CN117007717A - 一种葡萄籽提取物中原花青素c1的测定方法 - Google Patents
一种葡萄籽提取物中原花青素c1的测定方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117007717A CN117007717A CN202310988280.0A CN202310988280A CN117007717A CN 117007717 A CN117007717 A CN 117007717A CN 202310988280 A CN202310988280 A CN 202310988280A CN 117007717 A CN117007717 A CN 117007717A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- procyanidine
- seed extract
- grape seed
- procyanidin
- sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229940087603 grape seed extract Drugs 0.000 title claims abstract description 42
- 235000002532 grape seed extract Nutrition 0.000 title claims abstract description 42
- 239000001717 vitis vinifera seed extract Substances 0.000 title claims abstract description 42
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 38
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 138
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 24
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 21
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims abstract description 19
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims abstract description 12
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims abstract description 11
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 6
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 3
- MOJZMWJRUKIQGL-FWCKPOPSSA-N Procyanidin C2 Natural products O[C@@H]1[C@@H](c2cc(O)c(O)cc2)Oc2c([C@H]3[C@H](O)[C@@H](c4cc(O)c(O)cc4)Oc4c3c(O)cc(O)c4)c(O)cc(O)c2[C@@H]1c1c(O)cc(O)c2c1O[C@@H]([C@H](O)C2)c1cc(O)c(O)cc1 MOJZMWJRUKIQGL-FWCKPOPSSA-N 0.000 claims description 43
- MOJZMWJRUKIQGL-XILRTYJMSA-N procyanidin C1 Chemical compound C1([C@@H]2[C@H](O)[C@H](C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)C2=C3O[C@@H]([C@H](O)[C@H](C3=C(O)C=C2O)C=2C(O)=CC(O)=C3C[C@H]([C@H](OC3=2)C=2C=C(O)C(O)=CC=2)O)C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=CC=C(O)C(O)=C1 MOJZMWJRUKIQGL-XILRTYJMSA-N 0.000 claims description 41
- MOJZMWJRUKIQGL-FQVWZTFVSA-N Procyanidin C1 Natural products O[C@H]1[C@@H](c2cc(O)c(O)cc2)Oc2c([C@@H]3[C@@H](O)[C@@H](c4cc(O)c(O)cc4)Oc4c3c(O)cc(O)c4)c(O)cc(O)c2[C@H]1c1c(O)cc(O)c2c1O[C@H]([C@H](O)C2)c1cc(O)c(O)cc1 MOJZMWJRUKIQGL-FQVWZTFVSA-N 0.000 claims description 40
- 229920001554 Procyanidin C1 Polymers 0.000 claims description 40
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 claims description 28
