CN116804214A - 一种生物酶法合成5’-胞苷酸的方法 - Google Patents
一种生物酶法合成5’-胞苷酸的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116804214A CN116804214A CN202310972989.1A CN202310972989A CN116804214A CN 116804214 A CN116804214 A CN 116804214A CN 202310972989 A CN202310972989 A CN 202310972989A CN 116804214 A CN116804214 A CN 116804214A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cytidine
- synthesizing
- acid
- biological enzyme
- reaction
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 46
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 21
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 21
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 title claims abstract description 16
- IERHLVCPSMICTF-XVFCMESISA-N cytidine 5'-monophosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O1 IERHLVCPSMICTF-XVFCMESISA-N 0.000 title description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 40
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims abstract description 27
- UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 1-beta-D-Xylofuranosyl-NH-Cytosine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N Cytidine Natural products O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-PSQAKQOGSA-N 0.000 claims abstract description 20
- UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N cytidine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-ZAKLUEHWSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 102000007410 Uridine kinase Human genes 0.000 claims abstract description 13
- 101710168490 Uridine-cytidine kinase Proteins 0.000 claims abstract description 13
- 108020000161 polyphosphate kinase Proteins 0.000 claims abstract description 13
- -1 acetyl potassium phosphate Chemical compound 0.000 claims abstract description 9
- 239000002994 raw material Substances 0.000 claims abstract description 7
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 claims abstract description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 9
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 6
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 claims description 4
- PSDHRHUVDFEMBQ-UHFFFAOYSA-L dipotassium;acetyl phosphate Chemical compound [K+].[K+].CC(=O)OP([O-])([O-])=O PSDHRHUVDFEMBQ-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims description 3
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N Adenosine triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N 0.000 claims description 2
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 claims description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims 1
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 2
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J ATP(4-) Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-J 0.000 abstract 1
