CN111893196B

CN111893196B - 与苏姜猪生产性状相关的mc4r基因分子标记及其制备方法和应用

Info

Publication number: CN111893196B
Application number: CN202010972799.6A
Authority: CN
Inventors: 刘林雨; 徐盼; 马政; 仲德; 赵旭庭; 周春宝; 陶勇; 倪黎纲
Original assignee: Jiangsu Agri Animal Husbandry Vocational College
Current assignee: Jiangsu Agri Animal Husbandry Vocational College
Priority date: 2020-09-16
Filing date: 2020-09-16
Publication date: 2023-03-14
Anticipated expiration: 2040-09-16
Also published as: CN111893196A

Abstract

本发明公开了与苏姜猪生产性状相关的MC4R基因分子标记，该分子标记的位点选自如下位点的至少一种：(1)猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773885位碱基（rs335628164）由C到T的位点突变；(2)猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773971位碱基（rs81221063）由A到T的位点突变；上述二个位点完全连锁。关联分析确定2个分子标记与苏姜猪生产性状呈显著相关，可以用于苏姜猪分子标记辅助选择育种中。

Description

与苏姜猪生产性状相关的MC4R基因分子标记及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于猪标记辅助选择(MAS)技术及遗传育种领域，涉及到可用于苏姜猪生产性状标记辅助选择的分子标记的制备与应用。

背景技术

受非洲猪瘟的影响，国内生猪存栏量不足，严重影响猪肉的供给，尤其是优质猪肉的供给。优质种猪则是优质猪肉的保障。传统的育种方法在生产性状等低遗传力性状上收效甚微。随着分子生物学技术的发展，遗传力低、表型值难以测定或测定费用高的性状可以通过分子标记辅助选择(marker-assisted selection,MAS)来提高猪育种选择效率和准确性。

黑素皮质素受体4(melanocortin 4 receptors，MC4R)是运输Leptin蛋白的载体，参与控制食欲、体重、能量代谢等生理过程，其主要功能是在维持能量的动态平衡的过程中进行信号传导。MC4R蛋白是Leptin调节采食量效应降低和刺激下丘脑神经原活性调控通路的下游物质，对调控能量平衡有着至关重要的作用。MC4R可与大脑组织释放的内源配体α-促黑激素(α-MSH)相互作用，促进体重的降低。已有相关文献报道背膘厚度性状与MC4R基因密切相关，猪MC4R基因第7跨膜结构功能域内具有一个高度的同源保守片段，当错义突变(G/A)发生时可造成Taq I酶切位点的变化，从而导致猪MC4R蛋白的第298位氨基酸由天冬氨酸变成天冬酰胺(Asp298Asn)，因此，Asp298Asn错义突变可适用于以西方猪种为杂交亲本的商品猪品种背膘厚的分子标记。苏姜猪是以姜曲海猪、枫泾猪为母本，杜洛克猪为父本，通过继代选育而成的新品种，肉质指标达到了优质猪肉的要求。开发与苏姜猪生产性状相关的MC4R基因分子标记并应用于优质苏姜猪的选育，对满足人们对优质猪肉的需求，加快我国优质种猪的培育具有重要的促进作用。

发明内容

发明目的：本发明的目的在于开发可应用于苏姜猪生产性状辅助选育的分子标记，加速生产性状遗传改良进程。

首先从影响猪生产性状的重要候选基因MC4R中鉴定出潜在的可影响苏姜猪生产性状的遗传变异位点，然后建立相应遗传变异位点的简便的分子标记检测方法，并对分子标记的应用效果在苏姜猪群中进行了验证，结果表明所开发的分子标记可应用于苏姜猪体重、体高和胸围中至少一种性状的分子标记辅助选育。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种与苏姜猪生产性状相关的MC4R基因分子标记，所述分子标记位于猪1号染色体上的MC4R基因的核苷酸序列上，所述分子标记的位点选自如下位点的至少一种：

(1)猪参考基因组11.1版本序列1号染色体序列第160773885位碱基(rs335628164)由C到T的位点突变，对应于SEQ ID NO:2所示序列中的第425位碱基处，同时对应于SEQ ID NO:1的第2473位碱基；

(2)猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773971位碱基(rs81221063)由A到T的位点突变，对应于SEQ ID NO:2所示序列中的第511位碱基处，对应于SEQ ID NO:1所示序列中2559位碱基处。