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 20
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 6
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical group CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 4
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 claims description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 abstract description 12
- 238000001514 detection method Methods 0.000 abstract description 12
- 230000004044 response Effects 0.000 abstract description 12
- 238000005457 optimization Methods 0.000 abstract description 7
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 abstract description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 21
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 18
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 17
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 14
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 7
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 5
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 5
- 239000012490 blank solution Substances 0.000 description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 3
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 3
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 3
- MOJZMWJRUKIQGL-WNCKYJNFSA-N Catechin-(4alpha->8)-gallocatechin-(4alpha->8)-catechin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@H](O)[C@@H](C3=C(O)C=C(O)C=C3O2)C2=C3O[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](C3=C(O)C=C2O)C=2C(O)=CC(O)=C3C[C@@H]([C@H](OC3=2)C=2C=C(O)C(O)=CC=2)O)C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=CC=C(O)C(O)=C1 MOJZMWJRUKIQGL-WNCKYJNFSA-N 0.000 description 2
- 229920002956 Procyanidin C2 Polymers 0.000 description 2
- XBJFCYDKBDVADW-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;formic acid Chemical compound CC#N.OC=O XBJFCYDKBDVADW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- -1 holding for 2min Chemical compound 0.000 description 2
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000013076 target substance Substances 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- XFZJEEAOWLFHDH-UHFFFAOYSA-N (2R,2'R,3R,3'R,4R)-3,3',4',5,7-Pentahydroxyflavan(48)-3,3',4',5,7-pentahydroxyflavan Natural products C=12OC(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)C(O)CC2=C(O)C=C(O)C=1C(C1=C(O)C=C(O)C=C1O1)C(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1 XFZJEEAOWLFHDH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100020865 EKC/KEOPS complex subunit LAGE3 Human genes 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 101001137983 Homo sapiens EKC/KEOPS complex subunit LAGE3 Proteins 0.000 description 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 description 1
