CN117070652A - 用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组以及鉴定方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了提供一种用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组以及鉴定方法。该探针组可以用于鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点的基因型,通过确定待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点的基因型,可以实现鉴定或辅助鉴定美洲狼尾草籽粒产量变化以及筛选或辅助筛选具有不同籽粒产量特征的美洲狼尾草种质;还可以鉴定或辅助鉴定美洲狼尾草生殖生长过程相关的单核苷酸多态性。适合在生物技术领域推广运用。

Description

用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组以及鉴定方法
技术领域
本发明属于生物技术领域,具体涉及一种用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组以及鉴定方法。
背景技术
美洲狼尾草为重要的暖季型一年生禾本科牧草,也是世界上六大禾谷类作物之一。它具有高蛋白、高籽实、产量高的特点。此外,美洲狼尾草的抗逆性极强,能在炎热干旱等土地贫瘠地区正常生长结实,在全球的种植面积约为2900万hm2(2017年)。其在我国则是重要的饲草,是草食家畜和食草淡水鱼类的优质饲料和青饵料。以美洲狼尾草作为亲本的杂交狼尾草,普遍种植于南方各省,是单产最高的多年生牧草。随着人民生活水平不断提高,我国牛羊肉、牛奶等草畜产品消费大幅增加。作为畜牧业的重要基础,牧草的需求量也相应地大幅增加。然而,我国牧草产业发展远落后于发达国家,每年都需要从国外大量进口草种和干草,才能满足需求。由于牧草严重短缺,有的地方甚至出现了把灌浆期小麦用作青贮饲料的极端现象,导致“人畜争粮”矛盾出现。因此,提高美洲狼尾草的籽粒产量追求更高的产量,是解决此矛盾的迫切需求。目前决定籽粒产量的重要三因素包括穗粒数、亩穗数和粒重。其中,穗粒数作为禾本科牧草产量的重要决定性因素之一,已成为当下产量性状广泛研究的焦点。
近年来,除了“人畜争粮”矛盾问题外,全球干旱胁迫也日益严峻。而植物在干旱胁迫条件下会导致减产和其他一系列性状。在这种条件下,如何保障植物在干旱条件下籽粒产量亦是当前牧草育种亟待解决的问题。目前,解析植物调控穗粒数及干旱胁迫对穗粒数影响的相关研究逐渐增多,这些研究为高产牧草新品种的选育及草地畜牧业稳态持续发展提供了有力支撑。但随着相关研究的大量开展,如何快速高效地鉴定植物籽粒产量相关性状成为当前科学研究的限速问题。
目前,随着大量分子标记的开发以及生物信息学的迅猛发展,应用关联分析方法发掘植物数量性状基因已成为目前国际植物基因组学研究的热点之一。关联分析是以连锁不平衡(linkage disequilibrium,LD)为基础的,连锁不平衡是不同基因座位上等位基因的非随机组合,是针对表型和基因型的变异进行直接分析,进一步将某些基因定位的方法。但是该方法具有一定的缺点,因为其主要是通过对单一的参考基因组和单核苷酸多态性(SNP)进行分析。植物种内多态性高,单一个体的参考基因组不能涵盖该物种的所有遗传信息。如果仅使用单一的参考基因组进行遗传驯化变异等的研究,可能会丢失很多有意的遗传密码信息,因为很多特有的序列都不在参考基因组上。同时,随着基因组测序技术的不断发展,使得泛基因组(Pan-genome)的应用逐渐广泛。泛基因组即某一物种全部基因的总称,在研究同一物种中差异巨大的不同亚种或者变种具有巨大的优势。泛基因组除了可以提供SNP(单核苷酸多态性,SNP),还提供大量的SV(基因组结构性变异,Structural variation,简称SV)信息,SV对基因组的影响比SNP大,更能用于解释农艺性状群体多样性的特征。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组。
本发明解决其技术问题所采用的技术方案为:该用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组,包括探针1和探针2,所述探针1采用如下方法得到:首先,收集美洲狼尾草的全基因组重测序数据集,然后筛选PGLA1540130位点核苷酸序列如序列表SEQ ID No:1所示的基因型并人工合成探针1,所述探针探针2采用如下方法得到:首先,收集美洲狼尾草的全基因组SV数据集,然后筛选PGLA1540130位点核苷酸序列如序列表SEQ ID No:2所示的基因型并人工合成探针2。
进一步的是,所述PGLA1540130位点位于5号染色体,所述5号染色体的位置为81,045,297。
本发明还提供了一种用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的鉴定方法,其鉴定方法包括以下步骤:
1)、提取待鉴定美洲狼尾草品种基因组DNA;
2)、加入用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组,进行等位基因特异性延伸和连接酶连接,得到一段包含PGLA1540130位点和地址序列的片段;
3)、将步骤2)得到的片段进行PCR扩增后与芯片进行杂交;
