CN116818947A - 一种枣柏安神颗粒的质量控制方法 - Google Patents
一种枣柏安神颗粒的质量控制方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明提供了一种枣柏安神颗粒的质量控制方法,包括:建立枣柏安神颗粒斯皮诺素的含量测定方法:A)将枣柏安神颗粒采用溶剂提取,得到待测液;B)取斯皮诺素标准品,采用溶剂溶解,得到参照物对照品溶液;C)采用高效液相色谱法,在相同检测条件下分别获得步骤A)中待测液和步骤B)中参照物对照品的色谱图,D)根据所述参照物浓度、所述参照物对照品溶液在色谱图中的峰面积以及枣柏安神颗粒中与所述参照物对照品溶液相对应的成分在色谱图中的峰面积,且基于步骤C)中的检测条件,以外标法计算枣柏安神颗粒中化学成分的含量。本发明所建立的主要成分斯皮诺素的含量测定方法精密度、稳定性及重复性均良好。
Description
技术领域
本发明涉及药物分析技术领域,尤其是涉及一种枣柏安神颗粒的质量控制方法。
背景技术
枣柏安神颗粒处方由炒酸枣仁、丹参、柏子仁、首乌藤、醋五味子、黄连、珍珠粉、合欢花、贯叶金丝桃九味中药组成,其中炒酸枣仁为君药,丹参、柏子仁、首乌藤、醋五味子为臣药,黄连、珍珠粉为佐药,合欢花、贯叶金丝桃为使药。诸药合用具有养血安魂,清热除烦之功效。枣柏安神颗粒处方以汤剂形式应用于临床多年,疗效确切,具有较高的开发应用价值。但目前对于枣柏安神颗粒的制备工艺及质量研究方法尚无研究报道。
因此,建立其质量标准全面评价该制剂质量是非常必要的。
发明内容
有鉴于此,本发明要解决的技术问题在于提供一种枣柏安神颗粒的质量控制方法,本发明提供的质量控制方法可以全面的控制产品的质量,方法稳定性、精密度和重复性良好。
本文术语“包括”、“包含”和“具有”之间可互换使用,旨在表示方案的包含性,意味着所述方案可存在除所列出的元素之外的其他元素。同时应当理解,在本文中使用“包括”、“包含”和“具有”描述,也提供“由……组成”方案。
本申请中,术语“和/或”,描述关联对象的关联关系,表示可以存在三种关系,例如,A和/或B,可以表示:单独存在A,同时存在A和B,单独存在B的情况。其中A,B可以是单数或者复数。
本申请中,“至少一个”是指一个或者多个,“多个”是指两个或两个以上。“以下至少一项(个)”或其类似表达,是指的这些项中的任意组合,包括单项(个)或复数项(个)的任意组合。
应理解,在本申请的各种实施例中,下述各过程的序号的大小并不意味着执行顺序的先后,部分或全部步骤可以并行执行或先后执行,各过程的执行顺序应以其功能和内在逻辑确定,而不应对本申请实施例的实施过程构成任何限定。
本发明提供了一种枣柏安神颗粒的质量控制方法,包括:建立枣柏安神颗粒斯皮诺素的含量测定方法:
A)将枣柏安神颗粒采用溶剂提取,得到待测液;
B)取斯皮诺素标准品,采用溶剂溶解,得到参照物对照品溶液;
C)采用高效液相色谱法,在相同检测条件下分别获得步骤A)中待测液和步骤B)中参照物对照品的色谱图,具体色谱参数如下:
色谱柱为C18色谱柱,检测波长335nm;流动相为甲醇-0.1%磷酸;
洗脱程序为:
0~5min,A相20%~30%、B相80%~70%;
5~30min A相30%~40%、B相70%~60%;
30~35min A相40%~100%、B相60%~0%;
35~40min A相100%、B相0%;
40~45min A相100%~20%、B相0%~80%;
D)根据所述参照物浓度、所述参照物对照品溶液在色谱图中的峰面积以及枣柏安神颗粒中与所述参照物对照品溶液相对应的成分在色谱图中的峰面积,且基于步骤C)中的检测条件,以外标法计算枣柏安神颗粒中化学成分的含量。
本发明提供的枣柏安神颗粒的质量控制方法包括建立枣柏安神颗粒斯皮诺素的含量测定方法;
还包括如下测定方法中的任意一种或多种:
i)HPLC测定枣柏安神颗粒中盐酸小檗碱含量;
ii)采用薄层色谱鉴别枣柏安神颗粒中炒酸枣仁;
iii)采用薄层色谱鉴别黄连;
iv)采用薄层色谱鉴别丹参;
v)采用薄层色谱鉴别醋五味子;
vi)采用薄层色谱鉴别首乌藤。
本发明从药材、制剂的一系列薄层色谱鉴别中,发现均有对应的特征斑点,为制剂中的特征成分溯源到药材提供了依据,通过含量测定证实了药材、制剂之间具有一定的相关性。
本发明所建立的两个主要成分斯皮诺素和盐酸小檗碱的含量测定方法精密度、稳定性及重复性均良好。
本发明所建立的五味药材的薄层鉴别方法耐用性均良好。
本发明可保证临床用药的安全、有效和稳定,也为枣柏安神颗粒制剂后续的制备工艺研究、质量标准建立及稳定性考察提供了详实可靠的研究基础。
一方面,本发明枣柏安神颗粒斯皮诺素的含量测定方法:
首先将枣柏安神颗粒采用溶剂提取,得到待测液。
在本发明其中一部分优选实施方式中,所述溶剂为70%甲醇。
本发明人发现,70%甲醇提取率最高,甲醇提取的杂质太多导致斯皮诺素主峰与其他峰包裹,致使其含量偏高,故选择70%甲醇作为提取溶剂。
在本发明其中一部分优选实施方式中,所述提取为超声提取;所述超声提取的时间为10~20min。
按照本发明,所述枣柏安神颗粒的质量g和溶剂的体积mL的比例为1:15~45;更优选为1:25。
取斯皮诺素标准品,采用溶剂溶解,得到参照物对照品溶液。
本发明所述斯皮诺素在0.01362~0.2180mg/mL范围内线性良好。
采用高效液相色谱法,在相同检测条件下分别获得步骤A)中待测液和步骤B)中参照物对照品的色谱图,具体色谱参数如下:
在本发明其中一部分优选实施方式中,所述流动相流速为1ml/min,色谱柱温度为25℃,进样量为10μL;
在本发明其中一部分优选实施方式中,色谱柱为C18色谱柱;
在本发明其中一部分优选实施方式中,Phenomenex C18色谱柱中的色谱图较其他色谱图指标成分具有良好的分离效果,故以此作为色谱柱。
本发明检测波长335nm;经前期实验研究,斯皮诺素的最大吸收波长为335nm,在该波长条件下,斯皮诺素响应较高且响应稳定,故选择的检测波长为335nm。
本发明流动相为甲醇-0.1%磷酸;
在本发明其中一部分优选实施方式中,洗脱程序为:
0~5min,A相20%~30%、B相80%~70%;
5~30min A相30%~40%、B相70%~60%;
30~35min A相40%~100%、B相60%~0%;
