CN117088772A - 一种甜菊醇衍生物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种甜菊醇衍生物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种甜菊醇衍生物及其制备方法和应用；旨在提供一种具有抗肿瘤活性的甜菊醇衍生物；其对甜菊醇的C‑19位、C‑16位、C‑13位进行改造，接上长链卤代化合物后，可与三苯基膦结合后得到全新的三苯基膦甜菊醇衍生物偶联衍生物，具有良好的抗肿瘤活性且对正常细胞毒性小，可用于制备抗肿瘤药物；涉及药物化学及细胞生物学技术领域。

Description

一种甜菊醇衍生物及其制备方法和应用
技术领域
本发明设计药物化学及细胞生物学技术领域，具体涉及一种甜菊醇衍生物，本发明还涉及该甜菊醇衍生物的制备方法和应用。
背景技术
癌症，亦称恶性肿瘤，具有较高死亡率。癌症对人类的平均寿命有着至关重要的影响，被认为对全球发展有着严重威胁。癌细胞增殖能力强，黏着力低使得癌细胞扩散速度快，化疗药物对癌细胞的精准控制度差，癌细胞产生耐药性等都是癌症治疗效果差的原因。饮食习惯，生活压力等原因使得癌症患者年轻化趋势。以上可以看出，高效新型靶向性的抗肿瘤药物开发具有重要意义。
肿瘤治疗的一大难题是化疗药物选择性差，毒性大，基于肿瘤细胞与正常细胞的差异设计药物有望实现药物对肿瘤细胞的选择性杀伤。肿瘤细胞的线粒体膜电位远大于正常细胞，电子移位亲脂性阳离子化合物可利用肿瘤细胞膜电位这一差异在肿瘤细胞线粒体内选择性地积聚，故小分子抗肿瘤活性化合物与亲脂性阳离子化合物连接有望实现肿瘤细胞靶向性。目前为止使用和研究最多的亲脂性阳离子化合物是三苯基膦盐（Triphenylphopine，TPP+），已有不少以TPP+实现线粒体靶向的研究实例，并且其靶向线粒体的能力被多篇文献报道证实。
甜菊醇（steviol）是甜菊糖苷（steviolside）的碱性水解产物，属于对映贝壳杉烷型四环二萜类化合物。甜菊醇具有广泛的生物活性，如降血压、降血糖、心血管保护、抗炎、抗菌、抗肿瘤等。目前对于甜菊醇的抗肿瘤活性的结构修饰集中在从甜菊醇骨架上引入不饱和酮结构，但此类化合物的抗肿瘤活性和靶向性均有待提高。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种具有抗肿瘤活性的甜菊醇衍生物。
本发明的目的之二在于提供甜菊醇衍生物的制备方法。
本发明的目的之三在于提供甜菊醇衍生物在制备抗肿瘤药物方面的应用。
为此，本发明提供的第一个技术方案是这样的：
一种甜菊醇衍生物，结构式如式1所示：
；
式1；
其中：R1为甲基、乙基、异丙基、2-丁基、烯丙基、1-烯丁基、环乙丙基、苄基、苯丙基、对氟苯丙基的其中之一。
或者，所述的甜菊醇衍生物结构式如式2所示：
；
式2；
其中，R1为甲基、乙基、苄基的其中之一。
或者，所述的甜菊醇衍生物结构式如式3所示：
；
式3；
其中，R1为甲基、乙基、苄基的其中之一。
或者，所述的甜菊醇衍生物结构式如式4所示：
；
式4。
本发明提供的第二个技术方案是式1中甜菊醇衍生物的制备方法，依次包括下述步骤：
（1）化合物2a-j的合成
将0.31 mmol化合物1、0.31 mmol碳酸钾、0.93 mmol卤代化合物溶解在1 mmol丙酮中，混合物在60℃回流搅拌，反应2h；加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物2a-j；
（2）化合物3a-j的合成
将0.30 mmol化合物2a-j、0.9 mmol钠氢、0.60 mmol 1,5-二溴戊烷溶解于1 mmolN,N-二甲基甲酰胺溶液中，混合物在80℃回流搅拌，反应16h，加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物3a-j；
（3）化合物4a-j的合成
将0.21 mmol化合物3a-j、0.32 mmol三苯基膦溶解于1 mmol乙腈中，在氮气保护下混合物在80℃回流搅拌，反应24h，加入二氯甲烷和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物4a-j；
其合成路线如下：
。
本发明提供的第三个技术方案是式2中甜菊醇衍生物的制备方法，依次包括下述步骤：
（1）化合物5a-c的合成
将0.30 mmol化合物2a、2b、2h溶解在1 mmol二氯甲烷，混合物在-60℃回流搅拌，通入臭氧，反应15min；加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物5a-c；
（2）化合物6a-c的合成
将0.30 mmol化合物5a-c、0.36 mmol硼氢化钠溶解于1 mmol甲醇，混合物在室温下回流搅拌1h，加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物6a-c；
（3）化合物7a-c的合成
将0.30 mmol化合物6a-c、0.54 mmol5-溴戊酸、0.36 mmol1-乙基-3（3-二甲基丙胺）碳二亚胺和0.24 mmol4-二甲氨基吡啶溶解于1 mmol二氯甲烷，混合物在室温下回流搅拌2h，加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物7a-c；
（4）化合物8a-c的合成
将0.21 mmol化合物7a-c、0.32 mmol三苯基膦溶解于1 mmol乙腈中，在氮气保护下混合物在80℃回流搅拌，反应24h，加入二氯甲烷和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物8a-c；
其合成路线如下：
。
本发明提供的第四个技术方案是式3甜菊醇衍生物的制备方法，依次包括下述步骤：
（1）化合物9a-c的合成
将0.30 mmol化合物6a-c、0.60 mmol1,5-二溴戊烷、0.90 mmol钠氢溶解于1 mmolN,N-二甲基甲酰胺溶液，混合物在室温下回流搅拌2h，加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物9a-c；
（2）化合物10a-c的合成
将0.21 mmol化合物9a-c、0.32 mmol三苯基膦溶解于1 mmol乙腈中，在氮气保护下混合物在80℃回流搅拌，反应24h，加入二氯甲烷和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物10a-c；
其合成路线如下：
。
本发明提供的第五个技术方案是式4中甜菊醇衍生物的制备方法，依次包括下述步骤：
（1）化合物11的合成
将0.32 mmol化合物1、2.4 mmol丙酸酐、0.32 mmol 4-二甲氨基吡啶溶解于1mmol吡啶溶液中，混合物在80℃下回流搅拌6h，加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物11；
（2）化合物12的合成
