CN114181308B - 一种降钙素原抗体及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种降钙素原抗体及其应用，降钙素原抗体的重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3。HCDR1～HCDR3的序列分别为NYWMN、EIRLKSNNYATHYAESVKG和EPIRAQYYFDY。LCDR1～LCDR3的序列分别为KSTKSLLNSDGFTYLD、LVSNRFS和FQSNYLPLT。本发明的PCT单克隆抗体，可对完整的降钙素原1‑116进行测定，可避免交叉反应，具有较高的灵敏度，提高PCT检测的准确度，可用于制备降钙素原检测的试剂，检测炎症（特别是细菌感染/脓毒血症状态下）刺激下产生的PCT含量。

Description

一种降钙素原抗体及其应用
技术领域
本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种降钙素原抗体及其应用。
背景技术
降钙素原(Procalcitonin，PCT)是降钙素的前体肽，由116个氨基酸组成，相对分子量为13KD的无激素活性糖蛋白，是11号染色体上的Calci基因的编码产物。PCT是一种用于诊断和监控严重细菌感染及脓毒血症、败血症等疾病的理想指标，降钙素原可以以游离形式存在于正常人全血、血浆或血清中。正常人全血、血浆或血清PCT水平很低，而严重感染并有全身表现时，如全身性细菌、真菌和寄生虫感染时，PCT水平明显升高，PCT的增长反应了一个从健康状态到疾病的最严重状态(严重脓毒症和脓毒性休克)的持续发展。
由于在局部感染、病毒感染、慢性非特异性炎症、癌症发热、移植物宿主排斥反应或自身免疫性等疾病时PCT浓度不增加或轻微增加，而只在严重的全身系统性感染时才明显增加，所以PCT在临床的应用可用于细菌感染与病毒感染的鉴别诊断，脓毒症的早期诊断，疾病的严重程度的评估及预后，抗生素治疗效果的评估，指导临床抗生素使用，术后细菌感染监测，胰腺炎鉴别诊断等。因此，PCT在不同医学领域对诊断和指导治疗具有很高的临床价值。
临床检测PCT的检测方法包括双抗夹心免疫化学发光法(双抗夹心法)、胶体金比色法、放射免疫学分析法、免疫比浊法等，其均利用抗体的特异性识别进行检测，所以对其检测抗体有一定要求。现有技术使用重组PCT全长抗原直接进行小鼠免疫，筛选出的PCT单克隆大多也会同时识别降钙素或抗钙素等，产生交叉反应。
开发出一种特异性更好的PCT抗体，对于准确检测PCT的量，具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种降钙素原抗体及其应用。
本发明所采取的技术方案是：
本发明的第一个方面，提供：
一种降钙素原抗体，包括重链和轻链，其重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，其轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述可变区的氨基酸序列如下：
HCDR1：NYWMN(SEQ ID NO.：1)
HCDR2：EIRLKSNNYATHYAESVKG(SEQ ID NO.：2)
HCDR3：EPIRAQYYFDY(SEQ ID NO.：3)
LCDR1：KSTKSLLNSDGFTYLD(SEQ ID NO.：4)
LCDR2：LVSNRFS(SEQ ID NO.：5)
LCDR3：FQSNYLPLT(SEQ ID NO.：6)。
在一些实例中，所述重链的恒定区H_FR1～H_FR4的氨基酸序列分别独立为：
H_FR1：QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFT(SEQ ID NO.：7)
H_FR2：WIKQRPGQGLEWIG(SEQ ID NO.：8)
H_FR3：KATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAR(SEQ ID NO.：9)
H_FR4：WGQGTLVTVSA(SEQ ID NO.：10)。
在一些实例中，所述重链的结构为H_FR1-HCDR1-H_FR2-HCDR2-H_FR3-HCDR3-H_FR4。
在一些实例中，所述轻链的恒定区L_FR1～L_FR4的氨基酸序列分别独立为：
L_FR1：DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTC(SEQ ID NO.：11)
L_FR2：WFQQKPGQSPKSLIY(SEQ ID NO.：12)
