CN116731221B - 一种多糖衍生物及其在制药中的用途 - Google Patents

一种多糖衍生物及其在制药中的用途 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种多糖衍生物及其在制药中的用途，属于天然多糖改性领域。本发明多糖衍生物，是将去甲酯化水溶性大豆多糖使用苯磺酸、三氯乙酸进行硫酸酯化修饰制得。具体制备步骤包括取去甲酯化水溶性大豆多糖与吡啶混合，混合后加入苯磺酸和三氯乙酸，升温进行搅拌反应；反应后冷却，调节pH呈中性附近后将反应液透析；透析结束后离心取沉淀干燥即得多糖衍生物。本发明多糖衍生物可以用于制备促进成纤维细胞增殖和/或促进伤口愈合的药品。

Description

一种多糖衍生物及其在制药中的用途
技术领域
本发明涉及天然多糖改性领域，具体涉及一种多糖衍生物及其在制药中的用途。
背景技术
多糖是一类有着结构多样性的生物高分子，其来源广泛，含量丰富。水溶性大豆多糖是一种主要由阿拉伯糖、鼠李糖、木糖、半乳糖、海藻糖、葡萄糖以及半乳糖醛酸构成的物质。水溶性大豆多糖的主链由聚鼠李糖半乳糖醛酸长链和聚半乳糖醛酸短链组合而成的，其中性糖侧链由阿拉伯糖基以及半乳糖基构成，以鼠李糖作为桥梁和鼠李糖半乳糖醛酸相连接。水溶性大豆多糖具有多种理化功能：膳食纤维含量高、溶解性好、耐盐和酸、抗热稳定性、良好的成膜性和胶着性、乳化稳定性等等。
目前，天然多糖的修饰或改性方法包括物理方法，如共混改性、湿热改性、超声改性等；化学方法，如酯化改性、醚化改性、络合改性等；生物方法，如酶法改性、微生物改性等。硫酸酯化多糖是指糖羟基上带有硫酸根的一类化学结构复杂、生物活性多样、构效关系鲜明的聚阴离子化合物。许多原本没有或仅有微弱抗病毒或抗肿瘤活性的多糖，经硫酸酯化修饰后其抗病毒或抗肿瘤活性得到了显著提高，而且还具有提高机体免疫力的功能。多糖硫酸酯有望成为一系列新型促进人类健康的理想药物。而目前针对水溶性大豆多糖的硫酸酯化研究较少。
发明内容
本发明的目的在于提供一种得率高，取代度高并且可以用于制备促进成纤维细胞增殖或促进伤口愈合的药物的多糖衍生物及其制备方法。
为达到上述发明目的，采用如下技术方案：
本发明公开了一种多糖衍生物的制备方法，包括将去甲酯化水溶性大豆多糖使用氨基磺酸、苯磺酸、三氯乙酸进行硫酸酯化修饰制得多糖衍生物；其中，去甲酯化水溶性大豆多糖的制备步骤包括：
取豆渣与水混合，碱性条件下升温进行去甲酯化处理；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与水混合，酸性条件下升温反应；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖。
本发明制备方法中加入苯磺酸、三氯乙酸对水溶性大豆多糖进行硫酸酯化修饰，可以对反应中的取代度产生影响，取代度可达1.9以上。
优选地，多糖衍生物的制备步骤包括：
取去甲酯化水溶性大豆多糖与吡啶混合，混合后加入氨基磺酸、苯磺酸和三氯乙酸，升温进行搅拌反应；反应后冷却，调节pH呈中性附近后将反应液透析；透析结束后浓缩干燥即得多糖衍生物。
优选地，氨基磺酸、苯磺酸和三氯乙酸的重量比为：5-8:1-2:1-2。
优选地，去甲酯化水溶性大豆多糖、吡啶、氨基磺酸、苯磺酸和三氯乙酸的重量比为1-3:100-200:5-8: 1-2:1-2。
优选地，硫酸酯化的反应条件为：反应温度50-80℃，反应时间1-4h。
更优选地，多糖衍生物的制备步骤包括：
按重量份计，取1-3份去甲酯化水溶性大豆多糖，加入100-200份吡啶混合均匀；继续加入5-8份氨基磺酸、1-2份苯磺酸和1-2份三氯乙酸，升温至50-80℃进行反应；反应结束后调整pH为7.0-7.5，使用蒸馏水对反应液进行透析，透析60-72h后更换蒸馏水再次透析18-24h；透析结束后加入2-3倍体积的乙醇，混匀后静置12-18h；静置后10000r/min进行离心，弃上清，将沉淀干燥即得多糖衍生物。
优选地，多糖衍生物的取代度大于1.9。