将0.30 mmol化合物11、0.9 mmol钠氢、0.60 mmol 1,5-二溴戊烷溶解于1 mmolN,N-二甲基甲酰胺溶液中，混合物在80℃回流搅拌，反应16h，加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物12；
（3）化合物13的合成
将0.21 mmol化合物12、0.32 mmol三苯基膦溶解于1 mmol乙腈中，在氮气保护下混合物在80℃回流搅拌，反应24h，加入二氯甲烷和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物13；
其合成路线如下：
。
本发明提供的最后一个技术方案是上述的甜菊醇衍生物在制备抗肿瘤活性药物中的应用。
本发明还提供一种肿瘤活性药物，包括第一个技术方案所述的甜菊醇衍生物。
更优选的，所述药物还包括药学上可接受的辅料；所述药学上可接受的辅料为润滑剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、抗氧剂或pH调节剂中的至少一种。
所述药物的剂型为注射液、片剂、口服液、颗粒剂或胶囊。
与现有技术相比，本发明对甜菊醇进行了多位点修饰，包括19位羧基修饰成酯，13位羟基首先成醚连接长链卤代化合物，然后连接三苯基膦，或者C-19位连接三苯基膦，C-13位成丙酰胺增加化合物的抗肿瘤活性。通过A549、HCT116、Hela、Huh7、MDA-MB-231、HHL5以及NCM460细胞毒性模型来筛选化合物的抗肿瘤毒性和选择性，可以发现该化合物对Huh7有较好的抗肿瘤毒性和选择性，可以发现该化合物对Huh7有较好的抗肿瘤毒性和选择性，可以富集在线粒体中并降低线粒体膜电位，将细胞周期阻滞在G2/M期，诱导Huh7细胞凋亡。
附图说明
图1为采用流式细胞仪分析甜菊醇衍生物治疗后Huh7细胞的凋亡和细胞周期水平变化。
图2为采用流式细胞仪分析甜菊醇衍生物治疗后Huh7细胞线粒体膜电位变化。
具体实施方式
以下结合实施和附图进一步解释本发明，但实施并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。除非特别说明，本发明所用试剂和材料均为市购。
实施例1 化合物4a-j的合成
如合成路线1所示，以甜菊醇为起始原料，在碳酸钾和丙酮溶液中与卤代烷烃类化合物反应生成化合物2a-2j，然后2a-2j的13号位在氢化钠、1,5-二溴戊烷和N,N-二甲基甲酰胺溶液可得到化合物3a-3j，3a-j在三苯基膦和乙腈溶液下反应得到化合物4a-4j。
合成路线1中反应条件与试剂：（a）卤代化合物，碳酸钾，丙酮，60℃加热回流；(b)氢化钠、1,5-二溴戊烷、N,N-二甲基甲酰胺，80℃加热回流；(c) 三苯基膦，乙腈，氮气保护，80℃加热回流。
。
合成路线1
具体步骤如下：
（1）化合物2a-j的合成
将甜菊醇（100 mg，0.31mmol）、碳酸钾（42.85 mg，0.31 mmol）、溴乙烷（101.34mg，0.93 mmol）和丙酮（3 mL），分别加至10 mL圆底烧瓶中，加热至60 ℃回流搅拌2 h，在反应液中加入饱和氯化钠和乙酸乙酯（体积比1:1）进行萃取，得到有机层，用无水硫酸钠在常温条件下干燥12h后浓缩，使用柱层析方法对浓缩物进行分离提纯，分别得到纯产物2a-j中的其中一种；
其中：合成2a使用碘甲烷，2b使用溴乙烷，2c使用异丙基溴，2d使用2-丁基溴，2e使用烯丙基溴，2f使用1-烯丁基溴，2g使用环乙丙基溴，2h使用溴化苄，2i使用苯丙基溴，2j使用对氟苯丙基溴。
（2）化合物3a-j的合成
将反应底物A（100 mg）、氢化钠（38.3mg, 0.9 mmol）、1,5-二溴戊烷（0.1 mL,0.60 mmol）溶解于N,N-二甲基甲酰胺溶液（3 mL）中，80 ℃回流搅拌2 h，在反应液中加入饱和氯化钠和乙酸乙酯（体积比1:1）进行萃取，得到有机层，用无水硫酸钠在常温条件下干燥12h后浓缩，使用柱层析方法对浓缩物进行分离提纯，分别得到纯产物3a-j中的其中一种；
其中：反应底物A为步骤（1）合成的2a或步骤（1）合成的2b或步骤（1）合成的2c或步骤（1）合成的2d或步骤（1）合成的2e或步骤（1）合成的2f或步骤（1）合成的2g步骤（1）合成的2h或步骤（1）合成的2i或步骤（1）合成的2j。
2a对应纯产物3a；2b对应纯产物3b，2c对应纯产物3c，2d对应纯产物3d，2e对应纯产物3e，2f对应纯产物3f，2g对应纯产物3g，2h对应纯产物3h，2i对应纯产物3i，2j对应纯产物3j。
（3）化合物4a-j的合成
将反应底物B（100 mg）、三苯基膦（75.1 mg, 0.29 mmol）溶解于乙腈（5 mL）中，在氮气保护下80 ℃回流加热24 h，在反应液中加入饱和氯化钠和二氯甲烷（体积比1:1）进行萃取，得到有机层，用无水硫酸钠在常温条件下干燥12h后浓缩，使用柱层析方法对浓缩物进行分离提纯，分别得到纯产物4a-j中的其中一种；
其中：反应底物B为步骤（2）合成的3a或步骤（2）合成的3b或步骤（2）合成的3c或步骤（2）合成的3d或步骤（2）合成的3e或步骤（2）合成的3f或步骤（2）合成的3g步骤（2）合成的3h或步骤（2）合成的3i或步骤（2）合成的3j。
3a对应纯产物4a；3b对应纯产物4b，3c对应纯产物4c，3d对应纯产物4d，3e对应纯产物4e，3f对应纯产物4f，3g对应纯产物4g，3h对应纯产物4h，3i对应纯产物4i，3j对应纯产物4j。
化合物4a-j的结构、外观、核磁共振谱图数据如下所示：
化合物4a结构式如下：
。
化合物4a：无色油状物（19 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.87 –7.70 (15H, m, H-Ph), 4.78 (1H, s, H-17), 4.74 (1H, s, H-17), 3.84 (2H, m, H-5’), 3.65 (3H, s, COOCH3), 3.33 – 3.28 (2H, m, H-1’), 2.17 (1H, d, J = 13.6Hz, H-3), 1.17 (s, 3H, H-18), 2.07 – 0.84 (25H, m, CH, CH2 in ent-kaureneskeleton or carbon chain), 0.79 (3H, s, H-20). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 178.1, 151.9, 135. 0, 135.0, 135.0, 133.8, 133.8, 133.8, 133.7, 133.7,133.7, 130.5, 130.5, 130.5, 130.4, 130.4, 130.4, 119.0, 119.0, 118.1, 103.5,84.8, 61.9, 56.9, 54.0, 51.2, 48.1, 43.8, 41.6, 40.9, 40.7, 39.3, 39.0, 38.1,30.0, 28.7, 27.4, 27.3, 22.8, 22.4, 21.9, 20.1, 19.1, 15.3. HRESIMS m/z [M+H]+ (calcd for C44H56O3P+Br-, 742.3151)。
