CN116925337B - 一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，包括将多巴胺衍生物PDAO、多巴胺衍生物DAO和多巴胺衍生物FA‑DAO分别溶于溶剂中配置成不同母液，之后按照多巴胺衍生物PDAO、多巴胺衍生物DAO和多巴胺衍生物FA‑DAO的质量比为1：0.3：0.1的比例混合，超声，除去溶剂再加入水、加热、超声，得到多巴胺衍生物的靶向型纳米载体。本发明可提高难溶活性成分和难溶药物的溶解性，延长化疗药物的体内半衰期，改善化疗药物体内分布的问题，提高纳米载体释药率。

Description

一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，特别涉及一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法。
背景技术
纳米药物制剂是通过运用纳米载体技术将原料药制成的纳米尺度的颗粒，可以通过静电吸附、共价或非共价等连接方式将药物结合在载体表面或直接将药物包裹在载体内部，相比于其他的剂型，纳米药物制剂在稳定性、延长药物体内循环时间、靶向给药等方面具有显著优势。
多巴胺（Dopamine，DA）是人体中的内源性物质，具有良好的生物相容性、将其通过一定方法处理后可形成多巴胺衍生物聚多巴胺PDA。聚多巴胺PDA具有良好的粘附性，光热作用和可修饰性，使得聚多巴胺PDA在药物递送的应用中具有广阔的应用前景； 叶酸受体FR（Folate Receptor）是一种糖基化磷脂酰肌醇（Glycosyl Phosphatidyl Inositol，GPI），在某些肿瘤细胞表面高度表达，而在正常细胞无或很少表达，常被用作靶向肿瘤的特异性位点。叶酸（Folic Acid，FA）也称维生素B9，叶酸具有相对分子质量小、易于修饰、易于穿透肿瘤细胞、免疫原性低，到达靶点时间短、血浆清除率高等优点。席夫碱（Schiff Base）常被用作pH响应连接键，在一些pH响应纳米给药系统中用做触发部位，当给药系统在酸性环境下，希夫碱结构断裂，使得纳米粒解体，释放出药物。
目前，传统聚合物胶束纳米载药系统药物释放率较低、具有一定的毒副作用，传统对于肿瘤的治疗多用化疗药物进行治疗，而大多数化疗药物具有水溶性差、生物利用度低、毒副作用大、不易在肿瘤部位富集等局限，限制了大多数化疗药物的使用， 传统纳米制剂制备方法较为复杂，所用有机溶剂种类较多，在生产成本和质量控制方面带来麻烦。
有鉴于此，亟待开发多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法。
发明内容
本发明的目的在于，针对现有技术的上述不足，提供一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，多巴胺衍生物合成方法简便，绿色环保，具有良好的生物相容性，靶向型纳米载体可延长化疗药物的体内半衰期，可改善化疗药物体内分布及传统聚合物胶束释药率较低等问题。
本发明为达到上述目的所采用的技术方案是：
一种多巴胺衍生物DAO，该多巴胺衍生物DAO的结构式如下所示，
所述多巴胺衍生物DAO的合成方法包括如下步骤：
S1.将亚油酸、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑加入到N,N-二甲基甲酰胺中得A液；
S2.将A液0℃冰水浴搅拌，之后在室温下搅拌，再加入多巴胺盐酸盐和三乙胺，之后在室温下搅拌；
S3. 将步骤S2所得产物用乙酸乙酯萃取，通过快速柱色谱纯化即得多巴胺衍生物DAO。
一种多巴胺衍生物FA-DAO，该多巴胺衍生物FA-DAO的结构式如下所示，
所述的多巴胺衍生物FA-DAO的合成方法包括如下步骤：将多巴胺衍生物DAO和叶酸FA加入到有机溶剂中，在碱性条件下反应后冻干，纯化，即得多巴胺衍生物FA-DAO。
一种多巴胺衍生物PDAO，该多巴胺衍生物PDAO的结构式如下所示，