- 238000000889 atomisation Methods 0.000 description 1
- 230000006399 behavior Effects 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000002452 interceptive effect Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013824 polyphenols Nutrition 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013558 reference substance Substances 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 239000012898 sample dilution Substances 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/62—Detectors specially adapted therefor
- G01N30/72—Mass spectrometers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
Abstract
本发明公开了一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法，包括步骤：（1）将葡萄籽提取物待测样品加入有机溶剂提取，得供试品溶液；（2）取供试品溶液，采用液质联用仪进行检测，采用外标法定量计算样品中原花青素C1含量；其中色谱条件为：C18色谱柱，以甲酸为流动相A，甲醇为流动相B进行梯度洗脱。本发明方法运用液质联用仪分析技术进行分析，通过采集离子模式和色谱条件的优化，不仅可以排除葡萄籽提取物中与原花青素C1互为旋光异构体的原花青素C2的干扰，特别是能够使原花青素C1与多种原花青素C的同分异构体进行有效分离，并提高了原花青素C1的响应值，从而进一步提高了原花青素C1含量检测的准确性。
Description
技术领域
本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法。
背景技术
专利CN114910578A公开了一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法，其通过对色谱柱，流动相及洗脱程序进行优化，可以分离葡萄籽提取物中其他多酚类物质，同时可以分离互为旋光异构体的原花青素C1和原花青素C2，从而实现对原花青素C1的定量分析。然而，经四极杆飞行时间液质联用仪分析发现，葡萄籽提取物中不仅存在原花青素C2，同时还存在多种原花青素C的同分异构体(见图1)，采用该测试方法并不能将原花青素C1和原花青素C的其他同分异构体进行有效分离，从而导致检测的原花青素C1含量不准确。且由图2可知，采用专利CN114910578A方法实施测定葡萄籽提取物中原花青素C1还存在基质干扰，基线上抬，正模式信号响应小，容易受基质影响定量不准，原花青素C1专属性不足的问题，原花青素C1含量的准确性有待进一步提高。因此，急需开发一种专属性强，能准确定量葡萄籽提取物中原花青素C1含量的测定方法。
发明内容
为解决上述问题，本发明的目的在于提供一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法，该方法不仅可以消除与原花青素C1互为旋光异构体的原花青素C2的干扰，特别是能够使原花青素C1与原花青素C的多种同分异构体进行有效分离，并提高了原花青素C1的响应值，从而进一步提高了原花青素C1含量检测的准确性。
本发明是通过以下技术方案实现：
一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法，包括以下步骤：
(1)将葡萄籽提取物待测样品加入有机溶剂提取，得供试品溶液；
(2)取供试品溶液，采用液质联用仪进行检测，采用外标法定量计算样品中原花青素C1含量；
其中色谱条件为：采用C18色谱柱，以体积浓度为0.05-0.5％的甲酸水溶液为流动相A，甲醇为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为：
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 98 | 2 |
| 2 | 98 | 2 |
| 3 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 20 | 78 | 22 |
| 22 | 5 | 95 |
