CN107300600B - 一种中药制剂生发丸的鉴定方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种中药制剂生发丸的鉴别方法。具体方法为对中药制剂生发丸中的黑芝麻、蛇床子、骨碎补、当归、何首乌、牛膝、补骨脂、黄芪、苦参使用薄层色谱法进行检测。本发明优化了从中药组合物中分离纯化黑芝麻相关成分的方法，使得其薄层色谱斑点清晰，重现性好；同时优化后的黑芝麻分离纯化和薄层色谱方法，同样适用于蛇床子的分离纯化及薄层色谱检测，简化了分别检测的操作，减少了成本；通过本发明对中药制剂生发丸的鉴别，提高了产品稳定性，有利于工业化生产的质量控制。

Description

一种中药制剂生发丸的鉴定方法

技术领域

本发明涉及一种药物组合物的鉴定方法，具体而言，涉及一种中药制剂生发丸的检测方法，属于中药检测技术领域。

背景技术

脱发是指头发脱落的现象。正常脱落的头发都是处于退行期及休止期的毛发，由于进入退行期与新进入生长期的毛发不断处于动态平衡，故能维持正常数量的头发。病理性脱发是指头发异常或过度的脱落，其原因很多。肾虚使精血不足，精血不足导致头发缺少营养供应，会引起头发脱落。

中药生发丸主要用于肝肾不足所致须发早白，头发稀疏、干枯、斑秃脱发。中药生发丸为多种中药的组合制剂，其主要包括以下原料药：何首乌、补骨脂、牛膝、当归、茯苓、枸杞子、菟丝子、女贞子、墨旱莲、桑椹、黑芝麻、熟地黄、桑寄生、核桃仁、沙苑子、蛇床子、紫河车、骨碎补、黄芪、制黄精、五味子、灵芝、地黄、侧柏叶、苦参和山楂。生发丸中的原料药何首乌补益精血、乌须发、补肝肾；当归养血、活血、补血，发为血之余，因而有生发作用；侧柏叶凉血止血、生发乌发；女贞子滋肝补肾，乌须黑发、生发。

目前市面上存在多种不同中药配方和制作工艺的生发丸，但缺乏对中药制剂生发丸进行鉴定的有效方法。生发丸是由二十六味中药组成，虽然多种药材都已存在确定的检测方法，但其中，从中药组合物中分离纯化并且鉴定黑芝麻的方法还存在样品纯度低而检测精度不高的弊端，同时，经过检索，并未发现能在同一分离纯化和薄层色谱检测条件下，对中药组合物中的黑芝麻和蛇床子同时进行检测的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种中药制剂生发丸的鉴定方法。

本发明的中药制剂生发丸由如下中药药材组成：何首乌、盐补骨脂、牛膝、当归、茯苓、枸杞子、盐菟丝子、女贞子、墨旱莲、桑椹、黑芝麻、熟地黄、桑寄生、核桃仁、沙苑子、蛇床子、紫河车、骨碎补、黄芪、制黄精、五味子、灵芝、地黄、侧柏叶、苦参和山楂。

本发明的目的通过以下技术方案来实现：本发明中中药制剂生发丸中的黑芝麻和蛇床子的检测方法：

S1. 制备供试品溶液：取中药制剂生发丸水蜜丸10g或大蜜丸14g，研细或剪碎，加无水乙醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2 ml，加于中性氧化铝柱上，加入无水乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

S2. 制备对照品溶液：另取蛇床子对照药材0.2g、黑芝麻对照药材0.4 g，分别加无水乙醇20ml，同步骤S1制成黑芝麻对照药材溶液和蛇床子对照药材溶液，再取芝麻素对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的黑芝麻素对照溶液；

S3. 检测：照中国药典2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取步骤S1制备的供试品溶液，步骤S2制备的黑芝麻对照药材溶液、蛇床子对照药材溶液及黑芝麻素对照溶液各5µl，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环已烷－乙醚－乙酸乙酯为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置356nm紫外光灯下检视；

S4. 结果判定：步骤S1制得供试品色谱中，在与蛇床子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，再于105℃加热至斑点显色清晰，步骤S1制得供试品色谱中，在与黑芝麻对照药材和芝麻素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