所述的多巴胺衍生物PDAO的合成方法包括如下步骤：将多巴胺衍生物DAO和甲氧基聚乙二醇-氨基mPEG-NH2加入到有机溶剂中，在碱性条件下反应后经纯化，即得多巴胺衍生物PDAO。
优选地，所述的多巴胺衍生物的合成方法中所述的有机溶剂包括N,N-二甲基甲酰胺、DMSO、二氯甲烷、乙醇中的任意一种。
优选地，所述的多巴胺衍生物的合成方法中所述的碱性条件包括向有机溶剂中加入三乙胺、乙二胺、氢氧化钠中的任意一种以达到pH为8.5-10的碱性条件。
优选地，所述的多巴胺衍生物的合成方法中所述的纯化为固相萃取法纯化：采用淋洗液和洗脱液为乙酸乙酯、甲醇、环己烷中的一种或任意组合。
本发明提供一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，其包括将多巴胺衍生物PDAO、多巴胺衍生物DAO和多巴胺衍生物FA-DAO分别溶于溶剂中配置成不同母液，将不同母液按照多巴胺衍生物PDAO、多巴胺衍生物DAO和多巴胺衍生物FA-DAO的质量比为1：0.3：0.1的比例混合，超声，除去溶剂再加入水、加热、超声，得到多巴胺衍生物的靶向型纳米载体。本发明构建的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体在没有加入多巴胺衍生物FA-DAO即结构式（I）存在时，所得纳米颗粒就没有对应的叶酸分子所对应的肿瘤主动靶向特性；若没有加入多巴胺衍生物PDAO即结构式（II）存在时，所形成的纳米颗粒过小，负载姜黄素的能力非常低，且EPR效应会减弱。
优选地，前述的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，其还包括将药物姜黄素Cur溶于溶剂中配置成母液，所述多巴胺衍生物PDAO、多巴胺衍生物DAO、多巴胺衍生物FA-DAO、药物姜黄素Cur的质量比为1：0.3：0.1：0.02—0.1。
本发明前述的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体的应用，该多巴胺衍生物的靶向型纳米载体在负载疏水性活性成分、疏水性药物和抗肿瘤方面中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
1.本发明利用希夫碱反应合成PEG修饰的多巴胺衍生物PDAO以及利用酰胺化反应和希夫碱反应合成叶酸修饰的多巴胺衍生物FA-DAO，同时利用多巴胺衍生物PDAO、DAO和FA-DAO构建具有靶向和pH响应功能的靶向型纳米载体。该合成方法使用的有机溶剂少，方法简单，采用的原料均为生物相容性良好的物质如神经递质多巴胺（DA）、人体必需不饱和脂肪酸亚油酸（OA）、细胞合成核苷酸的原料叶酸（FA）以及FDA认证的低毒药用辅料PEG，因此该靶向型药物载体具有良好的生物相容性。
2.本发明多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，通过PEG部分提供的亲水性可改善疏水性化疗药物的水溶性，该靶向型纳米载体的PEG部分还可通过EPR效应 (高渗透长滞留效应)延长化疗药物的体内半衰期；该靶向型纳米载体的叶酸FA部分提供靶向肿瘤功能，可改善化疗药物体内分布的问题，降低化疗药物的毒副作用，提高化疗药物疗效；该靶向型纳米载体具有pH敏感特性的希夫碱结构，该结构在肿瘤细胞和肿瘤微环境等酸性环境下断裂而释放负载的疏水性化疗药物，可改善传统聚合物胶束释药率较低的问题。
上述是发明技术方案的概述，以下结合附图与具体实施方式，对本发明做进一步说明。
附图说明
图1是本发明的多巴胺衍生物FA-DAO、PDAO、DAO结构式示意图；
图2是本发明的多巴胺衍生物FA-DAO核磁图谱示意图；
图3是本发明的多巴胺衍生物PDAO核磁图谱示意图；
图4是本发明的多巴胺衍生物FA-DAO红外图谱示意图；
图5是本发明的多巴胺衍生物PDAO红外图谱示意图；
图6是本发明的不同pH下多巴胺衍生物的靶向型纳米载体粒径分布图示意图；
图7是本发明的负载姜黄素的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体释药曲线示意图；
