CN116997358A - 对缺失egfr激活突变的癌症的治疗 - Google Patents

对缺失egfr激活突变的癌症的治疗 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种对患有肿瘤缺失至少一个EGFR激活突变的癌症的受试者的治疗。

Description

对缺失EGFR激活突变的癌症的治疗
相关申请的交叉引用
本申请要求于2021年3月9日提交的美国临时申请序列号63/158,552的优先权。上述申请的全部内容全文以引用方式并入本文。
以电子方式提交的参考序列表
本申请含有序列表，该序列表以电子方式经由EFS-Web作为ASCII格式化序列表提交，文件名为“JBI6507WOPCT1SEQLIST.txt”，创建日期为2022年3月1日，并且大小为29KB。经由EFS-Web提交的该序列表是本说明书的一部分并且全文以引用方式并入本文。
技术领域
本发明涉及一种对患有肿瘤缺失至少一个EGFR激活突变的癌症的受试者的治疗。
背景技术
表皮生长因子受体(EGFR)和受体酪氨酸激酶间充质-上皮转换因子(c-Met)两者在癌症中的单独作用已被充分确立，使得这些靶标对于联合疗法是有吸引力的。两种受体通过相同的存活和抗凋亡途径(ERK和AKT)发信号；因此，联合抑制这一对可限制补偿路径激活的可能性，从而改善总体功效。
基于致癌驱动突变的晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的分子分割已改善了具有可操作的驱动突变的患者的总体存活和生活质量。
埃万妥单抗是靶向EGFR和c-MET的双特异性抗体。在临床试验中，该双特异性抗体的临床活性在一系列EGFR激活突变中进行了调查，但尚未对治疗对EGFR呈阳性但缺失EGFR激活突变的肺癌进行评估。
发明内容
需要改进的治疗剂或治疗剂的组合来开发对肿瘤包括缺失激活突变的EGFR的癌症的更有效治疗。
本公开提供了一种治疗患有对EGFR呈阳性并且缺失至少一个EGFR激活突变的癌症的受试者的方法，该方法包括向患有对EGFR呈阳性并且缺失至少一个EGFR激活突变的癌症的该受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗-表皮生长因子受体(EGFR)/肝细胞生长因子受体(c-Met)抗体。
本公开还提供了一种用双特异性抗EGFR/c-Met抗体治疗患有癌症的受试者的方法，该方法包括：
a)提供来自所述受试者的生物样品；
b)确定该样品中EGFR激活突变的存在或不存在；
c)向被确定为缺失EGFR激活突变的该受试者施用该双特异性抗EGFR/c-Met抗体或提供该双特异性抗EGFR/c-Met抗体的施用。
在一个实施方案中，至少一个激活突变是增加EGFR的至少一种生物活性的突变。
在一个实施方案中，EGFR的该至少一种生物活性选自由以下组成的组：酪氨酸激酶活性、配体非依赖性信号传导、细胞增殖增加、MAPK/ERK通路的信号传导、基因转录、二聚化(EGFR:EGFR)以及异源二聚化(EGFR:HER2或EGFR:HER3)。
在一个实施方案中，增加EGFR的该至少一种生物活性的该至少一个激活突变包括选自由以下组成的组的至少一个突变：L718Q、G719A、G719X(X为任何氨基酸)、L861X(X为任何氨基酸)、L858R、E746K、L747S、E749Q、A750P、A755V、V765M、C797S、L858P或T790M置换；E746-A750的缺失；R748-P753的缺失；Ala(A)在M766与A767之间的插入；Ser、Val和Ala(SVA)在S768与V769之间的插入；Asn和Ser(NS)在P772与H773之间的插入；一个或多个氨基酸在D761与E762之间、A763与Y764之间、Y764与Y765之间、M766与A767之间、A767与V768之间、S768与V769之间、V769与D770之间、D770与N771之间、N771与P772之间、P772与H773之间、H773与V774、V774与C775之间的插入；EGFR外显子20中的一个或多个缺失；EGFR外显子20、S768I、L861Q和G719X(X为任何氨基酸)中的一个或多个插入。
在一个实施方案中，该方法还包括：确定在选自由KRAS、PIK3CA和PTEN组成的组的任何一个基因中至少一个突变的存在或不存在；以及向被确定为具有缺失激活突变的该EGFR并且被确定为缺失在选自由KRAS、PIK3CA和PTEN组成的组的任何一个基因中的至少一个突变的该受试者施用该双特异性抗EGFR/c-Met抗体或提供该双特异性抗EGFR/c-Met抗体的施用。
在一个实施方案中，KRAS中的该至少一个突变选自由G12V、G12C、G12A和G12D组成的组。
在一个实施方案中，KRAS中的该至少一个突变是G12C。
在一个实施方案中，PI3K中的该至少一个突变选自由E545K、H1047L和PI3K扩增组成的组。
在一个实施方案中，PTEN中的该至少一个突变是PTEN缺失。
在一个实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体包含：特异性结合EGFR的第一结构域和特异性结合c-Met的第二结构域，其中该第一结构域包含SEQ ID NO:1的重链互补决定区1(HCDR1)、SEQ ID NO:2的HCDR2、SEQ ID NO:3的HCDR3、SEQ ID NO:4的轻链互补决定区1(LCDR1)、SEQ ID NO:5的LCDR2和SEQ ID NO:6的LCDR3；并且其中结合c-Met的第二结构域包含SEQ ID NO:7的HCDR1、SEQ ID NO:8的HCDR2、SEQ ID NO:9的HCDR3、SEQ ID NO:10的LCDR1、SEQ ID NO:11的LCDR2和SEQ ID NO:12的LCDR3。
在一个实施方案中，特异性结合EGFR的第一结构域包含SEQ ID NO:13的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:14的轻链可变区(VL)，并且特异性结合c-Met的第二结构域包含SEQID NO:15的VH和SEQ ID NO:16的VL。
在一个实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体是IgG1同种型。
在一个实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体包含SEQ ID NO:17的第一重链(HC1)、SEQ ID NO:18的第一轻链(LC1)、SEQ ID NO:19的第二重链(HC2)和SEQ ID NO:20的第二轻链(LC2)。
在一个实施方案中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括一个或多个Fc沉默突变。
在一个实施方案中，该一个或多个Fc沉默突变降低与Fcγ受体的亲和力。
在一个实施方案中，该一个或多个Fc沉默突变包括V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S。
在一个实施方案中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括岩藻糖含量介于约1％至约15％之间的双触角(biantennary)聚糖结构。
在一个实施方案中，受试者对于用一种或多种先前抗癌疗法进行的治疗具有复发性或抵抗性。
在一个实施方案中，一种或多种先前抗癌疗法包括一种或多种化学治疗剂、检查点抑制剂、靶向抗癌疗法或激酶抑制剂或它们的任何组合。
在一个实施方案中，一种或多种先前抗癌疗法包括卡铂、紫杉醇、吉西他滨、顺铂、长春瑞滨、多西他赛、帕博西尼、克唑替尼、PD-(L)1轴抑制剂、EGFR抑制剂、c-Met抑制剂、HER2抑制剂、HER3抑制剂、HER4抑制剂、VEGFR抑制剂、AXL抑制剂、埃罗替尼、吉非替尼、拉帕替尼、凡德他尼、阿法替尼、奥希替尼、拉泽替尼、波齐替尼、克里替尼、卡博替尼、卡马替尼、阿昔替尼、乐伐替尼、尼达尼布、瑞格非尼、帕唑帕尼、索拉非尼或舒尼替尼或它们的任何组合。
在一个实施方案中，受试者是未接受过治疗的。
在一个实施方案中，对缺失激活突变的该EGFR呈阳性的癌症对选自由以下组成的组的基因中的至少一个突变呈阳性：ALK、APC、BRAF、BRCA1、BRCA2、CDKN2A、CDKN2B、CTNNB1、ERBB2、ERBB3、FGFR3、KIT、LRP1B、MET、MLH1、MSH3、NOTCH1、NTRK1、RET、ROS1、STK11、TP53以及VEGFA。
在一个实施方案中，癌症是肺癌、胃癌、结直肠癌、脑癌、源自上皮细胞的癌症、乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌、肛门癌、前列腺癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、咽癌、鼻癌、胰腺癌、皮肤癌、口腔癌、舌癌、食管癌、阴道癌、宫颈癌、脾癌、睾丸癌、胃癌、胸腺癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌、肝细胞癌(HCC)或者散发性或遗传性乳头状肾细胞癌(PRCC)或它们的任何组合。
在一个实施方案中，肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌(SCLC)或肺腺癌、肺肉瘤样癌、或它们的任何组合。
在一个实施方案中，该方法还包括向受试者施用一种或多种抗癌疗法。
在一个实施方案中，所述一种或多种抗癌疗法包括化学疗法、放射疗法、手术、靶向抗癌疗法、激酶抑制剂或它们的任何组合。
在一个实施方案中，激酶抑制剂是EGFR抑制剂、c-Met抑制剂、HER2抑制剂、HER3抑制剂、HER4抑制剂、VEGFR抑制剂或AXL抑制剂。
在一个实施方案中，激酶抑制剂是埃罗替尼、吉非替尼、拉帕替尼、凡德他尼、阿法替尼、奥希替尼、拉泽替尼、波齐替尼、克里替尼、卡博替尼、卡马替尼、阿昔替尼、乐伐替尼、尼达尼布、瑞格非尼、帕唑帕尼、索拉非尼或舒尼替尼。
在一个实施方案中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体以介于约140mg和约2240mg之间的剂量施用。
在一个实施方案中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg、约1500mg、约1550mg、约1575mg、约1600mg、约1650mg、约1700mg、约1750mg、约1800mg、约1850mg、约1900mg、约1950mg、约2000mg、约2050mg、约2100mg、约2150mg、约2200mg、或约2240mg的剂量施用。
在一个实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以1050mg的剂量施用。
在一个实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以1400mg的剂量施用。
在一个实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周两次、每周一次、两周一次、三周一次或四周一次地施用。
在一个实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以1575mg的剂量施用。
在一个实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以1600mg的剂量施用。
在一个实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以2100mg的剂量施用。
在一个实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以2240mg的剂量施用。
在一个实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周两次、每周一次、两周一次、三周一次或四周一次地施用。
在一个实施方案中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体是静脉内施用的。
在一个实施方案中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体是皮下施用的。
附图说明
图1A至图1B示出针对EGFR(图1A)和MET(图1B)绘制的作为IHC分数的受体表达与作为PLA分数的信号传导。
图2A至图2C示出埃万妥单抗、Fc沉默EGFR/MET或同种型对照在针对LXFA677(图2A)、LXFA1584(图2B)和LXFA2158(图2C)的小鼠异种移植肿瘤中的代表性体内功效绘图。
图3A至图3D示出在具有缺失激活突变的EGFR的所选PDX模型中关于EGFR IHC H分数(图3A)和PLA分数(图3B)以及MET IHC H分数(图3C)和PLA分数(图3D)绘制的以肿瘤生长抑制％(TGI％)形式的埃万妥单抗功效。
图4A至图4C示出在具有缺失激活突变的EGFR的PDX模型中常见癌基因的表达(图4A)和突变状态(图4B)，其中，测试了以肿瘤生长抑制％(TGI％)形式示出的功效(图4C)。箭头指示KRAS或PI3K通路中的突变的模型。
图5A至图5B示出在选择模型中以肿瘤生长抑制％(TGI％)形式示出的埃万妥单抗功效与针对EGFR(图5A)和MET(图5B)的组合的IHC H分数和PLA分数(IHC+PLA)的相关性绘图。
图6示出以肿瘤生长抑制％(TGI％)形式示出的埃万妥单抗功效与由使用每千碱基百万转录物(TPM)的RNA-Seq测量的EGFR配体双调蛋白(AREG)的表达的相关性绘图。
具体实施方式
定义
本说明书中所引用的所有出版物，包括但不限于专利和专利申请均以引用方式并入本文，如同在本文中完整给出。
应当理解，本文所用的术语只是为了描述具体实施方案，并非旨在进行限制。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同。
虽然与本文所述的那些方法和材料相似或等效的任意方法和材料都可以用于检验本发明的实践中，然而本文中描述示例性材料和方法。在描述和要求保护本发明时，将使用以下术语。
当提供一个列表时，除非另行指出，否则应当理解，该列表中的每个单独元素和该列表的每种组合都是单独的实施方案。例如，作为“A、B或C”呈现的实施方案的列表将被理解为包括实施方案“A”、“B”、“C”、“A或B”、“A或C”、“B或C”或者“A、B或C”。
如本说明书和所附权利要求中所用，除非内容另有明确说明，否则单数形式“一个”、“一种”和“所述”包括复数指代。因此，例如，对“一个细胞”的提及包括两个或更多个细胞的组合等等。
多个列举的要素之间的连接术语“和/或”被理解为涵盖单个选项和组合选项两者。例如，在两个要素由“和/或”连接的情况下，第一种选项是指在没有第二个要素的情况下适用第一个要素。第二种选项是指在没有第一个要素的情况下适用第二个要素。第三种选项是指适合一起使用第一要素和第二要素。这些选项中的任一种均被理解为落在含义内，并且因此满足如本文所用的术语“和/或”的要求。多于一种选项的并行适用性也被理解为落在含义内，并且因此满足术语“和/或”的要求。
过渡术语“包括”、“基本上由……组成”和“由……组成”旨在暗示它们在专利用语中的公认含义；即，(i)“包括”与“包含”、“含有”或“其特征在于”同义，并且是包括端值在内或末端开放的，并且不排除附加的、未列出的要素或方法步骤；(ii)“由……组成”排除权利要求书未指定的任何要素、步骤或成分；以及(iii)“基本上由……组成”将权利要求的范围限制于指定的材料或步骤“以及本质上不影响受权利要求书保护的发明的基本及新颖特征的材料或步骤”。还提供了以短语“包括”(或其等同形式)描述的实施方案，如以“由……组成”和“基本上由……组成”独立描述的那些实施方案。
“共同施用”、“与......一起施用”、“与......联合施用”、“与......联合”等涵盖向单个患者施用所选择的治疗剂或药物，并且旨在包括将这些治疗剂或药物通过相同或不同的施用途径或在相同或不同的时间施用的治疗方案。
“分离的”是指已从产生分子的系统(诸如重组细胞)的其他组分中基本上分离和/或纯化出来的分子(诸如合成多核苷酸、多肽载体或病毒)的同质群体，以及已经受至少一个纯化或分离步骤的蛋白质。“分离的”是指基本上不含其他细胞材料和/或化学物质的分子，并且涵盖分离至更高纯度(诸如80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％纯度)的分子。
“治疗(Treat/treating/treatment)”疾病或病症诸如癌症是指实现以下项中的一者或多者：降低病症的严重程度和/或减少其持续时间，抑制所治疗病症的特征性症状的恶化，限制或防止先前患有病症的受试者中病症的复发，或者限制或防止先前有病症的症状的受试者中症状的复发。
“预防(Prevent/preventing/prevention/prophylaxis)”疾病或病症意指预防受试者中出现病症。
“诊断(Diagnosing/diagnosis)”是指确定受试者是否患有给定疾病或病症或者是否可能在将来发展成给定疾病或病症或者是否可能响应先前诊断的疾病或病症的治疗(即根据响应治疗的可能性对患者群体进行分层)的方法。诊断通常由医师基于待诊断的疾病的一般指南或指示受试者可能响应特定治疗的其他标准来执行。
“响应”、“响应性”或“可能响应”是指任何类型的改善或阳性响应，诸如一种或多种症状的减轻或改善、疾病程度的减弱、疾病状态的稳定(即，未恶化)、疾病的预防传播、疾病进展的延迟或减慢、疾病状态的改善或缓和、以及缓解(不论是部分缓解还是全部缓解)，不论是可检测的还是不可检测的。
“新诊断的”是指已被诊断患有表达EGFR或c-Met的癌症但尚未接受多发性骨髓瘤治疗的受试者。
“治疗有效量”是指在所需剂量和时间段有效实现期望的治疗结果的量。治疗有效量可根据以下因素变化：诸如个体的疾病状态、年龄、性别和体重，以及治疗剂或治疗剂组合在个体中引发期望的应答的能力。有效的治疗剂或治疗剂的组合的示例性指标包括例如改善患者的健康。
“难治性”是指对治疗无应答的疾病。难治性疾病可在治疗之前或开始时对治疗具有抗性，或者难治性疾病可在治疗期间变得具有抗性。
“复发”是指在先前用治疗剂治疗之后改善一段时间之后疾病或疾病的迹象和症状的再现。
“受试者”包括任何人或非人动物。“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物和非哺乳动物，诸如非人灵长类、绵羊、狗、猫、马、牛、鸡、两栖动物、爬行动物等。术语“受试者”和“患者”在本文中互换使用。
“约”是指处于如本领域的普通技术人员所确定的特定值的可接受误差范围之内，其将部分取决于该值是如何测量或测定的，即测量系统的限制。在特定测定、结果或实施方案的上下文中，除非实施例或说明书其他地方内另有明确说明，否则“约”意指在根据本领域惯例的一个标准偏差之内或多至5％的范围(取较大者)。
“癌症”是指细胞的异常生长，它们倾向于以不受控制的方式增殖，并且在一些情况下，会转移(扩散)到患者身体的其他区域。
“表达EGFR或c-Met的癌症”是指具有可检测的EGFR或c-Met表达或者具有EGFR或c-Met突变或扩增的癌症。EGFR或c-Met表达、扩增和突变状态可以使用已知方法检测，诸如测序、荧光原位杂交、免疫组织化学、流式细胞术或蛋白质印迹。
“表皮生长因子受体”或“EGFR”指具有UniProt标识符：P00533-1中所示的氨基酸序列(SEQ ID NO:21)的人EGFR(也称为HER1或ErbB1(Ullrich等人，Nature 309:418-425,1984))，以及其天然存在的变体或突变体。
SEQ ID NO:21：