优选地，如上所述的的中药制剂生发丸中芝麻和蛇床子的检测方法，在步骤S3中，所述展开剂，环己烷、乙醚、乙酸乙酯的体积比为20:5.5:2.5。

优选地，如上所述的的中药制剂生发丸中芝麻和蛇床子的检测方法，在步骤S1中，所述中性氧化铝柱中氧化铝规格为100~200目，用量为5g，氧化铝柱的柱内径为1cm。

本发明中中药制剂生发丸中骨碎补的检测方法：

A. 制备供试品溶液：取本品水蜜丸10g或大蜜丸14g，研细或剪碎，加水60ml，水浴加热30分钟，放冷，超声处理20分钟使完全溶散，抽滤，滤液加乙醚50ml振摇提取，分取水溶液，加稀盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次乙酸乙酯用量为30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，上清液作为供试品溶液；

B. 制备对照品溶液：另取骨碎补对照药材0.5g，加水20ml，水浴加热30分钟，滤过，滤液加乙酸乙酯30ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为骨碎补对照药材溶液，再取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为柚皮苷对照溶液；

C. 检测：照中国药典2010年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，分别吸取步骤A制得供试品溶液、步骤B制得骨碎补对照药材溶液和柚皮苷对照溶液各5µ1，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比10:4:5:3的乙酸乙酯－丙酮-醋酸－水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视；

D. 结果判定：步骤A制得供试品色谱中，在与骨碎补对照药材和柚皮苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

本发明的有益效果是：本发明首先通过对中药制剂生发丸中的当归、何首乌、牛膝、骨碎补、补骨脂、蛇床子、黑芝麻、黄芪、苦参的有效成分进行分离纯化，再经过薄层色谱检测的方法，以对中药制剂生发丸进行鉴定。薄层色谱检测方法已经被广泛应用于中药药材检测，但现有对中药药材黑芝麻的薄层色谱检测方法主要针对黑芝麻药材，对组合药物中黑芝麻的检测精确度偏低。本发明通过对中药制剂生发丸的研磨、超声处理，并通过无水乙醇提取及中性氧化铝柱的柱层析方法，分离纯化中药制剂生发丸中黑芝麻的相关成分，使用羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板，通过薄层色谱法对其中黑芝麻进行检测。本发对中药制剂生发丸中黑芝麻有效成分的分离方法，同样适用于蛇床子，并通过统一使用环已烷－乙醚－乙酸乙酯展开剂可同时对中药制剂生发丸中的黑芝麻和蛇床子进行薄层色谱检测，简化操作，减少成本。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的描述，本发明的保护范围不局限于以下所述：

实施例1：

本发明中中药制剂生发丸的制备：

分别取何首乌30g，盐补骨脂15g，牛膝15g，当归10g，茯苓10g，枸杞子30g，盐菟丝子20g，女贞子30g，墨旱莲30g，桑椹30g，黑芝麻30g，熟地黄15g，桑寄生30g，核桃仁30g，沙苑子15g，蛇床子15g，紫河车3g，骨碎补15g，黄芪30g，制黄精30g，五味子15g，灵芝15g，地黄15g，侧柏叶30g，苦参10g，山楂30g共二十六味药，粉碎成细粉，过筛，混匀。每100g粉末加炼蜜35～50g 与适量的水，泛丸或制丸，干燥，制成水蜜丸；或加炼蜜 100～120g制成大蜜丸，即得。

实施例2：

本发明鉴别方法检测中药制剂生发丸中的黑芝麻和蛇床子：

A. 制备供试品溶液：取中药制剂生发丸水蜜丸10g，研细，加无水乙醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2 ml，加于中性氧化铝柱（100~200，5 g，内径1cm）上，用无水乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

B. 制备对照品溶液：另取蛇床子对照药材0.2g、黑芝麻对照药材0.4 g，分别加无水乙醇20ml，同步骤A制成蛇床子和黑芝麻对照药材溶液；再取芝麻素对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为黑芝麻素对照品溶液。

C. 检测：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液、蛇床之对照药材溶液、黑芝麻对照药材溶液和黑芝麻素对照品溶液各5µl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环已烷－乙醚－乙酸乙脂（20︰5.5︰2.5）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。

D. 结果判定：供试品色谱中，在与蛇床子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。再于105℃加热至斑点显色清晰，供试品色谱中，在与黑芝麻对照药材和芝麻素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例3：

本发明鉴别方法检测中药制剂生发丸中的骨碎补：

A. 制备供试品溶液：取本品水蜜丸10g，研细，加水60ml，水浴加热30分钟，放冷，超声处理20分钟使完全溶散，抽滤，滤液加乙醚50ml振摇提取，分取水溶液，加稀盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次乙酸乙酯用量为30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，上清液作为供试品溶液；

B. 制备对照品溶液：另取骨碎补对照药材0.5g，加水20ml，水浴加热30分钟，滤过，滤液加乙酸乙酯30ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为骨碎补对照药材溶液，再取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为柚皮苷对照溶液；

C. 检测：照中国药典2010年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，分别吸取步骤A制得供试品溶液、步骤B制得骨碎补对照药材溶液和柚皮苷对照溶液各5µ1，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比10:4:5:3的乙酸乙酯－丙酮-醋酸－水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视；

D. 结果判定：供试品色谱中，在与骨碎补对照药材和柚皮苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例4：

本发明鉴别方法检测中药制剂生发丸中的当归：

A. 制备供试品溶液：取中药制剂生发丸水蜜丸10g，研细，加水60ml，水浴加热30分钟，放冷，超声处理20分钟使完全溶散，抽滤，滤液加乙醚50ml振摇提取，分取乙醚液，用2％碳酸钠溶液30ml振摇提取，分取碳酸钠溶液，缓缓加入稀盐酸调pH值至1，加乙醚30ml振摇提取，分取乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

B.制备对照品溶液：另取当归对照药材0.2g，加水20ml，同步骤（1）制成当归对照药材溶液。再取阿魏酸对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为阿魏酸对照品溶液。

C. 检测：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录VI B）试验，吸取供试品溶液、当归对照药材溶液、阿魏酸对照药品溶液各5μl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯－甲酸（10∶4∶0.2）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（254nm）下检视。

D. 结果判定：供试品色谱中，在与当归对照药材和阿魏酸对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；再喷以新制的1％三绿化铁-1％铁氰化钾（1:1）混合溶液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例5：

本发明鉴别方法检测中药制剂生发丸中的何首乌：

A. 制备供试品溶液：取中药制剂生发丸水蜜丸10g，研细，加水60ml，水浴加热30分钟，放冷，超声处理20分钟使完全溶散，抽滤，取药渣，加盐酸1ml，拌匀，加三氯甲烷50ml，加热回流30分钟，放冷，滤过，滤液蒸至近干，残渣加甲醇1ml使溶解，上清液作为供试品溶液。

B. 制备对照品溶液：另取何首乌对照药材0.5g，加盐酸10滴，三氯甲烷30ml，同步骤A制成何首乌对照药材溶液。

C. 检测：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液、何首乌对照药材溶液各5µ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）－甲酸乙酯－甲酸（15：5：1）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，分别置自然光和紫外光灯(365nm)下检视。

D. 结果判定：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点及荧光斑点。

本发明中中药制剂生发丸中补骨脂的检测方法：

A. 制备供试品溶液：取中药制剂生发丸水蜜丸7g，研细，加乙酸乙酯40ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2ml，加于中性氧化铝柱（100～200目，5g，1cm）上，以乙酸乙酯洗脱50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作为供试品溶液。

B. 制备对照品溶液：另取补骨脂素及异补骨脂素对照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的溶液，作为补骨脂素及异补骨脂素对照品溶液。

C.检测：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液、补骨脂素及异补骨脂素对照品溶液各5µ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷－乙酸乙酯(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％氢氧化钾甲醇溶液，置紫外光灯(365nm)下检视。

D. 结果判定：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。

实施例6：

本发明鉴别方法检测中药制剂生发丸中的黄芪：

A. 制备供试品溶液：取中药制剂生发丸水蜜丸10g，研细，加水100ml，水浴加热1小时，放冷，超声处理20分钟使完全溶散，滤过，滤液用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次30ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤两次，每次50ml，分取正丁醇液，用正丁醇饱和的水50ml洗涤，分取正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

B. 制备对照品溶液：另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为黄芪甲苷对照品溶液。

C. 检测：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液、黄芪甲苷对照品溶液各2µ1，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13：7：2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

D. 结果判定：供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；置紫外光灯(365nm)下检视，显相同颜色的荧光斑点。

实施例7：

本发明鉴别方法检测中药制剂生发丸中的苦参：

A. 制备供试品溶液：取中药制剂生发丸水蜜丸10g，研细，加浓氨试液2ml，拌匀，加三氯甲烷30ml，浸泡12小时，再超声处理30分钟，滤过，药渣用三氯甲烷20ml分次洗涤，合并三氯甲烷液，用稀盐酸振摇提取2次，每次20ml，合并稀盐酸溶液，用氨试液调节pH至10，加三氯甲烷提取2次，每次20ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷1ml使溶解，作为供试品溶液。

B. 制备对照品溶液：另取苦参对照药材0.4g，加浓氨试液0.5ml，拌匀，同法制成苦参对照药材溶液。再取苦参碱对照品，加三氯甲烷制成每1ml含0.2mg的溶液，作为苦参碱对照品溶液。

C. 检测：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取对照品溶液、苦参对照药材溶液、苦参碱对照品溶液各5µl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（60∶8∶0.3）为展开剂，置氨蒸气饱和的层析缸内泡和20分钟，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。

D. 结果判定：供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

实施例8：

本发明鉴别方法检测中药制剂生发丸中的牛膝：

A. 制备供试品溶液：取中药制剂生发丸水蜜丸15g，研细，加无水乙醇50ml，回流提取30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水30ml，加盐酸1ml，水解1小时，放冷，滤过，滤液用石油醚（60～90℃）振摇提取2次，每次30ml，合并石油醚液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。

B. 制备对照品溶液：另取牛膝对照药材0.5g，加无水乙醇20ml，同步骤A成牛膝对照药材溶液。

C. 检测：照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录Ⅵ B）试验，吸取供试品溶液、牛膝对照药材溶液各5µl，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇（40∶1）为展开剂，饱和30分钟，展开，取出，晾干，喷以2%磷钼酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。

结果判定：供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

Claims (3)

1.一种中药制剂生发丸的鉴定方法，所述生发丸由何首乌、补骨脂、牛膝、当归、茯苓、枸杞子、菟丝子、女贞子、墨旱莲、桑椹、黑芝麻、熟地黄、桑寄生、核桃仁、沙苑子、蛇床子、紫河车、骨碎补、黄芪、制黄精、五味子、灵芝、地黄、侧柏叶、苦参和山楂组成，其特征在于所述鉴定方法通过薄层色谱法检测生发丸中的黑芝麻和蛇床子，具体检测方法为：

S1. 制备供试品溶液：取中药制剂生发丸水蜜丸10g或大蜜丸14g，研细或剪碎，加无水乙醇50ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至2 ml，加于中性氧化铝柱上，无水乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加无水乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液；

S2. 制备对照品溶液：另取蛇床子对照药材0.2g、黑芝麻对照药材0.4 g，分别加无水乙醇20ml，同步骤S1制成黑芝麻对照药材溶液和蛇床子对照药材溶液，再取芝麻素对照品，加无水乙醇制成每1ml含0.5mg的芝麻素对照溶液；

S3. 检测：照中国药典2010年版一部附录ⅥB薄层色谱法试验，分别吸取步骤S1制备的供试品溶液，步骤S2制备的黑芝麻对照药材溶液、蛇床子对照药材溶液及芝麻素对照溶液各5µl，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以环已烷－乙醚－乙酸乙酯为展开剂，展开剂中环已烷、乙醚与乙酸乙酯的体积比为20:5.5:2.5，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，置356nm紫外光灯下检视；

S4. 结果判定：步骤S1制得供试品色谱中，在与蛇床子对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，再于105℃加热至斑点显色清晰，步骤S1制得供试品色谱中，在与黑芝麻对照药材和芝麻素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。

2.根据权利要求1所述的一种中药制剂生发丸的鉴定方法，其特征在于：步骤S1中使用的中性氧化铝柱中氧化铝规格为100~200目，用量为5g，氧化铝柱的柱内径为1cm。

3.根据权利要求1所述的一种中药制剂生发丸的鉴定方法，其特征在于：所述的中药制剂生发丸中骨碎补的具体检测方法为：

A.制备供试品溶液：取本品水蜜丸10g或大蜜丸14g，研细或剪碎，加水60ml，水浴加热30分钟，放冷，超声处理20分钟使完全溶散，抽滤，滤液加乙醚50ml振摇提取，分取水溶液，加稀盐酸调节pH值至1～2，用乙酸乙酯振摇提取2次，每次乙酸乙酯用量为30ml，合并乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，上清液作为供试品溶液；

B. 制备对照品溶液：另取骨碎补对照药材0.5g，加水20ml，水浴加热30分钟，滤过，滤液加乙酸乙酯30ml振摇提取，分取乙酸乙酯液，蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为骨碎补对照药材溶液，再取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作为柚皮苷对照溶液；

C. 检测：照中国药典2010年版一部附录Ⅵ B薄层色谱法试验，分别吸取步骤A制得供试品溶液、步骤B制得骨碎补对照药材溶液和柚皮苷对照溶液各5µ1，点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以体积比10:4:5:3的乙酸乙酯－丙酮-醋酸－水的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以三氯化铝试液，置365nm紫外光灯下检视；

D. 结果判定：步骤A制得供试品色谱中，在与骨碎补对照药材和柚皮苷对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。