CN117025450A - 一种副干酪乳杆菌sf-l31和提高钙吸收的双菌发酵饮品及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及发酵饮品技术领域，具体涉及一种副干酪乳杆菌SF‑L31和提高钙吸收的双菌发酵饮品及其制备方法，副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）SF‑L31，已于2021年9月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23492。双菌发酵饮品的原料包括被发酵底物和调味料，被发酵底物经干酪乳杆菌SF‑L‑12、副干酪乳杆菌SF‑L31发酵后，与调味料混合调味制得具有提高钙吸收功能的双菌发酵饮品。经试验证明，本发明提供的双菌发酵饮品可起到促进机体对钙的吸收、预防和治疗骨质疏松的作用。
Description
技术领域
本发明涉及发酵饮品技术领域，具体涉及一种副干酪乳杆菌SF-L31和提高钙吸收的双菌发酵饮品及其制备方法。
背景技术
钙是人体必须的最丰富的矿物元素，占人体体重的1.5%～2.0%，在人体内承担着重要的生理功能。由于我国国民的膳食模式主要以植物性食物为主，以及人体对钙的吸收利用能力的差异，导致钙的吸收率较低，钙缺乏症存在于多数人中，而且几乎是整个一生都存在的一个营养问题，从婴幼儿到老年都要注意钙的有效摄入。目前，通过食用富含钙的食物已经比较普遍，牛奶、酸奶、虾皮、海产品、大豆、豆制品等等，但是国内中老年人患骨质疏松症的比例依然很高，所以在提高钙元素的吸收方面需要进一步的研究。用于提高钙元素吸收的方式包括西式治疗与中式治疗，西式方法包括服用甲状旁腺激素类似物、双膦酸盐类、降钙素、选择性雌激素受体调节剂、RNAK抑制剂、维生素K2类等。中式治疗主要是传统中药，如人工虎骨粉制剂、淫羊藿苷类制剂等。
专利CN1250267C公布了一种用于改善睡眠和增加骨密度的保健品及制备方法，采用中药炒枣仁、地黄、生牡蛎、白芍、枸杞子、当归、麦冬、百合、北五味子与莲子心作为活性成分与药用辅料组成，药材加水煎煮两次并离心浓缩后制成口服液，具有改善睡眠和增加骨密度的功效。专利CN102224896A公布了一种用于增强人体免疫力、增加骨密度的保健食品及其制备方法，本发明的保健食品由透明质酸、氨基葡萄糖、胶原蛋白、葛根提取物、硫酸软骨素、维生素、钙等成分组成，长期服用过程中起到润滑关节、提高骨密度、增强骨强度的作用。专利CN104664402B公布了一种增加骨密度的组合物及其制备方法和应用，由氨基葡萄糖盐酸盐、硫酸软骨素、乳矿物盐、姜黄提取物、杜仲提取物组成，具有增加骨密度的功能。专利CN1250267C是纯中药方案，药效慢、口感差。专利CN102224896A与专利CN104664402B为中药与西药联合治疗方案，但是以药为主，长期服用对患者有一定的副作用。
发明内容
针对现有提高钙吸收产品见效慢、口感差、具有一定副作用的问题，本发明运用生物技术，提供一种副干酪乳杆菌SF-L31和提高钙吸收的双菌发酵饮品及其制备方法，可增加钙吸收，改善骨质疏松症症状。
第一方面，本发明提供一种副干酪乳杆菌SF-L31，其特征在于，副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）SF-L31，已于2021年9月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23492，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
第二方面，本发明提供一种提高钙吸收的双菌发酵饮品，双菌发酵饮品的原料包括被发酵底物和调味料，被发酵底物经干酪乳杆菌SF-L-12、副干酪乳杆菌SF-L31发酵后，与调味料混合调味制得具有提高钙吸收功能的双菌发酵饮品；
被发酵底物包括如下重量份的组分：净化水65~75份，茯苓提取物2~3份，党参提取物2~3份，枸杞提取物2~3份，山药粉2~3份，黑木耳粉2~5份，鸡内金粉2~4份，黄芪提取物1~2份，黑芝麻粉3~4份，海带提取物2~3份，牡蛎粉2~3份；
