998)；美国专利第5,977,318号、第6,682,736号、第7,109,003号及第7,132,281号。
适合的抗PD-1抑制剂包括例如纳武单抗、帕博利珠单抗、皮立珠单抗(pidilizumab)、MEDI0680及其组合。在其他特定实施例中，抗PD-L1治疗剂包括阿特珠单抗(atezolizumab)、BMS-936559、MEDI4736、MSB0010718C及其组合。
适合的抗PD-1抑制剂包括例如Topalian等人，Immune Checkpoint Blockade:ACommon Denomi-nator Approach to Cancer Therapy，Cancer Cell 27:450-61(2015年4月13日)中所描述的彼等抑制剂，文献以全文引用的方式并入本文中。
在一些实施例中，检查点抑制剂为伊匹木单抗(Yervoy)、纳武单抗(Opdivo)、帕博利珠单抗(Keytruda)、阿特珠单抗(Tecentriq)、阿维鲁单抗(Avelumab)(Bavencio)或德瓦鲁单抗(Durvalumab)(Imfinzi)。
在一些实施例中，提供一种改善接受免疫疗法的个体的治疗结果的方法。该方法一般包括向患有癌症的个体施用有效量的免疫疗法；以及向个体施用治疗有效量的CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂或其偶联物或其医药组合物，其中CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂或其偶联物特异性结合于CD70+癌细胞；其中个体的治疗结果相较于仅施用免疫疗法有所改善。在一些实施例中，CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂或其偶联物包括如本文所描述的CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂或其偶联物的实施例中的任一者。
在一些实施例中，改善的治疗结果为选自稳定疾病、部分反应或完全反应的客观反应，通过所治疗癌症的标准医学准则所确定。在一些实施例中，改善的治疗结果为肿瘤负荷降低。在一些实施例中，改善的治疗结果为无进展存活期或无疾病存活期。
自身免疫疾病的治疗
在一些实施例中，如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分、其他结合剂及偶联物可用于方法中，方法包括向有需要的个体(例如患有自身免疫疾病的个体)施用如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物。
在一些实施例中，提供一种治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQID NO:4；分别为SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；以及分别为SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ IDNO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列。
在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ IDNO:4；分别为SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQID NO:9及SEQ ID NO:10；以及分别为SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个保守氨基酸取代来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区具有选自以下的氨基酸序列对中所示的氨基酸序列：分别为SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；分别为SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；分别为SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；分别为SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；以及分别为SEQ ID NO:11及SEQ IDNO:12；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变区(VH)及轻链可变区(VL)，该VH及VL区分别具有SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12中所示的氨基酸序列；其中重链及轻链可变框架区可选择性地经框架区中的1至8、1至6、1至4或1至2个氨基酸取代、缺失或插入来修饰，其中重链或轻链可变区的CDR未经修饰。
在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR具有选自以下的氨基酸序列组中所示的氨基酸序列：(i)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:24、SEQID NO:25及SEQ ID NO:26；(ii)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:14、SEQID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；(iii)分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQID NO:15、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；(iv)分别为SEQ ID NO:21、SEQID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:18；以及(v)分别为SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:18中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，提供治疗自身免疫疾病的方法，该方法包括施用CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物，其包括重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，VH及VL CDR分别具有SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。在一些实施例中，各VH及VL区包括人源化框架区。在一些实施例中，各VH及VL区包括人类框架区。
在一些实施例中，个体需要治疗自身免疫疾病。本文所描述的方法包括向患有自身免疫疾病的个体施用治疗有效量的CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物。如本文所用，短语“治疗有效量”、“有效量”或“有效剂量”是指如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或偶联物在自身免疫疾病的治疗、控制或复发预防中提供治疗益处的量，例如在统计学上显著降低自身免疫疾病的至少一个症状、体征或标记物的量。治疗有效量的确定完全在本领域技术人员的能力范围内。一般而言，治疗有效量可因个体的病史、年龄、病况、性别以及个体的医学病况的严重程度及类型以及其他医药学活性剂的施用而异。
术语“自身免疫疾病”是通过免疫细胞(例如淋巴细胞或树突状细胞)的不当活化表达CD70的免疫病症，不当活化干扰身体器官及系统的正常功能。自身免疫疾病的实例包括但不限于类风湿性关节炎、牛皮癣性关节炎、自身免疫性去髓鞘疾病(例如多发性硬化症、过敏性脑脊髓炎)、内分泌性眼病、葡萄膜视网膜炎(uveoretinitis)、系统性红斑狼疮、重症肌无力、格雷夫病(Grave's disease)、肾小球肾炎、自身免疫性肝病、炎症性肠病(例如克罗恩氏病(Crohn's disease))、重度过敏(anaphylaxis)、过敏反应、干燥综合征(Sjogren's syndrome)、I型糖尿病、原发性胆汁性肝硬化、韦格纳氏肉芽肿病(Wegener'sgranulomatosis)、纤维肌痛(fibromyalgia)、多发性肌炎(polymyositis)、皮肌炎、多发性内分泌失调(multiple endocrine failure)、施密特氏综合征(Schmidt's syndrome)、自身免疫性葡萄膜炎、艾迪森氏病(Addison's disease)、肾上腺炎(adren-alitis)、甲状腺炎、桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)、自身免疫性甲状腺疾病、恶性贫血(pernicious anemia)、萎缩性胃炎(gastric atrophy)、慢性肝炎、类狼疮性肝炎、动脉粥样硬化、亚急性皮肤红斑性狼疮、甲状旁腺功能减退症(hypoparathyroidism)、德雷斯勒综合征(Dressler's syndrome)、自身免疫性血小板减少症(autoimmunethrombocytopenia)、特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenicpurpura)、溶血性贫血(hemolytic anemia)、寻常型天疱疮(pemphigus vulgaris)、天疱疮、疱疹样皮炎(dermatitis herpetiformis)、斑秃、类天疱疮(pemphigoid)、硬皮病、进行性系统性硬化症、CREST综合征(钙化症、雷诺氏现象(Raynaud'sphenomenon)、食道蠕动异常(esophageal dysmotility)、硬皮病(sclerodactyl)及毛细血管扩张(telangiectasia))、男性及女性自身免疫性不育、强直性脊柱炎(ankylosingspondolytis)、溃疡性结肠炎、混合型结缔组织病、结节性多动脉炎(polyarteritisnodosa)、系统性坏死性血管炎(systemic necrotizing vasculitis)、特应性皮炎、特应性鼻炎(atopic rhinitis)、古巴斯德氏综合征(Goodpasture's syndrome)、查加斯氏病(Chagas'disease)、类肉瘤病(sarcoidosis)、风湿热、哮喘、反复性流产、抗磷脂综合征、农夫肺炎(farmer's lung)、多形性红斑(erythema multiforme)、心包膜切开后术综合征(post cardiotomy syndrome)、库欣氏综合征(Cushing's syndrome)、自身免疫性慢性活动性肝炎、饲鸟者肺炎、毒性表皮坏死溶解症(toxic epidermal necrolysis)、艾柏氏综合征(Al-port's syndrome)、肺泡炎(alveolitis)、过敏性肺泡炎、纤维化肺泡炎、间质性肺病、结节性红斑(erythema nodosum)、坏疽性脓皮病(pyoderma gangrenosum)、输注反应、高安氏动脉炎(Takayasu's arteritis)、多发性风湿痛(polymyalgia rheumatica)、颞动脉炎(temporal arteritis)、血吸虫病(schistosomiasis)、巨细胞动脉炎(giant cellarteritis)、蛔虫病(ascariasis)、曲霉菌病(aspergillosis)、桑特氏综合征(Samter'ssyndrome)、湿疹、类淋巴瘤肉芽肿(lymphomatoid granulomatosis)、白塞氏病(Behcet'sdisease)、卡普兰氏综合征(Caplan's syndrome)、川崎氏病(Kawasaki's disease)、登革热、脑脊髓炎(encephalomyelitis)、心内膜炎(endocarditis)、心内膜心肌纤维化(endomyocardial fibrosis)、眼内炎(endophthalmitis)、持久性隆起性红斑(erythemaelevatum et diutinum)、银屑病(psoriasis)、胎儿红细胞增多症(erythroblastosisfetalis)、嗜酸性筋膜炎(eosinophilic faciitis)、夏尔曼氏综合征(Shulman'ssyndrome)、费尔蒂氏综合征(Felty's syndrome)、丝虫病(filariasis)、睫状体炎(cyclitis)、慢性睫状体炎、异色性睫状体炎(heterochronic cyclitis)、法曲氏睫状体炎(Fuch's cyclitis)、IgA肾病变、过敏性紫癜(Henoch-Schonlein purpura)、移植物抗宿主疾病、移植排斥、心肌病、伊顿兰伯特综合征(Eaton-Lambert syndrome)、复发性多软骨炎(relapsing polychondritis)、冷凝球蛋白血症(cryoglobulinemia)、瓦尔登斯特伦巨球蛋白血症(Waldenstrom's macroglobulemia)、伊文氏综合征(Evan's syndrome)及自身免疫性性腺功能衰竭。
在一些实施例中，本文所描述的方法包括治疗B淋巴细胞病症(例如系统性红斑狼疮、古巴斯德氏综合征、类风湿性关节炎及I型糖尿病)、Th1淋巴细胞病症(例如类风湿性关节炎、多发性硬化症、干癣、干燥综合征、桥本氏甲状腺炎、格雷夫病、原发性胆汁性肝硬化、韦格纳氏肉芽肿病、结核病或移植物抗宿主疾病)或Th2淋巴细胞病症(例如特应性皮炎、系统性红斑狼疮、异位性哮喘、鼻结膜炎(rhinoconjunctivitis)、过敏性鼻炎、欧门氏综合征(Omenn's syndrome)、系统性硬化症或慢性移植物抗宿主疾病)。一般而言，树突状细胞疾病涉及Th1淋巴细胞或Th2淋巴细胞的病症。
在一些实施例中，免疫病症为T细胞介导的免疫病症，例如其中与病症相关的活化T细胞表达CD70的T细胞病症。可施用CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂及偶联物以消耗此类表达CD70的活化T细胞。在一特定实施例中，施用CD70抗体抗原结合部分、其他结合剂及偶联物可消耗表达CD70的活化T细胞，而静息T细胞实质上不被抗CD70抗原结合部分、其他结合剂及偶联物消耗。在此上下文中，“实质上不消耗”是指静息T细胞的消耗率低于约60％，或低于约70％，或低于约80％。
如本文所用，“个体”可以指人类或动物。通常，动物为诸如灵长类动物、啮齿动物、驯养动物或狩猎动物的脊椎动物。灵长类动物包括黑猩猩、食蟹猕猴、蜘蛛猴及猕猴(例如恒河猴)。啮齿动物包括小鼠、大鼠、土拨鼠、雪貂、兔及仓鼠。驯养动物及狩猎动物包括奶牛、马、猪、鹿、野牛、水牛、猫类物种(例如家猫)、犬类物种(例如狗、狐狸、狼)、禽类物种(例如鸡、鸸鹋、鸵鸟)，及鱼类(例如鳟鱼、鲶鱼及鲑鱼)。在一些实施例中，个体为哺乳动物，例如灵长类动物，例如人类。术语“患者(patient)”、“个人(individual)”及“个体(subject)”在本文中可互换使用。
较佳地，个体为哺乳动物。哺乳动物可为人类、非人类灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马或奶牛，但不限于此等实例。除人类外的哺乳动物可有利地用作表示例如各种自身免疫疾病的动物模型的个体。另外，本文所描述的方法可用于治疗驯养动物和/或宠物。个体可为雄性或雌性。在一些实施例中，个体为人类。
在一些实施例中，个体可为先前已诊断或鉴别为患有自身免疫疾病且需要治疗但未经历自身免疫疾病治疗的个体。在一些实施例中，个体亦可为先前尚未诊断为患有需要治疗的自身免疫疾病的个体。在一些实施例中，个体可为展现一种或多种与自身免疫疾病相关的病况或一种或多种并发症的风险因素的个体或未展现风险因素的个体。“有治疗自身免疫疾病的需要的个体”尤其可为患有病况或经诊断患有病况的个体。在另一些实施例中，“有患病风险”的个体是指经诊断有患病风险或处于再次患病(例如自身免疫疾病)风险的个体。
如本文所用，当提及疾病、病症或医学病况使用时，术语“治疗”或“改善”是指病况的治疗性治疗，其中目的在于逆转、减轻、改善、抑制、减缓或终止症状或病况的进展或严重程度。术语“治疗”包括减轻或缓解病况的至少一种不良影响或症状。若一个或多个症状或临床标记减少，则治疗通常为“有效的”。或者，若病况的进展减少或停止，则治疗为“有效”的。即，“治疗”不仅包括症状或标记的改善，而且包括在缺乏治疗的情况下预期的症状的进展或恶化的停止或至少减缓。有益或所需临床结果包括但不限于相较于不存在治疗的情况下所预期，个体的CD70+自身免疫细胞减少、一个或多个症状减轻、缺陷程度减轻、自身免疫疾病状态稳定(即不恶化)、自身免疫疾病的进展延迟或减缓及寿命增加。如本文所用，术语“施用”是指通过使得CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或偶联物与CD70+自身免疫细胞结合的方法或途径，向个体提供如本文所描述的CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或偶联物或编码如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的核酸。类似地，可通过使得有效治疗个体的任何适当途径施用医药组合物，其包括如本文所描述的CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或偶联物或本文所公开的编码如本文所描述的CD70抗体或其抗原结合部分或其他结合剂的核酸。
CD70结合抗体或其抗原结合部分或结合剂或偶联物的剂量范围取决于效力，且涵盖足够大以产生所需效果(例如减缓自身免疫疾病的进展或减少症状)的量。剂量不应过大以致引起不可接受的不良副作用。一般而言，剂量将因个体的年龄、病况及性别而异且可由本领域技术人员确定。在出现任何并发症的情况下，亦可由个别医师调整剂量。在一些实施例中，剂量的范围为0.1毫克/公斤体重至10毫克/公斤体重。在一些实施例中，剂量的范围为0.5毫克/公斤体重至15毫克/公斤体重。在一些实施例中，剂量的范围为0.5毫克/公斤体重至5毫克/公斤体重。或者，可滴定剂量范围以使血清含量维持在1ug/mL与1000ug/mL之间。对于全身性施用，可向个体施用治疗量，例如0.1mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、12mg/kg或更多。