| 26 | 5 | 95 |
| 27 | 98 | 2 |
| 30 | 98 | 2 |
质谱条件为：采用电喷雾负离子模式，以特征质荷比865.2为母离子，以特征质荷比286.9、577.0、575.1为子离子。
本发明方法采用有机溶剂对葡萄籽提取物待测样品进行提取，提取后供试品溶液用液质联用仪分析，以0.05-0.5％甲酸水溶液和甲醇作为流动相进行梯度洗脱，使用C18色谱柱进行原花青素同分异构体分离，并用外标法定量，得到葡萄籽提取物中原花青素C1的含量。
本发明通过采集离子模式，色谱柱，流动相及洗脱程序进行优化，可以分离葡萄籽提取物中多种原花青素C同分异构体，从而实现了对原花青素C1的准确定量。
优选的，步骤(1)中，所述有机溶剂为乙醇溶液、甲醇溶液或乙腈溶液，更优选为60-90％甲醇溶液。
优选的，步骤(2)中，所述甲酸浓度优选为0.1％。
优选的，步骤(2)中，所述C18色谱柱的5cm，内径为2.1mm，粒径为1.8μm。
优选的，步骤(2)中，所述C18色谱柱的柱温为25℃-40℃，流速为0.2-0.5mL/min。本发明与现有技术相比，具有如下优点：
本发明方法运用液质联用仪分析技术进行分析，通过采集负离子模式和色谱条件的优化，不仅可以排除葡萄籽提取物中与原花青素C1互为旋光异构体的原花青素C2的干扰，特别是能够使原花青素C1与原花青素C的多种同分异构体进行有效分离，并且提高了原花青素C1的响应值，从而进一步提高了原花青素C1含量检测的准确性。
本发明的检测方法专属性强，其线性、精密度、耐用性试验(稳定性)、专属性试验(空白)、检出限、定量限、准确度(回收率)试验，均符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求，该方法科学有效，能对葡萄糖籽提取物的原花青素C1含量起到质量控制的目的。
附图说明
图1为葡萄籽提取物经四极杆飞行时间液质联用仪分析色谱图；
图2为采用专利CN114910578A方法测定的色谱图；
图3为本发明原花青素C1标准品在Product Ion模式下的离子色谱图：
图4为专利CN114910578A正离子模式和离子选择的响应值；
图5为本发明负离子模式和离子选择的响应值；
图6为F5色谱柱(柱长15cm，内径4.6mm，粒径2.6μm)分析葡萄籽提取物的色谱图；
图7为C4色谱柱(柱长15cm，内径4.6mm，粒径3.6μm)分析葡萄籽提取物的色谱图；
图8为T3色谱柱(柱长10cm，内径2.1mm，粒径2.5μm)分析葡萄籽提取物的色谱图；
图9为C18色谱柱(柱长5cm，内径2.1mm，粒径1.8μm)分析葡萄籽提取物的色谱图；
图10为采用流动相选择一的色谱图；
图11为采用流动相选择二的色谱图；
图12为采用梯度洗脱程序一的色谱图；
图13为采用梯度洗脱程序二的色谱图；
图14为采用梯度洗脱程序三的色谱图；
图15为空白色谱图；
图16为标准工作溶液色谱图；
图17为样品溶液色谱图；
图18为标准工作曲线图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明具体的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
实施例1：
1仪器
液相色谱-质谱联用仪：液相质谱联用仪：1290InfinityⅡ型液相色谱仪(Agilent，美国)串联G6470B型质谱仪(Agilent，美国)；XSE205DU型电子天平(MettlerToledo，瑞士)。
2试剂
试剂：甲酸(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，一级用水。
对照品：
| 名称 | 厂家 | 批号 | 纯度 |
| 原花青素C1 | 安谱璀世 | 2354707 | 97.1％ |
提取溶液：300mL水，加入700mL甲醇，混匀。
0.1％甲酸水溶液：1000mL水，加入1mL甲酸，混匀。
3分析方法
3.1仪器条件与参数：
3.1.1液相条件
色谱柱：Agilent EclipsePlus C18 RRHD 1.8μm，2.1×50mm；
柱温：30℃；
进样体积：2μL；
流速：0.3mL/min；
流动相：A为0.1％甲酸水溶液，B为甲醇；
洗脱程序见下表1：
表1
| 时间(min) | 流动相A(％) | 流动相B(％) |
| 0 | 98 | 2 |
| 2 | 98 | 2 |
| 3 | 90 | 10 |
| 10 | 90 | 10 |
| 20 | 78 | 22 |
| 22 | 5 | 95 |
| 26 | 5 | 95 |
| 27 | 98 | 2 |
| 30 | 98 | 2 |
3.1.2质谱条件
电离方式：电喷雾负离子模式；
检测方式：多反应检测(MRM)；
雾化气压力：40psi；
离子喷雾电压：3000V；
干燥气温度：300℃；
干燥气流速：8L/min；
定性离子对、定量离子、碎裂电压和碰撞能量见下表2：
表2
| 中文名称 | 母离子(m/z) | 子离子(m/z) | 碎裂电压(V) | 碰撞能量(V) |
| 原花青素C1 | 865.2 | 286.9 | 160 | 30 |
| 原花青素C1 | 865.2 | 577.0 | 160 | 25 |
| 原花青素C1 | 865.2 | 575.1 | 160 | 20 |
286.9为定量离子碎片，577、575.1为定性离子碎片。
3.2对照品溶液的配制
精密称取原花青素C1对照品4.19mg，置于10mL容量瓶中，加入70％甲醇溶液溶解定容至刻度，摇匀，即得407μg/mL的对照储备液，同时作为加标溶液。