L_FR3：GVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFC(SEQ ID NO.：13)
L_FR4：FGAGTKLELK(SEQ ID NO.：14)。
在一些实例中，所述轻链的结构为L_FR1-LCDR1-L_FR2-LCDR2-L_FR3-LCDR3-L_FR4。
在一些实例中，所述抗体为分子结构为VH-X1-VL的单链抗体，其中，VH为重链，X1为连接子序列，VL为轻链。
在一些实例中，所述连接子序列由氨基酸G/S组成。
在一些实例中，所述连接子序列为(GS)n、(GGS)n、(GGGS)n或(GGGGS)n，n＝1～5。
在一些实例中，所述连接子序列为GGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO.：15)。
本发明的第二个方面，提供：
编码本发明第一个方面所述降钙素原抗体的DNA分子。
本发明的第三个方面，提供：
一种降钙素原检测试剂，其包括本发明第一个方面所述的降钙素原抗体。
本发明的有益效果是：
本发明一些实例的PCT单克隆抗体，可用于诊断人体血浆中的天然降钙素原，即对完整的降钙素原1-116进行测定，可避免交叉反应，具有较高的灵敏度，提高PCT检测的准确度。
本发明一些实例的PCT单克隆抗体，可用于制备降钙素原检测的试剂，用于检测炎症(特别是细菌感染/脓毒血症状态下)刺激下产生的PCT含量。
本发明一些实例的PCT单克隆抗体，可与4A1进行配对。
附图说明
图1是单克隆抗体的SDS-PAGE电泳染色结果；
图2是线性范围试验的回归曲线。
具体实施方式
本发明的第一个方面，提供：
一种降钙素原抗体，包括重链和轻链，其重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，其轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，所述可变区的氨基酸序列如下：
HCDR1：NYWMN
HCDR2：EIRLKSNNYATHYAESVKG
HCDR3：EPIRAQYYFDY
LCDR1：KSTKSLLNSDGFTYLD
LCDR2：LVSNRFS
LCDR3：FQSNYLPLT。
在一些实例中，所述重链的恒定区H_FR1～H_FR4的氨基酸序列分别独立为：
H_FR1：QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFT
H_FR2：WIKQRPGQGLEWIG
H_FR3：KATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAR
H_FR4：WGQGTLVTVSA。
在一些实例中，所述重链的结构为H_FR1-HCDR1-H_FR2-HCDR2-H_FR3-HCDR3-H_FR4。
在一些实例中，所述轻链的恒定区L_FR1～L_FR4的氨基酸序列分别独立为：
L_FR1：DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTC
L_FR2：WFQQKPGQSPKSLIY
L_FR3：GVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFC
L_FR4：FGAGTKLELK。
在一些实例中，所述轻链的结构为L_FR1-LCDR1-L_FR2-LCDR2-L_FR3-LCDR3-L_FR4。
在一些实例中，所述抗体为分子结构为VH-X1-VL的单链抗体，其中，VH为重链，X1为连接子序列，VL为轻链。
在一些实例中，所述连接子序列由氨基酸G/S组成。
在一些实例中，所述连接子序列为(GS)n、(GGS)n、(GGGS)n或(GGGGS)n，n＝1～5。
在一些实例中，所述连接子序列为GGGGSGGGGSGGGGS。
本发明的第二个方面，提供：
编码本发明第一个方面所述降钙素原抗体的DNA分子。
本发明的第三个方面，提供：
一种降钙素原检测试剂，其包括本发明第一个方面所述的降钙素原抗体。试剂中其他降钙素原检测试剂常用组分包括微孔板、酶标记物(R1)、发光底物、浓缩洗液、校准品组成等。
下面结合实例，进一步说明本发明的技术方案。
单克隆抗体的制备
步骤1：小鼠免疫
小鼠选择4-5周雌性Balb/c健康小鼠，采用重组降钙素原(全长PCT)抗原进行免疫。初次免疫：免疫剂量为100ug/只，采用背部多点注射法；两周后二次免疫：免疫剂量为50ug/只，采用背部多点注射法；二次免疫一周后，第1次采血进行效价检测，效价应大于1:10000；四周后三次免疫：免疫量为50ug/只，采用小腿肌肉注射；三次免疫一周后，第2次采血进行效价检测，效价应大于1:100000；七周后四次免疫：使用NPCT、CT以及PCT(去除NPCT)三种多肽混合的溶液，60ug/只，采用小腿肌肉注射；九周后四次免疫：使用三种多肽混合的溶液，50ug/只，采用腹腔注射；加强免疫，在细胞融合前3天，取50ug真核PCT抗原采用生理盐水配置200ul，免疫量为50ug/只，采用腹腔注射。
步骤2：杂交瘤细胞融合
取加强免疫小鼠一只，眼眶采血后脱臼处死，在75％酒精浸泡5min后取脾脏，去除结缔组织，制备脾细胞悬液，转移到50ml离心管中，加RPMI1640至30ml，1000rpm离心5分钟，弃上清，加RPMI1640至30ml，计数，细胞数量至少要达到3.6*108个/ml。取没有被免疫接种过免疫原的6-10周Balb/c健康小鼠的骨髓瘤细胞，转移到50ml离心管中，加RPMI1640至30ml，1000rpm离心5分钟，弃上清，加RPMI1640至30ml，计数，细胞数量至少要达到1.7*107个/ml，将脾细胞与骨髓瘤以6.35：1的比例进行细胞混合，1000rpm离心5分钟，去上清，细胞进行融合培养7d。
步骤3：阳性杂交瘤细胞株的筛选
采用间接ELISA检测杂交瘤融合细胞上清中抗体，将待测细胞培养上清加入已包被重组PCT抗原的酶标板中，于37℃作用1h后洗涤3次，每孔加入100ul的HRP标记的羊抗鼠IgG，于37℃作用1h后洗涤3次，加入显色液，避光显色20min，每孔加入100uL终止液终止反应，以450、630双波长测定各孔OD值，以与阴性对照孔OD值的比值(P/N)大于2.1为限，作出判断为阳性孔，采用倒置显微镜观察细胞生长情况，根据筛选出阳性杂交瘤细胞数较少的高值阳性结果的阳性杂交瘤细胞。通过间接ELISA法检测杂交瘤细胞上清中抗体，经过3-5次克隆化筛选，直到单克隆细胞株阳性率达到100％，对细胞株进行定株，选择具有较高效价的杂交瘤细胞株，进一步对其进行抗体测序。
步骤4：单克隆抗体的生产与纯化
5-6周健康Balb-c小鼠注射0.5ml/只石蜡油，使得小鼠致敏，将上述细胞悬液离心去上清，加入生理盐水至细胞浓度为1×106～2×106个/ml，吸取10ml的细胞悬液腹腔注射小鼠，每只小鼠注射0.5ml，5d后抽取腹水，离心吸取腹水上清，将制备的腹水先经饱和硫酸铵沉淀，制备出鼠抗PCT抗体粗品，之后经亲和层析柱Protein A进行纯化。
采用SDS-PAGE电泳染色，对单克隆抗体纯度进行检测，M为marker，1为包被抗体，观察70KD、25KD左右处可见目标条带，无其他条带或显色较弱的杂带。通过凝胶成像系统分析单克隆抗体纯度≥95％(图1)。
最终筛选得到效果最佳的单克隆抗体的重链氨基酸和轻链氨基酸序列分别为：
重链氨基酸序列：QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFT-NYWMN-WIKQRPGQGLEWIG-EIRLKSNNYATHYAESVKG-KATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAR-EPIRAQYYFDY-WGQGTLVTVSA(下划线标记的部分为重链可变区，其余部分为重链恒定区)。
轻链氨基酸序列：DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTC-KSTKSLLNSDGFTYLD-WFQQKPGQSPKSLIY-LVSNRFS-GVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFC-FQSNYLPLT-FGAGTKLELK(下划线标记的部分为轻链可变区，其余部分为轻链恒定区)。
下面对上述具体的单克隆抗体的性能进行检测。
PCT抗体性能验证
1、鼠抗PCT单抗腹水的效价测定
间接ELISA法测定鼠抗PCT单抗腹水的效价，使用碳酸盐包被缓冲液将PCT抗原稀释至2ug/mL并加入酶联板进行包被，采用封闭液进行封闭后，分别按下表加入稀释后的PCT单克隆抗体作为孵育一抗，羊抗鼠IgM作为孵育二抗，经显色、终止步骤，采用酶标仪读取OD值。(结果：OD>0.1判定为有效价)
表1、效价结果
稀释倍数 PCT抗体浓度 OD值
1000 0.4ug/ml 3.0756
3000 0.133ug/ml 3.0432
9000 0.04ug/ml 2.9666
27000 0.015ug/ml 2.1033
81000 0.005ug/ml 0.8328
243000 1.6ng/ml 0.294
729000 0.54ng/ml 0.1019
2187000 0.182ng/ml 0.0324
根据表1结果分析可知，当包被浓度为0.4ug/ml至1.6ng/ml时，效价符合质控要求。
2、单克隆抗体特异性识别