可重复施用上文所引述的剂量。在一个优选的实施例中，上文所引述的剂量为每周、每两周、每三周或每月施用，持续数周或数月。治疗持续时间视个体的临床进展及对治疗的反应性而定。
在一些实施例中，剂量可为约0.1mg/kg至约100mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约0.1mg/kg至约25mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约0.1mg/kg至约20mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约0.1mg/kg至约15mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约0.1mg/kg至约12mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约1mg/kg至约100mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约1mg/kg至约25mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约1mg/kg至约20mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约1mg/kg至约15mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约1mg/kg至约12mg/kg。在一些实施例中，剂量可为约1mg/kg至约10mg/kg。
在一些实施例中，剂量可静脉内施用。在一些实施例中，静脉内施用可为经约10分钟至约4小时的时段进行的输注。在一些实施例中，静脉内施用可为经约30分钟至约90分钟的时段进行的输注。
在一些实施例中，剂量可每周进行施用。在一些实施例中，剂量可每两周施用一次。在一些实施例中，剂量可约每2周进行施用。在一些实施例中，剂量可约每3周进行施用。在一些实施例中，剂量可每四周进行施用。
在一些实施例中，向个体施用总共约2至约10次剂量。在一些实施例中，施用总共4次剂量。在一些实施例中，施用总共5次剂量。在一些实施例中，施用总共6次剂量。在一些实施例中，施用总共7次剂量。在一些实施例中，施用总共8次剂量。在一些实施例中，施用总共9次剂量。在一些实施例中，施用总共10次剂量。在一些实施例中，施用总共超过10次剂量。
可以单位剂量施用含有CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他CD70结合剂或其CD70偶联物的医药组合物。术语“单位剂量”当提及医药组合物使用时是指适合呈单位剂量用于个体的物理离散单元，各单元含有预定量的活性物质(例如CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物)，量经计算以与所需生理学上可接受的稀释剂(亦即载剂或媒剂)结合产生所需治疗效果。
在一些实施例中，CD70结合抗体或其抗原结合部分或其他结合剂或其偶联物或其任何医药组合物与免疫抑制疗法一起施用。在一些实施例中，提供一种改善接受免疫抑制疗法的个体的治疗结果的方法。方法一般包括向患有自身免疫病症的个体施用有效量的免疫抑制疗法；以及向个体施用治疗有效量的CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂或其偶联物或其医药组合物，其中CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂或其偶联物特异性结合于CD70+自身免疫细胞；其中个体的治疗结果相较于仅施用免疫疗法有所改善。在一些实施例中，CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂或其偶联物包括如本文所描述的CD70抗体、抗原结合部分、其他结合剂或其偶联物的实施例中的任一者。在一些实施例中，改善的治疗结果为疾病进展减少、一个或多个症状的减轻或其类似者。
通过以下实施例进一步说明本公开，以下实施例不应理解为限制性的。
1.一种结合剂，其包括：
重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，该VH及VL CDR具有选自由以下组成的组中所示的氨基酸序列组的氨基酸序列：
分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；
分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；
分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；
分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:18；及
分别为SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26。
2.如实施例1的结合剂，其中VH及VL区分别具有选自由以下组成的组中所示的氨基酸序列对的氨基酸序列：
SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；
SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；
SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；
SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；及
SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12。
3.如实施例1的结合剂，其中VH及VL区分别具有选自由以下组成的组中所示的氨基酸序列对的氨基酸序列：
SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；
SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；
SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；
SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；及
SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12；
其中重链及轻链框架区可选择性地通过所述框架区中的1至8个氨基酸取代、缺失或插入来修饰。
4.如前述实施例中任一例的结合剂，其中HCDR1、HCDR2及HCDR3以及LCDR1、LCDR2及LCDR3分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22及SEQ ID NO:15以及SEQ ID NO:24、SEQ IDNO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。
5.如实施例1的结合剂，其中框架区为人类框架区。
6.如实施例1至5中任一例的结合剂，其中结合剂为抗体或其抗原结合部分。
7.如前述实施例中任一例的结合剂，其中结合剂为单克隆抗体、Fab、Fab'、F(ab')、Fv、二硫键连接Fc、scFv、单域抗体、双功能抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。
8.如前述实施例中任一例的结合剂，其中重链可变区进一步包括重链恒定区。
9.如实施例8的结合剂，其中重链恒定区具有IgG同型。
10.如实施例9的结合剂，其中重链恒定区为IgG1恒定区。
11.如实施例8的结合剂，其中重链恒定区为IgG4恒定区。
12.如实施例10的结合剂，其中IgG1恒定区具有SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列。
13.如前述实施例中任一例的结合剂，其中轻链可变区进一步包括轻链恒定区。
14.如实施例13的结合剂，其中轻链恒定区具有κ型。
15.如实施例14的结合剂，其中轻链恒定区具有SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列。
16.如实施例8至18中任一例的结合剂，其中重链恒定区进一步至少包括降低与人类FcγRIII的结合亲和力的氨基酸修饰。
17.如前述实施例中任一例的结合剂，其中结合剂为单特异性的。
18.如实施例1至17中任一例的结合剂，其中结合剂为二价的。
19.如实施例1至17中任一例的结合剂，其中结合剂为双特异性的。
20.一种医药组合物，其包括如实施例1至19中任一例的结合剂及药学上可接受的载剂。
21.一种核酸，其编码如实施例1至19中任一例的结合剂。
22.一种载体，其包括如实施例21的核酸。
23.一种细胞系，其包括如实施例22的载体。
24.一种偶联物，其包括：如实施例1至19中任一例的结合剂，至少一个连接至结合剂的连接子；及至少一种连接至各连接子的药物。
25.如实施例24的偶联物，其中各药物选自细胞毒性剂、免疫调节剂、核酸、生长抑制剂、PROTAC、毒素及放射性同位素。
26.如实施例24至25中任一例的偶联物，其中各连接子系经由链间二硫键残基、赖氨酸残基、经工程改造的半胱氨酸残基、聚糖、经修饰的聚糖、结合剂的N端残基或连接至结合剂的聚组氨酸残基而连接至结合剂。
27.如实施例24至26中任一例的偶联物，其中偶联物的平均药物负载为约1至约8、约2、约4、约6、约8、约10、约12、约14、约16、约3至约5、约6至约8或约8至约16。
28.如实施例24至27中任一例的偶联物，其中药物为细胞毒性剂。
29.如实施例28的结合物，其中细胞毒性剂选自由以下组成的组：奥瑞他汀、类美登素、喜树碱、多卡霉素或卡奇霉素。
30.如实施例29的偶联物，其中细胞毒性剂为奥瑞他汀。
31.如实施例30的偶联物，其中细胞毒性剂为MMAE或MMAF。
32.如实施例29的偶联物，其中细胞毒性剂为喜树碱。
33.如实施例32的偶联物，其中细胞毒性剂为依喜替康。
34.如实施例32的偶联物，其中细胞毒性剂为SN-38。
35.如实施例29的偶联物，其中细胞毒性剂为卡奇霉素。
36.如实施例29的偶联物，其中细胞毒性剂为类美登素。
37.如实施例36的偶联物，其中类美登素为美登素、美登醇或DM1、DM3及DM4中的美登素类似物，及安沙霉素-2。
38.如实施例24至37中任一例的偶联物，其中连接子为可裂解连接子。
39.如实施例38的偶联物，其中连接子包括mc-VC-PAB、CL2、CL2A或(丁二酰亚胺-3-基-N)-(CH2)n-C(＝O)-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-CH2-O-CH2-(C＝O)-，其中n＝1至5。
40.如实施例39的偶联物，其中连接子包括mc-VC-PAB。
41.如实施例39的偶联物，其中连接子包括CL2A。
42.如实施例39的偶联物，其中连接子包括CL2。
43.如实施例39的偶联物，其中连接子包括(丁二酰亚胺-3-基-N)-(CH2)n-C(＝O)-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-CH2-O-CH2-(C＝O)-。
44.如实施例43的偶联物，其中连接子连接至依喜替康的至少一个分子。
45.如实施例24至27中任一例的偶联物，其中药物为免疫调节剂。
46.如实施例45的偶联物，其中免疫调节剂选自由以下组成的组：TRL7激动剂、TLR8激动剂、STING激动剂或RIG-I激动剂。
47.如实施例46的偶联物，其中免疫调节剂为TLR7激动剂。
48.如实施例46的偶联物，其中TLR7激动剂为咪唑并喹啉、咪唑并喹啉胺、噻唑并喹啉、氨基喹啉、氨基喹唑啉、吡啶并[3，2-d]嘧啶-2，4-二胺、嘧啶-2，4-二胺、2-氨基咪唑、1-烷基-1H-苯并咪唑-2-胺、四氢吡啶并嘧啶、杂芳噻二嗪-2，2-二氧化物、苯并萘啶、鸟苷类似物、腺苷类似物、胸苷均聚物、ssRNA、CpG-A、PolyG10及PolyG3。
49.如实施例45的偶联物，其中免疫调节剂为TLR8激动剂。
50.如实施例49的偶联物，其中TLR8激动剂选自咪唑并喹啉、噻唑并喹啉、氨基喹啉、氨基喹唑啉、吡啶并[3，2-d]嘧啶-2，4-二胺、嘧啶-2，4-二胺、2-氨基咪唑、1-烷基-1H-苯并咪唑-2-胺、四氢吡啶并嘧啶或ssRNA。
51.如实施例45的偶联物，其中免疫调节剂为STING激动剂。
52.如实施例45的偶联物，其中免疫调节剂为RIG-I激动剂。
53.如实施例52的偶联物，其中RIG-I激动剂选自KIN1148、SB-9200、KIN700、KIN600、KIN500、KIN100、KIN101、KIN400及KIN2000。
54.如实施例45至53中任一例的偶联物，其中连接子选自由以下组成的组：mc-VC-PAB、CL2、CL2A及(丁二酰亚胺-3-基-N)-(CH2)n-C(＝O)-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-CH2-O-CH2-(C＝O)-，其中n＝1至5。
55.一种医药组合物，其包括如实施例24至54中任一例的偶联物及药学上可接受的载剂。
56.一种治疗CD70+癌症的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的如实施例1至19中任一例的结合剂、如实施例24至54中任一例的偶联物或如实施例20或55的医药组合物。
57.如实施例56的方法，其中CD70+癌症为实体肿瘤或恶性血液病。
58.如实施例57的方法，其中CD70+癌症选自肝细胞癌、结直肠癌、胰脏癌、卵巢癌、惰性非霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤、B细胞系癌、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、鼻咽喉癌、胸腺癌及神经胶质瘤。
59.如实施例57的方法，其中CD70癌症为实体肿瘤。
60.如实施例56至59中任一例的方法，其进一步包括向个体施用免疫疗法。
61.如实施例60的方法，其中免疫疗法包括检查点抑制剂。
62.如实施例61的方法，其中检查点抑制剂选自特异性结合于人类PD-1、人类PD-L1或人类CTLA4的抗体。
63.如实施例62的方法，其中检查点抑制剂为帕博利珠单抗、纳武单抗、西米普利单抗或伊匹木单抗。
64.如实施例56至63中任一例的方法，其进一步包括向个体施用化学疗法。
65.如实施例56至64中任一例的方法，其包括施用如实施例25至53的偶联物或如实施例55的医药组合物。
66.如实施例56至65中任一例的方法，其中结合剂、偶联物或医药组合物为静脉内施用。
67.如实施例66的方法，其中结合剂、偶联物或医药组合物以约0.1mg/kg至约12mg/kg的剂量施用。
68.如实施例56至67中任一例的方法，其中个体的治疗结果得以改善。
69.如实施例68的方法，其中改善的治疗结果为选自稳定疾病、部分反应或完全反应的客观反应。
70.如实施例68的方法，其中改善的治疗结果为肿瘤负荷降低。
71.如实施例68的方法，其中改善的治疗结果为无进展存活期或无疾病存活期。
72.一种如实施例1至19中任一例的结合剂或如实施例20的医药组合物的用途，其用于治疗个体的CD70+癌症。
73.一种如实施例24至54中任一例的偶联物或如实施例55的医药组合物的用途，其用于治疗个体的CD70+癌症。
74.一种治疗自身免疫疾病的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的如实施例1至19中任一例的结合剂、如实施例24至54中任一例的偶联物或如实施例20或55的医药组合物。
75.如实施例74的方法，其中自身免疫疾病为类风湿性关节炎、多发性硬化症或系统性红斑狼疮。
76.如实施例74至75中任一例的方法，其进一步包括向个体施用免疫抑制疗法。
77.如实施例74至76中任一例的方法，其包括施用如实施例24至54的偶联物或如实施例55的医药组合物。
78.如实施例74至77中任一例的方法，其中结合剂、偶联物或医药组合物为静脉内施用。
79.如实施例78的方法，其中结合剂、偶联物或医药组合物以约0.1mg/kg至约12mg/kg的剂量施用。
80.如实施例74至79中任一例的方法，其中个体的治疗结果得以改善。
81.如实施例80的方法，其中改善的治疗结果为疾病进展减缓或疾病严重程度减轻。
82.一种如实施例1至19中任一例的结合剂或如实施例20的医药组合物的用途，其用于治疗个体的自身免疫疾病。
83.一种如实施例24至54中任一例的偶联物或如实施例55的医药组合物的用途，其用于治疗个体的自身免疫疾病。
本公开的实施例的描述不意欲为详尽的或将本公开限于所公开的确切形式。如本领域技术人员所认识到的，虽然本文出于说明性目的而描述了本公开的特定实施例及实例，但在本公开的范畴内，各种等效修改是可能的。本文所提供的本公开的教示可视需要应用于其他程序或方法。本文所描述的各种实施例可经组合以提供其他实施例。必要时，可修改本公开的各方面，以采用上文参考文献及应用的组合物、功能及概念，从而提供本公开的其他实施例。可根据实施方式对本公开进行此类及其他变化。
前述实施例中的任一者的特定要素可组合或取代为其他实施例中的要素。此外，虽然与本公开的某些实施例相关的优势已描述于这些实施例的上下文中，但其他实施例亦可展现此类优势，且并非所有实施例必定需要展现此类优势才能落入本公开的范畴内。
所有专利及其他出版物均以引用的方式明确并入本文中，其目的在于描述及公开例如这些出版物中所描述的可结合本公开使用的方法。此等出版物仅提供在本申请的申请日之前的公开内容。不应将就此而言的任何内容理解为承认本发明人因先前发明或任何其他原因而无权先于这些公开内容。所有关于这些文献的日期或内容的陈述均以申请人可掌握的信息为依据，并不构成对这些文献的日期或内容的正确性的任何承认。
实例
实施例1：针对人类CD70的人类抗体的产生。
通过亲本抗体69A7(参见美国专利案第8,124,738B2号)的抗体重链及轻链的CDR区的随机突变来产生具有较高亲和力及更佳特性的抗CD70抗体。69A7的重链及轻链可变区氨基酸序列分别载于SEQ ID NO:1及2。HCDR及LCDR氨基酸序列载于SEQ ID NO:21至26。
CDR扫描库构建
通过使用简并引物进行基于PCR的突变诱发，将随机突变引入至亲本抗体69A7的6个CDR(3HCDR+3LCDR)(Chothia编号规约)中的每一者中。遵循标准方案将剪接PCR产物用于文库构建。
根据连续稀释滴定法，CDR文库大小为约20亿(2×109)。选取随机菌落用于测序。从未经选择的文库结果中对一些随机序列进行的比对显示，随机突变文库具有良好序列多样性(数据未显示)。噬菌体文库被保存下来，并用于以下淘选程序。
淘选及筛选
遵循以下标准方案进行文库淘选。将免疫试管用指示浓度(参见淘选概述，表1)的0.5ml CD70抗原涂布，且置于冰箱中过夜。将试管用PBS洗涤一次，用1％ BSA/PBS阻断，且置于RT(室温)下1小时。将试管与指定量(CFU，参见淘选概述，表1)的文库噬菌体样本一起在RT下培育1小时。用PBST缓冲液洗涤试管10次。为洗脱结合的噬菌体，添加0.5ml的100mMTEA(三乙胺)且在RT下培育2min。随后将洗脱液转移至新试管，且立即通过添加0.25ml的1.0M Tris-HCl、pH 8.0并混合而中和。将洗脱剂(0.75ml)添加至10ml的按指数增长的大肠杆菌TG1(OD600约0.5)中，充分混合且在37℃(水浴)下无震荡培育30min。在2xTY培养基中制备培养物的10倍稀释液，且将10μl的各稀释液平板接种在TYE/amp/glu培养板上且在30℃下培育过夜。次日，对各稀释液的菌落数量进行计数，且计算淘选结果的CFU(菌落形成单位)。将剩余培养物在2800g下离心15min，再悬浮于0.5ml的2xTY培养基中，平板接种在两个150mm TYE/amp/glu培养板上，且在30℃下培育过夜。次日，将3ml的2xTY/amp/glu培养基添加至各培养板，且用细胞涂布棒(cell spreader)自培养板刮下细菌。通过混合1.5ml细菌及0.5ml 80％甘油制备甘油储备液，且将储备液置于-80℃下。
为制备用于下一轮选择的噬菌体颗粒，将甘油储备液接种至40ml的2xTY/amp/glu培养基中，以OD600约0.01-0.05起始。培养物在37℃下在震荡(300rpm)下生长，直至OD600达到0.4至0.6。通过将辅助噬菌体CM13以5-10:1的辅助噬菌体:细菌比添加至培养物中来感染培养物。将细菌培养物在37℃下培育30分钟，在水浴中静置，伴随偶然混合，之后在37℃下震荡30分钟。使细菌培养物在3000rpm下离心20min，且移除上清液。将集结粒再悬浮于100mL的2xTY/amp/kan中，且在30℃下在震荡下生长过夜。随后通过在6000g下离心30min来收集培养物。通过添加1/5体积的PEG溶液至上清液中，之后在冰上培育1h来沉淀噬菌体颗粒，且随后在4000g下在4℃下离心20min。彻底移除上清液。将噬菌体颗粒再悬浮于1至2ml冷PBS中。通过以最高速度在4℃下微离心5min来移除任何残余细菌。将制备的噬菌体立即用于选择，或以含10％甘油的等分试样储存于-80℃下。通过用噬菌体溶液的10倍稀释液(于2xTY中，降至1011)感染100μL按指数生长的大肠杆菌TG1来测定噬菌体制备物的效价。重复选择步骤，自步骤1开始，总轮数为3轮。
如上文所论述，进行3轮淘选。第2轮及第3轮中洗涤缓冲液PBS-Tween20的浓度分别逐渐增大0.2％、0.3％，且第2轮及第3轮中的涂布抗原分别逐渐减少至4μg及2μg。3轮筛选之后，目标阳性富集率达到6.9×105(690,000)，与空白对照具有显著差异，如表1中所示。
对经纯化噬菌体样本的ELISA分析。
用100μl/孔的2xYT-2％葡萄糖填充无菌96孔圆底微孔板。使用无菌移液管吸头自第3轮(最后一轮)富集的选择培养板选取单一TG1菌落，且将其用于接种1孔/菌落。培养板用透气膜密封且在30℃下在震荡下培育过夜。将此培养板指定为主培养板。次日，将等量的培养物转移至新的含有400μl/孔2xYT-0.1％葡萄糖的深孔诱导培养板中。使用多通道移液器将主培养板中约10μl/孔的培养物吸取至新的诱导培养板中。将诱导培养板在噬菌体回转式摇床中培育约2-4hr，直至细菌达到对数期(37℃，200rpm)。将IPTG以0.2mM的最终浓度添加至各孔中，且培养板在30℃、200rpm的振荡条件下培养过夜。次日，将诱导培养板以3,500rpm旋转10min。将上清液用于以下scFv ELISA。(培养板可选择性地置于4℃下暂时储存；上清液可在2周内使用。)
用噬菌体ELISA测试噬菌体与CD70抗原的结合。简而言之，将抗原CD70(ACRO，CDL-H5246)稀释至5μg/ml且使用100μl/孔涂布至微孔板上过夜。次日，用PBST(含0.1％Tween20的PBS)洗涤培养板2次，每次200μl/孔。使用200μl/孔添加阻断缓冲液(含2％牛奶的PBST)。将培养板置于RT下1hr。用PBST洗涤培养板两次。将IPTG诱导的培养上清液以50μl/孔添加至各孔，且置于RT下1hr。用PBST洗涤培养板3至4次。将抗人类HRP以1:5,000的比例稀释至PBST中，50μl/孔。在RT下培育培养板20min。随后用PBST再洗涤培养板5次。制备新鲜显色液(10ml显色缓冲液、13.3μL Amplex Red(5mg/ml于DMSO中)、3.3μL H2O2)，使用50μl/孔进行添加，且在RT下显色1至60min。在Ex＝530nm、Em＝590nm及cutoff＝570nm下读取培养板。
表1.淘选程序的概述
第1轮 第2轮 第3轮
输入(AMX scFv) 7.6×1011 9.6×1010 4.8×1010
输出 1.8×106 2.6×106 7.0×104
富集 4.2×105 3.7×104 6.9×105
CD70抗原 6ug 2ug 1ug
使用上文所描述的scFv Elisa程序，选取，挑选、培养和诱导两个96孔培养板的单菌落进行scFv表达。将scFv上清液用于筛选分析。
对具有阳性信号的20个克隆进行测序。5个所选克隆的序列展示于表2中。以粗体标出各可变区中的HCDR及LCDR。这些克隆与亲本抗体69A7相比，每个候选抗体的HCDR3/LCDR3(SEQ ID NO:13至SEQ18)至少多了两个氨基酸的取代。选取5个独特序列2A4、1H8、2E7、2D2及1A4用于进一步分析。制备一个新VH/VL组合；2A4P0L1的VH/VL对来源于2A4的VH及2D2的VL。
表2.抗CD70抗体的可变区序列
实例2：scFv前导抗体表征
为通过结合亲和力对来自实例1的前导抗体进行分级，使用ProbeLife来测定scFv表达量，且根据scFv浓度，通过ELISA滴定了5个前导抗体候选2A4、1H8、2E7、2D2及1A4的特异性结合。
如下进行scFv定量：于Gator系统(ProbeLife)上测定培养物上清液中的表达量。在Q缓冲液(Probe Life)中预润湿抗His传感器后，将传感器浸至scFv上清液孔中2min。根据抗His传感器的标准曲线，通过系统计算表达效价。所用ELISA检测方法描述于上文。
结果展示于表3及图1中。大部分前导抗体(除2E7以外)具有类似于或低于亲本抗体69A7的表达量。但相较于亲本69A7 scFv克隆，所有前导抗体的结合显著改善。
表3.前导抗体(scFv)分级的表达
样本(scFv) 所计算C(μg/mL)
69A7(野生型) 21.3
1A4 3.51
1H8 14
2A4 25.3
2E7 128
2D2 12.8
实例3：抗人类CD70抗体的表征
为在结合亲和力及内化方面对前导抗体进一步分级，将scFv转化成完全IgG抗体且测定完全IgG表达量。根据抗体浓度，通过ELISA或FACS滴定特异性结合。
抗CD70抗体的制备：
完全IgG抗CD70前导抗体(1A4、2A4、1H8、2D2、2E7及2A4P0L1)及参考亲本抗体(69A7)以及另一参考抗体1F6(伏妥珠单抗(Vorsetuzumab)，参见美国专利案第7,491,390号)是由6个前导抗体及两个对照构成，使其人类重链及轻链可变区分别与人类恒定区IgG1及κ相连接。(1F6抗体的VH及VL序列分别如SEQ ID NO:19和20所示。)简而言之，Kozak共识序列“GCCGCCACC”(SEQ ID NO:31)及信号肽“MGWSCIILFLVATATGVHS”(SEQ ID NO:32)插入于基因构建体的5'端，以进行充分翻译及抗体分泌。重链及轻链的最终DNA编码序列经优化、合成并构建于载体pcDNA3.4中。
根据标准ExpiFectamine CHO转染程序(Gibco，A29129)，使用ExpiCHOTM表达系统(Thermo，ExpiFectamineTMCHO转染套组，目录号A29129)在旋转烧瓶中将所得质粒瞬时转染至ExpiCHO-S细胞中。将瞬时转染的悬浮液培养10天，随后使用蛋白A柱纯化澄清上清液。
使用蛋白A层析(蛋白A树脂浆液，4.5mL，Bogen，目录号18-0010-02)自澄清的细胞培养物上清液中纯化抗体。简而言之，制备上清液用于亲和层析，且装载至管柱上并使其完全流过树脂。用含有0.15M NaCl及0.2M PB，PH 7.0的结合缓冲液洗涤管柱。用含有0.15MNaCl，0.1M甘氨酸及0.2M PB，PH 3.0的洗脱缓冲液洗脱抗体。收集馏分，且通过添加1/10体积的1M Tris，PH 9.0中和。馏分用1×PBS渗析2小时。纯化的抗体通过A280吸光度进行定量。将来自蛋白A层析的各步骤的样本涂覆至12％ SDS-PAGE凝胶上进行还原和非还原电泳。使用Waters HPLC 2695系统，在4.6×100mm、具有Butyl-NPR的TSK gel Butyl-NPR(Tosoh公司)上进行疏水相互作用层析(HIC)，以评定疏水性。
纯化后的表达量展示于表4中。抗体克隆2A4具有较高表达量；克隆1A4、2D2及2E7具有中等表达量，且克隆2A4P0L1及1H8具有较低表达量。
疏水性分析展示于表5中。克隆2D2及2A4具有与亲本抗体69A7类似的疏水性；克隆2A4P0L1、1H8及2E7具有比亲本抗体69A7略高的疏水性。
表4.抗体表达水平的比较
样本名称 转移体积(ml) 浓度(mg/ml) 体积(ml) 量(mg)
1A4 60 1.965 6.5 12.77
2A4 60 3.356 6.5 21.81
2A4P0L1 60 0.663 6.5 4.30
1H8 60 0.541 6.5 3.52
2D2 60 1.993 6.5 12.95
2E7 60 1.782 6.5 11.58
69A7 60 2.78 10.5 29.19
表5.抗CD70抗体的疏水性
样本名称 滞留时间(min)
2A4P0L1 9.56
2A4 9.06
2D2 8.81
1H8 10.24
2E7 10.19
69A7 8.83
通过ELISA进行抗体结合表征
通过ELISA根据标准方案测试CD70抗体的结合特异性。简而言之，用100μl/孔的2μg/ml人类或食蟹猕猴CD70重组蛋白于PBS中涂布96孔微孔板，且在4℃下培育过夜。用TBS+0.5％Tween20洗涤培养板两次。将200μL阻断缓冲液(含2％BSA的PBS)添加至各孔中，且在37℃下培育培养板2小时。使用上文所提及的洗涤缓冲液洗涤培养板。将连续稀释抗体以100μl/孔添加至ELISA培养板，且在室温下培育培养板1小时。随后洗涤培养板3次。将HRP结合的抗人类Fc抗体溶液(Sigma，I18885-2ML，用阻断缓冲液稀释)以100μl/孔添加至培养板中。将培养板在室温下培育1小时且随后洗涤3次。随后将TMB溶液以100μl/孔添加至培养板中，且将培养板置于RT下5至15min。随后以50μl/孔添加终止溶液(2MH2SO4)。测定A450及A630下的吸光度。
结果展示于图2及图3中。抗体2E7的半数最大有效浓度(EC50)值比抗体69A7的值大1.5倍。抗体2E7、1H8及2D2具有比抗体69A7更佳、类似于h1F6的食蟹猕猴抗原交叉结合活性。
通过流式细胞术判定抗体结合亲和力
通过流式细胞术测试前导抗体与在细胞表面上表达CD70的肾癌细胞及神经胶母细胞瘤细胞的结合。测试细胞系786-O(CRL-1932TM，由COBIOER提供)、Caki-1(/>HTB-46TM，由COBIOER提供)、U251及DBTRG-05MG(/>CRL-2020TM，由COBIOER提供)各自的抗体结合。786-O细胞用含有10％FBS(Gibco，目录号10099141)的RPMI 1640培养基(Gibco，目录号11875093)培养，而Caki-1细胞用含有10％FBS的McCoy的5a改良培养基(Gibco，目录号16600082)培养。U251细胞用含有10％FBS及1％NEAA+1mM丙酮酸钠的MEM培养基培养。DBTRG-05MG细胞用含有10％FBS的DMEM培养基(Gibco，目录号C11995500BT)培养。在0.2mlFACS缓冲液(1×PBS，含0.1％BSA)中，将每种前导抗体及对照组与不同细胞系(3×105个细胞/孔)在4℃下培育30min。随后，使细胞集结，洗涤，且在4℃下用100μl的1:200稀释的与PE结合的抗人类Fc(Abcam，Ab98596)的FACS缓冲液培育30min。再次使细胞集结，用PBS洗涤，再悬浮于FACS缓冲液中且通过流式细胞仪(Beckman，CytoFLEX)分析。
抗CD70抗体对不同细胞系的EC50结果展示于表6及图4至图7中。通过流式细胞术分析获得的结果证实，抗CD70抗体结合于肾细胞系786-O及Caki-1细胞，且结合于神经胶母细胞瘤U251及DBTRG-05MG细胞。抗体2E7的EC50比抗体69A7大1.8至3.5倍，抗体2A4P0L1的EC50比抗体69A7大1.7至2.2倍。抗体2H8及2D2的细胞系结合能力比抗体69A7略高。
表6.抗CD70抗体结合于不同肿瘤细胞系的EC50
实例4：抗CD70抗体的内化
使用FACS免疫荧光染色分析测试前导抗体及对照内化至CD70表达肾癌细胞786-O及Caki-1细胞中的能力。
简而言之，通过用0.25％胰蛋白酶/EDTA处理来自组织培养物烧瓶收集2×105个细胞，随后在4℃下与10μg/ml前导抗体或对照抗体于FACS缓冲液(1×PBS，含0.1％ BSA)中一起培育30min。在4℃下洗涤细胞以移除未结合抗体且保持在冰上或移动至37℃。在设定时间点(0h、4h、24h)，将细胞跟与PE结合的抗人类Fc(Abcam，Ab98596)一起在4℃下培育30min，随后通过流式细胞术来分析。用4℃的MFI减去37℃的MFI来计算内化率，随后与4℃的MFI进行比较。
结果展示于表7以及图8及图9中。结果显示在4h研究过程中，抗CD70抗体在保持于4℃或37℃下的786-O及Caki-1细胞系上的表面含量发生了变化。在分析过程中，抗体的表面含量在细胞转移至37℃时显著下降。根据细胞结合亲和力，结果表明抗CD70抗体1H8、2D2及2E7内化至细胞中的抗体绝对量比亲本抗体69A7高。
表7.肾肿瘤细胞上的抗CD70抗体内化的比较
实例5：测定CD70抗体与CD70的亲和力结合
CD70抗原至CM5传感器芯片上的固定。
在25℃下将HBS-EP作为运行缓冲液来进行抗原CD70 ECD的固定。通过新鲜混合的50mmol/LN-羟基丁二酰亚胺(NHS)及200mmol/L 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)将流动池1、4的传感器芯片表面活化420s(10μL/min)。随后，将稀释于10mmol/L NaAC(pH 4.5)中的CD70抗原注入流动池4中以实现适当反应单元的结合，而流动池1设定为空白。在胺偶合反应结束后，在420s内注入1mol/L乙醇胺盐酸盐来阻断芯片表面上的剩余活性偶合位点。
CD70抗体与CD70 ECD的结合的亲和力测定。
在25℃下进行分析，且运行缓冲液为HBS-EP。在结合阶段将经稀释的抗体的注入流动池1及4的表面，之后注入运行缓冲液作为解离阶段。使用Biacore T200评估软件版本3.1处理所有数据。各循环中的流动池1及注入缓冲液的空白池用作反应单元减除的双重参考。经由亲和力测定获得抗体与CD70抗原之间的相互作用的动力学数据。
数据概述于表8中。抗体2E7对CD70抗原的亲和力比亲本抗体69A7大22倍，且与CD70抗原的亲和力比参考抗体h1F6大2至3倍。其他抗体1H8、2D2、2A4及2A4P0L1与CD70抗原的亲和力相较于亲本抗体69A7的亲和力提高3至8倍。
表8.抗体与CD70的结合的亲和力测定
实例6：与细胞毒素结合的抗CD70抗体对肾细胞癌细胞系的细胞杀伤的评估
在细胞增殖分析中测试与细胞毒素结合的抗CD70抗体杀伤CD70+肾细胞癌细胞系的能力。
如下制备抗CD70偶联物：通过添加0.5M磷酸氢二钠将CD70抗体溶液的pH调节至7.0至7.5的范围内。添加0.5M EDTA以在抗体溶液中达成5mM的最终EDTA浓度。添加10mMTCEP(三(2-氯乙基)磷酸盐)溶液以达成所需TCEP/mAb摩尔比。将还原物保持在RT下90min。随后添加DMSO以达成10％v/v浓度。将药物连接的Mc-VC-PAB-MMAE(顺丁烯二酰亚胺基己酰基-缬氨酸-瓜氨酸-对氨基苯甲酰基MMAE)溶解于DMSO中，使最终浓度达到10mM，且相较于可获得的半胱氨酸硫醇的摩尔数，以30至50％的摩尔数过量添加至反应溶液中。置于RT下进行结合反应30min。为淬灭反应物，添加NAC(N-乙酰基-L-半胱氨酸)原液使NAC/Mc-VC-PAB-MMAE的摩尔比达到5。将淬灭反应物置于RT下15min。通过PD10管柱进行纯化。
对肾肿瘤细胞的细胞毒性
以400个细胞/孔接种肾癌癌细胞系786-O，持续24小时。在3倍连续稀释下以起始浓度30μg/ml将如上文所描述制备的抗体偶联物添加至孔中。培育培养板96小时。90小时后，在培养板中每孔加入40μl CTG(Promega，目录号G7572)，5min之后进行荧光素酶读取。相对于未经处理的细胞计算生长抑制百分比。
结果展示于图10中。结果表明抗CD70偶联物1H8-ADC、2D2-ADC及2E7-ADC对肾癌癌细胞具细胞毒性。抗体偶联物的IC50值显示，2E7-ADC的细胞生长抑制性比亲本抗体偶联物(69A7-ADC)大得多(超过10倍)。
本公开的范畴不限于本文所描述的特定实施例。实际上，根据前述描述及随附图式，除本文所描述的修改的外，本公开的各种修改对本领域技术人员而言将变得显而易见。这些修改旨在落入随附申请专利范围的范畴内。
本文引用各种公开案，包括专利、专利申请公开案及科学文献，其公开内容出于所有目的以全文引用的方式并入本文中。
实例7：通过生物层干涉术(BLI)测试的2E7/69A7与物种CD70的亲和力数据
购买(自ACRO系统)由人类、大鼠或小鼠CD70细胞外域(ECD)组成的连接至His标签的重组蛋白。将69A7及2E7(20nM)固定于抗人类IgG Fc生物传感器吸头(ForteBio)上。使用Octet RED(ForteBio)对一种浓度(100nM)的重组蛋白溶液进行结合测定。结合时间设定为180s且解离时间设定为300s。使用ForteBio Data Acquisition 6.3软件计算结合亲和力。通过利用全局拟合算法将动力学数据拟合至1:1朗缪尔结合模型(Langmuir bindingmodel)中得出亲和力。证实69A7和2E7与人类CD70的结合亲和力很高，其平衡解离常数(KD)分别为2.9和0.97nM。69A7和2E7显示与大鼠和小鼠CD70无交叉反应性(表9)。此外，还使用相同方法，对各物种的重组CD70 ECD蛋白溶液的多个稀释液(自200nM降至3.13nM)进行2E7的结合测定。2E7显示与人类及食蟹猕猴CD70的高结合亲和力，KD分别为0.81和0.39nM。2E7与大鼠或小鼠CD70无交叉反应性(表10)。
表9.通过BLI测试的69A7/2E7对物种CD70的亲和力数据
*反应低于量化范围
表格10.通过BLI测试的2E7对物种CD70的亲和力数据
*反应低于量化范围
实例8：2E7与细胞Raji及MCF-7的结合
通过流失细胞术(Beckman，Cytoflex)评估2E7或同型对照与目标细胞系(Raji)或CD70表达量可忽略的细胞系(MCF-7)的结合活性。将3×105个细胞/孔接种于96孔V底培养板上且与100μl的2E7连续稀释液一起培育。在4℃培育30min后，细胞用PBS洗涤两次，用100μl的1:200稀释的与PE结合的抗人类Fc的FACS缓冲液(1×PBS，含1％ BSA)染色，随后在4℃下培育30min。细胞最后用PBS洗涤两次，并进行流式细胞分析。2E7显示与表达人类CD70的细胞系Raji的强结合活性，EC50为约19nM(图11)，而未显示与CD70阴性细胞系MCF-7的结合(图12)，这表明了相互作用的特异性。
实例9：在时程内使用其他细胞系(Raji、MCF7)的2E7内化
在内化分析中利用四个细胞系(786-O、Caki-1、Raji、MCF-7)。经由QIFIKIT(DAKO，K0078)测定目标(CD70)拷贝数。简而言之，用针对CD70的一级小鼠单克隆抗体标记细胞。用与荧光素结合的抗小鼠二级抗体对细胞、组装微珠及校准微珠(来自套组)进行标记。荧光与细胞上及微珠上所结合的一级抗体分子的数量有关。随后在流式细胞仪上分析样本，且根据校准曲线测定拷贝数(表11)。对于内化分析，将3×105个细胞与10μg/ml 2E7的FACS缓冲液(1×PBS，含有0.1％ BSA)一起在4℃下培育30min。在4℃下洗涤细胞以移除未结合物质且保持在冰上或移动至37℃，保持不同时间长度。在渐进性时间点(1、0.5、1、2、3、4hr)，细胞在4℃下用与PE结合的抗人类Fc染色30min，并流式细胞术分析。内化率如下计算：自时间0时4℃下细胞表面所结合抗体的平均荧光强度(MFI)减去各时间点处37℃下细胞表面所结合抗体的MFI，随后除以时间0时4℃下细胞表面所结合抗体的MFI。2E7显示在CD70表达细胞系(786-O、Caki-1、Raji)上快速内化，且在CD70阴性细胞系(MCF-7)上无内化(图13)。
表11.细胞系中的目标(CD70)拷贝数
实例10：2E7大鼠PK
以3mg/kg向雄性史泊格多利大鼠(Sprague Dawley rat)静脉内输注施用2E7(n＝3只/组)。在施用后不同时间点，对各大鼠的眼眶血液进行取样。通过ELISA分析(ProfoundBio)分析2E7的循环浓度，且使用GraphPad Prism 6软件进行计算。2E7显示IgG1抗体特有的在大鼠中的稳定血浆PK(图14)。
实例11：2E7偶联物：体外细胞毒性
将两种2E7偶联物用于研究中(表12)。对于制备2E7-德鲁替康(deruxtecan)，将于含有5mM EDTA的50mM磷酸钠缓冲液(pH＝6.9)中的2mL抗体(10mg/mL)添加至10mM TCEPHCl(参(2-羧乙基)膦HCl)水溶液中，摩尔比为8.0(TCEP与mAb)。在25℃下进行还原反应2hr。将德鲁替康(以20mg/mL的浓度溶解于DMSO中)以摩尔比12(德鲁替康/mAb)添加至还原抗体中。在25℃下搅拌偶合反应物8hr。通过用50mM磷酸钠缓冲液进行超滤来移除过量德鲁替康及杂质。ADC通过UFDF储存于含有6％蔗糖及0.02％(w/V)Tween 20的20mM组氨酸缓冲液中。通过SEC-HPLC测定的纯度为97.2％且通过LC-MS测定的DAR值为7.5。对于制备2E7-维多汀(vedotin)，将于含有5mM EDTA的50mM磷酸钠缓冲液(pH＝6.9)中的2mL抗体(10mg/mL)添加至10mM TCEP HCl(三(2-羧乙基)膦HCl)水溶液中，摩尔比为2.2(TCEP与mAb)。在25℃下进行还原反应2hr。将维多汀(以20mg/mL的浓度溶解于DMSO中)添加至摩尔比5.0(维多汀/mAb)的还原抗体中。在25℃下搅拌偶合反应物2hr。通过用50mM磷酸钠缓冲液进行超滤来移除过量维多汀及杂质。ADC通过UFDF储存于含有6％蔗糖及0.02％(w/V)Tween 20的20mM组氨酸缓冲液中。通过SEC-HPLC测定的纯度为97.4％且通过HIC-HPLC测定的DAR值为3.9。对于体外细胞毒性研究：在添加2E7偶联物的前一天，收集细胞且平板接种至96孔实心白色平底培养板中。次日，将细胞暴露于浓度范围为670nM至0.00067nM的测试品。将培养板在37℃下培育96h。此后，将每孔40μl Cell-tire Glo(CTG)添加至培养板中，在培育后5min收集荧光素酶读数，且通过微孔板读取器分析。将所有读数标准化为未处理对照孔中的活细胞百分比，且通过Prism软件计算IC50值。2E7-德鲁替康及2E7-维多汀而非2E7对测试的所有四个细胞系产生细胞毒性效果(图15至图18)。
表12.用于研究中的2E7偶联物
基准ADC(DAR) 连接子-药物
2E7-deruxtecan(8) mc-GGFG-Dxd
2E7-vedotin(4) mc-vc-PAB-MMAE
实例12：2E7偶联物：细胞系衍生异种移植(CDX)模型的活体内功效
在CDX模型中评估与基准连接子-药物结合的2E7的抗肿瘤活性(表12)。用Caki-1细胞(ATCC，HTB-46，3×106，于0.2mL细胞悬浮液中)或Raji细胞(来自Betapharma，5×106，于0.1mL细胞悬浮液中)在右侧腹下对雌性BALB/c裸小鼠皮下接种，以产生肿瘤。在肿瘤接种后五至八天，选择平均肿瘤大小120至130mm3的小鼠，且根据其肿瘤体积使用分层随机分组将其分配至各模型的治疗组中(n＝9至10只小鼠/组)。在随机分组后一天开始治疗(随机分组日定义为D0)，且经由以5mg/kg静脉内输注2E7偶联物而进行单次剂量(在第1天)或多次剂量(第1天/第4天/第8天/第11天)方案。使用卡尺一周两次在两个维度测定肿瘤大小及体重，且使用下式以mm3表述体积：V＝0.5a×b2，其中a及b分别为肿瘤的长直径及短直径。超过2000mm3的肿瘤体积定义为终点。监测动物体重作为衡量毒性的间接指标。所有研究组中的小鼠均未显示显著体重减轻。治疗持续时间内无发病或死亡。相较于载剂对照组，在使用Caki-1或Raji细胞的多次或单次剂量模型中，用2E7-德鲁替康(8)处理产生对肿瘤生长的明显抑制；在此等模型中，2E7-维多汀(4)发挥较低至中等的抗肿瘤活性(图19至图22)。
序列表
SEQ ID NO:1–69A7 VH氨基酸序列
QVQLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSVSSDYYYWSWIR QPPGKGLEWLGYIYYSGSTNYNPSLKSRVT ISVDTSKNQF SLKLRSVTTA DTAVYYCARG DGDYGGNCFD YWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:2–69A7 VL氨基酸序列
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIFD ASNRATGIPARFSGSGSGTD FTLTISSLEP EDFAVYYCQQ RSNWPLTFGG GTKVEIK
SEQ ID NO:3–2A4 VH氨基酸序列
QVQLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSVSSDYYYWSWIR QPPGKGLEWLGYIYYSGSTNYNPSLKSRVT ISVDTSKNQF SLKLRSVTTA DTAVYYCARG DGDYGGNVFP YWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:4–2A4 VL氨基酸序列
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIFD ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQ RSNWPLTFGG GTKVEIK
SEQ ID NO:5 1H8 VH氨基酸序列
QVQLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSVSSDYYYWSWIR QPPGKGLEWLGYIYYSGSTNYNPSLKSRVT ISVDTSKNQF SLKLRSVTTA DTAVYYCARG DGDFMGVCFD YWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:6 1H8 VL氨基酸序列
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIFD ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQ RSNWPLTFGG GTKVEIK
SEQ ID NO:7 2E7 VH氨基酸序列
QVQLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSVSSDYYYWSWIR QPPGKGLEWLGYIYYSGSTNYNPSLKSRVT ISVDTSKNQF SLKLRSVTTA DTAVYYCARG DGDFLGVCFD YWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:8 2E7 VL氨基酸序列
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIFD ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQ RSNWPLTFGG GTKVEIK
SEQ ID NO:9 2D2 VH氨基酸序列
QVQLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSVSSDYYYWSWIR QPPGKGLEWLGYIYYSGSTNYNPSLKSRVT ISVDTSKNQF SLKLRSVTTA DTAVYYCARG DGDYGGNCFD YWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:10 2D2 VL氨基酸序列
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIFD ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQ RLKFPLTFGG GTKVEIK
SEQ ID NO:11 1A4 VH氨基酸序列
QVQLQESGPG LVKPSETLSL TCTVSGGSVY SGYYYWSWIR QPPGKGLEWLGYFSLSGSTNYNPSLKSRVT ISVDTSKNQF SLKLRSVTTA DTAVYYCARG DGDYGGNCFD YWGQGTLVTVSS
SEQ ID NO:12 1A4 VL氨基酸序列
EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASQSVS SYLAWYQQKP GQAPRLLIFD ASNRATGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEP EDFAVYYCQQ RSNWPLTFGG GTKVEIK
SEQ ID NO:13 2A4 HCDR3氨基酸序列
GDGDYGGNVF PY
SEQ ID NO:14 1H8 HCDR3氨基酸序列
GDGDFMGVCF DY
SEQ ID NO:15 2E7 HCDR3氨基酸序列
GDGDFLGVCF DY
SEQ ID NO:16 1A4 HCDR1氨基酸序列
YSGYYYWS
SEQ ID NO:17 1A4 HCDR2氨基酸序列
YFSLSGSTNY NPSLKS
SEQ ID NO:18 2D2 LCDR3
QQRLKFPLT
SEQ ID NO:19h1F6 VH氨基酸序列
QVQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGYTFT NYGMNWVRQA PGQGLKWMGWINTYTGEPTYADAFKGRVTM TRDTSISTAY MELSRLRSDD TAVYYCARDY GDYGMDYWGQ GTTVTVSS
SEQ ID NO:20h1F6 VL氨基酸序列
DIVMTQSPDS LAVSLGERAT INCRASKSVS TSGYSFMHWY QQKPGQPPKL LIYLASNLESGVP-DRFSGSG SGTDFTLTIS SLQAEDVAVY YCQHSREVPW TFGQGTKVEI K
SEQ ID NO:21HCDR1氨基酸序列
SSDYYYWS
SEQ ID NO:22HCDR2氨基酸序列
YIYYSGSTNY NPSLKS
SEQ ID NO:23HCDR3氨基酸序列
GDGDYGGNCF DY
SEQ ID NO:24LCDR1氨基酸序列
RASQSVSSYL A
SEQ ID NO:25LCDR2氨基酸序列
DASNRAT
SEQ ID NO:26LCDR3氨基酸序列
QQRSNWPLT
SEQ ID NO:27
(GGGGS)
SEQ ID NO:28人类IgG1重链UniProt P01857-1ASTKGPSVFP LAPSSKSTSGGTAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGVHTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTQT YICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCP PCPAPELLGGPSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGKEYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQVYTLPPSRDE LTKNQVSLTCLVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK
SEQ ID NO:29人类κ轻链UniProt P01834-1
RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTKSFNRGEC
SEQ ID NO:30六组氨酸
HHHHHH
SEQ ID NO:31
GCCGCCACC
SEQ ID NO:32
MGWSCIILFL VATATGVHS
SEQ ID NO:33
LPXTG
SEQ ID NO:34
(丁二酰亚胺-3-基-N)-(CH2)n-C(＝O)-GGFG-NH-CH2-O-CH2-(C＝O)-
SEQ ID NO:35
GGFG
SEQ ID NO:36
ALAL
序列表
<110> 普方生物制药美国公司
普方生物制药（苏州）有限公司
<120> CD70结合剂、其偶联物及其使用方法
<130> 760270.40101WO
<140> PCT
<141> 2022-04-22
<150> PCT/CN2021/089164
<151> 2021-04-23
<160> 36
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> 合成69A7 VH氨基酸序列
<400> 1
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Thr Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Asp Gly Asp Tyr Gly Gly Asn Cys Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 2
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成69A7 VL氨基酸序列
<400> 2
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 3
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成2A4 VH氨基酸序列
<400> 3
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Thr Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Asp Gly Asp Tyr Gly Gly Asn Val Phe Pro Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 4
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成2A4 VL氨基酸序列
<400> 4
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 5
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成1H8 VH氨基酸序列
<400> 5
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Thr Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Asp Gly Asp Phe Met Gly Val Cys Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 6
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成1H8 VL氨基酸序列
<400> 6
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 7
