CN116836819A - 一种微生物复合菌剂及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种微生物复合菌剂及其应用，所述微生物复合菌剂由青霉菌(Penicillium)ZJ‑1和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ‑6复配而成，所述青霉菌(Penicillium)ZJ‑1于2023年04月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.40559；黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ‑6于2023年04月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.40560。将该微生物复合菌剂配制成复合发酵液能够有效的淋洗铀矿区污染土壤，从而改善土壤性质，修复土壤环境。
Description
技术领域
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种微生物复合菌剂及其应用。
背景技术
随着社会工业化的发展，核能大量使用，铀矿的开采和冶炼日益增多，导致了铀矿周边环境污染问题日益严重，尤其是对土壤环境的污染。因此对铀矿周边污染土壤进行治理非常必要。但是现有的一些物理和化学修复技术存在着许多的问题，如再生困难、回收成本高、重复利用率低、容易产生二次污染等，限制了其进一步实际应用。生物修复法既经济实用又无二次污染，用以修复污染土壤具有很好的实用价值。
生物淋滤是指利用微生物直接作用或者其代谢产物的间接作用，通过氧化、还原、吸附、溶解、络合等方式，将固相中的一些不可溶解的成分分离浸提，从而进入液相的一种技术。微生物产生的有机酸在淋滤过程起到了重要作用。但是目前运用生物淋滤技术修复实际铀矿区污染土壤的研究较少。因此，获得适用矿区铀污染土壤的生物淋洗技术具有积极意义。
发明内容
本发明的目的在于提供了一种微生物复合菌剂及其应用，将该微生物复合菌剂配制成复合发酵液能够有效的淋洗铀矿区污染土壤，从而改善土壤性质，修复土壤环境。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案为：
一种微生物复合菌剂，由青霉菌(Penicillium)ZJ-1和黄曲霉菌(Aspergillusflavus)ZJ-6复配而成，所述青霉菌(Penicillium)ZJ-1于2023年04月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.40559；黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ-6于2023年04月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.40560。
优选的，青霉菌(Penicillium)ZJ-1和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ-6之间的发酵液体积比为4：1。
本发明还提供上述微生物复合菌剂在制备用于淋洗铀污染土壤发酵修复液中的应用。
本发明还提供一种用于淋洗铀污染土壤发酵修复液的制备方法，包括以下步骤：
1)制备马铃薯蔗糖琼脂培养基液体培养基，高温灭菌20-30min，备用；
2)在灭过菌的超净台内，以种量为2‰进行接种，用移液器分别取青霉菌(Penicillium)ZJ-1母液和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ-6母液，分别接种于马铃薯蔗糖琼脂培养基液体培养基中进行发酵得到发酵液；
3)3d后，将步骤2)得到的青霉菌(Penicillium)ZJ-1发酵液和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ-6发酵液按体积比4:1进行混合，即得到用于淋洗铀污染土壤发酵修复液。
与现有技术相比，本发明有益效果如下：
本发明为微生物淋滤技术修复实际铀矿区污染土壤的发展提供了良好的菌种资源。使用该微生物菌剂具有绿色环保、无农药残留的特点，生物安全性高，在使用后避免了致病菌产生抗药性。
附图说明
图1为实施例1中青霉菌ZJ-1在PSA培养基上培养3d后的菌落生长形态图；
图2为实施例1中青霉菌ZJ-1在光学显微镜下放大1000倍的孢子梗形态图；