35~40min A相100%、B相0%;
40~45min A相100%~20%、B相0%~80%;
根据所述参照物浓度、所述参照物对照品溶液在色谱图中的峰面积以及枣柏安神颗粒中与所述参照物对照品溶液相对应的成分在色谱图中的峰面积,且基于步骤C)中的检测条件,以外标法计算枣柏安神颗粒中化学成分的含量。
一方面,所述HPLC测定枣柏安神颗粒中盐酸小檗碱含量具体为:
a)将枣柏安神颗粒采用溶剂提取,得到待测液;
b)取盐酸小檗碱标准品,采用溶剂溶解,得到参照物对照品溶液;
c)采用高效液相色谱法,在相同检测条件下分别获得步骤a)中待测液和步骤b)中参照物对照品的色谱图,并根据参照物的色谱图对待测液的成分进行定性和定量分析;
具体色谱参数如下:
色谱柱为C18色谱柱,检测波长345nm;流动相为:乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(50:50),每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g,再以磷酸调节pH值为4.0;等度洗脱,流动相流速1.0ml/min;色谱柱温度为30℃,进样量为10μL。
本发明提供的HPLC测定枣柏安神颗粒中盐酸小檗碱含量首先将枣柏安神颗粒采用溶剂提取,得到待测液。
按照本发明,所述步骤a)具体为:
枣柏安神颗粒采用甲醇和盐酸的混合溶液超声提取,所述超声提取的时间为10~30min;更优选为20min;
本发明人发现,超声提取效率较高,为方便操作,故选择超声法作为提取方法。
在本发明其中一部分优选实施方式中,所述甲醇和盐酸的体积比为100:1;
本发明人发现,甲醇-盐酸(100:1,V/V)溶液作为提取剂时提取率较高,故选此作为提取溶剂。
按照本发明,所述枣柏安神颗粒的质量g和溶剂的体积mL的比例为0.1:25~100;更优选为0.1:50。
取盐酸小檗碱标准品,采用溶剂溶解,得到参照物对照品溶液;
所述盐酸小檗碱在0.005377~0.2151mg/mL范围内线性良好。
采用高效液相色谱法,在相同检测条件下分别获得步骤a)中待测液和步骤b)中参照物对照品的色谱图,并根据参照物的色谱图对待测液的成分进行定性和定量分析;
具体色谱参数如下:
在本发明其中一部分优选实施方式中,色谱柱为C18色谱柱,检测波长345nm;
盐酸小檗碱的最大吸收波长为345nm,在该波长条件下,盐酸小檗碱响应较高且响应稳定,故选择的检测波长为345nm。
在本发明其中一部分优选实施方式中,流动相为:乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(50:50),每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g,再以磷酸调节pH值为4.0;等度洗脱,流动相流速1.0ml/min;
本发明发现,流动相洗脱条件3中的色谱图较其他色谱图指标成分具有良好的分离效果,故以此作为洗脱条件。
在本发明其中一部分优选实施方式中,色谱柱温度为30℃,进样量为10μL。
一方面,所述采用薄层色谱鉴别枣柏安神颗粒中炒酸枣仁具体为:
a)将枣柏安神颗粒、炒酸枣仁阴性供试品和酸枣仁对照药材采用溶剂提取,分别得到供试品溶液、炒酸枣仁阴性供试品和酸枣仁对照药材溶液;
将酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品,加甲醇溶解,得到酸枣仁皂苷A对照品溶液和酸枣仁皂苷B对照品溶液;
b)将供试品溶液、炒酸枣仁阴性供试品、酸枣仁对照药材溶液、酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品溶液进行薄层色谱检测,薄层板为硅胶G薄层板;展开剂为正丁醇-冰醋酸-水,所述正丁醇-冰醋酸-水的体积比为4:1:5;
c)检视:如供试品与酸枣仁对照药材和酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品在Rf值相等处有相同颜色的斑点,酸枣仁阴性供试品无斑点,则为炒酸枣仁。
本发明提供的采用薄层色谱鉴别枣柏安神颗粒中炒酸枣仁将枣柏安神颗粒、炒酸枣仁阴性供试品和酸枣仁对照药材采用溶剂提取,分别得到供试品溶液、炒酸枣仁阴性供试品和酸枣仁对照药材溶液。
上述提取具体为:枣柏安神颗粒加乙醚加热回流提取1h,挥干后加入甲醇,加热回流提取30min,过滤,加水溶解,用水饱和正丁醇振摇提取2~3次,合并正丁醇液,用氨试液洗涤2次,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇使溶解,作为供试品溶液;
在本发明其中一部分优选实施方式中,枣柏安神颗粒、乙醚、甲醇、水的质量体积比为:5g:30mL:30mL:20mL。
取炒酸枣仁阴性处方,同法处理得到炒酸枣仁阴性供试品;
另取酸枣仁对照药材,同法制成对照药材溶液;
再取酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品,加甲醇制成每lml各含lmg的混合溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验,展开剂为正丁醇-冰醋酸-水(4:1:5)10℃以下放置的上层溶液,吸取上述溶液各5~10μl,点于硅胶G板上,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,热风吹至斑点显色清晰,立即检视;
如供试品与酸枣仁对照药材和酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品在Rf值相等处有相同颜色的斑点,酸枣仁阴性供试品无斑点,则质量合格。
一方面,所述采用薄层色谱鉴别黄连具体为:
a)将枣柏安神颗粒、黄连阴性供试品和黄连对照药材采用溶剂提取,分别得到供试品溶液、黄连阴性供试品和黄连对照药材溶液;
将盐酸小檗碱对照品,加甲醇溶解,得到盐酸小檗碱对照品溶液;
b)将供试品溶液、黄连阴性供试品、黄连对照药材溶液、盐酸小檗碱对照品溶液进行薄层色谱检测,薄层板为硅胶G薄层板;展开剂为环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺,所述环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺的体积比为3:3.5:1:1.5:0.5:1;