4)、芯片扫描,利用软件根据两种荧光颜色判读并输出分型结果,从而确定待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点的基因型,若待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点基因型为SEQ ID No:1,则表明该美洲狼尾草品种在正常生长条件下具有高籽粒产量的特性、在干旱生长条件下会导致其籽粒产量降低的特性,若待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点基因型为SEQ ID No:2,则表明该美洲狼尾草品种在正常生长条件下具有低籽粒产量的特性、在干旱生长条件下籽粒产量升高的特性;所述正常生长条件是指正常灌溉,所述干旱条件是指早期干旱胁迫和\或晚期干旱胁迫。
进一步的是,在步骤3)中,所述PCR扩增的体系中具有Cy3标记的dATP、Cy5标记的dGTP、dCTP和dTTP。
本发明的有益效果在于:本发明所述的用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组可以用于鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点的基因型,通过确定待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点的基因型,若待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点基因型为SEQ ID No:1,则表明该美洲狼尾草品种在正常生长条件下具有高籽粒产量的特性、在干旱生长条件下会导致其籽粒产量降低的特性,若待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点基因型为SEQ ID No:2,则表明该美洲狼尾草品种在正常生长条件下具有低籽粒产量的特性、在干旱生长条件下籽粒产量升高的特性;所述正常生长条件是指正常灌溉,所述干旱条件是指早期干旱胁迫和\或晚期干旱胁迫,可以实现鉴定或辅助鉴定美洲狼尾草籽粒产量变化以及筛选或辅助筛选具有不同籽粒产量特征的美洲狼尾草种质;还可以鉴定或辅助鉴定美洲狼尾草生殖生长过程相关的单核苷酸多态性。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明。
该用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组,包括探针1和探针2,所述探针1采用如下方法得到:首先,收集美洲狼尾草的全基因组SV数据集,然后筛选PGLA1540130位点核苷酸序列如序列表SEQ ID No:1所示的基因型并人工合成探针1,所述探针探针2采用如下方法得到:首先,收集美洲狼尾草的全基因组SV数据集,然后筛选PGLA1540130位点核苷酸序列如序列表SEQ ID No:2所示的基因型并人工合成探针2。
PGLA1540130变异位点位于5号染色体,基因PMA5G03691.1附近,属于大片段插入变异,其基本信息见表1;
表1、PGLA1540130变异位点基本信息
基于PGLA1540130位点基因型为SEQ ID No:1的核苷酸序列为:C
基于PGLA1540130位点基因型为SEQ ID No:2的核苷酸序列如下所示:
CTGTTGGGGAATTCAGGAAAACCCGTCACCCTCGAAACGTCGAAGTTTTAACGGAATTCTCAAAGCATGTTTTTCAGGAGCAGGGAATTCGCGATTCTCGGAAGTCTGGAACCTGCGGAGTCTCGAATTCGCGAATGTGCAGAGTTCGGGAATCTTGATTCGGTGAGGAGGCGGAGTCATGAACATGCGGAAGCCCGGAATCTCAACTGTTGATGGTCCGAACTTCGGGGATTTGCCGATTCGGGAATCTGATGAAAACTCTGTTCGGGACTCAGGCGCAAGGACACGCACGAACCTGCTGGGAAGCAAGAGCCACTTCGGGAATCTGTAGAAGACCTGGTTCAGGAATTTCGGGCGAAGACATTCATAAATCACGGGAGAAGCAAAGTCAAAGTTGTAGTCCCAAAAAGTCCGGGTTTAGAGTGTGAACTAGTGGCAGACTTGTAAATGTGCAAGGGGGGAAAAGACATTCTTGTGTGTGTTCACATTAAGAATATTCTCCGAGCCCGAGGGTGTTATCGGAATGTAAAAGTCCCTTCGTCTCCCTATAAAAGGGGGCGCGAGGGCACGTGTAAACGGATTCAGACTTTTTTGGAACTTGTGCTATTCGCAGAGGGAATCACAGTCTCTTTGCGCTCTAACTTTGTACTTGAACGTGTTGAGAACTCATACTTGTGTTAGGGAGGTTATCCGAATTTTTCGGGTATTCCCCAACAG
本发明还提供了一种用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的鉴定方法,其鉴定方法包括以下步骤:
1)、提取待鉴定美洲狼尾草品种基因组DNA;
2)、加入用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组,进行等位基因特异性延伸和连接酶连接,得到一段包含PGLA1540130位点和地址序列的片段;
3)、将步骤2)得到的片段进行PCR扩增后与芯片进行杂交;所述PCR扩增的体系中具有Cy3标记的dATP、Cy5标记的dGTP、dCTP和dTTP;所述芯片为美国Illumina公司产品,芯片上具有微珠,微珠表面连接有所述地址序列的互补序列;
4)、芯片扫描,利用软件根据两种荧光颜色判读并输出分型结果,从而确定待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点的基因型,若待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点基因型为SEQ ID No:1,则表明该美洲狼尾草品种在正常生长条件下具有高籽粒产量的特性、在干旱生长条件下会导致其籽粒产量降低的特性,若待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点基因型为SEQ ID No:2,则表明该美洲狼尾草品种在正常生长条件下具有低籽粒产量的特性、在干旱生长条件下籽粒产量提升的特性;所述正常生长条件是指正常灌溉,所述干旱条件是指早期干旱胁迫和\或晚期干旱胁迫。
实施例1
采用上述用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的鉴定方法对在正常灌溉条件下生长的150个美洲狼尾草种质基于PGLA1540130位点的基因型进行鉴定,其鉴定结果如下表2所示:
表2
由表2可知,150个美洲狼尾草种质中有88个品种基PGLA1540130位点的基因型为SEQ ID No:1型,这88个种质平均籽粒产量指数为1562.80;有62个品种基于PGLA1540130位点的基因型为SEQ ID No:2型,平均籽粒产量指数为1095.11,显著性检验P<0.05。
实施例2
采用上述用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的鉴定方法对在早期干旱胁迫和晚期干旱胁迫条件下生长的150个美洲狼尾草种质基于PGLA1540130位点的基因型进行鉴定,其鉴定结果如下表3所示:
表3
由表3结果显示,150个美洲狼尾草种质中有88个品种基PGLA1540130位点的基因型为SEQ ID No:1型,这88个种质在干旱早期平均籽粒产量指数为1226.47,在干旱晚期平均籽粒产量指数为1079.54,整个生长发育时期平均籽粒产量指数为1153.01;有62个种质基于PGLA1540130位点的基因型为SEQ ID No:2型,在干旱早期平均籽粒产量指数为1318.76,在干旱晚期平均籽粒产量指数为1246.58,整个生长发育时期平均籽粒产量指数为1282.67。干旱处理条件下基因型为SEQ ID No:2的品种籽粒产量更高。
由表2和表3可知,若待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点基因型为SEQIDNo:1,则表明该美洲狼尾草品种在正常生长条件下具有高籽粒产量的特性、在干旱生长条件下会导致其籽粒产量降低的特性,若待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点基因型为SEQ ID No:2,则表明该美洲狼尾草品种在正常生长条件下具有低籽粒产量的特性、在干旱生长条件下籽粒产量提升的特性;所述正常生长条件是指正常灌溉,所述干旱条件是指早期干旱胁迫和\或晚期干旱胁迫。

Claims (4)

1.用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组,其特征在于:包括探针1和探针2,所述探针1采用如下方法得到:首先,收集美洲狼尾草的全基因组重测序数据集,然后筛选PGLA1540130位点核苷酸序列如序列表SEQ ID No:1所示的基因型并人工合成探针1,所述探针探针2采用如下方法得到:首先,收集美洲狼尾草的全基因组SV数据集,然后筛选PGLA1540130位点核苷酸序列如序列表SEQ ID No:2所示的基因型并人工合成探针2。
2.如权利要求1所述的用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组,其特征在于:所述PGLA1540130位点位于5号染色体,所述5号染色体的位置为81,045,297。
3.用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的鉴定方法,其特征在于包括以下步骤:
1)、提取待鉴定美洲狼尾草品种基因组DNA;
2)、加入用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的探针组,进行等位基因特异性延伸和连接酶连接,得到一段包含PGLA1540130位点和地址序列的片段;
3)、将步骤2)得到的片段进行PCR扩增后与芯片进行杂交;
4)、芯片扫描,利用软件根据两种荧光颜色判读并输出分型结果,从而确定待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点的基因型,若待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点基因型为SEQ ID No:1,则表明该美洲狼尾草品种在正常生长条件下具有高籽粒产量的特性、在干旱生长条件下会导致其籽粒产量降低的特性,若待鉴定美洲狼尾草品种基于PGLA1540130位点基因型为SEQ ID No:2,则表明该美洲狼尾草品种在正常生长条件下具有低籽粒产量的特性、在干旱生长条件下籽粒产量升高的特性;所述正常生长条件是指正常灌溉,所述干旱条件是指早期干旱胁迫和\或晚期干旱胁迫。
4.如权利要求1所述的用于鉴定美洲狼尾草籽粒产量的鉴定方法,其特征在于:在步骤3)中,所述PCR扩增的体系中具有Cy3标记的dATP、Cy5标记的dGTP、dCTP和dTTP。
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