图3为实施例1中青霉菌ZJ-1系统发育树图；
图4为实施例2中黄曲霉菌ZJ-6在PSA培养基上培养3d后的菌落生长形态图；
图5为实施例2中黄曲霉菌ZJ-6菌株在光学显微镜下放大1000倍的孢子梗形态图；
图6为实施例2中黄曲霉菌ZJ-6系统发育树图；
图7为实施例3中青霉菌ZJ-1的有机酸种类和浓度示意图；
图8为实施例3中青霉菌ZJ-1发酵液在pH为4.31时有机酸色谱图；
图9为实施例3中黄曲霉菌ZJ-6的有机酸种类和浓度示意图；
图10为实施例3中黄曲霉菌ZJ-6发酵液在pH为4.35时有机酸色谱图；
图11为青霉菌(Penicillium)ZJ-1和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ-6的液体复合菌剂配制得到的用于淋洗铀污染土壤发酵修复液；
图12为不同固液比条件下单一发酵液淋洗效果对比图；图中：a为青霉菌ZJ-1发酵液淋洗、b为黄曲霉菌ZJ-6发酵液淋洗、CK为空白对照；
图13为不同温度条件下单一发酵液淋洗效果对比图；图中：a为青霉菌ZJ-1发酵液淋洗、b为黄曲霉菌ZJ-6发酵液淋洗、CK为空白对照；
图14为单一发酵液以不同体积比复合时淋洗效果对比图；
图15为最佳复合发酵液与单一发酵液淋洗效果对比图，图中：CK1为青霉菌ZJ-1发酵液空白对照、CK2为黄曲霉菌ZJ-6发酵液空白对照、CK3为最佳复合发酵液空白对照；
图16复合菌剂淋洗前后土壤中铀形态分布特征图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例1：青霉菌株的筛选与鉴定
1.菌株筛选
1)采集铀污染土壤样品，除去杂质、过100目筛、称取1g样品于超净台备用；
2)无菌条件下，将1g样品移入装有99mL无菌水的三角瓶中，加入玻璃珠振荡使其均匀分散开，取1mL土壤悬液加入9mL无菌水内进行梯度稀释，以此类推，分别将土壤悬液样品稀释到10-3g/mL、10-4g/mL、10-5g/mL、10-6g/mL和10-7g/mL等不同浓度梯度的样品，备用；
3)马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)培养基:将新鲜的土豆去皮洗净后称取200g，然后切成小块，加入1000ml蒸馏水煮沸20～30min，用8层纱布过滤得到土豆浸汁；称取20g蔗糖、15～20g琼脂(固体培养基加琼脂，液体不加)，加入土豆浸汁中搅拌融化，最后加入蒸馏水补充至1000mL，充分溶解定容后于高温灭菌锅内121℃灭菌20min；
4)每个浓度样品取100μL涂布于马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)固体培养基上，每组浓度设置三个平行，并设置对照组；
5)置于30℃的恒温培养箱中倒置培养3-5d；
6)菌株分离纯化至得到单菌落；
7)置于4℃保藏备用。
2.菌株ZJ-1的生物学鉴定
本实施例对获得的菌株进行了形态学分类鉴定。将菌株放置在PSA培养基上培养3d后，菌落生长形态如图1所示。在光学显微镜下放大1000倍的孢子、孢子梗的形态如图2所示，呈现的形态学特征为：菌株生长迅速，菌落直径达2cm～3cm，结构疏松，边缘不规则，由分支状菌丝组成，菌丝生长初期为白色短绒状，向四周平铺生长，生长后期菌落中央长出大量灰绿色孢子，基内菌丝深入培养基内部呈现褐色；气生菌丝长在培养基上方的空气中，顶端形成长而直立的分生孢子梗，其顶端形成特殊的对称或不对称的扫帚状的分支，其上着生分生孢子链，分生孢子为圆形或椭圆形，呈灰绿色。
本实施例通过ITS rDNA序列方法对菌株进行了分类鉴定。
1)提取本实施例中分离得到的菌株的DNA，扩增ITS rDNA的序列。ITS rDNA基因PCR扩增中所使用的引物委托杭州美迪贝生物科技有限公司合成，其序列为：
ITS1：5'-GGAAGTAAAAGTCGTAACAAGG-3'；
ITS4：5'-TCCTCC GCTTATTGATATGC-3，'扩增片段大小约500bp～1000bp；
2)扩增产物进行sanger双向测序，测序结果在Genebank上比对分析，下载与ZJ-1的序列相似性大于97％的菌株的ITS序列。通过Clustal X进行聚类分析后，利用MEGA6软件生成系统发育进化树，结果如图3所示。
将所得菌株序列通过Genebank序列比对，利用MEGA6建立系统发育树，结果表明：所述青霉菌株基因序列与菌株Penicillium最为接近，同源性达到99.83％(如图3所示)。结合菌株形态观察、培养特性及ITS rDNA的鉴定结果，将本发明所述青霉菌命名为青霉菌ZJ-1。
