CN113337409B - 一种黑曲霉菌株738y-15mj及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种黑曲霉及其应用，属于微生物应用技术领域。本发明提供的黑曲霉(Aspergillusniger)菌株738Y‑15MJ，保藏编号为CGMCCNO.21466。本发明提供的黑曲霉菌株738Y‑15MJ可经PSA、PDA、DOX(‑)或DOX(+)培养基发酵培养得到含有草酸、柠檬酸等多种有机酸的发酵液，能够用于铀金属矿石的浸出，浸铀效果好，铀浸出率达到98.81％，能够显著提高铀浸出率，有利于提高铀矿资源利用率，促进了微生物浸矿的工业化进程。

Description

一种黑曲霉菌株738Y-15MJ及其应用

技术领域

本发明涉及微生物应用技术领域，特别是涉及一种黑曲霉菌株738Y-15MJ及其应用。

背景技术

微生物浸矿以其环境友好、投资少、浸出周期短等优点而受到广泛关注，研究成果已广泛应用于铀、铜、金、镍等金属的浸出。目前研究较多的浸铀微生物主要有氧化皿铁硫杆菌、氧化硫硫杆菌、喜温硫杆菌、氧化亚铁钩端螺旋菌等化能自养菌，这类微生物需要硫、铁等作为能量来源，这些物质在硫化矿中含量较高，在氧化矿中的含量很少，因此，这类微生物只适合用于硫化矿的浸出，而我国的铀矿资源又以氧化矿为主，所以限制了它们的工业应用范围。并且，这类微生物在浸出硫化矿的过程中会产生黄钾铁矾等沉淀，这些沉淀覆盖在铀矿石表面，阻碍了浸出反应的继续进行，导致浸出率降低，这进一步阻碍了其工业应用步伐。

近年研究了不同的微生物对铀矿浸出的效果，比如公开号为CN104745498A的专利文献中将耐氟嗜酸氧化亚铁硫杆菌用于高氟铀矿的浸出；公开号为CN107058195A的专利文献中利用复合菌群浸出钛铀矿。但目前真菌浸铀方面的研究还比较少，铀的浸出率低。因此，为了从根本上解决上述问题，提高铀矿资源利用率，促进微生物浸矿的工业化进程，有必要提供一种新的微生物浸铀方法。

发明内容

为了解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种黑曲霉菌株738Y-15MJ及其应用。本发明提供的黑曲霉菌株738Y-15MJ能够用于铀金属矿石的浸出，浸铀效果好，可以显著提高铀浸出率。

为解决上述技术问题，本发明提供了以下技术方案：

本发明提供了一种黑曲霉(Aspergillus niger)菌株738Y-15MJ，所述菌株738Y-15MJ的保藏编号为CGMCC NO.21466。

优选的，所述菌株在DOX(-)和PDA培养基上呈圆形，绒毛状；菌丝有隔膜，有分枝，松散呈白色；孢子呈球形、黑褐色，分生孢子头为球形，裂开后呈放射状，分生孢子梗壁光滑。

优选的，所述菌株的18s rDNAITS序列如SEQ ID NO：3所示。

本发明提供了所述黑曲霉菌株738Y-15MJ的孢子悬液，所述孢子悬液由所述黑曲霉菌株738Y-15MJ经PSA、PDA、DOX(+)或DOX(-)任一培养基培养获得。