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 6
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 6
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 6
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 6
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 235000013350 formula milk Nutrition 0.000 description 4
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 108010093096 Immobilized Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 2
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 2
- BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N isopropyl beta-D-thiogalactopyranoside Chemical compound CC(C)S[C@@H]1O[C@H](CO)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O BPHPUYQFMNQIOC-NXRLNHOXSA-N 0.000 description 2
- WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L magnesium sulfate heptahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.O.[Mg+2].[O-]S([O-])(=O)=O WRUGWIBCXHJTDG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229940061634 magnesium sulfate heptahydrate Drugs 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 2
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-M CDP-choline(1-) Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)O[C@H]1N1C(=O)N=C(N)C=C1 RZZPDXZPRHQOCG-OJAKKHQRSA-M 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- PCDQPRRSZKQHHS-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Triphosphate Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 PCDQPRRSZKQHHS-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 229920000388 Polyphosphate Polymers 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 238000010364 biochemical engineering Methods 0.000 description 1
- 238000005842 biochemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 238000007036 catalytic synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 229960001284 citicoline Drugs 0.000 description 1
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000008176 lyophilized powder Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000000865 phosphorylative effect Effects 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 239000001205 polyphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011176 polyphosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- DJJCXFVJDGTHFX-XVFCMESISA-L uridine 5'-monophosphate(2-) Chemical compound O1[C@H](COP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1N1C(=O)NC(=O)C=C1 DJJCXFVJDGTHFX-XVFCMESISA-L 0.000 description 1
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种生物酶法合成5’‑胞苷酸的方法，属于生物医药技术领域。以胞苷和乙酰磷酸钾盐为原料，在尿苷‑胞苷激酶和多聚磷酸激酶共同催化作用下发生反应生成5’‑胞苷酸。与其它工艺相比，该方法利用乙酰磷酸钾盐作为腺苷三磷酸合成的原料，合成步骤短效率高，且成本低廉、易操作适合工业化，转化率达到87.6％，产物浓度达到112.5g/L，具有明显市场竞争力。
Description
技术领域