更优选地，去甲酯化水溶性大豆多糖的制备步骤包括：
按重量份计，取1份豆渣与20-25份水混合，pH 11-12.5条件下升温至60-80℃进行去甲酯化处理1-3h；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与20-25份水混合，pH3-4条件下升温至110-125℃进行反应2-4h；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖。
更优选地，去甲酯化水溶性大豆多糖的制备过程添加有2-咪唑烷酮和3-巯基丙酸。
现有技术中，多糖在提取过程中很容易因为碱性条件或是反应温度过高发生降解，从而影响多糖提取的得率；而本发明制备方法中2-咪唑烷酮和3-巯基丙酸的加入可以减少多糖在提取过程中的降解，从而提高去甲酯化水溶性大豆多糖的得率。此外，2-咪唑烷酮和3-巯基丙酸的加入可以降低去甲酯化水溶性大豆多糖的酯化度，有利于后续硫酸酯化修饰，最终提高多糖衍生物的取代度。
更优选地，2-咪唑烷酮和3-巯基丙酸的重量比为0.2-0.5:1-2。
更进一步优选地，去甲酯化水溶性大豆多糖的制备步骤包括：
按重量份计，取1份豆渣与20-25份水混合，继续添加0.2-0.5份2-咪唑烷酮和1-2份3-巯基丙酸；pH 11-12.5条件下升温至60-80℃进行去甲酯化处理1-3h；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与20-25份水混合，pH 3-4条件下升温至110-125℃进行反应2-4h；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖。
优选地，去甲酯化水溶性大豆多糖的得率大于45%。
本发明还公开了上述制备方法制得的多糖衍生物。
本发明还公开了上述多糖衍生物在制备促进成纤维细胞增殖和/或促进伤口愈合的药品中的用途。
本发明还公开了上述制备方法中使用的苯磺酸和三氯乙酸在提高水溶性大豆多糖硫酸酯化修饰的取代度中的用途。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
本发明制备了一种可多糖衍生物，通过对去甲酯化水溶性大豆多糖进行硫酸酯化修饰得到。在进行硫酸酯化修饰处理时，本发明制备方法中使用苯磺酸、三氯乙酸对水溶性大豆多糖进行硫酸酯化修饰，得到了取代度高的多糖衍生物，取代度可达1.9以上，此外，在制备去甲酯化大豆多糖的过程中，本发明添加2-咪唑烷酮和3-巯基丙酸，有效提高了去甲酯化水溶性大豆多糖的得率，可达45%以上；2-咪唑烷酮和3-巯基丙酸还具有提高后续步骤中产物的酯化度的作用。本发明制得的多糖衍生物具有明显的促进成纤维细胞增殖以及促进伤口愈合的作用，可以用于制备促进成纤维细胞增殖和/或促进伤口愈合的药物。
附图说明
图1为多糖衍生物的红外光谱图。
具体实施方式
这里将详细地对示例性实施例进行说明，以下示例性实施例中所描述的实施方式并不代表与本公开相一致的所有实施方式。相反，它们仅是与如所附权利要求书中所详述的、本公开的一些方面相一致的方法的例子。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，或按照制造厂商所建议的条件。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
试验例中所使用的小鼠成纤维细胞为NIH/3T3细胞系，购自南京科佰生物科技有限公司；小鼠为SPF级雄性昆明小鼠，体重20g±2g，购自北京博奥派克生物科技有限公司。
实施例1
水溶性大豆多糖硫酸酯化衍生物的制备
（1）去甲酯化水溶性大豆多糖的制备
取100g豆渣与2000g水混合，pH12条件下升温至80℃进行去甲酯化处理2.5h；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与2000g水混合，pH3条件下升温至115℃进行反应3h；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖；
