CN117180489A - 一种微纤维胶原止血材料及其制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种微纤维胶原止血材料的制备方法，通过在自组装过程中引入异向剪切力和超声空化作用，利用机械扰动破坏胶原分子间的锁水凝胶支架，并且瞬时加强纤维单元间作用力，析出微纤维胶原；本发明还提供一种微纤维胶原止血材料的制备方法，协同调控胶原自组装制备工艺，可制备纤维尺寸可控的微纤维胶原止血材料。本发明还提供一种微纤维胶原止血材料及其应用，具有人体组织一致的具有D周期具有更大的比表面积，能够高效快速黏附血小板，触发凝血机制，实现快速止血效果。
Description
技术领域
本发明涉及物医用材料技术领域，尤其涉及一种微纤维胶原止血材料及其制备方法和应用。
背景技术
创伤、外科手术等因素导致的大面积出血很难仅靠人体自身的凝血机制实现止血，而为了应对各类复杂场景中的出血情况，理想的止血材料应具备快速止血、使用便捷、安全性高、可吸收且促进伤口愈合等特点。目前，常用的止血材料主要有分子筛止血材料、壳聚糖、纤维素、胶原等。其中壳聚糖的止血在于带有正电荷的壳聚糖离子能够吸附红细胞与血小板，形成血栓达到止血效果。然而，壳聚糖本身止血作用有限，对严重出血创伤的止血效果一般；纤维素是目前应用广泛的止血材料，但其在使用过程中会导致局部环境呈酸性。这种高酸性环境会引起神经元的变性。同时，纤维素属于多糖类物质，在降解过程中可能会促进细菌生长，导致伤口感染的发生。近年来，研究发现胶原能够促进血小板凝结，而且对成纤维细胞具有诱导作用，能够促进伤口的愈合，可作为止血材料用于创伤快速止血。
目前，较多的胶原类止血材料主要为冻干海绵。中国专利201811641759.8将胶原溶于离子液体中，通过湿法纺丝及溶剂脱水的方式获得了干燥的胶原海绵。胶原海绵的本质为单分子胶原聚集体，其微观结构与人体组织的胶原纤维形貌不一致，存在止血效果差、材质板硬、伤口贴附性能差等缺陷。中国专利201410229105.4公开了一种水产胶原的自组装成纤维方法，制备获得了具有D周期横纹的水凝胶。然而此类凝胶材料含水量高、机械强度差，无法应用于止血领域。中国专利201710377072.1公开了一种微纤维胶原止血材料的制备方法。该专利直接将动物皮肤组织经脱毛、切碎、干燥、蓬松等方式处理，获得了皮纤维止血材料。中国专利201811036592.7通过离子液体对皮块进行分散处理，利用离子液体的强极性冻干获得了纤维胶原材料。上述两项专利方法的本质是将动物皮组织进行纯化、干燥、粉碎制备止血材料。然而，由于皮肤组织纤维编织紧密，皮内大量的脂肪、杂蛋白、色素等物质无法完全去除。最终导致获得的止血材料纯度低，存在安全隐患。同时，未经提取的皮纤维间存在大量的端肽，可能引发严重的不良反应。另外，皮肤组织的纤维尺寸、纤维强度、纤维堆积密度等均受动物皮来源种属、动物年龄、原料皮部位差、动物生长环境等各种因素的印象，使制备的胶原止血材料纤维尺寸、相态不可控，止血性能存在巨大差异。
发明内容
为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种微纤维胶原止血材料的制备方法，其能解决胶原自组装过快，形成有强度凝胶的问题，且微纤维胶原尺寸不可控的问题，其能解决目前胶原蛋白质止血材料制备过程存在安全隐患且影响胶原结构和生物活性的问题。