MRPSGTAGAALLALLAALCPASRALEEKKVCQGTSNKLTQLGTFEDHFLSLQRMFNNCEVVLGNLEITYVQRNYDLSFLKTIQEVAGYVLIALNTVERIPLENLQIIRGNMYYENSYALAVLSNYDANKTGLKELPMRNLQEILHGAVRFSNNPALCNVESIQWRDIVSSDFLSNMSMDFQNHLGSCQKCDPSCPNGSCWGAGEENCQKLTKIICAQQCSGRCRGKSPSDCCHNQCAAGCTGPRESDCLVCRKFRDEATCKDTCPPLMLYNPTTYQMDVNPEGKYSFGATCVKKCPRNYVVTDHGSCVRACGADSYEMEEDGVRKCKKCEGPCRKVCNGIGIGEFKDSLSINATNIKHFKNCTSISGDLHILPVAFRGDSFTHTPPLDPQELDILKTVKEITGFLLIQAWPENRTDLHAFENLEIIRGRTKQHGQFSLAVVSLNITSLGLRSLKEISDGDVIISGNKNLCYANTINWKKLFGTSGQKTKIISNRGENSCKATGQVCHALCSPEGCWGPEPRDCVSCRNVSRGRECVDKCNLLEGEPREFVENSECIQCHPECLPQAMNITCTGRGPDNCIQCAHYIDGPHCVKTCPAGVMGENNTLVWKYADAGHVCHLCHPNCTYGCTGPGLEGCPTNGPKIPSIATGMVGALLLLLVVALGIGLFMRRRHIVRKRTLRRLLQERELVEPLTPSGEAPNQALLRILKETEFKKIKVLGSGAFGTVYKGLWIPEGEKVKIPVAIKELREATSPKANKEILDEAYVMASVDNPHVCRLLGICLTSTVQLITQLMPFGCLLDYVREHKDNIGSQYLLNWCVQIAKGMNYLEDRRLVHRDLAARNVLVKTPQHVKITDFGLAKLLGAEEKEYHAEGGKVPIKWMALESILHRIYTHQSDVWSYGVTVWELMTFGSKPYDGIPASEISSILEKGERLPQPPICTIDVYMIMVKCWMIDADSRPKFRELIIEFSKMARDPQRYLVIQGDERMHLPSPTDSNFYRALMDEEDMDDVVDADEYLIPQQGFFSSPSTSRTPLLSSLSATSNNSTVACIDRNGLQSCPIKEDSFLQRYSSDPTGALTEDSIDDTFLPVPEYINQSVPKRPAGSVQNPVYHNQPLNPAPSRDPHYQDPHSTAVGNPEYLNTVQPTCVNSTFDSPAHWAQKGSHQISLDNPDYQQDFFPKEAKPNGIFKGSTAENAEYLRVAPQSSEFIGA
如本文所用，“肝细胞生长因子受体”或“c-Met”是指具有GenBank登录号NP_001120972中所示的氨基酸序列的人c-Met及其天然变体。
“双特异性抗EGFR/c-Met抗体”或“双特异性EGFR/c-Met抗体”是指具有特异性结合EGFR的第一结构域和特异性结合c-Met的第二结构域的双特异性抗体。特异性结合EGFR和c-Met的结构域通常为VH/VL对，并且双特异性抗EGFR/c-Met抗体在结合EGFR和c-Met方面是一价的。
“特异性结合”或“特异性地结合”或“结合”是指抗体以比针对其他抗原更高的亲和力结合至抗原或抗原内的表位。通常，抗体与抗原或抗原内的表位结合，平衡解离常数(KD)为约5×10-8M或更低，例如约1x10-9M或更低、约1×10-10M或更低、约1×10-11M或更低、或约1×10-12M或更低，通常KD比它与非特异性抗原(例如BSA、酪蛋白)结合的KD低至少一百倍。解离常数可使用已知方案来测量。然而，结合至抗原或抗原内的表位的抗体可能对其他相关的抗原具有交叉反应性，例如，对来自其他物种(同源)(诸如人或猴，例如食蟹猕猴(Macaca fascicularis)(cynomolgus，cyno)或黑猩猩(Pan troglodytes)(chimpanzee，chimp)的相同抗原具有交叉反应性。单特异性抗体结合一个抗原或一个表位，而双特异性抗体结合两个不同的抗原或两个不同的表位。
“抗体”广义上是指并包括免疫球蛋白分子，具体包括单克隆抗体(包括鼠科动物单克隆抗体、人单克隆抗体、人源化单克隆抗体和嵌合单克隆抗体)，抗原结合片段，多特异性抗体(诸如双特异性抗体、三特异性抗体、四特异性抗体等)，二聚、四聚或多聚抗体，单链抗体、结构域抗体，以及包含具有所需特异性的抗原结合位点的免疫球蛋白分子的任何其他经修饰构型。“全长抗体”包含由二硫键互连的两条重链(HC)与两条轻链(LC)以及它们的多聚体(例如IgM)。每条重链由重链可变区(VH)和重链恒定区(由结构域CH1、铰链、CH2和CH3构成)构成。每条轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区(CL)构成。VH区和VL区可进一步细分为超变区，该超变区称为互补决定区(CDR)并间插有框架区(FR)。各个VH和VL由三个CDR和四个FR片段构成，并按以下顺序从氨基端至羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。
“互补决定区”(CDR)是结合抗原的抗体区。CDR可使用各种描绘来定义，诸如Kabat(Wu等人(1970)J Exp Med 132:211-50)(Kabat等人，Sequences of Proteins ofImmunological Interest，第5版Public Health Service,National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.,1991)、Chothia(Chothia等人，(1987)J Mol Biol 196:901-17)、IMGT(Lefranc等人，(2003)Dev Comp Immunol 27:55-77)和AbM(Martin和Thornton(1996)，JBmol Biol 263:800-15)。描述了各种描绘和可变区编号之间的对应关系(参见例如Lefranc等人，(2003)Dev Comp Immunol 27:55-77；Honegger和Pluckthun,(2001)J MolBiol 309:657-70；International ImMunoGeneTics(IMGT)数据库；Web资源，http://www_imgt_org)。可用程序(诸如UCL Business PLC的abYsis)可用于描绘CDR。除非说明书中另有明确地说明，否则如本文所用，术语“CDR”、“HCDR1”、“HCDR2”、“HCDR3”、“LCDR1”、“LCDR2”和“LCDR3”包括由任何上述方法(Kabat、Chothia、IMGT或AbM)定义的CDR。
免疫球蛋白可根据重链恒定结构域氨基酸序列被指定为五种主要种类，即IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。IgA和IgG进一步亚分类为同种型IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3和IgG4。基于其恒定域的氨基酸序列，可将任何脊椎物种的抗体轻链指定为两种完全不同的类型即κ和λ中的一种。
“抗原结合片段”是指免疫球蛋白分子的结合抗原的部分。抗原结合片段可以是合成的、可酶促获得的或经遗传工程改造的多肽，并且含有VH、VL、VH和VL、Fab、F(ab')2、Fd和Fv片段、由一个VH结构域或一个VL结构域组成的结构域抗体(dAb)、鲨鱼可变IgNAR结构域、驼峰化VH结构域、由模拟抗体的CDR诸如FR3-CDR3-FR4部分、HCDR1、HCDR2和/或HCDR3以及LCDR1、LCDR2和/或LCDR3的氨基酸残基组成的最小识别单元。VH和VL结构域可经由合成接头连接在一起以形成各种类型的单链抗体设计，其中在VH和VL结构域由单独的单链抗体构建体表达的情况下，VH/VL结构域可在分子内或分子间配对，以形成单价抗原结合位点，诸如单链Fv(scFv)或双价抗体；例如在国际专利公布号WO 1998/44001、WO 1988/01649、WO1994/13804和WO 1992/01047中有所描述。
“单克隆抗体”是指从抗体分子的基本上同质群体获得的抗体，即包含该群体的各个抗体是相同的，不同的是可能的熟知改变，诸如从抗体重链移除C末端赖氨酸或翻译后修饰诸如氨基酸异构化或脱酰胺基、甲硫氨酸氧化或天冬酰胺或谷氨酰胺脱酰胺基。单克隆抗体通常结合一个抗原表位。双特异性单克隆抗体结合两个不同的抗原表位。单克隆抗体可在抗体群内具有异质糖基化。单克隆抗体可以是单特异性的或多特异性的，诸如双特异性的、单价的、二价的或多价的。
“重组体”是指当将来自不同来源的片段连接以产生重组DNA、抗体或蛋白质时，通过重组手段制备、表达、形成或分离的DNA、抗体和其他蛋白质。
“双特异性”是指特异性结合两个不同抗原或同一抗原内的两个不同表位的抗体。双特异性抗体可能对其他相关的抗原具有交叉反应性，例如，对来自其他物种(同源)(诸如人或猴，例如食蟹猕猴(Macaca cynomolgus)(cynomolgus,cyno)或黑猩猩(Pantroglodytes))的相同抗原具有交叉反应性，或者可结合两个或更多个不同抗原之间所共享的表位。
“拮抗剂”或“抑制剂”是指当与细胞蛋白质结合时抑制由蛋白质的天然配体诱导的至少一种反应或活性的分子。当至少一种反应或活性被抑制的程度比不存在拮抗剂(例如，阴性对照)时抑制的至少一种反应或活性多至少约20％、30％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或100％时，或当与不存在拮抗剂时的抑制相比抑制在统计学上是显著的时，所述分子是拮抗剂。
“PD-(L)1轴抑制剂”是指抑制PD-1下游信号传导的分子。PD-(L)1轴抑制剂可以是结合PD-1、PD-L1或PD-L2的分子。
“生物样品”是指从受试者分离的类似流体、细胞、或组织的采集物，以及存在于受试者体内的流体、细胞或组织。示例性样本是生物流体，诸如血液、血清和浆膜液、血浆、淋巴液、尿液、唾液、囊液、泪液、排泄物、痰、分泌组织和器官的粘膜分泌物、阴道分泌物、腹水、胸膜液、心包液、腹膜液、腹腔液和其他体腔液、由支气管灌洗液收集的流体、滑液、与受试者或生物来源接触的液体溶液(例如细胞和器官培养基(包括细胞或器官条件培养基)、灌洗液等)、组织活检物、肿瘤组织活检物、肿瘤组织样本、细针抽吸物、手术切除组织、器官培养物或细胞培养物。
如本申请中所用，“低岩藻糖”或“低岩藻糖含量”是指抗体的岩藻糖含量为约1％-15％。
如本文所用，“正常岩藻糖”或“正常岩藻糖含量”是指抗体的岩藻糖含量大约高于50％，通常大约高于80％或高于85％。
本文所使用的“沉默Fc”是指Fc结构域，该Fc结构域与未经修改的Fc相比已经被修改为减少与Fcγ受体(FcγR)的结合或具有减少的效应子功能，诸如ADCC、ADCP和/或CDC。Fc中的修改可为位置214、233、234、235、236、237、238、265、267、268、270、295、297、309、327、328、329、330、331或365中的突变。可单独地或组合产生的示例性突变为IgG1、IgG2、IgG3或IgG4中的突变K214T、E233P、L234V、L234A、G236缺失、V234A、F234A、L235A、G237A、P238A、P238S、D265A、S267E、H268A、H268Q、Q268A、N297A、A327Q、P329A、D270A、Q295A、V309L、A327S、L328F、A330S和P331S。产生具有降低的ADCC的抗体的示例性组合突变为IgG1上的突变L234A/L235A、IgG2上的突变V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S、IgG4上的突变F234A/L235A、IgG4上的突变S228P/F234A/L235A、所有Ig同种型上的N297A、IgG2上的突变V234A/G237A、IgG1上的突变K214T/E233P/L234V/L235A/G236缺失/A327G/P331A/D365E/L358M、IgG2上的突变H268Q/V309L/A330S/P331S、IgG1上的突变S267E/L328F、IgG1上的突变L234F/L235E/D265A、IgG1上的突变L234A/L235A/G237A/P238S/H268A/A330S/P331S、IgG4上的突变S228P/F234A/L235A/G237A/P238S、以及IgG4上的突变S228P/F234A/L235A/G236缺失/G237A/P238S。产生具有降低的CDC的抗体的示例性突变是K322A突变。残基编号是根据欧盟编号(参见例如Web资源；/>组库(IG和TR)；蛋白质和等位基因；同种异型)。
本公开的方法
埃万妥单抗或JNJ-61186372(JNJ-372)是美国专利9,593,164中描述的一种IgG1抗EGFR/c-Met双特异性抗体。
本公开至少部分地基于以下发现：埃万妥单抗在治疗具有缺失激活突变的EGFR的肿瘤方面是有效的。
可能与癌症相关联的EGFR激活突变包括点突变、缺失突变、插入突变、倒置或基因扩增，这些突变会引起EGFR的至少一种生物活性增加(诸如酪氨酸激酶活性升高、配体结合增强、配体非依赖性信号传导、细胞增殖增加、MAPK/ERK通路的信号传导、基因转录、受体同源二聚体和异源二聚体形成、二聚化(EGFR:EGFR)、异源二聚化(EGFR:HER2或EGFR:HER3))。突变可位于EGFR基因或与EGFR基因相关联的调控区的任何部分中并且包括外显子18、19、20或21中的突变或激酶结构域中的突变。EGFR激活突变的其他示例在本领域中是已知的(参见例如美国专利公布号US2005/0272083中所述)。关于EGFR和其他ErbB受体(包括受体同源二聚体和异源二聚体、受体配体、自磷酸化位点和参与ErbB介导的信号传导的信号传导分子)的信息在本领域中是已知的(参见例如Hynes and Lane,Nature Reviews Cancer5:341-354,2005)。
在一些实施方案中，所述EGFR激活突变包括：L718Q、G719A、G719X(X为任何氨基酸)、L861X(X为任何氨基酸)、L858R、E746K、L747S、E749Q、A750P、A755V、V765M、C797S、L858P或T790M置换；E746-A750的缺失；R748-P753的缺失；M766与A767之间Ala(A)的插入；S768与V769之间Ser、Val和Ala(SVA)的插入；P772与H773之间Asn和Ser(NS)的插入；D761与E762之间、A763与Y764之间、Y764与Y765之间、M766与A767之间、A767与V768之间、S768与V769之间、V769与D770之间、D770与N771之间、N771与P772之间、P772与H773之间、H773与V774之间、V774与C775之间一个或多个氨基酸的插入；EGFR外显子20中的一个或多个缺失；或EGFR外显子20中的一个或多个插入；或它们的任何组合。具有EGFR外显子20突变(一个或多个氨基酸的插入)的受试者通常对EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)具有抗性(参见例如国际专利公布号WO 2018/094225)。
在一些实施方案中，EGFR激活突变包括诸如S768I、L861Q和G719X的一个或多个少见的EGFR激活突变。
EGFR突变状态可使用本领域已知的方法检测，诸如像桑格测序、下一代测序(NGS)、外显子组测序(WES)、RNA-Seq、荧光原位杂交、或免疫组织化学。
本公开提供了一种治疗患有缺失EGFR激活突变的癌症的受试者的方法，该方法包括：向患有对缺失激活突变的EGFR呈阳性的癌症的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗-表皮生长因子受体(EGFR)/肝细胞生长因子受体(c-Met)抗体。
本公开还提供了一种治疗患有缺失EGFR激活突变的肺癌的受试者的方法，该方法包括：向患有缺失EGFR激活突变的肺癌的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗EGFR/c-Met抗体。
本公开还提供了一种治疗患有缺失EGFR激活突变的非小细胞肺癌(NSCLC)的受试者的方法，该方法包括：向患有缺失EGFR激活突变的NSCLC的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗EGFR/c-Met抗体。
本公开还提供了一种治疗患有缺失EGFR激活突变的小细胞肺癌(SCLC)的受试者的方法，该方法包括：向患有缺失EGFR激活突变的SCLC的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗EGFR/c-Met抗体。
本公开还提供了一种治疗患有对缺失激活突变的EGFR呈阳性的肺腺癌的受试者的方法，该方法包括：向患有对缺失激活突变的EGFR呈阳性的肺腺癌的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗EGFR/c-Met抗体。
本公开还提供了一种用双特异性抗EGFR/c-Met抗体治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括：
提供来自所述受试者的生物样品；
确定样品中缺失激活突变的EGFR的存在或不存在；
向被确定为具有缺失激活突变的EGFR的受试者施用双特异性抗EGFR/c-Met抗体或提供双特异性抗EGFR/c-Met抗体的施用。
在一些实施方案中，生物样品是血液样品。
在一些实施方案中，生物样品是肿瘤组织活检物。
在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体包含
特异性结合EGFR的第一结构域和特异性结合c-Met的第二结构域，其中该第一结构域包含SEQ ID NO:1的重链互补决定区1(HCDR1)、SEQ ID NO:2的HCDR2、SEQ ID NO:3的HCDR3、SEQ ID NO:4的轻链互补决定区1(LCDR1)、SEQ ID NO:5的LCDR2和SEQ ID NO:6的LCDR3；并且该第二结构域包含SEQ ID NO:7的HCDR1、SEQ ID NO:8的HCDR2、SEQ ID NO:9的HCDR3、SEQ ID NO:10的LCDR1、SEQ ID NO:11的LCDR2和SEQ ID NO:12的LCDR3。
在一些实施方案中，特异性结合EGFR的第一结构域包含SEQ ID NO:13的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:14的轻链可变区(VL)，并且特异性结合c-Met的第二结构域包含SEQID NO:15的VH和SEQ ID NO:16的VL。
在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体是IgG1同种型。
在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体包含SEQ ID NO:17的第一重链(HC1)、SEQ ID NO:18的第一轻链(LC1)、SEQ ID NO:19的第二重链(HC2)和SEQ ID NO:20的第二轻链(LC2)。
在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括岩藻糖含量介于约1％至约15％之间的双触角聚糖结构。
