CN102557942A - 一种甜菊醇衍生物及制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种如式(I)所示的甜菊醇衍生物及其制备与应用,所述制备方法为:所述的化合物(VIII)与如式(VII)所示的溴代烷烃反应,在有机溶剂中,加入催化剂碘化钾,另加入缚酸剂,在20~50℃温度下连续反应8~12小时,反应液后处理得到式(I)所示的甜菊醇衍生物;本发明甜菊醇衍生物提供了一种新的、有明显抗肿瘤活性的抗肿瘤药物,为新药筛选提供研究基础,具有重大应用前景;本发明甜菊醇衍生物制备流程简单,利于产业化生产。
Description
(一)技术领域
本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的化合物——甜菊醇衍生物和该类化合物的制备方法,及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
(二)背景技术
恶性肿瘤是危害人们生命健康的重大疾病,据报道,全世界有4000多万人患恶性肿瘤,其中每年新增患者900多万、死亡700多万,我国年均癌症发病人数约180万~200万,死亡人数约140万~150万。目前恶性肿瘤发生与死亡还有日趋严重的趋势,有些地区已经成为人口死亡的首要原因。因此,开发新颖的抗肿瘤药物具有重要的意义。
甜菊醇衍生物是一种含对映-贝壳杉烯型骨架结构的二萜化合物。许多天然二萜类化合物,如冬凌草甲素、冬凌草乙素均含有对映-贝壳杉烯型骨架结构,且具有良好的生物活性,已发展为一类重要的药物。细胞毒活性筛选结果证明对映-贝壳杉烯型二萜化合物都具有一定的抗肿瘤活性,化合物结构中的α,β-不饱和酮结构片断是其活性中心,α-亚甲基环戊酮结构的存在,大大增强了该类化合物的抗肿瘤活性,其作用机制可能是通过一个类似于迈克尔加成的反应,使活性中心与肿瘤细胞中的巯基酶相结合而发生作用。甜菊醇是甜菊糖的苷元,具有抗高血压、降低血糖、抑制癌细胞等生理活性,甜菊醇分子为具有贝壳杉骨架的四环二萜类化合物,通过对甜菊醇分子的结构改造,向分子中引入α-亚甲基环戊酮活性基团,可增强其抗菌、抗肿瘤活性,获得新的抗肿瘤化合物。因此对甜菊醇进行结构修饰,制备具有抗肿瘤活性的二萜化合物新药,具有非常重大的意义。
(三)发明内容
本发明目的是提供一类新的具有抗肿瘤活性的化合物-甜菊醇衍生物和该类化合物的制备方法,及其在制备抗肿瘤药物中的应用。
发明采用的技术方案是:
一种结构如式(I)所示的甜菊醇衍生物:
式(I)中,R1为H或乙酰基,当R1为H时,R2为异丙基、仲丁基、2-溴乙基、2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基;当R1为乙酰基时,R2为乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、苄基、2-溴乙基、2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基。
优选的,本发明所述的甜菊醇衍生物为下列之一:
本发明还提供了甜菊醇衍生物的制备方法,所述的方法为,所述化合物(VIII)与如式(VII)所示的溴代烷烃溶解在有机溶剂中,加入催化剂碘化钾,另加入缚酸剂,在20~50℃温度下连续反应8~12小时,反应液后处理得到式(I)所示的具有α-亚甲基环戊酮活性结构的甜菊醇衍生物,所述缚酸剂为无水碳酸钾或KOH;式(VIII)中R1与式(I)中R1相同,式(VII)中R2与式(I)中R2相同,式(I)中R1为H或乙酰基,当R1为H时,R2为异丙基、仲丁基、2-溴乙基、2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基;当R1为乙酰基时,R2为乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、苄基、2-溴乙基、2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基;
优选的,本发明所述的后处理为,反应液加水稀释令固体析出,过滤,滤液再用乙酸乙酯萃取,取乙酸乙酯层饱和食盐水洗涤,再用无水硫酸镁干燥、过滤,取滤液浓缩至干,再用丙酮溶解,以体积比5~12∶1的石油醚、丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析,收集洗脱液,浓缩,再用丙酮重结晶,制得式(I)所示的具有α-亚甲基环戊酮活性结构的甜菊醇衍生物。
进一步,本发明所述的有机溶剂为二甲基甲酰胺(DMF)或二甲基亚砜(DMSO),所述的有机溶剂的体积用量以式(VIII)所示化合物的物质的量计为10~13.3ml/mmol。
再进一步,本发明方法所述的方法中,式(VIII)所示化合物与如式(VII)所示的溴代烷烃物质的量比为1∶2~3,式(VIII)所示的化合物与催化剂物质的量比为1∶0.1~0.14;所述式(VIII)所示的化合物和缚酸剂投料物质的量之比为1∶3~6。
进一步,所述的甜菊醇衍生物的制备方法为:所述的化合物(VIII)与如式(VII)所示的溴代烷烃溶解在二甲基甲酰胺中,加入催化剂碘化钾,另加入缚酸剂,在20~50℃温度下连续反应8~12小时,反应液加水稀释,过滤,滤液再用乙酸乙酯萃取,取乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤,再用无水硫酸镁干燥、过滤,取滤液浓缩至干,再用丙酮溶解,以体积比5~12∶1的石油醚丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析,收集洗脱液,浓缩,再用丙酮重结晶,得到式(I)所示的甜菊醇衍生物,所述缚酸剂为无水碳酸钾或KOH;所述的二甲基甲酰胺的体积用量以式(VIII)所述化合物物质的量计为13.3ml/mmol,所述式(VIII)所示的化合物与如式(VII)所示的溴代烷烃物质的量比为1∶2~3,所述式(VIII)所示的化合物和碘化钾、缚酸剂投料物质的量之比为1∶0.12∶3~6。
更进一步,本发明所述的式(V)所示的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸推荐按如下步骤制得:(1)以如式(II)所示的甜菊糖为原料,经NaIO4和KOH水解得到式(III)所示的甜菊醇;(2)式(III)所示的甜菊醇经SeO2进行氧化反应得到式(IV)所示的ent-13,15二羟基贝壳杉烯-19-酸,即15-羟基甜菊醇;(3)式(IV)所示的ent-13,15二羟基贝壳杉烯-19-酸经CrO3进一步氧化得到式(V)所示的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸;具体推荐按以下步骤进行:(1)以如式(II)所示的甜菊糖为原料,甜菊糖10g,高碘酸钠15g于1000ml圆底烧瓶中,并加入450ml水,在室温下搅拌约16小时后,向反应体系中加入75g(1.34mol)氢氧化钾继续搅拌,并且油浴加热回流3小时,冷却至室温,缓慢滴加冰醋酸,调节pH至5.0,然后用乙醚(150ml×3)萃取三次,合并有机相水洗两次,再用无水硫酸镁干燥,最后抽滤,浓缩得白色固体,即为甜菊醇粗品,用甲醇重结晶得式(III)所示的甜菊醇白色针状晶体1.97g;(2)称取500mg(1.57mmol)甜菊醇于250ml圆底烧瓶中,加入1,4-二氧六环和水的混合溶剂100ml(体积比1∶1)。加入新鲜配置的浓度为3.9mol/L的1,4-叔丁基过氧化氢的甲苯溶液1ml,最后再加入55mg(0.5mmol)二氧化硒,油浴60度下反应5小时后,向体系中加150ml水静置,用氯仿(90ml×3)萃取三次,合并有机相并用无水硫酸镁干燥,最后抽滤,滤液浓缩得白色粉末状固体496mg,收率94.4%,即为15-羟基甜菊醇粗品,用甲醇重结晶得白色针状晶体;(3)称取三氧化铬129mg(1.29mmol)溶于1ml水中,并向此溶液缓慢滴加8ml吡啶,约10分钟滴加完毕,143mg(0.43mmol)化合物(IV)溶于10ml吡啶,并缓慢滴加至上述反应体系中,约15分钟滴加完毕,在室温下连续搅拌12小时后,向反应物中加20ml水,并用乙醚萃取3次,合并有机相用无水硫酸镁干燥,最后抽滤,滤液浓缩得棕黄色油状物,用丙酮溶解重结晶得式(V)所示的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸的白色针状晶体125mg,收率87.6%。