实施例2：黄曲霉菌株的筛选与鉴定
1.菌株筛选
1)采集铀污染土壤样品，除去杂质、过100目筛、称取1g样品于紫外超净台备用；
2)无菌条件下，将1g样品移入装有99mL无菌水的三角瓶中，加入玻璃珠振荡使其均匀分散开，取1mL土壤悬液加入9mL无菌水内进行梯度稀释，以此类推，分别将土壤悬液样品稀释到10-2g/mL、10-3g/mL、10-4g/mL、10-5g/mL、10-6g/mL等不同浓度梯度的样品，备用；
3)马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)培养基:将新鲜的土豆去皮洗净后称取200g，然后切成小块，加入1000ml蒸馏水煮沸20～30min，用8层纱布过滤得到土豆浸汁；称取20g蔗糖、15～20g琼脂(固体培养基加琼脂，液体不加)，加入土豆浸汁中搅拌融化，最后加入蒸馏水补充至1000mL，充分溶解定容后于高温灭菌锅内121℃灭菌20min；
4)每个浓度样品取100μL涂布于马铃薯蔗糖琼脂培养基(PSA)固体培养基上，每组浓度设置三个平行，并设置对照组；
5)置于30℃的恒温培养箱中倒置培养3-5d；
6)反复划线纯化直至得到单菌落；
7)置于4℃保藏备用。
2.菌株ZJ-6的生物学鉴定
本实施例通过ITS rDNA序列方法对菌株进行了分类鉴定。
1)提取本实施例中分离得到的菌株的DNA，扩增ITS rDNA的序列。ITS rDNA基因PCR扩增中所使用的引物委托杭州美迪贝生物科技有限公司合成，其序列为：
ITS1：5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3'；
ITS4：5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3'，扩增片段大小约500bp～1000bp；
2)扩增产物进行sanger双向测序，测序结果在Genebank上比对分析，利用MEGA6建立系统发育树，结果表明：所述黄曲霉菌株基因序列与菌株Aspergillus flavus最为接近，同源性达到100％(如图6所示)。
本实施例还结合形态学特征对所述黄曲霉菌株进行了分类鉴定。菌株ZJ-6在PSA培养基上培养3d后的菌落生长形态如图4所示。在光学显微镜下放大1000倍的孢子、孢子梗的形态如图5所示，呈现的形态学特征为：菌株生长迅速，菌落直径达2cm～3cm，结构疏松，边缘不规则，由分支状菌丝组成，菌丝生长初期为白色短绒状，向四周平铺生长，生长后期菌落中央长出大量黄绿色孢子，基内菌丝具有分隔，深入培养基内部；气生菌丝长在培养基上方的空气中，其顶端形成长而粗糙的分生孢子梗，分生孢子梗顶端膨大形成椭圆形的顶囊，由顶囊向外辐射长出1-2层小梗，最上层小梗顶端生成成串的圆形分生孢子。
结合菌株形态观察、培养特性及ITS rDNA的鉴定结果，将本发明所述黄曲霉菌命名为黄曲霉菌ZJ-6。
实施例3：单一菌株的产酸活性
本实施例涉及到的的菌株分别为青霉菌(Penicillium)ZJ-1和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ-6，从铀污染土壤中分离得到，保藏编号分别为：CGMCC NO.40559和CGMCCNO.40560。
在最佳条件下分别接种青霉菌ZJ-1和黄曲霉菌ZJ-6的母液进行培养，当pH小于5时取样，将样品放入低温冷冻离心机中8000rpm/min离心，然后取上清液做适量稀释，过0.22um滤膜，最后采用高效液相色谱仪测定真菌发酵液中的有机酸。采用外标法定量测定样品中的有机酸，检测样品中草酸、柠檬酸、苹果酸、琥珀酸、乳酸的具体浓度。液相色谱条件：仪器：岛津LC-20AD、色谱柱：Ultimate AQ-C18 4.6*250mm 5um、流速：0.7ml/min、柱温：30、检测波长：210nm、进样量：10ul、流动相A：(20mM磷酸氢二钠用磷酸调pH为2.60)-甲醇＝99-1、流动相B：甲醇。