岩藻糖含量减小的抗体可以使用所报告的用于引起具有双触角复合物型Fc低聚糖的相对较高去岩藻糖基化抗体的成功表达的不同方法制成，这些方法诸如控制培养物渗透压(Konno等人，Cytotechnology 64(:249-65,2012)、应用变体CHO细胞系Lec13作为宿主细胞系(Shields等人，J Biol Chem 277:26733-26740,2002)、应用变体CHO细胞系EB66作为宿主细胞系(Olivier等人，MAbs；2(4),2010；印刷出版前的电子版；PMID:20562582)、应用大鼠杂交瘤细胞系YB2/0作为宿主细胞系(Shinkawa等人，J Biol Chem 278:3466-3473,2003)、引入特异性针对α1,6-岩藻糖基转移酶(FUT8)基因的小干扰RNA(Mori等人，Biotechnol Bioeng 88:901-908,2004)，或共表达β-1,4-N-乙酰葡糖胺基转移酶III和高尔基体α-甘露糖苷酶II或强效α-甘露糖苷酶I抑制剂几夫碱(Ferrara等人，J Biol Chem281:5032-5036,2006，Ferrara等人，Biotechnol Bioeng93:851-861,2006；Xhou等人，Biotechnol Bioeng 99:652-65,2008)。通常，降低抗体的聚糖中的岩藻糖含量增强了抗体介导的细胞毒性(ADCC)。
本公开还提供一种治疗患有缺失EGFR激活突变的癌症的受试者的方法，该方法包括：向患有对缺失激活突变的EGFR呈阳性的癌症的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗EGFR/c-Met抗体，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括特异性结合EGFR的第一结构域和特异性结合c-Met的第二结构域，其中，该第一结构域包括SEQ ID NO:1的HCDR1、SEQID NO:2的HCDR2、SEQ ID NO:3的HCDR3、SEQ ID NO:4的LCDR1、SEQ ID NO:5的LCDR2和SEQID NO:6的LCDR3；并且该第二结构域包括SEQ ID NO:7的HCDR1、SEQ ID NO:8的HCDR2、SEQIDNO:9的HCDR3、SEQ ID NO:10的LCDR1、SEQ ID NO:11的LCDR2和SEQ ID NO:12的LCDR3。
本公开还提供一种治疗患有缺失EGFR激活突变的肺癌的受试者的方法，该方法包括：向患有缺失EGFR激活突变的肺癌的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗EGFR/c-Met抗体，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括特异性结合EGFR的第一结构域和特异性结合c-Met的第二结构域，其中，该第一结构域包括SEQ ID NO:1的HCDR1、SEQ ID NO:2的HCDR2、SEQ ID NO:3的HCDR3、SEQ ID NO:4的LCDR1、SEQ ID NO:5的LCDR2和SEQ ID NO:6的LCDR3；并且该第二结构域包括SEQ ID NO:7的HCDR1、SEQ ID NO:8的HCDR2、SEQ ID NO:9的HCDR3、SEQ ID NO:10的LCDR1、SEQ ID NO:11的LCDR2和SEQ ID NO:12的LCDR3。
本公开还提供一种治疗患有缺失EGFR激活突变的NSCLC的受试者的方法，该方法包括：向患有对缺失EGFR激活突变的NSCLC的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗EGFR/c-Met抗体，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括特异性结合EGFR的第一结构域和特异性结合c-Met的第二结构域，其中，该第一结构域包括SEQ ID NO:1的HCDR1、SEQ IDNO:2的HCDR2、SEQ ID NO:3的HCDR3、SEQ ID NO:4的LCDR1、SEQ ID NO:5的LCDR2和SEQ IDNO:6的LCDR3；并且该第二结构域包括SEQ ID NO:7的HCDR1、SEQ ID NO:8的HCDR2、SEQ IDNO:9的HCDR3、SEQ ID NO:10的LCDR1、SEQ ID NO:11的LCDR2和SEQ ID NO:12的LCDR3。
本公开还提供一种治疗患有缺失EGFR激活突变的SCLC的受试者的方法，该方法包括：向患有缺失EGFR激活突变的SCLC的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗EGFR/c-Met抗体，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括特异性结合EGFR的第一结构域和特异性结合c-Met的第二结构域，其中，该第一结构域包括SEQ ID NO:1的HCDR1、SEQ ID NO:2的HCDR2、SEQ ID NO:3的HCDR3、SEQ ID NO:4的LCDR1、SEQ ID NO:5的LCDR2和SEQ ID NO:6的LCDR3；并且该第二结构域包括SEQ ID NO:7的HCDR1、SEQ ID NO:8的HCDR2、SEQ ID NO:9的HCDR3、SEQ ID NO:10的LCDR1、SEQ ID NO:11的LCDR2和SEQ ID NO:12的LCDR3。
本公开还提供一种治疗患有缺失EGFR激活突变的肺腺癌的受试者的方法，该方法包括：向患有缺失EGFR激活突变的肺腺癌的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗EGFR/c-Met抗体，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括特异性结合EGFR的第一结构域和特异性结合c-Met的第二结构域，其中，该第一结构域包括SEQ ID NO:1的HCDR1、SEQ IDNO:2的HCDR2、SEQ ID NO:3的HCDR3、SEQ ID NO:4的LCDR1、SEQ ID NO:5的LCDR2和SEQ IDNO:6的LCDR3；并且该第二结构域包括SEQ ID NO:7的HCDR1、SEQ ID NO:8的HCDR2、SEQ IDNO:9的HCDR3、SEQ ID NO:10的LCDR1、SEQ ID NO:11的LCDR2和SEQ ID NO:12的LCDR3。
本公开提供一种治疗患有缺失EGFR激活突变的癌症的受试者的方法，该方法包括：向患有缺失EGFR激活突变的癌症的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗EGFR/c-Met抗体，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括特异性结合EGFR的第一结构域和特异性结合c-Met的第二结构域，其中，该第一结构域包括SEQ ID NO:13的VH和SEQ ID NO:14的VL；并且该第二结构域包括SEQ ID NO:15的VH和SEQ ID NO:16的VL。
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本公开还提供一种治疗患有缺失EGFR激活突变的SCLC的受试者的方法，该方法包括：向患有对缺失激活突变的EGFR呈阳性的SCLC的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗EGFR/c-Met抗体，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体是IgG1同种型并包括特异性结合EGFR的第一结构域和特异性结合c-Met的第二结构域，其中，该第一结构域包括SEQ IDNO:13的VH和SEQ ID NO:14的VL；并且该第二结构域包括SEQ ID NO:15的VH和SEQ ID NO:16的VL。
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在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体是IgG1同种型。IgG1恒定结构域内存在一些变异(例如熟知的同种异型)，其中变异位于位置214、356、358、422、431、435或436(根据EU编号的残基编号)(参见例如IMGT Web资源；IMGT组库(IG和TR)；蛋白质和等位基因；同种异型)。双特异性抗EGFR/c-Met抗体可以是任何IgG1同种异型，诸如G1m17、G1m3、G1m1、G1m2、G1m27或G1m28。
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本公开还提供一种治疗患有缺失EGFR激活突变的肺腺癌的受试者的方法，该方法包括：向患有对缺失激活突变的EGFR呈阳性的肺腺癌的受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗EGFR/c-Met抗体，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括SEQ ID NO:17的HC1、SEQ ID NO:18的LC1、SEQ ID NO:19的HC2和SEQ ID NO:20的LC2。
在一些实施方案中，受试者对于用一种或多种先前抗癌疗法进行的治疗具有复发性或抵抗性。
在一些实施方案中，所述一种或多种先前抗癌疗法包括一种或多种化学治疗剂、检查点抑制剂、靶向抗癌疗法或激酶抑制剂或它们的任何组合。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是EGFR抑制剂、c-Met抑制剂、HER2抑制剂、HER3抑制剂、HER4抑制剂、VEGFR抑制剂或AXL抑制剂。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是埃罗替尼、吉非替尼、拉帕替尼、凡德他尼、阿法替尼、奥希替尼、拉泽替尼、波齐替尼、克里替尼、卡博替尼、卡马替尼、阿昔替尼、乐伐替尼、尼达尼布、瑞格非尼、帕唑帕尼、索拉非尼或舒尼替尼。
在一些实施方案中，一种或多种先前抗癌疗法包括卡铂、紫杉醇、吉西他滨、顺铂、长春瑞滨、多西他赛、帕博西尼、克唑替尼、PD-(L)1轴抑制剂、EGFR抑制剂、c-Met抑制剂、HER2抑制剂、HER3抑制剂、HER4抑制剂、VEGFR抑制剂、AXL抑制剂、埃罗替尼、吉非替尼、拉帕替尼、凡德他尼、阿法替尼、奥希替尼、拉泽替尼、波齐替尼、克里替尼、卡博替尼、卡马替尼、阿昔替尼、乐伐替尼、尼达尼布、瑞格非尼、帕唑帕尼、索拉非尼或舒尼替尼或它们的任何组合。
在一些实施方案中，受试者对EGFR抑制剂具有抗性或已获得对EGFR抑制剂的抗性。癌症可获得其抗性的示例性EGFR抑制剂是抗EGFR抗体西妥昔单抗帕尼单抗/>马妥珠单抗、尼妥珠单抗、小分子EGFR抑制剂埃罗替尼吉非替尼/>EKB-569(培利替尼，不可逆EGFR TKI)、泛ErbB和其他受体酪氨酸激酶抑制剂、拉帕替尼(EGFR和HER2抑制剂)、培利替尼(EGFR和HER2抑制剂)、凡德他尼(ZD6474、ZACTIMATM、EGFR、VEGFR2和RET TKI)、PF00299804(达克替尼、不可逆泛ErbB TKI)、CI-1033(不可逆泛erbB TKI)、阿法替尼(BIBW2992、不可逆泛ErbBTKI)、AV-412(双重EGFR和ErbB2抑制剂)、EXEL-7647(EGFR、ErbB2、GEVGR和EphB4抑制剂)、CO-1686(不可逆突变体选择性EGFR TKI)、AZD9291(不可逆突变体选择性EGFR TKI)和HKI-272(来那替尼，不可逆EGFR/ErbB2抑制剂)。
可使用各种定性和/或定量方法来确定受试者是否对用抗癌疗法进行的治疗具有抗性或者已产生或易于产生对这种治疗的抗性。可与对抗癌疗法的抗性相关联的症状包括患者的健康状况下降或停滞、肿瘤的尺寸增加、肿瘤生长的下降受到遏制或减慢和/或体内癌细胞从一个位置扩散到其他器官、组织或细胞。与癌症相关联的各种症状的重建或恶化也可以是以下指征：受试者已产生或易于产生对抗癌疗法的抗性，诸如厌食症、认知功能障碍、抑郁症、呼吸困难、疲劳、激素失调、中性粒细胞减少症、疼痛、周围神经病变和性功能障碍。与癌症相关联的症状可根据癌症的类型而变化。例如，与宫颈癌相关联的症状可包括异常出血、异常大量阴道分泌物、与正常月经周期无关的盆腔疼痛、排尿期间膀胱疼痛或疼痛以及在正常月经期之间、性交、冲洗或盆腔检查之后出血。与肺癌相关联的症状可包括持续性咳嗽、咳血、呼吸短促、喘息胸痛、食欲不振、体重无故减轻以及疲劳。肝癌的症状可包括食欲不振和体重减轻、腹痛(尤其是可能延伸到背部和肩部的腹部右上部分)、恶心和呕吐、全身无力和疲劳、肝脏增大、腹部肿胀(腹水)以及皮肤和眼白黄变(黄疸)。肿瘤学技术人员可很容易地鉴定与特定癌症类型相关联的症状。
示例性PD-(L)1轴抑制剂是结合PD-1的抗体(诸如纳武单抗派姆单抗/>信迪利单抗、西米普利单抗/>的黎波里单抗(tripolibamab)、替雷利珠单抗、斯巴达珠单抗、卡瑞利珠单抗、多塔利单抗、杰诺单抗或西利单抗)或结合PD-L1的抗体(诸如PD-L1抗体是恩沃利单抗、阿替利珠单抗度伐鲁单抗/>和阿维鲁单抗/>)。
市售抗体可经由授权分销商或药房购买。小分子的氨基酸序列结构可以见于由CAS登记公司提交的USAN和/或INN。
在一些实施方案中，受试者是治疗初治型的。
在一些实施方案中，对缺失激活突变的EGFR呈阳性的癌症对于CDK4扩增、EGFR扩增、KRAS扩增、MDM2扩增、TERT扩增、NF1R2450*；RAD50 L597Vfs*5、MET c.3082+3A>G、循环HGF、c-MET扩增的水平增加、或它们的任何组合呈阳性。
在一些实施方案中，对缺失激活突变的该EGFR呈阳性的癌症对选自由以下组成的组的基因中的至少一个突变呈阳性：ALK、APC、BRAF、BRCA1、BRCA2、CDKN2A、CDKN2B、CTNNB1、ERBB2、ERBB3、FGFR3、KIT、LRP1B、MET、MLH1、MSH3、NOTCH1、NTRK1、RET、ROS1、STK11、TP53以及VEGFA。在一些实施方案中，至少一个突变是选自由以下组成的组的突变：点突变、缺失突变、插入突变、倒置、基因扩增以及基因融合。突变可位于基因或与基因相关联的调节区的任何部分中。突变可使用本领域已知的方法检测，诸如像桑格测序、下一代测序(NGS)、外显子组测序(WES)、RNA-Seq、荧光原位杂交、或免疫组织化学。
在一些实施方案中，APC中的至少一个突变是S2621C、N813S、E1317Q或R549G。
在一些实施方案中，BRCA1中的至少一个突变是M128V、G275S、Y179C、F486L或N550H。
在一些实施方案中，BRCA2中的至少一个突变是S326R、R2973H、R2034C、I283V、R672X、G25X、R468X或I1929M(其中，X为任何氨基酸)。
在一些实施方案中，CDKN2A中的至少一个突变是G23X、A100X、D84H、C72X、H83N或G111X(其中，X为任何氨基酸)。
在一些实施方案中，CTNNB1中的至少一个突变是T41A。
在一些实施方案中，ERBB2中的至少一个突变是R1146W、V1180X(其中，X为任何氨基酸)或A386D。
在一些实施方案中，ERBB3中的至少一个突变是K998R、L1177I或G513D。
在一些实施方案中，FGFR3中的至少一个突变是G639R或E85K。
在一些实施方案中，LRP1B中的至少一个突变是P4512A、A3816V、T3393K、Q3636H、M1V、C1554S、S1083N、T2482S、C3522Y、G1965C、P2882T、P3372A、I1266L、L4268X(其中，X为任何氨基酸)、S449T、E4352G、C864R、F1435I、D3697Y、V2033F、A3308S、S1281N、D1807E。
在一些实施方案中，MET中的至少一个突变是E168D。
在一些实施方案中，MSH3中的至少一个突变是E1036Q。
在一些实施方案中，NOTCH1中的至少一个突变是A1696V、R1279C、E1450K、Q2184R、Q2184K、T701P或C612Y。
在一些实施方案中，TP53中的至少一个突变是R280G、P278S、E198X、H193L、R379S、V172X、G245D、L194R、H179Y、L265P、R110L、R158L、R248W、I332M、G244C、R273H、Y163C、H193R、R158L、Y103X、M237I、R273L、R273H、E171X、或R249M(其中，X为任何氨基酸)。
在一些实施方案中，VEGFA中的至少一个突变是R114W、R87W或R335C。
示例性c-Met激活突变包括引起c-Met蛋白的至少一种生物活性增加(诸如酪氨酸激酶活性升高、受体同源二聚体和异源二聚体形成、配体结合增强等)的点突变、缺失突变、插入突变、倒置或基因扩增。突变可以位于c-Met基因或与该基因相关联的调控区的任何部分中，诸如突变在c-Met的激酶结构域中。示例性c-Met激活突变是在残基位置N375、V13、V923、R175、V136、L229、S323、R988、S1058/T1010和E168处的突变。用于检测EGFR和c-Met突变或基因扩增的方法是熟知的。
在一些实施方案中，所述突变体KRAS包含G12V、G12C、G12A或G12D置换，或它们的任何组合。
在一些实施方案中，对缺失激活突变的EGFR呈阳性的癌症对于至少一个EGFR配体的表达呈阳性。EGFR配体的示例包括但不限于表皮生长因子(EGF)、双调蛋白(AREG)、转化生长因子α(TGFα)、结合肝素的EGF样生长因子(HBEGF)、β细胞素(BTC)、表皮调节素(EREG)以及上皮细胞有丝分裂蛋白抗体(EPGN)。
在一些实施方案中，治疗对缺失激活突变的EGFR呈阳性的癌症的方法还包括：确定至少一个EGFR配体的水平；以及向被确定为具有缺失激活突变的EGFR并且被确定为对至少一个EGFR配体的基因表达水平或蛋白水平呈阳性的受试者施用双特异性抗EGFR/c-Met抗体或提供双特异性抗EGFR/c-Met抗体的施用。
在一些实施方案中，治疗对缺失激活突变的EGFR呈阳性的癌症的方法还包括：确定双调蛋白的水平；以及向被确定为具有缺失激活突变的EGFR并且被确定为对双调蛋白基因表达水平或蛋白水平呈阳性的受试者施用双特异性抗EGFR/c-Met抗体或提供双特异性抗EGFR/c-Met抗体的施用。在一些实施方案中，双调蛋白基因表达水平或蛋白水平可与对照值进行比较。