。
化合物4b：无色油状物（19 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.87 –7.68 (15H, m, H-Ph), 4.79 (1H, s, H-17), 4.74 (1H, s, H-17), 4.16 – 4.06 (2H,m, COOCH2), 3.82 (2H, m, H-5’), 3.31 (2H, m, H-1’), 2.17 (1H, d, J = 13.7 Hz,H-3), 1.28 (3H, t, J = 7.1 Hz, CH3 in ethyl), 1.17 (3H, s, H-18), 0.82 (3H,s, H-20), 2.20 – 0.74 (25H, m, CH, CH2 in ent-kaurene skeleton or carbonchain). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 179.5, 152.9, 134.9, 134.9, 134.9,133.8, 133.8, 133.8, 133.7, 133.7, 133.7, 130.5, 130.5, 130.5, 130.4, 130.4,130.4, 119.0, 119.0, 118.1, 103.5, 84.9, 61.8, 60.0, 57.0, 54.0, 48.1, 43.7,41.7, 40.8, 40.7, 39.4, 39.0, 38.0, 30.0, 28.8, 27.4, 27.2, 22.7, 22.4, 21.9,20.1, 19.1, 15.6, 14.2。
。
化合物4c：无色油状物（26 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.85 –7.68 (15H, m, H-TPP), 4.97 (1H, p, J = 6.3 Hz, COOCH), 4.79 (1H, s, H-17),4.74 (1H, s, H-17), 3.78 – 3.63 (2H, m, H-5’), 3.35 – 3.27 (2H, m, H-1’),2.16 (1H, d, J = 14.1 Hz, H-3), 1.26 (3H, d, J = 6.3 Hz, CH3 in isopropyl),1.23 (d, J = 6.3 Hz, 3H, CH3 in isopropyl), 1.15 (3H, s, H-18), 0.85 (3H, s,H-20), 2.10 – 0.75 (25H, m, CH, CH2 in ent-kaurene skeleton or carbon chain).13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 176.9, 151.9, 135.0, 135.0, 135.0, 133.7,133.7, 133.7, 133.6, 133.6, 133.6, 130.6, 130.6, 130.6, 130.5, 130.5, 130.5,118.8, 118.8, 118.0, 103.4, 84.9, 67.2, 61.8, 56.9, 53.9, 48.1, 43.8, 41.7,40.8, 40.7, 39.4, 39.0, 38.0, 29.9, 28.9, 27.4, 27.3, 22.7, 22.4, 21.9, 21.6,21.6, 20.1, 19.1, 15.8。
。
化合物4d：无色油状物（27 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.83 –7.69 (15H, m, H-TPP), 4.79 (1H, s, H-17), 4.74 (1H, s, H-17), 4.72 – 4.68(1H, m, COOCH), 3.75 – 3.58 (2H, m, H-5’), 3.35 – 3.26 (2H, m, H-1’), 2.20(1H, d, J = 13.3 Hz, H-3), 1.18 (3H, s, H-18), 0.91 (6H, t, J = 7.4 Hz, CH3in CHCH3 and CH2CH3), 0.86 (3H, s, H-20), 2.09 – 0.76 (27H, m, CH, CH2 inent-kaurene skeleton or carbon chain). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ177.22, 151.86, 134.98, 134.98, 135.0, 133.7, 133.7, 133.7, 133.6, 133.6,133.6, 130.6, 130.6, 130.6, 130.4, 130.4, 130.4, 118.9, 118.9, 118.1, 103.5,84.9, 76.5, 61.8, 57.0, 53.9, 48.2, 44.2, 41.7, 40.8, 40.7, 39.4, 39.0, 38.1,29.9, 29.3, 27.4, 27.3, 25.8, 22.7, 22.4, 21.9, 20.1, 19.2, 16.1, 9.7, 9.6。
。
化合物4e：无色油状物（26 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.82 –7.60 (15H, m, H-TPP), 5.87 (1H, m, CHin Allyl), 5.30 – 5.14 (2H, m, COOCH2),4.72 (1H, s, H-17), 4.67 (1H, s, H-17), 4.56 – 4.40 (2H, m, = CH2), 3.70 (2H,m, H-5’), 3.37 – 3.05 (2H, m, H-1’), 1.12 (3H, s, H-18), 2.24 – 0.79 (26H, m,CH, CH2 in ent-kaurene skeleton or carbon chain), 0.74 (3H, s, H-20). 13C NMR(101 MHz, Chloroform-d) δ 177.2, 151.9, 135.0, 135.0, 135.0, 133.8, 133.8,133.8, 133.7, 133.7, 133.7, 132.4, 130.6, 130.6, 130.6, 130.4, 130.4, 130.4,118.9, 118.9, 118.2, 118.1, 103.5, 84.9, 64.9, 61.8, 57.0, 54.0, 48.1, 43.9,41.6, 40.8, 40.7, 39.3, 39.0, 38.0, 30.2, 28.9, 27.4, 27.2, 22.7, 22.2, 21.9,20.1, 19.1, 15.6。
。