c)检视:如供试品与黄连对照药材、盐酸小檗碱对照品在Rf值相等处有相同颜色的荧光斑点,黄连阴性供试品无斑点,则为黄连;
所述检视为紫外光灯下进行;所述紫外光灯的波长为365nm;点样量为1μL。
本发明首先将枣柏安神颗粒采用溶剂提取,得到供试品溶液。
上述提取具体为:枣柏安神颗粒加甲醇提取,超声处理20~30min;
其中枣柏安神颗粒和甲醇的质量体积比为0.5g:10mL。
取黄连阴性处方,同法处理得到黄连阴性供试品;
另取黄连对照药材,同法制成对照药材溶液;
再取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;
照薄层色谱法试验,展开剂为环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺(3:3.5:1:1.5:0.5:1)10℃以下放置的上层溶液,吸取上述溶液各1μl,点于硅胶G板上,置用浓氨试液预饱和20分钟的展开缸内,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视;
如供试品在与黄连对照药材色谱和盐酸小檗碱对照品色谱在Rf值相等处有相同颜色的荧光斑点,黄连阴性供试品无斑点,则质量合格。
一方面,所述采用薄层色谱鉴别丹参具体为:
a)将枣柏安神颗粒、丹参阴性供试品和丹参对照药材采用溶剂提取,分别得到供试品溶液、丹参阴性供试品和丹参对照药材溶液;
将丹参酮ⅡA对照品,加乙酸乙酯溶解,得到丹参酮ⅡA对照品溶液;
b)将供试品溶液、丹参阴性供试品和丹参对照药材溶液和丹参酮ⅡA对照品溶液进行薄层色谱检测,薄层板为硅胶G薄层板;展开剂为甲苯-乙酸乙酯,所述甲苯-乙酸乙酯的体积比为19:1;
c)检视:如供试品与丹参对照药材、丹参酮ⅡA在Rf值相等处有相同颜色的斑点,丹参阴性供试品无斑点,则为丹参;
所述检视为日光下检视;点样量为4~10μL。
本发明提供的采用薄层色谱鉴别丹参首先将枣柏安神颗粒采用溶剂提取得到供试品溶液;
取本品枣柏安神颗粒,加乙酸乙酯,超声处理20分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯使溶解,作为供试品溶液。
本发明枣柏安神颗粒和乙酸乙酯的质量体积比为1g:25mL。
取丹参阴性处方,同法处理得到丹参阴性供试品;另取丹参对照药材1g,同法制成对照药材溶液;再取丹参酮ⅡA对照品,加乙酸乙酯制成每lml含lmg的溶液,作为对照品溶液;
照薄层色谱法试验,展开剂为甲苯-乙酸乙酯(19:1),吸取上述丹参酮ⅡA对照品溶液、丹参对照药材溶液各4μl,供试品溶液5~10μl,点于硅胶G板上,展开,取出,晾干,置日光下检视;
如供试品在与丹参对照药材色谱和丹参酮ⅡA对照品色谱在Rf值相等处有相同颜色的斑点,丹参阴性供试品无斑点,则质量合格;
一方面,所述采用薄层色谱鉴别醋五味子具体为:
a)将枣柏安神颗粒、醋五味子阴性供试品和五味子对照药材采用溶剂提取,分别得到供试品溶液、醋五味子阴性供试品和五味子对照药材溶液;
将五味子甲素对照品,加石油醚溶解,得到五味子甲素对照品溶液;
b)将供试品溶液、醋五味子阴性供试品和醋五味子对照药材溶液和五味子甲素对照品溶液进行薄层色谱检测,薄层板为硅胶GF254薄层板;展开剂为石油醚-甲酸乙酯-甲酸,所述石油醚-甲酸乙酯-甲酸的体积比为15:5:1;
c)检视:如供试品与五味子对照药材、五味子甲素在Rf值相等处有相同颜色的斑点,醋五味子阴性供试品无斑点,则为醋五味子;
所述检视为紫外光灯下进行;所述紫外光灯的波长为254nm;点样量为5μL。
取枣柏安神颗粒,研细,加石油醚超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加石油醚/>使溶解,作为供试品溶液;
其中,枣柏安神颗粒、石油醚的质量体积比为4g:25mL。
取醋五味子阴性处方,同法处理得到醋五味子阴性供试品;
另取五味子对照药材,同法制成对照药材溶液;
再取五味子甲素对照品,加石油醚制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
照薄层色谱法试验,展开剂为石油醚-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)10℃以下放置的上层溶液,吸取上述溶液各5μl,点于硅胶GF254板上,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视;
如供试品与五味子对照药材色谱和对照品色谱在Rf值相等处有相同颜色的斑点,醋五味子阴性供试品无斑点,则质量合格。
一方面,所述采用薄层色谱鉴别首乌藤具体为:
a)将枣柏安神颗粒、首乌藤阴性供试品和首乌藤对照药材采用溶剂提取,分别得到供试品溶液、首乌藤阴性供试品和首乌藤对照药材溶液;
将大黄素对照品,加甲醇溶解,得到大黄素对照品溶液;
b)将供试品溶液、首乌藤阴性供试品和首乌藤对照药材溶液和大黄素对照品溶液进行薄层色谱检测,薄层板为硅胶G薄层板;展开剂为石油醚-甲酸乙酯-甲酸,所述石油醚-甲酸乙酯-甲酸的体积比为15:5:1;
c)检视:如供试品与首乌藤对照药材、大黄素在Rf值相等处有相同颜色的荧光斑点,首乌藤阴性供试品无斑点,则为首乌藤;
所述检视为紫外光灯下进行;所述紫外光灯的波长为365nm;点样量为5μL。
取枣柏安神颗粒2g,加乙醚30ml与盐酸2ml,超声处理30分钟,过滤,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;
其中,枣柏安神颗粒、乙醚、盐酸的质量体积比为2g:30mL:2mL。
取首乌藤阴性处方,同法处理得到首乌藤阴性供试品;
另取首乌藤对照药材,同法制成对照药材溶液;
再取大黄素对照品,加甲醇制成每lml含0.1mg的溶液,作为对照品溶液;
照薄层色谱法试验,展开剂为石油醚(60~90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)10℃以下放置的上层溶液,吸取上述溶液各5μl,点于硅胶G板上,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视;