精密移取0.5mL对照储备液，置25mL容量瓶中，加70％甲醇溶液定容至刻度，摇匀，即得8.14μg/mL的对照中间液。
分别精密移取0.5mL、1.5mL、2.5mL、4.0mL、5.0mL对照中间液，置10mL容量瓶中，加70％甲醇溶液定容至刻度，摇匀，即得0.407μg/mL、1.221μg/mL、2.035μg/mL、3.256μg/mL、4.070μg/mL的标准工作溶液。
3.3标准工作曲线绘制
精密吸取工作标准液2μL，注入液相色谱-质谱联用仪，建立内标法标准曲线方程。
3.4供试品制备
精密称取均匀样品约0.1g，置于50mL容量瓶中，加入约40ml 70％甲醇溶液，摇匀，室温超声至充分溶解，约5min，取出，用70％甲醇溶液定容至容量瓶刻度，摇匀。精密移取1mL置于10mL容量瓶中，加入70％甲醇溶液定容至容量瓶刻度，摇匀，经滤膜过滤，即得样品供试液。
3.5结果计算：
式中：X—试样中原花青素C1的含量，g/100g；
C—试样溶液中原花青素C1的浓度，μg/mL；
M—试样的质量，g；
V—试样稀释的体积，mL；
K—单位转换系数，K＝0.0001。
4方法学验证
4.1方法优化试验
4.1.1离子模式的优化
离子模式的选择会导致目标物质的电离效果不同，从而影响目标物质的抗干扰能力和定量，电离效果强，响应高，抗干扰能力强，定量准确。本发明用液质联用仪对原花青素C1分析研究，负模式有较强的响应值，以特征质荷比865.2为母离子，以响应值较大的特征质荷比286.9、577.0、575.1为子离子(见图3)。本发明使用4.07μg/ml的原花青素C1对比CN114910578A测定方法不同离子模式和离子选择的响应值，见表3和图4-5：
表3
由上表可知，原花青素C1采用本发明负离子模式的响应值明显更高，抗干扰能力强，定量更准确。
4.1.2色谱柱的优化
葡萄籽提取物中存在多种原花青素C1的同分异构体，其色谱、质谱行为都非常相似，需开发合适的色谱条件，使原花青素C1到基线分离。
当分离度R≥1.5时,称为6σ分离,曝光峰面积为99.7％,R(>1.5)，称为完全分离。本发明试验了不同类型的色谱柱，对原花青素C1进行分离。
由图6色谱图显示F5色谱柱分析葡萄籽提取物，原花青素C同分异构体与杂质集中在25min-27min，原花青素C1的分离度R＝1，不能满足完全分离的要求；
由图7色谱图显示C4色谱柱分析葡萄籽提取物，原花青素C同分异构体与杂质没有明显的色谱峰，C4色谱柱对目标物没有明显保留作用，不能满足完全分离的要求；
由图8色谱图显示T3色谱柱分析葡萄籽提取物，原花青素C1与同分异构体或杂质在21min-22min内，色谱峰之间重叠，原花青素C1的分离度R＝1.2，不能满足完全分离的要求；
由图9色谱图显示C18色谱柱分析葡萄籽提取物，原花青素C1与同分异构体或杂质分离效果明显，原花青素C1的分离度R＝2.7，满足完全分离的要求；因此，本发明优选C18色谱柱，原花青素C1达到基线分离，且峰型最好。
4.1.3流动相选择及梯度洗脱程序的优化
要实现原花青素C1与多种同分异构体的有效分离，流动相及洗脱程序的选择也是关键技术之一。
流动相的选择一：以乙腈-甲酸酸水为流动相检测葡萄籽提取物，流速0.3ml/min,起始2％乙腈,保持2分钟，3分钟内乙腈由2％递增至10％，10％乙腈保持7分钟，10分钟内乙腈由10％递增至22％，2分钟内乙腈由22％递增至95％，95％乙腈保持4分钟，1分钟内恢复2％乙腈保持3分钟，其色谱图如图10所示(PCC1保留时间8.579min)。结果显示，乙腈-甲酸水不能很好分离样品中原花青素C1峰与其它同分异构体或杂质峰。
流动相的选择二：以0.1％甲酸溶液和甲醇为流动相检测葡萄籽提取物，流速0.3ml/min,起始2％甲醇,保持2分钟，3分钟内甲醇由2％递增至10％，10％甲醇保持7分钟，10分钟内甲醇由10％递增至22％，2分钟内甲醇由22％递增至95％，95％甲醇保持4分钟，1分钟内恢复2％甲醇保持3分钟。其色谱图如图11所示(PCC1保留时间17.232min)，结果显示，0.1％甲酸溶液和甲醇可以分离样品中原花青素C1峰与其它同分异构体或杂质。
梯度洗脱程序一：流速0.3ml/min,起始5％甲醇,保持1分钟，2分钟内甲醇由5％递增至30％，5分钟内甲醇由30％递增至80％，80％甲醇保持2分钟，2分钟内恢复5％甲醇保持3分钟。葡萄籽提取物图谱如图12所示，原花青素C1(保留时间3.25min)与同分异构体或杂质没有很好的分离度。由此可知，甲醇洗脱梯度幅度过大可使原花青素C1和同分异构体或杂质无法分离。
梯度洗脱程序二：流速0.3ml/min,起始2％甲醇,保持2分钟，3分钟内甲醇由2％递增至10％，7分钟内甲醇由10％递增至50％，1分钟内甲醇由5％递增至80％，80％甲醇保持4分钟，1分钟内恢复2％甲醇保持3分钟。葡萄籽提取物图谱如图13所示，原花青素C1(保留时间7.107min)与同分异构体或杂质没有很好的分离，杂峰个数增多。由此可知，甲醇洗脱梯度幅度降低可使原花青素C1和同分异构体或杂质分离情况改善。
梯度洗脱程序三：流速0.3ml/min,起始2％甲醇,保持2分钟，3分钟内甲醇由2％递增至10％，10％甲醇保持7分钟，10分钟内甲醇由10％递增至22％，2分钟内甲醇由22％递增至95％，95％甲醇保持4分钟，1分钟内恢复2％甲醇保持3分钟。葡萄籽提取物图谱如图14所示，原花青素C1(保留时间17.232min)与同分异构体或杂质有很好的分离，基线平整。此梯度洗脱程序可有效分离原花青素C1和同分异构体或杂质。
4.2专属性试验
4.2.1试验方法