本发明还提供了所述黑曲霉菌株738Y-15MJ的发酵液。

优选的，所述发酵液由上述的孢子悬液经液体发酵获得。

优选的，所述液体发酵的培养基为PDA培养基或PSA培养基，所述液体发酵的温度为25-37℃，时间为12-72h。

本发明还提供了一种利用黑曲霉浸出铀金属的方法，所述方法具体包括如下步骤：

将上述的发酵液与铀矿混合浸出，经震荡离心得浸出液和矿渣，分别检测浸出液和矿渣中的铀浓度。

优选的，所述发酵液的pH值为1.81-2.11。

优选的，所述铀矿与发酵液的质量体积比为1：3-1：5。

本发明提供了一种黑曲霉菌株738Y-15MJ，可经PSA、PDA、DOX(-)或DOX(+)培养基发酵培养得到发酵液，所述发酵液中含有草酸、L-苹果酸、柠檬酸等多种有机酸，能够用于铀金属矿石的浸出。经铀浸出实验表明，本发明所述黑曲霉菌株738Y-15MJ发酵液的浸铀效果好，铀浸出率达到98.81％，能够显著提高铀浸出率，有利于提高铀矿资源利用率，促进了微生物浸矿的工业化进程。

生物保藏说明

本发明所述的黑曲霉菌株738Y-15MJ，分类命名：黑曲霉Aspergillus niger，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO.21466，保藏日期2021年02月25日，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

附图说明

图1为ITS系统发育树。

图2为738Y-15MJ在DOX(-)和PDA固体培养基上的纯化菌落形态；其中(a)为738Y-15MJ在DOX(-)培养基上的纯化菌落形态，(b)738Y-15MJ在PDA培养基上的纯化菌落形态。

图3为菌丝在显微镜下放大200倍的形态。

图4为分生孢子和孢子在显微镜下放大400倍的形态.

图5为738Y-15MJ在PSA中不同温度下的生长曲线；其中，横坐标为培养时间，纵坐标为菌体重量。

图6为738Y-15MJ在PDA中不同温度下的生长曲线；其中，横坐标为培养时间，纵坐标为菌体重量。

图7为738Y-15MJ在DOX(+)中不同温度下的生长曲线；其中，横坐标为培养时间，纵坐标为菌体重量。

图8为738Y-15MJ在DOX(-)中不同温度下的生长曲线；其中，横坐标为培养时间，纵坐标为菌体重量。

图9为PSA中不同温度条件下发酵液pH值的变化。

图10为PDA中不同温度条件下发酵液pH值的变化。

图11为DOX(-)中不同温度条件下发酵液pH值的变化。

图12为不同发酵液pH值与总有机酸浓度关系图。

图13为发酵液浸出过程U浓度变化。

图14为发酵液浸出过程pH变化。

图15为发酵液浸出过程Eh变化。

图16为发酵液多回次浸出过程U浓度变化。

图17为发酵液多回次浸出过程U浸出率。

具体实施方式

本发明提供了一种黑曲霉(Aspergillus niger)菌株738Y-15MJ，所述菌株738Y-15MJ的保藏编号为CGMCC NO.21466。

本发明所述的黑曲霉菌株738Y-15MJ分离自新疆十红滩铀矿床的铀矿层地下水，所述菌株738Y-15MJ于2021年02月25日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心。

本发明所述菌株的形态特征为：在DOX(-)和PDA培养基上呈圆形，绒毛状；菌丝有隔膜，有分枝，松散呈白色；孢子呈球形、黑褐色，分生孢子头为球形，裂开后呈放射状，分生孢子梗壁光滑。

本发明通过分子鉴定738Y-15MJ菌株是黑曲霉。本发明对所述分子鉴定的方法和过程没有特殊的限定，采用常规菌种鉴定方法即可。在本发明中，所述分子鉴定过程优选如下：

将纯化菌株送至生工生物工程(上海)股份有限公司测序部门，提取基因组DNA，采用18spF：AGTAGTCATATGCTTGTCTC(SEQ ID NO.1)和18spR：AACCTGCGGAAGGATCATTA(SEQ IDNO.2)特异引物进行扩增，并进行测序，测序后所得菌株的18s rDNA序列如SEQ ID NO：3所示。测序结果在NCBI数据库中进行同源性分析，并采用MEGA5构建系统发育树得到附图1。

