CN116369518A - 一种多功效植物发酵液及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种多功效植物发酵液及其制备方法与应用，属于生物发酵领域。所述植物发酵液的制备方法包括以下步骤：将大枣、马齿苋和甘草混匀后进行粉碎、制浆，得到混合浆液，然后加入果胶酶和纤维素酶进行酶解；所得酶解液接种复合菌进行发酵，即得植物发酵液；其中果胶酶和纤维素酶的质量比为1:1‑2；复合菌为植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌；复合菌的接种量为5‑7％。本申请采用大枣、马齿苋和甘草作为原料，经过酶解后进行发酵，所得植物发酵液具有优异的抗光老化、抗衰老、促进胃肠消化和润肠通便的效果。该制备方法简单，易于工业化生产。
Description
技术领域
本申请涉及生物发酵领域，具体涉及一种抗光老化、抗衰老、促进胃肠消化和润肠通便的植物发酵液及其制备方法与应用。
背景技术
人体衰老是一个全方位、多因素、系统的不可逆的过程，由内源性和外源性多种因素引起的皮肤衰老过程，由外界环境中各类刺激因素为外源性皮肤老化，长期的紫外线辐射容易引起皮肤光老化。紫外线是引起人永生化表皮角质形成细胞(HaCaT)辐射损伤的最重要因素，且UVB辐射可增加皮肤组织中的活性氧ROS水平和自由基的生成量，引起一系列的氧化损伤。自由基的积累是机体衰老的重要标志，具有强氧化效果的自由基能够损害生物膜，引发一系列自由基链式反应，导致蛋白质、脂质、核酸产生氧化损伤，影响新陈代谢。当自由基引起的损伤积累超过了机体修复能力，就会引起皮肤衰老。
临床上可观察到多数患者在大便不畅时伴有皮肤粗糙、色素沉着等皮肤老化的现象。人体皮肤组织的色泽反映了阴阳五行的盛衰、脏腑功能的状态及经络气血的荣枯等。若存在先天不足、后天失调、脏腑虚衰、精气神虚衰及邪气壅盛等因素则易于加快衰老进程。《素问》曰：“主不明则十二官危，使道闭塞不通此养生则欢。气虚血凝、血脉不通会引起衰老。气为血之帅，气行则血行，气虚则血行不畅而致血疲；气虚运行无力，导致肠道气机郁滞，传导失常，大便秘结不通，则可引起一系列的病理变化，从而加速衰老。只有当阴阳协调平衡，五行生克正常，脏腑功能旺盛，精气血脉充盈，经络运行通畅，才能身体健康，精力充沛，面色润泽，容颜不衰；反之，人体便发生疾病，必然反映在容貌形体，因此养护肠胃，减少便秘对延缓衰老有积极作用。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种多功效植物发酵液及其制备方法与应用，该植物发酵液具有较强的抗氧化能力和抵抗UVB对表皮细胞的光损伤，润肠通便，促进肠道消化，能在较短时间内有效改善便秘，并改善黄褐斑、萎黄、油脂分泌旺盛等皮肤问题。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：一种多功效植物发酵液的制备方法，包括以下步骤：将大枣、马齿苋和甘草混匀后进行粉碎、制浆，得到混合浆液，然后加入果胶酶和纤维素酶进行酶解；所得酶解液接种复合菌进行发酵，即得植物发酵液；其中果胶酶和纤维素酶的质量比为1:1-2；复合菌为植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌；复合菌的接种量为5-7％。
本发明的植物发酵液以中医理论为基础，采用大枣、马齿苋和甘草作为原料，经过酶解后进行发酵，所得植物发酵液具有优异的抗光老化、抗衰老、促进胃肠消化和润肠通便的效果；其中大枣富含蛋白质、脂肪、糖类、维生素C及环磷酸腺苷等活性成分，可以补中益气，具有抗氧化、抗血脂、抗抑郁等作用；甘草具有抗氧化的作用，马齿苋和大枣、甘草彼此配合起到了协同功效，在马齿苋和大枣、甘草总质量相等的情况下，缺少其中任一组分都会导致植物发酵液的抗光老化、抗衰老、促进胃肠消化和润肠通便的作用明显降低。