本发明涉及生物化工领域，具体涉及一种5’-胞苷酸的酶催化合成工艺。
背景技术
5’-胞苷酸(简称胞苷酸)，分子式为C9H12N3O8P，分子量321.1817，英文名5’-Cytidylate Monophosphate，CAS登记号63-37-6，是生物细胞内重要生化物质，参与多种生理生化反应。工业上，5’-胞苷酸用作于生产核苷酸类药物的原料、中间体以及食品添加剂等，如用于合成胞苷三磷酸、阿糖胞苷酸、聚肌胞苷酸、胞磷胆碱以及与其他核苷酸混合后作为保健品和食品添加剂，亦可加于婴儿奶粉中，能显著提高婴幼儿的免疫力。
5’-胞苷酸目前主要有两种生产方式：一种是生物合成法，另一种是化学合成法。
生物合成法利用核酸水解酶水解核糖核酸，经过分离得到5’-胞苷酸，参考：华洵璐等，核酸水解酶及酶解法生产核苷酸研究进展，辽宁大学学报，2012，39(2)，110-117)。生物合成法得到四种5’-核苷酸，即5’-腺苷酸、5’-鸟苷酸、5’-胞苷酸和5’-尿苷酸混合物，除了5’-胞苷酸以外，其它三种均为副产物，在工业生产中分离操作复杂且收率低。
化学合成法通过磷酸化胞苷从而得到胞苷酸，参考：CN 1086219A。化学合成法生产过程中的三废较多、企业环保压力较大，腐蚀设备且不利于人员身体健康及工业化生产，存在一定的安全隐患。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明提供了一种生物酶法合成5’-胞苷酸的方法。该方法以胞苷、乙酰磷酸钾盐为原料，在尿苷-胞苷激酶和多聚磷酸盐激酶共同催化下反应得到5’-胞苷酸。该工艺所需原料来源广泛，价格便宜，反应步骤简单，产量高且反应过程温和。
本发明所述一种生物酶法合成5’-胞苷酸的方法，包括如下步骤：以胞苷、乙酰磷酸钾盐和ATP为原料，采用尿苷-胞苷激酶和多聚磷酸盐激酶共同作用下进行生物转化，得到5’-胞苷酸。
采用反应方程式表示为：
进一步地，在上述技术方案中，所述反应温度为25-35℃，反应采用pH＝6.0-8.0条件下进行。
进一步地，在上述技术方案中，所述反应在Mg2+存在条件下进行。
进一步地，在上述技术方案中，所述胞苷浓度为300-500mM，所述乙酰磷酸钾盐浓度为600-1000mM，所述ATP的浓度为15-25mM。
进一步地，在上述技术方案中，所述乙酰磷酸钾盐为液体型试剂。
进一步地，在上述技术方案中，所述尿苷-胞苷激酶的序列为序列表中，SEQ IDNO.1所示的核苷酸序列。
进一步地，在上述技术方案中，所述多聚磷酸激酶的序列为序列表中，SEQ IDNO.2所示的核苷酸序列。
进一步地，在上述技术方案中，所述尿苷-胞苷激酶和多聚磷酸盐激酶形式包括但不局限于酶液、酶冻干粉、含酶细胞以及各种固定化酶和固定化酶细胞。例如也可以是未经纯化的粗酶形式、经部分纯化或完全纯化的形式。
本发明有益效果
本发明采用生物酶法合成胞苷酸的方法，与目前现有的以多聚磷酸盐作为磷酸供体的技术不同，本发明以价格更为低廉的乙酰磷酸钾盐为磷酸供体，极大的降低了生产成本。
A、本发明生物酶法合成胞苷酸的方法，反应步骤简单，对环境更为友好。
B、本发明生物酶法合成胞苷酸的方法，所需酶的用量极少便可使反应的转化率达到88％。
C、本发明生物酶法合成胞苷酸的方法，产品5’-胞苷酸的浓度可达到115g/L。
说明书附图
图1为实施例3中反应温度优化图；
图2为实施例4中pH值优化图；
图3为实施例5中反应液液相色谱检测图。
具体实施方式
实施例1尿苷-胞苷激酶的发酵培养，具体如下：
发酵培养基配方：葡萄糖30g/L，七水硫酸镁0.3g/L，磷酸二氢钾3g/L，磷酸氢二钠4.8g/L，氯化铵1g/L，酵母膏20g/L，蛋白胨15g/L。
将尿苷-胞苷激酶菌株的单菌落接种到LB液体培养基，在35℃下震荡培养10-12h，以5％接种量转接至LB培养基中，在35℃下震荡培养至OD600值达到0.6时，接种至发酵培养基。发酵培养至OD600值达到16时加入IPTG诱导培养8h，然后离心得尿苷-胞苷激酶菌体细胞235g。
实施例2多聚磷酸激酶的发酵培养，具体如下：
发酵培养基配方：葡萄糖30g/L，七水硫酸镁0.3g/L，磷酸二氢钾3g/L，磷酸氢二钠4.8g/L，氯化铵1g/L，酵母膏20g/L，蛋白胨15g/L。
将多聚磷酸激酶菌株的单菌落接种到LB液体培养基，在35℃下震荡培养10-12h，以5％接种量转接至LB培养基中，在35℃下震荡培养至OD600值达到0.6时，接种到发酵罐。发酵培养至OD600值达到16时加入IPTG(0.12g/L)诱导培养8h，然后离心得多聚磷酸激酶菌体细胞255g。
实施例3温度优化反应，具体如下：
反应体系及反应条件：反应体系包括410mM胞苷，450mM乙酰磷酸钾盐溶液，10mMATP，27mM Mg2+，20g/L尿苷-胞苷激酶，20g/L多聚磷酸盐激酶，加适量纯化水，采用NaOH调pH＝7.0-7.2，之后纯化水定容至30mL，分别在10℃，20℃，30℃，40℃，50℃水浴锅中反应7h，反应过程中取样进行高效液相色谱HPLC检测，监控反应进程。根据高效液相色谱结果分析，30℃为最佳反应条件，显著高于其它温度水平，如图1结果所示。在30℃反应温度下，反应进行至7h时，产物胞苷酸生成量达到67.5g/L。
实施例4pH优化反应，具体如下：
反应体系及反应条件：反应体系包括410mM胞苷，450mM乙酰磷酸钾盐溶液，10mMATP，27mM Mg2+，20g/L尿苷-胞苷激酶，20g/L多聚磷酸盐激酶，加适量纯化水，采用NaOH调pH＝5.0，6.0，7.0，8.0，9.0，之后纯化水定容至30mL，分别在30℃水浴锅中反应7h，反应过程中取样进行高效液相色谱HPLC检测，监控反应进程。根据高效液相色谱结果分析，反应初始pH＝6.0-8.0范围内反应效果均可，如图2结果所示，反应进行至7h时，产物胞苷酸的生成量达到72.7g/L。
实施例5酶法合成5’-胞苷酸的方法
反应体系及反应条件：反应体系包括410mM胞苷，10mM ATP，27mM Mg2+，尿苷-胞苷激酶和多聚磷酸盐激酶分别以40g/L和30g/L，810mM乙酰磷酸钾盐溶液进行反应，加适量纯化水，用NaOH调pH＝7.2，之后用纯化水定容至2L，分别在30℃水浴锅中反应9h，反应过程中取样进行高效液相色谱HPLC检测，监控反应进程。根据高效液相色谱结果分析，如图3结果所示，反应进行至8h时，产物胞苷酸的转化率达到87.6％，产物浓度达到112.5g/L。