本发明的第二个目的在于提供一种微纤维胶原止血材料，其能解决目前胶原类止血材料纤维尺寸单一和纯度低、止血性能不佳、与人体相容性差的问题。
本发明的第三个目的在于提供一种微纤维胶原止血材料的应用，其能解决止血过程中触发凝血机制慢，粘附血小板效率低止血效果不好的问题。
本发明的第一个目的采用以下技术方案实现：
一种微纤维胶原止血材料的制备方法，包括原料处理步骤、胶原提取步骤以及胶原自组装步骤；所述胶原自组装步骤中，对胶原自组装体系同时进行异向搅拌和超声处理，将胶原自组装为微纤维胶原析出体。
进一步地，包括以下步骤：
原料处理步骤：对动物组织进行预处理，将预处理后的动物组织进行灭菌和清洗，制备得到处理后的动物组织原料；
胶原提取步骤：将处理后的动物组织原料进行搅拌溶胀处理，获得溶胀后的动物组织，向溶胀后的动物组织中加入胃蛋白酶进行酶处理，过滤后获得含胶原的上清液；
胶原自组装步骤：向含胶原的上清液中加入质量浓度为1.5-2.5％的NaCl进行胶原自组装，对胶原自组装体系同时进行异向搅拌处理和超声处理，获得微纤维胶原析出体，完成微纤维胶原止血材料的制备。
进一步地，所述原料处理步骤中，对动物组织进行脱脂、脱毛以及去除杂蛋白，得到预处理后的动物组织；所述动物组织来源为牛、猪、羊的皮肤或者跟腱组织。
进一步地，所述原料处理步骤中，通过将预处理后的动物组织浸泡于质量浓度为3-5％，pH为6.0-8.0的双氧水内进行灭菌；所述预处理后的动物组织和双氧水的料液比为1：(20-60)，浸泡时间为4-6h。
进一步地，所述胶原提取步骤中，处理后的动物组织原料于浓度为0.1-0.4M的醋酸溶液中进行搅拌溶胀，搅拌溶胀时间为3-4天，搅拌溶胀温度为2-8℃；向溶胀后的动物组织中加入组织湿重1-3％的胃蛋白酶进行酶处理，所述酶处理时间为4-8h，酶处理温度为8-15℃。
进一步地，所述胶原自组装步骤中，胶原自组装体系的pH为6.0-7.0，胶原自组装温度为20-30℃，胶原自组装时间为1-4h。
进一步地，所述胶原自组装步骤中，异向搅拌处理为在胶原自组装过程中进行剪切搅拌，剪切搅拌速度为50-100rpm，每25-35min改变剪切搅拌的方向。
进一步地，所述胶原自组装步骤中，超声处理为每超声15-25min后停止15-25min；所述超声功率为5-15w。
本发明的第二个目的采用以下技术方案实现：
一种微纤维胶原止血材料，由一种微纤维胶原止血材料的制备方法制备获得；所述微纤维胶原止血材料的微纤维胶原长度在2-10mm；所述微纤维胶原具有D周期。
本发明的第三个目的采用以下技术方案实现：
一种微纤维胶原止血材料的应用，所述微纤维胶原止血材料应用于创伤止血或者手术止血。
相比现有技术，本发明的有益效果在于：
1.本发明的一种微纤维胶原的自组装方法，通过原料中的醋酸分子增加空间位阻，调控其他自组装条件，放缓自组装的速度，不会形成具有强度的凝胶；同时利用异向剪切力和超声空化，分别利用机械扰动破坏胶原分子在组装过程中形成锁水凝胶支架；超声的空化，纤维单元间形成空泡并迅速闭合破灭，瞬时加强纤维单元间作用力，形成微纤维胶原析出体。
2.本发明的一种微纤维胶原止血材料的制备方法，协同调控胶原自组装制备工艺，可制备纤维尺寸可控的微纤维胶原止血材料。拟实现短微纤维胶原(2-5mm)快速吸附止血，形成血凝块；长微纤维胶原(5-10mm)缠结血凝块，加强止血效果；提取阶段将酶添加滞后，减轻酶对于胶原结构的影响，强化胶原自组装能力。