干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）SF-L-12，已于2020年10月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20927，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其相关信息已公开于中国专利CN113444675A。
被发酵底物的各组分具备如下功效：
茯苓：味甘、淡，性平，归心、肺、脾、肾经，利水渗湿，健脾，宁心；党参：甘，平，补中益气，和胃生津，祛痰止咳，用于脾虚食少便溏，四肢无力；枸杞：甘，平，滋肾，润肺；山药：健脾，补肺，固肾，益精；黑木耳：补气养血，润肺，止血，降压；鸡内金：健胃消食，涩精止遗，通淋化石；黄芪：补气固表，托毒排脓，利尿，生肌；黑芝麻：补肝肾，益精血，润肠燥；海带：消痰软坚，利水消肿；牡蛎粉：敛阴，潜阳，止汗，涩精，化痰，软坚。配方中各组分均为药食两用，安全、无副作用，有补肾益气、调节激素分泌的功效。
干酪乳杆菌SF-L-12与副干酪乳杆菌SF-L31具有较强的肠胃适应能力，可有效调节肠胃菌群健康，提高机体免疫力，同时，对被发酵底物中的各个组分进行分解发酵，一方面有助于改善产品口感，另一方面便于机体吸收利用有益物质，促进其功效发挥。
进一步的，被发酵底物包括如下重量份的组分：净化水69份，茯苓提取物2份，党参提取物2份，枸杞提取物2份，山药粉3份，黑木耳粉3份，鸡内金粉2份，黄芪提取物1份，黑芝麻粉3份，海带提取物3份，牡蛎粉2份。
进一步的，调味料包括如下重量份的组分：蜂蜜3~4份，苹果浓缩汁3~5份。
进一步的，调味料包括如下重量份的组分：蜂蜜4份，苹果浓缩汁4份。
第三方面，本发明提供上述双菌发酵饮品的制备方法，包括以下步骤：
（1）首先将被发酵底物的各组分混合，得到混合浆料；
（2）将混合浆料输送至灭菌容器中，高温高压灭菌，冷却至30~40℃后得到灭菌液；
（3）将干酪乳杆菌SF-L-12与副干酪乳杆菌SF-L31分别接种到两个MRS液体培养基中，培养得到干酪乳杆菌SF-L-12接种剂与副干酪乳杆菌SF-L31接种剂；
（4）将干酪乳杆菌SF-L-12接种剂与副干酪乳杆菌SF-L31接种剂按体积比1:1~3混合后接种于灭菌液中，培养得到发酵液；
（5）将发酵液输送至高压喷雾破壁机中进行破壁处理，得到破壁发酵液；
（6）破壁发酵液与调味料混合调味后，进行巴氏灭菌，得发酵饮品。
进一步的，步骤（2）中，在120℃下高压灭菌30min，然后冷却至35℃，得到灭菌液。
进一步的，步骤（3）中，干酪乳杆菌SF-L-12与副干酪乳杆菌SF-L31的接种量为1%，37℃下培养18h得接种剂。
进一步的，步骤（4）中，干酪乳杆菌SF-L-12接种剂与副干酪乳杆菌SF-L31接种剂的接种量为1%~4%，37℃下培养24h，得到发酵液。
进一步的，步骤（5）中，高压喷雾破壁机的压力设置为60Mpa。
本发明的有益效果在于：
合理调配被发酵底物的各组分配比，然后使用干酪乳杆菌SF-L-12与副干酪乳杆菌SF-L31对被发酵底物中的各个组分进行分解发酵，有助于改善产品口感、促进有效组分功效发挥。经试验证明，本发明提供的双菌发酵饮品可明显改善去卵巢大鼠的骨密度低下症状，明显促进人体对钙元素的吸收。因此，本发明提供的双菌发酵饮品可起到促进机体对钙的吸收、预防和治疗骨质疏松的作用，且本品原材料全部是药食两用，安全、有效、无任何副作用。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
本发明使用的MRS固体平板培养基包括以下组分：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、K2HPO4·7H2O 2g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、CH3COONa·3H2O 5g、MgSO4·7H2O 0.2g、MnSO4·4H2O 0.05g、吐温-80 1mL、琼脂15.0g、蒸馏水1000mL。
