CN117180384A - 一种组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种组合物及其制备方法和应用，所述组合物包含姜黄、灵芝和灵芝孢子的提取物，其可在提高免疫力、提高免疫细胞活性以及防治肝损伤等方面发挥作用。

Description

一种组合物及其应用

技术领域

本发明属于生物制品领域，具体涉及包含姜黄、灵芝和灵芝孢子成分的组合物及其制备方法和应用。

背景技术

姜黄为较常用中药，在我国有悠久的应用历史。性辛温、归脾、肝经，具有破血行气，通经止痛的作用。灵芝是扶正固本，滋补强壮的珍品。其性平、味甘，归心、肺、肝、肾经。灵芝提取物是灵芝的精华，富含灵芝多糖、灵芝三萜、有机硒等主要活性成分。

亚健康是处于健康和疾病之间的一种状态，长期的亚健康症状会导致心理失衡、神经系统功能紊乱、内分泌失调，机体抵抗力下降，恶性循环反复发作就会产生疾病。

肝脏是人体最大的消化腺体，有着非常重要的生理功能。肝脏主导糖、蛋白、脂肪、维生素的代谢。在机体代谢过程中，门静脉收集腹腔中的血液，将有害物质通过化学、分泌、蓄积、吞噬等作用，在肝内解毒和清除。肝脏每天合成800-1000ml胆汁，辅助脂肪的消化与吸收。肝脏是最大的网状内皮细胞吞噬系统，具有强大的防御和免疫功能。此外，肝脏还参与凝血因子的合成和水、电解质的平衡等；参与血液中许多凝血因子的合成，参与造血过程、储存和释放造血因子。肝脏还是体内许多酶类的合成器官，保证着人体正常的新陈代谢。

肝损伤，尤其是广义的肝损伤，一般包括内科系统的各种肝脏的炎症性疾病，比如病毒性肝炎、药物性肝炎、酒精性肝炎，如果病情过重，有可能造成肝功能衰竭，并有可能引起并发症，比如出血、肝性脑病、肝肾综合征、腹水等等。

因此，本领域中需要新的生物制品、药品或者保健品以在亚健康、保肝护肝等方面发挥作用。

发明概述

在一个方面，本公开提供了一种组合物，其包含以下重量份的组分：30-70份的姜黄提取物、70-110份的灵芝提取物和80-120份的灵芝孢子粉提取物。

在一些实施方案中，所述组合物包含45-55重量份的姜黄提取物、81-99重量份的灵芝提取物和90-110重量份的灵芝孢子粉提取物。

在一些实施方案中，所述组合物包含50重量份的姜黄提取物、90重量份的灵芝提取物和100重量份的灵芝孢子粉提取物。

在一些实施方案中，所述姜黄提取物包含按姜黄提取物重量计至少约50％的姜黄素，所述灵芝提取物包含按灵芝提取物重量计至少约5％的多糖和至少约1％的灵芝三萜，所述灵芝孢子粉提取物包含按灵芝孢子粉提取物重量计至少约3％的多糖和至少约1.6％的灵芝三萜。

在一些实施方案中，所述组合物包含按姜黄提取物、灵芝提取物和灵芝孢子粉提取物的总重量计至少约7％(例如至少约8％、9％、10％、11％或甚至更高)的姜黄素，至少约2％(例如至少约3％、4％、5％或甚至更高)的多糖和至少约0.5％(例如至少约1％、2％、3％或甚至更高)的灵芝三萜。

在一些实施方案中，所述组合物还包含一种或多种药学可接受的辅料。所述药学可接受的辅料可以是本领域中常规选择和使用的那些，例如选自但不限于，微晶纤维素、羧甲淀粉钠、硬脂酸镁、磷酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖，甘露糖、糊精、蔗糖、甘露醇、海藻糖和山梨糖醇。

在一些实施方案中，所述组合物中包含的药学可接受的辅料为微晶纤维素、羧甲淀粉钠和硬脂酸镁。

在一些实施方案中，所述组合物配制为例如片剂、胶囊剂、汤剂、粒剂、丸剂、溶液剂、酏剂或糖浆剂的形式。例如，所述组合物可配制成片剂或丸剂的形式，便于携带和施用。所述片剂或丸剂的形式通常在所述组合物上覆有包衣。

在一个方面，本公开提供了一种制备本文的组合物的方法，其包括以下步骤：

将30-70份的姜黄提取物、70-110份的灵芝提取物和80-120份的灵芝孢子粉提取物均匀混合。更具体地，所述方法包括将45-55重量份的姜黄提取物、81-99重量份的灵芝提取物和90-110重量份的灵芝孢子粉提取物均匀混合。

在一些实施方案中，所述方法还包括将所述提取物与一种或多种药学可接受的辅料一起混合均匀。

在一些优选的实施方案中，所述方法还包括在混合前将提取物和辅料过筛。

在一些实施方案中，所述方法还包括以下一个或多个步骤：制粒、压片和包衣。

在一个方面，本公开提供了增强个体免疫力的方法，并且提供了所述组合物在制备用于增强个体的免疫力的制备物中的用途。所述制备物可以是药物或保健品制备物。

在一个方面，本公开提供了防护和治疗肝损伤的方法，其包括向个体施用有效量的组合物。本公开还提供了所述组合物在制备用于防护和治疗肝损伤的制备物中的用途。所述制备物可以是药物或保健品制备物。

在一个方面，本公开提供了所述组合物在制备用于解酒护肝的药物或保健品中的用途。

在一个方面，本公开提供了所述组合物用于治疗或减轻个体中的局部变态反应性炎症或抗过敏的制备物中的用途。在一些实施方案中，所述炎症是湿疹。所述制备物可以是药物或保健品制备物。

在一个方面，本公开提供了所述组合物在改善睡眠或提高睡眠质量中的用途。所述改善睡眠或提高睡眠质量可以是非治疗性的。

具体实施方式

除非另外定义，否则本申请中使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。此外，除非上下文另有要求，单数形式的术语应包括复数形式，复数形式的术语应包括单数形式。更具体地，如在本说明书和所附权利要求中所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数指示物。此外，术语“包含”以及其他形式(诸如“包括”和“含有”)的使用不是限制性的。此外，说明书和所附权利要求中提供的范围包括端点和端点之间的所有值，提供的数值为大约值或近似值，可在所述数值的±5％范围内变动。

本发明提供了一种从中药材制备的新型组合物及相关制剂，并验证了其在体内动物模型中的功能。如本文所用，术语“制剂”是指为适应治疗、诊断或预防的需要而制成的药物应用形式的具体品种。本文所述的制剂可通过将具有所需纯度的活性成分与一种或多种任选的药学可接受的辅料混合来制备。

组合物

本发明提供了包含来自姜黄、灵芝和灵芝孢子的成分的组合物。具体地，本发明的组合物包含姜黄提取物、灵芝提取物和灵芝孢子粉提取物作为活性成分。在一些实施方案中，本发明的组合物的活性成分由姜黄提取物、灵芝提取物和灵芝孢子粉提取物组成。

本发明人发现，采用灵芝提取物、灵芝孢子粉提取物和姜黄提取物组合，能产生协同的技术效果。从中医原理上说，灵芝提取物和灵芝孢子粉(包括灵芝孢子粉提取物)能够扶正固本，提高机体的防御功能，姜黄提取物则能祛邪辟恶，抗氧化抗炎，控制外来的氧化应激，三者的组合能够内外兼顾、相互协调。在一些特定的实施方案中，本发明的组合物包含约40-60重量份的姜黄提取物、约72-108重量份的灵芝提取物和约80-120重量份的灵芝孢子粉提取物。更具体地，所述组合物包含约45-55重量份的姜黄提取物、约81-99重量份的灵芝提取物和约90-110重量份的灵芝孢子粉提取物。更具体地，所述组合物包含约50重量份的姜黄提取物、约90重量份的灵芝提取物和约100重量份的灵芝孢子粉提取物。

姜黄是芭蕉目，姜科，姜黄属多年生草本植物。作为较为常见的中药，其主要成分是姜黄素、脱甲氧基姜黄素、双脱甲氧基姜黄素。姜黄提取物是姜黄的块根或根茎经提取精制得到的橘黄色结晶或粉末，其活性成分主要由姜黄素、去甲氧基姜黄素、二去甲氧基姜黄素等组成。本发明中使用的姜黄提取物可以是商购的或通过本领域已知的方法制备的。例如，可以将净选后的姜黄粉碎，加95％乙醇渗漉提取，浓缩，然后用95％乙醇多次重结晶、干燥、粉碎等来制备姜黄提取物。在一些实施方案中，姜黄提取物通过净选姜黄原料、粉碎、95％乙醇渗漉提取、浓缩、95％乙醇多次重结晶、干燥、粉碎等主要工艺加工制成。所得姜黄提取物中姜黄素含量以重量计可达到≥50％。

灵芝提取物是灵芝的精华，富含灵芝多糖、灵芝三萜、有机硒等主要活性成分。本发明中使用的灵芝提取物可以是商购的或通过本领域已知的方法制备的。例如，可以将净选后的灵芝(通常指其子实体)粉碎、提取(乙醇回流提取和水煎煮)、浓缩、干燥、粉碎、过筛等来制备灵芝提取物。在一些实施方案中，灵芝提取物通过净选灵芝原料、粉碎、提取(先8倍量75％乙醇回流提取2次，1.5h/次，再分别用8、6倍量水煎煮提取2次，2h/次)、浓缩，干燥(70～80℃，0.08MPa)、粉碎、过筛等主要工艺加工制成。所得灵芝提取物中以重量计，多糖含量可达到≥5.0％，灵芝三萜含量可达到≥1.0％。

灵芝孢子是灵芝发育后期弹射出来的雌雄配子，每个灵芝孢子只有4－6个微米，是活体生物体，双壁结构，外被坚硬的几丁质纤维素所包围，人体很难充分吸收。破壁后更适合人体肠胃直接吸收。灵芝孢子含有丰富的灵芝多糖、三萜、甾醇、氨基酸、核苷等成分。灵芝孢子的化学成分可分为以下几类：蛋白质和氨基酸类、糖肽类、维生素类、胡萝卜素、甾醇类、三萜类、生物碱类、脂肪酸类、内酯和无机离子等。灵芝孢子粉提取物通常为破壁灵芝孢子粉提取物，由于破开了灵芝孢子的外壁，使得外壁中紧裹的有效成分能最大程度被人体利用。所谓“提取物”是以植物为原料，按照对提取的最终产品的用途的需要，经过物理化学提取分离过程，定向获取和浓集植物中的某一种或多种有效成分，而不改变其有效成分结构而形成的产品。与灵芝孢子粉相比，灵芝孢子粉提取物经过了进一步的提取，使得灵芝多糖、三萜、甾醇、氨基酸、核苷等成分均显著提高。灵芝孢子粉提取物相比于灵芝提取物具有含量更高的灵芝三萜，灵芝提取物则具有含量更高的灵芝多糖，两者可以协同作用。本发明中使用的灵芝孢子粉提取物可以是商购的或通过本领域已知的方法制备的。例如，可以将净选后的灵芝孢子破壁处理、用乙醇和水提取、过滤、浓缩、干燥等来获得灵芝孢子粉提取物。在一些实施方案中，灵芝孢子粉提取物通过提取灵芝孢子粉(先10倍量75％乙醇回流提取2次，1.5h/次，再用10倍量水煎煮提取2次，1.5h/次)、浓缩、干燥(70～80℃，0.08MPa)、粉碎、过筛等主要工艺加工制成。所得灵芝孢子粉提取物按重量计，多糖含量可达到≥3.0％，灵芝三萜含量可达到≥1.6％。