本发明所述的式(VI)所示的ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸推荐按如下方法制得:式(V)所示的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸与乙酸酐(CH3CO)2O反应,得到式(VI)所示的ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸;
具体的,本发明所述的甜菊醇衍生物的方法,按如下步骤进行:
(1)在水中,将甜菊糖用高碘酸钠在室温下进行氧化反应16小时;然后加入氢氧化钾加热回流反应3小时,冷却后以冰醋酸调节pH至5.0,乙醚萃取,乙醚层用无水硫酸镁干燥,过滤,滤液浓缩至干,得甜菊醇,所述的甜菊糖、高碘酸钠、氢氧化钾投料物质的量比为1∶5~6∶100~120,所述的水的体积用量以甜菊糖的质量计为40~45ml/g;
(2)将甜菊醇溶于1,4-二氧六环和水体积比为1∶1的混合溶剂,加入1,4-叔丁基过氧化氢的甲苯溶液,再加入二氧化硒,于60℃反应5小时,按照每克甜菊醇用量加入300ml水稀释,以氯仿萃取,萃取液用无水硫酸镁干燥、过滤,滤液浓缩至干,得15-羟基甜菊醇,所述的甜菊醇、1,4-叔丁基过氧化氢、二氧化硒物质的量比为1∶2.5∶0.32,所述的混合溶剂体积用量以甜菊醇质量计为200ml/g,所述的甲苯体积用量以甜菊醇质量计为2ml/g;
(3)将15-羟基甜菊醇溶于吡啶a,加入三氧化铬的体积比为8∶1的吡啶b、水混合溶剂,在室温下连续搅拌12小时后,加入水稀释,乙醚萃取,合并有机相用无水硫酸镁干燥、过滤,滤液浓缩至干,浓缩物用丙酮重结晶得ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸,所述的15-羟基甜菊醇、三氧化铬物质的量比为1∶3,所述的吡啶a体积用量以15-羟基甜菊醇质量计为70ml/g,所述的吡啶b、水混合溶剂的体积用量以15-羟基甜菊醇质量计为63ml/g。
(4)将ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溶于吡啶c、和乙酸酐中,室温下搅拌反应四天,减压蒸去乙酸酐和吡啶c,得棕褐色油状物,硅胶柱色谱纯化,以体积比为1∶1的石油醚-丙酮洗脱,收集洗脱液得ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸,所述的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸与乙酸酐物质的量比1∶40,所述的吡啶c的体积用量以ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸质量计为27ml/g;
(5)将ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸(V)或ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸(VI)溶于DMF或DMSO中,加入催化剂碘化钾、溴代烷烃和缚酸剂(无水碳酸钾或氢氧化钾),在20~50℃温度下(优选40~45℃)连续反应8~12小时,反应液加水稀释,过滤,滤液用乙酸乙酯萃取,取乙酸乙酯层用无水硫酸镁干燥、过滤,滤液浓缩至干,再用丙酮溶解,以体积比5∶1的石油醚丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析,收集洗脱液,浓缩,再用丙酮重结晶,得式(I)所示化合物(ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸酯或ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸酯);所述DMF的体积用量以化合物(V)或化合物(VI)计为13.3ml/mmol,以DMF为有机溶剂时所述式(VIII)所示的化合物和碘化钾投料物质的量之比为1∶0.12,所述溶剂DMSO的用量以化合物(V)或化合物(VI)计为10ml/mmol,以DMSO为有机溶剂时不添加碘化钾;当所用缚酸剂为碳酸钾时,所述的化合物(V)或化合物(VI)、碳酸钾、溴代烷烃的量比为1∶4∶2;当所用缚酸剂为氢氧化钾时,所述的化合物(V)或化合物(VI)、氢氧化钾、溴代烷烃的量比为1∶4∶3。
本发明提供另一种制备所述的甜菊醇衍生物的方法:所述的化合物(VIII)与如式(VII)所示的溴代烷烃溶解在二甲基亚砜中,加入缚酸剂,在20~50℃温度下连续反应8~12小时,反应液加水稀释,过滤,滤液再用乙酸乙酯萃取,取乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤,再用无水硫酸镁干燥、过滤,取滤液浓缩至干,再用丙酮溶解,以体积比5~12∶1的石油醚、丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析,收集洗脱液,浓缩,再用丙酮重结晶,得到式(I)所示的甜菊醇衍生物,所述缚酸剂为无水碳酸钾或KOH;所述的二甲基亚砜的体积用量以式(VIII)所述化合物物质的量计为10ml/mmol,所述式(VIII)所示的化合物与如式(VII)所示的溴代烷烃物质的量比为1∶2~3,所述式(VIII)所示的化合物和缚酸剂投料物质的量之比为1∶3~6。
本发明所述的甜菊醇衍生物在制备抗HepG2细胞株导致的肝癌、HeLa细胞株导致的子宫颈癌、k562细胞株导致的慢性粒细胞白血病药物中的应用。
更具体的,下列之一的甜菊醇衍生物可应用于制备抗HepG2细胞株导致的肝癌:
I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、I-12。
更具体的,下列之一的甜菊醇衍生物可应用于制备抗HeLa细胞株导致的子宫颈癌:I-1、I-2、I-5、I-8、I-9、I-10、I-12。
更具体的,下列之一的甜菊醇衍生物可应用于制备抗k562细胞株导致的慢性粒细胞白血病:化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、I-12、I-14、I-15、I-16。
本发明所述的吡啶a、吡啶b和吡啶c均为吡啶,为便于不同步骤添加量不同而命名,字母a、b、c没有含义。
本发明所述溴代烷烃优选下列之一:溴代异丙烷、2-溴代丁烷、1,2-二溴乙烷、1,3-二溴丙烷、1,2-二溴丙烷、1,4-二溴丁烷、溴乙烷、1-溴丙烷、溴代正丁烷、溴代异丁烷。
与现有技术相比,本发明的有益效果主要体现在:本发明提供了一种甜菊醇衍生物及其制备方法与应用,本发明甜菊醇衍生物提供了一种新的、有明显抗肿瘤活性的抗肿瘤药物,为新药筛选提供研究基础,具有重大应用前景;本发明甜菊醇衍生物制备流程简单,利于产业化生产。
(四)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述,但本发明的保护范围并不仅限于此:
实施例1:ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸(V)的制备
(1)甜菊糖10g(12.4mmol),高碘酸钠15g(70mmol)于1000ml圆底烧瓶中,并加入450ml水,在室温下搅拌约16小时后,向反应体系中加入75g(1.34mol)氢氧化钾继续搅拌,并且油浴加热回流3小时,冷却至室温,缓慢滴加冰醋酸,调节pH至5.0,然后用乙醚(150ml×3)萃取三次,合并有机相水洗两次,再用无水硫酸镁干燥,最后抽滤,浓缩得白色固体,即为甜菊醇粗品,用甲醇重结晶得式(III)所示的甜菊醇白色针状晶体1.97g;(2)称取500mg(1.57mmol)甜菊醇于250ml圆底烧瓶中,加入1,4-二氧六环和水的混合溶剂100ml(体积比1∶1),加入新鲜配置的浓度为3.9mol/L的1,4-叔丁基过氧化氢的甲苯溶液1ml,最后再加入55mg(0.5mmol)二氧化硒,油浴60度下反应5小时后,向反应体系中加150ml水静置,用氯仿(90ml×3)萃取三次,合并有机相并用无水硫酸镁干燥,最后抽滤,滤液浓缩得白色粉末状固体496mg,收率94.4%,即为15-羟基甜菊醇(IV)粗品,用甲醇重结晶得白色针状晶体;(3)称取三氧化铬129mg(1.29mmol)溶于1ml水中,并向此溶液缓慢滴加8ml吡啶,约10分钟滴加完毕,143mg(0.43mmol)化合物(IV)溶于10ml吡啶,并缓慢滴加至上述反应体系中,约15分钟滴加完毕,在室温下连续搅拌12小时后,向反应物中加20ml水,并用乙醚萃取3次,合并有机相用无水硫酸镁干燥,最后抽滤,滤液浓缩得棕黄色油状物,用丙酮溶解重结晶得式(V)所示的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸的白色针状晶体125mg,收率87.6%。熔点:271-273℃.IR(KBr,cm-1):3468,3383,2944,1696,1474,1389,1262,1185,1105,1056.1H-NMR(500MHz,CD3OD)δppm:5.26(s,1H,17-H),5.22(s,1H,17-H),3.76(s,1H,15-H),2.15(d,1H,J=15Hz,14-H),2.00(d,1H,J=10Hz,5-H),1.22(s,3H,18-CH3),0.98(s,3H,20-CH3),2.17-2.14(m,2H),1.93-1.87(m,4H),1.78-1.73(m,5H),1.51-1.49(m,4H),1.10-1.01(m,2H),0.96-0.94(m,2H).13C-NMR(125MHz,CD3OD)δppm:180.47,158.17,103.28,80.15,57.35,54.63,48.52,47.87,44.25,42.26,42.18,41.38,41.15,40.19,39.01,29.69,23.01,21.12,20.19,16.27.
实施例2:ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸(VI)的制备
称取实施例1方法制备的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸332mg(1mmol),溶于9ml无水吡啶和3.8ml乙酸酐中(过量),室温下搅拌反应四天。减压蒸去乙酸酐和吡啶,得棕褐色油状物(有吡啶残留),油状物用丙酮溶解后拌硅胶干法上样,进行硅胶柱色谱纯化,石油醚-丙酮(6∶1)洗脱,得白色固体286mg,即ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸,收率76.6%。熔点:205-209℃。IR(KBr,cm-1):3178,2954,1727,1651,1466,1368,1272,1230,1180,1152,1042.1H-NMR(500MHz,DMSO)δppm:12.08(s,1H,-COOH),5.94(s,1H,17-H),5.42(s,1H,17-H),2.94(d,1H,J=10Hz,5-H),2.06(s,3H,COCH 3),1.13(s,3H,18-CH3),0.96(s,3H,20-CH3),2.44(m,1H),2.02-2.02(m,1H),1.87-1.68(m,8H),1.39-1.28(m,3H),1.11-0.98(m,3H),0.81-0.76(m,1H).ESI-MS:373[M-H]+
实施例3:制备ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸异丙酯(I-1)
称取250mg(0.75mmol)实施例1方法制备的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溶于10mlDMF,加入无水碳酸钾430mg(3.1mmol),用微量进样器向反应体系中加入溴代异丙烷0.14ml(1.5mmol),催化量碘化钾15mg(0.09mmol),40℃下连续反应8小时后停止搅拌。冷却至室温,加入30ml水,用乙酸乙酯萃取(20ml×3)三次,合并乙酸乙酯层,用饱和食盐水洗涤两次,然后用无水硫酸镁干燥,抽滤,滤液浓缩至干得粗品。粗品用丙酮溶解后拌硅胶干法上样,进行硅胶柱色谱纯化,石油醚-丙酮(体积比5∶1)洗脱,收集洗脱液,浓缩得白色固体,用丙酮重结晶得无色透明针状晶体233mg,即为化合物(I-1),收率83.1%。熔点:131-134℃,IR(KBr,cm-1):3474,2984,2955,2875,2853,1723,1693,1647,1446,1385,1317,1240,1172,1097,1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.05(s,1H,17-H),5.44(s,1H,17-H),5.04-4.97(m,1H,COOCH(CH 3)2),2.53(d,1H,J=15Hz,14-H),2.19(dd,1H,J=5Hz,J=5Hz,14-H),1.26(dd,6H,J=10Hz,J=5Hz,COOCH(CH 3)2),1.19(s,3H,18-CH3),0.96(s,3H,20-CH3),1.96-1.78(m,9H),1.48-1.45(m,4H),1.22-1.15(m,2H),1.03-1.00(m,1H),0.87-0.81(m,1H),13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:208.27,177.25,151.53,114.66,77.22,65.88,56.12,55.16,50.29,44.72,43.85,40.08,39.94,39.17,37.89,32.90,28.77,21.91,20.72,20.09,18.86,15.48,10.69.