根据738Y-15MJ在附图1中的位置和其形态特征，确定该菌为黑曲霉(Aspergillusniger)。

本发明提供了所述黑曲霉菌株738Y-15MJ的孢子悬液。本发明中，所述孢子悬液由上述黑曲霉菌株738Y-15MJ经PSA、PDA、DOX(+)或DOX(-)任一培养基培养获得。所述PSA、PDA、DOX(+)或DOX(-)培养基的组成如下表1所示：

表1霉菌选育培养基组成

本发明对所述孢子悬液的制备方法没有特殊的限定，采用常规方法即可。在本发明中，所述孢子悬液的制备优选如下：

将分离出的真菌进行平板划线，并置于恒温培养箱中20-35℃培养4-7d，直至菌丝顶端产生孢子后，在洁净工作台内将灭菌的棉签或接种环用含1％Tween-20的灭菌双蒸水沾湿，轻轻刮取孢子，尽量避免沾染菌丝，将刮取的孢子洗脱到含2mL灭菌培养基的离心管中洗脱，震荡5min，过滤，去除菌体，制得所述孢子悬液。取500μL孢子悬液至1.5mL的保种管中，加入灭菌的20％甘油500μL，将保种管置于-80℃冰箱中保存。

本发明还提供了所述黑曲霉菌株738Y-15MJ的发酵液。本发明中，所述发酵液由上述的孢子悬液经液体发酵获得。本发明中，所述液体发酵的培养基选自PSA、PDA、DOX(+)和DOX(-)中的一种，优选为PDA培养基和PSA培养基中的一种，更优选为PSA培养基。本发明中，所述液体发酵的温度优选为25-37℃，更优选为30℃；所述液体发酵的时间优选为12-72h，更优选为60h。

本发明还提供了一种利用黑曲霉浸出铀金属的方法，所述方法具体包括如下步骤：

将上述的发酵液与铀矿混合浸出，经震荡离心得浸出液和矿渣，分别检测浸出液和矿渣中的铀浓度。

本发明中，所述发酵液的pH值优选为1.81-2.11，更优选为1.18-1.86或2.00-2.11。本发明中，所述铀矿与发酵液的质量体积比优选为1：3-1：5，更优选为1：4。本发明中，所述浸出的温度优选为20-30℃，更优选为25℃。

本发明中，两种基于土豆基质的培养基PDA和PSA培养基均是选用新鲜土豆为原料制备的。在本发明的具体实施例中以同一批次的新鲜土豆为基质制备得到培养基，从而避免了同一试验内各样品间的差异对实验结果的影响。

为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

1、菌株的获得

选择PSA、PDA、DOX(-)或DOX(+)四种发酵培养基富集新疆十红滩铀矿床的铀矿层地下水中的霉菌，在30℃下，120rpm恒温振荡培养，当肉眼可见菌丝球时，划线接种进行分离纯化。

2、分离纯化

地下水样品接种到PDA或DOX(-)液体培养基中，30℃下振荡培养72h后出现圆润的菌丝球，且发酵液pH值下降；划线接种发酵液到相应的固体培养基上，菌落出现后继续培养，至菌落表面出现孢子；用湿润棉签沾取孢子并溶于质量分数为10％甘油中，充分分散后，取孢子悬液划线接种到固体培养基，多次孢子接种后得到纯化菌落如附图2所示，命名为738Y-15MJ。

3、形态鉴定

738Y-15MJ在DOX(-)固体培养基上的菌落如附图2a所示，呈圆形，绒毛状，表面突起；菌丝松散呈白色，生长后期出现孢子呈黑褐色。738Y-15MJ在PDA固体培养基上的菌落如附图2b所示，呈圆形，绒毛状，质地比DOX(-)上的菌落更厚更致密，相同发酵时间内已出现菌落沟纹，孢子呈黑褐色。

菌丝在显微镜下放大200倍的形态如附图3所示，菌丝有隔膜，有分枝，直径为5-7μm，壁厚且光滑。

分生孢子和孢子在显微镜下放大400倍的形态如附图4所示，分生孢子头为球形，裂开后呈放射状；分生孢子梗壁光滑，直径为20-30μm；孢子呈球形，直径为2.5-4μm。

