CN117100794B - 质量改进的杜仲壮骨丸及其制法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及质量改进的杜仲壮骨丸及其制法，该杜仲壮骨丸由如下中药材制成：杜仲、白术、乌梢蛇、人参、桑枝、金铁锁、三七、木瓜、狗骨胶、细辛、续断、石楠藤、川芎、附片、淫羊藿、当归、黄芪、大血藤、秦艽、防风、威灵仙、独活、豹骨、寻骨风；该方法包括如下步骤：制备细粉、制备浸膏、制备浸膏粉、制备混合粉、制备软材、制备干丸，得到未包衣的杜仲壮骨丸。还可以进一步将该未包衣的丸制成包衣丸，本发明还提供了一种杜仲壮骨丸，以及针对该杜仲壮骨丸进行质量检测的方法。本发明制备的杜仲壮骨丸丸型圆整、光滑、发亮，丸重均匀，溶散速度快，制备方法简便、易操作，制备的杜仲壮骨丸收得率高，安全性高，且质量稳定、可控。

Description

质量改进的杜仲壮骨丸及其制法

技术领域

本发明属于中药技术领域，涉及一种杜仲壮骨丸，具体涉及改进杜仲壮骨丸质量的方法，尤其是涉及通过检测和监控杜仲壮骨丸中的生物学敏感成分以确保杜仲壮骨丸的质量可靠性。

背景技术

杜仲壮骨丸是贵阳德昌祥药业有限公司独家生产的口服固体制剂(国药准字Z52020210)，其剂型为丸剂，性状为黑色糖衣浓缩水丸，除去黑色糖衣后显棕褐色，气香，味微苦；服用时用酒或温开水送服，成人一次服用8～12粒，12～13岁一次服用6～8粒，8～10岁一次服用4～6粒，一日服用3次；具有益气健脾，养肝壮腰，活血通络，强筋健骨，祛风除湿。用于治疗风湿痹痛，筋骨无力，屈伸不利，步履艰难，腰膝疼痛，畏寒喜温等症。杜仲壮骨丸的执行标准为中华人民共和国卫生部药品标准《中药成方制剂》第十八册WS3-B-3413-98，其由如下24味药制成：杜仲、白术、乌梢蛇、人参、桑枝、金铁锁、三七、木瓜、狗骨胶、细辛、续断、石楠藤、川芎、附片、淫羊藿、当归、黄芪、大血藤、秦艽、防风、威灵仙、独活、豹骨、寻骨风。

CN1169563C(中国专利号02127916.0)公开了一种治疗风湿类疾病的杜仲壮骨丸，其杜仲等如下24味中药材制成：杜仲74～89份、白术58～71份、乌梢蛇12.2～14.9份、人参29～35份、桑枝72～88份、金铁锁14～18份、三七29～35份、木瓜43～53份、狗骨胶12～14份、细辛14～18份、续断43～53份、石楠藤74～89份、川芎43～53份、附片29～35份、淫羊藿74～89份、当归43～53份、黄芪74～89份、大血藤49～59份、秦艽58～71份、防风43～53份、威灵仙43～53份、独活43～53份、豹骨1.22～1.49份、寻骨风74～89份，其制作方法为：先将人参、豹骨、细辛、三七、金铁锁、乌梢蛇、狗骨胶全量及当归、川芎、独活、秦艽、白术1/3～1/2量烘干并粉碎、过筛、混匀后得细粉备用，将杜仲、桑枝、淫羊藿、石楠藤、木瓜、大血藤、附片、威灵仙、寻骨风、续断、防风、黄芪及剩余的当归、川芎、独活、秦艽、白术混合煎煮三次，将煎煮液合并过滤得滤液，将滤液静置24小时，吸取其上清液，将上清液浓缩至在80℃下相对密度为1.35～1.38的稠膏，将该稠膏与备用的细粉混合均匀，再经泛丸、干燥、灭菌、包衣即制得成品。

CN102631437B(中国专利号201210149694.6)公开了一种治疗风湿痹痛的药物，其特征在于：它由下述按重量份数计原料药制成：杜仲50～100份、白术40～80份、乌梢蛇8.3～16.7份、人参20～40份、桑枝50～100份、金铁锁10～20份、三七20～40份、木瓜30～60份、狗骨胶8～16份、细辛10～20份、续断30～60份、石楠藤50～100份、川芎30～60份、附片20～40份、淫羊藿50～100份、当归30～60份、黄芪50～100份、大血藤33～66份、秦艽40～80份、防风30～60份、威灵仙30～60份、独活30～60份。

CN110320311B(中国专利号201910545252.5)公开了一种杜仲壮骨丸的质量检测方法，所述杜仲壮骨丸按照重量份计，由杜仲81份、白术64.8份、乌梢蛇13.5份、人参32.4份、桑枝81.0份、金铁锁16.2份、三七32.4份、木瓜48.6份、狗骨胶13份、细辛16.2份、续断48.6份、石楠藤81份、川芎48.6份、附片32.4份、淫羊藿81份、当归48.6份、黄芪81份、大血藤54份、秦艽64.8份、防风48.6份、威灵仙48.6份、独活48.6份、肿节风81份，按照下述方法制备而成：根据配方将人参、细辛、乌梢蛇、金铁锁、狗骨胶、三七及部分当归、川芎、独活、秦艽、白术干燥，粉碎成细粉，得药粉备用；将杜仲、桑枝、淫羊藿、木瓜、续断、石楠藤、附片、黄芪、大血藤、防风、威灵仙、肿节风以及剩余的当归、川芎、独活、秦艽、白术加水提取，过滤，滤液浓缩成浸膏；将上述浸膏、药粉及适量辅料混匀，干燥，包衣，即得；其特征在于：所述杜仲壮骨丸的质量检测方法包括鉴别方法和含量测定方法；所述鉴别方法包括对黄芪、淫羊藿、三七、人参或肿节风的薄层鉴别检测；所述含量测定方法包括对马兜铃酸I、马兜铃内酰胺-I或淫羊藿苷的含量测定，但是该发明中由于细辛用量非常少并且细辛药材本身所含马兜铃酸I含量非常低，因此该发明使用HPLC法未检出马兜铃酸I。

然而，众所周知的是，由于药材寻骨风含有马兜铃酸I，而马兜铃酸I在使用不当的情况下存在不良反应的风险，例如存在肾损伤的风险，因此，对于杜仲壮骨丸中的马兜铃酸I含量监控以保证产品批间差异，确保产品具有均一的生物学安全性，仍是本领域技术人员迫切期待的。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种杜仲壮骨丸的制备方法。本发明具有利用本方法制得的杜仲壮骨丸丸型圆整、光滑、发亮，丸重大小均匀，溶散速度快，并且制备方法简便、易操作，制备的杜仲壮骨丸收得率高，安全性高，且质量稳定、可控。同时，本发明制备方法能够对其中的马兜铃酸I含量进行准确监控，保证产品质量均一稳定、提升产品的生物学安全性。

本发明的第一方面提供了制备杜仲壮骨丸的方法，该杜仲壮骨丸由如下比例的中药材制成：杜仲81份、白术64.8份、乌梢蛇13.5份、人参32.4份、桑枝81份、金铁锁16份、三七32.4份、木瓜48.6份、狗骨胶13份、细辛16份、续断48.6份、石楠藤81份、川芎48.6份、附片(黑顺片)32.4份、淫羊藿81份、当归48.6份、黄芪81份、大血藤54份、秦艽64.8份、防风48.6份、威灵仙48.6份、独活48.6份、豹骨1.35份、寻骨风81份；该方法包括如下步骤：

(1)细粉的制备：取人参、豹骨、细辛、三七、金铁锁、乌梢蛇、狗骨胶，以及部分的当归、川芎、独活、秦艽、白术，粉碎，过100目筛，混合均匀，得细粉；

(2)浸膏的制备：另取杜仲、桑枝、木瓜、续断、石楠藤、附片(黑顺片)、淫羊藿、黄芪、大血藤、防风、威灵仙、寻骨风，以及处方余量的当归、川芎、独活、秦艽、白术，加水煎煮，合并煎液，滤过，滤液浓缩成浸膏；

(3)浸膏粉的制备：取部分细粉与部分浸膏，混合均匀，干燥，粉碎，过100目筛，得浸膏粉；

(4)混合粉的制备：取浸膏粉与余量细粉，混合均匀，得混合粉；

(5)软材的制备：取混合粉与余量浸膏，混合均匀，得软材；

(6)干丸的制备：取软材炼制压紧，采用塑制法制丸，修平，干燥，得到干丸，为未包衣的杜仲壮骨丸。

根据本发明第一方面的方法，其还包括如下步骤：

(7)胶糖浆的制备：取明胶、蔗糖、水，加热，搅拌至明胶、蔗糖全部融化，得胶糖浆；

(8)混浆的制备：取胶糖浆、药用活性炭，搅拌均匀，得混浆；

(9)包衣丸的制备：取步骤(6)所得干丸置包衣锅，加入混浆，待干丸表面吸附均匀后，吹风，重复上述操作1～2次，加入二甲硅油、虫白蜡，吹风，至二甲硅油、虫白蜡融化，制成黑色、发亮的丸剂，得包衣的杜仲壮骨丸。

根据本发明第一方面的方法，其还包括使用高效液相色谱法测定步骤(6)所得干丸或者步骤(9)所得包衣丸中的马兜铃酸I含量的操作。制药技术领域技术人员公知的，一种药品的生产，包括投料、制造、检验、包装等诸多过程，最后得到可以向医疗机构供应的药品，从这个意义上讲，对药品(包括中间体和成品)进行检验，当然地是药品生产方法/过程中的一个必不可少的步骤，因此使用高效液相色谱法测定步骤(6)所得干丸或者步骤(9)所得包衣丸中的马兜铃酸I含量的操作当然可以作为本发明第一方面方法的一个重要步骤。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(1)中细粉的制备是按照如下方式进行的：取白术、乌梢蛇、人参、金铁锁、三七、狗骨胶、细辛、川芎、当归、秦艽、独活、豹骨的净药材，混合配料，干燥至水分低于8.0％的干品后，粉碎成细粉，过100目筛，再将细粉混合均匀，制得细粉。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(2)中浸膏的制备是按照如下方式进行的：取杜仲、白术、桑枝、木瓜、续断、石楠藤、川芎、附片(黑顺片)、淫羊藿、当归、黄芪、大血藤、秦艽、防风、威灵仙、独活、寻骨风加水煎煮3次，每次煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.35～1.38的浸膏。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(3)中浸膏粉的制备是按照如下方式进行的：取制得浸膏总量的60～70％，另取制得的细粉，细粉按所取浸膏量重量比，浸膏量:细粉＝100:45～55，混合均匀，干燥为易粉碎的干品，粉碎，过100目筛。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(4)中混合粉的制备是按照如下方式进行的：将剩余部分步骤(1)制得的细粉和步骤(3)制得的浸膏粉混合均匀。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(5)中软材的制备：将剩余部分步骤(2)制得的浸膏和步骤(4)制得的混合粉混合均匀。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(6)中干丸的制备是按照如下方式进行的：取制得的软材，炼制压紧1～2次，采用塑制法制成每10丸重量为1.8g～2.5g的湿丸，将制得的湿丸修平，滚圆，干燥为水分低于6.0％的干丸。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(7)中胶糖浆的制备是按照如下方式进行的：取蔗糖、水、明胶，按2:1:0.05的比例配制，加热，搅拌至蔗糖、明胶完全融化。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(8)中混浆的制备是按照如下方式进行的：取制得的胶糖浆，另取药用活性炭，按3:1的比例配制，搅拌均匀。

根据本发明第一方面的方法，其中步骤(9)中包衣丸的制备是按照如下方式进行的：取步骤(6)制得的干丸置包衣锅，另取步骤(8)制得的混浆，将混浆加入干丸中，待干丸表面吸附均匀后，吹风，重复上述操作1～2次，加入二甲硅油、虫白蜡，吹风，至二甲硅油、虫白蜡融化，制成黑色、发亮的丸剂，即得。

根据本发明第一方面的方法，其包括如下步骤：

(1)制备细粉：取(处方全量的)人参、豹骨、细辛、三七、金铁锁、乌梢蛇、狗骨胶，以及(1/10～3/10处方量的)当归、川芎、独活、秦艽、白术，采用110℃一次干燥20分钟，再采用80℃二次干燥至水分低于8.0％后取出，粉碎成细粉，过100目筛，混合均匀，得细粉；

(2)制备浸膏：取(处方全量的)杜仲、桑枝、木瓜、续断、石楠藤、附片(黑顺片)、淫羊藿、黄芪、大血藤、防风、威灵仙、寻骨风，以及处方余量的当归、川芎、独活、秦艽、白术，置煎煮锅内按煮提法加水煎煮三次，第一次加入药材量的5倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；第二次加入药材量的5倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；第三次加入药材量的4倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；合并三次煎液，用100目滤布过滤，滤液浓缩成80℃时相对密度为1.35～1.38的浸膏；

(3)制备浸膏粉：取制得浸膏总量60～70％的浸膏，另取制得的细粉，细粉量与所取浸膏量重量比，浸膏量:细粉量＝100:45～55，将所取浸膏与细粉混合均匀，采用真空快速干燥成易粉碎的干品，粉碎，过100目筛，得浸膏粉；

(4)制备混合粉：将剩余细粉与浸膏粉混合均匀，得混合粉；

(5)制备软材：混合粉与剩余浸膏混合均匀，得软材；

(6)制备干丸：软材炼制压紧，采用塑制法制成每10丸重1.8～2.5g的湿丸，滚圆、修平，采用80℃干燥至水分低于6.0％，得杜仲壮骨丸素丸为干丸，每丸重0.19～0.22g；

(7)制备胶糖浆：取蔗糖、明胶、水，蔗糖量为干丸量的1.16％～1.41％，明胶量为干丸量的0.029％～0.035％，按照蔗糖:水:明胶＝2:1:0.05的比例，置加热锅中加热，边加热边搅拌，直至蔗糖、明胶完全融化，得胶糖浆；

(8)制备混浆：取胶糖浆、药用活性炭，药用活性炭量为干丸量的0.58％～0.71％，按照胶糖浆:药用活性炭＝3:1的比例，置搅拌桶中搅拌均匀，得混浆；

(9)制备包衣丸：取干丸置包衣锅中，加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风30分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风25分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风20分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹冷风20分钟，取虫白蜡、二甲硅油，虫白蜡量为干丸量的0.031％～0.038％，二甲硅油量为干丸量的0.017％～0.021％，加入虫白蜡、二甲硅油，吹冷风，直至虫白蜡、二甲硅油完全融化，药丸表面光滑、发亮，即得杜仲壮骨丸为包衣丸。

根据本发明第一方面的方法，其具有如实施例1～3任一项所述的操作。

根据本发明第一方面的方法，其中使用高效液相色谱法测定步骤(6)所得干丸或者步骤(9)所得包衣丸中的马兜铃酸I含量包括如下操作：

(i)色谱条件和测定法：配备高效液相色谱仪，使用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱(例如柱规格为4.6mm×250mm，5μm，例如填料规格为)，柱温30℃，流动相为乙腈-0.05％磷酸水溶液(60：40)，流速1mL/min，检测波长315nm，进样量20μL；马兜铃酸I的理论板数应大于5000；

(ii)对照品溶液的配制：精密称取马兜铃酸I对照品10mg，置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL于50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，即得马兜铃酸I对照品溶液。

(iii)供试品溶液的制备：取杜仲壮骨丸若干，素丸直接研细或者包衣丸剥去包衣后研细，精密称取相当于含寻骨风药材0.7g的量置25mL量瓶中，加流动相20mL和乙酸乙酯1mL，超声处理(功率500W，频率45kHz)30min，冷至室温，用流动相稀释至刻度，用0.22μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液。