按3.4试样制备方法处理空白溶液，按3.1色谱条件测定空白溶液，与原花青素C1标准工作溶液、供试液的出峰时间对比。
4.2.2试验结论：
如图15-17，空白溶液在原花青素C1的出峰时间处均无峰，表明空白对测定结果基本无干扰。
4.3线性范围确认
4.3.1试验数据：
表4
4.3.2标准工作曲线图
以浓度的为横坐标，峰面积的为纵坐标，绘制标准工作曲线如图16所示。
4.3.3线性试验结论
线性评价：原花青素C1相关系数R分别为0.999666，所以用该方法测定原花青素C1在浓度为0.407μg/mL至4.070μg/mL之间呈现良好的线性，符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求【GB/T27404-2008要求相关系数R≥0.99】。
4.4检出限和定量限
分析方法的检出限DL和定量限QL由信噪比(S/N)计算。DL定义为S/N＝3时对应的待分析浓度，QL定义为S/N＝10时对应的待分析浓度。
6.3.1检出限
当信噪比(S/N)为3时，原花青素C1检出限为20.35ng/mL；样品取样量0.1g，定容500mL时，方法的原花青素C1检出限为102μg/g。
6.3.2定量限
当信噪比(S/N)为10时，原花青素C1定量限为40.7ng/mL；样品取样量0.1g，定容500mL时，方法的原花青素C1定量限为204μg/g。
4.5精密度试验
4.5.1试验方法
称取6份样品，按3.4试样制备方法处理样品，检测样品含量，计算其RSD(％)。
4.5.2试验数据(见下表5)【葡萄籽提取物】
表5
4.5.3试验结论
6份样品原花青素C1含量的RSD为1.9％，表明该方法有较好的精密度，符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求【GB/T27404-2008要求RSD≤2.7％】。
4.6耐用性试验(稳定性)
4.6.1试验方法：
将原花青素C1供试品溶液分别在室温下放置0h、1h、3h、5h、7h、9h后，按5.1条件测定浓度(μg/mL)，计算其RSD(％)。
4.6.2试验数据见表6：
表6
4.6.3试验结论
原花青素C1供试品溶液分别在室温下放置0h、1h、3h、5h、7h、9h后，原花青素C1浓度的RSD为1.2％，表明原花青素C1供试品溶液在室温下9小时内的稳定性良好。
4.7准确度试验(回收率)
4.7.1试验方法
加标：精密称取约0.1g样品9份(已知样品的原花青素C1含量：0.47g/100g)，分成3组，每组3份，各组分别精密加入对照储备液(407μg/mL)0.5mL、1.0mL、1.5mL。按5.4试样制备方法处理样品。
4.7.2试验数据如下表7【试验样品为：葡萄籽提取物】
表7
测得加入量＝加标样品测得量-样品测得量；
回收率(％)＝测得加入量/理论加入量×100％。
4.7.3试验结论
平均回收率为：102.5％，RSD为2.2％；符合GB/T27404-2008《实验室质量控制规范》的要求【GB/T27404-2008要求回收率为95～105％】。
综上，本发明测定方法通过改变离子模式，选择C18色谱柱，优化洗脱程序，使得葡萄籽提取物中的原花青素C1和同分异构体或杂质有更好的分离，提高了响应值，准确度进一步提高。
Claims (6)
1.一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将葡萄籽提取物待测样品加入有机溶剂提取，得供试品溶液；
（2）取供试品溶液，采用液质联用仪进行检测，采用外标法定量计算样品中原花青素C1含量；
其中色谱条件为：采用C18色谱柱，以体积浓度为0.05-0.5%的甲酸水溶液为流动相A，甲醇为流动相B进行梯度洗脱，梯度洗脱的程序为：
2.质谱条件为：采用电喷雾负离子模式，以特征质荷比865.2为母离子，以特征质荷比286.9、577.0、575.1为子离子。
3.根据权利要求1所述的一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法，其特征在于，步骤（2）中，所述甲酸的质量浓度为0.1%。
4.根据权利要求1所述的一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法，其特征在于，步骤（1）中，所述有机溶剂为乙醇溶液、甲醇溶液或乙腈溶液，优选为60%-90%的甲醇溶液。
5.根据权利要求1所述的一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法，其特征在于，步骤（2）中，所述C18色谱柱的5cm，内径为2.1mm，粒径为1.8μm。
6. 根据权利要求1所述的一种葡萄籽提取物中原花青素C1的测定方法，其特征在于，步骤（2）中，所述C18色谱柱的柱温为25℃-40℃，流速为0.2-0.5 mL/min。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310988280.0A CN117007717A (zh) | 2023-08-07 | 2023-08-07 | 一种葡萄籽提取物中原花青素c1的测定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310988280.0A CN117007717A (zh) | 2023-08-07 | 2023-08-07 | 一种葡萄籽提取物中原花青素c1的测定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN117007717A true CN117007717A (zh) | 2023-11-07 |