实施例4:制备ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸仲丁酯(I-2)
以1.5mmol 2-溴代丁烷代替实施例3中的溴代异丙烷,其他操作同实施例3,收率80.2%。熔点:105-106℃,IR(KBr,cm-1):3481,2956,28712854,1724,1694,1647,1446,1378,1319,1239,1172,1106,1084,1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.04(s,1H,17-H),5.44(s,1H,17-H),4.86-4.81(m,1H,COOCHCH3CH2CH3),2.53(d,1H,J=10Hz,14-H),2.20(dd,1H,J=5Hz,J=5Hz,14-H),1.24-1.19(m,8H,18-CH3,COOCHCH 3CH 2CH3),0.95-0.91(m,6H,COOCHCH3CH2CH 3,20-CH 3),1.99-1.74(m,4H),1.85-1.77(m,5H),1.67-1.62(m,2H),1.50-1.47(m,1H),1.48-1.42(m,4H),0.86-0.81(m,1H),13C-NMR(125MHz,CDCl3).δppm:208.51,176.73,151.46,114.83,71.95,55.98,55.18,50.23,44.70,43.98,40.19,39.09,37.83,32.94,32.91,29.07,28.89,28.70,20.72,20.05,19.29,18.85,15.88,9.73。
实施例5:制备ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溴代乙酯(I-3)
称取230mg(4mmol)KOH于50ml圆底烧瓶,并加入10ml DMSO,搅拌约5分钟至完全溶解,然后向反应体系中加入实施例1方法制备的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸332mg(1mmol),搅拌约20分钟至全部溶解后,用移液管移取0.26ml(3mmol)1,2-二溴乙烷,升温至45℃,反应12小时,加入30ml水,用乙酸乙酯萃取(20ml×3)三次,合并乙酸乙酯层,用饱和食盐水洗涤两次,然后用无水硫酸镁干燥,抽滤,滤液浓缩至干,得黄色粘稠状粗品,粗品用丙酮溶解结晶,得浅黄色固体。浅黄色固体用丙酮溶解后拌硅胶干法上样,硅胶柱色谱纯化,石油醚-丙酮(5∶1)洗脱,浓缩得白色固体即为化合物(I-3),用丙酮重结晶得白色固体360mg,收率为82.0%。熔点:143-146℃.IR(KBr,cm-1):3482,2956,1724,1701,1647,1446,1386,1318,1291,1257,1232,1159,1103,1041.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.04(s,1H,17-H),5.43(s,1H,17-H),4.40-4.37(m,2H,COOCH2),3.56(t,2H,J=10Hz,CH2CH 2),1.23(s,3H,18-CH3),0.95(s,3H,20-CH3),2.53(d,1H,J=15Hz,14-H),2.20(d,1H,J=15Hz,5-H),2.05(s,1H),1.99-1.95(m,3H),1.94-1.82(m,4H),1.60(s,1H),1.49-1.43(m,3H),1.27-1.25(m,2H),1.22-1.18(m,2H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:208.39,176.99,151.44,115.42,77.25,64.01,56.07,55.16,50.20,44.69,43.94,40.10,39.81,39.09,37.82,32.84,29.00,28.78,20.73,20.09,18.76,15.51.
实施例6:制备ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溴代丙酯(I-4)
以3mmol 1,3-二溴丙烷代替实施例5中的1,2-二溴乙烷,其他操作同实施例5,收率为81.6%。熔点:131-133℃.IR(KBr,cm-1):3469,2951,2929,2849,1722,1692,1644,1469,1384,1253,1236,1164,1103,1083.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.05(s,1H,17-H),5.44(s,1H,17-H),4.29-4.13(m,2H,COOCH2),3.51(t,2H,CH2CH 2Br),2.53(d,1H,J=15Hz,14-H),1.89-1.81(m,2H,CH2CH2CH 2Br),1.22(s,3H,18-CH3),0.93(s,3H,20-CH3),2.22-2.17(m,3H),2.00-1.94(m,3H),1.81-1.75(m,1H),1.65(s,3H),1.50-1.45(m,4H),1.26(s,1H),1.20-1.17(m,1H),1.07-1.01(m,1H),0.88-0.82(m,1H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:208.36,177.07,151.44,114.92,76.78,61.89,56.08,55.14,50.24,44.73,43.88,40.07,39.84,39.13,37.84,32.86,31.41,29.64,28.80,20.73,20.12,18.87,15.50.ESI-MS:453[M]+.
实施例7:制备ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溴代异丙酯(I-5)
以3mmol 1,2-二溴丙烷代替实施例5中的1,2-二溴乙烷,其他操作同实施例5,收率为83.9%。熔点:130-133℃.IR(KBr,cm-1):3485,2954,2921,2853,1725,1701,1645,1446,1384,1319,1254,1165,1102,1083.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.04(s,1H,17-H),5.44(s,1H,17-H),4.32-4.13(m,2H,COOCH2),2.57-2.52(m,1H,COOCH2CHBr),2.20(dd,1H,J=15Hz,J=5Hz,14-H),0.96(s,3H,20-CH3),1.97-1.94(m,3H),1.89-1.84(m,4H),1.83-1.74(m,4H),1.50-1.46(m,4H),1.38-1.34(m,1H),1.27-1.20(m,6H,CHBrCH 3,18-CH3),1.09-1.02(m,1H),0.89-0.82(m,1H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:208.41,176.93,151.48,114.88,69.33,56.13,55.19,50.24,46.01,44.71,44.00,40.13,39.86,39.13,37.87,32.89,29.71,28.95,28.80,20.76,20.14,18.81,15.59.
