CN117126283A - 抗pic的抗体、试剂盒及检测pic的方法 - Google Patents

抗pic的抗体、试剂盒及检测pic的方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种抗PIC的抗体、试剂盒及检测PIC的方法。该抗PIC的抗体包括6个CDR，6个CDR选自(i)或(ii)，其中(i)选自SEQ ID NOs:1‑6所示的氨基酸序列，(ii)选自SEQ ID NOs:7‑12所示的氨基酸序列。具有本申请6个CDRs的抗PIC的抗体对PIC抗原的亲和力和特异性更高，因而利用本申请的抗体进行双抗体夹心法检测样品时，能够实现一步法检测，在特异性和准确性高的同时，大大缩短了检测时间，提高了检测速度和效率。

Description

抗PIC的抗体、试剂盒及检测PIC的方法
技术领域
本发明涉及血液检测领域，具体而言，涉及一种抗PIC的抗体、试剂盒及检测PIC的方法。
背景技术
血液凝固过程中形成的纤维蛋白，被分解液化的过程，叫纤维蛋白溶解(简称纤溶)。纤溶是体内重要的抗凝血过程。它和血凝过程一样，也是机体的一种保护性生理反应。纤溶系统的主要功能是清除沉积在血管壁上的纤维蛋白，溶解凝血块而保持血流通畅。其中纤溶酶(Plasmin)和α2-纤溶酶抑制剂(α2-AP)对机体的血栓形成和溶解起着重要作用。
纤溶酶由纤溶酶原(Plg)受纤溶酶原激活物作用后转化而来，与纤溶酶原有相似的抗原性，属丝氨酸蛋白酶，可降解交叉联结的纤维蛋白原或血纤蛋白形成纤维蛋白降解产物，有利于血栓的降解。α2-纤溶酶抑制剂是血浆中最重要的一种纤溶酶特异性抑制物，可与纤溶酶反应形成共价酶抑制剂，使纤溶酶失活，从而控制纤溶系统的激活程度，调节凝血和纤溶系统平衡，用于抑制血纤蛋白的过度水解，避免过度失血。
纤溶酶在血液中的半衰期极短(约10min)，难以直接测定，α2纤溶酶抑制剂可迅速地中和纤溶酶，以致血浆中无法检测到活性纤溶酶。纤溶酶-α2纤溶酶抑制剂复合物(PIC)是纤溶酶与α2纤溶酶抑制剂(α2-AP)以1：1的比例形成的复合物，即机体纤溶与抗纤溶物质相互结合的产物，是检测纤溶系统激活的标志物，有助于全面了解机体的凝血、纤溶状态。PIC在血液中半衰期较长，约为6小时。
正常血浆中前体分子纤溶酶原和α2-AP的浓度约为PIC的100倍以上，为避免这些前体分子的干扰，抗体的特异性对PIC的测定显得尤为重要。现有技术中已有的检测PIC的抗体及检测方法，如Monoclonal Antibodies to Discrete Regions in a2-PlasminInhibitor所公开的检测方法：通过固相载体连接抗纤溶酶原抗体，过氧化酶标记抗α2纤溶酶抗体，分两步检测。
上述检测方法中，采用现有配对方案Plasmin抗体和anti-α2plasmin抗体进行检测的，检出效果不佳：纤溶酶原血液浓度约为0.2mg/ml，α2纤溶酶抑制剂约为0.07mg/ml，约为PIC的100倍以上。纤溶酶与纤溶酶原具有相似的抗原性，采用Plasmin抗体作为捕获抗体捕获待测物PIC时，会受到血浆中大量存在的纤溶酶原的干扰，造成检测灵敏度降低。同时，纤溶酶原浓度在不同个体之间存在一定范围的波动，Plasmin抗体方案检测不同个体PIC水平时易产生波动，抗干扰性差。同样地，采用anti-α2plasmin抗体作为检测抗体，也会受到血液中大量存在的α2纤溶酶抑制剂的干扰，为降低α2-AP的干扰，必须分步检测，在Plasmin抗体与样本温育反应后，洗去样本中的α2-AP，再加入标记了发光物质的anti-α2plasmin抗体，完成检测。因此上述技术方案，除了会受到样本自身高浓度前体物质的干扰，降低检测灵敏度和准确性，还必须采用分步法，反应时间长。
另外，现有技术中尽管也有专利文件公开了采用复合物抗体进行检测的，但至今尚未发现有相关市售产品。因此，仍需要开发新的能够特异性检测PIC的相关检测产品
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种抗PIC的抗体、试剂盒及检测PIC的方法，以提供一种特异性高的PIC检测产品。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种抗PIC的抗体，该抗PIC的抗体包括6个CDR，6个CDR选自(i)或(ii)：其中(i)CDR1-VL1，具有SEQ ID NO：1所示序列：RASESVDSFGYSFX1H，其中X1是M或L；CDR2-VL1，具有SEQ ID NO：2所示序列：RASNLES；CDR3-VL1，具有SEQ ID NO：3所示序列：QQTNEDPX2T，其中X2是Y或F或W；CDR1-VH1，具有SEQ ID NO：4所示序列：SSWMN；CDR2-VH1，具有SEQ ID NO：5所示序列：RIYPGDGX3TNYNGKFKG，其中X3是D或H；和CDR3-VH1，具有SEQ ID NO：6所示序列：G X4PTTAYAMDY，其中X4是N、S或R；或者(ii)CDR1-VL2，具有SEQ ID NO：7所示序列：KASQDIKX5FLN，其中X5为S或N；CDR2-VL2，具有SEQ IDNO：8所示序列：YAX6SLAD，其中X6为R或T；CDR3-VL2，具有SEQ ID NO：9所示序列：LQHGESPFT；CDR1-VH2，具有SEQ ID NO：10所示序列：SX7WMH，其中X7为S或Y；CDR2-VH2，具有SEQ ID NO：11所示序列：X8IDPYDSETHYNQKFKD，其中X8为Y或R或N；和CDR3-VH2，具有SEQ ID NO：12所示序列：GYDRSFDX9，其中X9为Y或F。
进一步地，抗PIC的抗体选自如下野生型或如下任一种突变组合：
进一步地，抗PIC的抗体选自如下野生型或如下任一种突变组合：
进一步地，抗PIC的抗体还包括轻链可变区的骨架区和重链可变区的骨架区，其中，轻链可变区的骨架区包括FR1-VL1、FR2-VL1、FR3-VL1和FR4-VL1，重链可变区的骨架区包括FR1-VH1、FR2-VH1、FR3-VH1和FR4-VH1，或者，轻链可变区的骨架区包括FR1-VL2、FR2-VL2、FR3-VL2和FR4-VL2，重链可变区的骨架区包括FR1-VH2、FR2-VH2、FR3-VH2和FR4-VH2，其中，FR1-VL1具有SEQ ID NO：13：的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:13具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR2-VL1具有SEQ ID NO：14的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:14具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR3-VL1具有SEQ ID NO：15的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:15具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR4-VL1具有SEQ ID NO：16的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:16具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR1-VH1具有SEQ ID NO：17的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:17具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR2-VH1具有SEQ ID NO：18的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:18具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR3-VH1具有SEQ ID NO：19的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:19具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR4-VH1具有SEQ ID NO：20的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:20具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR1-VL2具有SEQ ID NO：21：的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:21具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR2-VL2具有SEQ ID NO：22的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:22具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR3-VL2具有SEQ ID NO：23的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:23具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR4-VL2具有SEQ ID NO：24的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:24具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR1-VH2具有SEQ ID NO：25的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:25具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR2-VH2具有SEQ ID NO：26的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:26具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR3-VH2具有SEQ ID NO：27的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:27具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR4-VH2具有SEQ ID NO：28的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:28具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；SEQ ID NO：13：DIVLTQSPASLAVSLGQRATLSC；SEQID NO：14：WYQQNPGQPPKLLIY；SEQ ID NO：15：GIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYFC；SEQ IDNO：16：FGGGAKLEIK；SEQ ID NO：17：QVQLQQSGPELVKPGASVKLSCKASGNAFS；SEQ ID NO：18：WVKQRPGQGLEWIG；SEQ ID NO：19：KATLTVDKSSSTVYMQLSSLTSVDSAVYFCGR；SEQ ID NO：20：WGQGTSVTVSS；SEQ ID NO：21：DIKMTQSPSSMFASLGERVTITC；SEQ ID NO：22：WYQQKPWRSPKTLIY；SEQ ID NO：23：GVPSRFSGSGSGQDFSLTISSLESDDAATYYC；SEQ ID NO：24：FGGGTKLEIK；SEQ ID NO：25：QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFT；SEQ ID NO：26：WVKQRPEQGLEWIG；SEQ ID NO：27：KAILTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAR；SEQ ID NO：28：WGQGTTLTVSS。
进一步地，抗PIC的抗体具有如下任意一种轻链可变区和重链可变区：(i)SEQ IDNO：29所示的轻链可变区VL1和SEQ ID NO：30所示的重链可变区VH1；SEQ ID NO：29：DIVLT QSPASLAVSLGQRATLSCRASESVDSFGYSFMHWYQQNPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINP VEADDVATYFCQQTNEDPYTFGGGAKLEIK；SEQ ID NO：30：QVQLQQSGPELVKPGASVKLSCKASGNAFSSSWMNWVKQRPGQGLEWIGRIYPGDGDTNYNGKFKGKATLTVDKSSSTVYMQLSSLTSVDSAVYFCGRGNPTTAYAMDYWGQGTSVTVSS；(ii)SEQ ID NO：31所示的轻链可变区VL2和SEQ ID NO：32所示的重链可变区VH2；SEQ ID NO：31：
DIKMTQSPSSMFASLGERVTITCKASQDIKSFLNWYQQKPWRSPKTLIYYATSLADGVPSRFSGSGSG QDFSLTISSLESDDAATYYCLQHGESPFTFGGGTKLEIK；SEQ ID NO：32：QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCK ASGYTFTSSWMHWVKQRPEQGLEWIGYIDPYDSETHYNQKFKDKAILTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGYDRSFDYWGQGTTLTVSS；(iii)与SEQ ID NO：29所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的轻链可变区和与SEQ ID NO：30所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的重链可变区；(iv)与SEQ ID NO：31所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的轻链可变区和与SEQ ID NO：32所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的重链可变区。
进一步地，抗体为全长抗体，全长抗体还包括轻链恒定区CL和重链恒定区CH，其中，轻链恒定区CL的序列为：1)SEQ ID NO：33；2)与SEQ ID NO：33所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；重链恒定区CH的序列为：1)SEQ ID NO：34；2)与SEQ ID NO：34所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列。
进一步地，抗PIC的抗体与PIC具有4.30*10-11≤Kd(M)≤7.58*10-9的亲和力；优选地，抗PIC的抗体是人的、人源化的或是嵌合的。
根据本申请的第二个方面，提供了一种分离的核酸分子，该分离的核酸分子编码上述任一种抗PIC的抗体。
根据本申请的第三个方面，提供了一种表达载体，表达载体包括上述分离的核酸分子。
根据本申请的第四个方面，提供了一种宿主细胞，该宿主细胞转染有上述表达载体。
根据本申请的第五个方面，提供了一种PIC检测试剂盒，该试剂盒包括上述任一种抗PIC的抗体。
进一步地，试剂盒包括两种抗PIC的抗体，其中一种为包被于磁球上的抗PIC的抗体，一种是标记的抗PIC的抗体；优选地，标记的抗PIC的抗体为ABEI标记的抗PIC抗体；优选地，试剂盒还包括校准品和/或质控品。
根据本申请的第五个方面，提供了一种检测PIC的方法，该方法包括：按照一步法双抗体夹心法使来自受试者的样品与上述任一种抗PIC的抗体接触以进行结合反应；检测结合反应是否产生免疫复合物，若产生免疫复合物，则表明PIC存在。
进一步地，该方法选自如下任意一种或多种：荧光免疫法、化学发光免疫法、胶体金免疫法、放射免疫法或酶联免疫法；优选地，化学发光免疫法为化学发光免疫双抗体夹心法；优选地，方法采用半自动免疫分析仪或全自动免疫分析仪进行分析。
进一步地，样品选自全血、血清或血浆中的至少一种，优选地，全血、血清或血浆来源于外周血。
应用本发明的技术方案，含有本申请CDRs的抗PIC的抗体对PIC具有更高亲和力和特异性，因而本申请提供的抗PIC的抗体组合应用于双抗体夹心法检测PIC时，能够通过一步法检测获得待测样本中是否含有PIC，在检测特异性和准确性较高的前提下，还能够大大提高检测速度和效率。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
术语解释：
Plg(Plasminogen，纤溶酶原)；
Plm(Plasmin，纤溶酶)；
α2-AP(α2-antiplasmin,α2-纤溶酶抑制剂)；
PIC(plasmin-α2-plasmin inhibitor complex)；
RNA(RibonucleicAcid，核糖核酸)；
PCR(Polymerase Chain Reaction，聚合酶链式反应)；
VL(抗体轻链可变区，variable region of light chain)；
VH(抗体重链可变区，variable region of heavy chain)；
CLIA(化学发光免疫分析法)；
BSA(牛血清白蛋白)；
NaN3(叠氮钠)；
ABEI[N-(4-氨丁基)-N-乙基异鲁米诺]；
TMB(四甲基联苯胺)；
HRP(Horseradish Peroxidase，辣根过氧化物酶)；
ELISA(酶联免疫吸附试验法)；
RLU(相对光单位)。
如背景技术所提到的，现有技术中尽管已有一些针对PIC的特异性抗体的报道，但仍存在更多的特异性检测产品的市场需求。因而，本申请从PIC免疫小鼠的淋巴细胞中提取总RNA，通过PCR的方式分别扩增出VL和VH片段，构建载体形成噬菌体展示文库，并通过采用噬菌体展示技术筛选到针对PIC具有高亲和力、高特异性的新位点抗体。
基于上述研究结果，在本申请一种典型的实施方式中，提供了一种抗PIC的抗体，该抗PIC的抗体包括6个CDR，这6个CDR选自(i)或(ii)：其中，(i)CDR1-VL1，具有SEQ ID NO：1所示序列：RASESVDSFGYSFX1H，其中X1是M或L；CDR2-VL1，具有SEQ ID NO：2所示序列：RASNLES；CDR3-VL1，具有SEQ ID NO：3所示序列：QQTNEDPX2T，其中X2是Y或F或W；CDR1-VH1，具有SEQ ID NO：4所示序列：SSWMN；CDR2-VH1，具有SEQ ID NO：5所示序列：RIYPGDGX3TNYNGKFKG，其中X3是D或H；和CDR3-VH1，具有SEQ ID NO：6所示序列：GX4PTTAYAMDY，其中X4是N、S或R；或者(ii)CDR1-VL2，具有SEQ ID NO：7所示序列：KASQDIKX5FLN，其中X5为S或N；CDR2-VL2，具有SEQ ID NO：8所示序列：YAX6SLAD，其中X6为R或T；CDR3-VL2，具有SEQ ID NO：9所示序列：LQHGESPFT；CDR1-VH2，具有SEQ ID NO：10所示序列：SX7WMH，其中X7为S或Y；CDR2-VH2，具有SEQ ID NO：11所示序列：X8IDPYDSETHYNQKFKD，其中X8为Y或R或N；和CDR3-VH2，具有SEQ ID NO：12所示序列：GYDRSFDX9，其中X9为Y或F。
含有上述CDRs的抗PIC的抗体对PIC具有更高亲和力和特异性，因而本申请提供的抗PIC的抗体组合应用于双抗体夹心法检测PIC时，能够通过一步法检测获得待测样本中是否含有PIC，在检测特异性和准确性较高的前提下，还能够大大提高检测速度和效率。
上述抗体的CDRs中，不同CDR上的X位置的氨基酸具有相同或类似的效果，因而不同抗体的不同CDR上的X位置的氨基酸可以任意组合。比如，CDR1-VL1中的X1为M时，CDR3-VL1中的X2可以是Y或F或W；同样地，CDR1-VL1中的X1为L时，CDR3-VL1中的X2可以是Y或F或W。因而，能够组合得到多种不同的抗PIC抗体。
在一些优选地实施例中，抗PIC的抗体选自下表中的任意一种：
在一些优选地实施例中，抗PIC的抗体选自下表中的任意一种：
需要说明的是，本申请的上述抗体的涵义包括抗体片段(包括但不限于Fab、Fab′、F(ab’)2、Fv、双抗体、scFv、scFv-Fcs、单结构域抗体、单链抗体、单重链抗体和单轻链抗体)或全长抗体，条件是它们表现出期望的生物活性(例如表位结合)。可以是单克隆抗体、多克隆抗体；单特异性抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、人源化抗体、嵌合抗体、共价修饰的抗体或抗体缀合物(例如缀合至可检测标记物的抗体)。其中，Fab，scFv，Fv，无论是一价还是二价，能同时含有VL和VH的结构即可实现与抗原PIC的结合，一价还是二价仅是结合强度及稳定性有些差异。
在一些优选的实施例中，抗PIC的抗体还包括轻链可变区的骨架区和重链可变区的骨架区，其中，轻链可变区的骨架区包括FR1-VL1、FR2-VL1、FR3-VL1和FR4-VL1，重链可变区的骨架区包括FR1-VH1、FR2-VH1、FR3-VH1和FR4-VH1，或者，轻链可变区的骨架区包括FR1-VL2、FR2-VL2、FR3-VL2和FR4-VL2，重链可变区的骨架区包括FR1-VH2、FR2-VH2、FR3-VH2和FR4-VH2，其中，FR1-VL1具有SEQ ID NO：13：的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:13具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR2-VL1具有SEQ ID NO：14的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:14具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR3-VL1具有SEQ ID NO：15的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:15具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR4-VL1具有SEQ ID NO：16的氨基酸序列或者与SEQID NO:16具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR1-VH1具有SEQID NO：17的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:17具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR2-VH1具有SEQ ID NO：18的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:18具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR3-VH1具有SEQ ID NO：19的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:19具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR4-VH1具有SEQ ID NO：20的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:20具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR1-VL2具有SEQ ID NO：21：的氨基酸序列或者与SEQID NO:21具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR2-VL2具有SEQID NO：22的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:22具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR3-VL2具有SEQ ID NO：23的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:23具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR4-VL2具有SEQ ID NO：24的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:24具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR1-VH2具有SEQ ID NO：25的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:25具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR2-VH2具有SEQ ID NO：26的氨基酸序列或者与SEQ IDNO:26具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR3-VH2具有SEQ IDNO：27的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:27具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；FR4-VH2具有SEQ ID NO：28的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:28具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列。
其中，SEQ ID NO：13：DIVLTQSPASLAVSLGQRATLSC；SEQ ID NO：14：WYQQNPGQPPKLLIY；SEQ ID NO：15：GIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYFC；SEQ ID NO：16：FGGGAKLEIK；SEQ ID NO：17：QVQLQQSGPELVKPGASVKLSCKASGNAFS；SEQ ID NO：18：WVKQRPGQGLEWIG；SEQ ID NO：19：KATLTVDKSSSTVYMQLSSLTSVDSAVYFCGR；SEQ ID NO：20：WGQGTSVTVSS；SEQ ID NO：21：DIKMTQSPSSMFASLGERVTITC；SEQ ID NO：22：WYQQKPWRSPKTLIY；SEQ ID NO：23：GVPSRFSGSGSGQDFSLTISSLESDDAATYYC；SEQ ID NO：24：FGGGTKLEIK；SEQ ID NO：25：QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFT；SEQ ID NO：26：WVKQRPEQGLEWIG；SEQ ID NO：27：KAILTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAR；SEQ ID NO：28：WGQGTTLTVSS。
在另一些优选的实施例中，抗PIC的抗体具有如下任意一种轻链可变区和重链可变区：(i)SEQ ID NO：29所示的轻链可变区VL1和SEQ ID NO：30所示的重链可变区VH1；或(ii)SEQ ID NO：31所示的轻链可变区VL2和SEQ ID NO：32所示的重链可变区VH2；或(iii)与SEQ ID NO：29所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的轻链可变区和与SEQ ID NO：30所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的重链可变区；或(iv)与SEQ ID NO：31所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的轻链可变区和与SEQ ID NO：32所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的重链可变区。
SEQ ID NO：29：
DIVLTQSPASLAVSLGQRATLSCRASESVDSFGYSFMHWYQQNPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSG SGSRTDFTLTINPVEADDVATYFCQQTNEDPYTFGGGAKLEIK；
SEQ ID NO：30：
QVQLQQSGPELVKPGASVKLSCKASGNAFSSSWMNWVKQRPGQGLEWIGRIYPGDGDTNYNGKFKGKA TLTVDKSSSTVYMQLSSLTSVDSAVYFCGRGNPTTAYAMDYWGQGTSVTVSS；
SEQ ID NO：31：
DIKMTQSPSSMFASLGERVTITCKASQDIKSFLNWYQQKPWRSPKTLIYYATSLADGVPSRFSGSGSG QDFSLTISSLESDDAATYYCLQHGESPFTFGGGTKLEIK；
SEQ ID NO：32：
QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTSSWMHWVKQRPEQGLEWIGYIDPYDSETHYNQKFKDKA ILTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGYDRSFDYWGQGTTLTVSS。
在一些优选的实施例中，抗PIC的抗体与PIC的亲和力为4.30*10-11≤Kd(M)≤7.58*10-9。
本申请中的抗体可以衍生自任何物种。在示例性的实施方案中，抗体是人抗体。在其他实施方案中，抗体是小鼠抗体。本申请中的全长抗体可具有人的Fc，即IgG1、IgG2、IgG3或IgG4，也可以具有小鼠Fc，即IgG1、IgG2a、IgG2b或IgG3。
在一种优选的实施例中，该抗PIC的抗体为全长抗体，进一步还包括轻链恒定区CL和重链恒定区CH；更优选地，轻链恒定区CL选自Cκ或Cλ；优选地，重链恒定区CH选自人源或鼠源的免疫球蛋白的轻链恒定区；优选地，人源的免疫球蛋白选自如下任意一种：IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA、IgD或IgE；优选地，鼠源的免疫球蛋白选自如下任意一种：IgGl、IgG2a、IgG2b或IgG3。
在一种优选的实施例中，该抗PIC的抗体为全长抗体，该抗PIC的抗体还包括轻链恒定区CL和重链恒定区CH，其中，轻链恒定区CL的序列为：(1)SEQ ID NO：33；(2)与SEQ IDNO：33所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；重链恒定区CH的序列为：(1)SEQ ID NO：34；(2)与SEQ ID NO：34所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列。
同源性(identity)，本申请中指多核苷酸或多肽与另一多核苷酸或多肽具有一定百分比的序列同源性，这意味着在比对时，在比较两个序列时，碱基或氨基酸的百分比是相同的，并且处于相同的相对位置。为了确定序列同源性，可以使用多种方便的方法和计算机程序(例如BLAST、T-COFFEE、MUSCLE、MAFFT等)对序列进行比对，所述方法和计算机程序可在包括ncbi.nlm.nili.gov/BLAST、ebi.ac.uk/Tools/msa/tcoffee/、ebi.ac.uk/Tools/msa/muscle/、mafft.cbrc.jp/alignment/software/的网站上获得。
在一种优选的实施例中，上述抗PIC的抗体与PIC具有Kd(M)≥4.30*10-11的亲和力。具有上述同源性的序列形成的抗PIC的抗体，若与PIC的亲和力满足Kd(M)≤4.30*10-11的条件的，也在本申请的保护范围内。
上述抗PIC的抗体的来源并无特殊限定，可以是人的、人源化的或是嵌合的。更优选是人源化的或人的，有助于提高特异性。
在本申请第二种典型的实施方式中，提供了一种核酸分子，该核酸分子编码上述抗PIC的抗体，或该抗体的片段，比如轻链或重链。还提供了一种核酸分子组合，核酸分子组合包括编码上述抗PIC的抗体的轻链的核酸分子和编码上述抗PIC的抗体的重链的核酸分子。
在本申请第三种典型的实施方式中，提供了一种重组表达载体，该重组质粒包括上述核酸分子或核酸分子组合。
在本申请第四种典型的实施方式中，提供了一种宿主细胞，该宿主细胞转染有上述包括核酸分子组合的重组质粒。
在本申请第五种典型的实施方式中，提供了一种PIC检测试剂盒，该试剂盒包括上述抗PIC的抗体。
在一种优选的实施例中，试剂盒包括两种抗PIC抗体，其中一种为包被于磁球上的抗PIC抗体，一种是标记的抗PIC抗体，优选地，标记的抗PIC抗体为ABEI标记的抗PIC抗体；更优选地，试剂盒还包括校准品、质控品、发光标记物标记的抗人免疫球蛋白抗体以及样本稀释液中的任意一种或多种；更优选地，发光标记物为鲁米诺、异鲁米诺、异鲁米诺衍生物、辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶，抗人免疫球蛋白抗体为抗人IgA、抗人IgM、抗人IgG、抗人LgD或抗人LgE中的一种或多种；更优选地，试剂缓冲液为Tris-HCl缓冲液、磷酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液或硼酸盐缓冲液；更优选地，样本稀释液为磷酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液或生理盐水。
在一些优选的实施例中，包被于磁球上的抗PIC抗体与ABEI标记的抗PIC抗体的工作浓度相同，比如均为1.1ng/mL。
在一些的实施例中，包被于磁球上的抗PIC抗体与标记的抗PIC抗体的加样质量比相同，比如均为1:1。
在一些实施例中，包被于磁球上的抗体可以相对过量，具体本领域技术人员可以结合实际情况进行调整，比如包被于磁球上的抗PIC抗体与标记的抗PIC抗体的加样质量比1.1:1-20:1。
在本申请第六种典型的实施方式中，提供了一种检测PIC的方法，该方法包括：按照一步法双抗体夹心法使来自受试者的样品与上述抗PIC的抗体接触以进行结合反应；检测结合反应是否产生免疫复合物，若产生免疫复合物，则表明PIC存在。
本申请的抗体具有更高的亲和力和特异性，因而采用本申请的抗体组合使用双抗体夹心法检测样品时，仅采用一步法进行检测即可实现对PIC抗原的检测，相比现有技术中的两步法检测法，在检测特异性和准确性高的基础上，大大缩短了检测时间，提高了检测速度和效率。
在一种优选的实施例中，上述方法选自如下任意一种或多种：荧光免疫法、化学发光免疫法、胶体金免疫法、放射免疫法或酶联免疫法；优选地，化学发光免疫法为化学发光免疫双抗体夹心法；优选地，方法采用半自动免疫分析仪或全自动免疫分析仪进行分析。
在一种优选的实施例中，样品选自全血、血清或血浆中的至少一种，其中，全血、血清或血浆来源于外周血。
下面将结合具体的实施例来进一步说明本申请的方案。
实施例1抗体筛选
以下实施例的抗体筛选采用杂交瘤融合技术进行筛选。杂交瘤融合技术的原理是将免疫小鼠脾脏的淋巴B细胞，通过与小鼠的骨髓瘤细胞进行融合杂交，从而使淋巴B细胞获得无限增殖的能力，通过对细胞上清中的分泌抗体进行ELISA检测，筛选出表达特异性抗体的细胞孔，进一步亚克隆获得单克隆抗体。经过完整的体内免疫流程，动物体能产生高亲和力的抗体，结合电融合保证较高的融合率，及较大数量的融合，能筛选到性能优秀的目标抗体。
本实施例的具体步骤如下：
1、免疫小鼠
外购plasmin(meridian,A50192H)和anti-α2plasmin(meridian,A50112H)，合成PIC作为免疫原，取6-8周龄SPF级Balb/c小鼠，以含PIC 200μg/500μl的抗原与等体积弗氏完全佐剂充分乳化，皮下多点注射，间隔3周用弗氏不完全佐剂乳化抗原，皮下多点注射，皮下加强免疫2次，最后一针腹腔注射进行加强。
2、细胞融合及亚克隆筛选
取免疫小鼠的脾脏，研磨分离获得分散的单个脾细胞，利用PEG将脾细胞和骨髓瘤细胞混合，培养基终止后离心复溶铺至96孔板中，一周后换液，取上清进行酶免间接法检测，包被抗原为Plg/α2-AP/PIC三种，挑选出分别针对三种包被原的高值阳性孔，进一步通过有限稀释法进行亚克隆，培养一周后继续进行酶免间接法检测，挑选高值孔进行有限稀释，重复3-4次，直至检测孔全部为阳性且孔内细胞为单集落时挑OD值最高的细胞孔进行扩培，得到系列特异性杂交瘤细胞株，其中包括针对PIC的杂交瘤细胞株1C2B4(记为WT1)和5B3F6(记为WT2)。
3、阳性细胞株腹水制备
对单集落细胞进行扩大培养，注射到提前接种IFA的小鼠体内制备腹水，收集腹水获得针对不同表位的抗体，经过SPA法亲和纯化。
实施例2表达质粒构建
1、基因调取
扩增培养1C2B4和5B3F6杂交瘤细胞株，提取mRNA，通过反转录获得cDNA产物，该产物用rTaq DNA聚合酶进行加A反应后插入到pMD-18T载体中，转化到DH5α感受态细胞中分别取Heavy chain和Light chain基因克隆各10个菌斑送基因测序公司进行测序。
2、抗体可变区基因的序列分析
将上述测序所得的基因序列放在IMGT抗体数据库中进行分析，并利用VNTI11.5软件进行分析，确定重链和轻链引物对扩增出的基因都是正确的。
测序结果如下：
核苷酸序列：
SEQ ID NO：41(VL1)
gacattgtgctgacccaatctccagccagcctggccgtgagcctgggccagagggccaccctgagctgcagggccagcgagagcgtggacagcttcggctacagcttcatgcactggtaccagcagaaccccggccagccccccaagctgctgatctacagggccagcaacctggagagcggcatccccgccaggttcagcggcagcggcagcaggaccgacttcaccctgaccatcaaccccgtggaggccgacgacgtggccacctacttctgccagcagaccaacgaggacccctacaccttcggcggcggcgccaagctggagatcaag。
SEQ ID NO：42(VH1)
caggttcagctgcagcagtctggccccgagctggtgaagcccggcgccagcgtgaagctgagctgcaaggccagcggcaacgccttcagcagcagctggatgaactgggtgaagcagaggcccggccagggcctggagtggatcggcaggatctaccccggcgacggcgacaccaactacaacggcaagttcaagggcaaggccaccctgaccgtggacaagagcagcagcaccgtgtacatgcagctgagcagcctgaccagcgtggacagcgccgtgtacttctgcggcaggggcaaccccaccaccgcctacgccatggactactggggccagggcaccagcgtgaccgtgagcagc。
SEQ ID NO：43(VL2)
gacatcaagatgacccagtctccatctagcatgttcgccagcctgggcgagagggtgaccatcacctgcaaggccagccaggacatcaagagcttcctgaactggtaccagcagaagccctggaggagccccaagaccctgatctactacgccaccagcctggccgacggcgtgcccagcaggttcagcggcagcggcagcggccaggacttcagcctgaccatcagcagcctggagagcgacgacgccgccacctactactgcctgcagcacggcgagagccccttcaccttcggcggcggcaccaagctggagatcaag。
SEQ ID NO：44(VH2)
caggtccaactgcagcagcctggcgccgagctggtgaggcccggcgccagcgtgaagctgagctgcaaggccagcggctacaccttcaccagcagctggatgcactgggtgaagcagaggcccgagcagggcctggagtggatcggctacatcgacccctacgacagcgagacccactacaaccagaagttcaaggacaaggccatcctgaccgtggacaagagcagcagcaccgcctacatgcagctgagcagcctgaccagcgaggacagcgccgtgtactactgcgccaggggctacgacaggagcttcgactactggggccagggcaccaccctgaccgtgagcagc。
对应的氨基酸序列如下：
SEQ ID NO：29：(VL1)
DIVLTQSPASLAVSLGQRATLSCRASESVDSFGYSFMHWYQQNPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSG SGSRTDFTLTINPVEADDVATYFCQQTNEDPYTFGGGAKLEIK。
SEQ ID NO：30：(VH1)
QVQLQQSGPELVKPGASVKLSCKASGNAFSSSWMNWVKQRPGQGLEWIGRIYPGDGDTNYNGKFKGKA TLTVDKSSSTVYMQLSSLTSVDSAVYFCGRGNPTTAYAMDYWGQGTSVTVSS。
SEQ ID NO：31：(VL2)
DIKMTQSPSSMFASLGERVTITCKASQDIKSFLNWYQQKPWRSPKTLIYYATSLADGVPSRFSGSGSG QDFSLTISSLESDDAATYYCLQHGESPFTFGGGTKLEIK。
SEQ ID NO：32：(VH2)
QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTSSWMHWVKQRPEQGLEWIGYIDPYDSETHYNQKFKDKA ILTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGYDRSFDYWGQGTTLTVSS。
SEQ ID NO：33：(CL---轻链恒定区)
RADAAPTVSIFPPSSEQLTSGGASVVCFLNNFYPKDINVKWKIDGSERQNGVLNSWTDQDSKDSTYSMSSTLTLTKDEYERHNSYTCEATHKTSTSPIVKSFNRNEC。
SEQ ID NO：34：(CH---重链恒定区)
AKTTPPSVYPLAPGSAAQTNSMVTLGCLVKGYFPEPVTVTWNSGSLSSGVHTFPAVLQSDLYTLSSSVTVPSSTWPSETVTCNVAHPASSTKVDKKIVPRDCGCKPCICTVPEVSSVFIFPPKPKDVLTITLTPKVTCVVVDISKDDPEVQFSWFVDDVEVHTAQTQPREEQFNSTFRSVSELPIMHQDWLNGKEFKCRVNSAAFPAPIEKTISKTKGRPKAPQVYTIPPPKEQMAKDKVSLTCMITDFFPEDITVEWQWNGQPAENYKNTQPIMDTDGSYFVYSKLNVQKSNWEAGNTFTCSVLHEGLHNHHTEKSLSHSPGK。
3、重组抗体表达质粒的构建
以pFastBacTMdual为载体构建重组抗体表达载体，该表达载体已经引入BamHI/SalI/XhoI/KpnI等多克隆酶切位点，简称为pFD载体；根据上述pMD-18T中抗体可变区基因测序结果，设计引物的VL和VH基因特异性引物(见表1)，两段分别带有相应的酶切位点和保护碱基，通过PCR扩增方法扩出0.73kb的Light chain基因片段和1.4kb的Heavy chain基因片段。
先对Heavy chain和pFastBacTMdual采用BamHI/SalI双酶切，回收目的片段和载体并纯化后进行连接转化，验证合格后提取已连接上Heavy chain的载体，简称为pFD-H，然后对此载体和Light chain基因片段采用XhoI/KpnI双酶切，回收目的片段和载体并纯化后进行连接转化，验证合格后提取已连接上Heavy和light chain的载体，简称为pFD-HL，将重组质粒转化至E.coli DH10Bac(含有AcNPV的Bacmid和辅助质粒)感受态细胞中，涂布于含卡那霉素(50μg/mL)、四环素(10μg/mL)、庆大霉素(7μg/mL)、IPTG(40μg/mL)、X-gal(100μg/mL)的LB琼脂平板上。通过蓝白斑筛选挑取白色菌落，用Omega BAC/PAC提取试剂盒提取重组bacmid。
表1：
引物编号 碱基序列
F-H1 5’-gtacGGATCCcaggttcagctgcagcagtct-3’(SEQ ID NO：35)
F-L1 5’-gtacCTCGAGgacattgtgctgacccaatctcca-3’(SEQ ID NO：36)
F-H2 5’-gtacGGATCCcaggtccaactgcagcagcct-3’(SEQ ID NO：37)
F-L2 5’-gtacCTCGAGgacatcaagatgacccagtctccat-3’(SEQ ID NO：38)
R-H 5’-gtacGTCGACtttaccaggagagtgggagaggc-3’(SEQ ID NO：39)
R-L 5’-gtacGGTACCacactcattcctgttgaagctcttg-3’(SEQ ID NO：40)
实施例3重组抗体表达
按照Gibco公司脂质体转染说明书将实施例2中提取的重组bacmid转染Sf9细胞，传代密度1*10^6/ml，28℃培养6d，在避光条件下，过0.22μm滤器过滤收集得到的上清即为第1(P1)代病毒液。将P1病毒再次感染Sf9细胞获得高滴度的重组病毒液，如此获得P2/P3病毒液，最后将P3代病毒液转入HF细胞，28℃培养3d，收集上清。
按照GE AKTA Pure蛋白质分离纯化系统说明书的操作，对上述表达上清进行SPA柱纯化，获得纯化的重组抗体。
实施例4、抗体特异性验证
通过ELISA法检测抗体的特异性，结果见下表。在下表中，“+”示抗体与抗原有特异性反应，“-”示抗体不与抗原反应。
表2不同抗体的特异性检测
Plg抗体来源：meridian，H86431M；；
AP抗体来源：meridian，H63710M；
(以下所涉及Plg抗体和AP抗体来源与此相同)。
实施例5、抗体结合亲和力验证
利用BIAcore技术来检测2株抗体和外购Plg和α2-AP抗体(如表3所示)与PIC抗原的结合亲和力。实验过程按照BiacoreR 3000,Biacore AB说明书进行。通过胺偶联化学将山羊抗鼠lgG Fc区的特异性亲和F(ab')片段(Jackson lmmunoResearch)固定在CM5传感器芯片上。选择HBS-EP作为流动缓冲液，流速为10μL/min。注射10μL的抗体(4μg/mL)后，以30μL/min的流速滴定不同浓度的PIC抗原。抗体亲和力在PIC抗原浓度2.1nM、4.2nM、8.4nM及16.8nM四个梯度下测定。平衡解离常数Kd(M)代表平衡状态下抗原抗体的解离程度，Kd(M)越小说明抗原抗体亲和力越强。
表3不同抗体针对PIC复合物的平衡解离常数Kd(M)
Ka(M-1s-1) Kd(s-1) Kd(M)
Plg抗体 4.69*105 6.85*10-5 1.46*10-10
α2-AP抗体 4.24*105 6.42*10-5 1.51*10-10
PIC抗体(WT1) 6.59*104 8.54*10-5 1.29*10-9
PIC抗体(WT2) 7.89*104 9.54*10-5 1.21*10-9
实施例6、自产抗体对前体分子纤溶酶原和α2-纤溶酶抑制剂的抗干扰验证
检测原理：采用化学发光免疫双抗体夹心法，一株单克隆抗体包被磁球、ABEI标记另一株单克隆抗体，其中包被抗体：标记抗体为10:1，将样本、磁性微球、ABEI依次加到反应杯中37℃温育10min，外加磁场沉淀，去掉上清液，用洗液清洗沉淀复合物3次，直接进入样品测量室，仪器自动泵入发光底物1和2，自动监测3s内发出的相对光强度(RLU)。(实施例7-11使用的试剂盒的原理与此相同，仅替换抗体)
选取PIC零浓度血浆基础样本；通过向零浓度基础样本中添加PIC企业校准品(PIC浓度为40μg/mL，10mmol/L pH7.4，PBS缓冲液)，配置理论浓度为0.200μg/mL，1.00μg/mL和20.0μg/mL，获得3水平基础样本，样本各6mL。
纤溶酶原母液配制：30mg纤溶酶原加入到1mL 10mmol/LpH7.4，PBS缓冲液中；
α2纤溶酶抑制剂母液配制：10mg人纤溶酶原加入到1mL 10mmol/L pH7.4，PBS缓冲液中；
制备干扰样本：将三水平基础样本分为4份，分别向其中的3份中添加相应体积的干扰物储备液(指上面的母液)和干扰物储备液配制用溶剂(即10mmol/LpH7.4，PBS缓冲液)，得到3个含不同干扰物浓度水平的分析样本(C1、C2、C3)。未做任何添加的样本记作C0。干扰物储备液、溶剂和基础样本的加入体积如下表所示：
表4：
根据公式(14)、(15)计算干扰率：
注：*相对对照组样本结果均值还原浓度
①按1:99配制干扰评估用样本时，相对对照组样本结果均值还原浓度等于相对对照组样本测定结果均值除以0.99；
②按1:9配制干扰评估用样本时，相对对照组样本结果均值还原浓度等于相对对照组样本测定结果均值除以0.90。
若干扰率的绝对值≤10％，则说明对检测结果无明显干扰；若干扰率的绝对值＞10％，则属于说明对检测结果有干扰。
表5不同抗体搭配方案对前体分子的抗干扰验证
/>
结果分析：通过在零浓度稀释液中添加不同浓度前体分子(纤溶酶原和α2纤溶酶抑制剂)，验证六组搭配方案对前体分子的抗干扰性，结果发现两株针对PIC复合物的单抗组成的检测方案，对纤溶酶原和α2纤溶酶抑制剂的抗干扰性最强，效果最好，几乎不受干扰。
实施例7、不同抗体搭配方案对截断值附近样本准确度的影响
选取PIC零浓度血浆基础样本，通过添加PIC复合物(PIC浓度为40μg/mL，10mmol/LpH7.4，PBS缓冲液)的方式配置5例终浓度在截断值附近(0.8μg/mL)的PIC血浆样本A1-A5。采用不同自产抗体搭配方案配置试剂盒(抗体搭配方式与实施例6设置相同)，分别检测各样本中PIC浓度，并计算平均浓度，判断阴阳性。
表6不同抗体搭配方案验证对截断值附近样本准确度的影响
结果分析：平行比较六组搭配方案，发现血浆样本中存在的前体分子纤溶酶原和α2纤溶酶抑制剂，会对Plg抗体或α2-AP抗体组成的检测方案造成干扰，导致样本检测准确度偏低。前体分子浓度越高，干扰越大，会严重影响截断值附近样本的准确度，导致阴阳性判读失误。
实施例8、不同抗体搭配方案验对低值样本灵敏度的影响
选取PIC零浓度血浆基础样本,通过向零浓度样本中添加PIC企业校准品(PIC浓度为40μg/mL，10mmol/L pH7.4，PBS缓冲液)，配置理论浓度为0.025μg/mL，0.050μg/mL，0.100μg/mL、0.200μg/mL、0.400μg/mL和0.800μg/mL样本，获得6个低水平样本。采用不同自产抗体搭配方案配置试剂盒(抗体搭配方式与实施例6设置相同)，分别检测6个低水平样本。
表7验证不同抗体搭配方案对低值样本灵敏度的影响
结果分析：平行比较六组搭配方案，发现仅有PIC单抗(WT1)搭配PIC单抗(WT2)方案在0.025μg/mL处与零浓度标准品区分最佳，样本6与零浓度校准品的比值越大(说明低值区分更好，低值灵敏度越高)；而其他方案均无法满足，分析是受到血浆样本中存在的高浓度纤溶酶原和α2纤溶酶抑制剂的干扰，导致检测的低值样本灵敏度不够。
实施例9、线性范围
选取PIC零浓度血浆基础样本,，配置成不同理论浓度的线性范围内样本，浓度分别为0.100μg/mL、0.500μg/mL、1.000μg/mL、10.0μg/mL、20.0μg/mL、40.0μg/mL，并检测稀释液样本，采用各搭配方案(抗体搭配方式与实施例6设置相同)检测样本，其中可以发现PIC抗体的搭配方案检测样本的区分更好，抗干扰能力更强，线性相关系数更好。
表8不同抗体搭配方案的线性范围比较
实施例10：HOOK效应
选取PIC零浓度血浆基础样本,采用PIC企业校准品(PIC浓度为400μg/mL，10mmol/L、pH7.4的PBS缓冲液)配置PIC高浓度样本，理论浓度分别为40μg/mL、80μg/mL、100μg/mL、200μg/mL和400μg/mL，而市场中购买的Plg抗体和α2-AP抗体进行配对方案检测，在100μg/mL往上出现明显的HOOK效应，而本申请的PIC抗体配对方案在400μg/mL浓度范围内未出现明显的HOOK效应；说明针对PIC复合物抗体的配对方案检测效果更优。
表9不同抗体搭配方案(抗体搭配方式与实施例6设置相同)的HOOK效应比较
实施例11、自产PIC抗体搭配方案与某商用方案比对
将自产PIC抗体(WT1，标记抗体)搭配PIC抗体(WT2，包被抗体)方案与某商用产品进行性能比对，结果示于表10。其中和某商业化的试剂盒比较，本申请采用一步法可节约耗材，检测效率更高，第一个出结果的时间在15min，检测时间更短，出结果较快。另外，本申请的LoB可达到0.03μg/mL，精密度小于5％，试剂性能更优。
表10新产业与Sysmex商业试剂比对结果
从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：本发明通过噬菌体展示技术制备的高亲和力的PIC新抗体，高亲和力特异性识别PIC复合物，而不与纤溶酶原、纤溶酶和α2纤溶酶抑制剂发生交叉反应，解决了来自血液的大量存在的前体分子纤溶酶原和α2纤溶酶抑制剂的干扰，提高了检测的抗干扰性、灵敏度和准确性。同时，本发明采用一步法完成检测，可显著提高检验效率。
实施例12 PIC抗体突变体
在本申请的上述抗PIC的新抗体基础上，为了进一步提高其与PIC的亲和力，申请人进一步对上述两种野生型抗体的轻链CDR及重链CDR进行了突变。并对各种突变后获得的抗体对PIC复合物的特异性和抗体亲和力进行了检测。具体的突变位点组合的突变抗体见下表11和表12。
表11：与抗PIC抗体(WT1)的亲和力有关的突变位点
表12：与抗PIC抗体(WT2)的亲和力有关的突变位点
/>
对上述突变株通过ELISA法检测抗体的特异性，发现上述突变株与PIC复合物均能发生特异性反应，与游离态的Plg和α2-AP均不发生反应。
表13：
/>
/>
对上述突变抗体的亲和力进行检测：
利用BIAcore技术检测实施例1中抗体与突变抗体与PIC抗原的结合亲和力。实验过程按照BiacoreR 3000，Biacore AB说明书进行。通过胺偶联化学将山羊抗鼠lgG Fc区的特异性亲和F(ab')片段(Jackson lmmunoResearch)固定在CM5传感器芯片上。选择HBS-EP作为流动缓冲液，流速为10μL/min。注射10μL的自产抗体(4μg/mL)后，以30μL/min的流速滴定不同浓度的PIC抗原。抗体亲和力在PIC抗原浓度2.1nM、4.2nM、8.4nM、16.8nM四个梯度下测定。平衡解离常数Kd(M)代表平衡状态下抗原抗体的解离程度，Kd(M)越小说明抗原抗体亲和力越强。
表14：
/>
/>
从上述突变体抗体与PIC抗原的亲和力检测结果可以看出，这些突变体抗体也均具有较高的亲和力。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司
<120> 抗PIC的抗体、试剂盒及检测PIC的方法
<130> PN163100SZSW
<160> 44
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> SITE
<222> (14)..(14)
<223> Xaa是M或L
<400> 1
Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Phe Gly Tyr Ser Phe Xaa His
1 5 10 15
<210> 2
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(7)
<223> CDR2-VL1
<400> 2
Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser
1 5
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> SITE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是Y或F或W
<400> 3
Gln Gln Thr Asn Glu Asp Pro Xaa Thr
1 5
<210> 4
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(5)
<223> CDR1-VH1
<400> 4
Ser Ser Trp Met Asn
1 5
<210> 5
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> SITE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa是D或H
<400> 5
Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Xaa Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 6
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> SITE
<222> (2)..(2)
<223> Xaa是N、S或R；
<400> 6
Gly Xaa Pro Thr Thr Ala Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> SITE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa为S或N
<400> 7
Lys Ala Ser Gln Asp Ile Lys Xaa Phe Leu Asn
1 5 10
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> SITE
<222> (3)..(3)
<223> Xaa为R或T
<400> 8
Tyr Ala Xaa Ser Leu Ala Asp
1 5
<210> 9
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> SITE
<222> (1)..(9)
<223> CDR3-VL2
<400> 9
Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Phe Thr
1 5
<210> 10
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> SITE
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<400> 10
Ser Xaa Trp Met His
1 5
<210> 11
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> SITE
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<223> Xaa为Y或R或N
<400> 11
Xaa Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 12
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> SITE
<222> (8)..(8)
<223> Xaa为Y或F
<400> 12
Gly Tyr Asp Arg Ser Phe Asp Xaa
1 5
<210> 13
<211> 23
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 13
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 14
<211> 15
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 14
Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 15
<211> 32
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 15
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Asn Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 16
<211> 10
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 16
Phe Gly Gly Gly Ala Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 17
<211> 30
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 17
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asn Ala Phe Ser
20 25 30
<210> 18
<211> 14
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 18
Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 19
<211> 32
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 19
Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr Met Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Thr Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Gly Arg
20 25 30
<210> 20
<211> 11
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 20
Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 21
<211> 23
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 21
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Phe Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys
20
<210> 22
<211> 15
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 22
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Trp Arg Ser Pro Lys Thr Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 23
<211> 32
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 23
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Gln Asp Phe Ser
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 24
<211> 10
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 24
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 25
<211> 30
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 25
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 26
<211> 14
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 26
Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 27
<211> 32
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 27
Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 28
<211> 11
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 28
Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 29
<211> 111
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 29
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Phe
20 25 30
Gly Tyr Ser Phe Met His Trp Tyr Gln Gln Asn Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Thr Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Ala Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 30
<211> 120
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 30
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Asn Ala Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Trp Met Asn Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Arg Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asn Tyr Asn Gly Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Val Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Gly Arg Gly Asn Pro Thr Thr Ala Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 31
<211> 107
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 31
Asp Ile Lys Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Met Phe Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Glu Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Ile Lys Ser Phe
20 25 30
Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Trp Arg Ser Pro Lys Thr Leu Ile
35 40 45
Tyr Tyr Ala Thr Ser Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Gln Asp Phe Ser Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Ser
65 70 75 80
Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln His Gly Glu Ser Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
<210> 32
<211> 117
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 32
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Ser
20 25 30
Trp Met His Trp Val Lys Gln Arg Pro Glu Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asp Pro Tyr Asp Ser Glu Thr His Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Ile Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Tyr Asp Arg Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 33
<211> 107
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 33
Arg Ala Asp Ala Ala Pro Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser Glu
1 5 10 15
Gln Leu Thr Ser Gly Gly Ala Ser Val Val Cys Phe Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Lys Asp Ile Asn Val Lys Trp Lys Ile Asp Gly Ser Glu Arg
35 40 45
Gln Asn Gly Val Leu Asn Ser Trp Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Met Ser Ser Thr Leu Thr Leu Thr Lys Asp Glu Tyr Glu
65 70 75 80
Arg His Asn Ser Tyr Thr Cys Glu Ala Thr His Lys Thr Ser Thr Ser
85 90 95
Pro Ile Val Lys Ser Phe Asn Arg Asn Glu Cys
100 105
<210> 34
<211> 324
<212> PRT
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 34
Ala Lys Thr Thr Pro Pro Ser Val Tyr Pro Leu Ala Pro Gly Ser Ala
1 5 10 15
Ala Gln Thr Asn Ser Met Val Thr Leu Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp Asn Ser Gly Ser Leu Ser Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Asp Leu Tyr Thr Leu
50 55 60
Ser Ser Ser Val Thr Val Pro Ser Ser Thr Trp Pro Ser Glu Thr Val
65 70 75 80
Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr Lys Val Asp Lys Lys
85 90 95
Ile Val Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Ile Cys Thr Val Pro
100 105 110
Glu Val Ser Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Val Leu
115 120 125
Thr Ile Thr Leu Thr Pro Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Ile Ser
130 135 140
Lys Asp Asp Pro Glu Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asp Asp Val Glu
145 150 155 160
Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr
165 170 175
Phe Arg Ser Val Ser Glu Leu Pro Ile Met His Gln Asp Trp Leu Asn
180 185 190
Gly Lys Glu Phe Lys Cys Arg Val Asn Ser Ala Ala Phe Pro Ala Pro
195 200 205
Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Arg Pro Lys Ala Pro Gln
210 215 220
Val Tyr Thr Ile Pro Pro Pro Lys Glu Gln Met Ala Lys Asp Lys Val
225 230 235 240
Ser Leu Thr Cys Met Ile Thr Asp Phe Phe Pro Glu Asp Ile Thr Val
245 250 255
Glu Trp Gln Trp Asn Gly Gln Pro Ala Glu Asn Tyr Lys Asn Thr Gln
260 265 270
Pro Ile Met Asp Thr Asp Gly Ser Tyr Phe Val Tyr Ser Lys Leu Asn
275 280 285
Val Gln Lys Ser Asn Trp Glu Ala Gly Asn Thr Phe Thr Cys Ser Val
290 295 300
Leu His Glu Gly Leu His Asn His His Thr Glu Lys Ser Leu Ser His
305 310 315 320
Ser Pro Gly Lys
<210> 35
<211> 31
<212> DNA
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 35
gtacggatcc caggttcagc tgcagcagtc t 31
<210> 36
<211> 34
<212> DNA
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 36
gtacctcgag gacattgtgc tgacccaatc tcca 34
<210> 37
<211> 31
<212> DNA
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 37
gtacggatcc caggtccaac tgcagcagcc t 31
<210> 38
<211> 35
<212> DNA
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 38
gtacctcgag gacatcaaga tgacccagtc tccat 35
<210> 39
<211> 33
<212> DNA
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 39
gtacgtcgac tttaccagga gagtgggaga ggc 33
<210> 40
<211> 35
<212> DNA
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 40
gtacggtacc acactcattc ctgttgaagc tcttg 35
<210> 41
<211> 333
<212> DNA
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 41
gacattgtgc tgacccaatc tccagccagc ctggccgtga gcctgggcca gagggccacc 60
ctgagctgca gggccagcga gagcgtggac agcttcggct acagcttcat gcactggtac 120
cagcagaacc ccggccagcc ccccaagctg ctgatctaca gggccagcaa cctggagagc 180
ggcatccccg ccaggttcag cggcagcggc agcaggaccg acttcaccct gaccatcaac 240
cccgtggagg ccgacgacgt ggccacctac ttctgccagc agaccaacga ggacccctac 300
accttcggcg gcggcgccaa gctggagatc aag 333
<210> 42
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<212> DNA
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 42
caggttcagc tgcagcagtc tggccccgag ctggtgaagc ccggcgccag cgtgaagctg 60
agctgcaagg ccagcggcaa cgccttcagc agcagctgga tgaactgggt gaagcagagg 120
cccggccagg gcctggagtg gatcggcagg atctaccccg gcgacggcga caccaactac 180
aacggcaagt tcaagggcaa ggccaccctg accgtggaca agagcagcag caccgtgtac 240
atgcagctga gcagcctgac cagcgtggac agcgccgtgt acttctgcgg caggggcaac 300
cccaccaccg cctacgccat ggactactgg ggccagggca ccagcgtgac cgtgagcagc 360
<210> 43
<211> 321
<212> DNA
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 43
gacatcaaga tgacccagtc tccatctagc atgttcgcca gcctgggcga gagggtgacc 60
atcacctgca aggccagcca ggacatcaag agcttcctga actggtacca gcagaagccc 120
tggaggagcc ccaagaccct gatctactac gccaccagcc tggccgacgg cgtgcccagc 180
aggttcagcg gcagcggcag cggccaggac ttcagcctga ccatcagcag cctggagagc 240
gacgacgccg ccacctacta ctgcctgcag cacggcgaga gccccttcac cttcggcggc 300
ggcaccaagc tggagatcaa g 321
<210> 44
<211> 351
<212> DNA
<213> 鼠源(Mus musculus)
<400> 44
caggtccaac tgcagcagcc tggcgccgag ctggtgaggc ccggcgccag cgtgaagctg 60
agctgcaagg ccagcggcta caccttcacc agcagctgga tgcactgggt gaagcagagg 120
cccgagcagg gcctggagtg gatcggctac atcgacccct acgacagcga gacccactac 180
aaccagaagt tcaaggacaa ggccatcctg accgtggaca agagcagcag caccgcctac 240
atgcagctga gcagcctgac cagcgaggac agcgccgtgt actactgcgc caggggctac 300
gacaggagct tcgactactg gggccagggc accaccctga ccgtgagcag c 351

Claims (15)

1.一种抗PIC的抗体，其特征在于，所述抗体包括6个CDR，6个所述CDR选自(i)或(ii)：
(i)
CDR1-VL1，具有SEQ ID NO：1所示序列：RASESVDSFGYSFX1H，其中X1是M或L；
CDR2-VL1，具有SEQ ID NO：2所示序列：；
CDR3-VL1，具有SEQ ID NO：3所示序列：QQTNEDPX2T，其中X2是Y或F或W；
CDR1-VH1，具有SEQ ID NO：4所示序列：SSWMN；
CDR2-VH1，具有SEQ ID NO：5所示序列：RIYPGDGX3TNYNGKFKG，其中X3是D或H；和
CDR3-VH1，具有SEQ ID NO：6所示序列：GX4PTTAYAMDY，其中X4是N、S或R；
或者(ii)
CDR1-VL2，具有SEQ ID NO：7所示序列：KASQDIKX5FLN，其中X5为S或N；
CDR2-VL2，具有SEQ ID NO：8所示序列：YAX6SLAD，其中X6为R或T；
CDR3-VL2，具有SEQ ID NO：9所示序列：LQHGESPFT；
CDR1-VH2，具有SEQ ID NO：10所示序列：SX7WMH，其中X7为S或Y；
CDR2-VH2，具有SEQ ID NO：11所示序列：X8IDPYDSETHYNQKFKD，其中X8为Y或R或N；和
CDR3-VH2，具有SEQ ID NO：12所示序列：GYDRSFDX9，其中X9为Y或F。
2.根据权利要求1所述的抗PIC的抗体，其特征在于，所述抗PIC的抗体选自如下野生型或如下任一种突变组合：
3.根据权利要求1所述的抗PIC的抗体，其特征在于，所述抗PIC的抗体选自如下野生型或如下任一种突变组合：
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗PIC的抗体，其特征在于，所述抗PIC的抗体还包括轻链可变区的骨架区和重链可变区的骨架区，其中，所述轻链可变区的骨架区包括FR1-VL1、FR2-VL1、FR3-VL1和FR4-VL1，所述重链可变区的骨架区包括FR1-VH1、FR2-VH1、FR3-VH1和FR4-VH1，或者，所述轻链可变区的骨架区包括FR1-VL2、FR2-VL2、FR3-VL2和FR4-VL2，所述重链可变区的骨架区包括FR1-VH2、FR2-VH2、FR3-VH2和FR4-VH2，其中，
所述FR1-VL1具有SEQ ID NO：13：所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:13具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR2-VL1具有SEQ ID NO：14所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:14具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR3-VL1具有SEQ ID NO：15所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:15具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR4-VL1具有SEQ ID NO：16所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:16具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR1-VH1具有SEQ ID NO：17所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:17具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR2-VH1具有SEQ ID NO：18所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:18具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR3-VH1具有SEQ ID NO：19所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:19具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR4-VH1具有SEQ ID NO：20所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:20具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR1-VL2具有SEQ ID NO：21：所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:21具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR2-VL2具有SEQ ID NO：22所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:22具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR3-VL2具有SEQ ID NO：23所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:23具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR4-VL2具有SEQ ID NO：24所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:24具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR1-VH2具有SEQ ID NO：25所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:25具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR2-VH2具有SEQ ID NO：26所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:26具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR3-VH2具有SEQ ID NO：27所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:27具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述FR4-VH2具有SEQ ID NO：28所述的氨基酸序列或者与SEQ ID NO:28具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
SEQ ID NO：13：DIVLTQSPASLAVSLGQRATLSC；
SEQ ID NO：14：WYQQNPGQPPKLLIY；
SEQ ID NO：15：GIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYFC；
SEQ ID NO：16：FGGGAKLEIK；
SEQ ID NO：17：QVQLQQSGPELVKPGASVKLSCKASGNAFS；
SEQ ID NO：18：WVKQRPGQGLEWIG；
SEQ ID NO：19：KATLTVDKSSSTVYMQLSSLTSVDSAVYFCGR；
SEQ ID NO：20：WGQGTSVTVSS；
SEQ ID NO：21：DIKMTQSPSSMFASLGERVTITC；
SEQ ID NO：22：WYQQKPWRSPKTLIY；
SEQ ID NO：23：GVPSRFSGSGSGQDFSLTISSLESDDAATYYC；
SEQ ID NO：24：FGGGTKLEIK；
SEQ ID NO：25：QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFT；
SEQ ID NO：26：WVKQRPEQGLEWIG；
SEQ ID NO：27：KAILTVDKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAR；
SEQ ID NO：28：WGQGTTLTVSS。
5.根据权利要求4所述的抗PIC的抗体，其特征在于，所述抗PIC的抗体具有如下任意一种轻链可变区和重链可变区：
(i)SEQ ID NO：29所示的轻链可变区VL1和SEQ ID NO：30所示的重链可变区VH1；
SEQ ID NO：29：
DIVLTQSPASLAVSLGQRATLSCRASESVDSFGYSFMHWYQQNPGQPPKLLIYRASNLESGIPARFSGSGSR TDFTLTINPVEADDVATYFCQQTNEDPYTFGGGAKLEIK；
SEQ ID NO：30：
QVQLQQSGPELVKPGASVKLSCKASGNAFSSSWMNWVKQRPGQGLEWIGRIYPGDGDTNYNGKFKGKATLTV DKSSSTVYMQLSSLTSVDSAVYFCGRGNPTTAYAMDYWGQGTSVTVSS；
(ii)SEQ ID NO：31所示的轻链可变区VL2和SEQ ID NO：32所示的重链可变区VH2；
SEQ ID NO：31：
DIKMTQSPSSMFASLGERVTITCKASQDIKSFLNWYQQKPWRSPKTLIYYATSLADGVPSRFSGSGSGQDFS LTISSLESDDAATYYCLQHGESPFTFGGGTKLEIK；
SEQ ID NO：32：
QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTSSWMHWVKQRPEQGLEWIGYIDPYDSETHYNQKFKDKAILTV DKSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCARGYDRSFDYWGQGTTLTVSS；
(iii)与SEQ ID NO：29所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的轻链可变区和与SEQ ID NO：30所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的重链可变区；
(iv)与SEQ ID NO：31所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的轻链可变区和与SEQ ID NO：32所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的重链可变区。
6.根据权利要求5所述的抗PIC的抗体，其特征在于，所述抗体为全长抗体，所述全长抗体还包括轻链恒定区CL和重链恒定区CH，其中，
所述轻链恒定区CL的序列为：1)SEQ ID NO：33；2)与SEQ ID NO：33所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列；
所述重链恒定区CH的序列为：1)SEQ ID NO：34；2)与SEQ ID NO：34所示序列具有90％以上，优选95％以上，更优选99％以上同源性的序列。
7.根据权利要求5所述的抗PIC的抗体，其特征在于，所述抗PIC的抗体与PIC具有4.30*10-11≤Kd(M)≤7.58*10-9的亲和力；
优选地，所述抗PIC的抗体是人的、人源化的或是嵌合的。
8.一种分离的核酸分子，其特征在于，所述分离的核酸分子编码权利要求1至7中任一项所述的抗PIC的抗体。
9.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体包括权利要求8所述的核酸分子。
10.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞转染有权利要求9所述的表达载体。
11.一种PIC检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1至7中任一项所述的抗PIC的抗体。
12.根据权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括两种所述抗PIC的抗体，其中一种为包被于磁球上的抗PIC的抗体，一种是标记的抗PIC的抗体；
优选地，所述标记的抗PIC的抗体为ABEI标记的抗PIC抗体；
优选地，所述试剂盒还包括校准品和/或质控品。
13.一种检测PIC的方法，其特征在于，所述方法包括：
按照一步法双抗体夹心法使来自受试者的样品与权利要求1至7中任一项所述的抗PIC的抗体接触以进行结合反应；
检测结合反应是否产生免疫复合物，若产生所述免疫复合物，则表明PIC存在。
14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述方法选自如下任意一种或多种：荧光免疫法、化学发光免疫法、胶体金免疫法、放射免疫法或酶联免疫法；
优选地，所述化学发光免疫法为化学发光免疫双抗体夹心法；
优选地，所述方法采用半自动免疫分析仪或全自动免疫分析仪进行分析。
15.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述样品选自全血、血清或血浆中的至少一种，优选地，所述全血、血清或血浆来源于外周血。
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