本发明使用的MRS液体培养基包括以下组分：蛋白胨10g、牛肉粉5g、酵母粉4g、K2HPO4·7H2O 2g、柠檬酸三铵2g、葡萄糖20g、CH3COONa·3H2O 5g、MgSO4·7H2O 0.2g、MnSO4·4H2O 0.05g、吐温-80 1mL、蒸馏水1000mL。
本发明使用的茯苓提取物，党参提取物，枸杞提取物，黄芪提取物、海带提取物的制备工艺为：将原料洗净后破碎成粗粒，用10倍量水煎煮2次，煎煮时间分别为3h和1h，合并两次滤液，静置2h后过滤得提取液；将提取液在真空度为-0.06~0.08Mpa条件下，浓缩至相对密度1.10（70℃），然后进行喷雾干燥，最后粉碎成80目细粉即得提取物。
本发明使用的各物质粉的制备方法如下：
山药粉，选择光滑、无病斑、条形直顺的新铁棍鲜山药；去除泥污，在清水中清洗干净；用削皮刀或竹片刮去外表皮，并挖除黑色斑眼。将去皮后的山药，切成0.2~0.3厘米厚的薄片。山药切片后立即浸入0.5%亚硫酸氢钠水溶液中进行变色处理，浸泡2~3小时后捞出；将捞出的山药片用清水漂去药液和胶体，然后放入沸水锅中烫漂6~8分钟，注意不要煮烂，捞出后再清水漂去黏液。将烫漂后的山药片置60~65℃烘房或烘箱内烘20小时。将烘干后的山药片用电磨加工成粉。
黑木耳粉，将黑木耳烘干至含水量5%以下，磨碎成80目的黑木耳粉。
鸡内金粉，将干燥后的鸡内金磨碎至80目，待用。
黑芝麻粉，黑芝麻烘干至含水量5%以下，磨碎成80目得黑芝麻粉。
牡蛎粉，将选取的牡蛎壳清洗后，用0.5%盐酸进行酸洗1小时，用蒸馏水漂洗后，将牡蛎磨碎成80目粉末。
本发明使用的苹果浓缩汁的制备方法为：将原料挑选、修整后在100℃沸水中短时浸泡，用刷皮机除去表皮，然后用切丁机切丁后预煮5min，输送至打浆机打成浆，采用卧螺机提取汁液，同时用真空机除去氧气，用两效真空蒸发器，物料浓缩到36%~40%，然后进行高温杀菌，冷却后即得苹果浓缩汁。
本发明使用的干酪乳杆菌SF-L-12于2020年10月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.20927，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，其相关信息已公开于中国专利CN113444675A。
本发明使用的干酪乳杆菌ACCC 10640和类干酪乳杆菌CICC 20251均从商业途径购得。
实施例1副干酪乳杆菌SF-L31的分离和鉴定
1、菌源：酸奶，2021年1月采集于青海省西宁市。
2、菌株的分离
对酸奶样品做十倍梯度稀释，每个梯度取100μL均匀涂布于MRS固体平板培养基上，随后取出置于厌氧罐中，37℃厌氧培养过夜；
次日可见平板上长有形态大小各异的菌落，挑取若干乳酸菌的特征菌落作二代划线纯化处理，平板厌氧活化1天，得培养物，随后做菌株鉴定。
3、副干酪乳杆菌SF-L31的鉴定
（1）鉴定单位
生工生物工程（上海）股份有限公司。
（2）引物序列
27F：5'-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-3'；
1492R：5'-GGTTACCTTGTTACGACTT-3'。
（3）鉴定的序列
CATGGCTCAGGATGAACGCTGGCGGCGTGCCTAATACATGCAAGTCGAACGAGTTCTCGTTGATGATCGGTGCTTGCACCGAGATTCAACATGGAACGAGTGGCGGACGGGTGAGTAACACGTGGGTAACCTGCCCTTAAGTGGGGGATAACATTTGGAAACAGATGCTAATACCGCATAGATCCAAGAACCGCATGGTTCTTGGCTGAAAGATGGCGTAAGCTATCGCTTTTGGATGGACCCGCGGCGTATTAGCTAGTTGGTGAGGTAATGGCTCACCAAGGCGATGATACGTAGCCGAACTGAGAGGTTGATCGGCCACATTGGGACTGAGACACGGCCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATCTTCCACAATGGACGCAAGTCTGATGGAGCAACGCCGCGTGAGTGAAGAAGGCTTTCGGGTCGTAAAACTCTGTTGTTGGAGAAGAATGGTCGGCAGAGTAACTGTTGTCGGCGTGACGGTATCCAACCAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGGCAAGCGTTATCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGAGCGCAGGCGGTTTTTTAAGTCTGATGTGAAAGCCCTCGGCTTAACCGAGGAAGCGCATCGGAAACTGGGAAACTTGAGTGCAGAAGAGGACAGTGGAACTCCATGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATATGGAAGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTGTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCTCGAAAGCATGGGTAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGTAAACGATGAATGCTAGGTGTTGGAGGGTTTCCGCCCTTCAGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGCATTCCGCCTGGGGAGTACGACCGCAAGGTTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCTTTTGATCACCTGAGAGATCAGGTTTCCCCTTCGGGGGCAAAATGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATGACTAGTTGCCAGCATTTAGTTGGGCACTCTAGTAAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGATGGTACAACGAGTTGCGAGACCGCGAGGTCAAGCTAATCTCTTAAAGCCATTCTCAGTTCGGACTGTAGGCTGCAACTCGCCTACACGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCACGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGAGAGTTTGTAACACCCGAAGCCGGTGGCGTAACCCTTTTAGGGA
（4）鉴定结果
该菌株被鉴定为乳杆菌属（Lactobacillus），推测为副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei），将该菌株命名为副干酪乳杆菌SF-L31，送至中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏信息如下：
该副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）SF-L31于2021年9月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号：CGMCC No.23492，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
实施例2制备含有干酪乳杆菌SF-L-12与副干酪乳杆菌SF-L31双菌发酵饮品
1、准备发酵饮品的原料，包括被发酵底物和调味料。
被发酵底物包括如下重量份的组分：净化水69份，茯苓提取物2份，党参提取物2份，枸杞提取物2份，山药粉3份，黑木耳粉3份，鸡内金粉2份，黄芪提取物1份，黑芝麻粉3份，海带提取物3份，牡蛎粉2份；
调味料包括如下重量份的组分：蜂蜜4份，苹果浓缩汁4份。
2、按照如下工艺步骤制备发酵饮品：
（1）首先将被发酵底物的各组分混合，得到混合浆料；（2）将混合浆料输送至灭菌容器中，120℃高压灭菌30min，然后冷却至35℃，得到灭菌液；（3）将干酪乳杆菌SF-L-12与副干酪乳杆菌SF-L31分别接种到两个MRS液体培养基中，接种量为1%，37℃下培养18h得干酪乳杆菌SF-L-12接种剂与副干酪乳杆菌SF-L31接种剂；（4）将干酪乳杆菌SF-L-12接种剂与副干酪乳杆菌SF-L31接种剂按体积比1:1混合后接种于灭菌液中，接种量为1%，37℃下培养24h，得到发酵液；（5）将发酵液输送至高压喷雾破壁机中，压力设置60MPa，进行破壁处理，得到破壁发酵液；（6）破壁发酵液与调味料混合调味后，进行巴氏灭菌，得双菌发酵饮品。
实施例3制备含有干酪乳杆菌SF-L-12与副干酪乳杆菌SF-L31双菌发酵饮品
1、准备发酵饮品的原料，包括被发酵底物和调味料。
被发酵底物包括如下重量份的组分：净化水65份，茯苓提取物3份，党参提取物3份，枸杞提取物3份，山药粉3份，黑木耳粉2份，鸡内金粉3份，黄芪提取物1份，黑芝麻粉4份，海带提取物3份，牡蛎粉3份；
调味料包括如下重量份的组分：蜂蜜3份，苹果浓缩汁3份。
2、按照如下工艺步骤制备发酵饮品：
（1）首先将被发酵底物的各组分混合，得到混合浆料；（2）将混合浆料输送至灭菌容器中，120℃高压灭菌30min，然后冷却至30℃，得到灭菌液；（3）将干酪乳杆菌SF-L-12与副干酪乳杆菌SF-L31分别接种到两个MRS液体培养基中，接种量为1%，37℃下培养18h得干酪乳杆菌SF-L-12接种剂与副干酪乳杆菌SF-L31接种剂；（4）将干酪乳杆菌SF-L-12接种剂与副干酪乳杆菌SF-L31接种剂按体积比1:2混合后接种于灭菌液中，接种量为3%，37℃下培养24h，得到发酵液；（5）将发酵液输送至高压喷雾破壁机中，压力设置60MPa，进行破壁处理，得到破壁发酵液；（6）破壁发酵液与调味料混合调味后，进行巴氏灭菌，得双菌发酵饮品。
制得的双菌发酵饮品为深黄色液体，双菌发酵饮品中含有干酪乳杆菌SF-L-12、副干酪乳杆菌SF-L31的总数量为20亿/ml。
实施例4制备含有干酪乳杆菌SF-L-12与副干酪乳杆菌SF-L31双菌发酵饮品
1、准备发酵饮品的原料，包括被发酵底物和调味料。
被发酵底物包括如下重量份的组分：净化水75份，茯苓提取物2份，党参提取物2份，枸杞提取物2份，山药粉2份，黑木耳粉5份，鸡内金粉4份，黄芪提取物2份，黑芝麻粉3份，海带提取物2份，牡蛎粉2份；
调味料包括如下重量份的组分：蜂蜜3份，苹果浓缩汁5份。
2、按照如下工艺步骤制备发酵饮品：
（1）首先将被发酵底物的各组分混合，得到混合浆料；（2）将混合浆料输送至灭菌容器中，120℃高压灭菌30min，然后冷却至40℃，得到灭菌液；（3）将干酪乳杆菌SF-L-12与副干酪乳杆菌SF-L31分别接种到两个MRS液体培养基中，接种量为1%，37℃下培养18h得干酪乳杆菌SF-L-12接种剂与副干酪乳杆菌SF-L31接种剂；（4）将干酪乳杆菌SF-L-12接种剂与副干酪乳杆菌SF-L31接种剂按体积比1:3混合后接种于灭菌液中，接种量为4%，37℃下培养24h，得到发酵液；（5）将发酵液输送至高压喷雾破壁机中，压力设置60MPa，进行破壁处理，得到破壁发酵液；（6）破壁发酵液与调味料混合调味后，进行巴氏灭菌，得双菌发酵饮品。
制得的双菌发酵饮品为深黄色液体，双菌发酵饮品中含有干酪乳杆菌SF-L-12、副干酪乳杆菌SF-L31的总数量为30亿/ml。
对比例1不同组分的被发酵底物制备双菌发酵饮品
1、准备发酵饮品的原料，包括被发酵底物和调味料。
被发酵底物包括如下重量份的组分：净化水69份，山药粉5份，黑木耳粉5份，鸡内金粉3份，黄芪提取物2份，黑芝麻粉3份，海带提取物3份，牡蛎粉2份；
调味料包括如下重量份的组分：蜂蜜4份，苹果浓缩汁4份。
2、制备工艺步骤同实施例2。
其他对比例
1、发酵饮品的原料同实施例2。
2、分别使用干酪乳杆菌SF-L-12、副干酪乳杆菌SF-L31、干酪乳杆菌SF-L-12与类干酪乳杆菌CICC 20251、干酪乳杆菌ACCC 10640与副干酪乳杆菌SF-L31制备发酵饮品，具体制备工艺同实施例2，制得四种发酵饮品，分别为对比例2（干酪乳杆菌SF-L-12）、对比例3（副干酪乳杆菌SF-L31）、对比例4（干酪乳杆菌SF-L-12与类干酪乳杆菌CICC 20251）、对比例5（干酪乳杆菌ACCC 10640与副干酪乳杆菌SF-L31）。
实施例5测试各发酵饮品对去卵巢手术诱导大鼠骨质疏松模型骨密度的影响
将80只SPF级雌性SD大鼠，随机分为下列8组，每组10只。
模型组：切除大鼠双侧卵巢后，诱导大鼠骨质疏松，正常饲喂，每天口服生理盐水10ml一次，连续饲喂50天。
对照组：正常饲喂，每天口服生理盐水10ml一次，连续饲喂50天。
试验组1：切除大鼠双侧卵巢后，诱导大鼠骨质疏松，正常饲喂，每天口服实施例2制备的发酵饮品10ml一次，连续饲喂50天。
试验组2：切除大鼠双侧卵巢后，诱导大鼠骨质疏松，正常饲喂，每天口服对比例1制备的发酵饮品10ml一次，连续饲喂50天。
试验组3：切除大鼠双侧卵巢后，诱导大鼠骨质疏松，正常饲喂，每天口服对比例2制备的发酵饮品10ml一次，连续饲喂50天。
试验组4：切除大鼠双侧卵巢后，诱导大鼠骨质疏松，正常饲喂，每天口服对比例3制备的发酵饮品10ml一次，连续饲喂50天。
试验组5：切除大鼠双侧卵巢后，诱导大鼠骨质疏松，正常饲喂，每天口服对比例4制备的发酵饮品10ml一次，连续饲喂50天。
试验组6：切除大鼠双侧卵巢后，诱导大鼠骨质疏松，正常饲喂，每天口服对比例5制备的发酵饮品10ml一次，连续饲喂50天。
试验方法：饲养50天后处死，剥离左、右侧股骨，剔除软组织后，将大鼠左侧股骨在105℃烘箱中烘干至恒重，将股骨研成粉末，精密称取适量，以原子吸收法测定骨钙含量。采用双能X线骨密度仪测定右侧股骨的骨密度，结果如表1所示。
表1 去除卵巢大鼠股骨重量、股钙含量、骨密度的比较
注：▲表示与对照组比较P＜0.05，*表示与模型组比较P＜0.05。
由表1可以看出，通过去卵巢手术后模型组的股骨重量、骨钙含量与股骨密度显著低于对照组，说明手术造成大鼠骨密度低下模型。通过口服本发明提供的发酵饮品后，实施例2（试验组1）和对比例1（试验组2）可明显提高大鼠骨钙含量，其中实施例2明显改善大鼠的骨密度低下症状，对比例2~5并不能明显提高大鼠骨钙含量或有效缓解大鼠的骨密度低下症状。
实施例6测试各发酵饮品对人体钙吸收的影响
健康志愿受试者30名，男女各半，年龄25~28岁，体重55~70kg，均无心血管、呼吸消化系统病史，无药物过敏，体检正常，肝功能正常，受试前一周未服用其他药物。试验期间禁食牛奶、鸡蛋、骨头汤等高钙食物。30名受试者随机分为6组，每组5人。实验分为2d，第一天，所有受试者正常饮食，每组收集24h内的尿液。
第二天试验如下：
下列各组所服用钙片均为统一规格，主要由活性钙组成，每片含元素钙100mg。
对照组：正常饮食，每隔4h服用一片钙片；
试验1组：正常饮食，每隔4h服用一片钙片，口服实施例2制备的发酵饮品10ml；
试验2组：正常饮食，每隔4h服用一片钙片，口服对比例1制备的发酵饮品10ml；
试验3组：正常饮食，每隔4h服用一片钙片，口服对比例2制备的发酵饮品10ml；
试验4组：正常饮食，每隔4h服用一片钙片，口服对比例3制备的发酵饮品10ml；
试验5组：正常饮食，每隔4h服用一片钙片，口服对比例4制备的发酵饮品10ml；
试验6组：正常饮食，每隔4h服用一片钙片，口服对比例5制备的发酵饮品10ml；
每组分别收集24h内总尿液，并采用全自动生化分析仪测定尿钙量，结果如表2所示。
表2 人体尿钙检测数据
注：▲表示与对照组比较P＜0.05。
表2的测定结果统计分析显示，第一天服用前各组别尿钙含量无显著差异（P＞0.05），第二天服用钙片及发酵饮品后，所有试验组尿钙均有增加，说明钙片可以补充人体内钙元素含量，其中实施例2（试验1组）使受试者尿钙增加最多，尿钙增加量为412.7mg，与对照组有显著差异（P＜0.05），说明实施例2可有效促进钙元素吸收。
尽管通过优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1. 一种副干酪乳杆菌SF-L31，其特征在于，副干酪乳杆菌（Lactobacillus paracasei）SF-L31已于2021年9月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.23492，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
2.一种提高钙吸收的双菌发酵饮品，其特征在于，双菌发酵饮品的原料包括被发酵底物和调味料，被发酵底物经干酪乳杆菌SF-L-12、如权利要求1所述的副干酪乳杆菌SF-L31发酵后，与调味料混合调味制得具有提高钙吸收功能的双菌发酵饮品；
被发酵底物包括如下重量份的组分：净化水65~75份，茯苓提取物2~3份，党参提取物2~3份，枸杞提取物2~3份，山药粉2~3份，黑木耳粉2~5份，鸡内金粉2~4份，黄芪提取物1~2份，黑芝麻粉3~4份，海带提取物2~3份，牡蛎粉2~3份；
干酪乳杆菌（Lactobacillus casei）SF-L-12，已于2020年10月21日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.20927，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
3.如权利要求2所述的一种提高钙吸收的双菌发酵饮品，其特征在于，被发酵底物包括如下重量份的组分：净化水69份，茯苓提取物2份，党参提取物2份，枸杞提取物2份，山药粉3份，黑木耳粉3份，鸡内金粉2份，黄芪提取物1份，黑芝麻粉3份，海带提取物3份，牡蛎粉2份。
4.如权利要求2所述的一种提高钙吸收的双菌发酵饮品，其特征在于，调味料包括如下重量份的组分：蜂蜜3~4份，苹果浓缩汁3~5份。
5.如权利要求4所述的一种提高钙吸收的双菌发酵饮品，其特征在于，调味料包括如下重量份的组分：蜂蜜4份，苹果浓缩汁4份。
6.一种如权利要求2所述双菌发酵饮品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）首先将被发酵底物的各组分混合，得到混合浆料；
（2）将混合浆料输送至灭菌容器中，高温高压灭菌，冷却至30~40℃后得到灭菌液；
（3）将干酪乳杆菌SF-L-12与副干酪乳杆菌SF-L31分别接种到两个MRS液体培养基中，培养得到干酪乳杆菌SF-L-12接种剂与副干酪乳杆菌SF-L31接种剂；
（4）将干酪乳杆菌SF-L-12接种剂与副干酪乳杆菌SF-L31接种剂按体积比1:1~3混合后接种于灭菌液中，培养得到发酵液；
（5）将发酵液输送至高压喷雾破壁机中进行破壁处理，得到破壁发酵液；
（6）破壁发酵液与调味料混合调味后，进行巴氏灭菌，得发酵饮品。
7.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（2）中，在120℃下高压灭菌30min，然后冷却至35℃，得到灭菌液。
8.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（3）中，干酪乳杆菌SF-L-12与副干酪乳杆菌SF-L31的接种量为1%，37℃下培养18h得接种剂。
9.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（4）中，干酪乳杆菌SF-L-12接种剂与副干酪乳杆菌SF-L31接种剂的接种量为1%~4%，37℃下培养24h，得到发酵液。
10.如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤（5）中，高压喷雾破壁机的压力设置为60Mpa。
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