以上实施例描述了本发明的基本原理、主要特征及优点。本行业技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书的描述只是用来解释本发明的原理，在不脱离本发明原理的范围下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进均落入本发明保护的范围内。
序列表
SEQ ID NO.1
ATGACTGATCAGTCTCATCAGTGCGTCATTATCGGTATCGCTGGCGCATCGGCTTCCGGCAAGAGTCTTATTGCCAGTACCCTTTATCGTGAATTGCGTGAGCAAGTCGGTGATGAACACATCGGCGTAATTCCCGAAGACTGCTATTACAAAGATCAAAGCCATCTGTCGATGGAAGAACGCGTTAAGACCAACTACGACCATCCCAGCGCGATGGATCACAGTCTGCTGCTTGAGCATTTACAAGCGTTGAAACGCGGCTCGGCAATTGACCTGCCGGTTTACAGCTATGTTGAACATACGCGTATGAAAGAAACGGTGACGGTTGAGCCGAAGAAGGTCATCATTCTCGAAGGCATTTTGTTGCTGACGGATGCGCGTTTGCGTGACGAACTTAACTTCTCCATTTTCGTTGATACCCCGCTGGATATCTGCCTGATGCGCCGCATCAAGCGTGACGTTAACGAGCGTGGGCGTTCAATGGATTCAGTGATGGCGCAATATCAAAAAACCGTGCGCCCGATGTTCCTGCAATTCATTGAGCCTTCTAAACAATATGCGGACATTATCGTGCCGCGCGGCGGGAAAAACCGCATCGCGATCGATATATTGAAAGCGAAAATAAGTCAGTTCTTTGAATAA
SEQ ID NO.2
ATGGGTCAGGAAAAGCTATACATCGAAAAAGAGCTCAGTTGGTTATCGTTCAATGAACGCGTGCTTCAGGAAGCGGCGGACAAATCTAACCCGCTGATTGAAAGGATGCGTTTCCTGGGGATCTATTCCAATAACCTTGATGAGTTCTATAAAGTCCGCTTCGCTGAACTGAAGCGACGCATCATTATTAGCGAAGAACAAGGCTCCAACTCTCATTCCCGCCATTTACTGGGCAAAATTCAGTCCCGGGTGCTGAAAGCCGATCAGGAATTCGACGGCCTCTACAACGAGCTATTGCTGGAGATGGCGCGCAACCAGATCTTCCTGATTAATGAACGCCAGCTCTCCGTCAATCAACAAAACTGGCTGCGTCATTATTTTAAGCAGTATCTGCGTCAGCACATTACGCCGATTTTAATCAATCCTGACACTGACTTAGTGCAGTTCCTGAAAGATGATTACACCTATCTGGCGGTGGAAATTATCCGTGGCGATACCATCCGTTACGCGCTGCTGGAGATCCCATCAGATAAAGTGCCGCGCTTTGTGAATTTACCGCCAGAAGCGCCGCGTCGACGCAAGCCGATGATTCTTCTGGATAACATTCTGCGTTACTGCCTTGATGATATTTTCAAAGGCTTCTTTGATTATGACGCGCTGAATGCCTATTCAATGAAGATGACCCGCGATGCCGAATACGATTTAGTGCATGAGATGGAAGCCAGCCTGATGGAGTTGATGTCTTCCAGTCTCAAGCAGCGTTTAACTGCTGAGCCGGTGCGTTTTGTTTATCAGCGCGATATGCCCAATGCGCTGGTTGAAGTGTTACGCGAAAAACTGACTATTTCCCGCTACGACTCCATCGTCCCCGGCGGTCGTTATCATAATTTTAAAGACTTTATTAATTTCCCCAATGTCGGCAAAGCCAATCTGGTGAACAAACCACTGCCGCGTTTACGCCATATTTGGTTTGATAAAGCCCAGTTCCGCAATGGTTTTGATGCCATTCGCGAACGCGATGTGTTGCTCTATTATCCTTATCACACCTTTGAGCATGTGCTGGAACTGCTGCGTCAGGCTTCGTTCGACCCGAGCGTACTGGCGATTAAAATTAACATTTACCGCGTGGCGAAAGATTCACGCATCATCGACTCGATGATCCACGCCGCACATAACGGTAAGAAAGTCACCGTGGTGGTTGAGTTACAGGCGCGTTTCGACGAAGAAGCCAACATTCACTGGGCGAAGCGCCTGACCGAAGCAGGCGTGCACGTTATCTTCTCTGCGCCGGGGCTGAAAATTCACGCCAAACTGTTCCTGATTTCACGTAAAGAAAACGGTGAAGTGGTGCGTTATGCACACATCGGGACCGGGAACTTTAACGAAAAAACCGCGCGTCTTTATACTGACTATTCGTTGCTGACCGCCGATGCGCGCATCACCAACGAAGTACGGCGGGTATTTAACTTTATTGAAAACCCATACCGTCCGGTGACATTTGATTATTTAATGGTATCGCCGCAAAACTCCCGCCGCCTATTGTATGAAATGGTGGACCGCGAGATCGCCAACGCGCAGCAAGGGCTGCCCAGTGGTATCACCCTGAAGCTAAATAACCTTGTCGATAAAGGCCTGGTTGATCGTCTGTATGCGGCCTCCAGCTCCGGCGTACCGGTTAATCTGCTGGTTCGCGGAATGTGTTCGCTGATCCCCAATCTGGAAGGCATTAGCGACAACATTCGTGCCATCAGTATTGTTGACCGTTACCTTGAACATGACCGGGTTTATATTTTTGAAAATGGCGGCGATAAAAAGGTCTACCTTTCTTCCGCCGACTGGATGACGCGCAATATTGATTATCGTATTGAAGTGGCGACGCCGCTGCTCGATCCGCGCCTGAAGCAGCGGGTACTGGACATCATCGACATATTGTTCAGCGATACGGTCAAAGCACGTTATATCGATAAAGAACTCAGTAATCGCTACGTTCCCCGCGGCAATCGCCGCAAAGTACGGGCGCAGTTGGCGATTTATGA
Claims (6)
1.一种生物酶法合成5’-胞苷酸的方法，其特征在于，包括如下步骤：以胞苷、乙酰磷酸钾盐和ATP为原料，在尿苷-胞苷激酶和多聚磷酸激酶共同催化下发生反应，制得胞苷酸。
2.根据权利要求1所述生物酶法合成5’-胞苷酸的方法，其特征在于：多聚磷酸盐激酶制备为，菌种活化后制备种子液，以2-10％接种量接种至发酵罐，进行连续流高密度发酵培养。
3.根据权利要求1所述生物酶法合成5’-胞苷酸的方法，其特征在于：尿苷-胞苷激酶的制备为，菌种活化制备种子液，以2-10％接种量接种至发酵罐，进行连续流高密度发酵培养。
4.根据权利要求1所述生物酶法合成5’-胞苷酸的方法，其特征在于：反应温度为25-35℃，反应采用pH＝6.0-8.0条件下进行。
5.根据权利要求1所述生物酶法合成5’-胞苷酸的方法，其特征在于：所述反应在Mg2+存在条件下进行。
6.根据权利要求1所述生物酶法合成5’-胞苷酸的方法，其特征在于：所述胞苷浓度为300-500mM，乙酰磷酸钾盐浓度为600-1000Mm，ATP浓度为15-25mM。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310972989.1A CN116804214A (zh) | 2023-08-04 | 2023-08-04 | 一种生物酶法合成5’-胞苷酸的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310972989.1A CN116804214A (zh) | 2023-08-04 | 2023-08-04 | 一种生物酶法合成5’-胞苷酸的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116804214A true CN116804214A (zh) | 2023-09-26 |
Family
ID=88080797
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310972989.1A Pending CN116804214A (zh) | 2023-08-04 | 2023-08-04 | 一种生物酶法合成5’-胞苷酸的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116804214A (zh) |
-
2023
- 2023-08-04 CN CN202310972989.1A patent/CN116804214A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2019101117A4 (en) | Method for the enzymatic production of uridine monophosphate and cytidine monophosphate | |
| CN112961890B (zh) | 烟酰胺单核苷酸的酶促合成方法 | |
| CN102605027B (zh) | 一种氧化型辅酶ii的酶催化制备方法 | |
| CN104561195B (zh) | 一种尿苷二磷酸葡萄糖的制备方法 | |
| US20230383329A1 (en) | Adenosine-Involved Fully Enzymatic Synthesis Method for NMN | |
| CN108018252B (zh) | 一种中间体2’-脱氧鸟苷的制备方法 | |
| WO2023273960A1 (zh) | 一种腺苷参与的nmn半合成方法 | |
| CN111269870A (zh) | 一种高产胞苷酸的重组大肠杆菌及其应用 | |
| AU2008249370B2 (en) | Method for producing glucuronic acid by glucuronic acid fermentation | |
| Taran et al. | Enzymatic transglycosylation of natural and modified nucleosides by immobilized thermostable nucleoside phosphorylases from Geobacillus stearothermophilus | |
| CN110551781A (zh) | 一种酶法制备5’-鸟苷酸的方法 | |
| CN104130967A (zh) | 一株共表达l-乳酸脱氢酶和甲酸脱氢酶的大肠杆菌及其构建方法与应用 | |
| CN106222211B (zh) | 1,6-二磷酸果糖的制备方法 | |
| CN114507649B (zh) | 嗜热酶及一锅法高效合成udp-葡萄糖和udp-葡萄糖醛酸的方法 | |
| CN116804214A (zh) | 一种生物酶法合成5’-胞苷酸的方法 | |
| CN113913481B (zh) | 甘露糖的生物制备方法 | |
| CN115433750A (zh) | 一种烟酰胺单核苷酸的制备方法 | |
| WO2014146242A1 (zh) | 一种氧化型辅酶 ii 的酶催化制备方法 | |
| CN114395578A (zh) | 一种重组海藻糖酶的制备方法及其应用 | |
| CN104830930B (zh) | 一种核苷类药物中间体2’-脱氧鸟苷的生产方法 | |
| CN114292890A (zh) | 一种新型酶法合成5’-胞苷酸的方法 | |
| CN112111536B (zh) | 一种以氨基酸为底物生产亚精胺的方法及工程菌 | |
| CN116875645A (zh) | 一种生物酶法合成胞苷二磷酸的方法 | |
| CN114317477B (zh) | 一种蔗糖磷酸化酶及葡萄糖-1-磷酸生产工艺 | |
| CN114940985B (zh) | 兼具脱氧腺苷二磷酸激酶和乙酸激酶活性的蛋白及应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |