CN117143770A - 一株凝结魏茨曼氏菌glm336及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一株凝结魏茨曼氏菌GLM336及其应用，属于微生物技术领域。本发明的凝结魏茨曼氏菌命名为凝结魏茨曼氏菌(Weizmannia coagulans)GLM336，已于2023年7月6日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.63548。本发明的凝结魏茨曼氏菌GLM336具有显著的抑菌作用，具有较好的耐酸、耐胆盐、耐高温性能，可用于制备饲料添加剂，能够有效的提高保育猪、母猪的生产性能，也能明显提高猪群的免疫水平，减少抗生素及其他药物的使用。

Description

一株凝结魏茨曼氏菌GLM336及其应用
技术领域
本发明属于微生物技术领域，具体涉及一株凝结魏茨曼氏菌GLM336及其应用。
背景技术
当前集约化养殖条件下，动物多处于高密度、饲料霉变、易感病的环境或应激状态下，益生菌作为一种绿色、安全的新型饲料添加剂，不仅能够减少使用抗生素，还能够提高饲料利用率、促进动物生长、调节肠道健康、提高免疫力。凝结魏茨曼氏菌是革兰氏阳性菌，属芽孢杆菌类，因为其发酵产乳酸，又属于乳酸菌的范畴。凝结魏茨曼氏菌能够定植于小肠上部并且在结肠处产芽孢，且抗逆性强，能够在饲料加工过程中保持活性。
凝结魏茨曼氏菌由于其兼具乳酸菌和芽孢杆菌的特点，近年来逐渐开始受到人们的重视，已经成为国内外研究的一个重点，菌剂产品中的凝结魏茨曼氏菌需要处在芽孢状态才能有高抗逆性，因此如何获得高浓度高活性的芽孢是制约凝结魏茨曼氏菌制剂生产的关键因素。凝结魏茨曼氏菌发酵过程中会产生大量乳酸降低环境pH值，pH值降低到一定程度时会抑制其自身生长，且其芽孢的形成条件也极为苛刻，受营养条件和环境因素如温度、pH和溶氧水平等多方面因素影响。
发明内容
为了解决上述技术问题，本发明提供一株凝结魏茨曼氏菌GLM336及其应用。
为实现上述目的，本发明提供一种凝结魏茨曼氏菌，所述凝结魏茨曼氏菌命名为凝结魏茨曼氏菌(Weizmannia coagulans)GLM336，已于2023年7月6日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.63548。本发明筛选得到的凝结魏茨曼氏菌GLM336，具有显著的抑菌作用、良好的耐酸性、耐胆盐性和耐高温性能。
作为本发明所述凝结魏茨曼氏菌的优选实施方式，所述凝结魏茨曼氏菌GLM336的序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供所述的凝结魏茨曼氏菌GLM336在制备病原菌抑制剂中的应用。
作为本发明所述应用的优选实施方式，所述病原菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、创伤弧菌、铜绿假单胞菌、副猪嗜血杆菌或产气荚膜梭菌中的至少一种。
本发明还提供所述的凝结魏茨曼氏菌GLM336在制备饲料添加剂中的应用。
本发明还提供一种凝结魏茨曼氏菌制剂，采用所述的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵得到。
本发明所述凝结魏茨曼氏菌制剂的制备方法，包括以下步骤：
(1)将凝结魏茨曼氏菌GLM336进行菌种培养，得到凝结魏茨曼氏菌GLM336种子液；
(2)将种子液接种于高密度固态培养基，于40～45℃有氧发酵48h后再密闭发酵24h，烘干得所述凝结魏茨曼氏菌制剂。
作为本发明所述凝结魏茨曼氏菌制剂的制备方法的优选实施方式，所述高密度固态培养基包括以下质量百分比的组分：40％棕榈粕，20％豆粕，2％红糖，3％碳酸钙，5％β-环状糊精和30％水。
本发明还提供一种饲料，所述饲料包括所述的凝结魏茨曼氏菌制剂。
作为本发明所述饲料的优选实施方式，所述饲料中凝结魏茨曼氏菌的含量为1.2*1010CFU/g。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明提供一株凝结魏茨曼氏菌GLM336，该菌株对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、创伤弧菌、铜绿假单胞菌、猪副嗜血杆菌、产气荚膜梭菌具有显著的抑制作用，具有较好的耐酸性，可在pH 2.0的条件下生存；具有耐胆盐能力，在1～3‰，0.7％胆盐条件下能够生长；本发明的凝结魏茨曼氏菌GLM336可用于制备饲料添加剂，并适合应于畜禽、水产养殖的全过程，能够有效的提高保育猪、母猪的生产性能，也能明显提高猪群的免疫水平，减少抗生素及其他药物的使用；本发明的凝结魏茨曼氏菌GLM336可用于调节动物肠内微生态平衡，具有增强非特异性免疫功能来预防疾病的作用，同时还可以提供营养因子、促进营养物的消化吸收、促进动物生长和提高饲料转化率。
具体实施方式