结果表明：在最佳产酸条件下，当青霉菌ZJ-1发酵液pH低于5时产生有机酸的种类和浓度如图7所示，青霉ZJ-1发酵液中的有机酸主要为草酸、苹果酸和柠檬酸，其中以柠檬酸为主。当青霉ZJ-1发酵液pH从4.85下降到4.31时，总有机酸浓度从2660.45μg/ml上升至2786.92μg/ml。当发酵液pH为4.85时柠檬酸浓度为2391.28μg/ml、苹果酸浓度为234.76μg/ml、草酸浓度为34.41μg/ml，发酵液pH下降到4.31时柠檬酸浓度上升到2487.79μg/ml、苹果酸浓度上升到246.13μg/ml、草酸浓度上升到52.99ug/ml，乳酸和琥珀酸浓度低于检测下限均未检出。青霉ZJ-1发酵液pH为4.31时的有机酸谱图如8所示。由此可见，青霉ZJ-1发酵液pH越低有机酸浓度越高。
在最佳产酸条件下，当黄曲霉ZJ-6发酵液pH低于5时有机酸的种类和浓度如图9所示，黄曲霉ZJ-6发酵液中的有机酸主要为草酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸和琥珀酸，其中以柠檬酸为主。当黄曲霉ZJ-6发酵液pH从4.79下降到4.35，总有机酸浓度从2843.35μg/ml上升至3146.77μg/ml，。当发酵液pH为4.79时柠檬酸浓度为2484.43μg/ml、苹果酸浓度为331.14μg/ml、草酸浓度为17.56μg/ml、乳酸浓度为10.22μg/ml、琥珀酸低于检测下限。发酵液pH下降到4.35时，柠檬酸浓度上升到2493.42μg/m、苹果酸浓度上升到462.46μg/ml、草酸浓度上升到24.49μg/ml，乳酸浓度上升到14.60μg/ml、琥珀酸浓度上升到151.80μg/ml，黄曲霉ZJ-6发酵液pH为4.35时的有机酸谱图如图10所示。由此可见，黄曲霉ZJ-6发酵液pH越低有机酸种类越多浓度越大。
综上所述，两株菌株的产酸效能较佳，为复合淋洗菌剂的筛选奠定了基础。
实施例4：发酵修复液的制备
1)制备马铃薯蔗糖琼脂培养基液体培养基，高温灭菌20-30min，备用；
2)在灭过菌的超净台内，以种量为2‰进行接种，用移液器分别取青霉菌(Penicillium)ZJ-1母液和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ-6母液，分别接种于马铃薯蔗糖琼脂培养基液体培养基中进行发酵得到发酵液；
3)3d后，将步骤2)得到的青霉菌(Penicillium)ZJ-1发酵液和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ-6发酵液按体积比4:1进行混合，即得到用于淋洗铀污染土壤发酵修复液(图11)。
实施例5：复合菌剂最佳淋洗条件筛选
1)固液比对淋洗的影响：精确称量8.00g土样置于三角瓶中，固液比设置1:5g/ml、1:10g/ml、1:20g/ml、1:30g/ml四个梯度，加入最佳复合发酵液，并置于恒温振荡培养箱中180rpm/min，30℃，淋洗0.17h、0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、36h取样，测定pH和铀浓度，铀浓度测定之前将样品置于离心管中，利用高速冷冻离心机离心4000rpm/min、10min，取上清液加入5％稀硝酸酸化，过0.22um滤膜，利用ICP测定，每个样品设置三个平行样和空白对照。
结果表明：固液比在1:5-1:30g/ml范围内，土壤中铀淋洗率随时间的变化情况如图12。从图中可以看出空白样品的去除率在20％左右，受固液比影响较小。生物发酵液对土壤中铀的淋洗率与固液比成反比。其中青霉菌ZJ-1发酵液的淋洗率要大于黄曲霉菌ZJ-6发酵液的淋洗率。当固液比从1:5g/ml降低至1:10g/ml时，土壤中铀的淋洗率快速上升，青霉菌ZJ-1发酵液的最大淋洗率由45.02％上升至54.65％，黄曲霉菌ZJ-6发酵液的最大淋洗率由48.44％上升至53.44％，在固液比1:10g/ml之后继续降低固液比，土壤中铀的淋洗率上升趋势变缓。青霉菌ZJ-1和黄曲霉菌ZJ-6发酵液淋洗率在各个固液比与时间的关系如图12所示，由图可知，各固液比在0-1h内土壤中铀的淋洗率呈直线上升趋势，在1-12h内土壤中铀的淋洗率上升趋势变缓，12h之后土壤中铀的淋洗率趋于平稳。固液比从大到小，青霉菌ZJ-1发酵液和黄曲霉菌ZJ-6发酵液的最大淋洗率依此为(45.02％、54.65％、56.50％、58.81％)，(48.44％53.44％、55.57％、56.76％)。从淋洗过程中pH的变化、淋洗成本以及淋洗率三个方面考虑，单一发酵液淋洗土壤的最佳固液比为1:10g/mL。
2)温度对淋洗的影响：精确称量8.00g土样置于三角瓶中，设置试验中得到的最佳固液比，温度设置为25℃、30℃、35℃、40℃四个梯度，加入最佳复合发酵液，并置于恒温振荡培养箱中180rpm/min，淋洗0.17h、0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、36h取样，测定pH和铀浓度，铀浓度测定之前将样品置于离心管中，利用高速冷冻离心机离心4000rpm/min、10min，取上清液加入5％稀硝酸酸化，过0.22um滤膜，利用ICP测定，每个样品设置三个平行样和空白对照。
结果表明：淋洗温度在25-40℃的条件下，土壤中铀淋洗率随时间的变化情况如图13。从图中可以看出空白培养基淋洗率基本在20％左右，受温度影响较小。生物发酵液淋洗率与温度成正比，其中青霉菌ZJ-1发酵液的淋洗率要大于黄曲霉菌ZJ-6发酵液的淋洗率。当温度从25℃提升至30℃时，土壤中铀的淋洗率快速上升，青霉菌ZJ-1发酵液的最大淋洗率由47.63％上升至54.65％，黄曲霉菌ZJ-6发酵液的最大淋洗率由49.17％上升至53.44％，在温度30℃之后继续升高温度，土壤中铀的淋洗率上升趋势变缓。青霉菌ZJ-1、黄曲霉菌ZJ-6发酵液在各个温度淋洗率与时间的关系如图13所示，由图可知各个固液比在0-1h内土壤中铀的淋洗率呈直线上升趋势，在1-12h内土壤中铀的淋洗率呈缓慢上升趋势，12h之后土壤中铀的淋洗率趋于平稳。淋洗温度从小到大，青霉菌ZJ-1发酵液和黄曲霉菌ZJ-6发酵液对土壤中铀的最大淋洗率依此为(47.63％、54.65％、56.03％、59.56％)，(49.17％53.44％、55.23％、57.53％)，从淋洗过程中pH变化趋势、淋洗成本以及淋洗率三个方面综合考虑，单一真菌发酵液最佳淋洗温度为30℃。
3)不同体积比复合发酵液对淋洗率的影响：精确称量8.00g土样置于三角瓶中，固液比设置为1:10g/ml，按照青霉菌ZJ-1发酵液(ml)：黄曲霉菌ZJ-6发酵液(ml)为1:4、2:3、1:1、3:2、4:1的比例加入，并置于恒温振荡培养箱中180rpm/min，30℃条件下，淋洗0.17h、0.5h、1h、3h、6h、12h、24h、36h取样，测定pH和铀浓度，铀浓度测定之前将样品置于离心管中，利用高速冷冻离心机离心4000rpm/min、10min，取上清液加入5％稀硝酸酸化，过0.22um滤膜，利用ICP测定，每个样品设置三个平行样和空白对照。
结果表明：将两种发酵液(青霉菌ZJ-1发酵液和黄曲霉菌ZJ-6发酵液)组合的淋洗效果如图14所示，不同比例的复合发酵液对于土壤中铀的淋洗率不同。青霉菌ZJ-1发酵液与黄曲霉菌ZJ-6发酵液在体积比为1:4-4:1的范围内，随着青霉菌ZJ-1发酵液的占比不断升高土壤中铀的淋洗率也随之增大。各比例复合发酵液淋洗率与时间的关系如图14所示，由图可知各比例在0-1h内，土壤中铀的淋洗率呈直线上升趋势，在1-12h内，土壤中铀的淋洗率上升趋势变缓，12h之后土壤中铀的淋洗率趋于平稳。各比例复合发酵液最大淋洗率依次为(52.63％、53.78％、52.89％54.47％、57.38％)，所以最佳体积比为4:1(青霉菌ZJ-1发酵液：黄曲霉菌ZJ-6发酵液)，此时淋洗率为57.38％。在相同条件下，如图15所示，单一青霉菌ZJ-1发酵液和黄曲霉菌ZJ-6发酵液的最大淋洗率为54.65％和53.44％，结果表明复合发酵液能够更加有效地去除土壤中的铀，两种发酵液之间具有一定的协同作用。
实施例6：淋洗前后重金属形态比较
采用欧盟委员会所制定的标准和测量过程(BCR)，对土壤中不同形态的铀进行测定，BCR提取重金属的步骤如表1所示。
表1 BCR顺序提取重金属步骤
结果表明：通过BCR连续提取法研究不同发酵液淋洗前后，土壤中铀形态的变化。其中不同形态的铀占比情况如图16所示，根据BCR形态占比显示，土壤原样中以可氧化态和残渣态形式存在的铀占比最高分别为40％和25％，弱酸可提取态占比最低。土壤经过发酵液淋洗之后，残渣态的铀占比明显增加，可氧化态和弱酸可提取态的铀占比大幅度减少，可还原态的铀占比略微减少。这是由于土壤经过发酵液淋洗之后残渣态的铀含量基本不变，而其余三种形态的铀含量都大幅度的下降。其中青霉菌ZJ-1发酵液和黄曲霉菌ZJ-6发酵液淋洗修复之后残渣态的铀占比在50％左右，弱酸可提取态、可还原态和可氧化态的铀占比都下降。复合发酵液淋洗之后土壤中残渣态的铀占比最高59％，弱酸可提取态以及可还原态占比最低分别为4％、15％。说明复合发酵液能够更加有效地降低铀在土壤中的生物可利用性，同时降低了铀在土壤中的环境风险。
实施例7：淋洗前后土壤流动性、稳定性对比
生物可利用度(MF)是反应重金属在土壤中流动性和可迁移程度的重要指标，用弱酸可提取态占总形态的比例来表示，其计算公式如下：
式中：F1、F2、F3、F4分别为弱酸可提取态、可还原态、可氧化态、残渣态重金属含量占比，MF数值越大则该土壤中生物可降解的重金属越多，即流动性越大。
配合能力(IR)反应了土壤中重金属的稳定性，是用来描述各形态重金属的相对结合强度，其计算公式如下:
式中：K为BCR顺序提取程序的步骤，Fi是第i步形态提取中所得到的重金属含量占比，IR指数范围在0-1之间，指数越大表示重金属和土壤相结合形式所占的比例越大，即土壤中重金属稳定性越高。
结果表面：根据土壤中铀的四个形态占比，计算淋洗修复前后铀配合能力(IR)以及生物可利用度(MF)的参数，并用来表征淋洗前后铀在土壤中的稳定性以及流动性。IR值越大，说明铀与土壤的结合强度大，在土壤中很难迁移转化；MF值越大，说明土壤中铀的生物可利用性和毒性越大。土壤经过真菌发酵液淋洗修复之后，土壤中的IR值有一定幅度的增加，土壤原样、青霉菌ZJ-1发酵液、黄曲霉菌ZJ-6发酵液、复合发酵液的IR值分别为0.54、0.69、0.68、0.75，其中复合发酵液淋洗修复后IR值最大，说明经过复合发酵液淋洗后，土壤中的铀稳定性最好。MF值有一定程度的减少，土壤原样、青霉菌ZJ-1发酵液、黄曲霉菌ZJ-6发酵液、复合发酵液的MF值分别为11.41、7.79、7.59、4.41，其中复合发酵液淋洗之后MF值最小，说明经过复合发酵液淋洗后，土壤中铀的生物可利用性和毒性最低。由此可以看出，复合菌剂淋洗铀污染土壤的效果较好，为之后深入探索铀污染土壤的修复研究提供重大意义。
Claims (4)
1.一种微生物复合菌剂，所述微生物复合菌剂由青霉菌(Penicillium)ZJ-1和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ-6复配而成，所述青霉菌(Penicillium)ZJ-1于2023年04月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.40559；黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ-6于2023年04月07日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.40560。
2.根据权利要求1所述的一种微生物复合菌剂，其特征在于，青霉菌(Penicillium)ZJ-1和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ-6之间的发酵液体积比为4：1。
3.根据权利要求1所述的微生物复合菌剂在制备用于淋洗铀污染土壤发酵修复液中的应用。
4.一种用于淋洗铀污染土壤发酵修复液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)制备马铃薯蔗糖琼脂培养基液体培养基，高温灭菌20-30min，备用；
2)在灭过菌的超净台内，以种量为2‰进行接种，用移液器分别取青霉菌(Penicillium)ZJ-1母液和黄曲霉菌(Aspergillus flavus)ZJ-6母液，分别接种于马铃薯蔗糖琼脂培养基液体培养基中进行发酵得到发酵液；
3)3d后，将步骤2)得到的青霉菌(Penicillium)ZJ-1发酵液和黄曲霉菌(Aspergillusflavus)ZJ-6发酵液按体积比4:1进行混合，即得到用于淋洗铀污染土壤发酵修复液。
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Address after: 344000 No.56 Xuefu Road, Linchuan District, Fuzhou City, Jiangxi Province Applicant after: EAST CHINA INSTITUTE OF TECHNOLOGY Address before: No.330418, Guanglan economic and Technological Development Zone, Nanchang City, Jiangxi Province Applicant before: EAST CHINA INSTITUTE OF TECHNOLOGY |
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20231003 |