3.本发明的一种微纤维胶原止血材料，保持有胶原特有的三螺旋结构，未经侧链修饰，保证了材料的生物活性，具有促进伤口愈合的作用。材料使用便捷，安全，控制内毒素，无菌，具有快速止血性能。
附图说明
图1为本发明实施例1具有D周期的自组装微纤维的AFM图。
图2为本发明实施例2制备的短纤维显微图。
图3为本发明实施例4制备的长纤维显微图。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
当皮肤破损发生流血情况时，人体会触发自身的生理止血机制。破损的血管壁组织暴露可激活血小板和血浆中的凝血系统，激活的血小板聚集成团，并黏附于伤口处形成松软的血栓以填塞伤口。然而，由于创伤、外科手术等因素导致的大面积出血很难仅靠人体自身的凝血机制实现止血。常规的止血技术主要有物理封堵、缝合、压迫等方式。但由于伤口创面的复杂性，如大面积、腹腔深处、脏器等出血，上述常规止血技术不能实现快速有效的止血，往往会造成患者失血休克、甚至危及生命。因此，高性能的止血材料成为快速止血，降低死亡率的关键。为了应对各类复杂场景中的出血情况，理想的止血材料应具备快速止血、使用便捷、安全性高、可吸收且促进伤口愈合等特点。
近年来，研究发现胶原能够促进血小板凝结，而且对成纤维细胞具有诱导作用，能够促进伤口的愈合，可作为止血材料用于创伤快速止血。胶原广泛分布于各类动物体内，是动物体最主要的结构蛋白，约占体内总蛋白的30％。
胶原分子具有自组装功能，是一种特殊的生物学活性，其能够在体内和体外通过疏水键、氢键和静电相互作用等自组装形成具有与动物体内的组织纤维结构一致，具有更高的生物学活性和生物相容性的D周期的胶原微纤维。
一种微纤维胶原止血材料的制备方法，包括原料处理步骤、胶原提取步骤以及胶原自组装步骤；所述胶原自组装步骤中，对胶原自组装体系同时进行异向搅拌和超声处理，将胶原自组装为微纤维胶原析出体。
进一步地，包括以下步骤：
原料处理步骤：对动物组织进行预处理，将预处理后的动物组织进行灭菌和清洗，制备得到处理后的动物组织原料；
胶原提取步骤：将处理后的动物组织原料进行搅拌溶胀处理，获得溶胀后的动物组织，向溶胀后的动物组织中加入胃蛋白酶进行酶处理，过滤后获得含胶原的上清液；
胶原自组装步骤：向含胶原的上清液中加入质量浓度为1.5-2.5％的NaCl进行胶原自组装，对胶原自组装体系同时进行异向搅拌处理和超声处理，获得微纤维胶原析出体，完成微纤维胶原止血材料的制备。
进一步地，所述原料处理步骤中，对动物组织进行脱脂、脱毛以及去除杂蛋白，得到预处理后的动物组织；所述动物组织来源为牛、猪、羊的皮肤或者跟腱组织。
进一步地，所述原料处理步骤中，通过将预处理后的动物组织浸泡于质量浓度为3-5％，pH为6.0-8.0的双氧水内进行灭菌；所述预处理后的动物组织和双氧水的料液比为1：(20-60)，浸泡时间为4-6h。
进一步地，所述胶原提取步骤中，处理后的动物组织原料于浓度为0.1-0.4M的醋酸溶液中进行搅拌溶胀，搅拌溶胀时间为3-4天，搅拌溶胀温度为2-8℃；向溶胀后的动物组织中加入组织湿重1-3％的胃蛋白酶进行酶处理，所述酶处理时间为4-8h，酶处理温度为8-15℃。
进一步地，所述胶原自组装步骤通过胶原提取步骤中获得的胶原上清液直接进行自组装，所述胶原上清液中存在醋酸分子。在体系内存在醋酸分子的情况下，增加空间位阻，同步调控其他自组装条件，放缓自组装的速度。
进一步地，所述胶原自组装步骤中，胶原自组装体系的pH为6.0-7.0，胶原自组装温度为20-30℃，胶原自组装时间为1-4h。
进一步地，所述组装时间为1-2h或2-4h。
进一步地，所述组装时间为1-2h时，获得2-5mm的短纤维。
进一步地，所述组装时间为2-4h时，获得5-10mm的长纤维。
进一步地，所述胶原自组装步骤中，异向搅拌处理为在胶原自组装过程中进行剪切搅拌，剪切搅拌速度为50-100rpm，每25-35min改变剪切搅拌的方向。
进一步地，所述剪切搅拌速度可以在50-60rpm之间，可以在60-70rpm之间，可以在70-80rpm之间，可以在80-90rpm之间，可以在90-100rpm之间。优选的，每30min改变剪切搅拌的方向。
进一步地，所述胶原自组装步骤中，超声处理为每超声15-25min后停止15-25min；所述超声功率为5-15w。所述超声功率可以在5-7W之间，可以在7-9W之间，可以在9-11W之间，可以在11-13W之间，可以在13-15W之间。
进一步地，一种微纤维胶原止血材料的制备方法中的所有试剂均为药用级或250℃烘箱干烤去除内毒素。所有容器均以0.2-0.4M HCl或NaOH溶液浸泡去内毒素并湿热灭菌。
一种微纤维胶原止血材料，由一种微纤维胶原止血材料的制备方法制备获得；所述微纤维胶原止血材料的微纤维胶原长度在2-10mm；所述微纤维胶原具有D周期。
进一步地，所述D周期为五个三螺旋胶原分子通过四分之一交错排列并高度取向为具有D-周期带状空间的微纤维胶原，每个D周期为66±1.3nm。
进一步地，所述微纤维胶原分为长纤维胶原或短纤维胶原；所述长纤维胶原长度为5-10mm；所述短纤维胶原长度为2-5mm。
下面，结合具体实施方式，对本发明做进一步描述。
实施例1
对牛皮组织进行脱脂、脱毛、去杂蛋白预处理后，将牛皮组织置于3％的双氧水内浸泡4h，牛皮组织和双氧水的料液比为1：20，pH7.0进行灭菌。浸泡灭菌后，将牛皮组织用注射水清洗3次。
将清洗后的牛皮组织转移到浓度为0.1M的醋酸水溶液中进行溶胀，牛皮组织和醋酸水溶液的料液比为1：40。牛皮组织溶胀处理时间为3天，溶胀温度控制在2-8℃。溶胀后，向体系中加入组织湿重1％的胃蛋白酶，酶处理时间为4h，酶处理温度控制在8-15℃。过滤，获得胶原上清液。
对胶原上清液进行自组装，向体系中加入质量百分比为1.5％的NaCl，自组装体系的pH为6.0，自组装温度为25℃。在自组装过程中，进行异向剪切搅拌，剪切搅拌的速度为50rpm，每25min改变一次搅拌方向。同时加入超声，超声的功率为5W，每作用20min停止超声20min。自组装的总时长在1h。实施例1制备D周期的自组装微纤维的AFM图如图1所示。
实施例2
对牛皮组织进行脱脂、脱毛、去杂蛋白预处理后，将牛皮组织置于5％的双氧水内浸泡4h，牛皮组织和双氧水的料液比为1：30，pH7.0进行灭菌。浸泡灭菌后，将牛皮组织用注射水清洗3次。
将清洗后的牛皮组织转移到浓度为0.1M的醋酸水溶液中进行溶胀，牛皮组织和醋酸水溶液的料液比为1：40。牛皮组织溶胀处理时间为3天，溶胀温度控制在2-8℃。溶胀后，向体系中加入组织湿重2％的胃蛋白酶，酶处理时间为4h，酶处理温度控制在8-15℃。过滤，获得胶原上清液。
对胶原上清液进行自组装，向体系中加入质量百分比为1.5％的NaCl，自组装体系的pH为6.0，自组装温度为25℃。在自组装过程中，进行异向剪切搅拌，剪切搅拌的速度为75rpm，每25min改变一次搅拌方向。同时加入超声，超声的功率为10W，每作用20min停止超声20min。自组装的总时长在2h。实施例2制备的短纤维如图2所示。