如供试品与首乌藤对照药材色谱和对照品色谱在Rf值相等处有相同颜色的荧光斑点,首乌藤阴性供试品无斑点,则质量合格;
从药材、制剂的一系列薄层色谱鉴别中,发现均有对应的特征斑点,为制剂中的特征成分溯源到药材提供了依据,通过含量测定证实了药材、制剂之间具有一定的相关性。
本发明所建立的五味药材的薄层鉴别方法耐用性均良好。
本发明提供了一种枣柏安神颗粒的质量控制方法,包括:建立枣柏安神颗粒斯皮诺素的含量测定方法:A)将枣柏安神颗粒采用溶剂提取,得到待测液;B)取斯皮诺素标准品,采用溶剂溶解,得到参照物对照品溶液;C)采用高效液相色谱法,在相同检测条件下分别获得步骤A)中待测液和步骤B)中参照物对照品的色谱图,D)根据所述参照物浓度、所述参照物对照品溶液在色谱图中的峰面积以及枣柏安神颗粒中与所述参照物对照品溶液相对应的成分在色谱图中的峰面积,且基于步骤C)中的检测条件,以外标法计算枣柏安神颗粒中化学成分的含量。本发明所建立的两个主要成分斯皮诺素和盐酸小檗碱的含量测定方法精密度、稳定性及重复性均良好。本发明可保证临床用药的安全、有效和稳定,也为枣柏安神颗粒制剂后续的制备工艺研究、质量标准建立及稳定性考察提供了详实可靠的研究基础。
附图说明
图1.枣柏安神颗粒中炒酸枣仁的TLC图;
图2.枣柏安神颗粒中黄连的TLC图;
图3.枣柏安神颗粒中丹参的TLC图;
图4.枣柏安神颗粒中醋五味子的TLC图;
图5.枣柏安神颗粒中首乌藤的TLC图;
图6.A-B依次对应为斯皮诺素洗脱条件筛选的HPLC图(乙腈体系);
图7.A-C依次对应为斯皮诺素洗脱条件筛选的HPLC图;
图8.A-D依次对应为斯皮诺素不同厂家色谱柱筛选的HPLC图;
图9.斯皮诺素线性关系图;
图10.A-C依次对应为盐酸小檗碱洗脱条件筛选的HPLC图;
图11.盐酸小檗碱线性关系图。
具体实施方式
本发明提供了一种枣柏安神颗粒的质量控制方法,本领域技术人员可以借鉴本文内容,适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是,所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的,它们都属于本发明保护的范围。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述,相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合,来实现和应用本发明技术。
为了进一步说明本发明,以下结合实施例对本发明提供的一种枣柏安神颗粒的质量控制方法进行详细描述。
实施例1
1.枣柏安神颗粒的质量标准研究
1.1枣柏安神颗粒的定性研究
1.1.1枣柏安神颗粒的薄层色谱研究
(1)炒酸枣仁的薄层鉴别
取本品5g,研细,加乙醚30ml,加热回流1小时,滤过,滤渣挥干溶剂,加甲醇30ml,加热回流30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加水20ml使溶解,用水饱和正丁醇振摇提取3次,每次25ml,合并正丁醇液,用氨试液洗涤2次,每次20ml,弃去氨液,正丁醇液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液;取炒酸枣仁阴性处方,同法处理得到炒酸枣仁阴性供试品;另取酸枣仁对照药材1g,同法制成对照药材溶液。再取酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品,加甲醇制成每lml各含lmg的混合溶液,作为对照品溶液。
照薄层色谱法试验,展开剂为正丁醇-冰醋酸-水(4:1:5)10℃以下放置的上层溶液,吸取上述溶液各5~10μl,点于硅胶G板上,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸溶液,热风吹至斑点显色清晰,立即检视。
3批供试品与酸枣仁对照药材和酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品在Rf值相等处有相同颜色的斑点,炒酸枣仁阴性供试品无斑点。结果见图1(1.酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B混合对照品,2.酸枣仁对照药材,3.酸枣仁阴性供试品,4.1~3批制剂供试品)。
(2)黄连的薄层鉴别
取本品0.5g,研细,加甲醇10ml,超声处理30分钟,滤过,取滤液作为供试品溶液;取黄连阴性处方,同法处理得到黄连阴性供试品;另取黄连对照药材0.25g,同法制成对照药材溶液;再取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每lml含0.5mg的溶液,作为对照品溶液;
照薄层色谱法试验,展开剂为环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺(3:3.5:1:1.5:0.5:1)10℃以下放置的上层溶液,吸取上述溶液各1μl,点于硅胶G板上,置用浓氨试液预饱和20分钟的展开缸内,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视;
3批供试品在与黄连对照药材色谱和盐酸小檗碱对照品色谱在Rf值相等处有相同颜色的荧光斑点,黄连阴性供试品无斑点。结果见图2(1.盐酸小檗碱对照品,2.黄连对照药材,3.黄连阴性供试品,4.1~3批制剂供试品)。
(3)丹参的薄层鉴别
取本品lg,研细,加乙酸乙酯25ml,超声处理20分钟,滤过,滤液挥干,残渣加乙酸乙酯lml使溶解,作为供试品溶液;取丹参阴性处方,同法处理得到丹参阴性供试品;另取丹参对照药材1g,同法制成对照药材溶液;再取丹参酮ⅡA对照品,加乙酸乙酯制成每lml含lmg的溶液,作为对照品溶液;
照薄层色谱法试验,展开剂为甲苯-乙酸乙酯(19:1),吸取上述丹参酮ⅡA对照品溶液、丹参对照药材溶液各4μl,供试品溶液5~10μl,点于硅胶G板上,展开,取出,晾干,置日光下检视;