本发明的组合物可以是药物组合物(例如中药组合物)，或者保健品组合物。在一些实施方案中，所述组合物还包含药学上可接受的辅料成分。

术语“药学可接受的辅料”是指生产药品和调配处方时使用的赋形剂和/或附加剂，其是除活性成分以外，在安全性方面已进行了合理的评估，且包含在药物制剂中的物质。药学可接受的辅料除了赋形、充当载体、提高稳定性外，根据需要还可具有增溶、助溶、缓控释等功能。药学可接受的辅料的非限制性实例包括：缓冲剂，例如磷酸盐、柠檬酸盐和其他有机酸；抗氧化剂，包括抗坏血酸和甲硫氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六甲双铵；苯扎氯铵；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苄醇；对羟基苯甲酸烷基酯，例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇和间甲酚)；亲水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；单糖，二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖，甘露糖或糊精；螯合剂，例如EDTA；糖，例如蔗糖，甘露醇，海藻糖或山梨糖醇；成盐抗衡离子，例如钠；金属配合物；和/或非离子表面活性剂，例如聚乙二醇(PEG)等。

组合物中所包含的药学可接受的辅料成分可由本领域技术人员根据需要容易地选择。口服制剂可以包含标准载剂，如药物级的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。适合的药学上可接受的载体的实例如在Remington’s PharmaceuticalSciences(1990)中所述。

在一些实施方案中，所述药学可接受的辅料成分选自微晶纤维素、羧甲淀粉钠、硬脂酸镁及其组合。在一些具体的实施方案中，本发明的组合物包含的辅料成分是微晶纤维素、羧甲淀粉钠和硬脂酸镁。辅料成分的配比可根据需要由本领域技术人员常规地调整，例如可以包含约32-48重量份的微晶纤维素、约14.4-21.6重量份的羧甲淀粉钠和约1.6-2.4重量份的硬脂酸镁。更具体地，可以包含约36-44重量份的微晶纤维素、约16.2-19.8重量份的羧甲淀粉钠和约1.8-2.2重量份的硬脂酸镁。更具体地，可以包含约40重量份的微晶纤维素、约18重量份的羧甲淀粉钠和约2重量份的硬脂酸镁。组合物中所包含的提取物(由上述3种提取物组成)与辅料成分的重量比可以是约3:1、约3.5:1、约4:1、约4.5:1、约5:1、约5.5:1、约6:1、约6.5:1、约7:1等等。在一些实施方案中，组合物中所包含的提取物(即活性成分)与辅料成分的重量比为约3:1。

本发明的组合物可以配制成各种剂型用于适合的施用方式，例如口服或者外用。所述剂型包括但不限于，片剂、胶囊剂、锭剂、硬糖剂、汤剂、口服液、散剂、茶剂、酒剂、粒剂、丸剂、浸膏剂、喷雾剂、乳膏剂、软膏剂、栓剂、凝胶剂、糊剂、洗剂、软膏剂、水性混悬剂、可注射溶液剂、酏剂、糖浆剂。在某些实施方案中，所述组合物可制成汤剂、口服液、茶剂、酒剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、散剂、丸剂或浸膏剂。在一个具体的实施方案中，所述组合物配制成片剂。在另一个具体的实施方案中，所述组合物配制成丸剂。将组合物配制成各种剂型的方法是本领域众所周知的。

在一些实施方案中，将所述组合物配制成覆有包衣的制剂。制剂类型的非限制性实例包括：液体制剂，如溶液剂、注射剂、洗剂、搽剂等；固体制剂，如散剂、丸剂、粉片剂、颗粒剂或胶囊剂等；半固体制剂，如软膏剂、凝胶剂、栓剂、糊剂等和气体制剂，如气雾剂、喷雾剂等。

术语“包衣”是指在特定的设备中按特定的工艺将糖料或其它能成膜的材料涂覆在药物固体制剂的外表面，使其干燥后成为紧密粘附在表面的一层或数层不同厚薄、不同弹性的多功能保护层。包衣材料的非限制性实例包括纤维素及其衍生物，例如羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素等；丙烯酸树脂，例如甲基丙烯酸二甲氨基乙酰中性甲基丙烯酸脂共聚物和乙烯聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮、苯乙烯-乙烯吡啶共聚物等。

在一些实施方案中，将所述组合物配制成片剂或丸剂，且所述组合物覆有包衣材料，所述包衣材料选自聚乙烯醇、二氧化钛、滑石粉、聚乙二醇、磷脂、亮蓝铝色淀、柠檬黄铝色淀、日落黄铝色淀及其组合。

组合物的制备方法

在一个方面，本公开提供了制备如上所述的组合物的方法。

在一些实施方案中，所述方法包括将约40-60重量份的姜黄提取物、约72-108重量份的灵芝提取物和约80-120重量份的灵芝孢子粉提取物混合。更具体地，所述方法包括将约45-55重量份的姜黄提取物、约81-99重量份的灵芝提取物和约90-110重量份的灵芝孢子粉提取物混合。更具体地，所述方法包括将约50重量份的姜黄提取物、约90重量份的灵芝提取物和约100重量份的灵芝孢子粉提取物混合。任选地，所述方法还包括将一种或多种药学可接受的辅料成分(例如微晶纤维素、羧甲淀粉钠)与三种提取物一起混合。

优选地，所述方法还包括在混合前将各提取物和一种或多种药学可接受的辅料过筛。过筛的尺寸根据需要，例如，过筛可以是过50目筛、过60目筛、过70目筛、过80目筛、过90目筛。在一些实施方案中，称取过筛后的姜黄提取物、灵芝提取物、灵芝孢子粉提取物和药学可接受的辅料置混合机中进行混合。根据需要确定混合时间，例如混合10-60min，例如混合10min、混合20min、混合30min、混合40min、混合50min、混合60min。优选地，混合30min，至混合粉均匀一致，得到总混合粉。

进一步地，针对将组合物制备成片剂，所述方法还包括以下一个或多个步骤：制粒、压片、包衣、包装。例如，所述方法可以包括在混合后将总混合粉制备成干颗粒。在一些实施方案中，将总混合粉用70％的乙醇混合润湿制软材，过筛制粒。过筛的尺寸根据需要，例如，过15目筛、过16目筛、过17目筛、过18目筛、过19目筛、过20目筛。在适当的温度下干燥，例如在30～80℃下、在40～70℃、在50～60℃下干燥。再过筛整粒，得干颗粒，水分可控制为≤5％。

任选地，可以将一种或多种药学可接受的辅料成分(例如硬脂酸镁)与干颗粒混合制备成混合颗粒。在一些实施方案中，将干颗粒与药学可接受的辅料混合均匀，混合。混合时间可以为1-10分钟，例如混合1分钟，混合2分钟，混合3分钟，混合4分钟，混合5分钟，混合6分钟，混合7分钟，混合8分钟，混合9分钟，混合10分钟。

压片和包衣步骤均为本领域技术人员所熟知的。例如，可以将包衣材料用75％的乙醇配成8％的包衣液，将素片筛去细粉，置于包衣锅内包衣。

在一些实施方案中，所述方法包括如上描述的配料、混合、制粒、压片和包衣步骤，以制备片剂。所得片剂可以是0.1g/片-1g/片，例如0.2g/片、0.3g/片、0.4g/片、0.5g/片、0.6g/片、0.7g/片、0.8g/片、0.9g/片。

组合物的功能

本发明的组合物利用了姜黄、灵芝和灵芝孢子的不同提取物之间的协同作用，如实施例所验证的，所得组合物具备以下的一种或多种功能：能提高机体应对局部变态反应性炎症的能力；能提高淋巴细胞转化的活性；能提高单核吞噬系统功能，即提高抗病能力；能提高抗体生成细胞数，促进产生抗体，提高免疫力；能显著提升对异物吞噬和消化的功能；能提高NK细胞的活性。本申请所述的组合物中既包含灵芝提取物和灵芝孢子粉或灵芝孢子粉提取物，能大幅增强护肝作用；又包含具有抗氧化抗炎作用的姜黄提取物，能够从根本上修复肝脏损伤。本申请的组合物具有增强免疫力和护肝的双功能。

针对各种功能的测定法是本领域已知的且确立的。例如，足跖增厚法可以来评估测试品是否能提高机体应对局部变态反应性炎症的能力，其使用SRBC(绵羊红细胞)刺激小鼠的T淋巴细胞增殖成致敏淋巴细胞，约4天后，当再以SRBC攻击时，攻击部位会出现迟发型变态反应(DTH)，通过比较攻击前后足跖厚度的变化来进行评估。

应用

在一些方面，本申请提供一种提高个体免疫力的方法，其包括向有此需要的个体施用有效量的组合物。本发明的组合物对个体免疫力的提升可表现在提高免疫细胞的活性、提高抗体生成细胞数等。相应地，本发明提供了组合物在制备用于提高个体免疫力的药物或保健品中的用途。所述个体可以是免疫力较低的个体，例如结核患者、肿瘤患者、易感冒易患病人群，熬夜、睡眠障碍、消化功能障碍营养不良、饮酒过量、久坐不动、中老年人群、大病初愈、术后康复人群、身体虚弱人群、压力过大、脑力劳动者、神经衰弱者、记忆力减退者、长期接触电脑、X线等辐射源的人群。

所述有效量是指给药后会在一定程度上改善或缓解状况的组合物的量。本申请所述组合物的剂量主要取决于所治疗的个体、病症或病况的严重性、给药的速率及医师的判断。

本文所述的个体包括人或非人的动物。示例性人个体包括患有疾病或病况的个体或正常个体。

在一些方面，本申请提供一种预防或治疗肝脏疾病的方法，其包括向有此需要的个体施用有效量的所述组合物。相应地，本发明提供了组合物在制备用于预防或治疗肝脏疾病的药物中的用途。术语治疗意指阻断、减轻、抑制所述的疾病或症状或者这样的疾病或症状中的一或多种症状的进展，或预防疾病或症状的一或多种症状。

在某些实施方案中，所述肝脏疾病选自肝损伤、肝炎、肝纤维化、酒精性肝病、代谢相关脂肪性肝病、自身免疫性肝病等。肝损伤可以是药物或毒物引起的肝损伤。在一些实施方案中，肝损伤是酒精性肝损伤。患有肝损伤的个体可以是肿瘤患者、长期服药的慢性病患者、结核患者、甲亢患者等，可在预防期、治疗期、预后保护全程使用本发明的组合物。在一些实施方案中，所述肝脏疾病是酒精性肝病。患有酒精性肝病的个体可以是长期饮酒、应酬较多的人群。在一些实施方案中，所述肝脏疾病是肝炎，包括病毒性肝炎(例如乙型、丙型肝炎)、非酒精性脂肪性肝炎、酒精性脂肪性肝炎。在一些实施方案中，所述肝脏疾病是代谢相关脂肪性肝病。患有代谢相关脂肪性肝病的个体可以是脂肪肝患者。

在一些方面，本申请提供一种解酒护肝的方法，其包括向有此需要的个体施用有效量的所述组合物。施用可以在饮酒前或饮酒后。相应地，本发明提供了组合物在制备用于解酒护肝的药物或保健品中的用途。

本发明的组合物还具有改善睡眠、提高睡眠质量的功能。

在一些方面，本申请提供了一种预防或治疗过敏或过敏相关的疾病或症状的方法，其包括向有此需要的个体施用有效量的所述组合物。此外，如实施例中验证的，本发明的组合物具有提高机体应对局部变态反应性炎症的功能。所述炎症可以是湿疹，湿疹是由内外多种因素诱发的变态反应性皮肤炎症。

在一些方面，本发明还提供了一种佐剂或免疫调节剂，其含有本文公开的组合物。在一些方面，本申请提供了所述组合物作为佐剂或免疫调节剂的用途。

所述佐剂是指，能够非特异性地增强对抗原免疫应答的物质，其先于抗原或与抗原一起注入机体，可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。免疫调节剂是指，能调节、平衡并恢复机体免疫功能的一类制剂，常用的免疫调节剂有免疫促进剂、免疫抑制剂和免疫双向调节剂三大类。

如实施例中验证的，本发明的组合物安全有效，功能作用明确，质量可控，既可用作疾病治疗的药物，也可用作保健品为正常人群提供免疫力防护。

在一些方面，本发明还提供了将所述组合物与其他药物联合施用。在一些实施方案中，所述其他药物可选自抗病毒药物、保肝护肝药物等。

实施例

包括以下实施例以证明本公开内容的某些非限制性方面。本领域技术人员应当理解，在随后的实施例中公开的技术代表了发明人发现的在公开的主题的实践中发挥良好作用的技术。然而，本领域的技术人员根据本公开内容应该理解，可以在公开的具体实施方案中进行许多改变并且仍然获得相似或相似的结果而不背离所公开主题的精神和范围。

实施例1：组合物的制备方法

1.1配料：

姜黄提取物、灵芝提取物、灵芝孢子粉提取物可如下制备或商购获得。

姜黄提取物：将姜黄原料净选、粉碎、95％乙醇渗漉提取、浓缩、95％乙醇多次重结晶、干燥、粉碎等主要工艺加工制成，姜黄素含量以重量计≥50％。

灵芝提取物：将灵芝子实体原料净选、粉碎、提取(先8倍量75％乙醇回流提取2次，1.5h/次，再分别用8、6倍量水煎煮提取2次，2h/次)、浓缩，干燥(70～80℃，0.08MPa)、粉碎、过筛等主要工艺加工制成，以重量计，多糖含量≥5.0％，灵芝三萜含量≥1.0％。

灵芝孢子粉提取物：将灵芝孢子粉先10倍量75％乙醇回流提取2次，1.5h/次，再用10倍量水煎煮提取2次，1.5h/次，然后经浓缩、干燥(70～80℃，0.08MPa)、粉碎、过筛等主要工艺加工制成。按重量计，多糖含量≥3.0％，灵芝三萜含量≥1.6％。

将姜黄提取物、灵芝提取物、灵芝孢子粉提取物，以及辅料微晶纤维素、羧甲淀粉钠、硬脂酸镁分别过80目筛，备用。

1.2灵芝孢子粉和灵芝提取物水解后分析比较

通过HPLC对灵芝孢子粉和灵芝提取物水解后的单糖进行分析，结果如下表所示。

从该表可见，灵芝孢子粉和灵芝提取物水解后都含有丰富的单糖，而且每种单糖含量各不相同，从作用上互为补充。

1.3混合

称取过筛后的姜黄提取物、灵芝提取物、灵芝孢子粉提取物、微晶纤维素、羧甲淀粉钠置混合机中进行混合30min，至混合粉均匀一致，得总混合粉，备用。对混合粉进行了检测，对于每100g的混合粉，标志性成分的含量为：姜黄素>16g，灵芝三萜>2500mg，粗多糖>32g。另外对于每100g的混合粉含有硒元素约34μg。

1.4制粒、混合

将总混合粉用70％的乙醇混合润湿制软材，过18目筛制粒，干燥(干燥温度50～60℃)，再过18目筛整粒，得干颗粒，水分控制为≤5％。将干颗粒与硬脂酸镁混合均匀，混合时间为5分钟，得混合颗粒。

1.5压片、包衣

将混合颗粒进行压片(0.3g/片)，剔除不合格的素片，得合格素片。取包衣粉，用75％的乙醇配成8％的包衣液。预热包衣锅，控制片床温度，将素片筛去细粉，置于包衣锅内包衣，随时观察增重情况，至增重约为2～3％，包衣结束后，用热风继续干燥，冷却，取出。

所得片剂形式的产品组成如下表所示：

1.6.胶囊剂

可将1.3的总混合粉或加有辅料充填于空心胶囊或软质囊材中制备成胶囊剂。空胶囊可由明胶、甲基纤维素、海藻酸盐类、聚乙烯醇等本领域中常用的用于胶囊的化合物制备。

实施例2：功能检测

将实验小鼠(18-22g的SPF级昆明种小鼠，由中国人民解放军军事医学科学院卫生学环境医学研究所提供)分成4大组，每组40只，然后每组40只动物又分为4个小组，分别为对照组和低、中、高三个剂量组，每组10只。其中，低、中、高三个剂量组分别为0.10g/kg体重、0.20g/kg体重和0.40g/kg体重，即相当于人拟用量的5倍、10倍和20倍。低、中、高剂量组分别取实施例1制备的片剂1.0g、2.0g和4.0g加蒸馏水至200ml。充分混合，按0.2ml/10g体重灌胃，对照组给予等量蒸馏水，每日一次，连续30天，末次施用组合物24小时后处死小鼠，测定各项指标。

2.1体重试验

灌胃30天之后，各组动物生长活动良好，各组动物增重与模型对照组相比，差异无统计学差异(p>0.05)。如表1至表4所示，显示各剂量的组合物对小鼠体重均没有影响。

表1受试物对免疫1组小鼠体重的影响(g，均值±标准差)

表2受试物对免疫2组小鼠体重的影响(g，均值±标准差)

表3受试物对免疫3组小鼠体重的影响(g，均值±标准差)

表4受试物对免疫4组小鼠体重的影响(g，均值±标准差)

此外，施用组合物30天后，取2组小鼠脾脏，胸腺，计算脏器/体重比值。由表5可见，各剂量组小鼠脾脏、胸腺/体重比值与对照组比较，差异均无统计学意义(p＞0.05)。

表5受试物对小鼠脏器/体重比值的影响(均值±标准差)

2.2细胞免疫影响

对第1组小鼠进行迟发型变态反应(足跖增厚法)试验。

施用组合物30天，在第25天腹腔注射2％(v/v)SRBC(绵羊血红细胞)，免疫4天后，测量左后足趾部厚度，同时在测量部位注射20％(v/v)SRBC 20μl，24小时后再测量。

如表6所示，中、高剂量组小鼠攻击前后足跖厚度差值高于对照组，且差异有统计学意义(p<0.05)，低剂量组小鼠攻击前后足跖厚度差值与对照组相比，差异无统计学意义(p>0.05)，表明组合物可以提高机体应对局部变态反应性炎症的能力。

表6受试物对小鼠迟发型变态反应(足跖增厚法)的影响(均值±标准差)

*与对照组比较，差异有统计学意义(p<0.05)

对第4组小鼠进行淋巴细胞转化试验(MTT法)：

无菌取脾，Hank’s液中将脾磨碎制成单细胞悬液，Hank’s液洗2次，每次离心10min(1000r/min)。将细胞悬浮于1mL的完全培养液，台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)，调整细胞浓度至3×10⁶个/mL。将每份细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，一孔加75μL ConA液(100μg/mL)，另一孔作为对照，置5％CO₂、37℃CO₂培养箱中培养72h。培养结束前4h，每孔吸去上清液0.7mL不含小牛血清的RPMI1640培养液，同时加入MTT(5mg/mL)50uL/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解，570nm波长测定光密度值。

如表7所示，中、高剂量组小鼠脾淋巴细胞转化高于对照组，且差异有统计学意义(p＜0.05)，低剂量组与对照组相比，差异无统计学意义(p＞0.05)。这再次验证了组合物可以提高淋巴细胞转化的活性。

表7受试物对ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法)的影响(均值±标准差)

2.3体液免疫影响

对第1组小鼠进行HC₅₀(小鼠半数溶血值)测定。

取羊血，生理盐水洗涤3次，每次离心(2000r/min)10min，腹腔注射2％(V/V，生理盐水配制)压积SRBC 0.2mL/只进行免疫。4天后，取血于离心管，放置约1h，将凝固血于管壁剥离，使血清充分析出，2000r/min离心10min，收集血清。用SA缓冲液将血清稀释(400倍)，稀释后的血清1mL置试管内，依次加入10％(V/V)SRBC 0.5mL，补体1mL(用SA缓冲液按1:8稀释)。另设不加血清的对照管(以SA缓冲液代替)。37℃恒温水浴中保温15-30min，冰浴终止反应。2000r/min离心10min，取上清1mL，加都氏试剂3mL。同时取10％(V/V)SRBC 0.25mL，加都氏试剂4mL，充分混匀，放置10min后，以对照作空白，分别测定各管OD_540nm，溶血素的量以半数溶血值(HC₅₀)表示，计算：

HC₅₀＝样品光密度值/SRBC半数溶血时的光密度值×稀释倍数

如表8所示，高剂量组小鼠半数溶血值(HC₅₀，血清溶血素生成水平，被测量的拮抗剂的半抑制浓度)高于对照组，且差异有统计学意义(p＜0.05)，中、低剂量组小鼠半数溶血值(HC₅₀)与对照组相比，差异无统计学意义(p＞0.05)。结果显示组合物可以提高单核吞噬系统功能，即提高抗病能力。

表8受试物对小鼠半数溶血值(HC₅₀)的影响(均值±标准差)

*与对照组比较，差异有统计学意义(p＜0.05)

对第1组小鼠进行抗体生成细胞检测。

将羊血放入有玻璃珠的灭菌锥形瓶中，朝一个方向摇动，以脱纤维，4℃冰箱保存备用(可保存2周)。压积SRBC以生理盐水配成2％(V/V)细胞悬液，鼠腹腔注射0.2mL/只。将SRBC免疫4-5天后的小鼠脱臼处死，取脾，放入Hank’s液，将脾磨碎制成细胞悬液，纱布过滤，Hank’s液洗2次，每次离心(1000r/min)10min，后将脾细胞悬液加入RPMI1640培养液中，计数细胞，细胞浓度调至5×10⁶个/mL。琼脂糖加热溶解后，45-50℃水浴保温，与等量pH7.2-7.42倍浓度的Hank’s液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加10％(V/V，用SA液配制)压积SRBC 50μL、脾细胞悬液20μL，混匀后倾倒于已刷有琼脂糖薄层的玻片上，做平行片，待琼脂凝固后，将玻片水平扣放在片架上，CO₂培养箱中温育

1.5h，后用SA缓冲液稀释的补体(1:8)加入到玻片架凹槽内，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。

如表9所示，高剂量组小鼠抗体生成细胞数高于对照组，且差异有统计学意义(p<0.05)，中、低剂量组小鼠抗体生成细胞与对照组相比，差异无统计学意义(p>0.05)。结果显示组合物可以提高抗体生成细胞数，促进产生抗体，提高免疫力。

表9受试物对小鼠抗体生成细胞的影响(均值±标准差)

*与对照组比较，差异有统计学意义(p<0.05)

2.4免疫调理

对第3组小鼠进行碳廓清试验。

小鼠尾静脉注射1:4倍稀释的印度墨汁，立即计时，注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μL，并立刻将其加到2mL 0.1％Na₂CO₃溶液中，以Na₂CO₃为对照，测定OD_600nm。处死小鼠，取肝脏和脾脏，称重。计算吞噬指数a：

k＝(lgOD1-lgOD2)/(t2-t1)，

如表10所示，高剂量组小鼠吞噬指数高于对照组，且差异有统计学意义(p<0.05)，中、低剂量组小鼠吞噬指数与对照组相比，差异无统计学意义(p>0.05)。结果显示组合物可显著提升对异物吞噬和消化的功能(在机体非特异性免疫中发挥重要作用)。

表10受试物对小鼠碳廓清试验的影响(均值±标准差)

对第2组进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验。

小鼠腹腔注射20％(V/V，用生理盐水配制)压积鸡红细胞(2000r/min，10min)悬液1mL，间隔30min，脱臼处死，取腹腔巨噬细胞洗液1mL，滴于载玻片上，37℃孵箱温育20min，生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞。晾干，甲醇固定，4％(V/V)Giemsa-磷酸缓冲液染色，蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数，每片计数100个巨噬细胞，计算吞噬率和吞噬指数：

吞噬率％＝吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/计数的巨噬细胞数×100

吞噬指数＝被吞噬的鸡红细胞总数/计数的巨噬细胞数

如表11所示，三个剂量组小鼠的吞噬百分率及吞噬指数与对照组相比，差异无统计学意义(p>0.05)。

表11受试物对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验的影响(均值±标准差)

对第4组小鼠进行NK细胞活性影响的实验。

实验前24h传代培养靶细胞YAC-1，应用前以Hank’s液洗3次，含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液调整细胞浓度至4×10<5>个/mL。受试小鼠脱臼处死，取脾脏，制成脾细胞悬液，Hank’s液洗3次，每次1500r/min离心10min，用2mL含10％小牛血清的RPMI1640完全培养液重悬，台酚兰染色计数(活细胞数应在95％以上)，调整细胞浓度至2×10⁷个/mL，使效靶比为50:1。取靶细胞和效应细胞各100μL，加入U形96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液个100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％ NP40各100μL；上述各项均设三个平行孔，37℃，5％CO₂培养箱中培养4h，将96孔板以1500r/min离心5min，每孔吸取上清100μL置酶标板中，加入LDH基质液100μL，反应10min，然后每孔加入1mol的HCl溶液30μL终止反应，测定OD 490nm，计算NK活性：

NK细胞活性％＝(反应孔OD–自然释放孔OD)/(最大释放孔OD-自然释放孔OD)×100％

LDH基质液的配制：乳酸钠5×10-²mol/L

硝基氯化四氮唑6.6×10-⁴mol/L

吩嗪二甲酯硫酸盐2.8×10-⁴mol/L

氧化型辅酶Ⅰ1.3×10-³mol/L

将上述试剂溶于0.2mol/L的Tris-HCl缓冲液中(pH 8.2)。

如表12所示，高剂量组NK细胞活性高于对照组，且差异有统计学意义(p<0.05)，中、低剂量组NK细胞活性与对照组相比，差异无统计学意义(p>0.05)。结果显示组合物可以提高NK细胞的活性。

表12受试物小鼠NK细胞活性的影响(乳酸脱氢酶测定法)(均值±标准差)

*与对照组比较，差异有统计学意义(p<0.05)

2.5化学性肝损伤保护

采用酒精性肝损伤模型，将实验小鼠分为高、中、低三个剂量组，一个空白对照组和一个模型对照组，三个剂量组每日灌胃施用组合物，剂量分别为0.10/kg体重、0.20/kg体重、0.40/kg体重，即相当于人拟用量的5倍、10倍、20倍。分别称取组合物1.0g、2.0g、4.0g加蒸馏水至200ml。以20ml/kg体重灌胃，空白对照组和模型对照组给予等量蒸馏水，每日一次，连续30天。实验结束时将模型对照组和三个剂量组一次灌胃给予50％乙醇(以蒸馏水稀释)14ml/kg体重。禁食16小时后，处死全部动物取肝脏，进行各项生化指标检测加组织病理学检查。

如表13所示，空白对照组和模型对照组的MDA(丙二醛)、GSH(谷胱甘肽)、TG(甘油三酯)差异均有统计学意义(p<0.05)，表明模型建立成功。以不同剂量灌胃小鼠30天，中、高剂量组的肝匀浆中MDA浓度及中、高剂量组的TG浓度均低于模型对照组，且差异均有统计学意义(p<0.05)。

表13.对MDA、GSH、TG含量的影响(均值±标准差)

如表14所示，模型对照组脂肪变性评分高于空白对照组，空白对照组和模型对照组脂肪变性评分差异有统计学意义(p<0.05)，表明模型建立成功。以不同剂量灌胃小鼠30天，高剂量组的脂肪变性评分均低于模型对照组，且差异有统计学意义(p<0.05)。

表14.肝脏脂肪变性评分(均值±标准差)

*与模型对照组比较，差异有统计学意义(p≤0.05)

上述结果表明在酒精性肝损伤模型中，组合物可以提升GSH水平、抑制MDA和降低TG。肝脏组织病理研究显示组合物可以改善肝脏脂肪变性。因此，本发明的组合物具有对酒精性肝损伤的保护功能。

实施例3：毒理学检测

3.1急性毒性检测

如表15和表16所示，大、小鼠未见中毒表现，没有出现死亡，尸检中各主要脏器未见异常。大、小鼠经口急性毒性(MTD)均大于20.0g/kg·BW，根据《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)急性毒性分级标准，本样品属无毒级。

表15小鼠急性毒性试验

表16大鼠急性毒性试验

3.2遗传毒性检测

致突变作用：

如表17所示，样品各剂量组回变菌落数均未超过溶剂对照菌落数2倍，没有剂量—反应关系，试验结果为阴性，表明组合物没有致突变作用。

表17 Ames试验结果(第一次实验)

注：以上结果为三个平皿回变菌落数的平均±标准准。

致癌作用：

如表18所示，受试物各剂量组微核率与阴性对照组比较差异均无统计学意义(p>0.05)，环磷酰胺组与阴性对照组比较有统计学意义(p<0.05)，表明未见组合物对小鼠骨髓细胞微核产生影响。

表18对小鼠骨髓微核发生率的影响

*与阴性对照组比较，p＜0.05

3.4致畸作用：

如表19所示，受试物各剂量组小鼠精子畸形发生率与阴性对照组比较差异均无统计学意义(p＞0.05)，环磷酰胺组与阴性对照组比较有统计学意义(p＜0.05)，表明未见组合物对小鼠精子畸形产生影响。

表19对小鼠精子畸形发生率的影响

*与阴性对照组比较，p＜0.05。

Claims (21)

1.一种组合物，其包含姜黄提取物、灵芝提取物和灵芝孢子粉提取物。

2.根据权利要求1所述的组合物，其包含以下重量份的组分：30-70份的姜黄提取物、70-110份的灵芝提取物和80-120份的灵芝孢子粉提取物。

3.根据权利要求2所述的组合物，其包含45-55重量份的姜黄提取物、81-99重量份的灵芝提取物和90-110重量份的灵芝孢子粉提取物。

4.根据权利要求2所述的组合物，其包含50重量份的姜黄提取物、90重量份的灵芝提取物和100重量份的灵芝孢子粉提取物。

5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述姜黄提取物包含按姜黄提取物重量计至少50％的姜黄素，所述灵芝提取物包含按灵芝提取物重量计至少5％的多糖和至少1％的灵芝三萜，所述灵芝孢子粉提取物包含按灵芝孢子粉提取物重量计至少3％的多糖和至少1.6％的灵芝三萜。

6.根据权利要求1所述的组合物，其包含按姜黄提取物、灵芝提取物和灵芝孢子粉提取物的总重量计至少7％的姜黄素，至少2％的多糖和至少0.5％的灵芝三萜，例如至少10％的姜黄素，至少3％的多糖和至少1％的灵芝三萜。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的组合物，其还包含一种或多种药学可接受的辅料，任选地还包含硒元素。

8.根据权利要求7所述的组合物，其中所述药学可接受的辅料选自微晶纤维素、羧甲淀粉钠、硬脂酸镁、磷酸盐、柠檬酸盐、葡萄糖，甘露糖、糊精、蔗糖、甘露醇、海藻糖和山梨糖醇。

9.根据权利要求8所述的组合物，其中所述药学可接受的辅料为微晶纤维素、羧甲淀粉钠和硬脂酸镁。

10.根据权利要求1-9中任一项所述的组合物，其配制为片剂、胶囊剂、汤剂、粒剂、丸剂、溶液剂、酏剂、乳膏剂、软膏剂或糖浆剂的形式。

11.根据权利要求10所述的组合物，其配制为片剂或丸剂的形式。

12.根据权利要求11所述的组合物，其中所述片剂或丸剂的形式在所述组合物上覆有包衣。

13.根据权利要求1-12中任一项所述的组合物，其为药物组合物或保健品组合物。

14.一种制备组合物的方法，其包括以下步骤：

将30-70份的姜黄提取物、70-110份的灵芝提取物和80-120份的灵芝孢子粉提取物均匀混合。

15.根据权利要求14所述的方法，其还包括将所述提取物与一种或多种药学可接受的辅料一起混合均匀。

16.根据权利要求14或15所述的方法，其还包括在混合前将提取物和辅料过筛。

17.根据权利要求13-15中任一项所述的方法，其还包括以下一个或多个步骤：制粒、压片和包衣。

18.权利要求1-13中任一项所述的组合物在制备用于增强个体的免疫力的制备物的用途。

19.权利要求1-13中任一项所述的组合物在制备用于防护和治疗肝损伤和/或解酒护肝的制备物中的用途。

20.权利要求1-13中任一项所述的组合物在制备用于治疗或减轻个体中的局部变态反应性炎症或抗过敏的制备物中的用途。

21.根据权利要求20所述的用途，其中所述炎症是湿疹。