(iv)测定：精密吸取对照品溶液、供试品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；根据对照品溶液色谱图中马兜铃酸I的峰面积及其浓度，按外标法以峰面积分别计算供试品溶液中的马兜铃酸I含量。

进一步的，本发明第二方面提供了一种杜仲壮骨丸，其是如本发明第一方面任一项所述方法制备得到的素丸或者包衣丸。

进一步的，本发明第三方面提供了测定本发明第一方面任一项所述方法制备得到的杜仲壮骨丸中的马兜铃酸I含量的方法，包括如下操作：

(i)色谱条件和测定法：配备高效液相色谱仪，使用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱(例如柱规格为4.6mm×250mm，5μm，例如填料规格为)，柱温30℃，流动相为乙腈-0.05％磷酸水溶液(60：40)，流速1mL/min，检测波长315nm，进样量20μL；马兜铃酸I的理论板数应大于5000；

(ii)对照品溶液的配制：精密称取马兜铃酸I对照品10mg，置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL于50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，即得马兜铃酸I对照品溶液。

(iii)供试品溶液的制备：取杜仲壮骨丸若干，素丸直接研细或者包衣丸剥去包衣后研细，精密称取相当于含寻骨风药材0.7g的量置25mL量瓶中，加流动相20mL和乙酸乙酯1mL，超声处理(功率500W，频率45kHz)30min，冷至室温，用流动相稀释至刻度，用0.22μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液。

(iv)测定：精密吸取对照品溶液、供试品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；根据对照品溶液色谱图中马兜铃酸I的峰面积及其浓度，按外标法以峰面积分别计算供试品溶液中的马兜铃酸I含量。

在本发明上述制备方法的步骤中，虽然其描述的具体步骤在某些细节上或者语言描述上与下文具体实施方式部分的制备例中所描述的步骤有所区别，然而，本领域技术人员根据本发明全文的详细公开完全可以概括出以上所述方法步骤。

本发明的任一方面的任一实施方案，可以与其它实施方案进行组合，只要它们不会出现矛盾。此外，在本发明任一方面的任一实施方案中，任一技术特征可以适用于其它实施方案中的该技术特征，只要它们不会出现矛盾。下面对本发明作进一步的描述。

本发明所引述的所有文献，它们的全部内容通过引用并入本文，并且如果这些文献所表达的含义与本发明不一致时，以本发明的表述为准。此外，本发明使用的各种术语和短语具有本领域技术人员公知的一般含义，即便如此，本发明仍然希望在此对这些术语和短语作更详尽的说明和解释，提及的术语和短语如有与公知含义不一致的，以本发明所表述的含义为准。

上述的发明的技术方案所提到的原材料标准如下：

杜仲：《中国药典》2020年版一部标准。本品为杜仲科植物杜仲Eucommia ulmoidesOliv.的干燥树皮。4～6月剥取，刮去粗皮，堆置“发汗”至内皮呈紫褐色，晒干。

白术：《中国药典》2020年版一部标准。本品为菊科植物白术Atractylodesmacrocephala Koidz.的干燥根茎。冬季下部叶枯黄、上部叶变脆时釆挖，除去泥沙，烘干或晒干，再除去须根。

乌梢蛇：《中国药典》2020年版一部标准。本品为游蛇科动物乌梢蛇Zaocysdhumnades(Cantor)的干燥体。多于夏、秋二季捕捉，剖开腹部或先剥皮留头尾，除去内脏，盘成圆盘状，干燥。

人参：《中国药典》2020年版一部标准。本品为五加科植物人参Panax ginsengC.A.Mey.的干燥根和根茎。多于秋季采挖，洗净经晒干或烘干。栽培的俗称“园参”；播种在山林野生状态下自然生长的称“林下山参”，习称“籽海”。

桑枝：《中国药典》2020年版一部标准。本品为桑科植物桑Morus alba L.的干燥嫩枝。春末夏初采收，去叶，晒干，或趁鲜切片，晒干。

金铁锁：《中国药典》2020年版一部标准。本品为石竹科植物金铁锁Psammosilenetunicoides W.C.Wu et C.Y.Wu的干燥根。秋季釆挖，除去外皮和杂质，晒干。

三七：《中国药典》2020年版一部标准。本品为五加科植物三七Panax notoginseng(Burk.)F.H.Chen的干燥根和根茎。秋季花开前采挖，洗净，分开主根、支根及根茎，干燥。支根习称“筋条”，根茎习称“剪口”。

木瓜：《中国药典》2020年版一部标准。本品为蔷薇科植物贴梗海棠Chaenomelesspeciosa(Sweet)Nakai的干燥近成熟果实。夏、秋二季果实绿黄时采收，置沸水中烫至外皮灰白色，对半纵剖，晒干。

狗骨胶：《贵州省中药民族药饮片标准》2019年版标准。本品为犬科动物家犬Canisfamiliaris L.的骨骼。宰杀后，剖开，剔去骨骼上的筋肉，将骨骼煎煮、浓缩制成的固体胶。本品亦为我省少数民族习用药材。

细辛：《中国药典》2020年版一部标准。本品为马兜铃科植物北细辛Asarumheterotropoides Fr.Schmidt var.mandshuricum(Maxim.)Kitag.、汉城细辛Asarumsieboldii Miq.var.seou1ense Nakai或华细辛Asarumsieboldii Miq.的干燥根和根茎。前二种习称“辽细辛”。夏季果熟期或初秋釆挖，除净地上部分和泥沙，阴干。

续断：《中国药典》2020年版一部标准。本品为川续断科植物川续断Dipsacusasper Wall.ex Henry的干燥根。秋季采挖，除去根头和须根，用微火烘至半干，堆置“发汗”至内部变绿色时，再烘干。

石楠藤：《湖南省中药材标准》2009年版标准。本品为胡椒科植物毛蒟Piperpuberulun(Benth)Maxim.的干燥地上部分。全年可采，除去杂质，洗净，干燥，扎成把。

川芎：《中国药典》2020年版一部标准。本品为伞形科植物川芎Ligusticumchuanxiong Hort.的干燥根茎。夏季当茎上的节盘显著突出，并略带紫色时采挖，除去泥沙，晒后烘干，再去须根。

附片(黑顺片)：《中国药典》2020年版一部标准。本品为毛茛科植物乌头Aconitumcarmichaelii Debx.的子根的加工品。6月下旬至8月上旬采挖，除去母根、须根及泥沙，习称“泥附子”。

淫羊藿：《中国药典》2020年版一部标准。本品为小檗科植物淫羊藿Epimediumbrevicornu Maxim.、箭叶淫羊藿Epimedium sagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimedium pubescens Maxim.或朝鲜淫羊藿Epimedium koreanum Nakai的干燥叶。夏、秋季茎叶茂盛时采收，晒干或阴干。

当归：《中国药典》2020年版一部标准。本品为伞形科植物当归Angelica sinensis(Oliv.)Diels的干燥根。秋末釆挖，除去须根和泥沙，待水分稍蒸发后，捆成小把，上棚，用烟火慢慢熏干。

黄芪：《中国药典》2020年版一部标准。本品为豆科植物蒙古黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.Var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜荚黄芪Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根。春、秋二季采挖，除去须根和根头，晒干。

大血藤：《中国药典》2020年版一部标准。本品为木通科植物大血藤Sargentodoxacuneata(Oliv.)Rehd.et Wils.的干燥藤茎。秋、冬二季采收，除去侧枝，截段，干燥。

秦艽：《中国药典》2020年版一部标准。本品为龙胆科植物秦艽Gentianamacrophylla Pall.、麻花秦艽Gentiana straminea Maxim.、粗茎秦艽Gentianacrassicaulis Duthie ex Burk.或小秦艽Gentiana dahurica Fisch.的干燥根。前三种按性状不同分别习称“秦艽”和“麻花艽”，后一种习称“小秦艽”。春、秋二季采挖，除去泥沙；秦艽和麻花艽晒软，堆置“发汗”至表面呈红黄色或灰黄色时，摊开晒干，或不经“发汗”直接晒干；小秦艽趁鲜时搓去黑皮，晒干。