依据《真菌鉴定手册》和《中国真菌志》，可初步鉴定738Y-15MJ为曲霉属Aspergillus niger。

实施例2

培养基种类和温度对黑曲霉生长的影响

在0.5‰孢子悬液接种量条件下，取200mLPSA培养基，接种100μL孢子悬液，分别置于25℃、30℃和37℃振荡培养箱中，200rpm振荡培养，每个温度条件设置18个培养组，分别于12h、24h、36h、48h、60h和72h取出3个培养组，采用定量滤纸过滤收集菌体，105℃烘干恒重至连续两次重量差小于0.2mg，绘制738Y-15MJ在不同培养基和温度下的生长曲线如附图5所示。采用同样的方法绘制得到PDA、DOX(+)和DOX(-)培养基生长曲线分别如附图6、附图7、附图8所示。

由附图5-8可以看出，本发明所述菌株738Y-15MJ在不同发酵培养基和不同温度条件下的生长曲线趋势不同。PSA土豆蔗糖发酵培养基中孢子萌发最早，30℃和37℃下60h菌体干重达到峰值，分别为7.26g·L^-1和6.61g·L^-1。PDA土豆葡萄糖发酵培养基中，30℃下72h菌体仍处于生长期，菌体干重为7.50g·L^-1；37℃下60h菌体干重达到峰值为7.47g·L^-1，随后菌丝球解体，菌体部分降解。DOX(+)含酵母提取物发酵培养基中，30℃和37℃下菌体干重达到峰值，分别为7.86g·L^-1和7.80g·L^-1。DOX(-)不含酵母提取物的发酵培养基中，30℃和37℃下60h菌体干重达到峰值，分别为1.00g·L^-1和1.42g·L^-1。采用SPSS20.0软件分析培养基种类对黑曲霉生长的影响，结果表明PSA、PDA和DOX(+)、DOX(-)之间存在显著差异(P<0.05)。

实施例3

菌株738Y-15MJ的液体发酵

分别在PSA、PDA和DOX(-)发酵培养基中，接种0.5‰孢子悬液，200rpm振荡发酵，分别在25℃、30℃和37℃发酵培养，监测发酵液pH，其中，PSA、PDA和DOX(-)发酵培养基初始pH值分别为5.89、5.83和5.20，监测结果如附图9-11所示。

由附图9可以看出，发酵产酸导致pH值下降，PSA中37℃下发酵48h，pH值为1.93，随后稳定在1.91-2.03之间；30℃下发酵60h，pH值为1.66，随后上升为1.72；25℃下发酵72h，pH值为1.63，仍有下降趋势，此时菌丝球仍光滑。

由附图10可以看出，不同温度条件下，PDA发酵产酸趋势与PSA发酵相近，37℃下发酵60h趋于稳定，pH值为1.88-1.91；25-30℃下发酵72h，pH值分别为1.75和1.71，此时30℃发酵的菌丝球出现少量解体。

由附图11可以看出，DOX(-)发酵pH下降的趋势受温度影响较小，37℃下发酵48hpH值为2.84，随后上升，这与菌丝球部分解体有关；25-30℃下发酵产酸72h，pH分别为2.55和2.35，仍有下降趋势，但菌丝球已部分解体。

上述结果表明，本发明所述菌株738Y-15MJ在37℃下不同的培养基中均表现为菌丝球生长较快，而产酸受到明显抑制。PSA和PDA两种发酵培养基产酸效率较高，60h内发酵液pH值可达到2.0左右。采用压滤的方法收集25℃下的发酵液，在pH值相近的情况下，1L的PDA培养体系可回收0.86L发酵液，1L的PSA培养体系可回收0.91L发酵液。

实施例4

PSA和PDA发酵液有机酸分析

将738Y-15MJ按照0.5‰孢子悬液接种到PSA和PDA发酵培养基中，25℃下，200rpm振荡，控制发酵时间为12h、24h、36h、48h、60h、72h，获得不同pH的发酵液。使用安捷伦Agilent 1260型高效液相色谱仪分析低分子量有机酸的种类和含量，得到表2和表3。

其中，色谱条件选择亲水的Zorbax SB-Aq柱，采用全水相的磷酸钠缓冲液(20mmol·L^-1，pH 2.0)为流动相，流速为1.0mL·min^-1，柱温为30℃，紫外检测波长为210nm，进样量为20μL。

表2 PSA发酵液中低分子量有机酸HPLC检测结果(mmol·L^-1)

表3 PDA发酵液中低分子量有机酸HPLC检测结果(mmol·L^-1)

表2和表3中，“-”表示低于检出限。

由表2可知，738Y-15MJ利用PSA发酵代谢产生的低分子量有机酸以草酸为主，发酵液pH由3.36下降至1.66，可检测低分子量有机酸总浓度由20.96mmol·L^-1升高至60.82mmol·L^-1。发酵液pH为3.36时草酸浓度为2.62mmol·L^-1，发酵液pH下降至1.66时草酸浓度达到39.36mmol·L^-1。发酵代谢产生的低分子量有机酸主要还有L-苹果酸和柠檬酸，L-苹果酸浓度为1.95-4.44mmol·L^-1，柠檬酸浓度为1.84-3.19mmol·L^-1。除以上三种有机酸外，发酵液中还检测到低浓度的a-酮戊二酸(浓度0.35-0.43mmol·L^-1)和富马酸(浓度0.05-0.19mmol·L^-1)，但浓度均接近检出限，存在未检出的情况。发酵液pH较高为3.36和较低为1.66的样品，存在L-乳酸(浓度3.35-5.89mmol·L^-1)和琥珀酸(浓度7.65-8.75mmol·L^-1)的累积。PSA发酵液中未检测到乙酸、葡萄糖酸等。

由表3可知，738Y-15MJ利用PDA发酵代谢产生的低分子量有机酸也是以草酸为主，发酵液pH为1.68、1.75和2.20时，可检测低分子量有机酸的总浓度分别为64.53、52.62和25.55mmol·L^-1。

实施例5

检测发酵液pH值与总有机酸浓度的相关性，将738Y-15MJ按照0.5‰孢子悬液接种到PSA和PDA发酵培养基中，25℃下，200rpm振荡，发酵过程中检测不同时段发酵液的pH值和草酸、柠檬酸、L-苹果酸、a-酮戊二酸、富马酸、L-乳酸、琥珀酸的含量并加和获得已检出低分子量有机酸的总浓度，得到附图12。

由附图12可以看出，与PSA发酵液相同，高pH值时除草酸外还检测到L-苹果酸和柠檬酸，随pH下降检测到琥珀酸、a-酮戊二酸和L-乳酸。PDA发酵液中存在少量富马酸，未检测到乙酸、葡萄糖酸等。

PSA和PDA发酵液有机酸种类和含量差异不显著。与PSA发酵液相比，相近pH条件下，PDA发酵液中草酸、a-酮戊二酸、琥珀酸和富马酸浓度略高，而柠檬酸和L-苹果酸的浓度略低。

上述结果表明，738Y-15MJ利用PSA和PDA发酵产生草酸、L-苹果酸、柠檬酸，还有少量的富马酸，随发酵液pH下降，有机酸种类增多，出现a-酮戊二酸、琥珀酸和L-乳酸。738Y-15MJ发酵产酸总浓度和发酵液pH下降速率优于广东某铀矿分离的一株黑曲霉(参见“有机酸的配比和铀浸出率关系研究”，王永东，2013)和应用于氧化镍矿浸出的一株黑曲霉(参见“有真菌衍生有机酸浸出低品位氧化镍矿”，刘学，2006)。

实施例6

单回次铀浸出方法：

取pH值分别为1.86(DXW-1.86)和2.03(DXW-2.03)的发酵液300.0mL与60.0g铀矿MIX33BZ(由新疆中核天山铀业有限公司送样)混合，25℃，200rpm振荡浸出铀矿。分别于0，1，2，4，8，16，24，36，48h进行取样，取混合样品5.0mL，8000rpm离心得浸出液和固体。将浸出液进行化学分析得附图13-15。

由附图13可知，pH值2.03的发酵液与铀矿混合后，浸出1h铀浓度为171.92mg·L^-1，24h至48h铀浓度趋于稳定，为139.38-140.30mg·L^-1。pH为1.86的发酵液铀浓度高于pH值为2.03的发酵液。发酵液溶浸铀矿的过程中，铀浓度升高迅速，1h已达到最高浓度，表明发酵液溶浸铀矿可行，且铀浸出平衡较快，浸出液铀浓度在4-12h内已基本稳定。两种pH条件的发酵液浸铀差异不明显。

由附图14-15可以看出，pH值分别为1.86和2.03的发酵液与铀矿混合后，4h内pH值迅速上升，24h后缓慢升高，分别为5.22-5.88和5.36-5.93。发酵液Eh起始值分别为361mV和375mV，2h内迅速下降，表明浸铀体系氧化还原反应剧烈，24h后相对稳定，分别在291mV-269mV和289mV-308mV。经SPSS软件统计分析，两种pH条件的发酵液浸出pH和Eh变化不存在显著差异(P>0.05)，浸出后期铀浓度下降与pH值缓慢升高正相关(P<0.05)。两种发酵液浸出铀矿的酸碱平衡和氧化还原平衡速率相近。

固体用5.0mL发酵液冲洗倒回溶浸体系，8000rpm离心5min，得矿渣，矿渣用无菌水洗2-3次后80℃干燥24h至恒重，在干燥器中冷却至室温后称重，送矿渣到湖南省核工业地质局地质矿产分析测试研究中心进行化学全分析得表4。

表4发酵液浸出矿渣铀浸出率结果

以上结果表明，DXW-1.86铀浸出率更高，pH值在1.86的发酵液溶浸铀优于pH值1.94-2.03的发酵液。

实施例7

多回次铀浸出

取pH值分别为1.81-1.86(DXW-pH-1.8)和2.00-2.11(DXW-pH-2.0)的溶浸剂与铀矿MIX33BZ混合，25℃200rpm振荡浸出铀矿，振荡浸出时间为4h。其中，溶浸剂为738Y-15MJ在PSA中的发酵液，溶浸剂与铀矿的体积质量比为5：1。浸出结束后，8000rpm离心5min，分离固液两相，液相(即浸出液)用于化学分析，固相再次混入300mL溶浸剂，如此重复。取液相进行化学分析得到附图16-17，其中U浸出率通过浸出液铀浓度和浸出液体积计算出浸出的铀含量，然后和原矿的铀品位比较计算得到，计算公式如下：

由附图16-17可知，DXW-pH-1.8经过5个回次的浸出，浸出液铀浓度从184.09mg·L^-1降为1.71mg·L^-1。DXW-pH-2.0经过9个回次的浸出，浸出液铀浓度从153.51mg·L^-1降低为1.27mg·L^-1。分别经过5个和9个回次，DXW-pH-1.8和DXW-pH-2.0的渣计浸出率为98.25％和98.81％。

以上结果表明，以草酸为主要成分的发酵液多回次连续浸出铀浓度变化趋势与0.01mol·L^-1纯草酸溶液的浸铀趋势相近。DXW-pH-1.8和DXW-pH-2.0试验组多回次铀浓度的差异具有显著性(P<0.05)。DXW-pH-1.8和DXW-pH-2.0试验组浸铀速率具有显著差异，pH值为1.8的发酵液多回次浸铀速率更快。

取上述最后一回次浸出后所得矿渣用无菌水洗2-3次，矿渣80℃干燥24h至恒重，在干燥器中冷却至室温后称重，送矿渣到湖南省核工业地质局地质矿产分析测试研究中心进行化学全分析得到表5。

表5发酵液多回次浸出矿渣铀浸出率结果

其中，“-”表示未检出。

由表5可以看出，DXW-pH-1.8和DXW-pH-2.0两种发酵液的铀浸出率分别为98.25％和98.81％，矿渣残留总铀量为22.0μg·g^-1和15.0μg·g^-1，其中残留U(IV)均未检出。经过5个和9个回次浸出，两种发酵液的铀浸出率均接近100.00％，铀矿浸出较彻底。

由以上实施例可以看出，本发明提供的黑曲霉菌株738Y-15MJ，可经PSA、PDA、DOX(-)和DOX(+)培养基发酵培养得到发酵液，所述发酵液中含有草酸、L-苹果酸、柠檬酸等多种有机酸，能够用于铀金属矿石的浸出。经铀浸出实验表明，本发明所述黑曲霉菌株738Y-15MJ发酵液的浸铀效果好，铀浸出率达到98.81％，能够显著提高铀浸出率，有利于提高铀矿资源利用率，促进了微生物浸矿的工业化进程。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等效结构或等效流程变换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

序列表

<110> 东华理工大学

<120> 一种黑曲霉菌株738Y-15MJ及其应用

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

agtagtcata tgcttgtctc 20

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

aacctgcgga aggatcatta 20

<210> 3

<211> 1175

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

aactcatgtc tagtataagc actttatact gtgaaactgc gaatggctca tttaaatcag 60

ttatcgttta tttgatagta ccttactaca tggatacctg tggtaattct agagctaata 120

catgctgaaa acctcgactt cggaaggggt gtatttatta gataaaaaac caatgccctt 180

cggggctcct tggtgaatca taataactta acgaatcgca tggccttgcg ccggcgatgg 240

ttcattcaaa tttctgccct atcaactttc gatggtagga tagtggccta ccatggtggc 300

aacgggtaac ggggaattag ggttcgattc cggagaggga gcctgagaaa cggctaccac 360

atccaaggaa ggcagcaggc gcgcaaatta cccaatcccg acacggggag gtagtgacaa 420

taaatactga tacggggctc ttttgggtct cgtaattgga atgagtacaa tctaaatccc 480

ttaacgagga acaattggag ggcaagtctg gtgccagcag ccgcggtaat tccagctcca 540

atagcgtata ttaaagttgt tgcagttaaa aagctcgtag ttgaaccttg ggtctggctg 600

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Claims (8)

1.一种黑曲霉(Aspergillus niger)菌株738Y-15MJ，其特征在于，所述菌株738Y-15MJ的保藏编号为CGMCC NO.21466。

2.权利要求1所述黑曲霉菌株738Y-15MJ的孢子悬液，其特征在于，所述孢子悬液由所述黑曲霉菌株738Y-15MJ经PSA、PDA、DOX或DOX+酵母提取物任一培养基培养获得。

3.权利要求1所述黑曲霉菌株738Y-15MJ的发酵液。

4.根据权利要求3所述的发酵液，其特征在于，所述发酵液由权利要求2所述的孢子悬液经液体发酵获得。

5.根据权利要求4所述的发酵液，其特征在于，所述液体发酵的培养基为PDA培养基或PSA培养基，所述液体发酵的温度为25-37℃，时间为12-72h。

6.一种利用黑曲霉浸出铀金属的方法，其特征在于，所述方法具体包括如下步骤：

将权利要求3-5任一所述的发酵液与铀矿混合浸出，经震荡离心得浸出液和矿渣，分别检测浸出液和矿渣中的铀浓度。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述发酵液的pH值为1.81-2.11。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述铀矿与发酵液的质量体积比为1：3-1：5。

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