降钙素原抗原(PCT抗原)包括PCT(全长)和其他的短肽，其他的短肽包括NPCT、CT以及PCT(去除NPCT)，采用间接ELISA法分别测定PCT单克隆抗体对NPCT、CT、PCT(去除NPCT)和PCT(全长)的特异性，使用抗体稀释液将抗原稀释至2ug/mL并加入酶联板进行包被，采用封闭液进行封闭后，加入稀释后的PCT单克隆抗体作为孵育一抗，羊抗鼠IgG作为孵育二抗，经显色、终止步骤，采用酶标仪读取OD值，其中，阴性对照：抗体稀释液，阳性对照：4A1抗体(购自重庆探生科技有限公司，货号为FAB-B002，克隆号为4A1)。
表2：特异性鉴定结果如下：
NPCT CT PCT(去除NPCT) PCT(全长) 阴性对照 阳性对照
OD值 0.0131 0.0149 0.0205 3.2158 0.0231 2.9568
结果表明，NPCT、CT、PCT(去除NPCT)与PCT全长的OD检测值均＜阴性对照，只有PCT全长抗原的OD检测值＞阳性对照，说明本技术的PCT单克隆抗体可对PCT(全长)抗原进行特异性识别，可排除交叉反应。
3、可配对抗体筛选
外购商品化抗人降钙素原抗体(PCT)(购自重庆探生科技有限公司，货号为FAB-B002，克隆号为4A1、10D6，本交底书中分别命名为4A1、10D6)作为包被抗体，将生物素化的PCT单抗(PCT-BIO)作为第二抗体，按双抗体夹心ELISA测定PCT抗原进行配对，具体为：
1、包被，将包被抗体用碳酸盐包被缓冲液稀释至2ug/ml，每孔100ul加入ELISA酶标板包被过夜，每孔加250ul洗涤液PBST，静置1min，洗涤3次；
2、封闭，每孔加入200uL的5％脱脂奶粉封闭37℃两小时，加250ul洗涤液PBST，静置1min，洗涤3次；
3、加抗原，将PCT抗原用抗体稀释液(5％脱脂奶粉，1xPBST配制)稀释至4ng/ml、1ng/ml、0.25ng/ml，空白对照为抗体稀释液，每孔100uL加入到酶标板中，室温震荡孵育1h。加250ul洗涤液，静置1min，洗涤3次。
4、加第二抗体，用抗体稀释液将PCT-BIO稀释至20倍，每孔100uL加入到酶标板中，室温震荡孵育1h。加250ul洗涤液，静置1min，洗涤3次。
5、加SA-HRP，原液1：1000稀释加100uL每孔(5％脱脂奶粉，1x PBST配制)，室温震荡孵育30min。加250ul洗涤液，洗涤5次，每次1min。
6、显色，加入显色液，避光显色20min。
7、终止，每孔加入100uL终止液。
8、检测，酶标仪读取OD值。
表3：配对抗体筛选数据结果
Figure BDA0003438543920000071
结果表明，本发明的PCT单克隆抗体可与探身科技的4A1抗体和10D6抗体进行配对，且配对抗体选用4A1抗体较选用10D6抗体的灵敏度更高，所以选用4A1抗体与本发明的PCT单抗进行配对。
4、PCT免疫比浊试剂盒
表4：PCT免疫比浊试剂盒组成
Figure BDA0003438543920000081
其中，试剂2中的PCT抗体复合物乳胶微球制备采用EDC-NHS偶联法，将本发明PCT单抗和4A1抗体分别偶联到乳胶微球上后，进行混合形成PCT抗体复合物乳胶微球。采用PCT免疫比浊试剂盒检测血清样本，检测原理为，包被有PCT单抗和4A1抗体的乳胶微球可与血清中的PCT形成双抗体夹心的抗原抗体复合物，溶液浊度高低在一定量PCT抗体复合物乳胶微球存在时与血清中的PCT成正比，通过测定溶液特定浊度的吸光度值，参考校准曲线即可计算出血清中PCT的浓度。检测步骤：
1、准备新鲜全血临床样本，离心得到血清样本；
2、向比色杯中加入150ul试剂1与12.5uL血清样本，混匀，37℃孵育300秒；
3、加入50ul试剂2，混匀，37℃孵育20-40秒，测定吸光值A1，反应300秒，测定吸光度A2。
采用迈瑞BS-400自动生化仪进行样本测试，生化仪测试参数如下表5，结果如表6所示。
表5：生化仪参数设定
主波长 546nm R1+S孵育时间 300秒
副波长 800nm R1+S+R2孵育时间 20-40秒
样本(S) 12.5ul R1+S+R2反应时间 300秒
试剂1(R1) 150ul 反应方向 向上
试剂2(R2) 50ul 反应方法 两点终点法
表6：校准曲线结果
Figure BDA0003438543920000091
4.1最低检出限：
表7：最低检出限结果
Figure BDA0003438543920000092
由表7可见，最低检测限为0.25ng/ml，检测灵敏度高，其检测范围广。
4.2精密度实验：分别测试低值血清和高值血清两种不同浓度(0.93ng/ml±15％，6.12ng/ml±15％，北京博尔迈生物技术有限公司)的血清各10次，得出批内变异系数CV在4.1％-6.8％。
表8：精密度实验结果
Figure BDA0003438543920000101
4.3稳定性：将试剂盒放置于37℃孵育箱中，进行加速实验，于1、3、5、7天取出，分别测试低值质控、高值质控血清(0.93ng/ml±15％，6.12ng/ml±15％，北京博尔迈生物技术有限公司)。测试结果应在质控结果范围内。
表9：稳定性实验结果
Figure BDA0003438543920000102
由表9可见，加速0-7天后，低值质控、高值质控血清的检测值依然在标示值范围内，所以试剂37℃7天依然稳定。
4.4线性范围：取低值血清和高值血清按不同比例混合，稀释成12个不同浓度的样本，使用本试剂盒在自动生化仪上从低值到高值进行测试，每个浓度分别进行平行测定4次。结果如表10和图2所示。
表10：线性实验结果
Figure BDA0003438543920000111
由表10和图2可见，试剂盒的线性范围为0.5-45ng/ml，r2＝0.998。
4.5准确度(回收实验)：按照下表，向血清样本1中加入不同浓度的PCT校准品，添加量分别0.50ng/ml、2ng/ml，分别计为样本2和样本3，计算回收率。由表11可见，PCT的回收率在95-105％。
表11：准确度实验结果
测定浓度ng/ml 加入浓度ng/ml 回收浓度ng/ml 回收率％
样本1 0.46 / / /
样本2 0.99 0.50 0.52 104.95
样本3 2.39 2.00 1.92 96.18
5、PCT免疫比浊试剂盒临床比较试验
样本来源：54例临床血清样本，采用降钙素原测定试剂盒(酶联免疫荧光法)VIDASB·R·A·H·M·S PCT(国械注进20152402217，生物梅里埃法国股份有限公司bioMerieux,sa)与本发明中的PCT免疫比浊试剂盒做对比试验，分别评价这两种试剂盒Cut-off值设置为为0.5ng/ml和2ng/ml的一致性。结果如表12和表13所示。
表12
Figure BDA0003438543920000121
表13
Figure BDA0003438543920000122
结果显示，Cut-off值为0.5ng/ml时，两种试剂盒阳性符合率为94.4％，阴性符合率为100％，总符合率为96.3％；Cut-off值为2ng/ml时，两种试剂盒阳性符合率为83.3％，阴性符合率为100％，总符合率为94.4％，本发明试剂盒用于降钙素原的检测与国外产品相近，可用于临床感染性疾病的辅助诊断。
以上是对本发明所作的进一步详细说明，不可视为对本发明的具体实施的局限。对于本发明所属技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的简单推演或替换，都在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 广州市雷德生物科技有限公司
<120> 一种降钙素原抗体及其应用
<130> PCT-ab
<160> 15
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Asn Tyr Trp Met Asn
1 5
<210> 2
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 2
Glu Ile Arg Leu Lys Ser Asn Asn Tyr Ala Thr His Tyr Ala Glu Ser
1 5 10 15
Val Lys Gly
<210> 3
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 3
Glu Pro Ile Arg Ala Gln Tyr Tyr Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 4
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 4
Lys Ser Thr Lys Ser Leu Leu Asn Ser Asp Gly Phe Thr Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 5
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 5
Leu Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 6
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 6