图8是本发明的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体的临界胶束浓度（CMC）计算图。
具体实施方式
为了使本发明的目的和技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例作详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
结合说明书附图1-8所示，本发明的实施例中记载的多巴胺衍生物FA-DAO对应的结构式如说明书附图1中式（Ⅰ）所示、多巴胺衍生物PDAO对应的结构式如说明书附图1中式（Ⅱ）所示、多巴胺衍生物DAO对应的结构式如说明书附图1中式（Ⅲ）所示。
本发明优选地提供一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，包括：S1.将1 mmoL亚油酸、1 mmoL 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和1 mmoL 1-羟基苯并三唑加入到10 mL N,N-二甲基甲酰胺中，0 ℃冰水浴搅拌40 min，随后在室温下搅拌100 min，再加入1 mmoL 多巴胺盐酸盐和3 mmoL三乙胺，室温下搅拌14 h，随后用50 mL乙酸乙酯萃取两次，萃取液用饱和NaHCO3溶液洗，随后用无水NaSO4除水，最后用比例为DCM：MeOH=50：4的洗脱剂，快速柱色谱纯化得油状物DAO；
S2. 将0.11 mmoL的mPEG-NH2和0.1 mmoL的DAO溶于碱性乙醇溶液，室温下搅拌24h。反应结束后旋转蒸发除去溶剂，用乙酸乙酯溶解，固相萃取：石油醚活化、淋洗液淋洗（乙酸乙酯：甲醇：环己烷=10：1：1），洗脱液洗脱（乙酸乙酯：甲醇：环己烷=1：10：1），收集洗脱液，旋转蒸发即得红色至红棕色油状物PDAO；
S3. 将0.11 mmoL的FA和0.1 mmoL的DAO溶于DMSO中，加入0.01 mmoL的三乙胺，室温下搅拌24 h，冻干24 h，加入乙醇沉淀FA，取上清液，旋转蒸发得淡黄色膏状物FA-DAO；
S4. 将S1、S2、S3产物溶于甲醇制备母液，取各母液一定量（质量比，PDAO：DAO：FA-DAO=1：0.3：0.1）混合，涡旋30 s，超声10 min，旋转蒸发除去溶剂，随后加入50 ℃水5 mL得一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体；
S5. 将S1、S2、S3和姜黄素（Cur）溶于甲醇制备母液，取各母液一定量混合（质量比，PDAO：DAO：FA-DAO：Cur=1：0.3：0.1：0.02）混合，涡旋30 s，超声10 min，旋转蒸发除去溶剂，制得一种负载姜黄素的基于多巴胺衍生物构建的靶向型纳米颗粒。
本发明多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，包括
S1. 将1-5 mmoL亚油酸、1-5 mmoL 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和1-5 mmoL 1-羟基苯并三唑加入到10 mL N,N-二甲基甲酰胺中，0-10 ℃冰水浴搅拌20-40 min，随后在室温下搅拌50-100 min，再加入1-5 mmoL 多巴胺盐酸盐和3-15 mmoL三乙胺，室温下搅拌8-14 h，随后用50 mL乙酸乙酯萃取两次，萃取液用饱和NaHCO3溶液洗，随后用无水NaSO4除水，最后用体积比的比例为DCM：MeOH=50：4的洗脱剂，快速柱色谱纯化得油状物DAO；
S2. 将0.11-0.55 mmoL的mPEG-NH2和0.1-0.5 mmoL的DAO溶于碱性乙醇溶液，室温下搅拌12-24 h。反应结束后旋转蒸发除去溶剂，用乙酸乙酯溶解，固相萃取：石油醚活化、淋洗液淋洗（乙酸乙酯、甲醇、环己烷其中一种或它们的组合），洗脱液洗脱（乙酸乙酯、甲醇、环己烷其中一种或它们的组合），收集洗脱液，旋转蒸发即得红色至红棕色油状物PDAO；