实施例8:制备ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溴代丁酯(I-6)
以3mmol 1,4-二溴丁烷代替实施例5中的1,2-二溴乙烷,其他操作同实施例5,收率为83.6%。熔点:126-128℃.IR(KBr,cm-1):3476,2954,2870,1726,1694,1645,1446,1384,1320,1237,1165,1104,1083.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.04(s,1H,17-H),5.44(s,1H,17-H),4.14-4.03(m,2H,COOCH2),3.51(t,2H,CH2CH 2Br),2.53(d,1H,J=10Hz,14-H),2.18(dd,1H,J=5Hz,J=5Hz,14-H),1.21(s,3H,18-CH3),0.92(s,3H,20-CH 3 ),1.99-1.95(m,6H),1.85-1.77(m,8H),1.51-1.42(m,4H),1.20-1.17(m,1H),1.06-1.00(m,1H),0.87-0.81(m,1H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:208.39,177.22,151.40,114.91,78.97,63.24,56.02,55.12,50.21,44.71,43.83,40.04,39.83,39.09,37.82,32.97,32.83,29.55,28.81,27.24,20.71,20.12,18.84,15.51..
实施例9:制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸乙酯(I-7)
称取280mg(0.75mmol)实施例2方法制备的ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溶于10mlDMF,加入无水碳酸钾430mg(3.1mmol),用微量进样器向反应体系中加入溴乙烷0.11ml(1.5mmol),催化量碘化钾15mg(0.09mmol),40℃下连续反应8小时。冷却至室温,加入30ml水,用乙酸乙酯萃取(20ml×3)三次,合并乙酸乙酯层,用饱和食盐水洗涤两次,然后用无水硫酸镁干燥,抽滤,滤液浓缩至干得黄色油状物,黄色油状物用丙酮溶解后拌硅胶干法上样,石油醚-丙酮(12∶1)洗脱,浓缩得浅黄色油状物242mg,收率80.1%。IR(KBr,cm-1):3448,2929,1719,1637,1560,1458,1384,1231,1155,1042.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.06(s,1H,17-H),5.39(s,1H,17-H),4.16-4.06(m,2H,COOCH2),3.12(d,1H,J=10Hz,5-H),2.57(t,3H,J=15Hz,CH2CH3),2.02(s,3H,COCH3),1.43(s,3H,18-CH3),0.98(s,3H,20-CH3),1.96-1.75(m,8H),1.61(s,3H),1.47-1.26(m,3H),1.19-0.98(m,3H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:207.00,177.15,169.75,147.92,115.77,84.46,60.08,56.06,54.96,50.32,43.67,40.37,39.97,39.91,37.85,35.58,32.81,28.75,22.04,20.31,19.99,18.83,15.39,14.13.
实施例10:制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸丙酯(I-8)
以1.5mmol1-溴丙烷代替实施例9中的溴乙烷,其他操作同实施例9,收率82.4%。IR(KBr,cm-1):3418,2959,2874,1728,1650,1463,1383,1367,1334,1227,1158,1076,1042.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.06(s,1H,17-H),5.39(s,1H,17-H),4.08-3.93(m,2H,COOCH2),3.11(d,1H,J=10Hz,5-H),2.56(dd,1H,J=10Hz,J=5Hz,14-H),2.19(d,1H,J=15Hz,14-H),2.08(s,3H,COCH3),0.98(t,3H,J=3.3Hz,CH2CH3),1.70-1.65(m,2H,CH2CH 2),1.20(s,3H,18-CH3),0.96(s,3H,20-CH3),1.94-1.78(m,5H),1.59(s,4H),1.47-1.44(m,2H),1.28-1.20(m,1H),1.17-1.14(m,2H),0.85-0.79(m,1H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:207.01,177.27,169.74,147.91,115.78,84.45,65.91,56.07,54.96,50.31,43.78,40.34,39.95,39.91,37.86,35.59,32.81,28.80,22.05,21.91,20.32,20.00,18.84,15.34,10.72.
实施例11:制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸异丙酯(I-9)
以1.5mmol溴代异丙烷代替实施例9中的溴乙烷,其他操作同实施例9,收率80.8%。IR(KBr,cm-1):2956,2873,1740,1716,1464,1383,1370,1234,1180,1161,1108,1076,1042.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.06(s,1H,17-H),5.38(s,1H,17-H),5.02-4.94(m,1H,COOCH),3.10(d,1H,J=15Hz,5-H),2.54(dd,1H,J=10Hz,J=5Hz,14-H),2.17(d,1H,J=10Hz,14-H),2.08(s,3H,COCH3),1.18(s,3H,18-CH3),0.99(s,3H,20-CH3),1.26(d,3H,J=10Hz,CHCH 3CH3),1.23(d,3H,J=5Hz,CHCH3CH 3),1.97-1.91(m,2H),1.87-1.82(m,3H),1.80-1.76(m,3H),1.62(s,2H),1.47-1.44(m,3H),1.15-1.13(m,1H),0.85-0.79(m,1H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:207.02,176.54,169.71,147.88,115.75,84.45,67.34,56.04,54.97,50.30,43.70,40.35,40.05,39.95,37.85,35.64,32.86,30.90,22.04,21.85,21.59,20.31,20.01,18.85,15.64.
实施例12:制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸丁酯(I-10)
以1.5mmol溴代正丁烷代替实施例9中的溴乙烷,其他操作同实施例9,收率81.6%。IR(KBr,cm-1):3443,2957,2872,1728,1650,1463,1384,1367,1334,1225,1157,1128.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.07(s,1H,17-H),5.39(s,1H,17-H),4.13-3.96(m,2H,COOCH2),3.11(d,1H,J=10Hz,5-H),2.56(dd,1H,J=10Hz,J=5Hz,14-H),2.18(d,1H,J=15Hz,14-H),2.08(s,3H,COCH3),1.19(s,3H,18-CH3),0.97(t,3H,J=6.0Hz,CH2CH 3),0.93(s,3H,20-CH3),1.96-1.91(m,2H),1.87-1.78(m,6H),1.63-1.62(m,4H),1.49-1.40(m,4H),1.18-1.14(m,2H),1.01-0.98(m,1H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:206.99,177.24,169.71,147.91,115.75,84.44,64.06,56.08,54.95,50.30,43.76,40.33,39.93,37.84,35.59,32.80,30.54,28.79,22.03,20.31,19.98,19.37,18.84,15.33,13.67.
实施例13:制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸异丁酯(I-11)
以1.5mmol溴代异丁烷代替实施例9中的溴乙烷,其他操作同实施例9,收率80.2%。IR(KBr,cm-1):3434,2959,1728,1649,1468,1368,1226,1157,1043.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.07(s,1H,17-H),5.39(s,1H,17-H),3.92-3.74(m,2H,COOCH2),3.11(d,1H,J=10Hz,5-H),2.55(dd,1H,J=5Hz,J=10Hz,14-H),2.19(d,1H,J=15Hz,14-H),2.08(s,3H,COCH3),1.21(s,3H,18-CH3),0.98(s,3H,20-CH3),0.96(d,6H,J=5.0Hz,CH(CH 3)2),1.97-1.94(m,3H),1.86-1.79(m,5H),1.63(s,2H),1.49-1.44(m,2H),1.18-1.14(m,2H),1.02-0.99(m,1H),0.87-1.79(m,1H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:207.00,177.26,169.71,147.90,115.76,84.44,70.58,56.10,54.96,50.29,43.86,40.30,39.93,39.91,37.86,35.60,32.80,28.82,27.66,22.03,20.31,20.03,19.41,19.31,18.84,15.30.
实施例14:制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸苄酯(I-12)
以1.5mmol溴苄代替实施例9中的溴乙烷,其他操作同实施例9,收率82.7%。IR (KBr,cm-1):3448,2955,2873,1725,1685,1656,1458,1384,1368,1247,1226,1147,1042.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:7.42-7.28(m,5H),6.07(s,1H,17-H),5.40(s,1H,17-H),5.12(dd,2H,J=10Hz,J=10Hz,COOCH2),4.52(s,1H),3.07(d,1H,J=10Hz,5-H),2.55(dd,1H,J=5Hz,J=5Hz,14-H),2.22(d,1H,J=15Hz,14-H),2.10(s,3H,COCH3),1.23(s,3H,18-CH3),0.90(s,3H,20-CH3),1.98-1.90(m,2H),1.87-1.75(m,6H),1.50-1.43(m,3H),1.19-1.16(m,1H),1.07-1.00(m,1H),0.85-0.79(m,1H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:207.09,176.67,169.68,147.89,136.02,129.03,128.79,128.53,128.21,128.11,115.80,84.39,66.06,56.14,54.92,50.24,43.83,40.27,39.93,39.03,37.82,35.55,32.75,28.75,22.07,20.30,20.20,18.82,15.31.
实施例15:制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸-2’-溴代乙酯(I-13)
称取230mg(4mmol)KOH于50ml圆底烧瓶,并加入10ml DMSO,搅拌约5分钟至完全溶解,然后向反应体系中加入实施例2方法制备的ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸332mg(1mmol),搅拌约20分钟至全部溶解后,用移液管移取0.26ml(3mmol)1,2-二溴乙烷,升温至45℃,反应12小时。加入30ml水中,用乙酸乙酯萃取(20ml×3)三次,合并乙酸乙酯层,用饱和食盐水洗涤两次,然后用无水硫酸镁干燥,抽滤,滤液浓缩至干得黄色粘稠状粗品,粗品用丙酮溶解结晶,得浅黄色固体。浅黄色固体用丙酮溶解后拌硅胶干法上样,进行硅胶柱色谱纯化,石油醚-丙酮(12∶1)洗脱,浓缩得白色固体391mg,收率为81.2%。熔点:115-116℃.IR(KBr,cm-1):3444,2954,2873,1733,1698,1650,1455,1384,1368,1333,1261,1232,1177,1157,1061,1040.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.07(s,1H,17-H),5.39(s,1H,17-H),4.45-4.31(m,2H,COOCH2),3.55(t,2H,CH2CH 2Br),3.13(d,1H,J=5Hz,J=5Hz,5-H),2.56(dd,1H,J=10Hz,J=5Hz,14-H),2.20(d,1H,J=15Hz,14-H),2.08(s,3H,COCH3),1.23(s,3H,18-CH3),0.99(s,3H,20-CH3),1.97-1.92(m,2H),1.88-1.78(m,5H),1.59(s,3H),1.51-1.45(m,3H),1.07-1.01(m,1H),0.85-0.82(m,1H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:206.99,176.92,169.73,147.95,115.82,84.44,63.96,56.12,54.97,50.29,43.96,40.38,40.02,39.88,37.84,35.60,32.82,28.96,28.82,22.07,20.37,20.06,18.81,15.46.
实施例16:制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸-3’-溴代丙酯(I-14)
以3mmol 1,3-二溴丙烷代替实施例15中的1,2-二溴乙烷,其他操作同实施例15,收率为80%。熔点:108-110℃.IR(KBr,cm-1):3434,2956,1726,1368,1228,1156,1043.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.08(s,1H,17-H),5.40(s,1H,17-H),4.30-4.10(m,2H,COOCH2),3.51-3.48(m,2H,COOCH2CH2CH 2),3.12(d,1H,J=10Hz,5-H),2.5(dd,1H,J=5Hz,J=10Hz,14-H),2.09(s,3H,COCH3),1.98-1,93(m,2H,COOCH 2CH2CH2),1.21(s,3H,18-CH3),0.97(s,3H,20-CH3),2.22-2.18(m,3H),1.88-1.82(m,3H),1.81-1.76(m,2H),1.64(s,2H),1.50-1.46(m,2H),1.26(s,1H),1.19-1.16(m,1H),1.06-1.00(m,1H),0.86-0.80(m,1H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:206.93,177.00,169.73,147.87,115.87,84.40,61.93,56.06,54.92,50.28,43.83,40.36,39.94,39.84,37.83,35.58,32.78,31.41,29.59,28.80,22.06,20.32,20.02,18.85,15.37.
实施例17:制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸-2’-溴代丙酯(I-15)
以3mmol 1,2-二溴丙烷代替实施例15中的1,2-二溴乙烷,其他操作同实施例15,收率为80.9%。熔点:105-106℃.IR(KBr,cm-1):3436,2956,1726,1449,1368,1230,1155,1042.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.08(s,1H,17-H),5.40(s,1H,17-H),4.35-4.22(m,2H,COOCH2),4.21-4.11(m,1H,COOCH2CHBr),3.13(d,1H,J=5Hz,J=5Hz,5-H),2.56(dd,1H,J=5Hz,J=10Hz,14-H),2.20(d,1H,J=15Hz,14-H),2.09(s,3H,COCH3),1.73(d,3H,CH2CHBrCH3),1.24(s,3H,18-CH3),0.99(s,3H,20-CH3),2.23-2.19(m,1H),1.96-1.83(m,4H),1.73-1.68(m,2H),1.49-1.40(m,5H),1.22-1.17(m,2H),0.94-0.89(m,1H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:207.00,176.75,169.72,147.89,115.82,84.40,69.25,56.07,54.94,50.23,44.92,43.93,40.30,39.96,39.83,37.80,35.57,32.78,28.77,24.67,22.04,20.32,20.03,18.76,15.45.
实施例18:制备ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸-4’-溴代丁酯(I-16)
以3mmol 1,4-二溴丁烷代替实施例15中的1,2-二溴乙烷,其他操作同实施例15,收率为78.3%。熔点:98-100℃.IR(KBr,cm-1):2955,1724,1447,1384,1367,1248,1227,1156,1093,1076,1042.1H-NMR(500MHz,CDCl3)δppm:6.07(s,1H,17-H),5.39(s,1H,17-H),4.15-4.00(m,2H,COOCH2),3.45(t,2H,CH2CH2Br),3.12(d,1H,J=5Hz,5-H),2.56(dd,1H,J=5Hz,J=5Hz,14-H),2.18(d,1H,J=10Hz,14-H),2.08(s,3H,COCH3),1.20(s,3H,18-CH3),0.95(s,3H,20-CH3),1.98-1.94(m,3H),1.85-1.75(m,8H),1.61(s,2H),1.53-1.43(m,3H),1.18-1.15(m,1H),1.04-0.99(m,1H),0.85-0.79(m,1H).13C-NMR(125MHz,CDCl3)δppm:206.94,177.16,169.75,147.94,115.83,84.44,63.25,56.07,54.95,50.30,43.84,40.40,39.96,39.89,37.86,35.57,32.97,32.80,29.58,28.82,27.27,22.06,20.34,20.08,18.86,15.42.
实施例19:抗HepG2细胞肝癌活性测试
测试方法:体外抗肿瘤活性测试方法:
A 原理:活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性噻唑蓝(MTT)还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的甲瓒,用酶联免疫检测仪测定其光吸收值,可间接反映活细胞数量。
B 细胞:HepG2(上海细胞所),人肝癌细胞株。
C 实验步骤
(1)样品的准备:将实施例3~18所制备的化合物(I-1)~(I-16)溶于DMSO配置成40mg/ml母液,与RPMI1640在37℃热水浴中超声促溶解配成母液(1000μg/ml),取500μl母液(1000μg/ml)再加4.5ml的RPMI1640培养液配成5ml 100μg/ml的药物稀释液,获得样品1~样品16,再用RPMI1640培养液将每个样品连续稀释至以下5个浓度:80、40、20、10、5μg/ml进行试验,再根据试验结果,根据不同化合物的活性进行浓度调整。
(2)细胞的培养
取对数生长期HepG2细胞一瓶,弃培养液,以PBS洗涤2次,每次4ml;加入0.25%(w/v)Trypsin-0.53mM EDTA溶液1ml,于37℃培养箱消化约15s,立即弃胰酶溶液,加入RPMI-1640完全培养液4.0ml,用5ml移液枪反复吹打,将细胞从瓶壁上吹打下来,用10mL含质量分数为10%的新生牛血清的RPMI1640培养液配成单细胞悬液。用细胞计数板计数后用RPMI-1640完全培养液稀释成2×105个/ml细胞悬液,取96孔板,每孔加入上述细胞悬液100μL,于体积分数为5%的CO2培养箱中于37℃培养24h,依次加入样品I-1~样品I-16的稀释液,每个样品5个浓度,每个浓度4孔,以不加样品的空白作为对照,于体积分数为5%的CO2培养箱中于37℃继续培养48h,培养终止前2h,每孔加入1mg/ml MTT 100μl,继续温育4h,吸去上清液,每孔加入150μl DMSO,摇匀,用酶标仪(Biorad680,美国biorad伯乐公司)于570nm处测定每个小孔中溶液的OD值,重复3次试验,求出IC50,抗肿瘤活性测试结果见表1所示。
表1:化合物对HepG2的IC50(μg/ml)
按照抗肿瘤活性的评价标准(化合物IC50<10μg/ml则判断样品在体外对肿瘤细胞有杀伤作用),化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、I-12具有显著的抗HepG2肝癌细胞活性。
实施例20:抗HeLa细胞子宫颈癌活性测试
以HeLa人子宫颈癌细胞株(上海细胞所)代替实施例19中的HepG2肝癌细胞株,进行抗肿瘤活性测试,其他操作同实施例19,试验结果如下:
表2:化合物对HeLa的IC50(μg/ml)
按照抗肿瘤活件的评价标准,化合物I-1、I-2、I-5、I-8、I-9、I-10、I-12具有显著的抗HeLa子宫颈癌细胞活性,化合物I-14、I-15、I-16具有较好的抗HeLa子宫颈癌细胞活性,化合物I-13具有一定的抗HeLa子宫颈癌细胞活性。
实施例21:抗k562慢性粒细胞白血病活性测试
以k562慢性粒细胞白血病细胞株(上海细胞所)代替实施例19中的HepG2肝癌细胞株,进行抗肿瘤活性测试,其他操作同实施例19,试验结果如表3所示:
表3:化合物对k562的IC50(μg/ml)
按照抗肿瘤活件的评价标准,化合物I-1、I-2、I-3、I-4、I-5、I-6、I-7、I-8、I-9、I-10、I-11、I-12、I-14、I-15、I-16具有显著的抗k562慢性粒细胞白血病活性,化合物I-13具有较好的抗k562慢性粒细胞白血病活性。
Claims (10)
3.一种制备如权利要求1所述的甜菊醇衍生物的方法,其特征在于所述的方法为,所述的化合物(VIII)与如式(VII)所示的溴代烷烃溶解在有机溶剂中,加入催化剂碘化钾,另加入缚酸剂,在20~50℃温度下连续反应8~12小时,反应液后处理得到式(I)所示的甜菊醇衍生物,所述缚酸剂为无水碳酸钾或KOH;式(VIII)中R1与式(I)中R1相同,式(VII)中R2与式(I)中R2相同,式(I)中R1为H或乙酰基,当R1为H时,R2为异丙基、仲丁基、2-溴乙基、2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基;当R1为乙酰基时,R2为乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、苄基、2-溴乙基、2-溴丙基、3-溴丙基或4-溴丁基;
4.如权利要求3所述的甜菊醇衍生物的制备方法,其特征在于所述的后处理为,反应液加水稀释,过滤,滤液再用乙酸乙酯萃取,取乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤,再用无水硫酸镁干燥、过滤,取滤液浓缩至干,再用丙酮溶解,以体积比5~12∶1的石油醚、丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析,收集洗脱液,浓缩,再用丙酮重结晶,制得式(I)所示的甜菊醇衍生物。
5.如权利要求3所述的甜菊醇衍生物的制备方法,其特征在于所述的有机溶剂为二甲基甲酰胺或二甲基亚砜,所述的有机溶剂的体积用量以式(VIII)所述化合物物质的量计为10~13.3ml/mmol。
6.如权利要求3所述的甜菊醇衍生物的制备方法,其特征在于所述的方法中,式(VIII)所示的化合物与如式(VII)所示的溴代烷烃物质的量比为1∶2~3,式(VIII)所示的化合物与催化剂物质的量比为1∶0.1~0.14;所述式(VIII)所示的化合物和缚酸剂投料物质的量之比为1∶3~6。
7.如权利要求3所述的甜菊醇衍生物的制备方法,其特征在于所述的方法为:所述的化合物(VIII)与如式(VII)所示的溴代烷烃溶解在二甲基甲酰胺中,加入催化剂碘化钾,另加入缚酸剂,在20~50℃温度下连续反应8~12小时,反应液加水稀释,过滤,滤液再用乙酸乙酯萃取,取乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤,再用无水硫酸镁干燥、过滤,取滤液浓缩至干,再用丙酮溶解,以体积比5~12∶1的石油醚丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析,收集洗脱液,浓缩,再用丙酮重结晶,得到式(I)所示的甜菊醇衍生物,所述缚酸剂为无水碳酸钾或KOH;所述的二甲基甲酰胺的体积用量以式(VIII)所述化合物物质的量计为13.3ml/mmol,所述式(VIII)所示的化合物与如式(VII)所示的溴代烷烃物质的量比为1∶2~3,所述式(VIII)所示的化合物和碘化钾、缚酸剂投料物质的量之比为1∶0.12∶3~6。
8.如权利要求3所述的甜菊醇衍生物的制备方法,其特征在于所述的方法按如下步骤进行:
(1)在水中,将甜菊糖用高碘酸钠在室温下进行氧化反应16小时;然后加入氢氧化钾加热回流反应3小时,冷却后以冰醋酸调节pH至5.0,乙醚萃取,乙醚层用无水硫酸镁干燥,过滤,滤液浓缩至干,得甜菊醇,所述的甜菊糖、高碘酸钠、氢氧化钾投料物质的量比为1∶5~6∶100~120,所述的水的体积用量以甜菊糖的质量计为40~45ml/g;
(2)将甜菊醇溶于1,4-二氧六环和水以体积比为1∶1的混合溶剂,加入1,4-叔丁基过氧化氢的甲苯溶液,再加入二氧化硒,于60℃反应5小时,加入水稀释,以氯仿萃取,合并有机相并用无水硫酸镁干燥、过滤,滤液浓缩至干,得15-羟基甜菊醇,所述的甜菊醇、1,4-叔丁基过氧化氢、二氧化硒物质的量比为1∶2.5∶0.32,所述的混合溶剂体积用量以甜菊醇质量计为200ml/g,所述的甲苯体积用量以甜菊醇质量计为2ml/g;
(3)将15-羟基甜菊醇溶于吡啶a,加入三氧化铬的体积比为8∶1的吡啶b、水混合溶剂,在室温下连续搅拌12小时后,加入水稀释,乙醚萃取,合并有机相用无水硫酸镁干燥、过滤,滤液浓缩至干,浓缩物用丙酮重结晶得ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸,所述的15-羟基甜菊醇与三氧化铬物质的量比为1∶3,所述的吡啶a体积用量以15-羟基甜菊醇质量计为70ml/g,所述的吡啶b、水混合溶剂的体积用量以15-羟基甜菊醇质量计为63ml/g;
(4)将ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸溶于吡啶c、和乙酸酐中,室温下搅拌反应四天,减压蒸去乙酸酐和吡啶c,得棕褐色油状物,硅胶柱色谱纯化,以体积比为1∶1的石油醚-丙酮洗脱,收集洗脱液得ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸,所述的ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸与乙酸酐物质的量比1∶40,所述的吡啶c的体积用量以ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸计为27ml/g;
(5)将ent-13-羟基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸(V)或ent-13-乙酰氧基-15-羰基贝壳杉烯-19-酸(VI)溶于二甲基甲酰胺中,加入催化剂碘化钾、溴代烷烃和缚酸剂,在40~45℃温度下连续反应8~12小时,反应液加水稀释,过滤,滤液用乙酸乙酯萃取,取乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤,再用无水硫酸镁干燥、过滤,取滤液浓缩至干,再用丙酮溶解,以体积比5∶1的石油醚丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析,收集洗脱液,浓缩,再用丙酮重结晶,得式(I)所示化合物;所述二甲基甲酰胺的体积用量以化合物(V)或化合物(VI)摩尔质量计为13.3ml/mmol;所述式(V)或(VI)所示的化合物和碘化钾投料物质的量之比为1∶0.12,所述缚酸剂为无水碳酸钾时,所述的化合物(V)或化合物(VI)、碳酸钾、溴代烷烃的物质的量比为1∶4∶2,所述缚酸剂为氢氧化钾时,所述的化合物(V)或化合物(VI)、氢氧化钾、溴代烷烃的量比为1∶4∶3;
9.一种如权利要求1所述的甜菊醇衍生物的制备方法,其特征在于所述的方法为:所述的化合物(VIII)与如式(VII)所示的溴代烷烃溶解在二甲基亚砜中,加入缚酸剂,在20~50℃温度下连续反应8~12小时,反应液加水稀释,过滤,滤液再用乙酸乙酯萃取,取乙酸乙酯层用饱和食盐水洗涤,再用无水硫酸镁干燥、过滤,取滤液浓缩至干,再用丙酮溶解,以体积比5~12∶1的石油醚丙酮混合液为洗脱剂进行硅胶柱层析,收集洗脱液,浓缩,再用丙酮重结晶,得到式(I)所示的甜菊醇衍生物,所述缚酸剂为无水碳酸钾或KOH;所述的二甲基亚砜的体积用量以式(VIII)所述化合物物质的量计为10ml/mmol,所述式(VIII)所示的化合物与如式(VII)所示的溴代烷烃物质的量比为1∶2~3,所述式(VIII)所示的化合物和缚酸剂投料物质的量之比为1∶3~6。
10.如权利要求1所述的甜菊醇衍生物在制备制疗抗HepG2细胞株导致的肝癌、HeLa细胞株导致的子宫颈癌、k562细胞株导致的慢性粒细胞白血病药物中的应用。
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