具体的，酶解所用的酶和发酵所用的菌种是影响植物发酵液性能的关键因素，本申请使用果胶酶和纤维素酶对大枣、马齿苋和甘草的混合浆液进行酶解，纤维素酶和果胶酶能够促进混合浆液中植物细胞壁纤维素、果胶的分解，让细胞壁中的有效成分物质分离，发明人在研究过程中，意外发现，当果胶酶和纤维素酶的质量比为1:1-2时，植物发酵液中的性能最佳；当果胶酶和纤维素酶的质量比小于1:2或大于1:1时，植物发酵液的有效成分含量显著下降，如乳酸的含量。本申请利用植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌对大枣、马齿苋和甘草的酶解液进行发酵，植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌共同发挥作用，获得性能更佳优异的植物发酵液。
复合菌的接种量可以是5％、5.5％、6％、6.5％、7％，也可以是上述任意两个值的范围内。
优选地，所述大枣、马齿苋和甘草的质量比为大枣：马齿苋：甘草＝11-15:8-10:6-9。
优选地，所述纤维素酶的质量为混合浆液质量的1.2-1.6％；所述果胶酶的质量为混合浆液质量的0.8-1.2％。
发明人通过研究发现，当大枣、马齿苋和甘草的质量比为大枣：马齿苋：甘草＝11-15:8-10:6-9时，植物发酵液的抗光老化、抗衰老、促进胃肠消化和润肠通便的功效更佳。
本申请中，纤维素酶的质量可以为混合浆液质量的1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％，也可以是上述任意两个值的范围内。果胶酶的质量可以为混合浆液质量的0.8％、0.9％、1.0％、1.1％、1.2％，也可以是上述任意两个值的范围内。
发明人通过研究发现，当纤维素酶的质量为混合浆液质量的1.2-1.6％；果胶酶的质量为混合浆液质量的0.8-1.2％时，植物发酵液的抗光老化、抗衰老、促进胃肠消化和润肠通便的作用更好。
优选地，所述植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌的接种量之比为植物乳杆菌：嗜酸乳杆菌：副干酪乳杆菌＝0.5-1.5:5-7:0.5-1.5。
植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌的接种量之比是影响植物发酵液性能的因素之一，本申请优选植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌的接种量之比为植物乳杆菌：嗜酸乳杆菌：副干酪乳杆菌＝0.5-1.5:5-7:0.5-1.5；以获得抗光老化和促进胃肠消化作用更好的植物发酵液。
复合菌在接种前还需要进行活化，活化能够恢复菌种的活性，同时也能够提供足够接种量的菌种。
活化的复合菌接入酶解液前，需要对酶解液进行灭酶，避免其他纤维素酶和果胶酶对发酵产生负面影响；灭酶是在110℃下灭酶30min。
优选地，所述酶解的温度为50-70℃；所述酶解的时间为1.5-2.5h。
上述酶解条件能够更好的将植物细胞壁中的有效成分分离，提高植物发酵液抗光老化、抗衰老、促进胃肠消化和润肠通便的作用。
优选地，所述发酵的条件包括：发酵温度为35-37℃，发酵的时间为40-80h。
在上述范围内的发酵条件进行发酵，可以获得性能效果更好的植物发酵液。
发酵结束后，还需要进行后处理，后处理的步骤为灭菌和过滤，优选地灭菌条件如下：在85-115℃下，灭菌15-30min；更优选的灭菌条件为：在90℃下，灭菌30min。灭菌能够防止植物发酵液进一步发酵以及提高植物发酵液的稳定性；过滤获得发酵液上清液。
本申请的另一目的为提供一种植物发酵液，所述植物发酵液由所述植物发酵液的制备方法制得。所述植物发酵液具有抗光老化、抗衰老、促进胃肠消化和润肠通便的作用。
本申请的再一目的为提供所述植物发酵液在食品、饮料或保健品中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：本申请采用大枣、马齿苋和甘草作为原料，经过酶解后进行发酵，所得植物发酵液具有优异的抗光老化、抗衰老、促进胃肠消化和润肠通便的效果；其中大枣富含蛋白质、脂肪、糖类、维生素C及环磷酸腺苷等活性成分，可以补中益气，具有抗氧化、抗血脂、抗抑郁等作用；甘草具有抗氧化的作用，马齿苋和大枣、甘草彼此配合起到了协同功效，在马齿苋和大枣、甘草总质量相等的情况下，缺少其中任一组分都会导致植物发酵液的抗光老化、抗衰老、促进胃肠消化和润肠通便的作用明显降低。本文中植物发酵液的制备方法简单，易于工业化生产。