化合物4f：无色油状物（29 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.83 –7.68 (15H, m, H-TPP), 5.86 – 5.75 (1H, m, = CH), 5.17 – 5.05 (2H, m, = CH2),4.79 (1H, s, H-17), 4.74 (1H, s, H-17), 4.16 – 4.03 (2H, m, COOCH2), 3.74 –3.59 (2H, m, H-5’), 3.34 – 3.28 (2H, m, H-1’), 2.43 – 2.38 (2H, m, CH2CH =),2.17 (1H, d, J = 14.1 Hz, H-3), 1.16 (3H, s, H-18), 0.81 (3H, s, H-20), 2.09– 0.75 (m, 25H, CH, CH2 in ent-kaurene skeleton or carbon chain). 13C NMR (101MHz, Chloroform-d) δ 177.6, 151.9, 135.0, 135.0, 135.0, 134.5, 133.7, 133.7,133.7, 133.6, 133.6, 133.6, 130.6, 130.6, 130.6, 130.4, 130.4, 130.4, 118.9,118.9, 118.1, 117.2, 103.5, 84.9, 63.3, 61.8, 57.0, 53.9, 48.1, 43.9, 41.7,40.8, 40.7, 39.3, 39.0, 38.0, 33.0, 29.9, 28.9, 27.4, 27.3, 22.7, 22.4, 21.9,20.1, 19.1, 15.6。
。
化合物4g：无色油状物（25 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.84 –7.68 (15H, m, H-TPP), 4.79 (1H, s, H-17), 4.74 (1H, s, H-17), 4.06 – 3.99(2H, m, COOCH2), 3.78 – 3.67 (2H, m, H-5’), 3.35 – 3.26 (2H, m, H-1’), 2.17(1H, d, J = 14.1 Hz, H-3), 1.17 (3H, s, H-18), 2.10 – 0.87 (38H, m, CH, CH2in ent-kaurene skeleton or carbon chain), 0.81 (3H, s, H-20). 13C NMR (101MHz, Chloroform-d) δ 177.7, 151.9, 135.0, 135.0, 135.0, 133.7, 133.7, 133.7,133.6, 133.6, 133.6, 130.6, 130.6, 130.6, 130.4, 130.4, 130.4, 118.9, 118.9,118.1, 103.5, 84.9, 62.3, 61.8, 57.0, 53.9, 48.1, 43.8, 41.7, 40.9, 40.7,39.3, 39.0, 38.0, 35.8, 34.8, 33.2, 33.1, 29.9, 28.9, 27.4, 27.3, 26.5, 26.3,26.3, 22.7, 22.1, 21.9, 20.1, 19.1, 15.5。
。
化合物4h：无色油状物（22 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.88 –7.68 (15H, m, H-TPP), 7.39 – 7.29 (5H, m, H-Ph), 5.21 – 4.99 (2H, m, CH2 inBn), 4.78 (1H, s, H-17), 4.73 (1H, s, H-17), 3.89 – 3.77 (2H, m, H-5’), 3.30(2H, m, H-1’), 2.20 (1H, d, J = 12.9 Hz, H-3), 1.19 (s, 3H, H-18), 2.10 –0.76 (25H, m, CH, CH2 in ent-kaurene skeleton or carbon chain), 0.75 (s, 3H,H-20). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 177.2, 151.9, 136.2, 134.9, 134.9,134.9, 133.8, 133.8, 133.8, 133.7, 133.7, 133.7, 130.5, 130.5, 130.5, 130.4,130.4, 130.4, 128.5, 128.5, 128.2, 128.2, 128.1, 119.0, 119.0, 118.1, 103.5,84.8, 66.0, 61.9, 57.1, 53.9, 48.1, 43.9, 41.6, 40.8, 40.6, 39.3, 38.9, 38.0,30.0, 28.8, 27.4, 27.2, 22.8, 22.4, 21.9, 20.1, 19.1, 15.5。
。
化合物4i：无色油状物（32 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.86 –7.67 (15H, m, H-TPP), 7.31 – 7.27 (2H, m, H-Ph), 7.25 – 7.17 (3H, m, H-Ph),4.78 (1H, s, H-17), 4.73 (1H, s, H-17), 4.36 – 4.20 (2H, m, COOCH2), 3.83 –3.75 (2H, m, CH2Ph), 3.38 – 3.27 (2H, m, H-5’), 3.02 – 2.90 (2H, m, H-1’),2.13 (1H, d, J = 13.1 Hz, H-3), 1.11 (3H, s, H-18), 2.09 – 0.72 (25H, m, CH,CH2 in ent-kaurene skeleton or carbon chain), 0.71 (3H, s, H-20). 13C NMR (101MHz, Chloroform-d) δ 177.6, 151.9, 138.1, 135.0, 135.0, 135.0, 133.8, 133.8,133.8, 133.7, 133.7, 133.7, 130.5, 130.5, 130.5, 130.4, 130.4, 130.4, 128.9,128.9, 128.5, 128.5, 126.5, 118.9, 118.9, 118.1, 103.5, 84.9, 64.7, 61.9,56.9, 53.9, 48.1, 43.8, 41.6, 40.9, 40.6, 39.3, 38.9, 38.0, 35.0, 30.0, 28.8,27.4, 27.3, 22.8, 22.4, 21.9, 20.1, 19.0, 15.4。
。