（2）多糖衍生物的制备
取2g去甲酯化水溶性大豆多糖，加入130g吡啶混合均匀；继续加入5g氨基磺酸、1g苯磺酸和2g三氯乙酸，升温至70℃进行反应；反应结束后调整pH为7.2，使用蒸馏水对反应液进行透析，透析72h后更换蒸馏水再次透析24h；透析结束后加入3倍体积的乙醇，混匀后静置12h；静置后10000r/min进行离心，弃上清，将沉淀干燥即得多糖衍生物。
实施例2
水溶性大豆多糖硫酸酯化衍生物的制备
（1）去甲酯化水溶性大豆多糖的制备
取100g豆渣与2000g水混合，pH11条件下升温至60℃进行去甲酯化处理1h；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与2000g水混合，pH3条件下升温至110℃进行反应2h；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖；
（2）多糖衍生物的制备
取1g去甲酯化水溶性大豆多糖，加入100g吡啶混合均匀；继续加入5g氨基磺酸、1g苯磺酸和1g三氯乙酸，升温至50℃进行反应；反应结束后调整pH为7.0，使用蒸馏水对反应液进行透析，透析60h后更换蒸馏水再次透析18h；透析结束后加入2倍体积的乙醇，混匀后静置12h；静置后10000r/min进行离心，弃上清，将沉淀干燥即得多糖衍生物。
实施例3
水溶性大豆多糖硫酸酯化衍生物的制备
（1）去甲酯化水溶性大豆多糖的制备
取100g豆渣与2500g水混合，pH12.5条件下升温至80℃进行去甲酯化处理3h；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与2500g水混合，pH4条件下升温至125℃进行反应4h；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖；
（2）多糖衍生物的制备
取3g去甲酯化水溶性大豆多糖，加入200g吡啶混合均匀；继续加入8g氨基磺酸、2g苯磺酸和2g三氯乙酸，升温至80℃进行反应；反应结束后调整pH为7.5，使用蒸馏水对反应液进行透析，透析72h后更换蒸馏水再次透析24h；透析结束后加入3倍体积的乙醇，混匀后静置18h；静置后10000r/min进行离心，弃上清，将沉淀干燥即得多糖衍生物。
实施例4
水溶性大豆多糖硫酸酯化衍生物的制备
（1）去甲酯化水溶性大豆多糖的制备
取100g豆渣与2000g水混合，继续添加25g 2-咪唑烷酮和120g 3-巯基丙酸；pH12条件下升温至80℃进行去甲酯化处理2.5h；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与2000g水混合，pH3条件下升温至115℃进行反应3h；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖；
（2）多糖衍生物的制备
同实施例1。
实施例5
水溶性大豆多糖硫酸酯化衍生物的制备
（1）去甲酯化水溶性大豆多糖的制备
取100g豆渣与2000g水混合，继续添加25g 2-咪唑烷酮；pH12条件下升温至80℃进行去甲酯化处理2.5h；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与2000g水混合，pH3条件下升温至115℃进行反应3h；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖；
（2）多糖衍生物的制备
同实施例1。
实施例6
水溶性大豆多糖硫酸酯化衍生物的制备
（1）去甲酯化水溶性大豆多糖的制备
取100g豆渣与2000g水混合，继续添加120g 3-巯基丙酸；pH12条件下升温至80℃进行去甲酯化处理2.5h；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与2000g水混合，pH3条件下升温至115℃进行反应3h；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖；
（2）多糖衍生物的制备
同实施例1。
对比例1
水溶性大豆多糖硫酸酯化衍生物的制备
（1）去甲酯化水溶性大豆多糖的制备
取100g豆渣与2000g水混合，pH12条件下升温至80℃进行去甲酯化处理2.5h；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与2000g水混合，pH3条件下升温至115℃进行反应3h；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖；
（2）多糖衍生物的制备
取2g去甲酯化水溶性大豆多糖，加入130g吡啶混合均匀；继续加入5g氨基磺酸、1g苯磺酸，升温至70℃进行反应；反应结束后调整pH为7.2，使用蒸馏水对反应液进行透析，透析72h后更换蒸馏水再次透析24h；透析结束后加入3倍体积的乙醇，混匀后静置12h；静置后10000r/min进行离心，弃上清，将沉淀干燥即得多糖衍生物。
对比例2
水溶性大豆多糖硫酸酯化衍生物的制备
（1）去甲酯化水溶性大豆多糖的制备
取100g豆渣与2000g水混合，pH12条件下升温至80℃进行去甲酯化处理2.5h；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与2000g水混合，pH3条件下升温至115℃进行反应3h；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖；
（2）多糖衍生物的制备
取2g去甲酯化水溶性大豆多糖，加入130g吡啶混合均匀；继续加入5g氨基磺酸、2g三氯乙酸，升温至70℃进行反应；反应结束后调整pH为7.2，使用蒸馏水对反应液进行透析，透析72h后更换蒸馏水再次透析24h；透析结束后加入3倍体积的乙醇，混匀后静置12h；静置后10000r/min进行离心，弃上清，将沉淀干燥即得多糖衍生物。
对比例3
水溶性大豆多糖硫酸酯化衍生物的制备
（1）去甲酯化水溶性大豆多糖的制备
同对比例1。
（2）多糖衍生物的制备
取2g去甲酯化水溶性大豆多糖，加入130g吡啶混合均匀；继续加入5g氨基磺酸，升温至70℃进行反应；反应结束后调整pH为7.2，使用蒸馏水对反应液进行透析，透析72h后更换蒸馏水再次透析24h；透析结束后加入3倍体积的乙醇，混匀后静置12h；静置后10000r/min进行离心，弃上清，将沉淀干燥即得多糖衍生物。
对比例4
去甲酯化水溶性大豆多糖的制备
取100g豆渣与2000g水混合，pH12条件下升温至80℃进行去甲酯化处理2.5h；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与2000g水混合，pH3条件下升温至115℃进行反应3h；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖。
试验例1
去甲酯化水溶性大豆多糖得率测定
对实施例1、4、5、6中的豆渣和制得的去甲酯化水溶性大豆多糖分别称重并记录，计算得率：
得率（%）=去甲酯化水溶性大豆多糖重量/豆渣重量×100%。
测定结果如表1所示。
表1 去甲酯化水溶性大豆多糖得率
得率（%）
实施例1 35.79
实施例4 46.21
实施例5 36.17
实施例6 35.48
由表1可知，实施例4中去甲酯化水溶性大豆多糖得率明显高于其他实施例，说明制备过程中2-咪唑烷酮和3-巯基丙酸的加入提高了去甲酯化水溶性大豆多糖的得率；仅添加2-咪唑烷酮或3-巯基丙酸的实施例5和6的得率与实施例1的得率接近，说明只有同时添加2-咪唑烷酮和3-巯基丙酸才具有提高去甲酯化水溶性大豆多糖得率的效果。
试验例2
酯化度的测定
分别取实施例1、4、5、6中制得的去甲酯化水溶性大豆多糖0.5g，加入5mL 38%的浓盐酸和95mL 75%的乙醇，搅拌15min后滤出产物，加入75%的乙醇洗涤至不含氯离子后进行干燥；干燥后准确称取80mg产物，加入2mL 75%的乙醇和100mL蒸馏水搅拌溶解，使用0.1mol/L氢氧化钠溶液进行滴定，记录消耗的体积V1；滴定后向溶液中加入0.5mol/L的氢氧化钠溶液15mL进行搅拌，再加入等摩尔的盐酸溶液进行搅拌；再次使用0.1mol/L氢氧化钠溶液进行滴定，记录消耗的体积V2；计算DE值：
DE（%）=V2/（V1+V2）×100%。
测定结果如表所示。
表2 去甲酯化水溶性大豆多糖酯化度
DE（%）
实施例1 64.2
实施例4 48.5
实施例5 59.7
实施例6 58.4
由表2可知，实施例1、实施例5-6中制得的去甲酯化水溶性大豆多糖酯化度明显高于实施例4，说明制备过程中使用2-咪唑烷酮和3-巯基丙酸对水溶性大豆多糖进行硫酸酯化修饰的过程中，可以降低水溶性大豆多糖的酯化度，而仅使用2-咪唑烷酮或3-巯基丙酸对酯化度影响较小。
试验例3
取代度的测定
使用硫酸钡浊度法对取代度进行测定。
分别取实施例1-6和对比例1-3中制得的多糖衍生物10mg溶于10mL 1mol/L的HCL溶液，升温至100℃水解反应5h，水解后取0.1mL稀释至1mL；取0.2mL稀释液加入3.8mL质量浓度3%三氯乙酸及1mL 1%氯化钡-明胶溶液，反应10min后测定其在360nm处的吸光度OD1；将0.2mL稀释液加入1mL 0.5%明胶溶液混匀后测定其在360nm处的吸光度OD2；计算取代度DS：
DS=1.62×S%/（32-1.02×S%）；
S%=CV/W×100%；
式中S% —— 样品中硫酸根含量，（%）；
C —— 样品测定浓度，（mg/mL）；
V —— 样品溶液体积，（mL）；
W —— 称量样品质量，（mg）。
计算结果如表3所示。
表3 硫酸酯化处理取代度
取代度
实施例1 1.94
实施例2 1.97
实施例3 1.92
实施例4 2.25
实施例5 2.02
实施例6 1.99
对比例1 1.53
对比例2 1.25
对比例3 1.22
由表3可知，本发明实施例1-4中制得的多糖衍生物的取代度大于1.9。同时，实施例1中制得的多糖衍生物的取代度明显高于对比例1-3，说明制备过程中使用苯磺酸、三氯乙酸对水溶性大豆多糖进行硫酸酯化修饰，能获得较高的取代度；对比例1中制得的多糖衍生物取代度稍高于对比例3，对比例1中制得的多糖衍生物取代度与对比例3接近，说明制备过程仅添加三氯乙酸不具有提高取代度的作用，仅添加苯磺酸可以小幅提高取代度。此外，实施例4制得的多糖衍生物的取代度明显高于实施例1、实施例5-6，这说明去甲酯化水溶性大豆多糖的制备过程添加2-咪唑烷酮和3-巯基丙酸有利于后续硫酸酯化修饰，提高多糖衍生物的取代度，该结果与试验例2酯化度的测定结果相符合。
试验例4
多糖衍生物性能测定
一、多糖衍生物红外分析
取实施例1的多糖衍生物与KBr混合压片，检测其在4000cm-1-400cm-1的红外光谱。
检测结果如图1所示。
由图1可知，在1230cm-1的附近出现S=O的吸收峰，800cm-1附近出现了C-O-SO3的吸收峰；说明对水溶性大豆多糖的硫酸酯化修饰成功进行。
二、多糖衍生物促进成纤维细胞增殖试验
选取对数生长期的小鼠成纤维细胞，消化后使用完全培养基稀释至106个/mL，接种至96孔板，每孔100μL；5% CO2，37°C恒温培养6h后使用PBS清洗2遍，加入含不同浓度的实施例1中制得的多糖衍生物的完全培养基（5ng/mL、10ng/mL、20ng/mL）200μL，对照孔添加不含多糖衍生物的完全培养基200μL，对比例孔添加含20 ng/mL的对比例4中制得的去甲酯化水溶性大豆多糖的完全培养基200μL；5% CO2，37°C恒温培养24h后使用MTT试剂盒（艾美捷科技有限公司）测定吸光度并计算增值率；
增值率（%）=（OD试验孔-OD对照孔）/OD对照孔×100%。
测定结果如表4所示。
表4 小鼠成纤维细胞增值率
细胞增值率（%）
实施例1-5ng/mL 63.92
实施例1-10ng/mL 83.71
实施例1-20ng/mL 95.12
对比例4-20ng/mL 17.82
对照组 11.35
由表4可知，相比于对照组，含有不同剂量的实施例1中制得的多糖衍生物的培养基促进了细胞增殖，使得小鼠成纤维细胞增值率远高于对照组；对比不同剂量下的细胞增值率可知，随着多糖衍生物浓度的增加，细胞增值率不断增加；使用含对比例4中制得的去甲酯化水溶性大豆多糖的培养基进行培养时的细胞增值率稍高于对照组，但远低于使用含实施例1中制得的水溶性大豆多糖的培养基进行培养时的细胞增值率，说明去甲酯化水溶性大豆多糖几乎没有促进成纤维细胞增殖的作用。
三、多糖衍生物促进伤口愈合试验
通过测定小鼠皮肤伤口愈合率测定实施例1中制得的多糖衍生物和对比例4中制得的去甲酯化水溶性大豆多糖促进伤口愈合的能力。
取小鼠50只，适应性饲养一周后进行试验。小鼠随均分为5组，对照组、对比例组（给药浓度2g/kg）、高剂量组（给药浓度2g/kg）、中剂量组（给药浓度0.5g/kg）和低剂量组（给药浓度0.2g/kg）；对照组不给药，对比例组使用对比例4中制得的去甲酯化多糖衍生物作为给药，其他三个剂量组使用实施例1中制得的多糖衍生物作为给药；使用活检打孔器在小鼠背侧，脊柱左右两侧对称位置制造2个直径为1cm的创面，致伤当天记为第0天；每2天观察小鼠，测量小鼠伤口面积，计算愈合率，直至完全愈合（愈合面积大于原始伤口面积的95%）；
愈合率（%）=（第0天伤口面积-测量当天伤口面积）/第0天伤口面积×100%。
测定结果如表5所示。
表5 小鼠伤口愈合率
时间（d） 低剂量组伤口愈合率（%） 中剂量组伤口愈合率（%） 高剂量组伤口愈合率（%） 对比例组伤口愈合率（%） 对照组伤口愈合率（%）
2 7.17 8.25 8.41 6.17 6.33
4 15.28 19.31 20.18 13.49 13.19
6 26.52 31.75 31.92 24.25 22.74
8 40.04 52.67 53.11 35.49 35.18
10 74.63 89.47 90.13 66.82 67.92
12 83.92 94.28 94.55 80.1 79.43
14 91.77 96.49 96.78 83.75 83.21
由表5可知，相比于对照组，接受实施例1中制得的多糖衍生物3种剂量给药的小鼠伤口愈合率明显增加，说明实施例1中制得的多糖衍生物具有良好的促进伤口愈合的作用；中剂量组的愈合率与高剂量组接近，明显高于低剂量组，说明给药浓度为0.5g/kg较为合适；使用对比例4中制得的去甲酯化水溶性大豆多糖作为给药的小鼠伤口愈合率与对照组接近，说明水溶性大豆多糖不具有促进伤口愈合的作用。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (5)

1.一种多糖衍生物的制备方法，包括将去甲酯化水溶性大豆多糖使用氨基磺酸、苯磺酸、三氯乙酸进行硫酸酯化修饰制得多糖衍生物；其中，去甲酯化水溶性大豆多糖的制备步骤包括：
取豆渣与水混合，碱性条件下升温进行去甲酯化处理；处理后离心即得去甲酯化豆渣，将去甲酯化豆渣与水混合，酸性条件下升温反应；反应后离心取上清液进行浓缩，将浓缩液使用乙醇沉淀；取沉淀干燥即得去甲酯化水溶性大豆多糖；
所述多糖衍生物的制备步骤包括：
取去甲酯化水溶性大豆多糖与吡啶混合，混合后加入氨基磺酸、苯磺酸和三氯乙酸，升温进行搅拌反应；反应后冷却，调节pH至中性后将反应液透析；透析结束后离心取沉淀干燥即得多糖衍生物；
所述氨基磺酸、苯磺酸和三氯乙酸的重量比为：5-8:1-2:1-2。
2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述多糖衍生物的取代度大于1.9。
3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述去甲酯化水溶性大豆多糖的得率大于45%。
4.一种由权利要求1-3任一项所述制备方法制得的多糖衍生物。
5.权利要求4所述多糖衍生物在制备促进成纤维细胞增殖和/或促进伤口愈合的药品中的用途。
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