在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括肺癌、胃癌、结肠直肠癌、脑癌、源自上皮细胞癌症、乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌、肛门癌、前列腺癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、咽癌、鼻癌、胰腺癌、皮肤癌、口腔癌、舌癌、食管癌、阴道癌、宫颈癌、脾癌、睾丸癌、胃癌、胸腺癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌、肝细胞癌(HCC)或者散发性或遗传性乳头状肾细胞癌(PRCC)、或它们的任何组合。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括肺癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括胃癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括结肠直肠癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括脑癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括上皮细胞癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括乳腺癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括卵巢癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括结肠直肠癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括肛门癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括前列腺癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括肾癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括膀胱癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括头颈癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括咽癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括鼻部癌症。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括胰腺癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括皮肤癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括口部癌症。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括舌头癌症。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括食道癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括阴道癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括宫颈癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括脾脏癌症。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括睾丸癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括胃癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括胸腺癌症。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括结肠癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括甲状腺癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括肝癌。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括肝细胞癌(HCC)。在一些实施方案中，缺失EGFR激活突变的癌症包括散发性或遗传性乳头状肾细胞癌(PRCC)。
在一些实施方案中，NSCLC包括鳞状细胞癌、腺癌和大细胞癌。在一些实施方案中，NSCLC的细胞具有上皮表型。在一些实施方案中，NSCLC已获得对用一种或多种EGFR抑制剂进行治疗的抗性。
在一些实施方案中，受试者还施用一种或多种抗癌疗法。
在一些实施方案中，所述一种或多种抗癌疗法包括化学疗法、放射疗法、手术、靶向抗癌疗法或激酶抑制剂或它们的任何组合。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是EGFR抑制剂、c-Met抑制剂、HER2抑制剂、HER3抑制剂、HER4抑制剂、VEGFR抑制剂或AXL抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是EGFR的抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是c-Met的抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是HER2的抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是HER3的抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是HER4的抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是VEGFR的抑制剂。在一些实施方案中，激酶抑制剂是AXL的抑制剂。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是埃罗替尼、吉非替尼、拉帕替尼、凡德他尼、阿法替尼、奥希替尼、拉泽替尼、波齐替尼、克里替尼、卡博替尼、卡马替尼、阿昔替尼、乐伐替尼、尼达尼布、瑞格非尼、帕唑帕尼、索拉非尼或舒尼替尼。
在一些实施方案中，激酶抑制剂是埃罗替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是吉非替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是拉帕替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是凡德他尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是阿法替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是奥希替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是拉泽替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是波齐替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是克里替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是卡博替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是卡马替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是阿昔替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是乐伐替尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是尼达尼布。在一些实施方案中，激酶抑制剂是瑞格非尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是帕唑帕尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是索拉非尼。在一些实施方案中，激酶抑制剂是舒尼替尼。
可在本公开的方法中与双特异性抗EGFR/c-Met抗体联合施用的抗癌疗法包括本领域技术人员已知的化学治疗剂药物或其他抗癌治疗剂中的任何一种或多种。化学治疗剂是可用于治疗癌症的化学化合物，并且包括生长抑制剂或其他细胞毒性剂，并且包括烷基化剂、抗代谢药、抗微管抑制剂、拓扑异构酶抑制剂、受体酪氨酸激酶抑制剂、血管生成抑制剂等。化学治疗剂的示例包括：烷基化剂，诸如噻替哌和环磷酰胺烷基磺酸盐，诸如白消安、硫丹和嗪消安；氮丙啶，诸如苯并多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、麦曲多巴(meturedopa)和尤利多巴(uredopa)；乙撑亚胺和甲基蜜胺，包括六甲蜜胺、三乙撑蜜胺、三乙撑磷酰胺(triethylenephosphoramide)、三乙撑硫代磷酰胺(triethylenethiophosphoramide)和三羟甲蜜胺(trimethylomelamine)；氮芥(nitrogenmustards)，诸如苯丁酸氮芥、萘氮芥(chlornaphazine)、胆磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(estramustine)、异环磷酰胺、双氯乙基甲胺、盐酸氧氮芥(mechlorethamine oxidehydrochloride)、美法仑、新氮芥(novembichin)、苯芥胆甾醇(phenesterine)、泼尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶氮芥(uracil mustard)；亚硝脲(nitrosoureas)，诸如卡莫司汀、氯脲霉素、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)、雷莫司汀(ranimnustine)；抗生素，诸如阿克拉霉素(aclacinomysins)、放线菌素、氨茴霉素(anthramycin)、偶氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素、放线菌素(cactinomycin)、加利车霉素(calicheamicin)、carabicin、洋红霉素(carminomycin)、嗜癌霉素(carzinophilin)、色霉素、更生霉素、柔红霉素、地托比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素(marcellomycin)、丝裂霉素类(mitomycins)、霉酚酸(mycophenolic acid)、诺拉霉素(nogalamycin)、橄榄霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、potfiromycin、嘌呤霉素(puromycin)、三铁阿霉素(quelamycin)、罗多比星(rodorubicin)、链黑菌素(streptonigrin)、链脲霉素、杀结核菌素(tubercidin)、乌苯美司(ubenimex)、净司他丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin)；抗代谢药，诸如甲氨蝶呤和5-FU；叶酸类似物，诸如二甲叶酸(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶罗呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimetrexate)；嘌呤类似物，诸如氟达拉滨(fludarabine)、6-巯嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鸟嘌呤；嘧啶类似物，诸如安西他滨(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿苷(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷、双脱氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷(doxifluridine)、依诺他滨(enocitabine)、氟尿苷；雄激素类，诸如卡鲁睾酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolone propionate)、环硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睾内酯(testolactone)；抗肾上腺类，诸如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦(trilostane)；叶酸补充剂，诸如亚叶酸(frolinic acid)；醋葡醛内酯(aceglatone)；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸(aminolevulinic acid)；安吖啶；bestrabucil；比生群(bisantrene)；依达曲沙；地磷酰胺(defofamide)；地美可辛(demecolcine)；地吖醌；elfornithine；依利醋铵(elliptinium acetate)；依托格鲁(etoglucid)；硝酸镓；羟基脲；香菇多糖(lentinan)；氯尼达明(lonidamine)；米托胍腙(mitoguazone)；米托蒽醌；莫哌达醇(mopidanmol)；二胺硝吖啶(nitrarine)；喷司他丁(pentostatin)；蛋氨氮芥(phenamet)；吡柔比星(pirarubicin)；鬼臼酸(podophyllinicacid)；2-乙基酰肼；丙卡巴肼；/>雷佐生(razoxane)；西佐喃(sizofiran)；螺旋锗(spirogermanium)；细交链孢菌酮酸(tenuazonic acid)；三亚胺醌(triaziquone)；2,2′,2″-三氯三乙胺；乌拉坦(urethan)；长春地辛；达卡巴嗪；甘露莫司汀(mannomustine)；二溴甘露醇(mitobronitol)；二溴卫矛醇(mitolactol)；哌泊溴烷(pipobroman)；gacytosine；阿糖胞苷(arabinoside)(“Ara-C”)；环磷酰胺；噻替哌；新型紫杉类或紫杉烷家族的成员，诸如紫杉醇(/>多西他赛/>)及其类似物；苯丁酸氮芥；吉西他滨；6-硫鸟嘌呤；巯嘌呤；甲氨蝶呤；铂类似物，诸如顺铂和卡铂；长春碱；铂；依托泊苷(VP-16)；异环磷酰胺；丝裂霉素C；米托蒽醌；长春新碱；长春瑞滨；去甲长春碱；诺安托(novantrone)；替尼泊苷；道诺霉素；氨基蝶呤(aminopterin)；希罗达；伊本膦酸盐(ibandronate)；CPT-11；拓扑异构酶抑制剂RFS2000；二氟甲基鸟氨酸(DMFO)；视黄酸；埃斯波霉素(esperamicins)；卡培他滨；受体酪氨酸激酶和/或血管生成的抑制剂，包括索拉非尼/>舒尼替尼/>帕唑帕尼(VOTRIENTTM)、托西尼布(PALLADIATM)、凡德他尼(ZACTIMATM)、西地尼布/>瑞格非尼(BAY 73-4506)、阿昔替尼(AG013736)、来他替尼(CEP-701)、埃罗替尼/>吉非替尼阿法替尼(BIBW 2992)、拉帕替尼/>来那替尼(HKI-272)等，以及以上物质中任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。该定义中还包括用于调节或抑制激素对肿瘤的作用的抗激素剂，诸如抗雌激素药，包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、芳香化酶抑制4(5)-咪唑、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、keoxifene、LY 117018、奥那司酮和托瑞米芬/>和抗雄激素药，诸如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及以上中的任一种的药学上可接受的盐、酸或衍生物。其他常规的细胞毒性化学化合物如在Wiemann等人，1985,in Medical Oncology(Calabresi等人编辑)，第10章，McMillan Publishing中所公开的那些，也适用于本发明的方法。
施用
双特异性抗EGFR/c-Met抗体可以在药学上可接受的载剂中施用。“载剂”是指本发明抗体与之一起施用的稀释剂、佐剂、赋形剂或媒介物。此类媒介物可以是液体，诸如水和油，包括来源于石油、动物、植物的油或合成的那些油，诸如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。例如，0.4％盐水和0.3％甘氨酸可用于配制双特异性抗EGFR/c-Met抗体。这些溶液是无菌的，并且通常不含颗粒物。它们可通过常规的公知灭菌技术(例如过滤)进行灭菌。对于肠胃外施用，载剂可包括无菌水，并且可添加其他赋形剂以增加溶解度或防腐性。注射用混悬剂或溶液剂还可利用水基载剂连同合适的添加剂来制备。包含其他人蛋白(例如，人血清白蛋白)在内的合适的媒介物和配制物在例如Remington:The Science and Practice ofPharmacy，第21版，Troy,D.B.编辑，Lipincott Williams and Wilkins,Philadelphia,PA，2006年，第5部分，Pharmaceutical Manufacturing，第691-1092页(特别参见第958-989页)中有所描述。
施用方式可以是将双特异性抗EGFR-c-Met抗体递送至宿主的任何合适的途径，诸如胃肠外施用，例如真皮内、肌肉内、腹膜内、静脉内或皮下、肺部、经粘膜(口腔、鼻内、阴道内、直肠)，使用片剂、胶囊、溶液、粉末、凝胶、颗粒形式的制剂；以及包含在注射器、植入装置、渗透泵、盒、微型泵中；或技术人员所理解的本领域熟知的其他方式。可通过例如以下方式实现位点特异性施用：瘤内、胃肠外、支气管内、腹内、囊内、软骨内、腔内、体腔内、小脑内、脑室内、结肠内、颈管内、胃内、肝内、心脏内、骨内、骨盆内、心包内、腹膜内、胸膜内、前列腺内、肺内、直肠内、肾内、视网膜内、脊柱内、滑膜内、胸内、子宫内、血管内、膀胱内、病灶内、阴道、直肠、口腔、舌下、鼻内或经皮递送。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体是静脉内(IV)施用的。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体是皮下(SC)施用的。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体是使用身体上输送装置(on-bodydelivery device)施用的。
在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以介于约140mg到约2240mg之间的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以介于约140mg到约2240mg之间的剂量施用。