防风：《中国药典》2020年版一部标准。本品为伞形科植物防风Saposhnikoviadivaricata(Turcz.)Schischk.的干燥根。春、秋二季采挖未抽花茎植株的根，除去须根和泥沙，晒干。

威灵仙：《中国药典》2020年版一部标准。本品为毛茛科植物威灵仙Clematischinensis Osbeck、棉团铁线莲Clematis hexapetala Pall.或东北铁线莲Clematismanshurica Rupr.的干燥根和根茎。秋季釆挖，除去泥沙，晒干。

独活：《中国药典》2020年版一部标准。本品为伞形科植物重齿毛当归Angelicapubescens Maxim.f.biserrata Shan et Yuan的干燥根。春初苗刚发芽或秋末茎叶枯萎时釆挖，除去须根和泥沙，烘至半干，堆置2～3天，发软后再烘至全干。

豹骨：《湖南省中药材标准》1993版标准。本品为猫科动物金钱豹Panthera PsrdusL.雪豹P.uncia Schreber或云豹Neofelis nebulosa的干燥骨胳。剥去皮(四肢掌爪上的皮毛留下)，刮净残余筋肉，阴干。

寻骨风：《贵州省中药材民族药材质量标准》2003版标准。本品为马兜铃科植物绵毛马兜铃Aristolochia mollissima Hance的干燥全草。夏、秋二季采收，除去泥沙，干燥。

细粉制备：取白术6.48份、乌梢蛇13.5份、人参32.4份、金铁锁16份、三七32.4份、狗骨胶13份、细辛16份、川芎4.86份、当归4.86份、秦艽6.48份、独活4.86份、豹骨1.35份，干燥至水分低于8.0％的干品，粉碎，过100目筛，混合均匀，得细粉。

浸膏制备：取杜仲81份、白术58.32份、桑枝81份、木瓜48.6份、续断48.6份、石楠藤81份、川芎43.74份、附片(黑顺片)32.4份、淫羊藿81份、当归43.74份、黄芪81份、大血藤54份、秦艽58.32份、防风48.6份、威灵仙48.6份、独活43.74份、寻骨风81份，加水煎煮三次，每次煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至1.35～1.38(80℃)，得浸膏。

浸膏粉制备：取前述制得浸膏总量的65％，另取前述制得的细粉，细粉量与所取浸膏量重量比，浸膏量:细粉量＝100:50～60，混合均匀，干燥，粉碎，过100目筛，得浸膏粉。

混合粉制备：取前述浸膏粉与剩余细粉混合均匀，得混合粉。

软材制备：取剩余浸膏与前述混合粉混合均匀，得软材。

干丸制备：取前述软材，炼制压紧1～2次，采用塑制法，制成每10丸重量为1.9g～2.0g的湿丸，将制得的湿丸修平，滚圆，干燥，干至水分低于6.0％，得干丸。

胶糖浆制备：取蔗糖、水、明胶，按2:1:0.05的比例配制，加热，搅拌,直至蔗糖、明胶完全融化，得胶糖浆。所述的蔗糖用量为干丸量的1.16％～1.41％，所述的明胶用量为干丸量的0.029％～0.035％。

混浆制备：取前述胶糖浆与药用活性炭，按3:1的比例配制，搅拌均匀，得混浆。所述的药用活性炭用量为干丸量的0.58％～0.71％。

包衣丸制备：取前述干丸置包衣锅，取前述混浆加入干丸中，待干丸表面吸附均匀后，吹风，重复上述操作1～2次，加入二甲硅油、虫白蜡，吹风，直至二甲硅油、虫白蜡融化，药丸黑色、发亮，得杜仲壮骨丸包衣丸。所述的虫白蜡用量为干丸量的0.031％～0.038％，所述的二甲硅油用量为干丸量的0.017％～0.021％。

本发明制备的杜仲壮骨丸丸型圆整、光滑、发亮，丸重均匀，溶散速度快，制备方法简便、易操作，制备的杜仲壮骨丸收得率高，安全性高，且质量稳定、可控。

发明人就本制备方法做了多次试验，试验记录如下：

取杜仲、白术、桑枝、木瓜、续断、石楠藤、川芎、附片(黑顺片)、淫羊藿、当归、黄芪、大血藤、秦艽、防风、威灵仙、独活、寻骨风加水煎煮三次，合并煎液，过滤，浓缩为1.35～1.38(80℃)的浸膏。另取白术、乌梢蛇、人参、金铁锁、三七、狗骨胶、细辛、川芎、当归、秦艽、独活、豹骨粉碎成细粉；再将部分浸膏与部分细粉混匀，干燥，粉碎成浸膏粉；浸膏粉与剩余细粉混匀成混合粉；用剩余浸膏与混合粉制丸，干燥，再用蔗糖、明胶、水、药用活性炭、二甲硅油、虫白蜡包衣、打光，制得杜仲壮骨丸。

本发明制得的杜仲壮骨丸及其质量检测方法呈现如本文所述优良效果。

附图说明

图1是杜仲壮骨丸中的马兜铃酸I测定HPLC图。

图2是本发明试验制备的杜仲壮骨丸的外观性状图，1：黑色糖衣浓缩水丸外观性状；2：除去糖衣后的外观性状。

图3是本发明试验制备的杜仲壮骨丸鉴别项(1)生成的显色反应。

图4是本发明试验制备的杜仲壮骨丸鉴别项(2)生成的显色反应。

图5是本发明试验制备的杜仲壮骨丸鉴别项(3)与人参对照药材日光下的薄层图，1、3、5：杜仲壮骨丸；2、4：人参对照药材。

图6是本发明试验制备的杜仲壮骨丸鉴别项(3)与人参对照药材紫外光灯(365nm)下的薄层图，1、3、5：杜仲壮骨丸；2、4：人参对照药材。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。在本发明中，如未特别指明，所用药材均为药材的干燥品，且符合药典规定。

实施例1：制备杜仲壮骨丸

本实施例1处方和制法基本上与CN021279160实施例1类同，细节上略有差异，具体如下。

【处方】：

杜仲81g、白术64.8g、乌梢蛇13.5g、人参32.4g、桑枝81g、金铁锁16g、三七32.4g、木瓜48.6g、狗骨胶13g、细辛16g、续断48.6g、石楠藤81g、川芎48.6g、附片(黑顺片)32.4g、淫羊藿81g、当归48.6g、黄芪81g、大血藤54g、秦艽64.8g、防风48.6g、威灵仙48.6g、独活48.6g、豹骨1.35g、寻骨风81g，总物料量1166.85g。

【制法】：

(1)制备细粉：取(处方全量即合计124.65g的)人参、豹骨、细辛、三七、金铁锁、乌梢蛇、狗骨胶，以及(2/10处方量即合计55.08g的)当归、川芎、独活、秦艽、白术，采用110℃一次干燥20分钟，再采用80℃二次干燥至水分低于8.0％后取出，粉碎成细粉，过100目筛，混合均匀，得细粉。

(2)制备浸膏：取(处方全量即合计766.8g的)杜仲、桑枝、木瓜、续断、石楠藤、附片(黑顺片)、淫羊藿、黄芪、大血藤、防风、威灵仙、寻骨风，以及处方余量(即合计220.32g)的当归、川芎、独活、秦艽、白术，置煎煮锅内按煮提法加水煎煮三次，第一次加入药材量的5倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；第二次加入药材量的5倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；第三次加入药材量的4倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；合并三次煎液，用100目滤布过滤，滤液浓缩成80℃时相对密度为1.35～1.38的浸膏。

(3)制备浸膏粉：取制得浸膏总量65％的浸膏，另取制得的细粉，细粉量与所取浸膏量重量比，浸膏量:细粉量＝100:50，将所取浸膏与细粉混合均匀，采用真空快速干燥成易粉碎的干品，粉碎，过100目筛，得浸膏粉。

(4)制备混合粉：将剩余细粉与浸膏粉混合均匀，得混合粉。

(5)制备软材：混合粉与剩余浸膏混合均匀，得软材。

(6)制备干丸：软材炼制压紧，采用塑制法制成每10丸重2.2～2.3g的湿丸，滚圆、修平，采用80℃干燥至水分低于6.0％，得干丸，每丸重0.19g(此处经干燥后所得全部干燥物料，包括收集的合格丸、不合格丸、未成丸粉等，通过称取此全部干燥物料的重量(本实施例称得279.2g)，可以计算每1克全部干燥物料相当于含有寻骨风药材的重量(本实施例算得0.2901g寻骨风药材/g全部干燥物料，即81÷279.2＝0.2901)，由于此全部干燥物料的内容物与干丸甚至下面步骤(9)包衣丸之丸芯本质上相同，因此，在本实施例中，每1g步骤(6)干丸或每1g步骤(9)包衣丸之丸芯相当于包含0.2901g寻骨风药材；同样地，可以计算其它制备杜仲壮骨丸的实施例中的每1g步骤(6)干丸或每1g步骤(9)包衣丸之丸芯相当于包含寻骨风药材的量)。

(7)制备胶糖浆：取蔗糖、明胶、水，蔗糖量为干丸量的1.16％～1.41％，明胶量为干丸量的0.029％～0.035％，按照蔗糖:水:明胶＝2:1:0.05的比例，置加热锅中加热，边加热边搅拌，直至蔗糖、明胶完全融化，得胶糖浆。

(8)制备混浆：取胶糖浆、药用活性炭，药用活性炭量为干丸量的0.58％～0.71％，按照胶糖浆:药用活性炭＝3:1的比例，置搅拌桶中搅拌均匀，得混浆。

(9)制备包衣丸：取干丸置包衣锅中，加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风30分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风25分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风20分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹冷风20分钟，取虫白蜡、二甲硅油，虫白蜡量为干丸量的0.031％～0.038％，二甲硅油量为干丸量的0.017％～0.021％，加入虫白蜡、二甲硅油，吹冷风，直至虫白蜡、二甲硅油完全融化，药丸表面光滑、发亮，即得包衣丸。收集形态良好的1000丸样品。

实施例2：制备杜仲壮骨丸

【处方】：

杜仲81g、白术64.8g、乌梢蛇13.5g、人参32.4g、桑枝81g、金铁锁16g、三七32.4g、木瓜48.6g、狗骨胶13g、细辛16g、续断48.6g、石楠藤81g、川芎48.6g、附片(黑顺片)32.4g、淫羊藿81g、当归48.6g、黄芪81g、大血藤54g、秦艽64.8g、防风48.6g、威灵仙48.6g、独活48.6g、豹骨1.35g、寻骨风81g，总物料量1166.85g。

【制法】：

(1)制备细粉：取(处方全量即合计124.65g的)人参、豹骨、细辛、三七、金铁锁、乌梢蛇、狗骨胶，以及(1/10处方量即合计27.54g的)当归、川芎、独活、秦艽、白术，采用110℃一次干燥20分钟，再采用80℃二次干燥至水分低于8.0％后取出，粉碎成细粉，过100目筛，混合均匀，得细粉。

(2)制备浸膏：取(处方全量即合计766.8g的)杜仲、桑枝、木瓜、续断、石楠藤、附片(黑顺片)、淫羊藿、黄芪、大血藤、防风、威灵仙、寻骨风，以及处方余量(即合计247.86g)的当归、川芎、独活、秦艽、白术，置煎煮锅内按煮提法加水煎煮三次，第一次加入药材量的5倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；第二次加入药材量的5倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；第三次加入药材量的4倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；合并三次煎液，用100目滤布过滤，滤液浓缩成80℃时相对密度为1.35～1.38的浸膏。

(3)制备浸膏粉：取制得浸膏总量70％的浸膏，另取制得的细粉，细粉量与所取浸膏量重量比，浸膏量:细粉量＝100:45，将所取浸膏与细粉混合均匀，采用真空快速干燥成易粉碎的干品，粉碎，过100目筛，得浸膏粉。

(4)制备混合粉：将剩余细粉与浸膏粉混合均匀，得混合粉。

(5)制备软材：混合粉与剩余浸膏混合均匀，得软材。

(6)制备干丸：软材炼制压紧，采用塑制法制成每10丸重2.1～2.2g的湿丸，滚圆、修平，采用80℃干燥至水分低于6.0％，得干丸，每丸重0.18g(参考上文计算方法，算得本实施例每1g步骤(6)干丸或每1g步骤(9)包衣丸之丸芯相当于包含0.3123g寻骨风药材)。

(7)制备胶糖浆：取蔗糖、明胶、水，蔗糖量为干丸量的1.16％～1.41％，明胶量为干丸量的0.029％～0.035％，按照蔗糖:水:明胶＝2:1:0.05的比例，置加热锅中加热，边加热边搅拌，直至蔗糖、明胶完全融化，得胶糖浆。

(8)制备混浆：取胶糖浆、药用活性炭，药用活性炭量为干丸量的0.58％～0.71％，按照胶糖浆:药用活性炭＝3:1的比例，置搅拌桶中搅拌均匀，得混浆。

(9)制备包衣丸：取干丸置包衣锅中，加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风30分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风25分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风20分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹冷风20分钟，取虫白蜡、二甲硅油，虫白蜡量为干丸量的0.031％～0.038％，二甲硅油量为干丸量的0.017％～0.021％，加入虫白蜡、二甲硅油，吹冷风，直至虫白蜡、二甲硅油完全融化，药丸表面光滑、发亮，即得包衣丸。收集形态良好的1000丸样品。

实施例3：制备杜仲壮骨丸

【处方】：

杜仲81g、白术64.8g、乌梢蛇13.5g、人参32.4g、桑枝81g、金铁锁16g、三七32.4g、木瓜48.6g、狗骨胶13g、细辛16g、续断48.6g、石楠藤81g、川芎48.6g、附片(黑顺片)32.4g、淫羊藿81g、当归48.6g、黄芪81g、大血藤54g、秦艽64.8g、防风48.6g、威灵仙48.6g、独活48.6g、豹骨1.35g、寻骨风81g，总物料量1166.85g。

【制法】：

(1)制备细粉：取(处方全量即合计124.65g的)人参、豹骨、细辛、三七、金铁锁、乌梢蛇、狗骨胶，以及(3/10处方量即合计82.62g的)当归、川芎、独活、秦艽、白术，采用110℃一次干燥20分钟，再采用80℃二次干燥至水分低于8.0％后取出，粉碎成细粉，过100目筛，混合均匀，得细粉。

(2)制备浸膏：取(处方全量即合计766.8g的)杜仲、桑枝、木瓜、续断、石楠藤、附片(黑顺片)、淫羊藿、黄芪、大血藤、防风、威灵仙、寻骨风，以及处方余量(即合计192.78g)的当归、川芎、独活、秦艽、白术，置煎煮锅内按煮提法加水煎煮三次，第一次加入药材量的5倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；第二次加入药材量的5倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；第三次加入药材量的4倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；合并三次煎液，用100目滤布过滤，滤液浓缩成80℃时相对密度为1.35～1.38的浸膏。

(3)制备浸膏粉：取制得浸膏总量60％的浸膏，另取制得的细粉，细粉量与所取浸膏量重量比，浸膏量:细粉量＝100:55，将所取浸膏与细粉混合均匀，采用真空快速干燥成易粉碎的干品，粉碎，过100目筛，得浸膏粉。

(4)制备混合粉：将剩余细粉与浸膏粉混合均匀，得混合粉。

(5)制备软材：混合粉与剩余浸膏混合均匀，得软材。

(6)制备干丸：软材炼制压紧，采用塑制法制成每10丸重2.3～2.4g的湿丸，滚圆、修平，采用80℃干燥至水分低于6.0％，得干丸，每丸重0.2g(参考上文计算方法，算得本实施例每1g步骤(6)干丸或每1g步骤(9)包衣丸之丸芯相当于包含0.2782g寻骨风药材，该值与实施例1～2不同是容易理解的，例如制备浸膏的不同操作批次中得膏率可能不同，从而造成每1g干丸中可折算的寻骨风药材量不同)。

(7)制备胶糖浆：取蔗糖、明胶、水，蔗糖量为干丸量的1.16％～1.41％，明胶量为干丸量的0.029％～0.035％，按照蔗糖:水:明胶＝2:1:0.05的比例，置加热锅中加热，边加热边搅拌，直至蔗糖、明胶完全融化，得胶糖浆。

(8)制备混浆：取胶糖浆、药用活性炭，药用活性炭量为干丸量的0.58％～0.71％，按照胶糖浆:药用活性炭＝3:1的比例，置搅拌桶中搅拌均匀，得混浆。

(9)制备包衣丸：取干丸置包衣锅中，加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风30分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风25分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风20分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹冷风20分钟，取虫白蜡、二甲硅油，虫白蜡量为干丸量的0.031％～0.038％，二甲硅油量为干丸量的0.017％～0.021％，加入虫白蜡、二甲硅油，吹冷风，直至虫白蜡、二甲硅油完全融化，药丸表面光滑、发亮，即得包衣丸。收集形态良好的1000丸样品。

若未另外说明，本发明所用寻骨风药材为同一批次的药材。

实施例4：使用HPLC法测定杜仲壮骨丸中的马兜铃酸I含量

本发明杜仲壮骨丸中使用了药材寻骨风，寻骨风中存在可测得量的马兜铃酸A，相比之下，细辛中的马兜铃酸A含量甚微并且细辛药材投料量少，因此有必要关注杜仲壮骨丸中尤其是寻骨风贡献的马兜铃酸A。

刘超文献(刘超,等,RP-HPLC法测定寻骨风中马兜铃酸A的含量,中草药,2003,34(12):1139)报道该药材中存在0.07％～0.26％马兜铃酸A即马兜铃酸I；金周慧文献(金周慧,等,反相高效液相色谱法测定寻骨风中马兜铃酸A的含量,山东中医杂志,2007,26(8):567)报道该药材中存在0.07％马兜铃酸A即马兜铃酸I；王秀兰文献(王秀兰,等,寻骨风药材质量标准研究,湖北中医杂志,2018,40(5):54)报道该药材中存在0.0156％～0.0589％马兜铃酸I。

综合借鉴上述文献的方法，本实施例使用如下方法测定杜仲壮骨丸中的马兜铃酸I含量：

(i)色谱条件和测定法：高效液相色谱仪(岛津LC-20A型)，使用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱(Atlantis dC18柱，4.6mm×250mm，5μm)，柱温30℃，流动相为乙腈-0.05％磷酸水溶液(60：40)，流速1mL/min，检测波长315nm，进样量20μL，马兜铃酸I的理论板数大于6000；保留时间约18.6min。

(ii)对照品溶液的配制：精密称取马兜铃酸I对照品(批号：110746-201912，中国食品药品检定研究院)约10mg，置50mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL于50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，即得含马兜铃酸I约20μg/mL的对照品溶液。

(iii)供试品溶液的制备：取杜仲壮骨丸若干，剥去包衣(可称为丸芯，或者直接取实施例1步骤(6)所得无包衣的干丸)，研细，精密称取相当于含寻骨风药材0.7g的量，置25mL量瓶中，加流动相20mL和乙酸乙酯1mL，超声处理(功率500W，频率45kHz)30min，冷至室温，用流动相稀释至刻度，用0.22μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液。

(iv)药材供试液的制备：精密称取寻骨风50g，加5倍量的水煎煮三次，每次2小时，合并三次煎液，用100目滤布过滤，滤液浓缩，干燥得颗粒；精密称取相当于寻骨风药材0.7g的颗粒置25mL量瓶中，加流动相20mL，超声处理(功率500W，频率45kHz)30min，冷至室温，用流动相稀释至刻度，用0.22μm微孔滤膜过滤，得药材供试液。

(v)测定：精密吸取对照品溶液、供试品溶液、药材供试液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；根据对照品溶液色谱图中马兜铃酸I的峰面积及其浓度，按外标法以峰面积分别计算供试品溶液和药材供试液中的马兜铃酸I含量。

典型的对照品溶液色谱图和供试品(实施例1步骤(6)干丸)溶液色谱图分别见图1之A和图1之B。测定的一些典型结果如下：

使用上述HPLC法经测定并计算，寻骨风药材中的马兜铃酸I含量为0.7313mg/g药材，即0.07313％；若是在步骤(iv)制备药材供试液时随流动相20mL还一起添加乙酸乙酯1mL，测得寻骨风药材中的马兜铃酸I含量0.07294％，表明在测定药材中的马兜铃酸I含量时不论是否添加乙酸乙酯所得结果基本相等，即乙酸乙酯不影响测定结果；

使用上述HPLC法经测定并计算，供试品(实施例1步骤(6)干丸)中的马兜铃酸I含量为0.2014mg/g干丸，供试品(实施例1步骤(9)包衣丸之丸芯)中的马兜铃酸I含量为0.2009mg/g干丸，上述结果表明，两个步骤产物中的马兜铃酸I含量是吻合的；

使用上述HPLC法经测定并计算，供试品(实施例2步骤(6)干丸)中的马兜铃酸I含量为0.2173mg/g干丸，供试品(实施例2步骤(9)包衣丸之丸芯)中的马兜铃酸I含量为0.2181mg/g干丸；

使用上述HPLC法经测定并计算，供试品(实施例3步骤(6)干丸)中的马兜铃酸I含量为0.1915mg/g干丸，供试品(实施例3步骤(9)包衣丸之丸芯)中的马兜铃酸I含量为0.1908mg/g干丸；

假设上述药材供试液测得的马兜铃酸I含量0.7313mg/g药材的结果是与真实值中吻合的，以此数据为基础计算丸剂中的马兜铃酸I回收率；以实施例1产物为例，算法如下：对于实施例1步骤(6)干丸而言，实际测得每1g干丸含有0.2014mg马兜铃酸I；根据实施例1所得结果之每1g干丸理论上相当于0.2901g寻骨风药材，又根据上文测得每1g寻骨风药材理论上含有0.7313mg马兜铃酸I，即理论算得每1g干丸含有0.21215mg马兜铃酸I；上述实测值除以理论值再乘以100％所得百分数(0.2014mg÷0.21215mg×100％＝94.93％)即为马兜铃酸I回收率；同法式可算得实施例1步骤(9)丸芯测得的马兜铃酸I回收率0.2009mg÷0.21215mg×100％＝94.70％；同法可算得实施例2步骤(6)干丸和步骤(9)丸芯实测的马兜铃酸I回收率分别为95.14％和95.49％，实施例3步骤(6)干丸和步骤(9)丸芯实测的马兜铃酸I回收率分别为94.17％和93.82％；

另外，在上述步骤“(iii)供试品溶液的制备”中，若不加乙酸乙酯1mL处理供试品，测得的马兜铃酸I含量明显偏低，如上法测得/求得实施例1(及实施例2～3)之步骤(6)所得全部干物料(干丸)中的马兜铃酸I回收率为77.52％(及实施例2～3的回收率分别73.48％和76.13％)。

在一些初步的实验中，本发明人已经发现，这种低回收率可能与配方中的狗骨胶影响有关，狗骨胶可能对杜仲壮骨丸中的马兜铃酸I含量测定存在不良影响。本发明人为此进行了验证：

参照实施例1～3的配方和制法，不同的仅是不添加狗骨胶，在步骤(6)中制得分别记为实施例a1、实施例a2、实施例a3的三种干物料(干丸)；

针对此实施例a1、实施例a2、实施例a3的三种干丸，使用“(iii)供试品溶液的制备”添加乙酸乙酯1mL的方法配制供试品溶液测得三种物料的马兜铃酸I回收率分别为93.78％、95.74％和94.63％，参考使用“(iii)供试品溶液的制备”但不添加乙酸乙酯的方法配制供试品溶液测得三种物料的马兜铃酸I回收率分别为94.04％、95.32％和93.87％。

这表明，在测定未添加狗骨胶的杜仲壮骨丸中的马兜铃酸I含量时，“(iii)供试品溶液的制备”不论是否添加乙酸乙酯均可以获得良好的回收率；但是如上文所述在测定添加有狗骨胶的杜仲壮骨丸中的马兜铃酸I含量时“(iii)供试品溶液的制备”需要添加乙酸乙酯才可以获得良好的回收率，若不添加乙酸乙酯无法获得良好的回收率。这一发现结果是现有技术根本无法预见的，本发明人尚未见任何文献教导，在使用HPLC法测定包含狗骨胶的杜仲壮骨丸中的马兜铃酸I含量时，使用添加了乙酸乙酯的溶剂制备供试品溶液才可以获得优良回收率。

由于实施例1～3制备丸剂时步骤(7)至(9)仅仅是对丸表面进行处理，而测定包衣丸的马兜铃酸I含量时预先剥除包衣，因此测定步骤(9)包衣丸的结果与步骤(6)干丸的结果预期将是一致的，从上面一些试验的结果也已得到了验证。因此本发明实施例4的HPLC法不但适用于测定步骤(6)干丸，同样也适用于步骤(9)包衣丸中的马兜铃酸I含量。

另外，本实施例4的方法符合药品质量分析方法的一般方法学规范，包括线性关系、精密度等，具体如下：

线性关系考察：精密量取对照品溶液5、10、15、20、30、40、50μL注入液相色谱仪，记录色谱图，以马兜铃酸I的进样量为横坐标，峰面积为纵坐标作图，绘制标准曲线，得线性回归方程y＝1.0062×10⁶x-4273.2(r＝0.9999)，结果表明马兜铃酸I的进样量与其峰面积在0.1～1μg范围内，呈良好的线性关系；

精密度试验：取同一供试品溶液(实施例1步骤(6)干丸)，连续进样6次，记录峰面积，计算峰面积的RSD，结果显示，马兜铃酸I面积的RSD％为0.746％，表明仪器的精密度良好；

中间精密度试验：取同一供试品溶液(实施例1步骤(6)干丸)，分别于岛津LC-20A、安捷伦Agilent1200、奥普斯APS-8010T三台不同的色谱仪上按上文色谱条件进行分析测定，记录峰面积，计算峰面积的RSD，结果显示，马兜铃酸I面积的RSD％为1.78％，结果表明中间精密度良好，具有可操作性；

稳定性试验：取同一供试品溶液(实施例1步骤(6)干丸)，分别于制样后0h、2h、4h、8h、12h、18h注入HPLC仪测定，记录峰面积，计算6个时间点峰面积的RSD，结果马兜铃酸I峰面积的RSD％为0.44％，表明样品在18h内的稳定性良好；

重复性试验：取同一批样品粉末(实施例1步骤(6)干丸)，平行制备6份供试品溶液，按色谱条件进样进行HPLC分析测定，测定峰面积，计算马兜铃酸I峰面积的RSD，6份样品马兜铃酸I峰面积的RSD％为1.46％，结果表明此法重复性良好。

实施例5：杜仲壮骨丸的质量检测

本实施例针对实施例1所得包衣丸进行质量检测。

【性状】：本品为黑色糖衣浓缩水丸，除去糖衣后显棕褐色；气香，味微苦。(见图2)

【鉴别】：(1)取本品5g，研细，加乙醚5ml，密塞，放置10小时，并时时振摇，静置。取上清液1ml，挥干后，残渣加甲醇1ml使溶解，再加2％3,5-二硝基苯甲酸的甲醇溶液2～3滴与氢氧化钾的甲醇饱和溶液2滴，显紫红色。(见图3)

(2)取本品5g，研细，加硅藻土2g，研匀，加浓氨试液2ml使湿润，加乙醚30ml，冷浸过夜，并时时振摇，滤过，滤液挥干，加稀硫酸2ml使溶解，滤过，取滤液分置2支试管中，一管加硅钨酸试液，生成类白色沉淀；另一管加碘化铋钾试液，生成橙红色沉淀。(见图4)

(3)检出人参：

供试品溶液制备：取本品5g，研细，加氯仿30ml，回流提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水饱和的正丁醇25ml回流30分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，先用0.5％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次20ml，再用水洗涤2次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。

对照药材溶液制备：取人参对照药材1g，研细，加氯仿30ml，回流提取20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水饱和的正丁醇25ml回流30分钟，滤过，滤液置分液漏斗中，先用0.5％氢氧化钠溶液洗涤2次，每次20ml，再用水洗涤2次，每次20ml，弃去洗液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为对照药材溶液。

温度：4℃；湿度：72％。

对照药材名称：人参对照药材溶液；来源：中国食品药品检定研究院；批号：J22111001。

展开剂：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水(15:40:22:10)10℃以下放置后的下层溶液；配制方式为：现配制现用。

固定相：硅胶G薄层板；来源：青岛海洋化工有限公司生产的硅胶G薄层板(批号：20230103)及自制硅胶G薄层板。

供试品点样量5ul，对照药材点样量5ul。

显色剂：10％硫酸乙醇溶液；配制批号：S23013003。在110℃烘约数分钟，取出，分别置日光及紫外光灯(365nm)下检视。

仪器名称：ZY-600U薄层色谱自动成像分析系统；仪器编号：DCX-ZL154。

供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的斑点或荧光斑点。薄层图见图5和图6，图5为日光下的薄层图，图6为紫外光灯(365nm)下的薄层图；图5和图6中，1、3、5为对照药材显色，2、4为杜仲壮骨丸显色。

【检查】：符合《中国药典》通则0108丸剂项下各项规定。

(1)水分：不得过9.0％；采用烘干法测定。

温度4℃；湿度：72％。

天平型号：ME204E，天平编号：DCX-ZL020。

仪器型号：DHG-9243BS-III，仪器编号：DCX-ZL126。

干燥温度：105℃；干燥时间：7小时。

称量瓶(第一次，30.2567g)，称量瓶(恒重，30.2565g)；称样量(2.1365g)。称量瓶+样(第一次，32.2846g)，称量瓶+样(第二次，32.2819g)。

计算过程：{[(30.2565+2.1365)-32.2819]÷2.1365}×100％＝5.20％

(2)溶散时限：应在2小时内全部溶散。

崩解溶剂：水；水温：37.0℃。

智能崩解仪型号：ZB-ID，智能崩解仪编号：DCX-ZL127。

溶散完全时间：34分钟。

结论：按照本发明制备的杜仲壮骨丸，丸型圆整、光滑、发亮，性状、水分、溶散时限以及鉴别项均符合标准，并且制备方法简便、易操作，制备的杜仲壮骨丸收得率高，安全性高，且质量稳定、可控。

本发明方法制备的杜仲壮骨丸以及对杜仲壮骨丸进行质量检测的方法呈现如本文上下文所述优良技术效果。

对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

Claims (14)

1.测定杜仲壮骨丸中的马兜铃酸I含量的方法，该杜仲壮骨丸由如下比例的中药材制成：杜仲81份、白术64.8份、乌梢蛇13.5份、人参32.4份、桑枝81份、金铁锁16份、三七32.4份、木瓜48.6份、狗骨胶13份、细辛16份、续断48.6份、石楠藤81份、川芎48.6份、附片32.4份、淫羊藿81份、当归48.6份、黄芪81份、大血藤54份、秦艽64.8份、防风48.6份、威灵仙48.6份、独活48.6份、豹骨1.35份、寻骨风81份；该杜仲壮骨丸是由包括如下步骤的方法制备得到的：

(1)细粉的制备：取人参、豹骨、细辛、三七、金铁锁、乌梢蛇、狗骨胶，以及部分的当归、川芎、独活、秦艽、白术，粉碎，过100目筛，混合均匀，得细粉；

(2)浸膏的制备：另取杜仲、桑枝、木瓜、续断、石楠藤、附片、淫羊藿、黄芪、大血藤、防风、威灵仙、寻骨风，以及处方余量的当归、川芎、独活、秦艽、白术，加水煎煮，合并煎液，滤过，滤液浓缩成浸膏；

(3)浸膏粉的制备：取部分细粉与部分浸膏，混合均匀，干燥，粉碎，过100目筛，得浸膏粉；

(4)混合粉的制备：取浸膏粉与余量细粉，混合均匀，得混合粉；

(5)软材的制备：取混合粉与余量浸膏，混合均匀，得软材；

(6)干丸的制备：取软材炼制压紧，采用塑制法制丸，修平，干燥，得到干丸，为未包衣的杜仲壮骨丸；

该测定方法包括如下操作：

(i)色谱条件和测定法：配备高效液相色谱仪，使用十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，柱温30℃，流动相为体积比60：40的乙腈-0.05%磷酸水溶液混合液，流速1mL/min，检测波长315nm，进样量20μL；马兜铃酸I的理论板数应大于5000；

(ii)对照品溶液的配制：精密称取马兜铃酸I对照品10mg，置50mL 量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取5mL于50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，即得马兜铃酸I对照品溶液；

(iii)供试品溶液的制备：取杜仲壮骨丸若干，素丸直接研细或者包衣丸剥去包衣后研细，精密称取相当于含寻骨风药材0.7g的量置25mL量瓶中，加流动相20mL和乙酸乙酯1mL，超声处理30min，冷至室温，用流动相稀释至刻度，用0.22µm微孔滤膜过滤，得供试品溶液；

(iv)测定：精密吸取对照品溶液、供试品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；根据对照品溶液色谱图中马兜铃酸I的峰面积及其浓度，按外标法以峰面积分别计算供试品溶液中的马兜铃酸I含量。

2.根据权利要求1的方法，其中制备杜仲壮骨丸时，还包括如下步骤：

(7)胶糖浆的制备：取明胶、蔗糖、水，加热，搅拌至明胶、蔗糖全部融化，得胶糖浆；

(8)混浆的制备：取胶糖浆、药用活性炭，搅拌均匀，得混浆；

(9)包衣丸的制备：取步骤(6)所得干丸置包衣锅，加入混浆，待干丸表面吸附均匀后，吹风，重复上述操作1~2次，加入二甲硅油、虫白蜡，吹风，至二甲硅油、虫白蜡融化，制成黑色、发亮的丸剂，得包衣的杜仲壮骨丸。

3.根据权利要求1的方法，步骤(1)中细粉的制备是按照如下方式进行的：取白术、乌梢蛇、人参、金铁锁、三七、狗骨胶、细辛、川芎、当归、秦艽、独活、豹骨的净药材，混合配料，干燥至水分低于8.0%的干品后，粉碎成细粉，过100目筛，再将细粉混合均匀，制得细粉。

4.根据权利要求1的方法，步骤(2)中浸膏的制备是按照如下方式进行的：取杜仲、白术、桑枝、木瓜、续断、石楠藤、川芎、附片、淫羊藿、当归、黄芪、大血藤、秦艽、防风、威灵仙、独活、寻骨风加水煎煮3次，每次煎煮2小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.35~1.38的浸膏。

5.根据权利要求1的方法，步骤(3)中浸膏粉的制备是按照如下方式进行的：取制得浸膏总量的60~70%，另取制得的细粉，细粉按所取浸膏量重量比，浸膏量:细粉=100:45~55，混合均匀，干燥为易粉碎的干品，粉碎，过100目筛。

6.根据权利要求1的方法，步骤(4)中混合粉的制备是按照如下方式进行的：将剩余部分步骤(1)制得的细粉和步骤(3)制得的浸膏粉混合均匀。

7.根据权利要求1的方法，步骤(5)中软材的制备：将剩余部分步骤(2)制得的浸膏和步骤(4)制得的混合粉混合均匀。

8.根据权利要求1的方法，步骤(6)中干丸的制备是按照如下方式进行的：取制得的软材，炼制压紧1~2次，采用塑制法制成每10丸重量为1.8g~2.5g的湿丸，将制得的湿丸修平，滚圆，干燥为水分低于6.0%的干丸。

9.根据权利要求2的方法，步骤(7)中胶糖浆的制备是按照如下方式进行的：取蔗糖、水、明胶，按2:1:0.05的比例配制，加热，搅拌至蔗糖、明胶完全融化。

10.根据权利要求2的方法，步骤(8)中混浆的制备是按照如下方式进行的：取制得的胶糖浆，另取药用活性炭，按3:1的比例配制，搅拌均匀。

11.根据权利要求2的方法，其中步骤(9)中包衣丸的制备是按照如下方式进行的：取步骤(6)制得的干丸置包衣锅，另取步骤(8)制得的混浆，将混浆加入干丸中，待干丸表面吸附均匀后，吹风，重复上述操作1~2次，加入二甲硅油、虫白蜡，吹风，至二甲硅油、虫白蜡融化，制成黑色、发亮的丸剂，即得。

12.根据权利要求1的方法，其中制备杜仲壮骨丸时，包括如下步骤：

(1)制备细粉：取处方全量的人参、豹骨、细辛、三七、金铁锁、乌梢蛇、狗骨胶，以及1/10~3/10处方量的当归、川芎、独活、秦艽、白术，采用110℃一次干燥20分钟，再采用80℃二次干燥至水分低于8.0%后取出，粉碎成细粉，过100目筛，混合均匀，得细粉；

(2)制备浸膏：取处方全量的杜仲、桑枝、木瓜、续断、石楠藤、附片、淫羊藿、黄芪、大血藤、防风、威灵仙、寻骨风，以及处方余量的当归、川芎、独活、秦艽、白术，置煎煮锅内按煮提法加水煎煮三次，第一次加入药材量的5倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；第二次加入药材量的5倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；第三次加入药材量的4倍量水，煎煮2小时，煎煮温度98℃；合并三次煎液，用100目滤布过滤，滤液浓缩成80℃时相对密度为1.35~1.38的浸膏；

(3)制备浸膏粉：取制得浸膏总量60~70%的浸膏，另取制得的细粉，细粉量与所取浸膏量重量比，浸膏量:细粉量=100:45~55，将所取浸膏与细粉混合均匀，采用真空快速干燥成易粉碎的干品，粉碎，过100目筛，得浸膏粉；

(4)制备混合粉：将剩余细粉与浸膏粉混合均匀，得混合粉；

(5)制备软材：混合粉与剩余浸膏混合均匀，得软材；

(6)制备干丸：软材炼制压紧，采用塑制法制成每10丸重1.8~2.5g的湿丸，滚圆、修平，采用80℃干燥至水分低于6.0%，得杜仲壮骨丸素丸为干丸，每丸重0.19~0.22g；

(7)制备胶糖浆：取蔗糖、明胶、水，蔗糖量为干丸量的1.16%~1.41%，明胶量为干丸量的0.029%~0.035%，按照蔗糖:水:明胶=2:1:0.05的比例，置加热锅中加热，边加热边搅拌，直至蔗糖、明胶完全融化，得胶糖浆；

(8)制备混浆：取胶糖浆、药用活性炭，药用活性炭量为干丸量的0.58%~0.71%，按照胶糖浆:药用活性炭=3:1的比例，置搅拌桶中搅拌均匀，得混浆；

(9)制备包衣丸：取干丸置包衣锅中，加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风30分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风25分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹热风20分钟；再加入混浆，待药丸表面吸附均匀后，吹冷风20分钟，取虫白蜡、二甲硅油，虫白蜡量为干丸量的0.031%~0.038%，二甲硅油量为干丸量的0.017%~0.021%，加入虫白蜡、二甲硅油，吹冷风，直至虫白蜡、二甲硅油完全融化，药丸表面光滑、发亮，即得杜仲壮骨丸为包衣丸。

13.根据权利要求3的方法，步骤(i)中，色谱柱的规格为4.6mm×250mm，5µm，填料规格为100Å。

14.根据权利要求3的方法，步骤(iii)中超声处理的功率500W，频率45kHz。