CN117092271A - 一种利用hilic技术测定麦芽酚铁中枸橼酸的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提出的是一种HILIC技术测定麦芽酚铁中枸橼酸的方法，采用HILIC色谱柱分离供试品中的枸橼酸，采用反相高效液相色谱法按等度进行洗脱，得到色谱图并计算枸橼酸含量。本发明可定量测定麦芽酚铁中的枸橼酸，从而使本发明可有效控制麦芽酚铁中的杂质，对于麦芽酚铁的质量控制有着不可或缺的意义。
Description
技术领域
本发明涉及麦芽酚铁原料药的质量控制方法，具体涉及一种利用HILIC技术测定麦芽酚铁中枸橼酸的方法。
背景技术
麦芽酚铁(ferricmeltol)是由英国ShieldThera-peutics公司研发的一种胶囊，2016年得到欧洲药品管理局的批准，用来治疗成人缺铁的症状，2019年7月25日，该药得到了美国食品药品管理局的批准以发挥相同功效。
在一系列Ⅲ期临床对照试验中，麦芽酚铁胶囊已被证实是一种稳定、耐受性良好、高效的治疗成人铁缺乏症(有无贫血症状均可)的口服药物，有望使缺铁性贫血患者无需使用静脉注射铁剂，从而改变铁缺乏症患者的治疗模式。
麦芽酚铁胶囊由奥赛康公司在2020年初引进，获得其在中国的独家权益。枸橼酸作为本品起始物料枸橼酸铁中的酸根离子，在麦芽酚铁中被作为特定杂质控制。由于枸橼酸是一种极性较大的有机酸，对于极性较大的物质，普通的反相色谱法(RPLC)对于有机酸特别是极性较大的有机酸，几乎无保留，在杂质的分离控制方面存在一定的限制性。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种利用HILIC技术测定麦芽酚铁中枸橼酸的方法。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：
(1)取麦芽酚铁供试品，精密称定，放置于量瓶中，加入流动相进行溶解并稀释成每1mL中含有10mg麦芽酚铁的溶液，作为供试品溶液；
(2)取枸橼酸对照品，精密称定，放置于量瓶中，加入流动相进行溶解并稀释成每1mL中含有0.05mg枸橼酸的溶液，作为对照品溶液；
(3)精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；供试品溶液色谱图中如有与对照品溶液色谱图中保留时间一致的色谱峰，按下面公式计算杂质含量：
式中：A供试主峰—供试品溶液枸橼酸峰的峰面积；
A对照主峰—对照品溶液枸橼酸峰的峰面积。
进一步的，所述步骤(3)液相色谱仪的色谱条件为：选用未键合亚乙基桥杂化颗粒为填充剂的亲水作用色谱柱(XBridge·BEH·HILIC·Column)，柱长150mm，柱温35℃，流速1.0ml/min；采用的检测器为紫外检测器；采用反相高效液相色谱法按等进行洗脱。
进一步的，所述流动相为离子对水溶液与极性有机溶剂，其中极性有机溶剂为A相，离子对水溶液为B相，A相与B相混合体积比例为0～100％。
进一步的，所述极性有机溶剂为乙腈；所述离子对水溶液的pH值为1～3，其中离子对为磷酸盐缓冲液，包括但不限于磷酸氢二钾、磷酸二氢钾的磷酸溶液，纯度为色谱纯。
与现有技术相比，本发明针对所需分离成分枸橼酸的特点，选择了亲水相互作用色谱法(HILIC)对麦芽酚铁中的枸橼酸进行分离：在HILIC中，物质的洗脱顺序与RPLC恰恰相反，在通常的实验条件下，在RPLC柱上很难保留或根本不保留的物质，在HILIC柱上有较强的保留，从而可以有效地延长枸橼酸峰在色谱分离中的保留时间，并形成良好峰型，从而对于分析检测供试品中的枸橼酸含量有着不可或缺的意义。从提高产品质量、提高临床用药安全性、优化工艺流程角度，本发明均有着较为突出的商业化价值，并能在企业标准中形成技术壁垒，提高企业产品的附加值。
附图说明
附图1为本发明实施例中的枸橼酸色谱图。
附图2为本发明实施例中的空白干扰色谱图。
附图3为本发明实施例中的供试品色谱图
附图4为本发明实施例中枸橼酸的波长检测结果图。
具体实施方式
下面根据实施例进一步说明本发明的技术方案。在本说明书的描述中，各实施例的内容意指结合其描述的具体技术特征包含于本发明的至少一个实施方式中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施方式或示例。而且，描述的具体技术特征可以在任何的一个或多个实施方式或示例中以合适的方式结合。
麦芽酚铁作为一种配合物，该化合物结构如下：
枸橼酸铁是本品合成的起始原料，该化合物结构如下：
其中的枸橼酸作为终产品控制的特定杂质，需要寻找合适的方法进行检测。针对文献中枸橼酸的分析方法，多采用常规的RPLC方法，在色谱体系中与主成分中其他待测成分的分离效果不佳。本发明针对强极性有机酸，采用HILIC(亲水作用色谱)技术，有效地改善了检测条件尤其是分离效果，创造性地摸索了流动相体系，采用离子对试剂增强分离效果，调整流动相比例，优化了样品处理方法，最终确立了本发明所述的高效液相色谱体系，并进行了方法学验证。