一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约200mg、约210mg、约220mg、约230mg、约240mg、约250mg、约260mg、约270mg、约280mg、约290mg、约300mg、约310mg、约320mg、约330mg、约340mg、约350mg、约360mg、约370mg、约380mg、约390mg、约400mg、约410mg、约420mg、约430mg、约440mg、约450mg、约460mg、约470mg、约480mg、约490mg、约500mg、约510mg、约520mg、约530mg、约540mg、约550mg、约560mg、约570mg、约580mg、约590mg、约600mg、约610mg、约620mg、约630mg、约640mg、约650mg、约660mg、约670mg、约680mg、约690mg、约700mg、约710mg、约720mg、约730mg、约740mg、约750mg、约760mg、约770mg、约780mg、约790mg、约800mg、约810mg、约820mg、约830mg、约840mg、约850mg、约860mg、约870mg、约880mg、约890mg、约900mg、约910mg、约920mg、约930mg、约940mg、约950mg、约960mg、约970mg、约980mg、约990mg、约1000mg、约1010mg、约1020mg、约1030mg、约1040mg、约1050mg、约1060mg、约1070mg、约1080mg、约1090mg、约1100mg、约1110mg、约1120mg、约1130mg、约1140mg、约1150mg、约1160mg、约1170mg、约1180mg、约1190mg、约1200mg、约1210mg、约1220mg、约1230mg、约1240mg、约1250mg、约1260mg、约1270mg、约1280mg、约1290mg、约1300mg、约1310mg、约1320mg、约1330mg、约1340mg、约1350mg、约1360mg、约1370mg、约1380mg、约1390mg、约1400mg、约1410mg、约1420mg、约1430mg、约1440mg、约1450mg、约1460mg、约1470mg、约1480mg、约1490mg、约1500mg、约1510mg、约1520mg、约1530mg、约1540mg、约1550mg、约1560mg、约1570mg、约1575mg、约1580mg、约1590mg、约1600mg、约1610mg、1620mg、约1630mg、约1640mg、约1650mg、约1660mg、约1670mg、约1680mg、约1690mg、约1700mg、约1710mg、约1720mg、约1730mg、约1740mg、约1750mg、约1760mg、约1770mg、约1780mg、约1790mg、约1800mg、约1810mg、约1820mg、约1830mg、约1840mg、约1850mg、约1860mg、约1870mg、约1880mg、1890mg、约1900mg、约1910mg、约1920mg、约1930mg、约1940mg、约1950mg、约1960mg、约1970mg、约1980mg、约1990mg、约2000mg、约2010mg、约2020mg、约2030mg、约2040mg、约2050mg、约2060mg、约2070mg、约2080mg、约2090mg、约2100mg、约2110mg、约2120mg、约2130mg、约2140mg、约2150mg、约2160mg、约2170mg、约2180mg、约2190mg、约2200mg、约2210mg、约2220mg、约2230mg、约2240mg、约2250mg、约2260mg、约2270mg、约2280mg、约2290mg、约2300mg的剂量施用。
在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约350mg、约700mg、约1050mg、约1400mg、约1575mg、约1600mg、约2100mg或约2240mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约350mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约700mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约750mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约800mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约850mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约900mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约950mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约1000mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约1050mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约1100mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约1150mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约1200mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约1250mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约1300mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约1350mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约1400mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约1575mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约1600mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约2100mg的剂量施用。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约2240mg的剂量施用。
在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周施用一次。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周一次施用约1050mg。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周一次施用约1400mg。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周一次施用约1575mg。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周一次施用约1600mg。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周一次施用约2100mg。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周一次施用约2240mg。
在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每两周施用一次。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每两周一次施用约1050mg。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每两周一次施用约1400mg。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每两周一次施用约1575mg。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每两周一次施用约1600mg。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每两周一次施用约2100mg。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每两周一次施用约2240mg。
在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周施用两次。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周施用一次。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每两周施用一次。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每三周施用一次。在一些实施方案中，双特异性抗EGFR/c-Met抗体每四周施用一次。
对于联合疗法，可以使用抗癌剂的推荐剂量和剂型来施用一种或多种抗癌剂。
用于本公开的方法中的双特异性抗EGFR/c-Met抗体的产生
可以用于本公开的方法中的示例性双特异性抗EGFR/c-Met抗体是埃万妥单抗。埃万妥单抗以如下氨基酸序列为特征：
EGFR结合臂
>SEQ ID NO:1(HCDR1，EGFR结合臂)
TYGMH
>SEQ ID NO:2(HCDR2，EGFR结合臂)
VIWDDGSYKYYGDSVKG
>SEQ ID NO:3(HCDR3，EGFR结合臂)
DGITMVRGVMKDYFDY
>SEQ ID NO:4(LCDR1，EGFR结合臂)
RASQDISSALV
>SEQ ID NO:5(LCDR2，EGFR结合臂)
DASSLES
>SEQ ID NO:6(LCDR3，EGFR结合臂)
QQFNSYPLT
>SEQ ID NO:7(HCDR1，c-Met结合臂)
SYGIS
>SEQ ID NO:8(HCDR2，c-Met结合臂)
WISAYNGYTNYAQKLQG
>SEQ ID NO:9(HCDR3，c-Met结合臂)
DLRGTNYFDY
>SEQ ID NO:10(LCDR1，c-Met结合臂)
RASQGISNWLA
>SEQ ID NO:11(LCDR2，c-Met结合臂)
AASSLLS
>SEQ ID NO:12(LCDR3，c-Met结合臂)
QQANSFPIT
>SEQ ID NO:13(VH，EGFR结合臂)
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWDDGSYKYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGITMVRGVMKDYFDYWGQGTLVTVSS
>SEQ ID NO:14(VL，EGFR结合臂)
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSALVWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIK
>SEQ ID NO:15(VH，c-Met结合臂)
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCETSGYTFTSYGISWVRQAPGHGLEWMGWISAYNGYTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDLRGTNYFDYWGQGTLVTVSS
>SEQ ID NO:16(VL，c-Met结合臂)
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISNWLAWFQHKPGKAPKLLIYAASSLLSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGQGTRLEIK
>SEQ ID NO:17 HC1
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFSTYGMHWVRQAPGKGLEWVAVIWDDGSYKYYGDSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARDGITMVRGVMKDYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFLLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>SEQ ID NO:18 LC1
AIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDISSALVWYQQKPGKAPKLLIYDASSLESGVPSRFSGSESGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQFNSYPLTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
>SEQ ID NO:19 HC2
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCETSGYTFTSYGISWVRQAPGHGLEWMGWISAYNGYTNYAQKLQGRVTMTTDTSTSTAYMELRSLRSDDTAVYYCARDLRGTNYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
>SEQ ID NO:20LC2
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISNWLAWFQHKPGKAPKLLIYAASSLLSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPITFGQGTRLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
可公开获得的其他双特异性抗EGFR/c-Met抗体也可以用于本公开的方法中，只要当与埃万妥单抗相比时，它们表现出类似的特性，如美国专利第9,593,164号中所描述。可用于本发明的方法中的双特异性抗EGFR/c-Met抗体也可通过将可公开获得的EGFR结合VH/VL结构域和c-Met结合VH/VL结构域联合并测试所得双特异性抗体的如美国专利第9,593,164号中所述的特征来产生。
于本公开的方法中的双特异性抗EGFR/c-Met抗体可例如使用两个单特异性二价抗体之间的Fab臂交换(或半分子交换)通过下列方式产生：在每个半分子中的重链CH3交界处引入取代以促成在体外无细胞环境中或使用共表达形成具有不同特异性的两个抗体半分子的异源二聚体。Fab臂交换反应是二硫键异构化反应和CH3结构域解离-缔合的结果。亲本单特异性抗体的铰链区中的重链二硫键被还原。亲本单特异性抗体之一的所得游离半胱氨酸与第二亲本单特异性抗体分子的半胱氨酸残基形成重链间二硫键，同时亲本抗体的CH3结构域通过解离-缔合而释放和重新形成。可将Fab臂的CH3结构域改造成促成异源二聚化而非同源二聚化。所得产物是具有各自结合不同的表位(即EGFR上的表位和c-Met上的表位)的两个Fab臂或半分子的双特异性抗体。如，本发明的双特异性抗体可使用国际专利公布号WO 2011/131746中。在IgG1抗体的情况中，可使用一条重链中的突变F405L和另一条重链中的K409R。对于IgG2抗体，可使用具有F405L和R409K取代的野生型IgG2和IgG2抗体。对于IgG4抗体，可使用具有F405L和R409K取代的野生型IgG4和IgG4抗体。为了产生双特异性抗体，将第一单特异性二价抗体和第二单特异性二价抗体工程化以在Fc区中具有前述突变，在足以允许铰链区中的半胱氨酸发生二硫键异构化的还原条件下将抗体一起温育；从而通过Fab臂交换生成双特异性抗体。温育条件最理想地可恢复到非还原条件。可使用的示例性还原剂为2-巯基乙胺(2-MEA)、二硫苏糖醇(DTT)、二硫赤藓糖醇(DTE)、谷胱甘肽、三(2-羧乙基)膦(TCEP)、L-半胱氨酸和β-巯基乙醇。例如，可使用如下条件：在至少25mM 2-MEA的存在下或至少0.5mM二硫苏糖醇的存在下，在5-8的pH例如pH7.0或pH7.4，至少20℃的温度下，温育至少90分钟。
用于本公开的方法中的双特异性抗EGFR/c-Met抗体也可使用诸如杵臼(Knob-in-Hole)(Genentech)、CrossMAbs(Roche)和静电匹配(Chugai,Amgen,NovoNordisk,Oncomed)、LUZ-Y(Genentech)、Strand Exchange工程化Domain body(SEEDbody)(EMDSerono)和Biclonic(Merus)的设计产生。
在“杵臼”策略(参见，例如国际公开WO 2006/028936)中，在人IgG中形成CH3结构域的交界的选定氨基酸可在影响CH3结构域相互作用的位置处突变，从而促进异源二聚体形成。将具有小侧链(杵)的氨基酸引入特异性地结合第一抗原的抗体的重链中，并将具有大侧链(杵)的氨基酸引入特异性地结合第二抗原的抗体的重链中。在两种抗体共表达后，由于具有“扣”的重链与具有“杵”的重链的优先相互作用而形成异源二聚体。形成杵和杵的示例性CH3取代对(表示为第一重链的第一CH3结构域中的修饰位置/第二重链的第二CH3结构域中的修饰位置)是：T366Y/F405A、T366W/F405W、F405W/Y407A、T394W/Y407T、T394S/Y407A、T366W/T394S、F405W/T394S和T366W/T366S_L368A_Y407V。
除利用“杵臼”策略促进Fab壁交换之外，CrossMAb技术还利用一个半臂中的CH1/CL结构域更换，以确保所得的双特异性抗体正确的轻链配对(参见例如美国专利8,242,247)。
可使用其他交换策略如下产生本发明的全长双特异性抗体：在双特异性抗体的一个或两个臂中，在重链与轻链之间或重链之内交换可变结构域或恒定结构域、或这两种结构域。这些交换包括例如VH-CH1与VL-CL、VH与VL、CH3与CL以及CH3与CH1，如在国际专利公布WO2009/080254、WO2009/080251、WO2009/018386和WO2009/080252中有所描述。
还可使用其他策略，诸如通过在一个CH3表面取代带正电荷的残基并在第二CH3表面取代带负电荷的残基使用静电相互作用促进重链异源二聚化，如美国专利公布US2010/0015133；美国专利公布号US2009/0182127；美国专利公布US2010/028637或美国专利公布号US 2011/0123532中。在其他策略中，可通过下面的取代(表示为第一重链的第一CH3结构域中的修饰位置/第二重链的第二CH3结构域中的修饰位置)促进异源二聚化：L351Y_F405A_Y407V/T394W、T366I_K392M_T394W/F405A_Y407V、T366L_K392M_T394W/F405A_Y407V、L351Y_Y407A/T366A_K409F、L351Y_Y407A/T366V_K409F、Y407A/T366A_K409F或T350V_L351Y_F405A_Y407V/T350V_T366L_K392L_T394W，如美国专利公开US2012/0149876或美国专利公布号US2013/0195849中。
SEEDbody技术可用于产生本发明的双特异性抗体。SEEDbodies在其恒定域中具有所选择的经IgA残基取代的IgG残基，以促进异源二聚化，如在美国专利US20070287170中有所描述。
通常使用标准方法以DNA水平到分子水平(诸如抗体的恒定域)上进行突变。
实施方案
1)一种治疗患有对EGFR呈阳性并且缺失至少一个EGFR激活突变的癌症的受试者的方法，该方法包括向患有对该EGFR呈阳性并且缺失至少一个EGFR激活突变的癌症的该受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗-表皮生长因子受体(EGFR)/肝细胞生长因子受体(c-Met)抗体。
2)一种用双特异性抗EGFR/c-Met抗体治疗患有癌症的受试者的方法，该方法包括：
a)提供来自所述受试者的生物样品；
b)确定样品中缺失激活突变的EGFR的存在或不存在；
c)向被确定为缺失EGFR激活突变的该受试者施用该双特异性抗EGFR/c-Met抗体或提供该双特异性抗EGFR/c-Met抗体的施用。
3)根据实施方案1或2所述的方法，其中，该至少一个激活突变是增加EGFR的至少一种生物活性的突变。
4)根据实施方案3所述的方法，其中，EGFR的该至少一种生物活性选自由以下组成的组：酪氨酸激酶活性、配体非依赖性信号传导、细胞增殖增加、MAPK/ERK通路的信号传导、基因转录、二聚化(EGFR:EGFR)以及异源二聚化(EGFR:HER2或EGFR:HER3)。