3批供试品在与丹参对照药材色谱和丹参酮ⅡA对照品色谱在Rf值相等处有相同颜色的斑点,丹参阴性供试品无斑点。结果见图3(1.丹参酮ⅡA对照品2.丹参对照药材,3.丹参阴性供试品,4.1~3批制剂供试品)。
(4)醋五味子的薄层鉴别
取本品4g,研细,加石油醚(60~90℃)25ml,超声处理20分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加石油醚(60~90℃)0.5ml使溶解,作为供试品溶液;取醋五味子阴性处方,同法处理得到醋五味子阴性供试品;另取五味子对照药材1g,同法制成对照药材溶液;再取五味子甲素对照品,加石油醚(60~90℃)制成每1ml含1mg的溶液,作为对照品溶液;
照薄层色谱法试验,展开剂为石油醚(60~90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)10℃以下放置的上层溶液,吸取上述溶液各5μl,点于硅胶GF254板上,展开,取出,晾干,置紫外光灯(254nm)下检视;
3批供试品在与五味子对照药材色谱和五味子甲素对照品色谱在Rf值相等处有相同颜色的斑点,醋五味子阴性供试品无斑点。结果见图4(1.五味子甲素对照品,2.五味子对照药材,3.五味子阴性供试品,4.1~3批制剂供试品)。
(5)首乌藤薄层鉴别
取本品2g,研细,加乙醚30ml与盐酸2ml,超声处理30分钟,过滤,滤液挥干,残渣加甲醇1ml使溶解,作为供试品溶液;取首乌藤阴性处方,同法处理得到首乌藤阴性供试品;另取首乌藤对照药材0.25g,同法制成对照药材溶液;再取大黄素对照品,加甲醇制成每lml含0.1mg的溶液,作为对照品溶液;
照薄层色谱法试验,展开剂为石油醚(60~90℃)-甲酸乙酯-甲酸(15:5:1)10℃以下放置的上层溶液,吸取上述溶液各5μl,点于硅胶G板上,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视;
3批供试品在与首乌藤对照药材色谱和大黄素对照品色谱在Rf值相等处有相同颜色的荧光斑点,首乌藤阴性供试品无斑点。结果见图5(1.大黄素对照品,2.首乌藤对照药材,3.首乌藤阴性供试品,4.1~3批制剂供试品)。
1.2枣柏安神颗粒的定量研究
1.2.1指标成分定量方法学考察
(1)斯皮诺素的含量测定
①色谱条件的优选
a.检测波长的选择
经前期实验研究,斯皮诺素的最大吸收波长为335nm,在该波长条件下,斯皮诺素响应较高且响应稳定,故选择的检测波长为335nm。
b.流动相洗脱条件的考察
Agilent C18色谱柱(250mm×4.6mm),检测波长为335nm,乙腈(A)-水(B)、乙腈(A)-0.1%磷酸(B)作为流动相,分别按表1~2中的比例洗脱,比较色谱图,见图6,(图上A~B依次对应为洗脱条件)。实验结果表明,以乙腈为洗脱条件,供试品色谱图中斯皮诺素主峰与其他杂质峰的分离效果较差,故考虑更换为甲醇体系洗脱。
表1.流动相洗脱条件1
表2.流动相洗脱条件2
c.流动相洗脱梯度的考察
Agilent C18色谱柱(250mm×4.6mm),检测波长为335nm,甲醇(A)-0.1%磷酸(B)作为流动相,分别按表3~5中的比例洗脱,比较色谱图,见图7,(图上A~C依次对应为洗脱条件)。实验结果表明,流动相洗脱条件5中的色谱图较其他色谱图指标成分具有良好的分离效果,故以此作为梯度洗脱的条件。
表3.流动相洗脱条件3
表4.流动相洗脱条件4
表5.流动相洗脱条件5
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b.不同厂家色谱柱的选择
Agilent、Waters、依利特、Phenomenex C18色谱柱(250mm×4.6mm),检测波长为335nm,甲醇(A)-0.1%磷酸(B)作为流动相,按表5中的比例洗脱,考察不同厂家色谱柱对色谱图的影响,见图8,(图上A~D依次对应为不同厂家色谱柱)。实验结果表明,Waters厂家色谱柱斯皮诺素主峰与杂峰包裹,Agilent及依利特厂家色谱柱斯皮诺素主峰易受前后杂峰的干扰,而Phenomenex C18色谱柱中的色谱图较其他色谱图指标成分具有良好的分离效果,故以此作为色谱柱。
c.液相条件的确定
Phenomenex C18色谱柱(250mm×4.6mm),检测波长为335nm,甲醇(A)-0.1%磷酸(B)作为流动相,按表5中的比例洗脱;流速为1mL/min;柱温为25℃;进样量为10μL。
②专属性考察
称取枣柏安神颗粒,按供试品处理项下得供试品;称取炒酸枣仁阴性处方,同法制得炒酸枣仁阴性供试品;吸取上述各供试品及斯皮诺素对照品溶液各10μL,采用HPLC进样分析。结果表明,酸枣仁阴性无干扰。
③线性关系考察
取斯皮诺素对照品,加甲醇稀释,得到浓度为0.8720mg/mL的斯皮诺素溶液,以此为母液,用甲醇分别制备浓度为0.01362,0.02725,0.05450,0.1090,0.2180mg/mL的标准品溶液。吸取上述五种浓度的对照品溶液10μL,注入HPLC进样系统,以斯皮诺素浓度-峰面积为坐标轴,绘制标准曲线Y=24454.8312X+14.7494,r=1.0000,斯皮诺素在0.01362~0.2180mg/mL范围内线性良好,结果见表6、图9。
表6.斯皮诺素线性实验
③供试品前处理方法的考察
a.提取方法的考察
取本品,研细,取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,平行2份,精密加入70%甲醇25ml,称定重量,分别超声处理30分钟、加热回流30分钟,取出,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。采用HPLC进样分析,测定斯皮诺素含量,结果见表7。结果表明,2种提取方法提取效果相当,为方便操作,故选择超声法作为提取方法。
表7.斯皮诺素提取方法考察结果(n=2)
b.提取溶剂的选择
取本品,研细,取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,平行7份,分别精密加入甲醇、70%甲醇、50%甲醇、乙醇、70%乙醇、50%乙醇、纯水25ml,称定重量,超声处理30分钟,取出,放冷,再称定重量,用相应溶剂补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。采用HPLC进样分析,测定斯皮诺素含量,结果见表8。结果表明,70%甲醇提取率最高,甲醇提取的杂质太多导致斯皮诺素主峰与其他峰包裹,致使其含量偏高,故选择70%甲醇作为提取溶剂。