附图说明
图1为不同浓度的实施例1植物发酵液对UVB诱导的光老化HaCaT细胞存活率图。
具体实施方式
为了更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例及附图对本发明作进一步说明，其目的在于详细地理解本发明的内容，而不是对本发明的限制。本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。本发明各实施例和对比例所涉及的实验试剂及仪器，除非特别说明，均为常用的普通试剂及仪器。
实施例1
本实施例提供了一种植物发酵液的制备方法，包括以下步骤：
将大枣、马齿苋和甘草混匀后进行粉碎，然后加入水制浆，水的质量为大枣、马齿苋和甘草总质量的10倍，所得混合浆液加入纤维素酶和果胶酶，在60℃下酶解2h，然后在110℃下进行灭酶30min，得到酶解液；其中，大枣、马齿苋和甘草的质量比为大枣：马齿苋：甘草＝13:10:7，纤维素酶的质量为混合浆液质量的1.5％，果胶酶的质量为混合浆液质量的1％；
所得酶解液接种复合菌，在37℃下发酵48h，发酵结束在90℃下灭菌30min，过滤所得滤液为，得到植物发酵液；其中，复合菌的接种量为6％，复合菌为植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌，植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌的接种量之比为植物乳杆菌：嗜酸乳杆菌：副干酪乳杆菌＝1:6:1。
实施例2
本实施例所述植物发酵液的制备方法与实施例1的唯一区别在于：大枣、马齿苋和甘草的质量比为大枣：马齿苋：甘草＝11:10:9。
实施例3
本实施例所述植物发酵液的制备方法与实施例1的唯一区别在于：大枣、马齿苋和甘草的质量比为大枣：马齿苋：甘草＝15:9:6。
实施例4
本实施例提供了一种植物发酵液的制备方法，包括以下步骤：
将大枣、马齿苋和甘草混匀后进行粉碎，然后加入水制浆，水的质量为大枣、马齿苋和甘草总质量的10倍，所得混合浆液加入纤维素酶和果胶酶，在70℃下酶解1.5h，然后在110℃下进行灭酶30min，得到酶解液；其中，大枣、马齿苋和甘草的质量比为大枣：马齿苋：甘草＝13:10:7，大枣、马齿苋和甘草的总质量与实施例1相同；纤维素酶的质量为混合浆液质量的1.2％，果胶酶的质量为混合浆液质量的1.2％；
所得酶解液接种复合菌，在37℃下发酵48h，发酵结束在90℃下灭菌30min，过滤所得滤液为，得到植物发酵液；其中，复合菌的接种量为7％，复合菌为植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌，植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌的接种量之比为植物乳杆菌：嗜酸乳杆菌：副干酪乳杆菌＝0.5:7:1.5。
实施例5
本实施例提供了一种植物发酵液的制备方法，包括以下步骤：
将大枣、马齿苋和甘草混匀后进行粉碎，然后加入水制浆，水的质量为大枣、马齿苋和甘草总质量的10倍，所得混合浆液加入纤维素酶和果胶酶，在50℃下酶解2.5h，然后在110℃下进行灭酶30min，得到酶解液；其中，大枣、马齿苋和甘草的质量比为大枣：马齿苋：甘草＝13:10:7，大枣、马齿苋和甘草的总质量与实施例1相同；纤维素酶的质量为混合浆液质量的1.6％，果胶酶的质量为混合浆液质量的0.8％；
所得酶解液接种复合菌，在37℃下发酵48h，发酵结束在90℃下灭菌30min，过滤所得滤液为，得到植物发酵液；其中，复合菌的接种量为5％，复合菌为植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌，植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌的接种量之比为植物乳杆菌：嗜酸乳杆菌：副干酪乳杆菌＝1.5:5:0.5。
对比例1
本对比例所述植物发酵液的制备方法与实施例1的唯一区别在于：用大枣替换大枣、马齿苋和甘草，大枣的质量与实施例1中大枣、马齿苋和甘草的总质量相同。
对比例2
本对比例所述植物发酵液的制备方法与实施例1的唯一区别在于：用马齿苋替换大枣、马齿苋和甘草，马齿苋的质量与实施例1中大枣、马齿苋和甘草的总质量相同。
对比例3
本对比例所述植物发酵液的制备方法与实施例1的唯一区别在于：用甘草替换大枣、马齿苋和甘草，甘草的质量与实施例1中大枣、马齿苋和甘草的总质量相同。
对比例4
本对比例所述植物发酵液的制备方法与实施例1的唯一区别在于：果胶酶和纤维素酶的质量比为1:2.2。
对比例5
本对比例所述植物发酵液的制备方法与实施例1的唯一区别在于：果胶酶和纤维素酶的质量比为0.8:1。
试验例1
本试验例测试实施例1所得酶解液、各实施例和对比例所得植物发酵液中部分成分的含量，测试结果如表1所示。
表1
从表1中可以看出，本申请实施例所得植物发酵液具有较高的成分含量，从实施例1-3的实验数据可以看出，当大枣、马齿苋和甘草的质量比为大枣：马齿苋：甘草＝13：10:7时，植物发酵液的成分含量较高。
从实施例1和对比例1-3的实验数据中可以看出，单独某一组分的植物发酵液，其成分含量显著低于实施例1的植物发酵液，说明大枣、马齿苋和甘草之间存在协同作用，能够有效增加本申请植物发酵液抗光老化、抗衰老、促进胃肠消化和润肠通便的效果。
从实施例1和对比例4-5的实验数据可以看出，当果胶酶和纤维素酶的质量比不在本申请请求保护的范围内时，对比例4-5所得植物发酵液成分含量显著降低，说明只有特定比例的果胶酶和纤维素酶才能有效提高植物发酵液中的成分含量。
试验例2
本试验例测试实施例1所得酶解液、实施例1所得植物发酵液的抗衰老性能。
SOD是机体清除自由基的主要物质，其可以延缓衰老、预防疾病、改善人体免疫力，维持机体代谢平衡，SOD含量越低，病情越严重。而丙二醛(MDA)是脂质氧化的终产物，对机体有害，其含量的升高往往提示着膜系统及细胞的受损程度严重。C-反应蛋白可以直接或间接参与局部或全身的炎症反应，CRP含量的升高表明炎症的发生。
试验方法：
采用SPF级别SD雌性大鼠，同步进行受试物的预防性给药，按体重随机分为7组，每组10只：模型组；空白组；植物发酵液组(分为高剂量组18mL/kg，中剂量组9mL/kg，低剂量组4.5mL/kg)，植物发酵液组按实施例1的原料比例和方法制成；阳性组(六味地黄胶囊药液0.06g/kg)；实施例酶解液1(9mL/kg)。
大鼠适应性喂养1周后，受试样品组分别给低、中、高剂量组药物灌胃，阳性对照组给六味地黄混悬液，实施例1酶解液组给实施例1所得酶解液，空白组及模型组给生理盐水灌胃，灌胃体积均为5mL/kg，连续给药30天。在受试样品给药15天后，除空白组外的其余小组大鼠以甲状腺素和利血平灌胃给药的方式来构建肾阴虚模型，连续造模15天。
结束后取材并测定大鼠的总超氧化物歧化酶、丙二醛、C-反应蛋白含量。总超氧化物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)含量均采用南京建成相关生物试剂盒测定；大鼠C-反应蛋白(CRP)含量采用上海碧云天生物技术有限公司相关试剂盒测定；具体操作参考试剂盒说明书进行。测试结果如表2所示。
表2
*表示空白组/给药组与模型组比较，*表示0.05≥P＞0.01，**表示0.01＞P＞0.001，***表示P<0.001。#表示与实施例1酶解液比较，#表示0.05≥P＞0.01，##表示0.01＞P＞0.001，###表示P<0.001。
从表2中可以看出，与空白组相比较，模型组SOD含量显著性降低，MDA含量显著性升高，表明该模型造模成功；与模型组相比较，低、中、高、阳性组中MDA含量均有所降低，而SOD含量有不同程度的上升。其中MDA含量中阳性及高剂量组均有显著性差异(P＜0.05)；SOD含量中，施例1所得植物发酵液中、高剂量组及阳性组差异具有统计学意义(P＜0.001)。
模型组大鼠C-反应蛋白水平显著性升高(P＜0.001)，表明其内有炎症发生；与模型组相比，施例1所得植物发酵液中、高剂量组及阳性组均能显著性下调CRP含量，且具有统计学意义(P＜0.01)。
上述数据表明植物发酵液可以降低血清中MDA含量，升高SOD水平，具有抗氧化和抗衰老作用；还可以显著下调CRP水平，缓解炎症反应的发生，延缓衰老。实施例1酶解液与低、中、高各剂量组呈现明显差异，说明发酵可以提高植物发酵液的功效。
试验例3
本试验例测试实施例1所得植物发酵液的抗光老化性能。
过量的UVB辐射将导致大量ROS堆积于体内，引发炎症反应、细胞凋亡、氧化损伤和DNA双链结构破坏、碱基被替换或者切除等，诱导凋亡相关细胞因子的表达，导致细胞凋亡。
试验方法：取处于对数生长期的HaCaT，分别给不同浓度植物发酵液，体积为100μl，每浓度设置6个复孔，一个调零孔，平行三份。接种于96孔板中细胞随机分组：空白组、模型组、不同浓度给植物发酵液组。空白组：完全培养基培养48h；模型组：完全培养基培养24h后，UVB辐射，再用完全培养基培养24h；3个不同浓度给植物发酵液组：使用不同浓度含植物发酵液培养基培养24h后，UVB辐射，用完全培养基培养24h。24h后吸除细胞培养液，PBS洗3遍，每孔加入100μLPBS，放置在距离紫外灯(波长254nm)25cm下，辐射剂量30cmJ/cm2设定10min的紫外辐照时长，辐照结束后吸除PBS，每孔重新加入全新培养液，继续培养。24h后每孔加入CCK-8溶液10μL，37℃继续培养30min，用全功能酶标仪在波长450nm处测定各组的吸光度值，考察细胞增殖情况，计算细胞存活率。
重复加入CCK-8溶液前的实验步骤，将培养液培养24h后，按照试剂盒说明书，检测细胞培养基上清液中SOD、MDA、LPO。
结果如图1和表3所示。
表3植物发酵液对UVB诱导的光老化HaCaT的影响情况
注：*表示各组与模型组比较，*表示0.05≥P＞0.01，**表示0.01＞P＞0.001，***表示P<0.001。
图1为不同浓度的实施例1植物发酵液对UVB诱导的光老化HaCaT细胞存活率图；从图1和表3中可以看出，与空白对照组相比，模型组的细胞存活率显著降低(P＜0.001)；与模型组相比较，各浓度给药组细胞活力显著升高，(P＜0.001)，表明植物发酵液对UVB诱导的光老化HaCaT细胞具有保护作用，且在此范围内具有浓度依赖性。
与空白组比较，UVB细胞模型组MDA、LPO水平升高(P＜0.001)，SOD活力降低(P＜0.001)，表明UVB诱导的HaCaT细胞氧化损伤模型构建成功；与模型组相比，除了3μL/100μL浓度，各浓度给药组中HaCaT细胞中MDA水平降低(P＜0.01)，SOD活性升高(P＜0.01)、LPO活性降低(P＜0.01)，并呈剂量依赖性。表明该植物发酵液可以降低MDA含量、提升SOD活性、降低LPO活力，减轻UVB对细胞造成的氧化损伤，从而抵抗UVB对细胞的光损伤。
表3的结果显示，该植物发酵液可以促进光老化HaCaT细胞的增殖，提高UVB光损伤表皮细胞的抗氧化能力，有效对抗UVB对HaCaT细胞造成的氧化损伤，维持细胞内氧化还原平衡。
试验例4
本试验例通过测定大鼠胃蛋白酶活力、大鼠脂肪酶活力，测试实施例1所得酶解液、实施例1所得植物发酵液的促胃肠消化能力。
试验方法：
动物造模及给药：采用SPF级别SD雌性大鼠，同步进行受试物的预防性给药，按体重随机分为7组，每组10只：模型组；空白组；植物发酵液组(分为高剂量组18mL/kg，中剂量组9mL/kg，低剂量组4.5mL/kg)，植物发酵液组按实施例1的原料比例和方法制成；阳性组(六味地黄胶囊药液0.06g/kg)；实施例酶解液1给药剂量为9mL/kg。连续给药30天。在受试样品给药15天后，除空白组外的其余小组大鼠以甲状腺素和利血平灌胃给药的方式来构建肾阴虚模型，连续造模15天。
结束后取材制备大鼠胃组织匀浆液、大鼠小肠组织匀浆液，并采用南京建成相关生物试剂盒测定有关指标，具体操作参考试剂盒说明书进行。测试结果如表4所示。
表4
注：*表示空白组/给植物发酵液组与模型组比较，*表示0.05≥P＞0.01，**表示0.01＞P＞0.001，***表示P<0.001。#表示与实施例1酶解液组比较，#表示0.05≥P＞0.01，##表示0.01＞P＞0.001，###表示P<0.001。
表4的结果显示，模型组相比，低、中、高剂量组胃蛋白酶活力明显上升，其中高、中剂量组具有统计学意义(P＜0.01)；低、中、高剂量组脂肪酶活力显著性上升(P＜0.05)。
试验例5
本试验例测试实施例1所得酶解液、实施例1所得植物发酵液的润肠通便功能。
试验方法：用SPF级别SD雌性大鼠，造模导致，同步进行受试物的预防性给药，随机分为高、中、低剂量组别，及空白组、模型组、阳性药组(健胃消食颗粒)、实施例酶解液1组，每组10只。高、中、低剂量组采用实施例1制备的植物发酵液，进行灌胃给药，给药量依次为36、18以及9mL/kg；阳性药组(健胃消食颗粒)给药量为：1.8g/kg；实施例1酶解液给药量为18mL/kg；空白组及模型组给生理盐水灌胃，灌胃体积均为10mL/kg，连续灌胃30天。在受试样品给药15天后，开始给小鼠造模，除空白组以外灌胃洛哌丁胺溶液(1mg/mL)，早晚各一次，连续造模15天，空白组小鼠相应的生理盐水进行灌胃。最后一次给药30min后，模型组和空白组使用生理盐水和0.2mL墨汁灌胃，给药组分别使用植物发酵液和0.2mL酚红混悬液灌胃，分别放入准备好的小隔间，进行红便观察实验。通过对红便粒数、墨汁灌胃时间和首颗红便排出的时间的记录，统计出首颗红便时间和红便粒数。测试结果如表5所示。
表5
| 组别 | 首颗红便时间 | 6h内粪便粒数 |
| 空白组 | 69.20±2.03***### | 25.70±3.63***### |
| 模型组 | 242.60±64.16 | 9.70±3.66### |
| 阳性组 | 171.10±30.93**## | 27.30±8.17***## |
| 实施例1植物发酵液低剂量组 | 196.60±52.75 | 23.80±9.17*** |
| 实施例1植物发酵液中剂量组 | 167.90±37.75**## | 26.70±10.02***# |
| 实施例1植物发酵液高剂量组 | 169.50±48.64*# | 28.30±9.80***## |
| 实施例1酶解液组 | 211.11±3.22 | 14.50±3.92* |
注：*表示空白组/给植物发酵液组与模型组比较，*表示0.05≥P＞0.01，**表示0.01＞P＞0.001，***表示P<0.001。#表示与实施例1酶解液组比较，#表示0.05≥P＞0.01，##表示0.01＞P＞0.001，###表示P<0.001。
从表5的实验数据可知，与空白组相比，模型组的首颗红便时间显著性延长(P＜0.001)，表明该便秘模型造模成功。与模型组相比，阳性组首颗红便时间显著性降低(P＜0.01)，植物发酵液能在加快便秘模型动物的肠道推进；低、中、高剂量组首颗红便时间均有所降低，其中高、中剂量组具有显著性差异(P＜0.05)；表明植物发酵液能在一定程度上加快便秘模型动物的肠道推进，促进肠蠕动。与实施例1酶解液组相比植物酵素液可以更好促进胃肠消化。
在排便观察的6h内，与空白组相比，模型组排便粒数显著性升高(P＜0.001)，表明该便秘模型造模成功。与模型组相比，阳性组排便粒数显著性升高(P＜0.001)；低、中、高剂量给药组排便粒数显著性升高(P＜0.001)，并呈剂量依赖性，表明植物发酵液能在一定程度上缓解便秘模型动物的便秘程度，且没有引起正常动物的明显腹泻。
试验例5
本试验例测试实施例1所得植物发酵液的抗衰老和润肠通便的效果。
患者：黄褐斑、皮肤暗沉、便秘等皮肤和胃肠问题人群；共20人。
试验方法：服用实施例1得到的植物发酵液规格100mL/瓶；开盖即饮，每天服用一次，服用周期2个月。
数据采集：服用植物发酵液前后填写调查问卷，并对患者进行调查回访，统计各种症状改善情况及人群改善率。观察患者治疗前后黄褐斑、皮肤暗沉、便秘等皮肤和胃肠问题积分，满分5分，分数越高表明患者临床症状越严重。
治疗标准：
观察患者治疗前后黄褐斑、皮肤暗沉、便秘等皮肤和胃肠问题积分，满分5分，分数越高表明患者临床症状越严重。
显效为患者黄褐斑、皮肤暗沉、便秘等皮肤和胃肠问题，症状积分≤1分；
有效为患者黄褐斑、皮肤暗沉、便秘等皮肤和胃肠问题有所缓解，症状积分为1<X≤3；
无效为患者上述症状皆未达到。
试验结果如表6所示。
表6
表6的结果表明：本申请实施例所得植物发酵液对黄褐斑、萎黄、油脂分泌旺盛等症状皮肤问题，具有改善效果，整体治疗有效率达到70％；对便秘等问题具有显著改善作用，有效率达到100％。
最后所应当说明的是，以上实施例用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者同等替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。
Claims (9)
1.一种植物发酵液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
将大枣、马齿苋和甘草混匀后进行粉碎、制浆，得到混合浆液，然后加入果胶酶和纤维素酶进行酶解；所得酶解液接种复合菌进行发酵，即得植物发酵液；其中果胶酶和纤维素酶的质量比为1:1-2；复合菌为植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌；复合菌的接种量为5-7％。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述大枣、马齿苋和甘草的质量比为大枣：马齿苋：甘草＝11-15:8-10:6-9。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述纤维素酶的质量为混合浆液质量的1.2-1.6％；所述果胶酶的质量为混合浆液质量的0.8-1.2％。
4.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述植物乳杆菌、嗜酸乳杆菌和副干酪乳杆菌的接种量之比为植物乳杆菌：嗜酸乳杆菌：副干酪乳杆菌＝0.5-1.5:5-7:0.5-1.5。
5.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述酶解的温度为50-70℃；所述酶解的时间为1.5-2.5h。
6.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵的条件包括：发酵温度为35-37℃，发酵的时间为40-80h。
7.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述发酵结束后，还需要进行后处理，后处理的步骤为灭菌和过滤。
8.一种植物发酵液，其特征在于，所述植物发酵液由权利要求1-7任一项所述植物发酵液的制备方法制得。
9.如权利要求8所述植物发酵液在食品、保健品或药品中的应用。
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| CN202310405324.2A CN116369518A (zh) | 2023-04-14 | 2023-04-14 | 一种多功效植物发酵液及其制备方法与应用 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN116889536A (zh) * | 2023-08-17 | 2023-10-17 | 花安堂生物科技集团有限公司 | 马齿苋发酵液、含其皮肤外用剂、及其制备方法和应用 |
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- 2023-04-14 CN CN202310405324.2A patent/CN116369518A/zh active Pending
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