5)根据实施方案3所述的方法，其中，增加EGFR的至少一种生物活性的该至少一个激活突变包括选自由以下组成的组的至少一个突变：L718Q、G719A、G719X(X为任何氨基酸)、L861X(X为任何氨基酸)、L858R、E746K、L747S、E749Q、A750P、A755V、V765M、C797S、L858P或T790M置换；E746-A750的缺失；R748-P753的缺失；Ala(A)在M766与A767之间的插入；Ser、Val和Ala(SVA)在S768与V769之间的插入；Asn和Ser(NS)在P772与H773之间的插入；一个或多个氨基酸在D761与E762之间、A763与Y764之间、Y764与Y765之间、M766与A767之间、A767与V768之间、S768与V769之间、V769与D770之间、D770与N771之间、N771与P772之间、P772与H773之间、H773与V774、V774与C775之间的插入；EGFR外显子20中的一个或多个缺失；EGFR外显子20、S768I、L861Q和G719X(X为任何氨基酸)中的一个或多个插入。
6)根据实施方案1至5中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括：确定在选自由KRAS、PIK3CA和PTEN组成的组的任何一个基因中至少一个突变的存在或不存在；以及向被确定为具有缺失激活突变的该EGFR并且被确定为缺失在选自由KRAS、PIK3CA和PTEN组成的组的任何一个基因中的至少一个突变的该受试者施用该双特异性抗EGFR/c-Met抗体或提供该双特异性抗EGFR/c-Met抗体的施用。
7)根据实施方案6所述的方法，其中，KRAS中的该至少一个突变选自由G12V、G12C、G12A和G12D组成的组。
8)根据实施方案7所述的方法，其中，KRAS中的该至少一个突变是G12C。
9)根据实施方案8所述的方法，其中，PI3K中的该至少一个突变选自由E545K、H1047L和PI3K扩增组成的组。
10)根据实施方案6所述的方法，其中，PTEN中的该至少一个突变是PTEN缺失。
11)根据实施方案1至10所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括特异性结合EGFR的第一结构域和特异性结合c-Met的第二结构域，其中，该第一结构域包括SEQ ID NO:1的重链互补决定区1(HCDR1)、SEQ ID NO:2的HCDR2、SEQ ID NO:3的HCDR3、SEQID NO:4的轻链互补决定区1(LCDR1)、SEQID NO:5的LCDR2和SEQ ID NO:6的LCDR3，并且其中，结合c-Met的该第二结构域包括SEQ ID NO:7的HCDR1、SEQ ID NO:8的HCDR2、SEQ IDNO:9的HCDR3、SEQ ID NO:10的LCDR1、SEQ ID NO:11的LCDR2和SEQ ID NO:12的LCDR3。
12)根据实施方案1至11中任一项所述的方法，其中，特异性结合EGFR的该第一结构域包括SEQ ID NO:13的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:14的轻链可变区(VL)，并且特异性结合c-Met的该第二结构域包括SEQ ID NO:15的VH和SEQ ID NO:16的VL。
13)根据实施方案1至12中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体是IgG1同种型。
14)根据实施方案1至13中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括SEQ ID NO:17的第一重链(HC1)、SEQID NO:18的第一轻链(LC1)、SEQ ID NO:19的第二重链(HC2)和SEQ ID NO:20的第二轻链(LC2)。
15)根据实施方案1至14中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括一个或多个Fc沉默突变。
16)根据实施方案14所述的方法，其中，该一个或多个Fc沉默突变降低与Fcγ受体的亲和力。
17)根据实施方案15或16所述的方法，其中，该一个或多个Fc沉默突变包括V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S。
18)根据实施方案1至17中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括岩藻糖含量介于约1％至约15％之间的双触角聚糖结构。
19)根据实施方案1至18中任一项所述的方法，其中，该受试者对用一种或多种先前抗癌疗法进行的治疗具有复发性或抗性。
20)根据实施方案19所述的方法，其中，该一种或多种先前抗癌疗法包括一种或多种化学治疗剂、检查点抑制剂、靶向抗癌疗法或激酶抑制剂、或它们的任何组合。
21)根据实施方案20所述的方法，其中，该一种或多种先前抗癌疗法包括卡铂、紫杉醇、吉西他滨、顺铂、长春瑞滨、多西他赛、帕博西尼、克唑替尼、PD-(L)1轴抑制剂、EGFR抑制剂、c-Met抑制剂、HER2抑制剂、HER3抑制剂、HER4抑制剂、VEGFR抑制剂、AXL抑制剂、埃罗替尼、吉非替尼、拉帕替尼、凡德他尼、阿法替尼、奥希替尼、拉泽替尼、波齐替尼、克里替尼、卡博替尼、卡马替尼、阿昔替尼、乐伐替尼、尼达尼布、瑞格非尼、帕唑帕尼、索拉非尼或舒尼替尼、或它们的任何组合。
22)根据实施方案1至18中任一项所述的方法，其中，该受试者是未接受过治疗的。
23)根据实施方案1至22中任一项所述的方法，其中，对缺失激活突变的该EGFR呈阳性的癌症对选自由以下组成的组的基因中的至少一个突变呈阳性：ALK、APC、BRAF、BRCA1、BRCA2、CDKN2A、CDKN2B、CTNNB1、ERBB2、ERBB3、FGFR3、KIT、LRP1B、MET、MLH1、MSH3、NOTCH1、NTRK1、RET、ROS1、STK11、TP53以及VEGFA。
24)根据实施方案1至23中任一项所述的方法，其中，该癌症是肺癌、胃癌、结直肠癌、脑癌、源自上皮细胞的癌症、乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌、肛门癌、前列腺癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、咽癌、鼻癌、胰腺癌、皮肤癌、口腔癌、舌癌、食管癌、阴道癌、宫颈癌、脾癌、睾丸癌、胃癌、胸腺癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌、肝细胞癌(HCC)或者散发性或遗传性乳头状肾细胞癌(PRCC)、或它们的任何组合。
25)根据实施方案24所述的方法，其中，肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌(SCLC)或肺腺癌、肺肉瘤样癌、或它们的任何组合。
26)根据实施方案1至25中任一项所述的方法，该方法还包括向该受试者施用一种或多种抗癌疗法。
27)根据实施方案26所述的方法，其中，该一种或多种抗癌疗法包括化学疗法、放射疗法、手术、靶向抗癌疗法、激酶抑制剂、或它们的任何组合。
28)根据实施方案20所述的方法，其中，该激酶抑制剂是EGFR抑制剂、c-Met抑制剂、HER2抑制剂、HER3抑制剂、HER4抑制剂、VEGFR抑制剂或AXL抑制剂。
29)根据实施方案28所述的方法，其中，该激酶抑制剂是埃罗替尼、吉非替尼、拉帕替尼、凡德他尼、阿法替尼、奥希替尼、拉泽替尼、波齐替尼、克里替尼、卡博替尼、卡马替尼、阿昔替尼、乐伐替尼、尼达尼布、瑞格非尼、帕唑帕尼、索拉非尼或舒尼替尼。
30)根据实施方案1至29中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体以介于约140mg至约2240mg之间的剂量施用。
31)根据实施方案1至30中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg、约1500mg、约1550mg、约1575mg、约1600mg、约1650mg、约1700mg、约1750mg、约1800mg、约1850mg、约1900mg、约1950mg、约2000mg、约2050mg、约2100mg、约2150mg、约2200mg、或约2240mg的剂量施用。
32)根据实施方案1至31中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体以1050mg的剂量施用。
33)根据实施方案1至31中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体以1400mg的剂量施用。
34)根据实施方案1至31中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体以1575mg的剂量施用。
35)根据实施方案1至31中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体以1600mg的剂量施用。
36)根据实施方案1至31中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体以2100mg的剂量施用。
37)根据实施方案1至31中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体以2240mg的剂量施用。
38)根据实施方案1至37中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周两次、每周一次、两周一次、三周一次或四周一次地施用。
39)根据实施方案1至38中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体是静脉内施用的。
40)根据实施方案1至38中任一项所述的方法，其中，该双特异性抗EGFR/c-Met抗体是皮下施用的。
41)根据实施方案1至5中任一项所述的方法，其中，该方法还包括：确定双调蛋白的水平；以及向被确定为具有缺失激活突变的EGFR并且被确定为对双调蛋白呈阳性的受试者施用双特异性抗EGFR/c-Met抗体或提供双特异性抗EGFR/c-Met抗体的施用。
本发明现将结合以下具体的、非限制性实施例进行描述。
实施例1.表达缺失激活突变的EGFR的非小细胞肺癌(NSCLC)患者来源的异种移植 (PDX)肿瘤的表征。
如通过免疫组织化学(IHC)确定的EGFR和MET蛋白水平；如通过邻近连接测定(PLA)确定的信号传导；以及肿瘤相关巨噬细胞(TAM)含量在具有缺失激活突变的EGFR的39个NSCLC患者来源的异种移植(PDX)模型中进行评估。EGFR中激活突变的缺失由全外显子组测序(WES)确定。具有缺失激活突变的EGFR的、福尔马林固定和石蜡包埋(FFPE)的39个NSCLC PDX肿瘤是从查尔斯河实验室(德国弗赖堡CRL)获得的。肿瘤包括19个腺癌和20个表皮样NSCLC。使用IHC和PLA，在这些模型中，针对EGFR和MET两者评估受体蛋白水平与受体信号传导之间的相关性。
对于IHC研究，组织切片的处理如Smith等人2015(Annotation of human cancerswith EGFR signaling–associated protein complexes using proximity ligationassays.Matthew A.Smith等人2015,Science Signaling,8(359):ra4)所描述的。简言之，对切片进行复水并取得抗原。通过用1.5％牛血清白蛋白(BSA)温育阻断非特异性结合，并且该非特异性结合使用靶向EGFR的兔抗体(Ventana；克隆5B7)或利用MET克隆D1C2(细胞信号传导(Cell Signaling))和磷酸化MET克隆D26(细胞信号传导)在BSA于0.5％ PBST中温育过夜。载玻片用PBST清洗两次，用EnVision+抗兔蛋白(K400311-2，安捷伦(Agilent))温育1小时，然后通过DAB(二氨基联苯胺)显色。载玻片用苏木精反染，复化并硬装片。为了计算H分数，对细胞的染色强度进行评分(0、1+、2+、3+)，并确定每个强度下的细胞百分比。然后使用式[1×(细胞1％+)+2×(细胞2％+)+3×(细胞3％+)]来计算每个PDX模型的在0到300范围内的H分数。
邻位连接技术(PLA)根据公布的协议(Annotation of human cancers with EGFRsignaling–associated protein complexes using proximity ligationassays.Matthew A.Smith等人2015,Science Signaling,8(359):ra4)执行。简言之，通过二甲苯和分级醇对含有FFPE PDX肿瘤的5μm切片的载玻片进行复水。在tris-EDTA(pH 9)的压力锅中执行热诱导的表位检索持续20min，然后冷却20min。在室温下通过用1.5％牛血清白蛋白(BSA)温育30min来阻断非特异性结合。一级抗体使用靶向EGFR的兔抗体(克隆D38B1，细胞信号传导技术公司)或经过1:300稀释的MET克隆D1C2(细胞信号传导)和靶向生长因子受体结合蛋白2(GRB2)小鼠抗体(克隆81，BD生物科学公司(BD Biosciences))在1.5％ BSA于0.5％磷酸盐缓冲盐水(PBS)—Tween 20(PBST)中温育过夜。PLA探针为兔(-)和小鼠(+)，并用DuolinkTMIn Situ PLA远红试剂盒(西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich))进行检测。使用Alexa Fluor 488缀合的抗细胞角蛋白来划分上皮区域(克隆AE1/AE3，e生物科学公司(eBioscience))。
在Leica TCS SP5 AOBS(声光分束器)激光扫描共聚焦显微镜上通过40×1.25NA(数值孔径)平面复消色差油浸物镜(徕卡显微系统公司(Leica Microsystems)CMS GmbH)获取共焦图像。应用二极管(405)和HeNe(647)激光线来激发样品，并且使用可调发射来最小化荧光染料之间的串扰。用光电倍增器捕获每个样品的Z叠层(0.5μm厚的切片)图像，并用LAS AF软件2.6版(徕卡显微系统公司)制备最大投影。在具有40×1.25NA油浸物镜以及DAPI和Cy5滤光块的全自动直立式蔡司Axio-ImagerZ.1显微镜上获取附加的荧光图像。使用AxioCam MRm CCD(电荷耦合装置)相机和Axiovision 4.6版软件套件(卡尔蔡司公司(Carl Zeiss Inc.))产生图像。使用配备有全电动载物台以及DAPI、Cy3、FITC(异硫氰酸荧光素)和Cy5滤光块的AQUA工作站(PM-2000，HistoRx)上使用20×物镜(干)获取所有基于组织的PLA和AQUA分析图像。将图像保存为单独的通道，并导出为合并的RGB TIFF图像(Annotation of human cancers with EGFR signaling–associated protein complexesusing proximity ligation assays.Matthew A.Smith等人2015,Science Signaling,8(359):ra4；MET-GRB2 Signaling-Associated Complexes Correlate with OncogenicMET Signaling and Sensitivity to MET Kinase Inhibitors.Matthew A.Smith等人2017,Clin Cancer Res.2017,23(22):7084–7096)。
PLA分数如先前所描述的那样进行确定(Smith等人2015)。简言之，PLA是使用评分标准基于每个细胞病灶进行人工量化的(0，不可检测到；1+，每个细胞1至5个病灶；2+，每个细胞>5至20个病灶；3+，每个细胞>20个病灶)，并标注为“高”(两个核中均为2+至3+)或“低”(0至1+)。
结果表明，观察到EGFR(r＝0.63，p<0.0001，参见图1A)和MET(r＝0.83，p<0.0001，参见图2A)两者的IHC分数与PLA分数之间的在统计学上显著的相关性。斯皮尔曼相关性(Spearman's correlation)用于计算r值，并且双尾检验用于计算p值(Prism Graphpadv.7.0.0)。具体地，如果XY对少于17个，则使用置换检验计算斯皮尔曼相关性系数的p值。否则，将统计与具有n-2自由度的学生t分布进行比较，其中，r为斯皮尔曼相关性系数，而n为XY对数。
实施例2.埃万妥单抗在具有缺失激活突变的EGFR的NSCLC模型中的功效不需要Fc 受体的参与。
接下来，在体内检测埃万妥单抗在具有缺失激活突变的EGFR的NSCLC模型中的功效。
体内研究在查尔斯河实验室(德国弗赖堡CRL)根据杨森动物护理和使用委员会(Janssen Animal and Care and Use Committee)的政策和程序执行。在NMRI nu/nu小鼠(CRL)一侧皮下植入14个NSCLC PDX肿瘤，并当肿瘤达到50至200mm3时随机分为治疗组。通过腹膜内注射10mg/kg同种型对照或埃万妥单抗或具有沉默Fc的EGFR/MET双特异性抗体来每周治疗两次，持续3周。EGFR/MET沉默Fc抗体保留了埃万妥单抗的EGFR和MET臂，并对重链进行V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S置换，从而在统计学上显著降低了与Fcγ受体和Cq1补体的亲和力。通过卡尺测量肿瘤，并且使用式：(长度×(宽度)2)/2计算肿瘤体积。肿瘤生长抑制百分比(TGI％)值在最后一次给药后7天使用式：{1-[(经治疗t-经治疗i)/(对照t-对照i)]}×100进行计算。
结果表明，在所测试的14个PDX模型中，埃万妥单抗在13个模型中抑制了肿瘤生长(代表性功效绘图在图2A和图2B中示出)。在埃万妥单抗显示出活性的这13个模型中，缺失与Fc受体结合的EGFR/MET沉默Fc抗体具有等效性(图2A和图2B)。具有MET基因扩增的模型LXFA2158是埃万妥单抗与Fc结合对功效至关重要的唯一PDX模型(图2C)。这与先前报道的数据(Smruthi Vijayaraghavan等人2020,Molecular Cancer Therapeutics,19(10):2044-2056)一致，这证明了埃万妥单抗Fc相互作用在MET扩增的和EGFR突变的模型系统中的必要性。
实施例3.受体表达与埃万妥单抗信号传导体内功效之间的关系。
接下来，评估了受体表达或信号传导与埃万妥单抗体内功效之间的关系。
IHC和PLA测定如实施例1中所描述的执行。关于EGFR和MET IHC H分数和PLA分数绘制了在具有缺失激活突变的EGFR的PDX肿瘤中的埃万妥单抗功效(TGI％)(参见图3A至图3D)。虽然确定了EGFR的功效与IHC和PLA两者之间的正相关性(IHC：r＝0.397；PLA：r＝0.22)，但相关性并不具有统计学显著性(p>0.05)。没有观察到肿瘤功效与MET表达或信号传导之间存在正相关性。
实施例4.PDX肿瘤的基因组分析。
接下来，评估了具有缺失激活突变的EGFR的PDX肿瘤的表达和突变状态与在实施例2中获得的肿瘤生长抑制％之间的关联。实施例2中使用的在具有缺失激活突变的EGFR的PDX肿瘤中常见癌基因的表达数据和突变状态由查尔斯河实验室(德国弗赖堡)提供并完全拥有。图4A中列出的常见癌基因的表达是通过RNA-Seq确定的，并且突变状态是通过全外显子组测序确定的(图4B)。虽然埃万妥单抗对许多这些具有缺失激活突变的EGFR的NSCLCPDX模型中高度有效(图4C)，但KRAS和PI3K通路中的突变被鉴定为指示抗肿瘤活性降低的生物标志物(参见图4A至图4C)。
在评估EGFR与功效的相关性时，我们观察了模型子集，在该模型子集中观察到，TGI％的趋势低于数据集的线性拟合，然而，EGFR水平相对较高(图3A)。有趣的是，据发现，此模型子集包含KRAS或PI3K通路中的突变，并且表明这些通路中的异常信号传导可能会降低埃万妥单抗的活性。
实施例5.缺失KRAS和PI3K通路突变的PDX肿瘤与增加的埃万妥单抗功效相关联。
接下来，在来自实施例2的PDX肿瘤亚组中评估了埃万妥单抗功效(TGI％)与H分数和PLA分数之和(参见表1)的关联，其中，移除了对位于EGFR和MET下游的已知癌基因驱动突变(诸如KRAS和PI3K)呈阳性的肿瘤，参见表2。如实施例1所描述的，使用斯皮尔曼相关性和双尾检验(Prism Graphpad 7.00)计算相关性系数和p值。
结果表明，排除具有KRAS或PI3K通路突变的肿瘤会导致埃万妥单抗功效与EGFR表达和信号传导之间显示出统计学上显著的相关性(IHC+PLA-r＝0.88，p＝0.0032，参见图5A)。事实上，EGFR H分数≥170并且无替代性驱动突变的模型在进行埃万妥单抗治疗后实现了肿瘤长期停滞或肿瘤完全消退(代表性肿瘤生长曲线在图2A和图2B中示出)。未观察到埃万妥单抗功效与MET表达和信号传导的相关性(图5B)。
表1.当用埃万妥单抗治疗时针对具有缺失激活突变的EGFR的PDX肿瘤确定的IHC 分数(H分数)、PLA分数、它们的总和以及TGI％。
表2.在PDX肿瘤中检测到的KRAS和PI3K通路突变
PDX肿瘤模型 KRAS PIK3CA PTEN
LXFA 592 G12C - -
LXFE 470 - E545K -
LXFE 2220 - H1047L -
LXFE 1066 - 扩增 缺失(与表达丧失相关联)
LXFE 2257 - - 丧失(与表达丧失相关联)
实施例6.对在具有缺失激活突变的EGFR的PDX肿瘤中EGFR配体表达与埃万妥单抗 功效的关联的分析。
接下来，评估了具有缺失激活突变的EGFR的PDX肿瘤中的EGFR配体的表达与在实施例2中获得的肿瘤生长抑制％之间的关联。使用RNA-Seq确定表皮生长因子(EGF)、双调蛋白(AREG)、转化生长因子α(TGFα)、结合肝素的EGF样生长因子(HBEGF)、β细胞素(BTC)、表皮调节素(EREG)和上皮细胞有丝分裂蛋白抗体(EPGN)在实施例2中使用的具有缺失激活突变的EGFR的PDX肿瘤中的表达。这些数据由查尔斯河实验室(德国弗莱堡)提供并完全拥有。双调蛋白表达仅对测试了体内功效的14个NSCLC模型中的11个NSCLC模型可用(数据对LXFA2158、LXFA 2165和LXFA 2201不可用)。双调蛋白表达与埃万妥单抗体内功效之间存在统计学上的显著相关性(r＝0.66；p＝0.03)(图6)。双调蛋白表达与埃万妥单抗功效之间的此关联与KRAS和PI3K通路突变无关。因此，双调蛋白表达可鉴定可能从埃万妥单抗治疗中获得临床获益的患者。
序列表
<110> Janssen Biotech, Inc.
Henley, BenjamiN
Moores, Sheri
<120> 对缺失EGFR激活突变的癌症的治疗
<130> JBI6507WOPCT1
<140> 待转让
<141> 2022-03-07
<150> US 63/158,552
<151> 2021-03-09
<160> 21
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR1，EGFR结合臂
<400> 1
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR2，EGFR结合臂
<400> 2
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Gly
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> HCDR3，EGFR结合臂
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> LCDR1，EGFR结合臂
<400> 4
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<213> 人工序列
<220>
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<213> 人工序列
<220>
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Gly
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Asp Leu Arg Gly Thr Asn Tyr Phe Asp Tyr
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<220>
<223> VH，EGFR结合臂
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Asp Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Ile Thr Met Val Arg Gly Val Met Lys Asp Tyr Phe
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120 125
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<220>
<223> VL，EGFR结合臂
<400> 14
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 119
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<213> 人工序列
<220>
<223> VH，c-Met结合臂
<400> 15
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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Ala Arg Asp Leu Arg Gly Thr Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> VL，c-Met结合臂
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys
100 105
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<211> 455
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链1
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Thr Tyr
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Asp Asp Gly Ser Tyr Lys Tyr Tyr Gly Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Gly Ile Thr Met Val Arg Gly Val Met Lys Asp Tyr Phe
100 105 110
Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr
115 120 125
Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser
130 135 140
Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu
145 150 155 160
Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His
165 170 175
Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser
180 185 190
Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys
195 200 205
Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu
210 215 220
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
225 230 235 240
Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
245 250 255
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
260 265 270
Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp
275 280 285
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr
290 295 300
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
305 310 315 320
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu
325 330 335
Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
340 345 350
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys
355 360 365
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
370 375 380
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
385 390 395 400
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Leu Leu Tyr Ser
405 410 415
Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser
420 425 430
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
435 440 445
Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
450 455
<210> 18
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链1
<400> 18
Ala Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser Ser Ala
20 25 30
Leu Val Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Ser Leu Glu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Glu Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Asn Ser Tyr Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 19
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重链2
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Glu Thr Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Gly Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Trp Ile Ser Ala Tyr Asn Gly Tyr Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Leu
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Thr Asp Thr Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Arg Ser Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Asp Leu Arg Gly Thr Asn Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe
115 120 125
Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu
130 135 140
Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp
145 150 155 160
Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu
165 170 175
Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser
180 185 190
Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro
195 200 205
Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys
210 215 220
Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly
435 440 445
Lys
<210> 20
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 轻链2
<400> 20
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Asn Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Phe Gln His Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Leu Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Ile
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 21
<211> 1210
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 21
Met Arg Pro Ser Gly Thr Ala Gly Ala Ala Leu Leu Ala Leu Leu Ala
1 5 10 15
Ala Leu Cys Pro Ala Ser Arg Ala Leu Glu Glu Lys Lys Val Cys Gln
20 25 30
Gly Thr Ser Asn Lys Leu Thr Gln Leu Gly Thr Phe Glu Asp His Phe
35 40 45
Leu Ser Leu Gln Arg Met Phe Asn Asn Cys Glu Val Val Leu Gly Asn
50 55 60
Leu Glu Ile Thr Tyr Val Gln Arg Asn Tyr Asp Leu Ser Phe Leu Lys
65 70 75 80
Thr Ile Gln Glu Val Ala Gly Tyr Val Leu Ile Ala Leu Asn Thr Val
85 90 95
Glu Arg Ile Pro Leu Glu Asn Leu Gln Ile Ile Arg Gly Asn Met Tyr
100 105 110
Tyr Glu Asn Ser Tyr Ala Leu Ala Val Leu Ser Asn Tyr Asp Ala Asn
115 120 125
Lys Thr Gly Leu Lys Glu Leu Pro Met Arg Asn Leu Gln Glu Ile Leu
130 135 140
His Gly Ala Val Arg Phe Ser Asn Asn Pro Ala Leu Cys Asn Val Glu
145 150 155 160
Ser Ile Gln Trp Arg Asp Ile Val Ser Ser Asp Phe Leu Ser Asn Met
165 170 175
Ser Met Asp Phe Gln Asn His Leu Gly Ser Cys Gln Lys Cys Asp Pro
180 185 190
Ser Cys Pro Asn Gly Ser Cys Trp Gly Ala Gly Glu Glu Asn Cys Gln
195 200 205
Lys Leu Thr Lys Ile Ile Cys Ala Gln Gln Cys Ser Gly Arg Cys Arg
210 215 220
Gly Lys Ser Pro Ser Asp Cys Cys His Asn Gln Cys Ala Ala Gly Cys
225 230 235 240
Thr Gly Pro Arg Glu Ser Asp Cys Leu Val Cys Arg Lys Phe Arg Asp
245 250 255
Glu Ala Thr Cys Lys Asp Thr Cys Pro Pro Leu Met Leu Tyr Asn Pro
260 265 270
Thr Thr Tyr Gln Met Asp Val Asn Pro Glu Gly Lys Tyr Ser Phe Gly
275 280 285
Ala Thr Cys Val Lys Lys Cys Pro Arg Asn Tyr Val Val Thr Asp His
290 295 300
Gly Ser Cys Val Arg Ala Cys Gly Ala Asp Ser Tyr Glu Met Glu Glu
305 310 315 320
Asp Gly Val Arg Lys Cys Lys Lys Cys Glu Gly Pro Cys Arg Lys Val
325 330 335
Cys Asn Gly Ile Gly Ile Gly Glu Phe Lys Asp Ser Leu Ser Ile Asn
340 345 350
Ala Thr Asn Ile Lys His Phe Lys Asn Cys Thr Ser Ile Ser Gly Asp
355 360 365
Leu His Ile Leu Pro Val Ala Phe Arg Gly Asp Ser Phe Thr His Thr
370 375 380
Pro Pro Leu Asp Pro Gln Glu Leu Asp Ile Leu Lys Thr Val Lys Glu
385 390 395 400
Ile Thr Gly Phe Leu Leu Ile Gln Ala Trp Pro Glu Asn Arg Thr Asp
405 410 415
Leu His Ala Phe Glu Asn Leu Glu Ile Ile Arg Gly Arg Thr Lys Gln
420 425 430
His Gly Gln Phe Ser Leu Ala Val Val Ser Leu Asn Ile Thr Ser Leu
435 440 445
Gly Leu Arg Ser Leu Lys Glu Ile Ser Asp Gly Asp Val Ile Ile Ser
450 455 460
Gly Asn Lys Asn Leu Cys Tyr Ala Asn Thr Ile Asn Trp Lys Lys Leu
465 470 475 480
Phe Gly Thr Ser Gly Gln Lys Thr Lys Ile Ile Ser Asn Arg Gly Glu
485 490 495
Asn Ser Cys Lys Ala Thr Gly Gln Val Cys His Ala Leu Cys Ser Pro
500 505 510
Glu Gly Cys Trp Gly Pro Glu Pro Arg Asp Cys Val Ser Cys Arg Asn
515 520 525
Val Ser Arg Gly Arg Glu Cys Val Asp Lys Cys Asn Leu Leu Glu Gly
530 535 540
Glu Pro Arg Glu Phe Val Glu Asn Ser Glu Cys Ile Gln Cys His Pro
545 550 555 560
Glu Cys Leu Pro Gln Ala Met Asn Ile Thr Cys Thr Gly Arg Gly Pro
565 570 575
Asp Asn Cys Ile Gln Cys Ala His Tyr Ile Asp Gly Pro His Cys Val
580 585 590
Lys Thr Cys Pro Ala Gly Val Met Gly Glu Asn Asn Thr Leu Val Trp
595 600 605
Lys Tyr Ala Asp Ala Gly His Val Cys His Leu Cys His Pro Asn Cys
610 615 620
Thr Tyr Gly Cys Thr Gly Pro Gly Leu Glu Gly Cys Pro Thr Asn Gly
625 630 635 640
Pro Lys Ile Pro Ser Ile Ala Thr Gly Met Val Gly Ala Leu Leu Leu
645 650 655
Leu Leu Val Val Ala Leu Gly Ile Gly Leu Phe Met Arg Arg Arg His
660 665 670
Ile Val Arg Lys Arg Thr Leu Arg Arg Leu Leu Gln Glu Arg Glu Leu
675 680 685
Val Glu Pro Leu Thr Pro Ser Gly Glu Ala Pro Asn Gln Ala Leu Leu
690 695 700
Arg Ile Leu Lys Glu Thr Glu Phe Lys Lys Ile Lys Val Leu Gly Ser
705 710 715 720
Gly Ala Phe Gly Thr Val Tyr Lys Gly Leu Trp Ile Pro Glu Gly Glu
725 730 735
Lys Val Lys Ile Pro Val Ala Ile Lys Glu Leu Arg Glu Ala Thr Ser
740 745 750
Pro Lys Ala Asn Lys Glu Ile Leu Asp Glu Ala Tyr Val Met Ala Ser
755 760 765
Val Asp Asn Pro His Val Cys Arg Leu Leu Gly Ile Cys Leu Thr Ser
770 775 780
Thr Val Gln Leu Ile Thr Gln Leu Met Pro Phe Gly Cys Leu Leu Asp
785 790 795 800
Tyr Val Arg Glu His Lys Asp Asn Ile Gly Ser Gln Tyr Leu Leu Asn
805 810 815
Trp Cys Val Gln Ile Ala Lys Gly Met Asn Tyr Leu Glu Asp Arg Arg
820 825 830
Leu Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Val Leu Val Lys Thr Pro
835 840 845
Gln His Val Lys Ile Thr Asp Phe Gly Leu Ala Lys Leu Leu Gly Ala
850 855 860
Glu Glu Lys Glu Tyr His Ala Glu Gly Gly Lys Val Pro Ile Lys Trp
865 870 875 880
Met Ala Leu Glu Ser Ile Leu His Arg Ile Tyr Thr His Gln Ser Asp
885 890 895
Val Trp Ser Tyr Gly Val Thr Val Trp Glu Leu Met Thr Phe Gly Ser
900 905 910
Lys Pro Tyr Asp Gly Ile Pro Ala Ser Glu Ile Ser Ser Ile Leu Glu
915 920 925
Lys Gly Glu Arg Leu Pro Gln Pro Pro Ile Cys Thr Ile Asp Val Tyr
930 935 940
Met Ile Met Val Lys Cys Trp Met Ile Asp Ala Asp Ser Arg Pro Lys
945 950 955 960
Phe Arg Glu Leu Ile Ile Glu Phe Ser Lys Met Ala Arg Asp Pro Gln
965 970 975
Arg Tyr Leu Val Ile Gln Gly Asp Glu Arg Met His Leu Pro Ser Pro
980 985 990
Thr Asp Ser Asn Phe Tyr Arg Ala Leu Met Asp Glu Glu Asp Met Asp
995 1000 1005
Asp Val Val Asp Ala Asp Glu Tyr Leu Ile Pro Gln Gln Gly Phe
1010 1015 1020
Phe Ser Ser Pro Ser Thr Ser Arg Thr Pro Leu Leu Ser Ser Leu
1025 1030 1035
Ser Ala Thr Ser Asn Asn Ser Thr Val Ala Cys Ile Asp Arg Asn
1040 1045 1050
Gly Leu Gln Ser Cys Pro Ile Lys Glu Asp Ser Phe Leu Gln Arg
1055 1060 1065
Tyr Ser Ser Asp Pro Thr Gly Ala Leu Thr Glu Asp Ser Ile Asp
1070 1075 1080
Asp Thr Phe Leu Pro Val Pro Glu Tyr Ile Asn Gln Ser Val Pro
1085 1090 1095
Lys Arg Pro Ala Gly Ser Val Gln Asn Pro Val Tyr His Asn Gln
1100 1105 1110
Pro Leu Asn Pro Ala Pro Ser Arg Asp Pro His Tyr Gln Asp Pro
1115 1120 1125
His Ser Thr Ala Val Gly Asn Pro Glu Tyr Leu Asn Thr Val Gln
1130 1135 1140
Pro Thr Cys Val Asn Ser Thr Phe Asp Ser Pro Ala His Trp Ala
1145 1150 1155
Gln Lys Gly Ser His Gln Ile Ser Leu Asp Asn Pro Asp Tyr Gln
1160 1165 1170
Gln Asp Phe Phe Pro Lys Glu Ala Lys Pro Asn Gly Ile Phe Lys
1175 1180 1185
Gly Ser Thr Ala Glu Asn Ala Glu Tyr Leu Arg Val Ala Pro Gln
1190 1195 1200
Ser Ser Glu Phe Ile Gly Ala
1205 1210

Claims (40)

1.一种治疗患有对EGFR呈阳性并且缺失至少一个EGFR激活突变的癌症的受试者的方法，所述方法包括向患有对EGFR呈阳性并且缺失至少一个EGFR激活突变的癌症的所述受试者施用治疗有效量的分离的双特异性抗-表皮生长因子受体(EGFR)/肝细胞生长因子受体(c-Met)抗体。
2.一种用双特异性抗EGFR/c-Met抗体治疗患有癌症的受试者的方法，所述方法包括：
a)提供来自所述受试者的生物样品；
b)确定所述样品中EGFR激活突变的存在或不存在；
c)向被确定为缺失EGFR激活突变的所述受试者施用所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体或提供所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体的施用。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中，所述至少一个激活突变是增加EGFR的至少一种生物活性的突变。
4.根据权利要求3所述的方法，其中，EGFR的所述至少一种生物活性选自由以下组成的组：酪氨酸激酶活性、配体非依赖性信号传导、细胞增殖增加、MAPK/ERK通路的信号传导、基因转录、二聚化(EGFR:EGFR)以及异源二聚化(EGFR:HER2或EGFR:HER3)。
5.根据权利要求3所述的方法，其中，增加EGFR的至少一种生物活性的所述至少一个激活突变包括选自由以下组成的组的至少一个突变：L718Q、G719A、G719X(X为任何氨基酸)、L861X(X为任何氨基酸)、L858R、E746K、L747S、E749Q、A750P、A755V、V765M、C797S、L858P或T790M置换；E746-A750的缺失；R748-P753的缺失；Ala(A)在M766与A767之间的插入；Ser、Val和Ala(SVA)在S768与V769之间的插入；Asn和Ser(NS)在P772与H773之间的插入；一个或多个氨基酸在D761与E762之间、A763与Y764之间、Y764与Y765之间、M766与A767之间、A767与V768之间、S768与V769之间、V769与D770之间、D770与N771之间、N771与P772之间、P772与H773之间、H773与V774、V774与C775之间的插入；EGFR外显子20中的一个或多个缺失；EGFR外显子20、S768I、L861Q和G719X(X为任何氨基酸)中的一个或多个插入。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中，所述方法还包括：确定在选自由KRAS、PIK3CA和PTEN组成的组的任何一个基因中至少一个突变的存在或不存在；以及向被确定为具有缺失激活突变的所述EGFR并且被确定为缺失在选自由KRAS、PIK3CA和PTEN组成的组的任何一个基因中的至少一个突变的所述受试者施用所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体或提供所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体的施用。
7.根据权利要求6所述的方法，其中，KRAS中的所述至少一个突变选自由G12V、G12C、G12A和G12D组成的组。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，KRAS中的所述至少一个突变是G12C。
9.根据权利要求8所述的方法，其中，PI3K中的所述至少一个突变选自由E545K、H1047L和PI3K扩增组成的组。
10.根据权利要求6所述的方法，其中，PTEN中的所述至少一个突变是PTEN缺失。
11.根据权利要求1至10所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括特异性结合EGFR的第一结构域和特异性结合c-Met的第二结构域，其中所述第一结构域包括SEQID NO:1的重链互补决定区1(HCDR1)、SEQ ID NO:2的HCDR2、SEQ ID NO:3的HCDR3、SEQ IDNO:4的轻链互补决定区1(LCDR1)、SEQ ID NO:5的LCDR2和SEQ ID NO:6的LCDR3，并且其中结合c-Met的所述第二结构域包括SEQ ID NO:7的HCDR1、SEQ ID NO:8的HCDR2、SEQ ID NO:9的HCDR3、SEQ ID NO:10的LCDR1、SEQ ID NO:11的LCDR2和SEQ ID NO:12的LCDR3。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的方法，其中，特异性结合EGFR的所述第一结构域包括SEQ ID NO:13的重链可变区(VH)和SEQ ID NO:14的轻链可变区(VL)，并且特异性结合c-Met的所述第二结构域包括SEQ ID NO:15的VH和SEQ ID NO:16的VL。
13.根据权利要求1至12中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体是IgG1同种型。
14.根据权利要求1至13中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括SEQ ID NO:17的第一重链(HC1)、SEQ ID NO:18的第一轻链(LC1)、SEQ ID NO:19的第二重链(HC2)和SEQ ID NO:20的第二轻链(LC2)。
15.根据权利要求1至14中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括一个或多个Fc沉默突变。
16.根据权利要求14所述的方法，其中，所述一个或多个Fc沉默突变降低与Fcγ受体的亲和力。
17.根据权利要求15或16所述的方法，其中，所述一个或多个Fc沉默突变包括V234A/G237A/P238S/H268A/V309L/A330S/P331S。
18.根据权利要求1至17中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体包括岩藻糖含量介于约1％至约15％之间的双触角聚糖结构。
19.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中，所述受试者对用一种或多种先前抗癌疗法进行的治疗具有复发性或抗性。
20.根据权利要求19所述的方法，其中，所述一种或多种先前抗癌疗法包括一种或多种化学治疗剂、检查点抑制剂、靶向抗癌疗法或激酶抑制剂、或它们的任何组合。
21.根据权利要求20所述的方法，其中，所述一种或多种先前抗癌疗法包括卡铂、紫杉醇、吉西他滨、顺铂、长春瑞滨、多西他赛、帕博西尼、克唑替尼、PD-(L)1轴抑制剂、EGFR抑制剂、c-Met抑制剂、HER2抑制剂、HER3抑制剂、HER4抑制剂、VEGFR抑制剂、AXL抑制剂、埃罗替尼、吉非替尼、拉帕替尼、凡德他尼、阿法替尼、奥希替尼、拉泽替尼、波齐替尼、克里替尼、卡博替尼、卡马替尼、阿昔替尼、乐伐替尼、尼达尼布、瑞格非尼、帕唑帕尼、索拉非尼或舒尼替尼、或它们的任何组合。
22.根据权利要求1至18中任一项所述的方法，其中，所述受试者是未接受过治疗的。
23.根据权利要求1至22中任一项所述的方法，其中，对缺失激活突变的所述EGFR呈阳性的癌症对选自由以下组成的组的基因中的至少一个突变呈阳性：ALK、APC、BRAF、BRCA1、BRCA2、CDKN2A、CDKN2B、CTNNB1、ERBB2、ERBB3、FGFR3、KIT、LRP1B、MET、MLH1、MSH3、NOTCH1、NTRK1、RET、ROS1、STK11、TP53以及VEGFA。
24.根据权利要求1至23中任一项所述的方法，其中，所述癌症是肺癌、胃癌、结直肠癌、脑癌、源自上皮细胞的癌症、乳腺癌、卵巢癌、结直肠癌、肛门癌、前列腺癌、肾癌、膀胱癌、头颈癌、咽癌、鼻癌、胰腺癌、皮肤癌、口腔癌、舌癌、食管癌、阴道癌、宫颈癌、脾癌、睾丸癌、胃癌、胸腺癌、结肠癌、甲状腺癌、肝癌、肝细胞癌(HCC)或者散发性或遗传性乳头状肾细胞癌(PRCC)、或它们的任何组合。
25.根据权利要求24所述的方法，其中，肺癌是非小细胞肺癌(NSCLC)、小细胞肺癌(SCLC)或肺腺癌、肺肉瘤样癌、或它们的任何组合。
26.根据权利要求1至25中任一项所述的方法，所述方法还包括向所述受试者施用一种或多种抗癌疗法。
27.根据权利要求26所述的方法，其中，所述一种或多种抗癌疗法包括化学疗法、放射疗法、手术、靶向抗癌疗法、激酶抑制剂、或它们的任何组合。
28.根据权利要求20所述的方法，其中，所述激酶抑制剂是EGFR抑制剂、c-Met抑制剂、HER2抑制剂、HER3抑制剂、HER4抑制剂、VEGFR抑制剂、或AXL抑制剂。
29.根据权利要求28所述的方法，其中，所述激酶抑制剂是埃罗替尼、吉非替尼、拉帕替尼、凡德他尼、阿法替尼、奥希替尼、拉泽替尼、波齐替尼、克里替尼、卡博替尼、卡马替尼、阿昔替尼、乐伐替尼、尼达尼布、瑞格非尼、帕唑帕尼、索拉非尼、或舒尼替尼。
30.根据权利要求1至29中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体以介于约140mg至约2240mg之间的剂量施用。
31.根据权利要求1至30中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体以约700mg、约750mg、约800mg、约850mg、约900mg、约950mg、约1000mg、约1050mg、约1100mg、约1150mg、约1200mg、约1250mg、约1300mg、约1350mg、约1400mg、约1450mg、约1500mg、约1550mg、约1575mg、约1600mg、约1650mg、约1700mg、约1750mg、约1800mg、约1850mg、约1900mg、约1950mg、约2000mg、约2050mg、约2100mg、约2150mg、约2200mg、或约2240mg的剂量施用。
32.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体以1050mg的剂量施用。
33.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体以1400mg的剂量施用。
34.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体以1575mg的剂量施用。
35.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体以1600mg的剂量施用。
36.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体以2100mg的剂量施用。
37.根据权利要求1至31中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体以2240mg的剂量施用。
38.根据权利要求1至37中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体每周两次、每周一次、两周一次、三周一次或四周一次地施用。
39.根据权利要求1至38中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体是静脉内施用的。
40.根据权利要求1至38中任一项所述的方法，其中，所述双特异性抗EGFR/c-Met抗体是皮下施用的。
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