化合物4j：无色油状物（32 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.86 –7.67 (15H, m, H-TPP), 7.23 – 6.93 (4H, m, H-Ph), 4.78 (1H, s, H-17), 4.73(1H, s, H-17), 4.33 – 4.16 (2H, m, COOCH2), 3.82 – 3.69 (2H, m, CH2Ph), 3.37 –3.27 (2H, m, H-5’), 2.99 – 2.87 (2H, m, H-1’), 2.12 (1H, d, J = 12.9 Hz, H-3), 1.10 (3H, s, H-18), 2.09 – 0.71 (25H, m, CH, CH2 in ent-kaurene skeletonor carbon chain), 0.69 (s, 3H, H-20). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 177.6,160.4, 151.9, 135.0, 135.0, 135.0, 133.9, 133.8, 133.8, 133.8, 133.7, 133.7,133.7, 130.5, 130.5, 130.5, 130.4, 130.4, 130.4, 130.4, 130.3, 118.9, 118.9,118.1, 115.3, 115.1, 103.5, 84.8, 64.7, 61.8, 56.9, 53.9, 48.1, 43.8, 41.6,40.9, 40.6, 39.3, 38.9, 38.0, 34.2, 30.0, 28.7, 27.4, 27.3, 22.8, 22.4, 21.9,20.1, 19.0, 15.3。
实施例2 化合物8a-c的合成
如合成路线2所示，以化合物2a、2b、2h为起始原料，C-16位端烯，可利用臭氧进行断裂，得到含羰基化合物5a-c，5a-c在NaBH4的作用下，羰基可还原为羟基，得到化合物6a-c，6a-c通过与5-溴戊酸、1-乙基-3（3-二甲基丙胺）碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶成酯反应生成化合物7a-c，7a-c在三苯基膦和乙腈溶液下反应得到化合物8a-c。
合成路线2中反应条件与试剂：（d）臭氧、二氯甲烷，-60℃搅拌；(e)硼氢化钠、甲醇，冰水浴转室温；(f) 5-溴戊酸、1-乙基-3（3-二甲基丙胺）碳二亚胺、4-二甲氨基吡啶、二氯甲烷，室温；(c) 三苯基膦，乙腈，氮气保护，80℃加热回流。
。
合成路线2
具体步骤如下：
（1）化合物5a-c的合成
将0.30 mmol化合物2a、2b、2h溶解在1 mmol二氯甲烷，混合物在-60℃回流搅拌，通入臭氧，反应15min；在反应液中加入饱和氯化钠和乙酸乙酯（体积比1:1）进行萃取，得到有机层，用无水硫酸钠在常温条件下干燥12h后浓缩，使用柱层析方法对浓缩物进行分离提纯，得到化合物5a-c；
2a对应纯产物5a；2b对应纯产物5b，2h对应纯产物5c。
（2）化合物6a-c的合成
将反应底物C（100 mg）、氢化钠（38.3mg, 0.9 mmol）0.36 mmol硼氢化钠溶解于1mmol甲醇，混合物在室温下回流搅拌1h，在反应液中加入饱和氯化钠和乙酸乙酯（体积比1:1）进行萃取，得到有机层，用无水硫酸钠在常温条件下干燥12h后浓缩，使用柱层析方法对浓缩物进行分离提纯，分别得到纯产物6a-c中的其中一种；
其中：反应底物C为步骤（1）合成的5a或步骤（1）合成的5b或步骤（1）合成的5c。
5a对应纯产物6a；5b对应纯产物6b，5c对应纯产物6c。
（3）化合物7a-c的合成
将反应底物D（100 mg）、0.54 mmol 5-溴戊酸、0.36 mmol1-乙基-3（3-二甲基丙胺）碳二亚胺和0.24 mmol4-二甲氨基吡啶溶解于1 mmol二氯甲烷，混合物在室温下回流搅拌2h，在反应液中加入饱和氯化钠和乙酸乙酯（体积比1:1）进行萃取，得到有机层，用无水硫酸钠在常温条件下干燥12h后浓缩，使用柱层析方法对浓缩物进行分离提纯，分别得到纯产物7a-c中的其中一种；
其中：反应底物D为步骤（2）合成的6a或步骤（2）合成的6b或步骤（2）合成的6c。
6a对应纯产物7a；6b对应纯产物7b，6c对应纯产物7c。
（4）化合物8a-c的合成
将反应底物E（100 mg）、0.32 mmol三苯基膦溶解于1 mmol乙腈中，在氮气保护下混合物在80℃回流搅拌，反应24h，在反应液中加入饱和氯化钠和二氯甲烷（体积比1:1）进行萃取，得到有机层，用无水硫酸钠在常温条件下干燥12h后浓缩，使用柱层析方法对浓缩物进行分离提纯，得到化合物8a-c；
其中：反应底物E为步骤（3）合成的7a或步骤（3）合成的7b或步骤（3）合成的7c。
7a对应纯产物8a；7b对应纯产物8b，7c对应纯产物8c。
化合物8a-c的结构、外观、核磁共振谱图数据如下所示：
。
化合物8a：白色固体（21 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.91 – 7.65(15H, m, H-Ph), 4.74 (1H, dd, J = 11.5, 4.0 Hz, H-16), 4.04 – 3.71 (2H, m, H-5’), 3.63 (3H, s, CH3 in COOCH3), 2.59 – 2.40 (2H, m, H-2’), 2.16 (1H, d, J =13.4 Hz, H-3), 1.16 (3H, s, H-17), 2.09 – 0.85 (23H, m, CH, CH2 in ent-kaurene skeleton or carbon chain), 0.79 (3H, s, H-19). 13C NMR (101 MHz,Chloroform-d) δ 178.0, 175.1, 135.1, 135.1, 135.1, 133.8, 133.8, 133.8,133.67, 133.7, 133.7, 130.6, 130.6, 130.6, 130.4, 130.4, 130.4, 118.7, 118.7,117.9, 81.7, 79.3, 56.7, 54.6, 51.2, 46.1, 43.8, 43.3, 41.5, 40.6, 39.2,38.0, 34.4, 33.3, 28.7, 25.5, 25.3, 22.6, 22.1, 21.6, 19.5, 19.0, 15.2。
。
化合物8b：白色固体（20%）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.91 – 7.62(15H, m, H-Ph), 4.73 (1H, dd, J = 11.5, 4.0 Hz, H-16), 4.09 (2H, q, J = 7.2Hz, CH2 in ethyl), 3.99 – 3.74 (2H, m, H-5’), 2.61 – 2.37 (2H, m, H-2’), 1.16(3H, s, H-17), 2.25 – 0.85 (27H, m, CH, CH2, CH3 in ent-kaurene skeleton orcarbon chain), 0.82 (3H, s, H-19). 13C NMR (100 MHz, Chloroform-d) δ 177.4,175.3, 135.0, 135.0, 135.0, 134.4, 134.4, 134.4, 133.7, 133.7, 133.7, 130.6,130.6, 130.6, 130.4, 130.4, 130.4, 118.9, 118.9, 118.0, 82.0, 79.3, 60.0,56.1, 53.5, 46.1, 43.7, 43.3, 41.5, 40.7, 39.3, 38.01, 34.5, 33.3, 29.0,25.5, 25.3, 22.6, 22.1, 21.6, 19.5, 19.1, 15.4, 14.1。
。
化合物8c：白色固体（30%）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.89 – 7.66(15H, m, H-Ph), 7.42 – 7.29 (5H, m, H-Ph in Bn), 5.19 – 4.93 (m, 2H, H-CH2 inBn), 4.72 (1H, dd, J = 11.5, 4.0 Hz, H-16), 4.13 – 3.73 (2H, m, H-5’), 2.56 –2.42 (2H, m, H-2’), 2.20 (1H, d, J = 12.5 Hz, H-3), 1.18 (3H, s, H-17), 1.07– 0.78 (23H, m, CH, CH2 in ent-kaurene skeleton or carbon chain), 0.74 (s,3H, H-19). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 177.2, 175.2, 136.0, 135.0,135.0, 135.0, 133.8, 133.8, 133.8, 133.7, 133.7, 133.7, 130.6, 130.6, 130.6,130.4, 130.4, 130.4, 128.5, 128.5, 128.3, 128.3, 128.1, 118.8, 118.8, 117.9,81.8, 79.3, 66.1, 56.9, 54.6, 46.1, 43.9, 43.3, 41.5, 40.6, 39.3, 38.0, 34.4,33.3, 28.8, 25.5, 25.3, 22.7, 22.2, 21.6, 19.5, 19.1, 15.3。
实施例3 化合物10a-c的合成
如合成路线3所示，以化合物6a-c为起始原料，6a-c通过与1,5-二溴戊烷、氢化钠、N,N-二甲基甲酰胺成醚反应生成化合物9a-c，9a-c在三苯基膦和乙腈溶液下反应得到化合物10a-c。
合成路线3中反应条件与试剂：(g) 1,5-二溴戊烷、氢化钠、N,N-二甲基甲酰胺，室温；(c) 三苯基膦，乙腈，氮气保护，80℃加热回流。
。
合成路线3
（1）化合物9a-c的合成
将反应底物D（100 mg）、0.60 mmol1,5-二溴戊烷、0.90 mmol氢化钠溶解于1 mmolN,N-二甲基甲酰胺溶液，混合物在室温下回流搅拌2h，混合物在室温下回流搅拌2h，在反应液中加入饱和氯化钠和乙酸乙酯（体积比1:1）进行萃取，得到有机层，用无水硫酸钠在常温条件下干燥12h后浓缩，使用柱层析方法对浓缩物进行分离提纯，分别得到纯产物9a-c中的其中一种；
其中：反应底物D为实施例2步骤（2）合成的6a或实施例2步骤（2）合成的6b或实施例2步骤（2）合成的6c。
6a对应纯产物9a；6b对应纯产物9b，6c对应纯产物9c。
（2）化合物10a-c的合成
将反应底物F（100 mg）、0.32 mmol三苯基膦溶解于1 mmol乙腈中，在氮气保护下混合物在80℃回流搅拌，反应24h，在反应液中加入饱和氯化钠和二氯甲烷（体积比1:1）进行萃取，得到有机层，用无水硫酸钠在常温条件下干燥12h后浓缩，使用柱层析方法对浓缩物进行分离提纯，得到化合物10a-c；
其中：反应底物F为步骤（3）合成的9a或步骤（3）合成的9b或步骤（3）合成的9c。
9a对应纯产物10a；9b对应纯产物10b，9c对应纯产物10c。
化合物10a-c的结构、外观、核磁共振谱图数据如下所示：
。
化合物10a：白色固体（17 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.88 – 7.67(15H, m, H-Ph), 3.75 – 3.71 (3H, m, H-16, H-5’), 3.62 (3H, s, CH3 in COOCH3),3.46 (2H, m, H-1’), 2.16 (1H, d, J = 13.4 Hz, H-3), 1.15 (3H, s, H-17), 1.14– 0.81 (27H, m, CH, CH2 in ent-kaurene skeleton or carbon chain), 0.79 (3H,s, H-19). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 178.1, 135.0, 135.0, 135.0,133.8, 133.8, 133.8, 133.7, 133.7, 133.7, 130.6, 130.6, 130.6, 130.4, 130.4,130.4, 118.9, 118.9, 118.1, 83.4, 80.2, 69.4, 56.9, 55.1, 51.1, 46.4, 43.8,42.8, 41.9, 40.7, 39.2, 38.1, 33.5, 29.2, 28.7, 27.3, 27.2, 22.8, 22.4, 21.6,19.6, 19.1, 15.3。
。
化合物10b：白色固体（19%）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.97 – 7.60(15H, m, H-Ph), 3.74 (3H, m, H-16, H-5’), 3.52 – 3.40 (2H, m, H-1’) 2.16 (1H,d, J = 13.0 Hz, H-3), 1.26 (3H, t, J = 7.1 Hz, CH3 in ethyl), 1.15 (3H, s, H-17), 0.82 (3H, s, H-19), 0.77 (27H, m, CH, CH2 in ent-kaurene skeleton orcarbon chain). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ 177.6, 135.0, 135.0, 135.0,133.8, 133.8, 133.8, 133.7, 133.7, 133.7, 130.6, 130.6, 130.6, 130.4, 130.4,130.4, 118.9, 118.9, 118.0, 83.5, 80.2, 69.4, 60.0, 56.9, 55.1, 46.4, 43.7,42.7, 42.0, 40.8, 39.3, 38.1, 33.4, 29.1, 28.8, 27.3, 27.2, 22.8, 22.3, 21.7,19.6, 19.1, 15.6, 14.1。