为更好的说明本发明的目的、技术方案和优点，本发明通过下列实施例进一步说明。显然，下列实施例仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。应理解，本发明实施例仅用于说明本发明的技术效果，而非用于限制本发明的保护范围。除非特别说明，否则本发明实施例中采用的方法和试验条件均为本领域常规使用的方法和试验条件，使用的试剂、设备和培养基均为本领域常规使用的试剂、设备和培养基，均可通过现有方法制备获得或通过市售购买获得。
实施例1菌株的分离、筛选、鉴定及保存
1、菌株的分离：取健康仔猪粪便样品，用无菌水分别进行10、100、1000倍稀释，取200μL涂布于改良MRS固体培养基(改良MRS培养基主要成分是蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温80 1.0mL，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g，蒸馏水1000mL，pH 6.2～6.6)，于45℃培养48小时，挑取菌落，划线改良MRS培养基，经4次纯化后，挑取单菌落至改良MRS肉汤中培养至对数期，加入终浓度20％甘油，-80℃下保存备用。
2、菌株形态学特征及生理生化特征：取上述纯化菌株的单菌落，转接到改良MRS固体培养基(琼脂)上，于45℃恒温培养箱中培养24h、36h和48h，分别观察其菌落的大小、颜色、边缘、凸起、光滑度、粘性、透明度等特点。结果显示，该菌株在改良MRS固体培养基上菌落形态为不透明白色，呈圆形，表面突出。根据《伯杰细菌鉴定手册》和《常见细菌系统鉴定手册》，对分离菌株进行生理生化初步鉴定，生理生化结果如表1所示。
表1生化鉴定结果
3、菌株的分子生物学鉴定
利用细菌基因组提取试剂盒提取上述菌株的基因组DNA。利用细菌通用引物27F，1492R扩增菌株16S rDNA片段。如上所述的引物对序列为：1492R：TACCTTGTTACGACTT，27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG。菌株的16S rRNA基因测序的结果如SEQ ID NO:1所示。综合该菌株有关生理生化指标和分子生物学鉴定结果，结合其形态学特征，结果为凝结芽孢杆菌，将上述菌株进行保藏。发明人已于2023年7月6日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，并命名为凝结魏茨曼氏菌(Weizmannia coagulans)GLM336，获得的保藏号为GDMCC NO:63548。
实施例2耐酸性试验
1、实验选取前期从健康仔猪肠道、土壤、市售同类产品等来源分离纯化到乳酸菌菌株作为对照，经革兰氏染色、触酶试验、硝酸盐还原试验和16S rDNA测序等鉴定，这些乳酸菌菌株分别属于凝结魏茨曼氏菌、屎肠球菌、干酪乳杆菌、植物乳杆菌、罗伊氏乳杆菌株。16S rDNA测序比对分析结果见下表2。
表2相关分离所得乳酸菌菌株的鉴定结果
2、具体实验方法：用HCl调节液体培养基至pH 2.0。将菌种以的5％(V/V)的接种量分别接种上述各处理，45℃静置培养。在接种初始及接种后120min取上述各处理中培养菌液，进行平板计数，从而计算出细菌的存活率，以pH 6.0的菌液为对照。存活率(％)＝待测pH的菌液活菌数/pH6.0的菌液活菌数×100％。实验结果见表3。
表3 GLM336与其它分离菌株耐酸实验对比结果
菌株 存活率(120min)％
GLM336 87.6
GLM522 56.3
GLM536 62.3
GLM568 42.5
GLM623 32.1
GLM821 22.6
GLM824 23.5
GLM853 57.3
GLM880 46.8
GLM894 62.1
GLM902 52.2
GLM935 21.2
由表3可知，所分离的菌株在pH 2.0条件下时的存活率分别为21.2％～87.6％，其中菌株GLM336的存活率最高，达到87.6％。
3、进一步对菌株GLM336进行耐酸性检测，实验方法为：设4个不同pH值处理，分别用HCl调节液体培养基至pH值为1.5、2.5、3.5、4.5。将菌种以的5％(V/V)的接种量分别接种上述各处理，45℃静置培养。在接种初始及接种后30、60、90、120、150min取上述各处理中培养菌液，进行平板计数，从而计算出细菌的存活率，以pH 6.0的菌液为对照。存活率(％)＝待测pH的菌液活菌数/pH6.0的菌液活菌数×100％。实验结果见表4。
表4菌株GLM336耐酸实验结果
pH 活菌数(CFU/g) 存活率(120min)
1.5 0.3 5.6％
2.5 9.5 90.3％
3.5 12.5 92.0％
4.5 13.5 98.2％
6.0 14.2 ----
由表4可知，所分离的菌株在pH 1.5、2.5、3.5、4.5时的存活率分别为5.6％、90.3％、92.0％、98.2％，说明该菌具有较强的耐酸性，最低可以耐受pH范围为1.5～2.5。
实施例3抑菌试验
具体实验方法：实验菌株选取实验室前期分离自仔猪肠道、土壤、市售同类产品等来源的凝结魏茨曼氏菌，指示菌株选取大肠杆菌(Escherichia coli ATCC 8739)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureusATCC 6538)、伤寒沙门氏菌(Salmonella typhi CMCC(B)50071)、创伤弧菌(Vibrio vulnificusATCC 27562)和铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa ATCC 9027)、副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis GLM006)和产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens GLM008)。采用牛津杯法，每杯加入0.2mL培养24h的培养液，恒温培养箱中培养，观察培养结果，测定平皿内抑菌圈直径大小，实验结果如表5所示。
表5菌株GLM336抑菌实验对比结果直径(mm)
注：实验重复3次，结果为三次平均值。
由实验结果可知，所分离的菌株对常见致病指示菌有良好的抑制作用，其中菌株GLM336对指示菌的抑菌能力高于其它来源的凝结魏茨曼氏菌。
实施例4胆盐耐受试验
具体实验方法：实验菌株选取实验室前期分离自仔猪肠道、土壤、市售同类产品等来源的乳酸菌菌株(表1)，菌株培养16h后，在4℃12000g离心4分钟后收集菌体，用PBS溶液冲洗2次。加入含有胆盐0.7％(w/v)的PBS溶液中，45℃培养4h后，稀释至10-4和10-5浓度涂布改良MRS平板(改良MRS培养基主要成分是蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温80 1.0mL，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g，蒸馏水1000mL，pH 6.2～6.6)，45℃厌氧培养48h后，观察改良MRS平板上菌落生长情况。
结果如表6所示，在所有的实验平板中，菌株GLM336的存活量最高，达到4.5*108CFU/ml。
表6各菌株经胆盐0.7％(w/v)处理4h后的存活菌量
注：----表示存活乳酸菌菌落数≦1.0*106CFU/ml。
实施例5高温耐受试验
具体实验方法：实验菌株选取实验室前期分离自仔猪肠道、土壤、市售同类产品等来源的凝结魏茨曼氏菌发酵液为试验对象，测定85-100℃水浴条件下、10-30min加热后凝结芽孢杆菌的存活情况。各实验菌株发酵液初始芽孢数调整为1.6×1010CFU/mL。采用平板涂布法梯度稀释测定芽孢数，并计算存活率，结果见表7。所用培养基为改良MRS平板，45℃厌氧培养48h后，观察改良MRS平板上菌落生长情况。改良MRS培养基主要成分是蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温80 1.0mL，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g，蒸馏水1000mL，pH 6.2～6.6。
表7不同加热温度对各菌株芽孢存活率的影响
由表7可知，85℃下水浴处理10-20min，菌株GLM336存活率100％；85℃下水浴处理30min，菌株GLM336存活率99.6％；100℃处理30min，菌株GLM336存活率89.2％。说明菌株GLM336的耐热性好。
实施例6
本实施例提供一种凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品，采用以下步骤制备：
1)菌种及其种子液制备
将菌株GLM336在改良MRS琼脂平板活化，挑取单菌落接种于改良MRS液体试管，45℃培养24h后，以2％接种量转接于MRS液体培养基，培养24小时后作为种子液；改良MRS培养基主要成分是蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，柠檬酸氢二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温80 1.0mL，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.58g，硫酸锰0.25g，L-半胱氨酸盐酸盐0.5g，蒸馏水1000mL，pH 6.2～6.6。
2)接种
以3％v/v接种量将上述制备的种子液接种到高密度固态培养基(高密度固态培养基的配方为：棕榈粕40％，豆粕20％，红糖2％，碳酸钙3％，β-环状糊精5％和水30％)；
3)发酵
将接好菌种的培养基在40～45℃下有氧发酵48h后再密闭发酵24h，然后在80℃下烘干4.1h，得所述凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品。
取上述凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品，进行梯度稀释，涂布于改良MRS培养基，厌氧培养48h后，计算菌落数，实验结果显示本发明发酵烘干产品中的活菌含量为1.2*1010CFU/g。
实施例7
本实施例研究实施例6制备得到的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品对仔猪健康状况的改善效果，具体实验方法如下：
1、实验动物与分组
产品1：实施例6制备得到的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品，检测活菌含量为1.2*1010CFU/g；
产品2：市售凝结魏茨曼氏菌活菌产品，标识含量为≥1.0*1010CFU/g，实测含量为1.2*1010CFU/g。
分组：选取同批28日龄的断奶仔猪300头，随机分为3组，每组100头(组内大小、体重接近，均匀度良好)。试验仔猪群分组与称重情况见表8。
表8试验仔猪群分组与称重情况
组别 初始数量：头 初始均重：kg/头
产品1 100 7.2
产品2 100 7.3
空白对照组 100 7.2
2、试验过程及试验产品添加：仔猪从试验开始当天，各组分别添加含有不同药物组合的饲料，连用30天。试验仔猪群用药剂量和喂药时间如表9所示。
表9试验仔猪群用药剂量和喂药时间
组别 药物方案及剂量 喂药时间(单位：天) 饲喂方式
产品1 1kg/吨饲料 30 拌料
产品2 1kg/吨饲料 30 拌料
空白对照组 不添加任何药物 正常饲养 正常饲养
3、实验结果
(1)试验过程中仔猪不同组临床症状观察情况：不同组对仔猪试验中临床症状观察结果如表10所示。
表10不同组对仔猪试验中临床症状观察结果
(2)试验过程中仔猪不同组生长性能：试验过程中仔猪不同组生长性能结果如表11所示。
表11不同组对仔猪生长指标影响试验结果
由表10、11可知，本发明的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品、市售凝结魏茨曼氏菌活菌产品比空白对照组出现的不良症状和腹泻率有明显降低，说明添加相应的产品能不同程度地提高猪群的健康状况；本发明的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品相对市售同类产品在改善食欲、改善腹泻方面具有显著的优势。本发明的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品、市售凝结魏茨曼氏菌活菌产品对仔猪出现的临床症状改善均有一定的效果，在提高仔猪的生长性能也具有一定效果。本发明的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品相对市售同类产品在提高日增重，降低料肉比方面具有显著的优势。
实施例8
本实施例研究实施例6制备得到的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品对仔猪血清免疫指标的改善，具体实验方法如下：于实施例7实验结束后，每个组别随机选取5头仔猪，前腔静脉采血10ml置于未加抗凝剂的试管中，放置30min后，4000r/min离心10min，分离血清，分装成5份，-20℃保存，待测定血清免疫指标。采用ELISE试剂盒法测定血清：免疫球蛋白A(IgA),免疫球蛋白G(IgG),免疫球蛋白M(IgM),、白细胞介素-2(IL-2),白细胞介素-4(IL-4),白细胞介素-8(IL-8)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量，采用Bio-Rad Model-680多功能酶标仪进行检测。ELISE试剂盒购于南京建成生物工程研究所，操作按说明书进行。
结果如表12、13所示。由表12可知，本发明的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品、市售凝结魏茨曼氏菌活菌产品的仔猪的IgA、IgG、IgdM均显著高于对照组，且本发明的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品比市售凝结魏茨曼氏菌活菌产品的效果更好，说明本发明的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品能够提升断奶仔猪免疫性能。由表13可知，日粮中添加本发明的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵产品显著提高了断奶仔猪血清中的TNF-α含量，IL-2、IL-4、IL-8含量也有不同程度的提高。在断奶应激条件下，细胞因子含量的提高可起到有效的抗炎作用。
表12菌株GLM336产品对断奶仔猪血清免疫指标的影响
项目 对照组 产品1 产品2
免疫球蛋白GIgG/(mg/mL) 7.22±0.52 8.20±0.44 7.14±0.31
免疫球蛋白AIgA/(μg/mL) 525.49±58.28 562.33±75.32 553.94±49.08
免疫球蛋白MIgM/(μg/mL) 168±33.22 210.30±15.49 189.82±36.24
表13菌株GLM336产品对断奶仔猪血清细胞因子的影响
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。

Claims (10)

1.一种凝结魏茨曼氏菌，其特征在于，所述凝结魏茨曼氏菌命名为凝结魏茨曼氏菌(Weizmannia coagulans)GLM336，已于2023年7月6日保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏编号为GDMCC No.63548。
2.根据权利要求1所述的凝结魏茨曼氏菌，其特征在于，所述凝结魏茨曼氏菌GLM336的序列如SEQ ID NO.1所示。
3.权利要求1～2任一项所述的凝结魏茨曼氏菌GLM336在制备病原菌抑制剂中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述病原菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、伤寒沙门氏菌、创伤弧菌、铜绿假单胞菌、副猪嗜血杆菌或产气荚膜梭菌中的至少一种。
5.权利要求1～2任一项所述的凝结魏茨曼氏菌GLM336在制备饲料添加剂中的应用。
6.一种凝结魏茨曼氏菌制剂，其特征在于，采用权利要求1～2任一项所述的凝结魏茨曼氏菌GLM336发酵得到。
7.根据权利要求6所述凝结魏茨曼氏菌制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将凝结魏茨曼氏菌GLM336进行菌种培养，得到凝结魏茨曼氏菌GLM336种子液；
(2)将种子液接种于高密度固态培养基，于40～45℃有氧发酵48h后再密闭发酵24h，烘干得所述凝结魏茨曼氏菌制剂。
8.根据权利要求7所述凝结魏茨曼氏菌制剂的制备方法，其特征在于，所述高密度固态培养基包括以下质量百分比的组分：40％棕榈粕，20％豆粕，2％红糖，3％碳酸钙，5％β-环状糊精和30％水。
9.一种饲料，其特征在于，所述饲料包括权利要求6所述的凝结魏茨曼氏菌制剂。
10.根据权利要求9所述的饲料，其特征在于，所述饲料中凝结魏茨曼氏菌的含量为1.2*1010CFU/g。
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Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001034168A1 (en) * 1999-11-08 2001-05-17 Ganeden Biotech, Inc. Inhibition of pathogens by bacillus coagulans strains
US20110189132A1 (en) * 2010-02-01 2011-08-04 Microbios, Inc. Microbial product containing multiple microorganisms
CN106011036A (zh) * 2016-08-04 2016-10-12 北京好实沃生物技术有限公司 一株具有益生作用的凝结芽孢杆菌hew-b379及其应用
CN106754579A (zh) * 2017-03-17 2017-05-31 哈尔滨中科生物工程有限公司 一种凝结芽孢杆菌及其用途
CN110028560A (zh) * 2019-03-15 2019-07-19 河南科技大学 一种凝结芽孢杆菌产的细菌素及其应用
CN115873754A (zh) * 2022-09-15 2023-03-31 江苏东誉绿塑生物科技有限公司 一株肠源凝结魏茨曼氏菌rs804及其应用
CN116333912A (zh) * 2022-11-09 2023-06-27 山东康地恩生物科技有限公司 一种具有广谱抑菌效果的凝结芽孢杆菌及其应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001034168A1 (en) * 1999-11-08 2001-05-17 Ganeden Biotech, Inc. Inhibition of pathogens by bacillus coagulans strains
US20110189132A1 (en) * 2010-02-01 2011-08-04 Microbios, Inc. Microbial product containing multiple microorganisms
CN106011036A (zh) * 2016-08-04 2016-10-12 北京好实沃生物技术有限公司 一株具有益生作用的凝结芽孢杆菌hew-b379及其应用
CN106754579A (zh) * 2017-03-17 2017-05-31 哈尔滨中科生物工程有限公司 一种凝结芽孢杆菌及其用途
CN110028560A (zh) * 2019-03-15 2019-07-19 河南科技大学 一种凝结芽孢杆菌产的细菌素及其应用
CN115873754A (zh) * 2022-09-15 2023-03-31 江苏东誉绿塑生物科技有限公司 一株肠源凝结魏茨曼氏菌rs804及其应用
CN116333912A (zh) * 2022-11-09 2023-06-27 山东康地恩生物科技有限公司 一种具有广谱抑菌效果的凝结芽孢杆菌及其应用

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