表8.斯皮诺素提取溶剂考察结果(n=7)
c.提取时间的考察
取本品,研细,取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,平行4份,精密加入70%甲醇25ml,称定重量,分别超声处理10分钟、20分钟、30分钟、40分钟,取出,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。采用HPLC进样分析,测定斯皮诺素含量,结果见表9。结果表明,不同提取时间下提取效果相当,为节约时间同时确保成分被提取完全,故超声时间选择较为适中的20分钟。
表9.斯皮诺素提取时间考察结果(n=4)
d.提取溶剂用量的考察
取本品,研细,取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,平行4份,分别精密加入70%甲醇15ml、25ml、35ml、45ml,称定重量,超声处理20分钟,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。采用HPLC进样分析,测定斯皮诺素含量,结果见表10。结果表明,不同提取体积下提取效果相当,为节约溶剂同时确保成分被提取完全,故提取体积选择25ml。
表10.斯皮诺素提取溶剂用量考察结果(n=4)
④供试品的处理
取本品,研细,取约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入70%甲醇25ml,称定重量,超声处理20分钟,取出,放冷,再称定重量,用70%甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得斯皮诺素供试品。
⑤精密度实验
分别精密吸取低、中、高浓度的对照品溶液各10μL,按确立的HPLC分析方法测定,连续进样6次,结果见表11。结果表明,仪器精密度良好。
表11.斯皮诺素精密度实验结果(n=6)
⑥重复性实验
取本品,按供试品处理方法制备供试品,平行6份,按确立的HPLC分析方法测定,结果见12。结果表明,该方法重复性良好,枣柏安神颗粒所含斯皮诺素含量为1.05mg/g。
表12.斯皮诺素重复性实验结果(n=6)
⑦稳定性实验
按供试品处理方法制备供试品,取同一供试品溶液,分别于室温下放置0、2、4、8、12、24h,进行HPLC分析测定,结果见表13。结果表明,该样品在24h内有良好的稳定性。
表13.斯皮诺素稳定性实验结果
⑧加样回收率实验
取已知含量的枣柏安神颗粒,共9份,分别加入相当于供试品中斯皮诺素成分含量的50%、100%、150%的对照品,按供试品处理方法制得供试品,平行处理3份,进行HPLC分析测定,结果见表14。结果表明,该方法测定斯皮诺素的含量回收率高,准确性好。
表14.斯皮诺素加样回收率实验结果(n=9)
⑨耐用性实验
通过将色谱条件的柱温、流速、色谱柱等进行微小变动,测定结果不受影响的承受程度,结果见表15。结果表明,该方法测定条件要求苛刻,对流速、柱温、色谱柱等参数的耐受范围较窄,为保证方法的稳定性,故需要固定色谱参数。
表15.斯皮诺素耐用性实验结果
注:“/”表示分离度不符合要求,数据不参与计算。
(2)盐酸小檗碱的含量测定
①色谱条件的优选
a.检测波长的选择
经前期实验研究,盐酸小檗碱的最大吸收波长为345nm,在该波长条件下,盐酸小檗碱响应较高且响应稳定,故选择的检测波长为345nm。
b.流动相洗脱条件的考察
汉邦Lichrospher C18色谱柱(250mm×4.6mm),检测波长为345nm,以乙腈-0.033mol/L磷酸二氢钾溶液(30:70,V/V)(以磷酸调节pH值为3-4)(条件1)、以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(30:70,V/V)(每100ml加十二烷基硫酸钠0.4g,再用磷酸调节pH为4)(条件2)、乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(50:50,V/V)(每100ml加十二烷基硫酸钠0.4g,再用磷酸调节pH为4)(条件3)作为流动相,等度洗脱,比较色谱图,见图10,(图上A~C依次对应为洗脱条件)。实验结果表明,条件1、条件2中盐酸小檗碱主峰与前杂分离度较差,而流动相洗脱条件3中的色谱图较其他色谱图指标成分具有良好的分离效果,故以此作为洗脱条件。
c.液相条件的确定
汉邦Lichrospher C18色谱柱(250mm×4.6mm),检测波长为345nm,乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(50:50,V/V)(每100ml加十二烷基硫酸钠0.4g,再用磷酸调节pH为4)作为流动相;流速为1mL/min;柱温为30℃;进样量为10μL。
②专属性考察
称取枣柏安神颗粒,按供试品处理项下得供试品;称取黄连阴性处方,同法制得黄连阴性供试品;吸取上述各供试品及盐酸小檗碱对照品溶液各10μL,采用HPLC进样分析。结果表明,黄连阴性无干扰。
③线性关系考察
取盐酸小檗碱对照品,加甲醇稀释,分别制备浓度为0.005377,0.01075,0.02689,0.05377,0.1075,0.2151mg/mL的标准品溶液。吸取上述六种浓度的对照品溶液10μL,注入HPLC进样系统,以盐酸小檗碱浓度-峰面积为坐标轴,绘制标准曲线Y=44547.9213X-3.8220,r=1.0000,盐酸小檗碱在0.005377~0.2151mg/mL范围内线性良好,结果见表16、图11。
表16盐酸小檗碱线性实验
③供试品前处理方法的考察
a.提取方法的考察
取本品,研细,取约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,平行2份,精密加入甲醇-盐酸(100:1,V/V)溶液50ml,称定重量,分别超声处理和加热回流处理30分钟,取出,放冷,再称定重量,用甲醇-盐酸(100:1,V/V)溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。采用HPLC进样分析,测定盐酸小檗碱含量,结果见表17。结果表明,超声提取效率较高,为方便操作,故选择超声法作为提取方法。
表17.盐酸小檗碱提取方法考察结果(n=2)
b.提取溶剂的选择
取本品,研细,取约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,平行8份,分别精密加入甲醇、乙醇、50%甲醇、50%乙醇、甲醇-盐酸(100:1,V/V)溶液、乙醇-盐酸(100:1,V/V)溶液、50%甲醇-盐酸(100:1,V/V)溶液、50%乙醇-盐酸(100:1,V/V)溶液50ml,称定重量,超声处理30分钟,取出,放冷,再称定重量,用相应试剂补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。采用HPLC进样分析,测定盐酸小檗碱含量,结果见表18。结果表明,甲醇-盐酸(100:1,V/V)溶液作为提取剂时提取率较高,故选此作为提取溶剂。
表18.盐酸小檗碱提取溶剂考察结果(n=8)
c.提取时间的考察
取本品,研细,取约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,平行4份,精密加入甲醇-盐酸(100:1,V/V)溶液50ml,称定重量,分别超声处理10分钟、20分钟、30分钟、40分钟,取出,放冷,再称定重量,用甲醇-盐酸(100:1,V/V)溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。采用HPLC进样分析,测定盐酸小檗碱含量,结果见表19。结果表明,不同提取时间下提取效果相当,为节约时间同时确保成分被提取完全,故超声时间选择20分钟。
表19.盐酸小檗碱提取时间考察结果(n=4)
d.提取溶剂用量的考察
取本品,研细,取约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,平行4份,分别精密加入甲醇-盐酸(100:1,V/V)溶液25ml、50ml、75ml、100ml,称定重量,超声处理20分钟,取出,放冷,再称定重量,用甲醇-盐酸(100:1,V/V)溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。采用HPLC进样分析,测定盐酸小檗碱含量,结果见表20。结果表明,当提取溶剂为50ml的时候,样品中盐酸小檗碱已经提取完全,故提取体积选择50ml。
表20.盐酸小檗碱提取溶剂用量考察结果(n=4)
④供试品的处理
取本品,研细,取约0.1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-盐酸(100:1,V/V)溶液50ml,称定重量,超声处理20分钟,放冷,再称定重量,用甲醇-盐酸(100:1,V/V)溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,取续滤液,即得。
⑤精密度实验
分别精密吸取低、中、高浓度的对照品溶液各10μL,按确立的HPLC分析方法测定,连续进样6次,结果见表21。结果表明,仪器精密度良好。
表21.盐酸小檗碱精密度实验结果(n=6)
⑥重复性实验
取本品,按供试品处理方法制备供试品,平行6份,按确立的HPLC分析方法测定,结果见22。结果表明,该方法重复性良好,枣柏安神颗粒所含盐酸小檗碱含量为22.88mg/g。
表22.盐酸小檗碱重复性实验结果(n=6)
⑦稳定性实验
按供试品处理方法制备供试品,取同一供试品溶液,分别于室温下放置0、2、4、8、12、24h,进行HPLC分析测定,结果见表23。结果表明,该样品在24h内有良好的稳定性。
表23.盐酸小檗碱稳定性实验结果
⑧加样回收率实验
取已知含量的枣柏安神颗粒,共9份,分别加入相当于供试品中盐酸小檗碱成分含量的50%、100%、150%的对照品,按供试品处理方法制得供试品,平行处理3份,进行HPLC分析测定,结果见表24。结果表明,该方法测定盐酸小檗碱的含量回收率高,准确性好。
表24.盐酸小檗碱加样回收率实验结果(n=9)
⑨耐用性实验
通过将色谱条件的柱温、流速、色谱柱等进行微小变动,测定结果不受影响的承受程度,结果见表25。结果表明,该方法测定条件耐用性良好。
表25.盐酸小檗碱耐用性实验结果
综上,本发明确定了枣柏安神颗粒定性和定量的质量评价方法,可用于该方的全面质量控制。
需要说明的是,本发明在长期大量的实验研究中,进行了大量关于色谱条件的研究实验,但不能在此一一赘述,以上仅以典型的实验作为说明。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种枣柏安神颗粒的质量控制方法,其特征在于,包括:建立枣柏安神颗粒斯皮诺素的含量测定方法:
A)将枣柏安神颗粒采用溶剂提取,得到待测液;
B)取斯皮诺素标准品,采用溶剂溶解,得到参照物对照品溶液;
C)采用高效液相色谱法,在相同检测条件下分别获得步骤A)中待测液和步骤B)中参照物对照品的色谱图,具体色谱参数如下:
色谱柱为C18色谱柱,检测波长335nm;流动相为甲醇-0.1%磷酸;
洗脱程序为:
0~5min, A相 20%~30%、 B相 80%~70%;
5~30min A相 30%~40%、 B相 70%~60%;
30~35min A相 40%~100%、 B相 60%~0%;
35~40min A相 100%、 B相 0%;
40~45min A相 100%~20%、 B相 0%~80%;
D)根据所述参照物浓度、所述参照物对照品溶液在色谱图中的峰面积以及枣柏安神颗粒中与所述参照物对照品溶液相对应的成分在色谱图中的峰面积,且基于步骤C)中的检测条件,以外标法计算枣柏安神颗粒中化学成分的含量。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述流动相流速为1ml/min,色谱柱温度为25℃,进样量为10μL;步骤A)所述溶剂为70%甲醇,所述提取为超声提取;所述超声提取的时间为10~20min;
所述斯皮诺素在0.01362~0.2180mg/mL范围内线性良好。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述质量控制方法还包括如下测定方法中的任意一种或多种:
i)HPLC测定枣柏安神颗粒中盐酸小檗碱含量;
ii)采用薄层色谱鉴别枣柏安神颗粒中炒酸枣仁;
iii)采用薄层色谱鉴别黄连;
iv)采用薄层色谱鉴别丹参;
v)采用薄层色谱鉴别醋五味子;
vi)采用薄层色谱鉴别首乌藤。
4.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述HPLC测定枣柏安神颗粒中盐酸小檗碱含量具体为:
a)将枣柏安神颗粒采用溶剂提取,得到待测液;
b)取盐酸小檗碱标准品,采用溶剂溶解,得到参照物对照品溶液;
c)采用高效液相色谱法,在相同检测条件下分别获得步骤a)中待测液和步骤b)中参照物对照品的色谱图,并根据参照物的色谱图对待测液的成分进行定性和定量分析;
具体色谱参数如下:
色谱柱为C18色谱柱,检测波长345nm;流动相为:乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾溶液(50:50),每100ml中加十二烷基硫酸钠0.4g,再以磷酸调节pH值为4.0;等度洗脱,流动相流速1.0ml/min;色谱柱温度为30℃,进样量为10μL。
5.根据权利要求4所述的方法,其特征在于,所述步骤a)具体为:
枣柏安神颗粒采用甲醇和盐酸的混合溶液超声提取,所述超声提取的时间为10~30min;
所述盐酸小檗碱在0.005377~0.2151mg/mL范围内线性良好。
6.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述采用薄层色谱鉴别枣柏安神颗粒中炒酸枣仁具体为:
a)将枣柏安神颗粒、炒酸枣仁阴性供试品和酸枣仁对照药材采用溶剂提取,分别得到供试品溶液、炒酸枣仁阴性供试品和酸枣仁对照药材溶液;
将酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品,加甲醇溶解,得到酸枣仁皂苷A对照品溶液和酸枣仁皂苷B对照品溶液;
b)将供试品溶液、炒酸枣仁阴性供试品、酸枣仁对照药材溶液、酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品溶液进行薄层色谱检测,薄层板为硅胶G薄层板;展开剂为正丁醇-冰醋酸-水,所述正丁醇-冰醋酸-水的体积比为4:1:5;
c)检视:如供试品与酸枣仁对照药材和酸枣仁皂苷A对照品、酸枣仁皂苷B对照品在Rf值相等处有相同颜色的斑点,酸枣仁阴性供试品无斑点,则为炒酸枣仁。
7.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述采用薄层色谱鉴别黄连具体为:
a)将枣柏安神颗粒、黄连阴性供试品和黄连对照药材采用溶剂提取,分别得到供试品溶液、黄连阴性供试品和黄连对照药材溶液;
将盐酸小檗碱对照品,加甲醇溶解,得到盐酸小檗碱对照品溶液;
b)将供试品溶液、黄连阴性供试品、黄连对照药材溶液、盐酸小檗碱对照品溶液进行薄层色谱检测,薄层板为硅胶G薄层板;展开剂为环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺,所述环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺的体积比为3:3.5:1:1.5:0.5:1;
c)检视:如供试品与黄连对照药材、盐酸小檗碱对照品在Rf值相等处有相同颜色的荧光斑点,黄连阴性供试品无斑点,则为黄连;
所述检视为紫外光灯下进行;所述紫外光灯的波长为365nm;点样量为1μL。
8.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述采用薄层色谱鉴别丹参具体为:
a)将枣柏安神颗粒、丹参阴性供试品和丹参对照药材采用溶剂提取,分别得到供试品溶液、丹参阴性供试品和丹参对照药材溶液;
将丹参酮ⅡA对照品,加乙酸乙酯溶解,得到丹参酮ⅡA对照品溶液;
b)将供试品溶液、丹参阴性供试品和丹参对照药材溶液和丹参酮ⅡA对照品溶液进行薄层色谱检测,薄层板为硅胶G薄层板;展开剂为甲苯-乙酸乙酯,所述甲苯-乙酸乙酯的体积比为19:1;
c)检视:如供试品与丹参对照药材、丹参酮ⅡA在Rf值相等处有相同颜色的斑点,丹参阴性供试品无斑点,则为丹参;
所述检视为日光下检视;点样量为4~10μL。
9.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述采用薄层色谱鉴别醋五味子具体为:
a)将枣柏安神颗粒、醋五味子阴性供试品和五味子对照药材采用溶剂提取,分别得到供试品溶液、醋五味子阴性供试品和五味子对照药材溶液;
将五味子甲素对照品,加石油醚溶解,得到五味子甲素对照品溶液;
b)将供试品溶液、醋五味子阴性供试品和醋五味子对照药材溶液和五味子甲素对照品溶液进行薄层色谱检测,薄层板为硅胶GF254薄层板;展开剂为石油醚-甲酸乙酯-甲酸,所述石油醚-甲酸乙酯-甲酸的体积比为15:5:1;
c)检视:如供试品与五味子对照药材、五味子甲素在Rf值相等处有相同颜色的斑点,醋五味子阴性供试品无斑点,则为醋五味子;
所述检视为紫外光灯下进行;所述紫外光灯的波长为254nm;点样量为5μL。
10.根据权利要求3所述的方法,其特征在于,所述采用薄层色谱鉴别首乌藤具体为:
a)将枣柏安神颗粒、首乌藤阴性供试品和首乌藤对照药材采用溶剂提取,分别得到供试品溶液、首乌藤阴性供试品和首乌藤对照药材溶液;
将大黄素对照品,加甲醇溶解,得到大黄素对照品溶液;
b)将供试品溶液、首乌藤阴性供试品和首乌藤对照药材溶液和大黄素对照品溶液进行薄层色谱检测,薄层板为硅胶G薄层板;展开剂为石油醚-甲酸乙酯-甲酸(10℃以下放置的上层溶液),所述石油醚-甲酸乙酯-甲酸的体积比为15:5:1;
c)检视:如供试品与首乌藤对照药材、大黄素在Rf值相等处有相同颜色的荧光斑点,首乌藤阴性供试品无斑点,则为首乌藤;
所述检视为紫外光灯下进行;所述紫外光灯的波长为365nm;点样量为5μL。
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