Family
ID=88568681
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310988280.0A Pending CN117007717A (zh) | 2023-08-07 | 2023-08-07 | 一种葡萄籽提取物中原花青素c1的测定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN117007717A (zh) |
-
2023
- 2023-08-07 CN CN202310988280.0A patent/CN117007717A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Silva et al. | Improved quantitative detection of 11 urinary phthalate metabolites in humans using liquid chromatography–atmospheric pressure chemical ionization tandem mass spectrometry | |
| Jagerdeo et al. | Screening of cocaine and its metabolites in human urine samples by direct analysis in real-time source coupled to time-of-flight mass spectrometry after online preconcentration utilizing microextraction by packed sorbent | |
| CN107884493B (zh) | 全二维气相色谱-飞行时间质谱分析环境样品中短链氯化石蜡的方法 | |
| CN110031557B (zh) | 一种盐酸法舒地尔中5-异喹啉磺酸甲酯、5-异喹啉磺酸乙酯的检测方法 | |
| CN111289637B (zh) | 一种检测苹果汁中展青霉素的方法 | |
| CN108918711A (zh) | 一种烟叶中多酚类化合物的检测方法 | |
| Jagerdeo et al. | Rapid screening for drugs of abuse in biological fluids by ultra high performance liquid chromatography/Orbitrap mass spectrometry | |
| CN114019062B (zh) | 一种利福平中有关物质的检测方法 | |
| CN102980968A (zh) | 一种尿液中肌酐的液相色谱串联质谱测定方法 | |
| GB2523850A (en) | Improved time of flight quantitation using alternative characteristic ions | |
| CN110044998B (zh) | 通过质谱法定量他莫昔芬及其代谢物 | |
| CN111458417A (zh) | 联合检测待测样品中多种抗生素的方法及试剂盒 | |
| CN115728408B (zh) | 一种同时测定黄花蒿中七种青蒿素类相关化合物的方法 | |
| CN117007717A (zh) | 一种葡萄籽提取物中原花青素c1的测定方法 | |
| CN108956812B (zh) | 一种土壤中水溶性有机氯农药残留的检测方法 | |
| CN114689754B (zh) | 一种与肺结核相关的血清代谢标志物及其应用 | |
| Deng et al. | Quality assessment and origin tracing of Guangdong Liangcha granules using direct mass spectrometry fingerprinting | |
| US10436794B1 (en) | Protocol for preconcentration and quantification of microcystins using LC-MS | |
| CN112903836B (zh) | 体外培育熊胆粉中异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷的测定方法 | |
| KR20090027896A (ko) | 아민 카르바밀레이티드 유도체화와액체크로마토그래피/전기분무-이중질량분석기를 이용한인체의 뇨 또는 혈청에서의 폴리아민 검출 방법 | |
| CN101210928B (zh) | 用功能糖芯片及飞行质谱仪分析糖结合蛋白的方法 | |
| CN107515262B (zh) | 同时测定动物血浆中林可霉素和庆大霉素的液质联用方法 | |
| CN105699575A (zh) | 高效液相色谱串联质谱技术检测唾液中皮质醇的方法及试剂盒 | |
| CN111650302B (zh) | 一种辛基酚和壬基酚同分异构体的分离检测方法 | |
| CN114034779B (zh) | 气质联用法测定样品中的4,4-二(二甲氨基)-4-甲氨基三苯甲醇 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |