CN116889536A - 马齿苋发酵液、含其皮肤外用剂、及其制备方法和应用 - Google Patents

马齿苋发酵液、含其皮肤外用剂、及其制备方法和应用 Download PDF

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CN116889536A CN202311042776.5A CN202311042776A CN116889536A CN 116889536 A CN116889536 A CN 116889536A CN 202311042776 A CN202311042776 A CN 202311042776A CN 116889536 A CN116889536 A CN 116889536A
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Abstract

本申请公开了一种马齿苋发酵液、含其皮肤外用剂、及其制备方法和应用。马齿苋发酵液的制备方法包括如下步骤：将根霉菌接种到包括马齿苋酶解产物的发酵底物中，经发酵培养，灭菌，制得马齿苋发酵液；马齿苋酶解产物为新鲜马齿苋和水经匀浆，酶解制得的物料；酶解过程中采用的酶包括纤维素酶。本申请采用根霉菌对新鲜马齿苋的酶解产物进行发酵，制得的发酵液具有较好的抗氧化、抗敏、抗衰老和滋养皮肤功效，使用后肌肤零负担，具有较好的使用安全性，属于纯天然植物原料；制备过程中不添加任何化学成分，制备工艺简单易操作，制备成本低，实现节能环保，在化妆品领域具有很好的应用前景。

Description

马齿苋发酵液、含其皮肤外用剂、及其制备方法和应用
技术领域
本申请属于化妆品技术领域，尤其涉及一种马齿苋发酵液、含其皮肤外用剂、及其制备方法和应用。
背景技术
马齿苋中含有丰富的三萜醇类物质、黄酮类物质、氨基酸、有机酸及其盐，还含有钙、磷、铁等微量元素及其无机盐，具有清热解毒、凉血止血、止痢、抗敏、抗炎、抗菌等多重药用功效，还可有效缓解敏感、瘙痒等皮肤问题，被广泛应用于化妆品领域。
现有技术常采用酶解法从马齿苋中提取活性成分，但马齿苋中含有丰富的金属离子包括Ca2+、Mg2+等，而高浓度的Ca2+、Mg2+对纤维素酶的活力影响较大，这使得通过酶解法制得的马齿苋提取物无法达到令人满意的效果。采用酶解法制得的发酵产物对皮肤成纤维细胞具有细胞毒性，使用安全性差，限制其在化妆品领域的应用。
因此，本领域亟需研发一种充分利用马齿苋中活性成分，可从马齿苋中提取出具有理想美容功效，且使用安全性高的马齿苋提取物的制备方法。
发明内容
本申请所要解决的技术问题是克服现有技术中酶解法制得的马齿苋提取物的活性不佳，且使用安全性差等缺陷，而提供一种马齿苋发酵液、含其皮肤外用剂、及其制备方法和应用。本申请采用根霉菌对新鲜马齿苋的酶解产物进行发酵，制备得到的发酵液具有较好的抗氧化、抗敏、抗衰老和滋养皮肤功效，使用后肌肤零负担，具有较好的使用安全性，属于纯天然植物原料；制备过程中不添加任何化学成分，制备工艺简单易操作，制备成本低，实现节能环保，在化妆品领域具有很好的应用前景。
本申请采用以下技术方案解决上述技术问题：
本申请提供一种马齿苋发酵液的制备方法，其包括如下步骤：将根霉菌接种到包括马齿苋酶解产物的发酵底物中，经发酵培养，灭菌，制得所述马齿苋发酵液；
所述马齿苋酶解产物为新鲜马齿苋和水经匀浆，酶解制得的物料；所述酶解过程中采用的酶包括纤维素酶。
一些实施例中，所述新鲜马齿苋和所述水的质量比可为1：(1～10)，较佳地为1：(2～5)。
一些实施例中，所述匀浆的条件和方法可为本领域常规，一般可在匀浆机中进行。
一些实施例中，所述纤维素酶可包括购自上海华上翔洋生物技术有限公司的产品编号为SPJ-XW017的复合纤维素酶和/或购自上海华上翔洋生物技术有限公司的产品编号为SPJ-XWS50WG的高浓缩纤维素酶。
一些实施例中，所述酶还可进一步包括果胶酶和/或耐高温α-淀粉酶。
其中，所述果胶酶可包括购自上海华上翔洋生物技术有限公司的产品编号为SPJ-GJM06WL的果胶酶。
其中，所述耐高温α-淀粉酶可包括购自上海源叶生物科技有限公司产品编号为S10005的耐高温α-淀粉酶。
当所述酶包括所述纤维素酶和所述果胶酶时，所述纤维素酶和所述果胶酶的质量比可为1：(0.2～5)，较佳地为1：(0.3～0.7)或1：(1.5～2.5)，例如1：0.5或1：2。
当所述酶包括所述纤维素酶和所述耐高温α-淀粉酶时，所述纤维素酶和所述耐高温α-淀粉酶的质量比可为1：(0.2～2)，较佳地为1：(0.8～1.2)，例如1：1。
一些实施例中，所述酶占所述水的质量百分比可为0.5％～2.5％，较佳地为1％～2％。
一些实施例中，所述酶解的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为50～65℃。
一些实施例中，所述酶解的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为60～180min，更佳地为100～120min。
一些实施例中，所述酶解可按照本领域常规在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速可为200～400rpm。
一些实施例中，所述酶解的操作后还可进一步包括离心，收集上清液的操作。
其中，所述离心的条件可为本领域常规，一般使体系中固体和液体分离，即可。
其中，所述离心的转速可为4000～6000rpm，较佳地为4500～5500rpm，例如4800rpm。
其中，所述离心的时间可为20～40min，较佳地为25～35min，例如30min。
一些实施例中，所述发酵底物还可进一步包括碳源。
其中，所述碳源可包括葡萄糖和/或米粉。
其中，所述碳源占所述马齿苋酶解产物的上清液的质量百分比可为0.05％～1％，较佳地为0.2％～0.5％。
一些实施例中，所述发酵底物在使用前还可按照本领域常规包括灭菌的操作。
其中，对所述发酵底物进行所述灭菌的条件和方法可为本领域该类操作常规的条件和方法，一般可为高温灭菌法。
当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为110～125℃，更佳地为115～121℃。
当采用所述高温灭菌法对所述发酵底物进行所述灭菌时，所述灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为20～60min，更佳地为30～40min。
其中，按照本领域常规，对所述发酵底物进行所述灭菌的操作后还可进一步包括冷却的操作，一般可为冷却至室温。
一些实施例中，所述根霉菌可包括安琪甜酒曲。
一些实施例中，单位体积所述发酵底物中接种的所述根霉菌的数量可为105～109CFU/mL，较佳地为106～108CFU/mL。
一些实施例中，所述发酵培养可为本领域常规使用的有氧发酵培养。
一些实施例中，所述发酵培养的条件和方法可为本领域常规，一般可在摇床上进行，所述摇床的转速可为150～300rpm，较佳地为180～250rpm。
一些实施例中，所述发酵培养的时间可为24～60h，较佳地为36～60h，例如48h。
一些实施例中，所述发酵培养的温度可为25～35℃，较佳地为28～30℃。
一些实施例中，所述灭菌的条件和方法可为本领域常规，一般可为高温灭菌法。
当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为100～121℃，更佳地为105～115℃，例如110℃。
当采用所述高温灭菌法进行所述灭菌时，所述灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为15～35min，更佳地为25～30min。
一些实施例中，所述灭菌的操作后，还可进一步包括冷却和/或离心，收集上清液的操作。
其中，按照本领域常规，所述冷却可为冷却至室温。
其中，所述离心的转速可为本领域该类操作常规的转速，较佳地为3000～9000rpm，更佳地为4000～6000rpm，例如4800rpm。
其中，所述离心的半径可为本领域该类操作常规的半径，较佳地为8～15cm。
其中，所述离心的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为10～40min，更佳地为20～30min。
其中，所述离心的操作后还可进一步包括二次灭菌的操作。所述二次灭菌的方法可为本领域常规使用的高温灭菌法。
当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的温度可为本领域该类操作常规的温度，较佳地为95～110℃，更佳地为95～100℃。
当采用所述高温灭菌法进行所述二次灭菌时，所述二次灭菌的时间可为本领域该类操作常规的时间，较佳地为20～40min，更佳地为25～30min。
本申请还提供一种马齿苋发酵液，其由如上所述的马齿苋发酵液的制备方法制得。
本申请还提供一种如上所述的马齿苋发酵液直接作为产品、作为添加剂或作为基底在制备皮肤外用剂中的应用。
一些实施例中，所述马齿苋发酵液可作为所述皮肤外用剂中的抗氧化活性成分、抗敏活性成分和抗衰老活性成分。
本发明还提供一种皮肤外用剂，其包括如上所述的马齿苋发酵液。
一些实施例中，所述皮肤外用剂中还可进一步包括本领域常规使用的活性成分，一般可包括保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分、抗敏活性成分和抗氧化活性成分中至少一种。
一些实施例中，所述皮肤外用剂可按照本领域常规包括但不限于面膜、精华或爽肤水。
一些实施例中，所述马齿苋发酵液占所述皮肤外用剂的质量百分比可为5％～99％，较佳地为5％～25％。
一些实施例中，所述室温一般指15～40℃。
在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本申请各较佳实例。
本申请所用试剂和原料均市售可得。
本申请的积极进步效果在于：本申请采用根霉菌对新鲜马齿苋的酶解产物进行发酵，制备得到的发酵液具有较好的抗氧化、抗敏、抗衰老和滋养皮肤功效，使用后肌肤零负担，具有较好的使用安全性，属于纯天然植物原料；制备过程中不添加任何化学成分，制备工艺简单易操作，制备成本低，实现节能环保，在化妆品领域具有很好的应用前景。
附图说明
本申请可以通过参考下文中结合附图所给出的描述而得到更好的理解。所述附图连同下面的详细说明一起包含在本说明书中并且形成本说明书的一部分，而且用来进一步举例说明本申请的优选实施例和解释本申请的原理和优点。
其中：
图1为本申请实施例1～6和对比例1～5制得产品的DPPH自由基清除率对比图；
图2为本申请实施例1～6和对比例1～5制得产品的羟自由基清除率对比图；
图3为本申请实施例1～6和对比例1～5制得产品的透明质酸酶抑制率对比图；
图4为采用本申请实施例1～6和对比例1～5制得产品处理人皮肤成纤维细胞后，细胞存活率对比图。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本申请，但并不因此将本申请限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例和对比例中，复合纤维素酶购自上海华上翔洋生物技术有限公司，产品编号为SPJ-XW017；
下述实施例中，高浓缩纤维素酶购自上海华上翔洋生物技术有限公司，产品编号为SPJ-XWS50WG；
下述实施例和对比例中，果胶酶购自上海华上翔洋生物技术有限公司，产品编号为SPJ-GJM06WL；
下述实施例和对比例中，耐高温α-淀粉酶购自上海源叶生物科技有限公司，产品编号为S10005；
下述实施例和对比例中，根霉菌购自安琪酵母股份有限公司，产品名称为甜酒曲(甜味型)；配制成活菌数为109CFU/mL的根霉菌菌液，待用；
下述对比例中，植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CICC 22186；配制成活菌数为109CFU/mL的植物乳杆菌菌液，待用；
下述对比例中，黄酒酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)购自北京市食品酿造研究所，保藏编号为AS2.1392；黄酒酵母菌接种到YPD液体培养基中，28℃培养48h，并配制成活菌数为109CFU/mL的黄酒酵母菌菌液，待用。
实施例1
取150g新鲜马齿苋和300g去离子水进行匀浆，匀浆后加入6g复合纤维素酶(购自上海华上翔洋生物技术有限公司，产品编号：SPJ-XW017)，进行酶解，酶解的温度为50℃，酶解的时间为100min，酶解在搅拌的条件下进行，搅拌的转速为200rpm，酶解后在4800rpm条件下离心30min，离心后取上清液，向上清液中加入葡萄糖，葡萄糖占上清液的质量百分比为0.2％，混合均匀，121℃条件下灭菌30min，灭菌结束后将上清液冷却至室温，制得发酵底物；
向上述制得的发酵底物中加入根霉菌菌粉，单位体积发酵底物中接种的根霉菌的数量为107CFU/mL，在28℃条件下有氧发酵培养48h，发酵培养在摇床上进行，摇床的转速为180rpm，发酵结束后在110℃条件下灭菌30min，灭菌后冷却至室温，在4800rpm转速下离心30min，收集上清液，再对上清液进行二次灭菌处理，在110℃条件下二次灭菌30min，制得马齿苋发酵液。
实施例2
与实施例1相比，区别仅在于酶的种类不同，具体将6g复合纤维素酶替换为6g高浓缩纤维素酶(购自上海华上翔洋生物技术有限公司，产品编号为SPJ-XWS50WG)，其他条件参数同实施例1。
实施例3
与实施例1相比，区别仅在于酶的种类不同，具体将6g复合纤维素酶替换为3g复合纤维素酶和3g果胶酶(购自上海华上翔洋生物技术有限公司，产品编号为SPJ-GJM06WL)的混合酶，其他条件参数同实施例1。
实施例4
与实施例1相比，区别仅在于酶的种类不同，具体将6g复合纤维素酶替换为3g复合纤维素酶和3g耐高温α-淀粉酶(购自上海源叶生物科技有限公司，产品编号为S10005)的混合酶，其他条件参数同实施例1。
实施例5
与实施例1相比，区别仅在于酶的种类不同，具体将6g复合纤维素酶替换为4g复合纤维素酶和2g果胶酶(购自上海华上翔洋生物技术有限公司，产品编号为SPJ-GJM06WL)的混合酶，其他条件参数同实施例1。
实施例6
与实施例1相比，区别仅在于酶的种类不同，具体将6g复合纤维素酶替换为2g复合纤维素酶和4g果胶酶(购自上海华上翔洋生物技术有限公司，产品编号为SPJ-GJM06WL)的混合酶，其他条件参数同实施例1。
对比例1
与实施例1相比，区别仅在于不进行酶解处理，其他条件参数同实施例1，具体包括如下步骤：
取150g新鲜马齿苋和300g去离子水进行匀浆，匀浆后在4800rpm条件下离心30min，离心后取上清液，向上清液中加入葡萄糖，葡萄糖占上清液的质量百分比为0.2％，混合均匀，121℃条件下灭菌30min，灭菌结束后将上清液冷却至室温，制得发酵底物；
向上述制得的发酵底物中加入根霉菌菌粉，单位体积发酵底物中接种的根霉菌的数量为107CFU/mL，在28℃条件下有氧发酵培养48h，发酵培养在摇床上进行，摇床的转速为180rpm，发酵结束后在110℃条件下灭菌30min，灭菌后冷却至室温，在4800rpm转速下离心30min，收集上清液，再对上清液进行二次灭菌处理，在110℃条件下二次灭菌30min，制得马齿苋发酵液。
对比例2
取150g新鲜马齿苋和300g去离子水进行匀浆，匀浆后加入6g复合纤维素酶(购自上海华上翔洋生物技术有限公司，产品编号：SPJ-XW017)，进行酶解，酶解的温度为50℃，酶解的时间为100min，酶解在搅拌的条件下进行，搅拌的转速为200rpm，酶解后在4800rpm条件下离心30min，离心后取上清液，向上清液中加入葡萄糖，葡萄糖占上清液的质量百分比为0.2％，混合均匀，121℃条件下灭菌30min，灭菌结束后将上清液冷却至室温，即可。
对比例3
与实施例1相比，区别仅在于酶的种类不同，具体将6g复合纤维素酶替换为6g耐高温α-淀粉酶(购自上海源叶生物科技有限公司，产品编号为S10005)，其他条件参数同实施例1。
对比例4
与实施例1相比，区别仅在于发酵菌种不同，将根霉菌替换为等量的植物乳杆菌(CICC 22186)，其他条件参数同实施例1。
对比例5
与实施例1相比，区别仅在于发酵菌种不同，将根霉菌替换为等量的黄酒酵母菌(购自北京市食品酿造研究所，保藏编号为AS2.1392)，其他条件参数同实施例1。
效果实施例1
DPPH是一种早期合成的有机自由基，常用来评估抗氧化物的供氢能力，它在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，而且在517nm处有一个特征吸收峰，当遇到自由基清除剂时，DPPH的孤对电子被配对而使其退色，也就是在最大吸收波长处的吸光值变小。因此，可通过测定吸光值的变化来评价样品对DPPH自由基的清除效果。
待测液的制备：取上述实施例1～6和对比例1～5制得的产品分别与水混合，分别配置成质量百分比为10％的待测液。
DPPH自由基清除实验的具体实验步骤为：
(1)取等体积(1mL)的待测液与2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A1管)；
(2)取等体积(1mL)的无水乙醇与2×10-4mol/L的DPPH溶液混匀(A2管)；
(3)取等体积(1mL)的无水乙醇与待测液混匀(A3管)；
(4)避光反应30min后，在517nm下测A1管、A2管、A3管吸光度值；清除率计算公式为：清除率＝[(A2+A3)-A1]/A2×100％。
本实验对实施例1～6和对比例1～5制得的产品稀释10倍后进行DPPH自由基清除实验测试，结果见表1和图1(表1和图1中，***p＜0.001，与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著升高；###p＜0.001，与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著降低；ns表示与实施例1相比无统计学差异)。
表1
DPPH自由基清除率(％)
实施例1 49.37±1.91
实施例2 32.55±4.07###
实施例3 56.56±0.64***
实施例4 47.39±2.42ns
实施例5 92.54±2.13***
实施例6 92.99±2.25***
对比例1 7.73±3.31###
对比例2 23.56±1.27###
对比例3 10.7±2.96###
对比例4 25.45±3.94###
对比例5 11.06±3.69###
结果表明，本申请实施例制得的产品具有良好的抗氧化功效，当采用复合纤维素酶和果胶酶的混合酶前处理新鲜马齿苋，再经根霉菌发酵制得的产品的抗氧化功效更理想。新鲜马齿苋若仅经酶解处理、仅进行发酵处理、前处理的酶不含纤维素酶或采用其他菌种发酵时，制得产品的DPPH自由基清除能力均不理想，即不利于提取出马齿苋中具有抗氧化功效的组分。
效果实施例2
利用Fenton反应产生羟自由基(·OH)，向反应体系中加入水杨酸，·OH与水杨酸反应，生成的有色化合物2，3-二羟基苯甲酸在510nm处有特征吸收。采用固定反应时间法，在510nm处测定含被测物反应液的吸光度，并与空白液比较，测定被测物对·OH的清除作用。
待测液的制备：取上述实施例1～6和对比例1～5制得的产品分别与水混合，分别配置成质量百分比为10％的待测液。
按表2往试管中添加试剂，依次加入9mmol/L FeSO4、9mmol/L水杨酸乙醇溶液、待测液、适量去离子水和8.8mmol/L H2O2溶液。摇匀，37℃水浴加热15min后取出，测定空白对照的吸光度A0、加样品组吸光度Ax和不加H2O2的溶液本底吸光度Ax0。测定A0时，参比溶液为不加双氧水体系；按照下述公式计算各组羟自由基清除率，结果见表3和图2。(图2中，***p＜0.001，与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著升高；##p＜0.01，与实施例1相比有显著性统计学差异，显著降低；###p＜0.001，与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著降低；ns表示与实施例1相比无统计学差异)。
羟自由基清除率计算公式为：
清除率＝(A0-(Ax-Ax0))/A0×100％。
表2
表3
羟自由基清除率(％)
实施例1 78.62±1.33
实施例2 60.08±1.55##
实施例3 82.31±3.2ns
实施例4 79.47±2.29ns
实施例5 94.52±2.06***
实施例6 96.73±1.78***
对比例1 12.73±2.25###
对比例2 34.02±2.42###
对比例3 14.37±1.8###
对比例4 40.67±1.23###
对比例5 16.79±1.66###
结果表明，本申请实施例制得的产品具有良好的抗氧化功效。新鲜马齿苋若仅经酶解处理、仅进行发酵处理、前处理的酶不含纤维素酶或采用其他菌种发酵时，制得产品的羟自由基清除能力均不理想，即不利于提取出马齿苋中具有抗氧化功效的组分。
效果实施例3透明质酸酶抑制试验
透明质酸酶是一种能分解多糖的溶酶体之一，能够水解透明质酸钾生成β-N-乙酰葡糖胺，该物质在碱性条件下与乙酰丙酮缩合生成生色原2-甲基-3-二乙酰吡咯衍生物，生色原与埃尔利希试剂在浓盐酸乙醇中显色。透明质酸酶与炎症、过敏有强相关性，是I型过敏反应的参与者，因此透明质酸酶体外抑制实验可作为快捷的抗过敏测定方法。
试剂：透明质酸酶、透明质酸钠、无水乙醇、氢氧化钠、无水碳酸钠、浓盐酸、对-二甲氨基苯甲醛、乙酰丙酮、冰醋酸、无水氯化钙。
设备：Sunrise酶标仪的厂家为帝肯贸易有限公司；上海博讯实业有限公司医疗设备厂的数显恒温水浴锅。
待测液的制备：取上述实施例1～6和对比例1～5制得的产品分别与水混合，分别配置成质量百分比为20％的待测液。
取0.1mL CaCl2溶液(0.25mmol/L)和0.5mL透明质酸酶液(100U/mL)于37℃下水浴恒温培养20min；加入待测液0.5mL，继续保温20min；再加入0.5mL透明质酸钠溶液(0.5mg/mL)，37℃水浴恒温培养30min后取出，在常温下放置5min；加入0.1mL NaOH溶液(0.4mol/L)和0.5mL乙酰丙酮溶液(3.5mL乙酰丙酮溶于50mL的1.0mol/L碳酸钠溶液中)，于沸水浴中加热15min后立即转移至冰水水浴冷却5min；滴加1.0mL埃尔利希试剂(0.8g对-二甲基氨基苯甲醛溶于15mL浓盐酸和15mL无水乙醇中)，并用3.0mL无水乙醇稀释，室温放置20min显色，用分光光度计测定波长为540nm处吸光度值。待测液对透明质酸酶抑制率的测定计算公式如下，结果见表4和图3(表4和图3中，*p＜0.05，与实施例1相比有统计学差异，**p＜0.01，与实施例1相比有显著性统计学差异，***p＜0.001，与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著升高；#p＜0.05，与实施例1相比有统计学差异，###p＜0.001，与实施例1相比有极其显著性统计学差异，极显著降低)
透明质酸酶抑制率＝[(A-B)-(C-D)]/(A-B)×100％
式中：A-对照溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替待测液)；B-对照空白溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替待测液及透明质酸酶液)；C-待测液吸光度值；D-待测液空白溶液吸光度值(用醋酸缓冲溶液代替透明质酸酶液)；
表4
透明质酸酶抑制率(％)
实施例1 69.96±1.51
实施例2 74.0±1.75*
实施例3 77.0±1.43**
实施例4 66.39±1.48#
实施例5 88.22±1.58***
实施例6 83.62±1.85***
对比例1 10.75±1.43###
对比例2 18.07±1.18###
对比例3 18.28±2.14###
对比例4 23.54±1.45###
对比例5 17.16±1.74###
结果表明，本申请实施例制得的产品具有良好的抗敏功效。新鲜马齿苋若仅经酶解处理、仅进行发酵处理、前处理的酶不含纤维素酶或采用其他菌种发酵时，制得产品对透明质酸酶抑制能力均不理想，即不利于提取出马齿苋中具有敏功效的组分。
效果实施例4促进细胞增殖
本实验采用人体皮肤成纤维细胞，来自中国科学细胞库，验证上述实施例和对比例制得产品的细胞毒性。
试剂：0.25％(含EDTA)胰蛋白酶的生产厂家为美国GIBCO公司；DMEM培养基的生产厂家为美国GIBCO公司；双抗的生产厂家为美国Corning公司；CCK-8的生产厂家为北京拜尔迪生物技术有限公司；胎牛血清的生产厂家为美国GIBCO公司；磷酸盐缓冲液的生产厂家为北京百瑞极生物科技有限公司。
设备：WJ-80A-II型CO2恒温培养箱的厂家为上海圣科仪器设备有限公司；Sunrise酶标仪的厂家为帝肯贸易有限公司；TL80-2型医用离心机的厂家为江苏天力医疗器械有限公司；NUNC 96孔细胞培养板的厂家为赛默飞世尔科技公司。
1、实验步骤：
分别将上述实施例和对比例制得的产品用无血清的DMEM培养基配置成体积百分数为1％的实验组待测液。
人体皮肤成纤维细胞培养于含10％胎牛血清以及1％双抗(1×105U/L的青霉素、100mg/L的链霉素)的DMEM培养基中。细胞生长于37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱中，当细胞融合达到85％以上时，以0.05％胰酶消化对数生长期细胞，用含血清的DMEM终止消化反应。细胞计数板计数，将细胞悬液浓度调整到7×104个/mL，将细胞悬液按照每孔100μL的比例接种到96孔板上，37℃、5％CO2的培养箱中孵育12h。孵育后去除旧培养液，用磷酸盐缓冲液清洗细胞两遍。
实验组中每孔加入100μL上述配置的已过滤除菌的实验组待测液，每个待测液做6个复孔；对照组含有细胞，加入无血清的DMEM培养基；空白对照组无细胞，加入100μL的PBS。再于37℃、5％CO2的培养箱中孵育24h。然后每孔加入10μL的CCK-8溶液，再孵育3h，在450nm波长下测定吸光度值，计算各组细胞存活率，结果见表5和图4(图4中，p＞0.05，ns表示与实施例1相比无统计学差异；#p＜0.05，表示与实施例1相比有统计学差异；##p＜0.01，表示与实施例1相比有显著性统计学差异，显著降低)。细胞存活率的计算公式如下：
细胞存活率(％)＝(A实验组-A空白对照组)/(A对照组-A空白对照组)×100％。
表5
细胞存活率(％)
实施例1 124.55±12.65
实施例2 112.8±7.2ns
实施例3 109.27±7.38ns
实施例4 101.17±4.78#
实施例5 110.99±7.53ns
实施例6 109.0±7.16ns
对比例1 94.14±3.31#
对比例2 83.36±7.53##
对比例3 94.0±4.85#
对比例4 90.2±5.55#
对比例5 93.03±3.82#
结果表明，本申请实施例制得产品可促进人皮肤成纤维细胞的增长，可见具有抗衰老功效。而对比例制得产品反而降低人皮肤成纤维细胞的存活率。其中，根据对比例2的结果可看出，采用酶解后的物料处理细胞后，细胞存活率显著降低，说明其细胞毒性大，使用安全性差。
最后，还需要说明的是，在本申请中术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。
尽管上面已经通过本申请的具体实施例的描述对本申请进行了披露，但是，应该理解，本领域技术人员可在所附方案的精神和范围内设计对本申请的各种修改、改进或者等同物。这些修改、改进或者等同物也应当被认为包括在本申请所要求保护的范围内。

Claims (10)

1.一种马齿苋发酵液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：将根霉菌接种到包括马齿苋酶解产物的发酵底物中，经发酵培养，灭菌，制得所述马齿苋发酵液；
所述马齿苋酶解产物为新鲜马齿苋和水经匀浆，酶解制得的物料；所述酶解过程中采用的酶包括纤维素酶。
2.如权利要求1所述的马齿苋发酵液的制备方法，其特征在于，所述制备方法满足下述条件中至少一种：
所述新鲜马齿苋和所述水的质量比为1：(1～10)；
所述纤维素酶包括购自上海华上翔洋生物技术有限公司的产品编号为SPJ-XW017的复合纤维素酶和/或购自上海华上翔洋生物技术有限公司的产品编号为SPJ-XWS50WG的高浓缩纤维素酶；
所述酶还进一步包括果胶酶和/或耐高温α-淀粉酶；
所述酶占所述水的质量百分比为0.5％～2.5％；
所述酶解的温度为50～65℃；
所述酶解的时间为60～180min；
所述酶解在搅拌的条件下进行，所述搅拌的转速为200～400rpm；
所述酶解的操作后还进一步包括离心，收集上清液的操作。
3.如权利要求2所述的马齿苋发酵液的制备方法，其特征在于，所述制备方法满足下述条件中至少一种：
所述新鲜马齿苋和所述水的质量比为1：(2～5)；
所述果胶酶包括购自上海华上翔洋生物技术有限公司的产品编号为SPJ-GJM06WL的果胶酶；
所述耐高温α-淀粉酶包括购自上海源叶生物科技有限公司产品编号为S10005的耐高温α-淀粉酶；
当所述酶包括所述纤维素酶和所述果胶酶时，所述纤维素酶和所述果胶酶的质量比为1：(0.2～5)；
当所述酶包括所述纤维素酶和所述耐高温α-淀粉酶时，所述纤维素酶和所述耐高温α-淀粉酶的质量比为1：(0.2～2)。
4.如权利要求3所述的马齿苋发酵液的制备方法，其特征在于，所述制备方法满足下述条件中至少一种：
当所述酶包括所述纤维素酶和所述果胶酶时，所述纤维素酶和所述果胶酶的质量比为1：(0.3～0.7)或1：(1.5～2.5)；
当所述酶包括所述纤维素酶和所述耐高温α-淀粉酶时，所述纤维素酶和所述耐高温α-淀粉酶的质量比为1：(0.8～1.2)。
5.如权利要求1～4中任意一项所述的马齿苋发酵液的制备方法，其特征在于，所述制备方法满足下述条件中至少一种：
所述发酵底物还进一步包括碳源；
所述发酵底物在使用前还包括灭菌的操作，所述灭菌的方法为高温灭菌法；
所述根霉菌包括安琪甜酒曲；
单位体积所述发酵底物中接种的所述根霉菌的数量为105～109CFU/mL；
所述发酵培养为有氧发酵培养；
所述发酵培养在摇床上进行，所述摇床的转速为150～300rpm；
所述发酵培养的时间为24～60h；
所述发酵培养的温度为25～35℃；
所述灭菌的方法为高温灭菌法；
所述灭菌的操作后，还进一步包括冷却和/或离心，收集上清液的操作。
6.如权利要求5所述的马齿苋发酵液的制备方法，其特征在于，所述制备方法满足下述条件中至少一种：
所述碳源包括葡萄糖和/或米粉；
所述碳源占所述马齿苋酶解产物的上清液的质量百分比为0.05％～1％；
单位体积所述发酵底物中接种的所述根霉菌的数量为106～108CFU/mL；
所述发酵培养在摇床上进行，所述摇床的转速为180～250rpm；
所述发酵培养的时间为36～60h；
所述发酵培养的温度为28～30℃；
所述离心的操作后还进一步包括二次灭菌的操作，所述二次灭菌的方法为高温灭菌法。
7.一种马齿苋发酵液，其特征在于，其由如权利要求1～6中任意一项所述的马齿苋发酵液的制备方法制得。
8.一种如权利要求7所述的马齿苋发酵液直接作为产品、作为添加剂或作为基底在制备皮肤外用剂中的应用。
9.一种皮肤外用剂，其特征在于，包括如权利要求7所述的马齿苋发酵液。
10.如权利要求9所述的皮肤外用剂，其特征在于，所述皮肤外用剂满足下述条件中至少一种：
所述皮肤外用剂中包括保湿活性成分、美白活性成分、抗炎活性成分、抗敏活性成分和抗氧化活性成分中至少一种；
所述皮肤外用剂包括面膜、精华或爽肤水；
所述马齿苋发酵液占所述皮肤外用剂的质量百分比为5％～99％。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114617819A (zh) * 2022-04-25 2022-06-14 广州善合化工有限公司 一种马齿苋提取物及其制备方法和应用
CN114732764A (zh) * 2022-03-17 2022-07-12 浙江绿岛科技有限公司 一种舒缓紧致组合物及其制备方法和应用
CN116369518A (zh) * 2023-04-14 2023-07-04 广州千物百草生物科技有限公司 一种多功效植物发酵液及其制备方法与应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114732764A (zh) * 2022-03-17 2022-07-12 浙江绿岛科技有限公司 一种舒缓紧致组合物及其制备方法和应用
CN114617819A (zh) * 2022-04-25 2022-06-14 广州善合化工有限公司 一种马齿苋提取物及其制备方法和应用
CN116369518A (zh) * 2023-04-14 2023-07-04 广州千物百草生物科技有限公司 一种多功效植物发酵液及其制备方法与应用

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