S3. 将0.11 mmoL的FA和0.1 mmoL的DAO溶于DMSO中，加入0.01-0.2 mmoL的三乙胺，室温下搅拌12-24 h，冻干24 h，加入乙醇、甲醇或它们中的一种除杂，取上清液，旋转蒸发得淡黄色膏状物FA-DAO；
S4. 将S1、S2、S3产物溶于甲醇制备母液，取各一定量的母液以一定质量比的PDAO、DAO、FA-DAO混合，涡旋30 s，超声10 min，旋转蒸发除去溶剂，随后加入50 ℃水5 mL得一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体；
S5. 将S1、S2、S3和姜黄素（Cur）溶于甲醇制备母液，取各一定量的母液以一定质量比的PDAO、DAO、FA-DAO、Cur混合，（质量比，PDAO：DAO：FA-DAO：Cur=1：0.3：0.1：0.02—0.1），得一种负载姜黄素的多巴胺衍生物的靶向型纳米颗粒。
实施例1
一种多巴胺衍生物FA-DAO的合成，包括以下步骤：
S1. 将1 mmoL亚油酸、1 mmoL 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和1 mmoL 1-羟基苯并三唑加入到10 mL N,N-二甲基甲酰胺中，0 ℃冰水浴搅拌40 min，随后在室温下搅拌100 min，再加入1 mmoL 多巴胺盐酸盐和3 mmoL三乙胺，室温下搅拌14 h，随后用50 mL乙酸乙酯萃取两次，萃取液用饱和NaHCO3溶液洗，随后用无水NaSO4除水，最后用比例为DCM：MeOH=50：4的洗脱剂，快速柱色谱纯化得油状物DAO，即多巴胺衍生物DAO；
S2. 将0.11 mmoL的叶酸FA和0.1 mmoL的多巴胺衍生物DAO溶于DMSO中，加入0.01mmoL的三乙胺，室温下搅拌24 h，冻干24 h，加入乙醇沉淀FA，取上清液，旋转蒸发得淡黄色膏状物FA-DAO，用氘代DMSO溶解FA-DAO测NMR得图2。核磁归属完全，FA-DAO合成成功。
实施例2
一种多巴胺衍生物PDAO的合成，包括以下步骤：
S1. 将1 mmoL亚油酸、1 mmoL 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和1 mmoL 1-羟基苯并三唑加入到10 mL N,N-二甲基甲酰胺中，0 ℃冰水浴搅拌40 min，随后在室温下搅拌100 min，再加入1 mmoL 多巴胺盐酸盐和3 mmoL三乙胺，室温下搅拌14 h，随后用50 mL乙酸乙酯萃取两次，萃取液用饱和NaHCO3溶液洗，随后用无水NaSO4除水，最后用比例为DCM：MeOH=50：4的洗脱剂，快速柱色谱纯化得油状物DAO，即多巴胺衍生物DAO；
S2. 将0.11 mmoL的mPEG-NH2和0.1 mmoL的多巴胺衍生物DAO溶于碱性乙醇溶液，室温下搅拌24 h。反应结束后旋转蒸发除去溶剂，用乙酸乙酯溶解，固相萃取：石油醚活化、淋洗液淋洗（乙酸乙酯：甲醇：环己烷=10：1：1），洗脱液洗脱（乙酸乙酯：甲醇：环己烷=1：10：1），收集洗脱液，旋转蒸发即得红色至红棕色油状物PDAO，用氘代DMSO溶解PDAO测NMR得图3。其中3.5 ppm处为PEG亚甲基是氢的峰，其余峰位归属完全，PDAO合成成功。
实施例3
一种多巴胺衍生物FA-DAO的合成，包括以下步骤：
S1. 将1 mmoL亚油酸、1 mmoL 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和1 mmoL 1-羟基苯并三唑加入到10 mL N,N-二甲基甲酰胺中，0 ℃冰水浴搅拌40 min，随后在室温下搅拌100 min，再加入1 mmoL 多巴胺盐酸盐和3 mmoL三乙胺，室温下搅拌14 h，随后用50 mL乙酸乙酯萃取两次，萃取液用饱和NaHCO3溶液洗，随后用无水NaSO4除水，最后用比例为DCM：MeOH=50：4的洗脱剂，快速柱色谱纯化得油状物DAO，即多巴胺衍生物DAO；
S2. 将0.11 mmoL的FA和0.1 mmoL的DAO溶于DMSO中，加入0.01 mmoL的三乙胺，室温下搅拌24 h，冻干24 h，加入乙醇沉淀FA，取上清液，旋转蒸发得淡黄色膏状物FA-DAO，测红外得图4。其中1696 cm-1可能为C=N伸缩振动峰，结合图2核磁图谱证明FA-DAO合成成功。
实施例4
一种多巴胺衍生物PDAO的合成，包括以下步骤：
S1. 将1 mmoL亚油酸、1 mmoL 1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和1 mmoL 1-羟基苯并三唑加入到10 mL N,N-二甲基甲酰胺中，0 ℃冰水浴搅拌40 min，随后在室温下搅拌100 min，再加入1 mmoL 多巴胺盐酸盐和3 mmoL三乙胺，室温下搅拌14 h，随后用50 mL乙酸乙酯萃取两次，萃取液用饱和NaHCO3溶液洗，随后用无水NaSO4除水，最后用比例为DCM：MeOH=50：4的洗脱剂，快速柱色谱纯化得油状物DAO，即多巴胺衍生物DAO；
S2. 将0.55 mmoL的mPEG-NH2和0.5 mmoL的DAO溶于碱性乙醇溶液，室温下搅拌24h。反应结束后旋转蒸发除去溶剂，用乙酸乙酯溶解，固相萃取：石油醚活化、淋洗液淋洗（乙酸乙酯：甲醇：环己烷=10：1：1），洗脱液洗脱（乙酸乙酯：甲醇：环己烷=1：10：1），收集洗脱液，旋转蒸发即得红色至红棕色油状物PDAO测红外得图5。其中1100cm-1处可能为PEG中C-O伸缩振动峰，结合图3核磁结果证明PDAO合成成功。
实施例5
一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，包括:
将PDAO、DAO和FA-DAO溶于甲醇制备母液，取各母液一定量混合（质量比，PDAO：DAO：FA-DAO =1：0.3：0.1），旋转蒸发除去甲醇，加入5 mL水，50 ℃加热30 min，超声10 min得一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体，并将其分别稀释10倍、100倍，再从多巴胺衍生物的靶向型纳米载体溶液、稀释10倍的、稀释100倍的溶液中分别再取其溶液0.1、0.2、0.5和0.8 mL到含有0.12 μg的芘的顶空瓶中，再向所得12个瓶中补充水至10 mL，12个不同浓度的溶液加热1 h超声10 min，待冷却至室温，测荧光强度，结合图8，并与其浓度负对数作图计算得其临界胶束浓度CMC值为0.0038 mg/mL，该CMC较小，说明该靶向型纳米载体成胶束能力较强，具有一定的抗稀释性，作为药物载体较为稳定。
实施例6
一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，包括:
将PDAO、DAO和FA-DAO溶于甲醇制备母液，取各母液一定量混合（质量比，PDAO：DAO：FA-DAO =1：0.3：0.1），旋转蒸发除去甲醇，加入5 mL水，50 ℃加热30 min，超声10 min得一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体，并将其分别再pH 5.0、pH 6.8、 pH 7.4、pH 9.5的PBS缓冲溶液中孵育24 h，测粒径得图6。图中该靶向型纳米载体在中性和碱性条件下较为稳定无明显变化，但在酸性环境下出现粒径变大的现象，说明该靶向型纳米载体中的希夫碱结构在酸性条件下断裂，使得粒径分布变宽，甚至出现聚集，另一方面DAO作为DA类似物在酸性条件下趋于溶解，在一定程度上破坏了该靶向型纳米载体的稳定性从而变大。综上所述，该靶向型纳米载体具有一定的pH响应性，可在肿瘤微环境和溶酶体内发生解体释放药物，一方面解决了一些聚合物胶束释药率低的问题，另一方面通过pH响应的被动靶向改善了化疗药物体内分布的问题和降低了化疗药物的毒副作用。
实施例7
一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，还包括进行药物负载，包括:将PDAO、DAO、FA-DAO和姜黄素（Cur）溶于甲醇制备母液，取各母液一定量混合（质量比，PDAO：DAO：FA-DAO：Cur=1：0.3：0.1：0.02—0.1）混合，涡旋30 s，超声10 min，旋转蒸发除去溶剂，加入水涡旋30 s，50 ℃加热30 min，超声10 min，得一种负载姜黄素的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体，将该纳米载体溶液分为两部分，一部分取200 μL和800μL色谱级甲醇混合，过0.45 μm滤膜，经高效液相色谱法分析，得峰面积A1；另一部分经过7000 rpm/min离心30min，取上清液200 μL和800μL色谱级甲醇混合，过0.45 μm滤膜，在对应实施例10的色谱条件下分析，得峰面积A2。（A2/A1）×100%得包封率，A2带入标准曲线得计算浓度，再除以投药浓度乘以百分百，得载药量，得表1。由表可知当FA-DAO加入量为0.1 mg时，包封率整体较高，该加入量较优。而当FA-DAO加入量为0.3 mg时，包封率整体较低。归因于FA-DAO疏水性较强，亲水性基团较少，因此仅能通过π-π相互作用在一定程度上稳定胶束，而含量较高，则疏水性的作用占据载体内部空间从而降低载体对姜黄素的负载能力，从而降低包封率。
表1是投药量对多巴胺衍生物的靶向型纳米载体包封率的影响
实施例8
一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，还包括进行药物负载，包括:将PDAO、DAO、FA-DAO和姜黄素（Cur）溶于甲醇制备母液，取各母液一定量混合（质量比，PDAO：DAO：FA-DAO：Cur=1：0.3：0.1：0.02）混合，涡旋30 s，超声10 min，旋转蒸发除去溶剂，加入水涡旋30 s，50 ℃加热30 min，超声10 min，得一种负载姜黄素的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体，将该负载姜黄素的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体5 mL分别装入三个长10 cm的3500 MD透析袋，两端扎紧，分别在含有pH 5.0 、pH 6.8和pH 7.4的锥形瓶中，37 ℃孵育24 h，在0.5、1、2、3、4、6、8、10、12和24 h时，取样1 mL并补入等量体积的相同的缓冲溶液。样品过0.45 μm滤膜，在实施例10色谱条件下分析，得峰面积带入标准曲线计算浓度，绘制曲线得图7。由图7可知，该多巴胺衍生物的靶向型纳米载体在pH 5.0和pH 6.8的酸性环境下，其释药率明显高于pH 7.4的环境，归因于希夫碱结构在酸性环境下断裂和一定程度上DAO在酸性环境下的溶解，二者协同导致胶束结构破坏，稳定性下降从而释放出药物。
实施例9
一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，还包括进行药物负载，包括:将PDAO、DAO、FA-DAO和Cur溶于甲醇制备母液，取各母液一定量混合（质量比，PDAO：DAO：FA-DAO：Cur=1：0.3：0.1：0.02）混合，涡旋30 s，超声10 min，旋转蒸发除去溶剂，加入水涡旋30s，50 ℃加热30 min，超声10 min，得一种负载姜黄素的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体，经激光笔照射，姜黄素为水不溶性药物，该负载姜黄素的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体水溶性良好，透明，具有一定的乳光，具有良好的丁达尔效应，证明溶液为胶体，体系均一稳定，显著提高了姜黄素的水溶性。
实施例10
精密称取Cur标准品10 mg溶于适量甲醇，并加入到100 mL容量瓶并定容，配置100μg/mL Cur母液，稀释其浓度为0.1、0.2、0.5、1、2、5和10 μg/mL，过0.45 μm滤膜，经高效液相色谱法分析（色谱条件：色谱柱：YMC-Pack ODS-A 250×4.6 mml.D. S-5 μm，12 nm，流速：1 mL/min，柱温：35 ℃，流动相：乙腈：4 %冰乙酸=50：50，检测波长：425 nm ，进样量：10µL）得峰面积，与浓度绘制标准曲线得线性方程Y=1.6446X-0.0533，该方程在0.1-10 μg/mL范围内线性良好R2=0.9999。实施例10 经过分析方法的建立，该线性方程可用于实施例7和实施例8中姜黄素Cur的含量测定。
根据上述说明书的揭示和教导，本发明所属领域的技术人员还可以对上述实施方式进行变更和修改。本发明并不局限于上面揭示和描述的具体实施方式，对发明的一些修改和变更也应当落入本发明的权利要求的保护范围内。

Claims (7)

1.一种多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，其特征在于，包括将多巴胺衍生物PDAO、多巴胺衍生物DAO和多巴胺衍生物FA-DAO分别溶于溶剂中配置成不同母液，之后按照多巴胺衍生物PDAO、多巴胺衍生物DAO和多巴胺衍生物FA-DAO的质量比为1：0.3：0.1的比例混合，超声，除去溶剂再加入水、加热、超声，得到多巴胺衍生物的靶向型纳米载体；
所述的多巴胺衍生物PDAO的结构式如下所示：
；
所述的多巴胺衍生物DAO的结构式如下所示：
；
所述的多巴胺衍生物FA-DAO的结构式如下所示：
。
2.根据权利要求1所述的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，其特征在于，还包括将药物姜黄素Cur溶于溶剂中配置成母液，所述多巴胺衍生物PDAO、多巴胺衍生物DAO、多巴胺衍生物FA-DAO、药物姜黄素Cur的质量比为1：0.3：0.1：0.02-0.1。
3.根据权利要求1或2所述的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，其特征在于，所述的多巴胺衍生物DAO的合成方法包括如下步骤：
S1.将亚油酸、1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐和1-羟基苯并三唑按摩尔比1：1：1加入到N,N-二甲基甲酰胺中得A液；
S2.将A液0℃冰水浴搅拌20-40 min，之后在室温下搅拌90-120 min，再加入摩尔比为1：3的多巴胺盐酸盐和三乙胺，之后在室温下搅拌10-14 h；
S3. 将步骤S2所得产物用乙酸乙酯萃取，通过快速柱色谱纯化即得多巴胺衍生物DAO。
4.根据权利要求3所述的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，其特征在于，所述的多巴胺衍生物FA-DAO的合成方法包括如下步骤：将多巴胺衍生物DAO和叶酸FA以1:1.1-1.5的摩尔比加入到有机溶剂中，在碱性条件下反应后冻干，纯化，即得多巴胺衍生物FA-DAO。
5.根据权利要求3所述的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，其特征在于，所述的多巴胺衍生物PDAO的合成方法包括如下步骤：将多巴胺衍生物DAO和甲氧基聚乙二醇-氨基mPEG-NH2以1:1.1-1.5的摩尔比加入到有机溶剂中，在碱性条件下反应，经纯化，即得多巴胺衍生物PDAO。
6.根据权利要求4或5所述的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，其特征在于，所述的有机溶剂为N,N-二甲基甲酰胺、DMSO、二氯甲烷、乙醇中的任意一种。
7.根据权利要求4或5所述的多巴胺衍生物的靶向型纳米载体构建的方法，其特征在于，所述的碱性条件包括向有机溶剂中加入三乙胺、乙二胺、氢氧化钠中的任意一种以达到pH为8.5-10的碱性条件。
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