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成2E7 VH氨基酸序列
<400> 7
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Thr Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Asp Gly Asp Phe Leu Gly Val Cys Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 8
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成2E7 VL氨基酸序列
<400> 8
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 9
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成2D2 VH氨基酸序列
<400> 9
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Ser Ser Asp
20 25 30
Tyr Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Thr Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Asp Gly Asp Tyr Gly Gly Asn Cys Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 10
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成2D2 VL氨基酸序列
<400> 10
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Leu Lys Phe Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 11
<211> 122
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成1A4 VH氨基酸序列
<400> 11
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Val Tyr Ser Gly
20 25 30
Tyr Tyr Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu
35 40 45
Trp Leu Gly Tyr Phe Ser Leu Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser
50 55 60
Leu Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe
65 70 75 80
Ser Leu Lys Leu Arg Ser Val Thr Thr Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr
85 90 95
Cys Ala Arg Gly Asp Gly Asp Tyr Gly Gly Asn Cys Phe Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 12
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成1A4 VL氨基酸序列
<400> 12
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Phe Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 13
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成2A4 HCDR3氨基酸序列
<400> 13
Gly Asp Gly Asp Tyr Gly Gly Asn Val Phe Pro Tyr
1 5 10
<210> 14
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成1H8 HCDR3氨基酸序列
<400> 14
Gly Asp Gly Asp Phe Met Gly Val Cys Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 15
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成2E7 HCDR3氨基酸序列
<400> 15
Gly Asp Gly Asp Phe Leu Gly Val Cys Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 16
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成1A4 HCDR1氨基酸序列
<400> 16
Tyr Ser Gly Tyr Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 17
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成1A4 HCDR2氨基酸序列
<400> 17
Tyr Phe Ser Leu Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 18
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成2D2 LCDR3
<400> 18
Gln Gln Arg Leu Lys Phe Pro Leu Thr
1 5
<210> 19
<211> 118
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成h1F6 VH氨基酸序列
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Lys Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Asp Ala Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Tyr Gly Asp Tyr Gly Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Thr Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 20
<211> 111
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成h1F6 VL氨基酸序列
<400> 20
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Arg Ala Ser Lys Ser Val Ser Thr Ser
20 25 30
Gly Tyr Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Val Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln His Ser Arg
85 90 95
Glu Val Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 21
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成HCDR1氨基酸序列
<400> 21
Ser Ser Asp Tyr Tyr Tyr Trp Ser
1 5
<210> 22
<211> 16
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成HCDR2氨基酸序列
<400> 22
Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser
1 5 10 15
<210> 23
<211> 12
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成HCDR3氨基酸序列
<400> 23
Gly Asp Gly Asp Tyr Gly Gly Asn Cys Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 24
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成LCDR1氨基酸序列
<400> 24
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成LCDR2氨基酸序列
<400> 25
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 26
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成LCDR3氨基酸序列
<400> 26
Gln Gln Arg Ser Asn Trp Pro Leu Thr
1 5
<210> 27
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成连接子
<400> 27
Gly Gly Gly Gly Ser
1 5
<210> 28
<211> 330
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成人类IgG1重链 UniProt P01857-1
<400> 28
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 29
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成人类κ 轻链 UniProt P01834-1
<400> 29
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 30
<211> 6
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成六组氨酸
<400> 30
His His His His His His
1 5
<210> 31
<211> 9
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成序列
<400> 31
gccgccacc 9
<210> 32
<211> 19
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成序列
<400> 32
Met Gly Trp Ser Cys Ile Ile Leu Phe Leu Val Ala Thr Ala Thr Gly
1 5 10 15
Val His Ser
<210> 33
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> 位置3上的“Xaa”代表 Gln、Arg、Pro或Leu。
<400> 33
Leu Pro Xaa Thr Gly
1 5
<210> 34
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 合成连接子序列
<220>
<221> mod_res
<223> (丁二酰亚胺-3-基-N)-(CH2)n-C(=O)
<220>
<221> mod_res
<223> NH-CH2-O-CH2-(C=O)-
<400> 34
Gly Gly Phe Gly
1
<210> 35
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> 合成连接子序列
<400> 35
Gly Gly Phe Gly
1
<210> 36
<211> 4
<212> PRT
<213> Artificial sequence
<220>
<223> 合成连接子序列
<400> 36
Ala Leu Ala Leu
1

Claims (83)

1.一种结合剂，包括：重链可变(VH)区及轻链可变(VL)区，所述VH区包括置于重链可变区框架区中的互补决定区HCDR1、HCDR2及HCDR3，且所述VL区包括置于轻链可变区框架区中的LCDR1、LCDR2及LCDR3，所述VH及VL CDR具有选自下列氨基酸序列组的氨基酸序列：
a.分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；
b.分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:14、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；
c.分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26；
d.分别为SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:18；及
e.分别为SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:17、SEQ ID NO:23、SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26。
2.如权利要求1所述的结合剂，其中所述VH及VL区分别具有选自下列氨基酸序列组的氨基酸序列：
a.SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；
b.SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；
c.SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；
d.SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；及
e.SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12。
3.如权利要求1所述的结合剂，其中所述VH及VL区分别具有选自下列氨基酸序列组的氨基酸序列：
a.SEQ ID NO:3及SEQ ID NO:4；
b.SEQ ID NO:5及SEQ ID NO:6；
c.SEQ ID NO:7及SEQ ID NO:8；
d.SEQ ID NO:9及SEQ ID NO:10；及
e.SEQ ID NO:11及SEQ ID NO:12；
其中所述重链及轻链框架区可选择性地通过所述框架区中的1至8个氨基酸取代、缺失或插入来修饰。
4.如前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中HCDR1、HCDR2及HCDR3以及LCDR1、LCDR2及LCDR3分别具有SEQ ID NO:21、SEQ ID NO:22及SEQ ID NO:15以及SEQ ID NO:24、SEQ ID NO:25及SEQ ID NO:26中所示的氨基酸序列。
5.如权利要求1所述的结合剂，其中所述框架区为人类框架区。
6.如权利要求1至5中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂为抗体或其抗原结合部分。
7.如前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂为单克隆抗体、Fab、Fab'、F(ab')、Fv、二硫键连接Fc、scFv、单域抗体、双功能抗体、双特异性抗体或多特异性抗体。
8.如前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述重链可变区进一步包括重链恒定区。
9.如权利要求8所述的结合剂，其中所述重链恒定区具有IgG同型。
10.如权利要求9所述的结合剂，其中所述重链恒定区为IgG1恒定区。
11.如权利要求8所述的结合剂，其中所述重链恒定区为IgG4恒定区。
12.如权利要求10所述的结合剂，其中所述IgG1恒定区具有SEQ ID NO:28中所示的氨基酸序列。
13.如前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述轻链可变区进一步包括轻链恒定区。
14.如权利要求13所述的结合剂，其中所述轻链恒定区具有κ型。
15.如权利要求14所述的结合剂，其中所述轻链恒定区具有SEQ ID NO:29中所示的氨基酸序列。
16.如权利要求8至15中任一项所述的结合剂，其中所述重链恒定区至少进一步包括降低与人类FcγRIII的结合亲和力的氨基酸修饰。
17.如前述权利要求中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂为单特异性的。
18.如权利要求1至17中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂为二价的。
19.如权利要求1至17中任一项所述的结合剂，其中所述结合剂为双特异性的。
20.一种医药组合物，其包括如权利要求1至19中任一项所述的结合剂及药学上可接受的载剂。
21.一种核酸，其编码如权利要求1至19中任一项所述的结合剂。
22.一种载体，其包括如权利要求21所述的核酸。
23.一种细胞系，其包括如权利要求22所述的载体或如权利要求21所述的核酸。
24.一种偶联物，其包括：如权利要求1至19中任一项所述的结合剂，至少一个连接至所述结合剂的连接子；及
至少一种连接至各所述连接子的药物。
25.如权利要求24所述的偶联物，其中所述药物选自细胞毒性剂、免疫调节剂、核酸、生长抑制剂、PROTAC、毒素及放射性同位素。
26.如权利要求24至25中任一项所述的偶联物，其中各所述连接子经由链间二硫键残基、赖氨酸残基、经工程改造的半胱氨酸残基、聚糖、经修饰的聚糖、所述结合剂的N端残基或连接至所述结合剂的聚组氨酸肽而连接至所述结合剂。
27.如权利要求24至26中任一项所述的偶联物，其中所述偶联物的平均药物负载为约1至约8、约2、约4、约6、约8、约10、约12、约14、约16、约3至约5、约6至约8或约8至约16。
28.如权利要求24至27中任一项所述的偶联物，其中所述药物为细胞毒性剂。
29.如权利要求28所述的偶联物，其中所述细胞毒性剂选自由以下组成的组：奥瑞他汀(auristatin)、类美登素(maytansinoid)、喜树碱(camptothecin)、多卡霉素(duocarmycin)或卡奇霉素(calicheamicin)。
30.如权利要求29所述的偶联物，其中所述细胞毒性剂为奥瑞他汀。
31.如权利要求30所述的偶联物，其中所述细胞毒性剂为MMAE或MMAF。
32.如权利要求29所述的偶联物，其中所述细胞毒性剂为喜树碱。
33.如权利要求32所述的偶联物，其中所述细胞毒性剂为依喜替康(exatecan)。
34.如权利要求32所述的偶联物，其中所述细胞毒性剂为SN-38。
35.如权利要求29所述的偶联物，其中所述细胞毒性剂为卡奇霉素。
36.如权利要求29所述的偶联物，其中所述细胞毒性剂为类美登素。
37.如权利要求36所述的偶联物，其中所述类美登素为美登素(maytansine)、美登醇(maytansinol)或DM1、DM3及DM4中的美登素类似物，及安沙霉素-2(ansamatocin-2)。
38.如权利要求24至37中任一项所述的偶联物，其中所述连接子为可裂解连接子。
39.如权利要求38所述的偶联物，其中所述连接子包括mc-VC-PAB、CL2、CL2A或(丁二酰亚胺-3-基-N)-(CH2)n-C(＝O)-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-CH2-O-CH2-(C＝O)-，其中n＝1至5。
40.如权利要求39所述的偶联物，其中所述连接子包括mc-VC-PAB。
41.如权利要求39所述的偶联物，其中所述连接子包括CL2A。
42.如权利要求39所述的偶联物，其中所述连接子包括CL2。
43.如权利要求39所述的偶联物，其中所述连接子包括(丁二酰亚胺-3-基-N)-(CH2)n-C(＝O)-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-CH2-O-CH2-(C＝O)-。
44.如权利要求43所述的偶联物，其中所述连接子连接至依喜替康的至少一个分子。
45.如权利要求24至27中任一项所述的偶联物，其中所述药物为免疫调节剂。
46.如权利要求45所述的偶联物，其中所述免疫调节剂选自由以下组成的组：TRL7激动剂、TLR8激动剂、STING激动剂或RIG-I激动剂。
47.如权利要求46所述的偶联物，其中所述免疫调节剂为TLR7激动剂。
48.如权利要求46所述的偶联物，其中所述TLR7激动剂为咪唑并喹啉、咪唑并喹啉胺、噻唑并喹啉、氨基喹啉、氨基喹唑啉、吡啶并[3，2-d]嘧啶-2，4-二胺、嘧啶-2，4-二胺、2-氨基咪唑、1-烷基-1H-苯并咪唑-2-胺、四氢吡啶并嘧啶、杂芳噻二嗪-2，2-二氧化物、苯并萘啶、鸟苷类似物、腺苷类似物、胸苷均聚物、ssRNA、CpG-A、PolyG10及PolyG3。
49.如权利要求45所述的偶联物，其中所述免疫调节剂为TLR8激动剂。
50.如权利要求49所述的偶联物，其中所述TLR8激动剂选自咪唑并喹啉、噻唑并喹啉、氨基喹啉、氨基喹唑啉、吡啶并[3，2-d]嘧啶-2，4-二胺、嘧啶-2，4-二胺、2-氨基咪唑、1-烷基-1H-苯并咪唑-2-胺、四氢吡啶并嘧啶或ssRNA。
51.如权利要求45所述的偶联物，其中所述免疫调节剂为STING激动剂。
52.如权利要求45所述的偶联物，其中所述免疫调节剂为RIG-I激动剂。
53.如权利要求52所述的偶联物，其中所述RIG-I激动剂选自KIN1148、SB-9200、KIN700、KIN600、KIN500、KIN100、KIN101、KIN400及KIN2000。
54.如权利要求45至53中任一项所述的偶联物，其中所述连接子选自由以下组成的组：mc-VC-PAB、CL2、CL2A及(丁二酰亚胺-3-基-N)-(CH2)n-C(＝O)-Gly-Gly-Phe-Gly-NH-CH2-O-CH2-(C＝O)-，其中n＝1至5。
55.一种医药组合物，其包括如权利要求24至54中任一项所述的偶联物及药学上可接受的载剂。
56.一种治疗CD70+癌症的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的如权利要求1至19中任一项所述的结合剂、如权利要求24至54中任一项所述的偶联物或者如权利要求20或55所述的医药组合物。
57.如权利要求56所述的方法，其中所述CD70+癌症为实体肿瘤或恶性血液病。
58.如权利要求57所述的方法，其中所述CD70+癌症选自肝细胞癌、结直肠癌、胰脏癌、卵巢癌、惰性非霍奇金氏淋巴瘤(indolent Non-Hodgkin's Lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤、B细胞系癌、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、鼻咽喉癌、胸腺癌及神经胶质瘤。
59.如权利要求57所述的方法，其中所述CD70癌症为实体肿瘤。
60.如权利要求56至59中任一项所述的方法，其进一步包括向所述个体施用免疫疗法。
61.如权利要求60所述的方法，其中所述免疫疗法包括检查点抑制剂。
62.如权利要求61所述的方法，其中所述检查点抑制剂选自特异性结合于人类PD-1、人类PD-L1或人类CTLA4的抗体。
63.如权利要求62所述的方法，其中所述检查点抑制剂为帕博利珠单抗(pembrolizumab)、纳武单抗(nivolumab)、西米普利单抗(cemiplimab)或伊匹木单抗(ipilimumab)。
64.如权利要求56至63中任一项所述的方法，其进一步包括向所述个体施用化学疗法。
65.如权利要求56至64中任一项所述的方法，其包括施用如权利要求25至53所述的偶联物或如权利要求55所述的医药组合物。
66.如权利要求56至65中任一项所述的方法，其中所述结合剂、偶联物或医药组合物为静脉内施用。
67.如权利要求66所述的方法，其中所述结合剂、偶联物或医药组合物以约0.1mg/kg至约12mg/kg的剂量施用。
68.如权利要求56至67中任一项所述的方法，其中所述个体的治疗结果获得改善。
69.如权利要求68所述的方法，其中所述经改善的治疗结果为选自稳定疾病、部分反应或完全反应的客观反应。
70.如权利要求68所述的方法，其中所述经改善的治疗结果为肿瘤负荷降低。
71.如权利要求68所述的方法，其中所述经改善的治疗结果为无进展存活期或无疾病存活期。
72.一种如权利要求1至19中任一项的结合剂或如权利要求20的医药组合物的用途，其用于治疗个体的CD70+癌症。
73.一种如权利要求24至54中任一项的偶联物或如权利要求55的医药组合物的用途，其用于治疗个体的CD70+癌症。
74.一种治疗自身免疫疾病所述的方法，其包括向有需要的个体施用治疗有效量的如权利要求1至19中任一项所述的结合剂、如权利要求24至54中任一项所述的偶联物或者如权利要求20或55所述的医药组合物。
75.如权利要求74所述的方法，其中所述自身免疫疾病为类风湿性关节炎、多发性硬化症或系统性红斑狼疮。
76.如权利要求74至75中任一项所述的方法，其进一步包括向所述个体施用免疫抑制疗法。
77.如权利要求74至76中任一项所述的方法，其包括施用如权利要求24至54所述的偶联物或如权利要求55所述的医药组合物。
78.如权利要求74至77中任一项所述的方法，其中所述结合剂、偶联物或医药组合物为静脉内施用。
79.如权利要求78所述的方法，其中所述结合剂、偶联物或医药组合物以约0.1mg/kg至约12mg/kg的剂量施用。
80.如权利要求74至79中任一项所述的方法，其中所述个体的治疗结果获得改善。
81.如权利要求80所述的方法，其中所述经改善的治疗结果为疾病进展减缓或疾病严重程度减轻。
82.一种如权利要求1至19中任一项的结合剂或如权利要求20所述的医药组合物的用途，其用于治疗个体的自身免疫疾病。
83.一种如权利要求24至54中任一项所述的偶联物或如权利要求55所述的医药组合物的用途，其用于治疗个体的自身免疫疾病。
CN202280030424.5A 2021-04-23 2022-04-22 Cd70结合剂、其偶联物及其使用方法 Pending CN117203238A (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2021089164 2021-04-23
CNPCT/CN2021/089164 2021-04-23
PCT/US2022/025966 WO2022226317A1 (en) 2021-04-23 2022-04-22 Anti-cd70 antibodies, conjugates thereof and methods of using the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN117203238A true CN117203238A (zh) 2023-12-08

Family

ID=81597869

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202280030424.5A Pending CN117203238A (zh) 2021-04-23 2022-04-22 Cd70结合剂、其偶联物及其使用方法

Country Status (7)

Country Link
EP (1) EP4326768A1 (zh)
JP (1) JP2024516631A (zh)
CN (1) CN117203238A (zh)
AU (1) AU2022262644A1 (zh)
CA (1) CA3216459A1 (zh)
TW (1) TW202308699A (zh)
WO (1) WO2022226317A1 (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2024040195A1 (en) 2022-08-17 2024-02-22 Capstan Therapeutics, Inc. Conditioning for in vivo immune cell engineering

Family Cites Families (172)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4307016A (en) 1978-03-24 1981-12-22 Takeda Chemical Industries, Ltd. Demethyl maytansinoids
US4256746A (en) 1978-11-14 1981-03-17 Takeda Chemical Industries Dechloromaytansinoids, their pharmaceutical compositions and method of use
JPS55102583A (en) 1979-01-31 1980-08-05 Takeda Chem Ind Ltd 20-acyloxy-20-demethylmaytansinoid compound
JPS55162791A (en) 1979-06-05 1980-12-18 Takeda Chem Ind Ltd Antibiotic c-15003pnd and its preparation
JPS5645483A (en) 1979-09-19 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd C-15003phm and its preparation
JPS5645485A (en) 1979-09-21 1981-04-25 Takeda Chem Ind Ltd Production of c-15003pnd
EP0028683A1 (en) 1979-09-21 1981-05-20 Takeda Chemical Industries, Ltd. Antibiotic C-15003 PHO and production thereof
WO1982001188A1 (en) 1980-10-08 1982-04-15 Takeda Chemical Industries Ltd 4,5-deoxymaytansinoide compounds and process for preparing same
US4450254A (en) 1980-11-03 1984-05-22 Standard Oil Company Impact improvement of high nitrile resins
US4313946A (en) 1981-01-27 1982-02-02 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Chemotherapeutically active maytansinoids from Trewia nudiflora
US4315929A (en) 1981-01-27 1982-02-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of Agriculture Method of controlling the European corn borer with trewiasine
JPS57192389A (en) 1981-05-20 1982-11-26 Takeda Chem Ind Ltd Novel maytansinoid
US4737462A (en) 1982-10-19 1988-04-12 Cetus Corporation Structural genes, plasmids and transformed cells for producing cysteine depleted muteins of interferon-β
US4518584A (en) 1983-04-15 1985-05-21 Cetus Corporation Human recombinant interleukin-2 muteins
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
AU606320B2 (en) 1985-11-01 1991-02-07 International Genetic Engineering, Inc. Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US4880935A (en) 1986-07-11 1989-11-14 Icrf (Patents) Limited Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US4704692A (en) 1986-09-02 1987-11-03 Ladner Robert C Computer based system and method for determining and displaying possible chemical structures for converting double- or multiple-chain polypeptides to single-chain polypeptides
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
IL106992A (en) 1988-02-11 1994-06-24 Bristol Myers Squibb Co Noble hydrazonic history of anthracycline and methods for their preparation
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
ES2206447T3 (es) 1991-06-14 2004-05-16 Genentech, Inc. Anticuerpo humanizado para heregulina.
US5851795A (en) 1991-06-27 1998-12-22 Bristol-Myers Squibb Company Soluble CTLA4 molecules and uses thereof
US5362852A (en) 1991-09-27 1994-11-08 Pfizer Inc. Modified peptide derivatives conjugated at 2-hydroxyethylamine moieties
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
CA2149329C (en) 1992-11-13 2008-07-15 Darrell R. Anderson Therapeutic application of chimeric and radiolabeled antibodies to human b lymphocyte restricted differentiation antigen for treatment of b cell lymphoma
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US6080560A (en) 1994-07-25 2000-06-27 Monsanto Company Method for producing antibodies in plant cells
KR960029336A (ko) 1995-01-09 1996-08-17 김충환 캄토테신 유도체, 그의 제조 방법 및 이를 함유하는 항암제
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6051227A (en) 1995-07-25 2000-04-18 The Regents Of The University Of California, Office Of Technology Transfer Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US5855887A (en) 1995-07-25 1999-01-05 The Regents Of The University Of California Blockade of lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