实施例3
对牛皮组织进行脱脂、脱毛、去杂蛋白预处理后，将牛皮组织置于5％的双氧水内浸泡4h，牛皮组织和双氧水的料液比为1：30，pH7.0进行灭菌。浸泡灭菌后，将牛皮组织用注射水清洗3次。
将清洗后的牛皮组织转移到浓度为0.1M的醋酸水溶液中进行溶胀，牛皮组织和醋酸水溶液的料液比为1：40。牛皮组织溶胀处理时间为3天，溶胀温度控制在2-8℃。溶胀后，向体系中加入组织湿重3％的胃蛋白酶，酶处理时间为4h，酶处理温度控制在8-15℃。过滤，获得胶原上清液。
对胶原上清液进行自组装，向体系中加入质量百分比为1.5％的NaCl，自组装体系的pH为6.0，自组装温度为25℃。在自组装过程中，进行异向剪切搅拌，剪切搅拌的速度为100rpm，每25min改变一次搅拌方向。同时加入超声，超声的功率为15W，每作用20min停止超声20min。自组装的总时长在2h。
实施例4
对牛皮组织进行脱脂、脱毛、去杂蛋白预处理后，将牛皮组织置于5％的双氧水内浸泡4h，牛皮组织和双氧水的料液比为1：40，pH7.0进行灭菌。浸泡灭菌后，将牛皮组织用注射水清洗3次。
将清洗后的牛皮组织转移到浓度为0.25M的醋酸水溶液中进行溶胀，牛皮组织和醋酸水溶液的料液比为1：40。牛皮组织溶胀处理时间为3天，溶胀温度控制在2-8℃。溶胀后，向体系中加入组织湿重2％的胃蛋白酶，酶处理时间为6h，酶处理温度控制在8-15℃。过滤，获得胶原上清液。
对胶原上清液进行自组装，向体系中加入质量百分比为2.0％的NaCl，自组装体系的pH为6.0，自组装温度为25℃。在自组装过程中，进行异向剪切搅拌，剪切搅拌的速度为75rpm，每25min改变一次搅拌方向。同时加入超声，超声的功率为10W，每作用20min停止超声20min。自组装的总时长在3h。实施例4制备的长纤维如图3所示。
实施例5
对牛皮组织进行脱脂、脱毛、去杂蛋白预处理后，将牛皮组织置于3％的双氧水内浸泡4h，牛皮组织和双氧水的料液比为1：40，pH7.0进行灭菌。浸泡灭菌后，将牛皮组织用注射水清洗3次。
将清洗后的牛皮组织转移到浓度为0.25M的醋酸水溶液中进行溶胀，牛皮组织和醋酸水溶液的料液比为1：40。牛皮组织溶胀处理时间为4天，溶胀温度控制在2-8℃。溶胀后，向体系中加入组织湿重3％的胃蛋白酶，酶处理时间为8h，酶处理温度控制在8-15℃。过滤，获得胶原上清液。
对胶原上清液进行自组装，向体系中加入质量百分比为2.0％的NaCl，自组装体系的pH为6.0，自组装温度为25℃。在自组装过程中，进行异向剪切搅拌，剪切搅拌的速度为75rpm，每25min改变一次搅拌方向。同时加入超声，超声的功率为10W，每作用20min停止超声20min。自组装的总时长在4h。
对比例1
对牛皮组织进行脱脂、脱毛、去杂蛋白预处理后，将牛皮组织置于5％的双氧水内浸泡4h，牛皮组织和双氧水的料液比为1：40，pH7.0进行灭菌。浸泡灭菌后，将牛皮组织用注射水清洗3次。
先对牛皮组织用胃蛋白酶进行处理，处理条件同实施例4。再对酶处理后的组织进行溶胀处理，所述溶胀处理条件同实施例4。过滤，获得胶原上清液。对胶原上清液进行自组装，向体系中加入质量百分比为2.0％的NaCl，自组装体系的pH为6.0，自组装温度为25℃，在自组装过程中，进行异向剪切搅拌，剪切搅拌的速度为75rpm，每25min改变一次搅拌方向，自组装总时长为3h。
对比例2
对牛皮组织进行脱脂、脱毛、去杂蛋白预处理后，将牛皮组织置于5％的双氧水内浸泡4h，牛皮组织和双氧水的料液比为1：40，pH7.0进行灭菌。浸泡灭菌后，将牛皮组织用注射水清洗3次。
先对牛皮组织用胃蛋白酶进行处理，处理条件同实施例4。再对酶处理后的组织进行溶胀处理，所述溶胀处理条件同实施例4。过滤，获得胶原上清液。
对胶原上清液进行自组装，向体系中加入与磷酸盐缓冲液进行混合，比例为1：1，自组装体系的pH为7.0，自组装温度为30℃，自组装总时长为3h，同时加入超声，超声的功率为10W，每作用20min停止超声20min。
对比例3
对牛皮组织进行脱脂、脱毛、去杂蛋白预处理后，将牛皮组织置于5％的双氧水内浸泡4h，牛皮组织和双氧水的料液比为1：40，pH7.0进行灭菌。浸泡灭菌后，将牛皮组织用注射水清洗3次。
先对牛皮组织用胃蛋白酶进行处理，处理条件同实施例4。再对酶处理后的组织进行溶胀处理，所述溶胀处理条件同实施例4。过滤，获得胶原上清液。
对胶原上清液进行自组装，向体系中加入质量百分比为2.0％的NaCl，自组装体系的pH为6.0，自组装温度为25℃，自组装总时长为3h。
性能测试
1.微胶原纤维止血材料物理性质
表1实施例1-5和对比例1-3的产品性质
| 微纤维物理性质 | 微纤维长度(mm) | 是否具有三维结构 | 比表面积(m2/g) |
| 实施例1 | 2.53 | 是 | 11.21 |
| 实施例2 | 3.15 | 是 | 14.28 |
| 实施例3 | 4.34 | 是 | 13.36 |
| 实施例4 | 5.18 | 是 | 13.62 |
| 实施例5 | 7.36 | 是 | 15.14 |
| 对比例1 | 6.37 | 否 | 8.63 |
| 对比例2 | 形成凝胶 | 是 | / |
| 对比例3 | 形成凝胶 | 否 | / |
从表1中可以看出，实施例1-5的微纤维胶原止血材料能够保持胶原的三维结构，并且根据胶原自组装的时间差异，形成的微纤维长度不同，同时相比对比例1也具有更大的比表面积。在对比例1中，胶原提取先加入了酶随后再用醋酸溶液溶胀，因此形成的微纤维中无法保持胶原特有的螺旋结构，但是由于在自组装过程中，引入了异向剪切力进行扰动，因此不会形成有强度的凝胶；而在对比例2中，自组装过程中仅包括了超声空化作用，不具有异向剪切力的扰动，因此仍然会形成有一定强度的凝胶，说明超声空化和异响剪切力有协同形成微纤维胶原的作用。而在对比例3中，胶原自组装中没有异向剪切和超声空化作用，因此自组装形成有强度的凝胶，不会生成微纤维。
2.止血测试
对实施例1-5及对比例1-2的微纤维胶原止血材料进行止血测试，测试方法如下：
取健康成年的新西兰白兔，体重约为2.0kg，性别不限。实验将分别测试材料对兔耳的止血效果，每组5只，剃除每只新西兰兔耳部毛发，用碘酒消毒后切断左耳耳缘静脉，右耳耳缘动脉和左后肢股动脉的三分之二。以实施例1-5和对比例1-2作为实验组，市售医用止血敷料作为对照组，当创面血涌现后，先用普通纱布吸去血液，然后迅速将实施例1-5或对比例1-2的微纤维胶原止血材料敷压于创面之上，同时开启秒表计时，观察止血材料表面及周围的渗血情况，并用已经精确称量的普通纱布每隔20s蘸取渗血，直至普通纱布无法蘸取到渗血时停止秒表，记录时间，取平均值为止血时间，结果如下表：
表2微纤维胶原止血性能测试
从上表可以看出，本发明实施例1-5的微纤维胶原止血材料的止血能力强于对比例1-2，同时相比市面上售卖的医用敷料，止血性能提高47％。在实施例1-5中，实施例4和实施例5的对动物组织的溶胀和酶处理更充分，提取更多的胶原，同时胶原自组装中的异向剪切频率和超声空化强度有所提高，延长了胶原自组装的时间，不会形成具有强度的凝胶，组织相容性更好，形成的长纤维能够更好的在短时间内达到止血的效果。
对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种微纤维胶原止血材料的制备方法，其特征在于，包括原料处理步骤、胶原提取步骤以及胶原自组装步骤；所述胶原自组装步骤中，对胶原自组装体系同时进行异向搅拌处理和超声处理，将胶原自组装为微纤维胶原析出体。
2.根据权利要求1所述一种微纤维胶原止血材料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
原料处理步骤：对动物组织进行预处理，将预处理后的动物组织进行灭菌和清洗，制备得到处理后的动物组织原料；
胶原提取步骤：将处理后的动物组织原料进行搅拌溶胀处理，获得溶胀后的动物组织，向溶胀后的动物组织中加入胃蛋白酶进行酶处理，过滤后获得含胶原的上清液；
胶原自组装步骤：向含胶原的上清液中加入质量浓度为1.5-2.5％的NaCl进行胶原自组装，对胶原自组装体系同时进行异向搅拌处理和超声处理，获得微纤维胶原析出体，完成微纤维胶原止血材料的制备。
3.根据权利要求2所述一种微纤维胶原止血材料的制备方法，其特征在于，所述原料处理步骤中，对动物组织进行脱脂、脱毛以及去除杂蛋白，得到预处理后的动物组织；所述动物组织来源为牛、猪、羊的皮肤或者跟腱组织。
4.根据权利要求2所述一种微纤维胶原止血材料的制备方法，其特征在于，所述原料处理步骤中，通过将预处理后的动物组织浸泡于质量浓度为3-5％，pH为6.0-8.0的双氧水内进行灭菌；所述预处理后的动物组织和双氧水的料液比为1：(20-60)，浸泡时间为4-6h。
5.根据权利要求2所述一种微纤维胶原止血材料的制备方法，其特征在于，所述胶原提取步骤中，处理后的动物组织原料于浓度为0.1-0.4M的醋酸溶液中进行搅拌溶胀，搅拌溶胀时间为3-4天，搅拌溶胀温度为2-8℃；向溶胀后的动物组织中加入组织湿重1-3％的胃蛋白酶进行酶处理，所述酶处理时间为4-8h，酶处理温度为8-15℃。
6.根据权利要求2所述一种微纤维胶原止血材料的制备方法，其特征在于，所述胶原自组装步骤中，胶原自组装体系的pH为6.0-7.0，胶原自组装温度为20-30℃，胶原自组装时间为1-4h。
7.根据权利要求1所述一种微纤维胶原止血材料的制备方法，其特征在于，所述胶原自组装步骤中，异向搅拌处理为在胶原自组装过程中进行剪切搅拌，剪切搅拌速度为50-100rpm，每25-35min改变剪切搅拌的方向。
8.根据权利要求1所述一种微纤维胶原止血材料的制备方法，其特征在于，所述胶原自组装步骤中，超声处理为每超声15-25min后停止15-25min；所述超声功率为5-15w。
9.一种微纤维胶原止血材料，其特征在于，由权利要求1-8任一项所述的微纤维胶原止血材料的制备方法制备获得；所述微纤维胶原止血材料的微纤维胶原长度在2-10mm；所述微纤维胶原具有D周期。
10.权利要求9所述的一种微纤维胶原止血材料的应用，其特征在于，所述微纤维胶原止血材料应用于创伤止血或者手术止血。
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