Phe Gln Ser Asn Tyr Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 7
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 7
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr
20 25 30
<210> 8
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 8
Trp Ile Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile Gly
1 5 10
<210> 9
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 9
Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 10
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
1 5 10
<210> 11
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 11
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Gln Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Ser Val Thr Cys
20
<210> 12
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 12
Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Ser Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 13
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 13
Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Asn Val Gln Ser Glu Asp Leu Ala Glu Tyr Phe Cys
20 25 30
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 14
Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
1 5 10
<210> 15
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 15
Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser Gly Gly Gly Gly Ser
1 5 10 15

Claims (3)

1.一种降钙素原抗体，包括重链和轻链，其重链可变区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，其轻链可变区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其特征在于：所述重链可变区HCDR1、HCDR2和HCDR3的氨基酸序列如下：
HCDR1：NYWMN
HCDR2：EIRLKSNNYATHYAESVKG
HCDR3：EPIRAQYYFDY
所述重链的氨基酸序列为：QVQLQQPGAELVKPGASVKLSCKASGYTFT-NYWMN-WIKQRPGQGLEWIG-EIRLKSNNYATHYAESVKG-KATLTVDTSSSTAYMQLSSLTSEDSAVYYCAR-EPIRAQYYFDY-WGQGTLVTVSA；
所述轻链可变区LCDR1、LCDR2和LCDR3的氨基酸序列如下：
LCDR1：KSTKSLLNSDGFTYLD
LCDR2：LVSNRFS
LCDR3：FQSNYLPLT；
所述轻链氨基酸序列为：DIVMTQSQKFMSTSVGDRVSVTC-KSTKSLLNSDGFTYLD-WFQQKPGQSPKSLIY-LVSNRFS-GVPDRFTGSGSGTDFTLTISNVQSEDLAEYFC-FQSNYLPLT-FGAGTKLELK。
2.编码权利要求1所述降钙素原抗体的DNA分子。
3.一种降钙素原检测试剂，其特征在于：其包括权利要求1所述的降钙素原抗体。
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