(1)波长的摸索
枸橼酸作为有机酸，其分子结构中存在一定的共轭体系，但在紫外区仅为末端吸收，经紫外扫描，决定采用205nm波长进行检测，扫描结果如图4所示。
(2)流动相的摸索
根据色谱柱的适用范围，摸索了本品测定的色谱条件如下：
方法1：乙腈-磷酸盐缓冲液(20mmol/l磷酸二氢钾，用10％磷酸调节pH值至3.0)(80:20)。
方法2：乙腈-磷酸盐缓冲液(20mmol/l磷酸二氢钾，用10％磷酸调节pH值至2.0)(80:20)。
方法3：乙腈-磷酸盐缓冲液(20mmol/l磷酸二氢钾，用10％磷酸调节pH值至2.0)(75:25)。
其中，方法1未获得良好峰型，方法2的保留时间较长且峰型较差，方法3的峰型及保留时间较为适合检测，结果见附图1。
(3)方法学验证
①专属性
可接受标准：空白溶剂应无干扰。
验证结果：如图2和图3所示，溶剂和供试品不干扰枸橼酸的测定。
②进样精密度
可接受标准：重复进样6次峰面积和保留时间的RSD％不大于2。
验证结果：实验结果表明，采用本方法对供试品、对照品溶液连续进样6针，保留时间和峰面积的RSD均小于2.0％，进样精密度良好。
③检测限
可接受标准：信噪比(S/N)为≈3时相应的浓度为检测限，信噪比(S/N)为≈10时相应的浓度为定量限。
验证结果：本方法检测限约为10μg/ml(限度的20％)，灵敏度良好，满足检测需要。
④线性与范围
可接受标准：线性回归的相关系数r不低于0.995。
验证结果：本品在10～60μg/ml浓度范围内，其浓度与峰面积呈良好的线性关系。
⑤溶液稳定性
可接受标准：样品放置前后主峰峰面积RSD％不大于2。
验证结果：实验结果表明，供试品溶液、对照溶液和系统适用性溶液，在室温条件下放置24小时稳定。
⑥重复性
可接受标准：限度浓度附近的杂质6次测定的含量及回收率结果的RSD％不大于2％。
验证结果：实验结果表明，对同一批样品平行测定6次，含量结果RSD％不大于2％。本方法重复性良好。
⑦耐用性
可接受标准：改变条件后检测，各个条件下的枸橼酸峰型未见明显变化，检测含量变化不明显。
验证结果：当流速相对值变动±10％、柱温变动±5℃、流动相中有机相比例变动±1％时，系统适用性、检测结果均无显著变化。本方法耐用性良好。
验证结果表明本方法的各项指标均符合中国药典2020年版的要求，适宜于检测。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何标记视为限制所涉及的权利要求。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。
Claims (5)
1.一种利用HILIC技术测定麦芽酚铁中枸橼酸的方法，具体包括如下步骤：
(1)取麦芽酚铁供试品，精密称定，放置于量瓶中，加入流动相进行溶解并稀释成每1mL中含有10mg麦芽酚铁的溶液，作为供试品溶液；
(2)取枸橼酸对照品，精密称定，放置于量瓶中，加入流动相进行溶解并稀释成每1mL中含有0.05mg枸橼酸的溶液，作为对照品溶液；
(3)精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μL，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；
其特征在于：所述步骤(3)液相色谱仪的色谱条件为：
选用未键合亚乙基桥杂化颗粒为填充剂的亲水作用色谱柱，柱长150mm，柱温35℃，流速1.0ml/min；采用的检测器为紫外检测器；采用反相高效液相色谱法按等进行洗脱。
2.根据权利要求1所述的一种利用HILIC技术测定麦芽酚铁中枸橼酸的方法，其特征在于：所述流动相为离子对水溶液与极性有机溶剂，其中极性有机溶剂为A相，离子对水溶液为B相，A相与B相混合体积比例为0～100％。
3.根据权利要求2所述的一种利用HILIC技术测定麦芽酚铁中枸橼酸的方法，其特征在于：所述极性有机溶剂为乙腈。
4.根据权利要求2所述的一种利用HILIC技术测定麦芽酚铁中枸橼酸的方法，其特征在于：所述离子对水溶液的pH值为1～3，其中离子对为磷酸盐缓冲液，具体包括磷酸氢二钾、磷酸二氢钾的磷酸溶液，纯度为色谱纯。
5.根据权利要求1所述的一种利用HILIC技术测定麦芽酚铁中枸橼酸的方法，其特征在于：所述步骤(3)液相色谱仪得到的供试品溶液色谱图中如有与对照品溶液色谱图中保留时间一致的色谱峰，按下面公式计算杂质含量：
式中：A供试主峰—供试品溶液枸橼酸峰的峰面积；
A对照主峰—对照品溶液枸橼酸峰的峰面积。
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