其中，SEQ ID NO:1是基因全长序列加上600bp 5'侧翼序列和3'侧翼序列；SEQ IDNO:2(1181bp)是引物MC4R-3F与MC4R-3R扩增出的序列，且上述二个位点完全连锁，即检测1个突变，另外1个突变的情况可以推导出来，且任何1个突变对生产性状的影响都一致，即rs335628164为C时rs81221063必为A。图3为本发明二个位点的LD模式图分析图，其中，2个SNP处于完全连锁状态(r²＝1)。

其中，所述苏姜猪生产性状包括体重、体高和胸围性状中的至少一种。

本发明进一步提出了用于检测上述的分子标记的引物对：

检测猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773885位碱基(rs335628164)C>T突变和第160773971位碱基(rs81221063)A>T突变的正、反向扩增测序引物的DNA序列如下所示：

正向引物(MC4R-3F)：AGCCAAGAACTGAGGAAAACC

反向引物(MC4R-3R)：CTGAAAATACCTGTGCGATAGA；

本发明还提出了一种与苏姜猪生产性状相关的MC4R基因分子标记的制备方法：

采用引物MC4R-3F与MC4R-3R PCR扩增包含猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773885位碱基(rs335628164)C>T突变和160773971位碱基(rs81221063)A>T突变的基因片段，然后采用测序技术进行基因分型。

本发明进一步提出了上述的MC4R基因分子标记、引物对及制备方法在苏姜猪生产性状辅助选育中的应用，所述的苏姜猪生产性状为体重、体高和胸围中的至少一种性状。

具体地，本发明提供了一种苏姜猪遗传改良的方法，通过继代选育猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773885位碱基(rs335628164)位点的CC型个体，淘汰该位点的CT型和TT型个体；和/或继代选育猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773971位碱基(rs81221063)位点的AA型的个体，淘汰该位点AT型和TT型的个体。

有益效果：本发明从猪MC4R基因鉴定出了2个有效的分子标记位点，其中第1个分子标记位于猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773885位碱基(rs335628164)C/T突变位点上，第2个分子标记位于猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773971位碱基(rs81221063)A/T突变位点上，针对上述2个SNP建立了一种方便可靠的多态性检测方法。通过将上述2个SNP位点与苏姜猪生产性状进行关联分析，发现其基因型对苏姜猪的体重、体高和胸围有显著影响(P<0.05)，使得上述2个SNP可以用于苏姜猪生产性状的标记辅助选择育种中。

附图说明

图1为本发明中MC4R-3F F与MC4R-3R引物扩增含猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773885位碱基(rs335628164)C/T突变位点的基因片段测序结果图，其中：箭头所指处为处于猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773885位碱基(rs335628164)C/T突变位点，自上至下分别为CC、CT和TT基因型的测序结果；

图2为本发明中MC4R-3F F与MC4R-3R引物扩增含猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773971位碱基(rs81221063)A/T突变位点的基因片段测序结果图，其中：箭头所指处为处于猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773971位碱基(rs81221063)A/T突变位点，自上至下分别为AA、AT和TT基因型的测序结果；

图3位本发明2个位点的LD模式图分析图，其中，2个SNP处于完全连锁状态(r²＝1)。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明名做进一步详细说明。给出了详细的实施方式和具体的操作过程，实施例将有助于理解本发明，但是本发明的保护范围不限于下述的实施例。

1、苏姜猪MC4R基因遗传变异位点鉴定

(1)参考序列下载与引物设计

从Ensembl^ASIA数据库中下载猪参考基因组11.1版本MC4R基因(ENSSSCG00000051798)序列SEQ ID NO:1(http://asia.ensembl.org/index.html)，包含外显子、内含子，以及600bp 5'侧翼序列和3'侧翼序列，针对外显子利用Primer 5.0设计PCR引物(如表1)。

表1外显子PCR引物

(2)PCR扩增

随机挑选100个苏姜猪的DNA样本，均匀稀释为50ng/μL，每个样本取10μL，均匀混合，构建苏姜猪DNA混池。以混池DNA为模板进行PCR扩增。

反应体系：反应体系为25μL，包括2×Taq PCR Mastermix(天根)12.5μL，正向引物(F)1μL，反向引物(R)1μL，模板DNA1.5μL，超纯水9μL。

反应程序：95℃变性5min；95℃30s，退火温度(表1)30s，72℃延伸(表1)，35个循环；72℃延伸10min；4℃保存。

(3)PCR产物测序

PCR产物送生工生物工程(上海)股份有限公司进行双向测序。对测序峰图进行分析，鉴定到了苏姜猪MC4R基因的6个SNP位点(表2)。

表2 MC4R基因SNP统计

2、苏姜猪MC4R基因6个SNP的基因型频率和等位基因频率分析

我们对鉴定到的6个SNP位点在苏姜猪群体中进行了基因分型，表3为6个SNP位点在苏姜猪群体中的基因型频率和等位基因频率分析结果。猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773437位碱基(rs81219178)G/A突变位点在苏姜猪群体中成功分型了365个个体，结果表明GG基因型为196头，GA基因型为143头，AA基因型为26头。猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773559位碱基(rs325999553)G/A突变位点在苏姜猪群体中成功分型了365个个体，结果表明GG基因型为267头，GA基因型为88头，AA基因型为10头。猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773562位碱基(rs344775772)T/A突变位点在苏姜猪群体中成功分型了365个个体，结果表明TT基因型为267头，TA基因型为88头，AA基因型为10头。猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773730位碱基(rs334536177)A/C突变位点在苏姜猪群体中成功分型了365个个体，结果表明AA基因型为244头，AC基因型为112头，CC基因型为9头。猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773885位碱基(rs335628164)C/T突变位点在苏姜猪群体中成功分型了365个个体，结果表明CC基因型为238头，CT基因型为117头，TT基因型为10头。猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773971位碱基(rs81221063)A/T突变位点在苏姜猪群体中成功分型了365个个体，结果表明AA基因型为238头，AT基因型为117头，TT基因型为10头。

以上结果表明该6个SNP变异位点在苏姜猪群体中存在明显的多态性，具有分子标记开放的潜在价值。同时，我们对6个SNP位点的LD block图进行分析，如图3所示，rs325999553与rs344775772处于完全连锁状态(r²＝1)，rs335628164与rs81221063处于完全连锁状态(r²＝1)，rs334536177与rs335628164、rs81221063两个SNP处于强连锁状态(r²＝0.93)，rs325999553、rs344775772两个SNP与rs335628164、rs81221063两个SNP处于强连锁状态(r²＝0.75)。

表3苏姜猪MC4R基因6个SNP的基因型频率和等位基因频率

3、苏姜猪MC4R基因6个SNP位点多态性与生产性状的关联分析

我们在苏姜猪群体中对鉴定到的MC4R基因6个SNP位点与苏姜猪生产性状进行了关联分析，用于关联分析的生产性状包括体重、体长、体高、胸围、胸宽、臀宽与最后一根肋骨处活体背膘厚。申请人利用SPSS 19.0软件中的单因素方差分析(One-Way ANOVA)统计群体中不同基因型与苏姜猪生产性状的关联性，结果用平均值±标准差表示；方差齐用LSD法进行组间两两比较，方差不齐用Tamhane's T2检验进行分析，以P<0.05为差异显著性判断标准。

从表4可以看出基因型为AA和AG的苏姜猪个体在胸围和胸宽上显著大于基因型为GG的个体(P<0.05)。说明了此SNP比较显著影响苏姜猪的胸围和胸宽性状，可以通过对苏姜猪的该SNP位点进行辅助选择，从而加快该群体的胸围和胸宽性状的遗传进展。在育种工作中，应当选择苏姜猪MC4R基因为AA基因型的个体。

表4 rs81219178与苏姜猪生产性状的关联分析

注：表中在同一行中标有a、b、c为差异显著性水平P<0.05。

从表5可以看出基因型为GG的苏姜猪个体在体重、体高和胸围上显著大于基因型为AA的个体(P<0.05)；基因型为GG的苏姜猪个体在体高上显著大于基因型为AG的个体(P<0.05)。说明了此SNP比较显著影响苏姜猪的体重、体高和胸围性状，可以通过对苏姜猪的该SNP位点进行辅助选择，从而加快该群体的体重、体高和胸围性状的遗传进展。在育种工作中，应当选择苏姜猪MC4R基因为GG基因型的个体。

表5 rs325999553与苏姜猪生产性状的关联分析

注：表中在同一行中标有a、b、c为差异显著性水平P<0.05。

从表6可以看出基因型为TT的苏姜猪个体在体重、体高和胸围上显著大于基因型为AA的个体(P<0.05)；基因型为TT的苏姜猪个体在体高上显著大于基因型为TA的个体(P<0.05)。说明了此SNP比较显著影响苏姜猪的体重、体高和胸围性状，可以通过对苏姜猪的该SNP位点进行辅助选择，从而加快该群体的体重、体高和胸围性状的遗传进展。在育种工作中，应当选择苏姜猪MC4R基因为TT基因型的个体。

表6 rs344775772与苏姜猪生产性状的关联分析

注：表中在同一行中标有a、b、c为差异显著性水平P<0.05。

从表7可以看出基因型为AA的苏姜猪个体在体重、体高和胸围上显著大于基因型为CC的个体(P<0.05)；基因型为AC的苏姜猪个体在体高和胸围上显著大于基因型为CC的个体(P<0.05)。说明了此SNP比较显著影响苏姜猪的体重、体高和胸围性状，可以通过对苏姜猪的该SNP位点进行辅助选择，从而加快该群体的体重、体高和胸围性状的遗传进展。在育种工作中，应当选择苏姜猪MC4R基因为AA基因型的个体。

表7 rs334536177与苏姜猪生产性状的关联分析

注：表中在同一行中标有a、b、c为差异显著性水平P<0.05。

从表8可以看出基因型为CC的苏姜猪个体在体重、体高和胸围上显著大于基因型为TT的个体(P<0.05)；基因型为CT的苏姜猪个体在体高和胸围上显著大于基因型为TT的个体(P<0.05)。说明了此SNP比较显著影响苏姜猪的体重、体高和胸围性状，可以通过对苏姜猪的该SNP位点进行辅助选择，从而加快该群体的体重、体高和胸围性状的遗传进展。在育种工作中，应当选择苏姜猪MC4R基因为CC基因型的个体。

表8 rs335628164与苏姜猪生产性状的关联分析

注：表中在同一行中标有a、b、c为差异显著性水平P<0.05。

从表9可以看出基因型为AA的苏姜猪个体在体重、体高和胸围上显著大于基因型为TT的个体(P<0.05)；基因型为AT的苏姜猪个体在体高和胸围上显著大于基因型为TT的个体(P<0.05)。说明了此SNP比较显著影响苏姜猪的体重、体高和胸围性状，可以通过对苏姜猪的该SNP位点进行辅助选择，从而加快该群体的体重、体高和胸围性状的遗传进展。在育种工作中，应当选择苏姜猪MC4R基因为AA基因型的个体。

表9 rs335628164与苏姜猪生产性状的关联分析

注：表中在同一行中标有a、b、c为差异显著性水平P<0.05。

在苏姜猪群体中鉴定到的MC4R基因6个SNP位点对苏姜猪生产性能的若干指标有显著影响，但只有体重性状具有较高的经济价值，因此在进行优质苏姜猪的选育时重点选择经济价值较高的体重性状，结合6个SNP的连锁状态，在育种工作中，应当选择苏姜猪MC4R基因rs335628164、rs81221063两个SNP作为分子标记。

本发明检测方法简单、成本低，检测结果直接、可靠，适用于对苏姜猪MC4R基因的大规模的筛查和诊断。

本发明提供了一种与苏姜猪生产性状相关的SNP标记以及该SNP标记用于苏姜猪生产性状辅助选育的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。

序列表

<110> 江苏农牧科技职业学院

<120> 与苏姜猪生产性状相关的MC4R基因分子标记及其制备方法和应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 3312

<212> DNA

<213> SEQ ID NO:1(Artificial Sequence)

<400> 1

tccaagctgc agctgtggcg aaggtcacaa tggctcctta acccactgcc agagtaggaa 60

tcccaaattc taaatagttt ccaaatattg taaatgaaaa taaaattttt tccagttaca 120

gtaaaagaga ttctgcaatg cagaaatagc aggtattagt gcataagaaa caaactcctt 180

cttgagccct ctgataaact atagctacct acttagtctt ccatctataa catagtctct 240

tgtattatta aatattctcc ccatatttca actactttaa atgggagcat gacttccttt 300

gctctaaatt caaagaaact gaggggtaaa taattcaata gcctggccaa aaaggcagtg 360

tgtatctatt tcaggacaca cacacacatc tccttttaag tagtaataaa cctgggtgcc 420

tcaaaaaagg gcttgttgtg atataaaaga atgtcctcta gaaaccaagc tgttttcctt 480

gaaaacttga aaagggaaat tcagtgtatc acagcctgct tgtgcctcct gattctacac 540

gcttctgcat ctgaatcagc gctgcccagc agtttgtatc tctggaacat aatcggtgtc 600

tcacagactc cccaggactt ggattggtca gaaagaagca gaggaggagc cactgtgcac 660

attttttttt ccccttcaca caccataaaa atcacagagg caactaacac tcacagcaaa 720

gcttcaggtt gggaactgat tctctctgcg aggcagctga tctgagcatg cgcacacaga 780

ttcattcttc tcccaatagc acagcagccg ctaggaaaat tattttgaaa agacctgaat 840

gcattaagac taaagttaaa gtggaagtga gaacaaaata tcaaacagca gactcgacag 900

agaatgagcg tcttgaagcc taagatttca aagtgatgct aatcagagcc ctacctgaaa 960

gagactaaaa actccatttc aagcttcgga gcatgtgata tttattcaca acaggcattc 1020

caatttcagc ctcataactt tcagacagat aaagacttgg agaaaatcgc tgaggctacc 1080

tgacccagga gcttaaatca ggtcagaggg gatctcaacc cacctggcgc aggatgaact 1140

caacccatca ccatggaatg catacttctc tccacttctg gaaccgcagc acctacggac 1200

tgcacagcaa tgccagtgag ccccttggaa aaggctactc tgaaggagga tgctacgagc 1260

aactttttgt ctctcctgag gtgtttgtga ctctgggtgt cataagcctg ttggagaaca 1320

ttctggtgat tgtggccata gccaagaaca agaatctgca ttcacccatg tactttttca 1380

tctgtagcct ggctgtggct gatatgctgg tgagcgtttc caatgggtca gaaaccattg 1440

tcatcaccct attaaacagc acggacacgg acgcacagag tttcacagtg aatattgata 1500

atgtcattga ctcagtgatc tgtagctcct tactcgcctc aatttgcagc ctgctttcga 1560

ttgcagtgga caggtatttt actatctttt atgctctcca gtaccataac attatgacag 1620

ttaagcgggt tggaatcatc atcagttgta tctgggcagt ctgcacggtg tcgggtgttt 1680

tgttcatcat ttactcagat agcagtgctg ttattatctg cctcataacc gtgttcttca 1740

ccatgctggc tctcatggct tctctctatg tccacatgtt cctcatggcc agactccaca 1800

ttaagaggat cgccgtcctc ccaggcactg gcaccatccg ccaaggtgcc aacatgaagg 1860

gggcaattac cctgaccatc ttgattgggg tctttgtggt ctgctgggcc cccttcttcc 1920

tccacttaat attctatatc tcctgccccc agaatccata ctgtgtgtgc ttcatgtctc 1980

actttaattt gtatctcatc ctgatcatgt gtaattccat catcgatccc ctgatttatg 2040

cactccggag ccaagaactg aggaaaacct tcaaagagat catctgttgc tatcccctgg 2100

gtggcctctg tgatttgtct agcagatatt aaatggggac agaggagact tataaatgca 2160

agcataagag actttctcct tacacagtct ggacaatatg cttcaacaac agcattttct 2220

tgtaaggcat cagttgagac attctattgt ataaatttaa gttcgtgatt ctgctcagtc 2280

tctgtgtatt tttaaggtct tgctaccttt tggctgtaaa atgtttatct atactacagg 2340

ttataggcac aatggattta taaaaaagaa aaaagtcctt atgaaaagtt aattaatgta 2400

tcttgtcatt cgaaaggatt tgacacattg cttgttttag taaaatggaa atcacagttt 2460

cattaaatat atcctaataa atggttgcta atattacact atacaacgct gaagtgtaga 2520

ggtttgattc tagcattgag gggagaaata ctgaaacaag tgtttaatca ttaaaaaata 2580

agctgaaatt tcaactaatt taataaaaca tgctcattct ccctgtgcag aaggagaaat 2640

gaagcttcta ctgggagaaa aacagttact aaaaaaaagt ggggggatat tttgagtttg 2700

aaaactatgt ttctcaaaga cagagatatt agtttgccca agcaaactgt ctgatattcc 2760

acacaggcaa ctgtttggga gagaaaaata gcagctatgg gtactgaagt gttctgggaa 2820

acctaagagc atggcaagct aaactcatat caaactattc taaccacccc ctaataaaaa 2880

caaaggtctt tctgcccctt taaccaggga cccagagtct gctaaaatgt ccagaaaagg 2940

tggtgctaca ctggagtctt tctctttatt ttttaaaatt ttattggaat atatttgact 3000

tacaaagttg tattaatttc agacatataa caaagtcaat cagttataca tatattcact 3060

ggctcctact ttctaaaaac aacctacaaa atcagtattg aattctttca cttttcacat 3120

ggaagtgact tgctatagtc ttattgctta ttttctgaac agaagttgaa atactcatta 3180

tcaaggattt tagcttttaa aattaaatct atcgcacagg tattttcagg caatatttgt 3240

aagatatgta aaataaggga acttctgatg ctggtacatg acaagcagga agaaaggtat 3300

tgcccaaacc cc 3312

<210> 2

<211> 1181

<212> DNA

<213> SEQ ID NO:2(Artificial Sequence)

<400> 2

agccaagaac tgaggaaaac cttcaaagag atcatctgtt gctatcccct gggtggcctc 60

tgtgatttgt ctagcagata ttaaatgggg acagaggaga cttataaatg caagcataag 120

agactttctc cttacacagt ctggacaata tgcttcaaca acagcatttt cttgtaaggc 180

atcagttgag acattctatt gtataaattt aagttcgtga ttctgctcag tctctgtgta 240

tttttaaggt cttgctacct tttggctgta aaatgtttat ctatactaca ggttataggc 300

acaatggatt tataaaaaag aaaaaagtcc ttatgaaaag ttaattaatg tatcttgtca 360

ttcgaaagga tttgacacat tgcttgtttt agtaaaatgg aaatcacagt ttcattaaat 420

atatcctaat aaatggttgc taatattaca ctatacaacg ctgaagtgta gaggtttgat 480

tctagcattg aggggagaaa tactgaaaca agtgtttaat cattaaaaaa taagctgaaa 540

tttcaactaa tttaataaaa catgctcatt ctccctgtgc agaaggagaa atgaagcttc 600

tactgggaga aaaacagtta ctaaaaaaaa gtggggggat attttgagtt tgaaaactat 660

gtttctcaaa gacagagata ttagtttgcc caagcaaact gtctgatatt ccacacaggc 720

aactgtttgg gagagaaaaa tagcagctat gggtactgaa gtgttctggg aaacctaaga 780

gcatggcaag ctaaactcat atcaaactat tctaaccacc ccctaataaa aacaaaggtc 840

tttctgcccc tttaaccagg gacccagagt ctgctaaaat gtccagaaaa ggtggtgcta 900

cactggagtc tttctcttta ttttttaaaa ttttattgga atatatttga cttacaaagt 960

tgtattaatt tcagacatat aacaaagtca atcagttata catatattca ctggctccta 1020

ctttctaaaa acaacctaca aaatcagtat tgaattcttt cacttttcac atggaagtga 1080

cttgctatag tcttattgct tattttctga acagaagttg aaatactcat tatcaaggat 1140

tttagctttt aaaattaaat ctatcgcaca ggtattttca g 1181

<210> 3

<211> 22

<212> DNA

<213> MC4R-1 正向引物(Artificial Sequence)

<400> 3

attcaaagaa actgaggggt aa 22

<210> 4

<211> 20

<212> DNA

<213> MC4R-1 反向引物(Artificial Sequence)

<400> 4

ctgtgaaact ctgtgcgtcc 20

<210> 5

<211> 18

<212> DNA

<213> MC4R-2 正向引物(Artificial Sequence)

<400> 5

tggaaccgca gcacctac 18

<210> 6

<211> 22

<212> DNA

<213> MC4R-2 反向引物(Artificial Sequence)

<400> 6

aatccattgt gcctataacc tg 22

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> MC4R-3 正向引物(Artificial Sequence)

<400> 7

agccaagaac tgaggaaaac c 21

<210> 8

<211> 22

<212> DNA

<213> MC4R-3 反向引物(Artificial Sequence)

<400> 8

ctgaaaatac ctgtgcgata ga 22

Claims

1.一种用于检测与苏姜猪生产性状相关的MC4R基因分子标记的引物对，其特征在于：

检测猪参考基因组11.1版本1号染色体第160773885位碱基（rs335628164）C>T突变和第160773971位碱基（rs81221063）A>T突变的正、反向扩增测序引物的DNA序列如下所示：

正向引物（MC4R-3F）：AGCCAAGAACTGAGGAAAACC；

反向引物（MC4R-3R）：CTGAAAATACCTGTGCGATAGA。

2.权利要求1所述的引物对在苏姜猪生产性状辅助选育中的应用，其中，所述性状为苏姜猪体重、体高和胸围中至少一种。