。
化合物10c：白色固体（34 mg, 23%）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.96– 7.50 (15H, m, H-Ph), 7.35 – 7.07 (5H, m, H-Ph in Bn), 5.16 – 4.97 (2H, m,CH2 in Bn), 3.80 – 3.68 (3H, m, H-16, H-5’), 3.52 – 3.38 (2H, m, H-1’), 2.19(1H, d, J = 13.6 Hz, H-3), 1.18 (3H, s, H-17), 1.02 – 0.87 (26H, m, CH, CH2in ent-kaurene skeleton or carbon chain), 0.75 (s, 3H, H-19). 13C NMR (101MHz, Chloroform-d) δ 177.3, 136.1, 135.0, 135.0, 135.0, 133.8, 133.8, 133.8,133.7, 133.7, 133.7, 130.6, 130.6, 130.6, 130.4, 130.4, 130.4, 128.5, 128.5,128.3, 128.3, 128.1, 118.9, 118.9, 118.1, 83.5, 80.2, 69.4, 66.0, 57.1, 55.1,46.4, 43.9, 42.8, 42.0, 40.7, 39.3, 38.1, 33.4, 29.7, 28.8, 27.3, 27.2, 22.7,22.5, 21.7, 19.6, 19.1, 15.5。
实施例4 化合物13的合成
如合成路线4所示，以化合物1为起始原料，1通过与丙酸酐、4-二甲氨基吡啶、吡啶溶液反应得到化合物11，11通过与1,5-二溴戊烷、氢化钠、N,N-二甲基甲酰胺成醚反应生成化合物12，12在三苯基膦和乙腈溶液下反应得到化合物13。
合成路线4中反应条件与试剂：(h) 丙酸酐、4-二甲氨基吡啶、吡啶溶液，80℃加热回流；(b)1,5-二溴戊烷、氢化钠、N,N-二甲基甲酰胺，80℃加热回流；(c) 三苯基膦，乙腈，氮气保护，80℃加热回流。
。
合成路线4
（1）化合物11的合成
将化合物1（100mg）、2.4 mmol丙酸酐、0.32 mmol 4-二甲氨基吡啶溶解于1 mmol吡啶溶液中，混合物在80℃下回流搅拌6h，在反应液中加入饱和氯化钠和乙酸乙酯（体积比1:1）进行萃取，得到有机层，用无水硫酸钠在常温条件下干燥12h后浓缩，使用柱层析方法对浓缩物进行分离提纯，得到纯产物11。
（2）化合物12的合成
将化合物11（100mg）、0.9 mmol氢化钠、0.60 mmol 1,5-二溴戊烷溶解于1 mmolN,N-二甲基甲酰胺溶液中，混合物在80℃回流搅拌，反应16h，在反应液中加入饱和氯化钠和乙酸乙酯（体积比1:1）进行萃取，得到有机层，用无水硫酸钠在常温条件下干燥12h后浓缩，使用柱层析方法对浓缩物进行分离提纯，得到纯产物12。
（3）化合物13的合成
将化合物12（100 mg）、0.32 mmol三苯基膦溶解于1 mmol乙腈中，在氮气保护下混合物在80℃回流搅拌，反应24h，在反应液中加入饱和氯化钠和二氯甲烷（体积比1:1）进行萃取，得到有机层，用无水硫酸钠在常温条件下干燥12h后浓缩，使用柱层析方法对浓缩物进行分离提纯，得到化合物13。
化合物13的结构、外观、核磁共振谱图数据如下所示：
。
化合物13：白色固体（17 %）。1H NMR (400 MHz, Chloroform-d) δ 7.89 – 7.67(15H, m, H-Ph), 4.90 (1H, s, H-17), 4.86 (1H, s, H-17), 4.05 – 3.84 (2H, m,H-5’), 3.80 – 3.63 (2H, m, H-1’), 1.11 (3H, s, H-18), 1.06 (3H, t, J = 7.6Hz, CH3 in OCOCH2CH3), 0.82 (3H, s, H-20), 2.60 – 0.72 (28H, m, CH, CH2 inent-kaurene skeleton or carbon chain). 13C NMR (101 MHz, Chloroform-d) δ177.5, 173.5, 152.1, 135.0, 135.0, 135.0, 133.7, 133.7, 133.7, 133.6, 133.6,133.6, 130.6, 130.6, 130.6, 130.4, 130.4, 130.4, 118.9, 118.9, 118.1, 103.5,87.4, 63.5, 56.9, 53.6, 46.8, 43.8, 42.6, 42.2, 41.1, 40.7, 39.2, 38.0, 36.6,28.5, 26.9, 26.8, 24.2, 22.2, 21.8, 21.7, 20.0, 19.1, 15.4, 9.2。
为了证明本申请提供的技术方案的优点，下面给出本申请提供的技术方案实施例。
试验例1 甜菊醇衍生物进行细胞活性探究及化合物4h的机制探索
（1）细胞培养：细胞复苏后，使用含有10%胎牛血清和1%的青链霉素双抗的DMEM培养基重悬细胞，并接种于细胞培养皿中，培养条件为37℃、5%CO2。培养细胞期间观察细胞形态，待细胞形态稳定，密度达到80%~90%即可用于传代或细胞机制实验研究。
（2）药物的细胞活性筛选：取一定数目的细胞，用完全培养基中混匀，并铺于96孔板中。其中，一孔3000-8000个细胞，共100μL溶液。培养12小时后，弃置孔板内溶液，再加入90μL完全培养基和10μL受试化合物（0.1，0.3，1，3，10，30μM），处理48小时后，以换液的形式加入含10% CCK8的培养基，培养1-4小时后，在酶标仪中测量450nm吸光度。
结果如表1所示，相比于甜菊醇（化合物1）和临床抗肿瘤药物顺铂，测试药物对肿瘤细胞株（人肺癌细胞A549、人结肠癌细胞HCT116、人宫颈癌细胞Hela、人肝癌细胞Huh7、人乳腺癌细胞MDA-MB-231）的细胞毒性都增强了。同时这些测试药物，相较于肿瘤细胞株，对人正常胚胎肝细胞HHL5的毒性较小。特别是化合物4h其对肿瘤细胞Huh7的IC50值为0.19 μM，而对正常细胞HHL5的TC50 为2.91μM，选择系数（SI）为15.24。
表1 甜菊醇衍生物对多种细胞的IC50，TC50和SI值测试
（3）癌细胞周期测试：取一定数目的Huh7细胞，用完全培养基中混匀，并铺于6孔板中。其中，一孔30万个细胞，共2mL溶液。培养12小时后，弃置孔板内溶液，再加入含受试化合物的完全培养基（0，0.4，0.8，1.6μM），处理24小时后，按照细胞周期试剂盒（贝博生物，上海）步骤对细胞进行染色并在流式细胞仪（BD，美国）上进行凋亡测试。结果如图1A所示，药物对癌细胞抑制主要集中在G2/M期。
（4）细胞凋亡测试：取一定数目的Huh7细胞，用完全培养基中混匀，并铺于12孔板中。其中，一孔15万个细胞，共1mL溶液。培养12小时后，弃置孔板内溶液，再加入含受试化合物的完全培养基（0，0.4，0.8，1.6μM），处理24小时后，按照Annexin V-FITC / PI试剂盒（贝博生物，上海）步骤对细胞进行染色并在流式细胞仪（BD，美国）上进行凋亡测试。结果如图1B所示，4h显著诱导癌细胞凋亡。
（5）线粒体膜电位（Δψm）的测定用阳离子JC-1（Sigma-Aldrich）染料测定线粒体膜电位：将接种在6孔板中的Huh7细胞与或不与试验化合物4h一起处理24小时。将制备成最终浓度为1μg/mL的JC-1工作溶液以500μL/孔添加到Huh7细胞中。混合物在37℃下培养20分钟。然后去除染料，并用PBS清洗孔三次。随后在流式细胞仪（BD，美国）上进行测试。如图2所示，4h处理后细胞∆ψm明显降低，随着4h剂量增加∆ψm降低，这一结果显示4h能有效地降低癌细胞的线粒体膜电位，破坏线粒体功能，从而达到促进细胞凋亡的效果。

Claims (10)

1.一种甜菊醇衍生物，其特征在于，所述的甜菊醇衍生物结构式如式1所示：
；
式1；
其中：R1为甲基、乙基、异丙基、2-丁基、烯丙基、1-烯丁基、环乙丙基、苄基、苯丙基、对氟苯丙基的其中之一；
或者，所述的甜菊醇衍生物结构式如式2所示：
；
式2；
其中，R1为甲基、乙基、苄基的其中之一；
或者，所述的甜菊醇衍生物结构式如式3所示：
；
式3；
其中，R1为甲基、乙基、苄基的其中之一；
或者，所述的甜菊醇衍生物结构式如式4所示：
；
式4。
2.权利要求1所述的甜菊醇衍生物的制备方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
（1）化合物2a-j的合成
将0.31 mmol化合物1、0.31 mmol碳酸钾、0.93 mmol卤代化合物溶解在1 mmol丙酮中，混合物在60℃回流搅拌，反应2h；加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物2a-j；
（2）化合物3a-j的合成
将0.30 mmol化合物2a-j、0.9 mmol钠氢、0.60 mmol 1,5-二溴戊烷溶解于1 mmol N,N-二甲基甲酰胺溶液中，混合物在80℃回流搅拌，反应16h，加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物3a-j；
（3）化合物4a-j的合成
将0.21 mmol化合物3a-j、0.32 mmol三苯基膦溶解于1 mmol乙腈中，在氮气保护下混合物在80℃回流搅拌，反应24h，加入二氯甲烷和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物4a-j；
其合成路线如下：
。
3.权利要求1所述的甜菊醇衍生物的制备方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
（1）化合物5a-c的合成
将0.30 mmol化合物2a、2b、2h溶解在1 mmol二氯甲烷，混合物在-60℃回流搅拌，通入臭氧，反应15min；加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物5a-c；
（2）化合物6a-c的合成
将0.30 mmol化合物5a-c、0.36 mmol硼氢化钠溶解于1 mmol甲醇，混合物在室温下回流搅拌1h，加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物6a-c；
（3）化合物7a-c的合成
将0.30 mmol化合物6a-c、0.54 mmol5-溴戊酸、0.36 mmol1-乙基-3（3-二甲基丙胺）碳二亚胺和0.24 mmol4-二甲氨基吡啶溶解于1 mmol二氯甲烷，混合物在室温下回流搅拌2h，加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物7a-c；
（4）化合物8a-c的合成
将0.21 mmol化合物7a-c、0.32 mmol三苯基膦溶解于1 mmol乙腈中，在氮气保护下混合物在80℃回流搅拌，反应24h，加入二氯甲烷和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物8a-c；
其合成路线如下：
。
4.权利要求1所述的甜菊醇衍生物的制备方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
（1）化合物9a-c的合成
将0.30 mmol化合物6a-c、0.60 mmol1,5-二溴戊烷、0.90 mmol钠氢溶解于1 mmol N,N-二甲基甲酰胺溶液，混合物在室温下回流搅拌2h，加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物9a-c；
（2）化合物10a-c的合成
将0.21 mmol化合物9a-c、0.32 mmol三苯基膦溶解于1 mmol乙腈中，在氮气保护下混合物在80℃回流搅拌，反应24h，加入二氯甲烷和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物10a-c；
其合成路线如下：
。
5.权利要求1所述的甜菊醇衍生物的制备方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
（1）化合物11的合成
将0.32 mmol化合物1、2.4 mmol丙酸酐、0.32 mmol 4-二甲氨基吡啶溶解于1 mmol吡啶溶液中，混合物在80℃下回流搅拌6h，加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物11；
（2）化合物12的合成
将0.30 mmol化合物11、0.9 mmol钠氢、0.60 mmol 1,5-二溴戊烷溶解于1 mmol N,N-二甲基甲酰胺溶液中，混合物在80℃回流搅拌，反应16h，加入乙酸乙酯和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物12；
（3）化合物13的合成
将0.21 mmol化合物12、0.32 mmol三苯基膦溶解于1 mmol乙腈中，在氮气保护下混合物在80℃回流搅拌，反应24h，加入二氯甲烷和饱和食盐水的混合物进行萃取，收集有机层，在无水硫酸钠上干燥后浓缩，柱层析分离提纯，得到化合物13；
其合成路线如下：
。
6.权利要求1所述的甜菊醇衍生物在制备抗肿瘤活性药物中的应用。
7.一种肿瘤活性药物，包括权利要求1所述的甜菊醇衍生物。
8.根据权利要求7所述的一种肿瘤活性药物，还包括药学上可接受的辅料。
9.根据权利要求7所述的一种肿瘤活性药物，所述的辅料为润滑剂、填充剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、抗氧剂或pH调节剂中的至少一种。
10.根据权利要求7所述的一种肿瘤活性药物，所述的药物的剂型为注射液、片剂、口服液、颗粒剂或胶囊。
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