US5811097A (en) 1995-07-25 1998-09-22 The Regents Of The University Of California Blockade of T lymphocyte down-regulation associated with CTLA-4 signaling
JP2000503639A (ja) 1995-12-22 2000-03-28 ブリストル―マイヤーズ スクイブ カンパニー 分枝ヒドラゾンのリンカー類
PT825186E (pt) 1996-08-16 2002-08-30 Pfizer Derivados de 2-aminobenzazepina e sua utilizacao para o tratamento da imunossupressao
JP2001523958A (ja) 1997-03-21 2001-11-27 ブライハム アンド ウィミンズ ホスピタル，インコーポレイテッド 免疫療法のｃｔｌａ−４結合ペプチド
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
US5985837A (en) 1998-07-08 1999-11-16 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin 15 derivatives
US20030167531A1 (en) 1998-07-10 2003-09-04 Russell Douglas A. Expression and purification of bioactive, authentic polypeptides from plants
US6512162B2 (en) 1998-07-10 2003-01-28 Calgene Llc Expression of eukaryotic peptides in plant plastids
US6204257B1 (en) 1998-08-07 2001-03-20 Universtiy Of Kansas Water soluble prodrugs of hindered alcohols
KR100856446B1 (ko) 1998-12-23 2008-09-04 화이자 인크. Ｃｔｌａ－４에 대한 인간 단일클론 항체
US6682736B1 (en) 1998-12-23 2004-01-27 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to CTLA-4
US7109003B2 (en) 1998-12-23 2006-09-19 Abgenix, Inc. Methods for expressing and recovering human monoclonal antibodies to CTLA-4
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
US7605238B2 (en) 1999-08-24 2009-10-20 Medarex, Inc. Human CTLA-4 antibodies and their uses
EP2829609A1 (en) 1999-08-24 2015-01-28 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Human CTLA-4 antibodies and their uses
EP1224309A2 (en) 1999-10-21 2002-07-24 Monsanto Company Post-translational modification of recombinant proteins produced in plants
AU2001233027A1 (en) 2000-01-27 2001-08-07 Genetics Institute, Llc Antibodies against ctla4 (cd152), conjugates comprising same, and uses thereof
ES2528794T3 (es) 2000-04-11 2015-02-12 Genentech, Inc. Anticuerpos multivalentes y usos de los mismos
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
CA2472329C (en) 2002-01-23 2010-01-12 Johnson Matthey Plc Sulphided ion exchange resins
US7591994B2 (en) 2002-12-13 2009-09-22 Immunomedics, Inc. Camptothecin-binding moiety conjugates
EP1545613B9 (en) 2002-07-31 2012-01-25 Seattle Genetics, Inc. Auristatin conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
SI1558648T1 (sl) 2002-10-17 2012-05-31 Genmab As Človeška monoklonalna protitelesa proti CD
WO2004054622A1 (en) 2002-12-13 2004-07-01 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
DE60332957D1 (de) 2002-12-16 2010-07-22 Genentech Inc Immunoglobulinvarianten und deren verwendungen
JP5356648B2 (ja) 2003-02-20 2013-12-04 シアトル ジェネティックス， インコーポレイテッド 抗ｃｄ７０抗体−医薬結合体、ならびに癌および免疫障害の処置のためのそれらの使用
US8088387B2 (en) 2003-10-10 2012-01-03 Immunogen Inc. Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates
US7635472B2 (en) 2003-05-31 2009-12-22 Micromet Ag Pharmaceutical compositions comprising bispecific anti-cd3, anti-cd19 antibody constructs for the treatment of b-cell related disorders
SI1678314T1 (sl) 2003-10-22 2013-01-31 Keck Graduate Institute Metode za sintetiziranje heteromultimernih polipeptidov pri kvasovkah s strategijo razmnoĺ˝evanja haploidnih celic
KR101520209B1 (ko) 2003-11-06 2015-05-13 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
DK1691833T3 (da) 2003-11-28 2010-05-03 Micromet Ag Præparater der omfatter polypeptider
US7235641B2 (en) 2003-12-22 2007-06-26 Micromet Ag Bispecific antibodies
WO2005084390A2 (en) 2004-03-02 2005-09-15 Seattle Genetics, Inc. Partially loaded antibodies and methods of their conjugation
CA2885854C (en) 2004-04-13 2017-02-21 F. Hoffmann-La Roche Ag Anti-p-selectin antibodies
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
EP1791565B1 (en) 2004-09-23 2016-04-20 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
AU2005295595C1 (en) 2004-10-15 2012-06-21 Seattle Genetics, Inc. Anti-CD70 antibody and its use for the treatment and prevention of cancer and immune disorders
CA2614436C (en) 2005-07-07 2016-05-17 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the c-terminus
TWI382019B (zh) 2005-08-19 2013-01-11 Array Biopharma Inc 作為類鐸受體（ｔｏｌｌ-ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）調節劑之胺基二氮雜呯
TW201402124A (zh) 2005-08-19 2014-01-16 Array Biopharma Inc 作為類鐸受體（ｔｏｌｌ-ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）調節劑之８-經取代苯并氮雜呯
RU2515108C2 (ru) 2005-08-19 2014-05-10 Эббви Инк Иммуноглобулин с двойными вариабельными доменами и его применения
US7612181B2 (en) 2005-08-19 2009-11-03 Abbott Laboratories Dual variable domain immunoglobulin and uses thereof
EP1934261B1 (en) 2005-09-26 2014-10-29 Medarex, L.L.C. Human monoclonal antibodies to cd70
AU2006301492B2 (en) 2005-10-11 2011-06-09 Amgen Research (Munich) Gmbh Compositions comprising cross-species-specific antibodies and uses thereof
EP2471816A1 (en) 2006-08-30 2012-07-04 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US8455622B2 (en) 2006-12-01 2013-06-04 Seattle Genetics, Inc. Variant target binding agents and uses thereof
WO2008074004A2 (en) * 2006-12-14 2008-06-19 Medarex, Inc. Human antibodies that bind cd70 and uses thereof
LT2520590T (lt) 2007-04-03 2018-09-10 Amgen Research (Munich) Gmbh Susijusioms rūšims specifinis rišantis domenas
TWI434849B (zh) 2007-06-29 2014-04-21 Gilead Sciences Inc 類鐸（Ｔｏｌｌ－ｌｉｋｅ）受體７之調節劑
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
PT2235064E (pt) 2008-01-07 2016-03-01 Amgen Inc Método de preparação de moléculas heterodiméricas de fc de anticorpos utilizando efeitos de indução eletrostática
NO2842575T3 (zh) 2008-03-18 2018-02-24
ES2438496T3 (es) 2008-08-01 2014-01-17 Ventirx Pharmaceuticals, Inc. Formulaciones de agonistas de receptores de tipo toll y su uso
KR101787309B1 (ko) 2008-12-09 2017-10-18 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 톨-유사 수용체의 조절제
CA3150199A1 (en) 2009-01-09 2010-07-15 Seagen Inc. Weekly dosing regimens for anti-cd30 vc-pab-mmae antibody drug-conjugates
EP3243527B1 (en) 2009-02-13 2019-06-05 Immunomedics, Inc. Immunoconjugates with an intracellularly-cleavable linkage
ES2726945T3 (es) 2009-06-03 2019-10-10 Immunogen Inc Métodos de conjugación
HUE032626T2 (en) 2009-08-18 2017-10-30 Ventirx Pharmaceuticals Inc Toll receptor modulator substituted benzoazepines
CN105669552A (zh) 2009-08-18 2016-06-15 文蒂雷克斯药品公司 作为toll样受体调节剂的取代的苯并氮杂*
NZ598933A (en) 2009-10-22 2013-04-26 Gilead Sciences Inc Derivatives of purine or deazapurine useful for the treatment of (inter alia) viral infections
CA3220104A1 (en) 2010-06-08 2011-12-15 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
ES2528956T3 (es) 2010-06-10 2015-02-13 Seattle Genetics, Inc. Nuevos derivados de auristatina y su uso
PT2621526T (pt) 2010-09-29 2018-08-02 Seattle Genetics Inc Conjugados de anticorpo com fármaco (adc) que se ligam a proteínas 191pad12
CN103458902B (zh) 2010-10-01 2017-11-07 帆德制药股份有限公司 Tlr激动剂和联合治疗的治疗应用
CA2812787A1 (en) 2010-10-01 2012-04-05 Robert Hershberg Methods for the treatment of allergic diseases
US20140088085A1 (en) 2011-01-12 2014-03-27 Array Biopharma, Inc Substituted Benzoazepines As Toll-Like Receptor Modulators
HUE032036T2 (en) 2011-01-12 2017-08-28 Ventirx Pharmaceuticals Inc Toll-type receptor modulator substituted benzodiazepines
PT2691417T (pt) 2011-03-29 2018-10-31 Roche Glycart Ag Variantes de fc de anticorpos
SI2694484T1 (sl) 2011-04-08 2018-10-30 Janssen Sciences Ireland Uc Derivati pirimidina za zdravljenje virusnih okužb
RS57023B1 (sr) 2011-05-18 2018-05-31 Janssen Sciences Ireland Uc Derivati hinazolina za tretman viralnih infekcija i drugih bolesti
ES2622578T3 (es) 2011-06-10 2017-07-06 Mersana Therapeutics, Inc. Conjugados de proteína-polímero-fármaco
JP6240599B2 (ja) 2011-07-19 2017-11-29 セルモザイク， インコーポレイテッド 新規の架橋試薬、高分子、治療用コンジュゲートおよびその合成法
CN103748114B (zh) 2011-08-23 2017-07-21 罗切格利卡特公司 T细胞活化性双特异性抗原结合分子
TWI519515B (zh) 2011-12-21 2016-02-01 諾維拉治療公司 Ｂ型肝炎抗病毒劑
ES2716811T3 (es) 2012-02-08 2019-06-17 Janssen Sciences Ireland Unlimited Co Derivados piperidinopirimidínicos para el tratamiento de infecciones víricas
US9504756B2 (en) 2012-05-15 2016-11-29 Seattle Genetics, Inc. Self-stabilizing linker conjugates
DK2882721T3 (en) 2012-08-10 2019-03-18 Janssen Sciences Ireland Unlimited Co ALKYLPYRIMIDINE DERIVATIVES FOR TREATING VIRAL INFECTIONS AND ADDITIONAL DISEASES
HUE037064T2 (hu) 2012-10-10 2018-08-28 Janssen Sciences Ireland Uc Pirrolo[3,2-d]-pirimidin származékok vírusos fertõzések és egyéb betegségek kezelésére
NZ746440A (en) 2012-10-11 2019-11-29 Daiichi Sankyo Co Ltd Glycinamide derivatives and production methods thereof
JP6855661B2 (ja) 2012-10-23 2021-04-07 シンアフィックス ビー．ブイ． 修飾抗体、抗体コンジュゲート及びそれらを調製する方法
EP3564259A3 (en) 2012-11-09 2020-02-12 Innate Pharma Recognition tags for tgase-mediated conjugation
EP2925729B1 (en) 2012-11-16 2017-10-18 Janssen Sciences Ireland UC Heterocyclic substituted 2-amino-quinazoline derivatives for the treatment of viral infections
DK2958900T3 (da) 2013-02-21 2019-07-01 Janssen Sciences Ireland Unlimited Co 2-aminopyrimidinderivater til behandling af virusinfektioner
US8993771B2 (en) 2013-03-12 2015-03-31 Novira Therapeutics, Inc. Hepatitis B antiviral agents
SG11201510736PA (en) 2013-07-30 2016-02-26 Janssen Sciences Ireland Uc THIENO[3,2-d]PYRIMIDINES DERIVATIVES FOR THE TREATMENT OF VIRAL INFECTIONS
TWI526446B (zh) 2013-09-27 2016-03-21 中國醫藥大學附設醫院 喜樹鹼的新穎２０（ｓ）－磺基脒衍生物及其抗腫瘤劑的用途
US20160257764A1 (en) 2013-10-14 2016-09-08 Synaffix B.V. Glycoengineered antibody, antibody-conjugate and methods for their preparation
US20160287623A1 (en) 2013-11-19 2016-10-06 The University Of Chicago Use of sting agonist as cancer treatment
CN105813653B (zh) 2013-12-19 2020-06-26 西雅图基因公司 与目标-药物偶联物并用的亚甲基氨基甲酸酯连接物
MX2016009862A (es) 2014-02-17 2016-10-31 Seattle Genetics Inc Conjugados de anticuerpo-farmaco hidrofilicos.
AR100137A1 (es) 2014-04-22 2016-09-14 Hoffmann La Roche Compuestos 4-amino-imidazoquinolina
CA2951368A1 (en) 2014-06-13 2015-12-17 Novartis Ag Auristatin derivatives and conjugates thereof
US11116774B2 (en) 2014-07-11 2021-09-14 Gilead Sciences, Inc. Modulators of toll-like receptors for the treatment of HIV
US11046988B2 (en) 2014-08-04 2021-06-29 Synaffix B.V. Process for the modification of a glycoprotein using a β-(1,4)-N-acetylgalactosaminyl transferase or a mutant thereof
PL3191502T3 (pl) 2014-09-11 2021-11-08 Seagen Inc. Ukierunkowane dostarczanie substancji leczniczych zawierających aminę trzeciorzędową
CA2957354A1 (en) 2014-09-12 2016-03-17 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
SI3230298T1 (sl) 2014-12-08 2021-04-30 F. Hoffmann-La Roche Ag Spojine 3-substituiranega 5-amino-6H-tiazolo(4,5-d)pirimidin-2,7-diona za zdravljenje ali preprečevanje okužbe z virusom
US9694084B2 (en) 2014-12-23 2017-07-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Methods to induce targeted protein degradation through bifunctional molecules
MD3097102T2 (ro) 2015-03-04 2018-02-28 Gilead Sciences Inc Compuşi de 4,6-diamino-pirido[3,2-D]pirimidină modulatori ai receptorilor de tip Toll
CN107295798B (zh) 2015-03-06 2020-10-30 豪夫迈·罗氏有限公司 苯并氮杂*二甲酰胺化合物
BR112017019751A2 (pt) 2015-03-18 2018-05-29 Arvinas Inc composto bifuncional, composição farmacêutica, e, métodos para tratar ou prevenir uma doença ou um distúrbio, e para degradar uma proteína alvo em uma célula
WO2017046112A1 (en) 2015-09-17 2017-03-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Sulfinylphenyl or sulfonimidoylphenyl benzazepines
WO2017071944A1 (en) 2015-10-27 2017-05-04 Koninklijke Philips N.V. Anti-fouling system, controller and method of controlling the anti-fouling system
EP3370726A4 (en) 2015-11-02 2019-06-12 VentiRx Pharmaceuticals, Inc. USE OF TLR8 AGONISTS FOR CANCER TREATMENT
US10393904B2 (en) 2015-11-06 2019-08-27 Weatherford Technology Holdings, Llc Predicting stress-induced anisotropy effect on acoustic tool response
AU2016363013B2 (en) 2015-12-04 2022-03-10 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
US11786603B2 (en) 2016-02-26 2023-10-17 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Optimized transglutaminase site-specific antibody conjugation
PL3430397T3 (pl) 2016-03-14 2022-04-04 Biogen International Neuroscience Gmbh Oznaczenie fagocytozy zależnej od przeciwciał do wiarygodnych pomiarów wychwytu zagregowanych białek
HRP20220577T1 (hr) 2016-05-06 2022-06-24 Shanghai De Novo Pharmatech Co., Ltd. Derivat benzazepina, metoda pripreme, farmaceutski sastav i njegova upotreba
WO2017201449A1 (en) 2016-05-20 2017-11-23 Genentech, Inc. Protac antibody conjugates and methods of use
JP7022702B2 (ja) 2016-05-23 2022-02-18 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト 第二級アミド基を有するベンズアゼピンジカルボキサミド化合物
CN109153648B (zh) 2016-05-23 2022-07-22 豪夫迈·罗氏有限公司 具有叔酰胺官能团的苯并氮杂卓二甲酰胺化合物
EP3468963B1 (en) 2016-06-12 2021-10-27 F. Hoffmann-La Roche AG Dihydropyrimidinyl benzazepine carboxamide compounds
MA45945A (fr) 2016-08-09 2019-06-19 Seattle Genetics Inc Conjugués de médicaments avec des lieurs auto-stabilisants, aux propriétés physiochimiques améliorées
WO2018045150A1 (en) 2016-09-02 2018-03-08 Gilead Sciences, Inc. 4,6-diamino-pyrido[3,2-d]pyrimidine derivaties as toll like receptor modulators
WO2018170179A1 (en) 2017-03-15 2018-09-20 Silverback Therapeutics, Inc. Benzazepine compounds, conjugates, and uses thereof
AR113224A1 (es) 2017-04-28 2020-02-19 Novartis Ag Conjugados de anticuerpo que comprenden un agonista de sting
AR111651A1 (es) 2017-04-28 2019-08-07 Novartis Ag Conjugados de anticuerpos que comprenden agonistas del receptor de tipo toll y terapias de combinación
WO2018227018A1 (en) 2017-06-07 2018-12-13 Silverback Therapeutics, Inc. Antibody conjugates of immune-modulatory compounds and uses thereof
EP3665195A4 (en) 2017-08-11 2021-05-19 Research Development Foundation MANIPULATED ANTIBODY FC VARIANTS FOR INCREASED SERUM HALF-VALUE
JP2021510375A (ja) 2018-01-10 2021-04-22 ディベロップメント センター フォー バイオテクノロジーＤｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ Ｃｅｎｔｅｒ Ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ 抗体ｐｒｏｔａｃコンジュゲート
EP3755707A1 (en) 2018-02-20 2020-12-30 Seagen Inc. Hydrophobic auristatin f compounds and conjugates thereof
US20210170037A1 (en) 2018-05-01 2021-06-10 Cellmosaic Inc. Branched sugar alcohol-based compounds, and compositions and methods thereof
WO2020056194A1 (en) 2018-09-12 2020-03-19 Silverback Therapeutics, Inc. Benzazepine compounds, conjugates, and uses thereof
EP3849971A2 (en) 2018-09-12 2021-07-21 Silverback Therapeutics, Inc. Substituted benzazepine compounds, conjugates, and uses thereof
WO2020059895A1 (ko) 2018-09-17 2020-03-26 주식회사 큐라티스 스팅 작용자를 포함하는 면역항원보강제 및 백신 조성물
TW202028212A (zh) 2018-10-11 2020-08-01 日商小野藥品工業股份有限公司 Ｓｔｉｎｇ促效化合物
CN112867727A (zh) 2018-10-12 2021-05-28 上海济煜医药科技有限公司 环二核苷酸类化合物及其应用
US20220031860A1 (en) 2018-12-12 2022-02-03 Bristol-Myers Squibb Company Antibodies modified for transglutaminase conjugation, conjugates thereof, and methods and uses
US10781239B2 (en) 2018-12-28 2020-09-22 Vividion Therapeutics, Inc. In vivo engineered cereblon protein
WO2020156189A1 (zh) 2019-01-30 2020-08-06 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 喜树碱衍生物及其水溶性前药、包含其的药物组合物及其制备方法和用途
MA55805A (fr) 2019-05-03 2022-03-09 Flagship Pioneering Innovations V Inc Métodes de modulation de l'activité immunitaire
WO2020245229A1 (en) 2019-06-03 2020-12-10 Synaffix B.V. Acetal-based cleavable linkers
CN116120451A (zh) * 2021-06-17 2023-05-16 南京蓝盾生物科技有限公司 抗cd70内化的抗体、抗体偶联物及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP4326768A1 (en) 2024-02-28
WO2022226317A1 (en) 2022-10-27
CA3216459A1 (en) 2022-10-27
TW202308699A (zh) 2023-03-01
AU2022262644A9 (en) 2023-11-16
JP2024516631A (ja) 2024-04-16
AU2022262644A1 (en) 2023-11-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11419945B2 (en) Antigen binding proteins
JP7018910B2 (ja) Ｂｃｍａ（ｃｄ２６９／ｔｎｆｒｓｆ１７）結合タンパク質
CA3197543A1 (en) Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
CN117203238A (zh) Cd70结合剂、其偶联物及其使用方法
US20240024502A1 (en) Anti-msln binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
AU2022253902A9 (en) Folr1 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
JP2024518709A (ja) Ｆｏｌｒ１結合剤、そのコンジュゲートおよびこれを使用する方法
EP4228704A1 (en) Anti-cspg4 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same
WO2023092099A1 (en) Gpc3 binding agents, conjugates thereof and methods of using the same

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination