CN113214393B - Il-6抗体或其抗原结合片段及包含其的检测试剂盒 - Google Patents

Il-6抗体或其抗原结合片段及包含其的检测试剂盒 Download PDF

Info

Publication number
CN113214393B
CN113214393B CN202110572041.8A CN202110572041A CN113214393B CN 113214393 B CN113214393 B CN 113214393B CN 202110572041 A CN202110572041 A CN 202110572041A CN 113214393 B CN113214393 B CN 113214393B
Authority
CN
China
Prior art keywords
antibody
seq
amino acid
ser
antigen
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202110572041.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN113214393A (zh
Inventor
李轲
夏志豪
陈清浦
何海华
杜凯
李婷华
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shenzhen New Industries Biomedical Engineering Co Ltd
Original Assignee
Shenzhen New Industries Biomedical Engineering Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shenzhen New Industries Biomedical Engineering Co Ltd filed Critical Shenzhen New Industries Biomedical Engineering Co Ltd
Priority to CN202110572041.8A priority Critical patent/CN113214393B/zh
Publication of CN113214393A publication Critical patent/CN113214393A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN113214393B publication Critical patent/CN113214393B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/24—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against cytokines, lymphokines or interferons
    • C07K16/244—Interleukins [IL]
    • C07K16/248—IL-6
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6863—Cytokines, i.e. immune system proteins modifying a biological response such as cell growth proliferation or differentiation, e.g. TNF, CNF, GM-CSF, lymphotoxin, MIF or their receptors
    • G01N33/6869—Interleukin
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/435—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from animals; from humans
    • G01N2333/52—Assays involving cytokines
    • G01N2333/54—Interleukins [IL]
    • G01N2333/5412—IL-6

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明提供了一种IL‑6的抗体或其抗原结合片段及包含有其的检测试剂及应用，所述抗体包含如SEQ ID NO：1‑3所示的重链可变区CDRH1‑3的氨基酸序列和/或分别如SEQ ID NO：4‑6所示的重链可变区VHCDR1‑3，和/或，包括分别如SEQ ID NO：7‑9所示的轻链可变区的VLCDR1‑3氨基酸序列和/或分别如SEQ ID NO：10‑12所示的轻链可变区的VLCDR1‑3。所述抗体或抗原结合片段的可变区在空间结构上可与抗原决定簇形成精密的互补，能够特异性结合IL‑6，并阻断IL‑6/IL‑6R的结合位点，且对IL‑6具有高亲和力。

Description

IL-6抗体或其抗原结合片段及包含其的检测试剂盒
技术领域
本发明涉及IL-6抗体检测领域，具体而言，涉及一种IL-6抗体或其结合片段及包含其的检测试剂盒。
背景技术
白细胞介素6（IL-6）是一种多功能细胞因子，可由多种类型细胞产生，并参与多种生物过程，包括调节体内炎症反应和特定免疫反应等。IL-6通过由信号转导糖蛋白gp130和IL-6受体（IL-6R）组成受体复合物促进细胞反应，在多种疾病的发展中起作用，包括类风湿性关节炎、恶病质和骨髓瘤等，因此检测IL-6可用于预防和治疗相关疾病。但由于IL-6在正常人体内含量极低(＜7pg/ml)，所 以对检测试剂盒中的核心原料---抗体提出更高的要求，研制出高亲和力的抗体是市场所需。
为解决现有技术中存在的问题，本发明提供了一种高亲和力的IL-6抗体或其抗原结合片段。
发明内容
为了解决现有技术的不足，本发明提供了一种抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含选自下列的重链可变区（VH）互补决定区（CDR）：
1）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1-3所示的VHCDR1-3；和/或
2）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：4-6所示的VHCDR1-3。
和/或，
选自下列的轻链可变区（VL）互补决定区（CDR）：
1）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：7-9所示的VLCDR1-3；和/或
2）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：10-12所示的VLCDR1-3。
进一步的，所述的抗体或其抗原结合片段包含如下所述的重链可变区（VH）互补决定区（CDR）：
1）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1-3所示的VHCDR1-3；和
2）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：4-6所示的VHCDR1-3。
和，
包含如下所示的轻链可变区（VL）互补决定区（CDR）：
1）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：7-9所示的VLCDR1-3；和
2）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：10-12所示的VLCDR1-3。
本发明另一方面提供了一种抗体或其抗原结合片段，所述的抗体或其抗原结合片段包括选自下列的重链可变区：
1）氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH；和/或
2）氨基酸序别如SEQ ID NO：14所示的VH。
和/或，
选自下列的轻链可变区（VL）：
1）氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL；和/或
2）氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL。
进一步的，所述的抗体或其抗原结合片段包含如下所示的重链可变区：
1）氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH；和
2）氨基酸序别如SEQ ID NO：14所示的VH；
和，
如下所示的轻链可变区（VL）：
1）氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL；和
2）氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL。
更进一步的，所述重链可变区在氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH和氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示的VH 的两段氨基酸之间通过接头序列进行连接；所述轻链可变区在氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL和氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL的两段氨基酸之间通过接头序列进行连接；优选的，所述接头序列为(GGGGS) 3。
本发明所提供的前述抗体或其抗原结合片段能够阻断IL-6与IL-6R的结合位点。
本发明还提供了一种编码前述抗体或抗原结合片段的核酸分子。
本发明还提供了一种包含前述核酸分子的载体。
本发明还提供了一种包含前述载体的宿主细胞。
本发明还提供了一种检测IL-6的试剂盒，其特征在于包含前述的抗体或其抗原结合片段。
本发明通过提供新的抗体或抗原结合片段的序列，其可变区在空间结构上可与抗原决定簇形成精密的互补，能够特异性结合IL-6，并阻断IL-6/IL-6R的结合位点，且对IL-6具有高亲和力。
具体实施方式
如本文中所使用的，术语“抗体”是指，通常由两对多肽链(每对具有一条“轻”(L)链和一条“重”(H)链)组成的免疫球蛋白分子。抗体轻链可分类为κ和λ，重链可分类为μ、δ、γ、α或ε，并且分别将抗体的同种型定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“J”区连接，重链还包含大约3个或更多个氨基酸的“D”区。各重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(CH)组成。重链恒定区由3个结构域(CH1、CH2和CH3)组成。各轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。抗体的恒定区可介导免疫球蛋白与宿主组织或因子，包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1q)的结合。VH和VL区还可被细分为具有高变性的区域(称为互补决定区(CDR))，其间散布有较保守的称为构架区(FR)的区域。各VH和VL由按下列顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4从氨基末端至羧基末端排列的3个CDR和4个FR组成。各重链/轻链对的可变区(VH和VL)分别形成抗体结合部位。术语“抗体”不受任何特定的产生抗体的方法限制。例如，其包括，重组抗体、单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可以是不同同种型的抗体，例如，IgG(例如，IgG1，IgG2，IgG3或IgG4亚型)，IgA1，IgA2，IgD，IgE或IgM抗体。
如本文中所使用的，术语抗体的“抗原结合片段”是指包含全长抗体的片段的多肽，其保持特异性结合全长抗体所结合的相同抗原的能力，和/或与全长抗体竞争对抗原的特异性结合，其也被称为“抗原结合部分”。可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学断裂产生抗体的抗原结合片段。在一些情况下，抗原结合片段包括Fab、Fab'、F(ab')2、单链抗体、嵌合抗体、双抗体等，其包含足以赋予多肽特异性抗原结合能力的抗体的至少一部分。
如本文中所使用的，术语“Fab片段”意指由VL、VH、CL和CH1结构域组成的抗体片段；术语“F(ab')2片段”意指包含通过铰链区上的二硫桥连接的两个Fab片段的抗体片段。
在一些情况下，抗体的抗原结合片段是单链抗体(例如,scFv)，其中VL和VH结构域通过使其能够产生为单个多肽链的连接体配对形成单价分子。此类scFv分子可具有一般结构：NH2-VL-接头-VH-COOH或NH2-VH-接头-VL-COOH。合适的现有技术接头由重复的GGGGS氨基酸序列或其变体等本领域常见的接头。
在一些情况下，抗体的抗原结合片段是双抗体，即，双价抗体，其中VH和VL结构域在单个多肽链上表达。
可使用本领域技术人员已知的常规技术获得抗体或其抗原结合片段，并且以与用于完整抗体的方式相同的方式就特异性筛选抗体的抗原结合片段。
在本文中，除非上下文明确指出，否则当提及术语“抗体”时，其不仅包括完整抗体，而且包括抗体的抗原结合片段。
为了解决现有技术中IL-6抗体亲和力不高的问题，在一方面，本发明提供了一种抗体或其抗原结合片段，其包含，选自下列的重链可变区（VH）互补决定区（CDR）：
1）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1-3所示的VHCDR1-3；和/或2）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：4-6所示的VHCDR1-3。
和/或，
选自下列的轻链可变区（VL）互补决定区（CDR）：
1） 氨基酸序列分别如SEQ ID NO：7-9所示的VLCDR1-3；和/或
2） 氨基酸序列分别如SEQ ID NO：10-12所示的VLCDR1-3。
在某些优选的实施方案中，所述的抗体或其抗原结合片段，其包含如下所述的重链可变区（VH）互补决定区（CDR）：
1）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1-3所示的VHCDR1-3；和
2）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：4-6所示的VHCDR1-3。
和，
包含如下所示的轻链可变区（VL）互补决定区（CDR）：
1） 氨基酸序列分别如SEQ ID NO：7-9所示的VLCDR1-3；和
2） 氨基酸序列分别如SEQ ID NO：10-12所示的VLCDR1-3。
在某些优选的实施方案中，所述的抗体或其抗原结合片段包含选自下列的重链可变区：
1）氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH；和/或
2）氨基酸序别如SEQ ID NO：14所示的VH。
和/或，
选自下列的轻链可变区（VL）：
1） 氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL；和/或
2） 氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL。
在某些优选的实施方案中，所述的抗体或其抗原结合片段包含如下所示的重链可变区：
1）氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH；和
2）氨基酸序别如SEQ ID NO：14所示的VH。
和，
如下所示的轻链可变区（VL）：
1） 氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL；和
2） 氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL。
在某些优选的实施方案中，所述的抗体或其抗原结合片包含：
1） 氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH和氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL；
或
2） 氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示的VH和氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL。
在某些优选的实施方案中，所述的单克隆抗体包含：
1） 氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH和氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示的VH
和
2） 氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL；和氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL。
在某些优选的实施方案中,所述的抗体或其抗原结合片段中的重链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH和氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示的VH ，在氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH和氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示的VH 的两段氨基酸之间通过接头序列进行连接。
在某些优选的实施方案中，所述的抗体或其抗原结合片段中的重链可变区从N段到C端的氨基酸序列依次为氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示的VH和氨基酸序列如SEQ IDNO：13所示的VH ，在氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH和氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示的VH 的两段氨基酸之间通过接头序列进行连接。
在某些优选的实施方案中,所述的抗体或其抗原结合片段中的轻链可变区包含氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL；和氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL；在氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL和氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL的两段氨基酸之间通过接头序列进行连接。
在某些优选的实施方案中,所述的抗体或其抗原结合片段中的轻链可变区从N段到C端的氨基酸序列依次为氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL；和氨基酸序列如SEQ IDNO：15所示的VL；在氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL和氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL的两段氨基酸之间通过接头序列进行连接。所述的接头序列可以是本领域内常见的接头序列，例如(GGGGS)3，A(EAAAK)A等。优选的，接头序列为(GGGGS)3。
在某些优选的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段选自Fab，Fab’，F(ab)2’，Fd，Fv，小鼠抗体、兔抗体、人源化抗体、全人抗体，嵌合抗体。
上述提供的抗体或抗原结合片段的可变区在空间结构上可与抗原决定簇形成精密的互补，能够特异性结合IL6，并阻断IL6/IL6R的结合位点。在某些优选实施例中所述抗体或抗原结合片段，对IL-6具有高亲和力。
在某些优选的实施方案中，所述的抗体或其抗原结合片段还可以包括恒定区，恒定区的氨基酸序列可以通过NCBI搜索，也可以通过UniprotKB搜索等本领域技术人员所公知的手段获得。
在某些优选的实施方案中，所述的抗体中重链对应的恒定区（CH）为氨基酸序列如SEQ ID NO：17所示的CH。
在某些优选的实施方案中，所述的抗体中轻链对应的恒定区（CL）为氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示的CL。
在另一方面，本发明提供了一种核酸分子，其包含能够编码抗体重链可变区的核酸序列，其中所述抗体重链可变区包含：
1）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：1-3所示的VHCDR1-3；和/或
2）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：4-6所示的VHCDR1-3。
在某些优选的实施方案中，所述核酸分子，其包含能够编码抗体重链可变区的核酸序列，其中所述抗体重链可变区包含具有氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH；和/或氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示的VH。
在某些优选的实施方案中，所述核酸分子，其包含能够编码抗体重链可变区的核酸序列，其中所述抗体重链可变区包含具有氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH；和氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示的VH。
在另一方面，本发明提供了一种核酸分子，其包含能够编码抗体轻链可变区的核酸序列，其中所述抗体轻链可变区包含：
1）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：7-9所示的VLCDR1-3；和/或
2）氨基酸序列分别如SEQ ID NO：10-12所示的VLCDR1-3。
在某些优选的实施方案中，所述核酸分子，其包含能够编码抗体轻链可变区的核酸序列，其中所述抗体轻链可变区包含具有氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL；和/或氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL的氨基酸序列。
在某些优选的实施方案中，所述核酸分子，其包含能够编码抗体轻链可变区的核酸序列，其中所述抗体轻链可变区包含具有氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL；和氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL的氨基酸序列。
在另一方面，本发明提供了一种核酸分子，其包含如上文所述的能够编码抗体重链可变区的核酸序列，和如上文所述的能够编码抗体轻链可变区的核酸序列。
在另一方面，本发明提供了一种核酸分子，其包含编码如本发明所述的抗体或其抗原结合片段的核酸序列。
在另一方面，本发明提供了一种载体，其包含如上文所述的核酸分子。
所述的载体可以是本领域内常见的载体，例如pFastBac1，pcDNA3.1，pCHO1.0等。
在另一方面，本发明提供了一种宿主细胞，其包含如本上文所述的核酸分子或载体。
所述的宿主细胞可以是本领域内常见的宿主细胞，例如SF9，HEK293，CHO等。
在另一方面，还提供了制备本发明的抗体或其抗原结合片段的方法，其包括采用适宜的条件培养上文所述的宿主细胞，并从细胞培养液中获取抗体或其抗原结合片段。
在另一方面，本发明还提供了一种组合物，其包含本发明所述的抗体或其抗原结合片段。
在另一方面，本发明还提供了一种试剂盒，其包含本发明所述的抗体或其抗原结合片段。所述试剂盒用于检测IL-6的存在或其水平。在某些优选的实施方案中，所述样品包括但不限于来自受试者的体液、排泄物、口鼻腔分泌物等。
使用抗体或其抗原结合片段来检测目标抗原在样品中的存在或其水平的一般方法是本领域技术人员所熟知的、在某些优选的实施方案中，所述检测方法可以使用酶联免疫吸附，酶免疫检测、化学发光免疫检测、放射免疫检测、荧光免疫检测、免疫色谱法等。
在某些优选的实施方案中，所述检测方法可包括以下几个步骤：(i)在允许抗体或其抗原结合片段与IL-6结合形成抗体或其抗原结合片段-IL-6复合物的条件下，将本发明的单克隆抗体或其抗原结合片段与待测样品接触；(ii)检测所述复合物的存在，以确定样品中是否含有IL-6。
在某些优选的实施方案中，所述检测方法可包括以下几个步骤：(i)将第一抗体吸附到固相支持物上；(ii)在上述支持物中加入可能含有IL-6的待测样品；(iii)在上述支持物中加入带有标记物的第二抗体；(iv)检测该标记物的存在从而判定IL-6是否存在于所述样品中。
此外，通过利用竞争法或夹心法的原理，上述检测方法可以用于检测目标抗原或抗体。
竞争法用于比较样品中抗原和一种已知量的标记抗原竞争结合本发明所述抗体或其抗原结合片段的数量关系。基于竞争法的免疫学检测通常包括，将含有未知数量的目标抗原的样品和预先定量的经标记的目标抗原加入到事先用已知的物理或化学方法把本发明所述抗体或其抗原结合片段包被到固相支持物上；然后，在孵育一段时间后，冲洗所述支持物，并检测结合到所述支持物上的标记物的量或水平。
在夹心法中，样品中的目标抗原被夹在包被抗体和标记抗体之间，然后通过检测标记抗体上的标记物的量或水平，可检测并定量抗原的存在。例如，基于夹心法的免疫学检测可包括，将含有一种未知数量目标抗原的样品加入到用物理或化学方法预先包被了本发明所述抗体或其抗原结合片段的固相支持物上进行反应；然后，加入经标记的本发明所述抗体或抗原结合片段进行反应；在孵育一段时间后，冲洗所述支持物，并检测结合到所述支持物上的标记物的量或水平。
标记物可以是放射性同位素、酶、酶的底物、发光物质如异鲁米诺和吖啶酯、荧光物质如荧光素和罗丹明、有色物质如乳胶颗粒和胶体金等。例如，标记用的酶包括但不限于，过氧化物酶(如辣根过氧化物酶HRP)、碱性磷酸酶、β半乳糖苷酶、乙酰胆碱酯酶和葡萄糖氧化酶。合适的酶底物包括例如，2 ,2 '-连氮基-双(3-乙基苯并噻吡咯啉-6磺酸)、鲁米诺-过氧化氢、邻苯二胺-过氧化氢(针对过氧化物酶)、对硝基苯磷酸盐、4-甲基磷酸伞型酮、3-(2 '-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰基)苯基-1 ,2-二乙氧基烷(针对碱性磷酸酶)、对硝基苯-β-D-半乳糖和甲基伞形酮-β-D-半乳糖(针对β半乳糖苷酶)。标记用的荧光物质包括但不限于，荧光素、异硫氰酸荧光素、罗丹明、四甲基罗丹明、伊红、绿色荧光蛋白、藻红蛋白、香豆素、甲基香豆素、芘、孔雀绿、二苯乙烯、荧光黄、Cascade蓝、二氯三嗪基荧光素、丹磺酰氯、藻红蛋白、荧光镧系络合物、Cy3、Cy5等等。放射性同位素包括但不限于，14C、123I、124I、131I、35S或3H。
下面将结合具体的实施例来进一步说明本申请的有益效果。
实施例1：抗体的制备方法
抗体1轻链为VL1-CL，重链为VH1-CH；抗体2轻链为VL2-CL，重链为VH2-CH。抗体3轻链为VL2-VL1-CL，重链为VH2-VH1-CH；抗体4轻链为VL1-VL2-CL，重链为VH1-VH2-CH；
抗体重链VH1氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示，VH2氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示，VL1氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示，VL2氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示。通过UniprotKB搜索得到抗体恒定区氨基酸序列，其中重链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO：17所示，轻链恒定区氨基酸序列如SEQ ID NO：18所示.
合成基因：
抗体1对应基因（IL6Ab-1）如SEQ ID NO：19所示
抗体2对应基因（IL6Ab-2）如SEQ ID NO：20所示
抗体3对应基因（IL6Ab-3）如SEQ ID NO：21所示
抗体4对应基因（IL6Ab-4）如SEQ ID NO：22所示
质粒构建：首先将合成的基因片段IL6Ab-1与载体pFastbacDual经XhoI、NheI双酶切，1%琼脂糖凝胶电泳鉴定后，切胶回收；然后用T4 DNA 连接酶连接，转化至E.coli Top10感受态，涂布于氨苄抗性平板。菌落PCR鉴定后，挑取阳性克隆培养并用Omega普通提取试剂盒提取质粒pFastbacDual-IL6Ab-1L。将基因片段IL6Ab-1经BamHI、EcoRI双酶切，连接到pFastbacDual-IL6Ab-L上，获得质粒pFastbacDual-IL6Ab-1LH。同理，可构建载体pFastbacDual-IL6Ab-2LH、pFastbacDual-IL6Ab-3LH、pFastbacDual-IL6Ab-4LH。
重组杆粒的获取：将重组质粒转化到至E.coli DH10Bac（含有AcNPV 的Bacmid和辅助质粒）感受态细胞中，涂布于含卡那霉素(50μg/mL)、四环素(10μg/mL)、庆大霉素(7μg/mL)、IPTG(40μg/mL)、X-gal(100μg/mL)的LB 琼脂平板上。通过蓝白斑筛选挑取白色菌落，用Omega BAC/PAC提取试剂盒提取重组bacmid。
重组杆粒转染HF细胞：按照Invitrogen 公司脂质体转染说明书将杆粒pFastbacDual-IL6Ab-LH DH10转染High Five细胞(即HF细胞)，传代密度1*10^6/ml，28℃培养6d，在荧光倒置显微镜下观察细胞生长状态。0.22um过滤器、避光过滤收集得到的上清即为第1（P1）代病毒液。将Pl 病毒再次感染细胞获得高滴度的重组病毒液。最后将P3代病毒液转入HF细胞，28℃培养3d。
蛋白纯化：按照GE AKTA Pure 蛋白质分离纯化系统说明书进行，过SPA柱纯化，得到初纯化的抗体1-4。
实施例2：抗体的效价评估
不同IL6抗体包被磁球的效价检测方法：
将抗体1-4分别包被磁球，用外购anti-IL-6 (外购单抗，货号：CSB-DA436EmN)抗体标记ABEI。将20ul待测样本、20ul 包被有选自抗体1-4 中其中一种的IL-6抗体的磁性微球、100ul Buffer（0.01mol/L PBS，PH7.4）依次加到反应杯中37℃温育10min，外加磁场沉淀，去掉上清液，加入200ul ABEI标记IL-6抗体后37℃温育10min，用洗液清洗沉淀复合物3次，直接进入样品测量室，仪器自动泵入发光底物1和2，自动监测3s内发出的相对光强度(RLU)。上述实验过程在MAGLUMI 2000中进行。
该实验过程中使用的已经得到验证的阴性样本和阳性样本各三例样，用上述使用抗体1-4制备得到的试剂盒进行检测。
表1 不同抗体包被磁球的效价检测
样本类型 抗体1 抗体2 抗体3 抗体4
阴性样本1 17305 16462 13270 12511
阴性样本2 9179 10242 7248 7805
阴性样本3 14980 16720 15851 15607
阳性样本1 183602 163523 330069 316598
阳性样本2 86380 68591 131014 127718
阳性样本3 126259 115960 223937 218458
结果分析：从表1可以看出，抗体3、4比抗体1、2的阴性样本效价稍偏低，而抗体3、4比抗体1、2的阳性样本效价更高，说明抗体可变区组合后可以提高效价。
实施例3：抗体对IL6/IL6R结合的阻断作用验证
利用不同浓度的自产IL-6抗体作为样本，检测自产IL-6抗体对IL6/IL6R的抑制程度。
利用化学发光免疫竞争法，使表达的IL-6R包被磁球， 人IL-6抗原标记ABEI。将40μL样本、40 μL 人IL-6抗原标记的ABEI、20μL Buffer（0.01mol/L PBS，PH7.4）依次加到反应杯中37℃温育15min，再加入20 μLIL-6R包被的磁球，37℃温育10min，之后外加磁场沉淀；去掉上清液，用洗液清洗沉淀复合物3次，直接进入样品测量室，仪器自动泵入发光底物1和2，自动监测3s内发出的相对光强度(RLU)。上述实验过程在MAGLUMI 2000中进行。
表2 自产IL6抗体对IL6/IL6R的抑制程度
样本预稀释比例 自产抗体1 自产抗体2 自产抗体3 自产抗体4
原液 48327 54361 31424 27780
1:10 112253 133561 75686 74448
1:50 236583 256634 179623 149448
1:100 476582 497389 423646 399445
稀释液 606148 606148 606148 606148
结果分析：从表2中可以看出，抗体3、4中相对光强度下降趋势优于抗体1、2的相对光强度下降趋势，可见抗体1-4均能抑制IL6/IL6R，而抗体3、4比抗体1、2的抑制效果更好。
实施例4：抗体结合亲和力验证
利用BIAcore技术来检测自产抗体1-4和IL-6抗原的结合亲和力。所述实验过程按照Biacore® 3000, Biacore AB说明书进行。通过胺偶联化学将山羊抗人IgG Fc区的特异性亲和F（ab'）片段（Jackson ImmunoResearch）固定在CM5传感器芯片上。选择HBS-EP作为流动缓冲液，流速为10ul/min。注射10ul的自产抗体（4 ug/mL）后，以30 uL/min的流速滴定不同浓度的IL-6抗原。抗体亲和力在IL-6抗原浓度不大于20nM时测定。平衡解离常数Kd(M)代表平衡状态下抗原抗体的解离程度，Kd(M)越小说明抗原抗体亲和力越强。
表3 自产IL6抗体的平衡解离常数Kd(M)
Ka(M<sup>-1</sup>s<sup>-1</sup>) Kd(s<sup>-1</sup>) Kd(M)
自产抗体1 4.21*10<sup>5</sup> 6.23*10<sup>-5</sup> 1.47*10<sup>-10</sup>
自产抗体2 4.65*10<sup>5</sup> 6.52*10<sup>-5</sup> 1.40*10<sup>-10</sup>
自产抗体3 7.86*10<sup>5</sup> 8.48*10<sup>-6</sup> 1.08*10<sup>-11</sup>
自产抗体4 7.49*10<sup>5</sup> 8.48*10<sup>-6</sup> 1.13*10<sup>-11</sup>
结果分析：测定的抗体1、2的亲和力常数值在1.40-1.50*10-10左右；抗体3、4的亲和力常数值在1. 0-1.10*10-11左右，明显小于抗体1、2，说明抗体可变区组合后可提高抗体的亲和力。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 深圳市新产业生物医学工程股份有限公司
<120> IL-6抗体或其抗原结合片段及包含其的检测试剂盒
<140> 2021105720418
<141> 2021-05-25
<160> 22
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Ala Tyr Tyr Met Asn
1 5
<210> 2
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Phe Ile Asp Leu Asn Asn Gly Val Tyr Tyr Ala Asn Arg Lys Phe Met
1 5 10 15
<210> 3
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Ala Val Ala Arg Ser Arg Gly Asn Ser Ala Gly Met Arg Leu Asp Leu
1 5 10 15
<210> 4
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Asp Tyr Tyr Met Gly
1 5
<210> 5
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Phe Ile Asp Gln Asn Asn Gly Val Tyr Tyr Ala Asn Arg Lys Phe
1 5 10 15
<210> 6
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
Ala Val Ala Arg Ser Arg Asp Asn Ser Val Gly Ser Arg Leu Asp Ala
1 5 10 15
<210> 7
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
Gln Cys Arg Ser Ser Val Tyr Glu Asn Asn Tyr Leu Ser
1 5 10
<210> 8
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
Gly Ala Ser Thr Leu Asp Ser
1 5
<210> 9
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
Ala Gly Val Tyr Arg Asp Glu Ser Asp Asp Ala
1 5 10
<210> 10
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
Gln Ala Arg Ser Asp Val Tyr Glu Ala Asn Ser Leu
1 5 10
<210> 11
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
Ala Ala Ser Tyr Leu Asp Ser
1 5
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
Ala Ser Val Tyr Arg Ser Glu Ser Thr Asp Ala
1 5 10
<210> 13
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
Gln Glu Gln Leu Gln Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Thr Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Lys Thr Leu Val Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asn Ala Tyr
20 25 30
Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ala His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Asp Leu Asn Asn Gly Val Tyr Tyr Ala Asn Arg Lys Phe
50 55 60
Met Arg Phe Thr Phe Leu Lys Thr Ser Asp Lys Val Asn Leu Lys Tyr
65 70 75 80
Thr Ser Leu Thr Pro Glu Asp Thr Ala Ser Glu Ala Val Ala Arg Ser
85 90 95
Arg Gly Asn Ser Ala Gly Met Arg Leu Asp Leu Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 14
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
Gln Glu Gln Leu Val Glu Ser Gly Glu Gly Leu Val Gln Pro Gly Ala
1 5 10 15
Thr Leu Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Ser Phe Asn Asp Tyr
20 25 30
Tyr Met Gly Trp Val Lys Gln Ala Pro Gly Lys Pro Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Phe Ile Asp Gln Asn Asn Gly Val Tyr Tyr Ala Asn Arg Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Phe Thr Ile Ser Arg Asp Ser Ala Gln Asn Thr Leu Asn
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Lys Glu Asp Thr Ala Ser Glu Ala Val Ala Arg Ser
85 90 95
Arg Asp Asn Ser Val Gly Ser Arg Leu Asp Ala Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Ser Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 15
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
Asp Pro Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Gly Arg Val Ser Ile Ser Cys Gln Cys Arg Ser Ser Val Tyr Glu Asn
20 25 30
Asn Tyr Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Gln Thr Ile Lys Arg
35 40 45
Leu Ile Tyr Gly Ala Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Gln Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Leu
65 70 75 80
Gln Cys Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Gly Val Tyr Arg Asp
85 90 95
Glu Ser Asp Asp Ala Phe Gly Gly Gly Thr Glu Leu Val Val Lys Arg
100 105 110
<210> 16
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Lys Ser Leu Ser Ala Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gly Arg Val Ser Ile Ser Cys Gln Ala Arg Ser Asp Val Tyr Glu Ala
20 25 30
Asn Ser Leu Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Gln Thr Pro Lys Arg Leu
35 40 45
Ile Tyr Ala Ala Ser Tyr Leu Asp Ser Gly Val Pro Thr Arg Phe Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Tyr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Asp Cys Gln
65 70 75 80
Cys Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Ser Val Tyr Arg Ser Glu
85 90 95
Ser Thr Asp Ala Phe Gly Gly Gly Thr Gln Leu Val Leu Lys Arg
100 105 110
<210> 17
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 17
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Cys Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Cys Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 18
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 18
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 19
<211> 2160
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 19
ccgctcgaga tggtaagcgc tattgtttta tatgtgcttt tggcggcggc ggcgcattct 60
gcctttgcgg atccagtgct aactcaaagt ccaagtagtg tctctgcttc tgtgggcgga 120
agagtgtcca tctcttgtca gtgcagatct tccgtgtatg agaacaacta cctgtcttgg 180
ctgcaacaaa aaccaggcca gaccatcaag cggctgatct acggcgcttc caccctggat 240
tccggggtgc cctcgcggtt ttccggctct ggttctggct accagttcac actgacaatc 300
tctgacctgc agtgcgagga cgccgccacc tactactgcg ctggcgtgta ccgggacgag 360
tccgacgacg cctttggcgg cggcaccgag ctggtcgtga agagaagaac cgtggccgcc 420
cccagcgtgt tcatcttccc tccttctgat gagcagctga aatccggcac cgcttctgtg 480
gtgtgcctgc tgaacaactt ctaccctaga gaggccaaag tgcagtggaa ggtggacaac 540
gccctgcagt ctggcaactc ccaagagtct gtcacagaac aggactccaa ggactctacc 600
tactccctct cctccaccct caccctgtct aaggccgact acgaaaagca caaggtgtac 660
gcctgcgaag tgacccacca gggcctgtcc tctcctgtga ccaagagctt caaccggggc 720
gagtgctaag ctagctagcg cggatccatg gtaagcgcta ttgttttata tgtgcttttg 780
gcggcggcgg cgcattctgc ctttgcgcaa gaacaactac aagaaagtgg tgaaggtctg 840
gtgacccctg gcgctaccaa gaccctggtg tgcaaggctt ctggattctc cttcaatgcc 900
tactacatga attgggtcaa gcaggctcac ggcaagtcgc tggaatggat cggcttcatc 960
gatctgaaca acggcgtgta ctatgccaac agaaagttca tgcggttcac cttcctaaaa 1020
acctccgaca aagtgaacct gaagtacacc agcctgaccc ctgaggatac cgcctccgag 1080
gccgtggcta gatctcgggg aaattctgcc ggcatgagac tggacctgtg gggccaagga 1140
acccttgtca ccgtgtctag cgccagcacc aaaggccctt ccgtgtttcc tctggcccct 1200
tcttccaagt ccacctccgg cggcaccgct gctctgggct gtctggtgaa ggactacttc 1260
cccgagcccg tcacagtgtc ttggaactcc ggcgccctga catctggcgt gcataccttt 1320
ccagcagtgc tgcagtccag cggactgtac tccctgtctt ctgtggtgac cgtgcctagc 1380
tcttccctgg gcacacagac ctacatctgc aacgtgaacc acaagccttc caataccaag 1440
gtggacaaga aggtggaacc taagagctgc gacaagaccc acacctgtcc tccttgtcct 1500
gccccagaac tgctgggagg cccctccgtg ttcctgttcc ctccaaaacc caaggacacc 1560
ctgatgatct ccagaacccc cgaagtgaca tgcgtggtcg tggacgtgtc tcacgaggac 1620
cctgaggtga agttcaactg gtacgtggac ggcgtggaag tgcacaacgc taagaccaag 1680
cctagagagg aacagtacaa ctctacctac agagtggtgt ccgttctgac cgtgctgcac 1740
caggactggc tgaacggcaa agagtacaag tgcaaagtct ccaacaaggc cctgccagct 1800
cctatcgaga agaccatctc caaggccaag ggccagtgca gagaacctca ggtgtatacc 1860
ctgcctcctt ctagagacga gctgacaaag aaccaggtct ctctgacctg cctggtcaag 1920
ggcttctacc cctccgacat cgccgtggag tgggagtcca acggccagcc tgagaacaac 1980
tacaagacca cacctcctgt gctggatagt gatggctcct tcttcctgta cagcaaactg 2040
acagtggata agtccagatg gcagcagggc aacgtgttca gctgctccgt gatgcacgag 2100
tgtctgcata accactacac ccagaagtct ctgtccctgt ctcctggcta agaattccgg 2160
<210> 20
<211> 2157
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 20
ccgctcgaga tggtaagcgc tattgtttta tatgtgcttt tggcggcggc ggcgcattct 60
gcctttgcgg acatcgtgct gacccagtcc cccaagagcc tgtctgccag cctgggcggc 120
agagtgtcta tctcctgcca ggcccgcagc gatgtgtatg aagctaattc tctgtggctg 180
cagcagaagc ctggccagac ccctaagaga ctgatctacg ctgcttccta cctggattcc 240
ggcgtgccta ccagattctc cggctccggc tccggctacg acttcaccct gaccatctcc 300
gactgccagt gtgaagatgc cgctacctac tactgtgcct ccgtttacag gtccgagagc 360
accgacgcct tcggcggagg aacacagctg gtgctgaagc ggagaaccgt ggccgccccc 420
agcgtgttca tcttccctcc ttctgatgag cagctgaaat ccggcaccgc ttctgtggtg 480
tgcctgctga acaacttcta ccctagagag gccaaagtgc agtggaaggt ggacaacgcc 540
ctgcagtctg gcaactccca agagtctgtc acagaacagg actccaagga ctctacctac 600
tccctctcct ccaccctcac cctgtctaag gccgactacg aaaagcacaa ggtgtacgcc 660
tgcgaagtga cccaccaggg cctgtcctct cctgtgacca agagcttcaa ccggggcgag 720
tgctaagcta gctagcgcgg atccatggta agcgctattg ttttatatgt gcttttggcg 780
gcggcggcgc attctgcctt tgcgcaagag cagctggtgg aatctggcga gggactcgtg 840
cagcccggcg ccaccctgaa gctgtcctgc aaggcctccg gcttttcttt caacgactac 900
tacatgggct gggtgaagca ggcccccgga aaacctctgg agtggatcgg cttcatcgac 960
cagaacaatg gcgtgtacta cgccaaccgg aagttcaagg ataagtttac aatctcccgc 1020
gactctgctc agaacaccct gaacctgcag atgaacaaag aagatactgc ttctgaggct 1080
gtggccaggt cccgggacaa ctccgtgggc tctcggctgg acgcctgggg acaaggcacc 1140
tccgtgaccg tgagcagcgc cagcaccaaa ggcccttccg tgtttcctct ggccccttct 1200
tccaagtcca cctccggcgg caccgctgct ctgggctgtc tggtgaagga ctacttcccc 1260
gagcccgtca cagtgtcttg gaactccggc gccctgacat ctggcgtgca tacctttcca 1320
gcagtgctgc agtccagcgg actgtactcc ctgtcttctg tggtgaccgt gcctagctct 1380
tccctgggca cacagaccta catctgcaac gtgaaccaca agccttccaa taccaaggtg 1440
gacaagaagg tggaacctaa gagctgcgac aagacccaca cctgtcctcc ttgtcctgcc 1500
ccagaactgc tgggaggccc ctccgtgttc ctgttccctc caaaacccaa ggacaccctg 1560
atgatctcca gaacccccga agtgacatgc gtggtcgtgg acgtgtctca cgaggaccct 1620
gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaagtgc acaacgctaa gaccaagcct 1680
agagaggaac agtacaactc tacctacaga gtggtgtccg ttctgaccgt gctgcaccag 1740
gactggctga acggcaaaga gtacaagtgc aaagtctcca acaaggccct gccagctcct 1800
atcgagaaga ccatctccaa ggccaagggc cagtgcagag aacctcaggt gtataccctg 1860
cctccttcta gagacgagct gacaaagaac caggtctctc tgacctgcct ggtcaagggc 1920
ttctacccct ccgacatcgc cgtggagtgg gagtccaacg gccagcctga gaacaactac 1980
aagaccacac ctcctgtgct ggatagtgat ggctccttct tcctgtacag caaactgaca 2040
gtggataagt ccagatggca gcagggcaac gtgttcagct gctccgtgat gcacgagtgt 2100
ctgcataacc actacaccca gaagtctctg tccctgtctc ctggctaaga attccgg 2157
<210> 21
<211> 2877
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
ccgctcgaga tggtaagcgc tattgtttta tatgtgcttt tggcggcggc ggcgcattct 60
gcctttgcgg acatcgtgct gacccagtcc cccaagagcc tgtctgccag cctgggcggc 120
agagtgtcta tctcctgcca ggcccgcagc gatgtgtatg aagctaattc tctgtggctg 180
cagcagaagc ctggccagac ccctaagaga ctgatctacg ctgcttccta cctggattcc 240
ggcgtgccta ccagattctc cggctccggc tccggctacg acttcaccct gaccatctcc 300
gactgccagt gtgaagatgc cgctacctac tactgtgcct ccgtttacag gtccgagagc 360
accgacgcct tcggcggagg aacacagctg gtgctgaagc ggggcggtgg cggctctgat 420
ccagtgctaa ctcaaagtcc aagtagtgtc tctgcttctg tgggcggaag agtgtccatc 480
tcttgtcagt gcagatcttc cgtgtatgag aacaactacc tgtcttggct gcaacaaaaa 540
ccaggccaga ccatcaagcg gctgatctac ggcgcttcca ccctggattc cggggtgccc 600
tcgcggtttt ccggctctgg ttctggctac cagttcacac tgacaatctc tgacctgcag 660
tgcgaggacg ccgccaccta ctactgcgct ggcgtgtacc gggacgagtc cgacgacgcc 720
tttggcggcg gcaccgagct ggtcgtgaag agaagaaccg tggccgcccc cagcgtgttc 780
atcttccctc cttctgatga gcagctgaaa tccggcaccg cttctgtggt gtgcctgctg 840
aacaacttct accctagaga ggccaaagtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagtct 900
ggcaactccc aagagtctgt cacagaacag gactccaagg actctaccta ctccctctcc 960
tccaccctca ccctgtctaa ggccgactac gaaaagcaca aggtgtacgc ctgcgaagtg 1020
acccaccagg gcctgtcctc tcctgtgacc aagagcttca accggggcga gtgctaagct 1080
agctagcgcg gatccatggt aagcgctatt gttttatatg tgcttttggc ggcggcggcg 1140
cattctgcct ttgcgcaaga gcagctggtg gaatctggcg agggactcgt gcagcccggc 1200
gccaccctga agctgtcctg caaggcctcc ggcttttctt tcaacgacta ctacatgggc 1260
tgggtgaagc aggcccccgg aaaacctctg gagtggatcg gcttcatcga ccagaacaat 1320
ggcgtgtact acgccaaccg gaagttcaag gataagttta caatctcccg cgactctgct 1380
cagaacaccc tgaacctgca gatgaacaaa gaagatactg cttctgaggc tgtggccagg 1440
tcccgggaca actccgtggg ctctcggctg gacgcctggg gacaaggcac ctccgtgacc 1500
gtgagcagcg gcggtggcgg ctctcaagaa caactacaag aaagtggtga aggtctggtg 1560
acccctggcg ctaccaagac cctggtgtgc aaggcttctg gattctcctt caatgcctac 1620
tacatgaatt gggtcaagca ggctcacggc aagtcgctgg aatggatcgg cttcatcgat 1680
ctgaacaacg gcgtgtacta tgccaacaga aagttcatgc ggttcacctt cctaaaaacc 1740
tccgacaaag tgaacctgaa gtacaccagc ctgacccctg aggataccgc ctccgaggcc 1800
gtggctagat ctcggggaaa ttctgccggc atgagactgg acctgtgggg ccaaggaacc 1860
cttgtcaccg tgtctagcgc cagcaccaaa ggcccttccg tgtttcctct ggccccttct 1920
tccaagtcca cctccggcgg caccgctgct ctgggctgtc tggtgaagga ctacttcccc 1980
gagcccgtca cagtgtcttg gaactccggc gccctgacat ctggcgtgca tacctttcca 2040
gcagtgctgc agtccagcgg actgtactcc ctgtcttctg tggtgaccgt gcctagctct 2100
tccctgggca cacagaccta catctgcaac gtgaaccaca agccttccaa taccaaggtg 2160
gacaagaagg tggaacctaa gagctgcgac aagacccaca cctgtcctcc ttgtcctgcc 2220
ccagaactgc tgggaggccc ctccgtgttc ctgttccctc caaaacccaa ggacaccctg 2280
atgatctcca gaacccccga agtgacatgc gtggtcgtgg acgtgtctca cgaggaccct 2340
gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaagtgc acaacgctaa gaccaagcct 2400
agagaggaac agtacaactc tacctacaga gtggtgtccg ttctgaccgt gctgcaccag 2460
gactggctga acggcaaaga gtacaagtgc aaagtctcca acaaggccct gccagctcct 2520
atcgagaaga ccatctccaa ggccaagggc cagtgcagag aacctcaggt gtataccctg 2580
cctccttcta gagacgagct gacaaagaac caggtctctc tgacctgcct ggtcaagggc 2640
ttctacccct ccgacatcgc cgtggagtgg gagtccaacg gccagcctga gaacaactac 2700
aagaccacac ctcctgtgct ggatagtgat ggctccttct tcctgtacag caaactgaca 2760
gtggataagt ccagatggca gcagggcaac gtgttcagct gctccgtgat gcacgagtgt 2820
ctgcataacc actacaccca gaagtctctg tccctgtctc ctggctaaga attccgg 2877
<210> 22
<211> 2880
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
ccgctcgaga tggtaagcgc tattgtttta tatgtgcttt tggcggcggc ggcgcattct 60
gcctttgcgg atccagtgct aactcaaagt ccaagtagtg tctctgcttc tgtgggcgga 120
agagtgtcca tctcttgtca gtgcagatct tccgtgtatg agaacaacta cctgtcttgg 180
ctgcaacaaa aaccaggcca gaccatcaag cggctgatct acggcgcttc caccctggat 240
tccggggtgc cctcgcggtt ttccggctct ggttctggct accagttcac actgacaatc 300
tctgacctgc agtgcgagga cgccgccacc tactactgcg ctggcgtgta ccgggacgag 360
tccgacgacg cctttggcgg cggcaccgag ctggtcgtga agagaggcgg cggaggcagc 420
gacatcgtgc tgacccagtc ccccaagagc ctgtctgcca gcctgggcgg cagagtgtct 480
atctcctgcc aggcccgcag cgatgtgtat gaagctaatt ctctgtggct gcagcagaag 540
cctggccaga cccctaagag actgatctac gctgcttcct acctggattc cggcgtgcct 600
accagattct ccggctccgg ctccggctac gacttcaccc tgaccatctc cgactgccag 660
tgtgaagatg ccgctaccta ctactgtgcc tccgtttaca ggtccgagag caccgacgcc 720
ttcggcggag gaacacagct ggtgctgaag cggagaaccg tggccgcccc cagcgtgttc 780
atcttccctc cttctgatga gcagctgaaa tccggcaccg cttctgtggt gtgcctgctg 840
aacaacttct accctagaga ggccaaagtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagtct 900
ggcaactccc aagagtctgt cacagaacag gactccaagg actctaccta ctccctctcc 960
tccaccctca ccctgtctaa ggccgactac gaaaagcaca aggtgtacgc ctgcgaagtg 1020
acccaccagg gcctgtcctc tcctgtgacc aagagcttca accggggcga gtgctaagct 1080
agctagcgcg gatccatggt aagcgctatt gttttatatg tgcttttggc ggcggcggcg 1140
cattctgcct ttgcgcaaga acaactacaa gaaagtggtg aaggtctggt gacccctggc 1200
gctaccaaga ccctggtgtg caaggcttct ggattctcct tcaatgccta ctacatgaat 1260
tgggtcaagc aggctcacgg caagtcgctg gaatggatcg gcttcatcga tctgaacaac 1320
ggcgtgtact atgccaacag aaagttcatg cggttcacct tcctaaaaac ctccgacaaa 1380
gtgaacctga agtacaccag cctgacccct gaggataccg cctccgaggc cgtggctaga 1440
tctcggggaa attctgccgg catgagactg gacctgtggg gccaaggaac ccttgtcacc 1500
gtgtctagcg gcggtggcgg ctctcaagag cagctggtgg aatctggcga gggactcgtg 1560
cagcccggcg ccaccctgaa gctgtcctgc aaggcctccg gcttttcttt caacgactac 1620
tacatgggct gggtgaagca ggcccccgga aaacctctgg agtggatcgg cttcatcgac 1680
cagaacaatg gcgtgtacta cgccaaccgg aagttcaagg ataagtttac aatctcccgc 1740
gactctgctc agaacaccct gaacctgcag atgaacaaag aagatactgc ttctgaggct 1800
gtggccaggt cccgggacaa ctccgtgggc tctcggctgg acgcctgggg acaaggcacc 1860
tccgtgaccg tgagcagcgc cagcaccaaa ggcccttccg tgtttcctct ggccccttct 1920
tccaagtcca cctccggcgg caccgctgct ctgggctgtc tggtgaagga ctacttcccc 1980
gagcccgtca cagtgtcttg gaactccggc gccctgacat ctggcgtgca tacctttcca 2040
gcagtgctgc agtccagcgg actgtactcc ctgtcttctg tggtgaccgt gcctagctct 2100
tccctgggca cacagaccta catctgcaac gtgaaccaca agccttccaa taccaaggtg 2160
gacaagaagg tggaacctaa gagctgcgac aagacccaca cctgtcctcc ttgtcctgcc 2220
ccagaactgc tgggaggccc ctccgtgttc ctgttccctc caaaacccaa ggacaccctg 2280
atgatctcca gaacccccga agtgacatgc gtggtcgtgg acgtgtctca cgaggaccct 2340
gaggtgaagt tcaactggta cgtggacggc gtggaagtgc acaacgctaa gaccaagcct 2400
agagaggaac agtacaactc tacctacaga gtggtgtccg ttctgaccgt gctgcaccag 2460
gactggctga acggcaaaga gtacaagtgc aaagtctcca acaaggccct gccagctcct 2520
atcgagaaga ccatctccaa ggccaagggc cagtgcagag aacctcaggt gtataccctg 2580
cctccttcta gagacgagct gacaaagaac caggtctctc tgacctgcct ggtcaagggc 2640
ttctacccct ccgacatcgc cgtggagtgg gagtccaacg gccagcctga gaacaactac 2700
aagaccacac ctcctgtgct ggatagtgat ggctccttct tcctgtacag caaactgaca 2760
gtggataagt ccagatggca gcagggcaac gtgttcagct gctccgtgat gcacgagtgt 2820
ctgcataacc actacaccca gaagtctctg tccctgtctc ctggcaagta agaattccgg 2880

Claims (8)

1.一种抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述的抗体或其抗原结合片段包含如下所示的重链可变区：
1)氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH1；和
2)氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示的VH2；
和，
如下所示的轻链可变区：
1)氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL1；和
2)氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL2；
所述的抗体轻链为VL2-VL1-CL，重链为VH2-VH1-CH或者所述抗体轻链为VL1-VL2-CL，重链为VH1-VH2-CH。
2.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述重链可变区在氨基酸序列如SEQ ID NO：13所示的VH1和氨基酸序列如SEQ ID NO：14所示的VH2的两段氨基酸之间通过接头序列进行连接；所述轻链可变区在氨基酸序列如SEQ ID NO：15所示的VL1和氨基酸序列如SEQ ID NO：16所示的VL2的两段氨基酸之间通过接头序列进行连接。
3.根据权利要求2所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述接头序列为GGGGS。
4.根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，其特征在于所述抗体或其抗原结合片段能够阻断IL-6与IL-6R的结合。
5.一种编码权利要求1-4任一项所述抗体或抗原结合片段的核酸分子。
6.一种包含权利要求5所述核酸分子的载体。
7.一种包含权利要求6所述载体的宿主细胞。
8.一种检测IL-6的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1-4任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
CN202110572041.8A 2021-05-25 2021-05-25 Il-6抗体或其抗原结合片段及包含其的检测试剂盒 Active CN113214393B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110572041.8A CN113214393B (zh) 2021-05-25 2021-05-25 Il-6抗体或其抗原结合片段及包含其的检测试剂盒

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202110572041.8A CN113214393B (zh) 2021-05-25 2021-05-25 Il-6抗体或其抗原结合片段及包含其的检测试剂盒

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN113214393A CN113214393A (zh) 2021-08-06
CN113214393B true CN113214393B (zh) 2022-11-18

Family

ID=77098362

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202110572041.8A Active CN113214393B (zh) 2021-05-25 2021-05-25 Il-6抗体或其抗原结合片段及包含其的检测试剂盒

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN113214393B (zh)

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2003531588A (ja) * 2000-04-11 2003-10-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 多価抗体とその用途
CN103059137A (zh) * 2011-10-21 2013-04-24 神州细胞工程有限公司 抗hIL6R高亲和力抗体的制备及应用
CA3088845A1 (en) * 2018-01-04 2019-07-11 Vitaeris, Inc. Use of anti-il-6 antibody, e.g., clazakizumab for desensitization of solid organ transplant recipients and/or for preventing, stabilizing or reducing antibody mediated rejection (abmr)
CN110655576A (zh) * 2019-11-13 2020-01-07 武汉华美生物工程有限公司 Il-6重组单克隆抗体及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN113214393A (zh) 2021-08-06

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105579471B (zh) 结合人程序性死亡配体1(pd-l1)的抗体
JP5941615B2 (ja) ヒトｃｘｃｌ１タンパク質の免疫学的測定方法
CN112250763A (zh) 靶向SARS-CoV-2冠状病毒的抗体及其诊断和检测用途
KR102661060B1 (ko) 항인간 IgG4 모노클로날 항체, 및 그 항체를 이용한 인간 IgG4 측정 시약
US20140243265A1 (en) Antibodies to modified human igf-1/e peptides
CN114181308B (zh) 一种降钙素原抗体及其应用
CN109336973B (zh) 抗转铁蛋白抗体及其用途
AU2019384259A1 (en) Specific antibody for AMH, and uses thereof
CN113045646B (zh) 抗新型冠状病毒SARS-CoV-2的抗体
CN113214393B (zh) Il-6抗体或其抗原结合片段及包含其的检测试剂盒
US20210380719A1 (en) Rabbit antibodies to human immunoglobulins g
CN111303289B (zh) 抗人Tn型糖基化MUC1抗体及其用途
TW201915016A (zh) 單株抗體或其抗原結合片段及其用途
CN116143929B (zh) 抗重组人凝血因子VIIa-Fc融合蛋白的抗体及其应用
CN116284411B (zh) 抗培重组人凝血因子VIII-Fc融合蛋白的抗体及其应用
CN117285637B (zh) 一种抗独特型抗体及其应用
CN117683121B (zh) 抗水痘-带状疱疹病毒抗体及其应用
JP7359390B2 (ja) チクングニアウイルスに対する抗体またはその抗原結合断片、およびその用途
CN115677856B (zh) 抗人IgM抗体及其应用
CN112724253B (zh) 抗人穹窿体蛋白的抗体及其应用
JP5448424B2 (ja) ヒトＩｇＧのＦｃを含有するタンパク質の測定試薬
WO2023088443A1 (zh) 一种抗人IgM抗体及其制备方法和用途
EP3932944A1 (en) Hsv ge antibodies
CN108727493B (zh) 抗Stathmin单克隆抗体及其用途
JP2011160696A (ja) 修飾ヒトｉｇｆ−１／ｅペプチドに対する抗体

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant