CN111393536B - 魔芋葡甘聚糖的降解方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,其包括如下步骤:制备含水魔芋粉混合物,含水魔芋粉混合物的含水量为5%‑60%;将含水魔芋粉混合物进行非均相湿热降解,得低分子量魔芋多糖降解产物。该降解方法工艺采用非均相体系进行降解反应,可以避免魔芋葡甘聚糖均相(配成溶胶)降解之后耗时耗能的脱水操作,同时也可以避免其它非均相降解法中为限制魔芋多糖溶胀而采用乙醇等有机溶剂,操作步骤简单,省时高效,可通过控制反应条件来调节降解产物的分子量分布范围,有利于规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及天然高分子加工领域,尤其涉及一种魔芋葡甘聚糖的降解方法。
背景技术
魔芋葡甘聚糖是一种来源于草本植物魔芋的天然高分子杂多糖,由β-D-葡萄糖和β-D-甘露糖以约2:3的摩尔比通过β-1,4糖苷键连接而成,在主链甘露糖的C3位置上以β-1,3糖苷键的结合方式形成支链,其相对分子质量约为200-2000kDa。魔芋葡甘聚糖具有凝胶性、成膜性、生物相容性,可应用于食品、化妆品、制药和保健品等领域。
研究表明,魔芋葡甘聚糖的分子量越大,其水溶胶黏度越高,天然魔芋葡甘聚糖因其极高的黏度被用作增稠剂和稳定剂。然而在一些特殊应用场景如用作膳食纤维补充剂或酶解底物,则需要其具有高浓度、低黏度的特性,而降低分子量是必然选择。另外,相比于天然魔芋葡甘聚糖,低分子量魔芋葡甘聚糖具有更优良的益生元作用,可刺激双歧杆菌和嗜酸乳杆菌的生长,有助于肠道健康。并且,降解后的低分子量魔芋葡甘聚糖对自由基和脂质过氧化物清除能力增强,因而具有更好的抗氧化作用。因此,有必要对其降解以获得低分子量多糖,更好地发挥其生物活性。
目前,降解魔芋葡甘聚糖的方法主要有物理降解法、化学降解法和酶降解法。
其中,物理降解法主要有超声波法、辐照降解法以及机械降解等。物理降解法通常操作较为简单,但往往对设备的要求较高,无法达到工业化生产。同时,辐照降解法则对辐射源有较大的依赖,且普通消费者对辐照产品的安全性仍存疑。
化学降解法主要有酸降解法、碱降解法和氧化降解法等。酸降解法是利用氢离子断裂魔芋葡甘聚糖中的糖苷键以减小多糖的分子量,是比较经典降解方法,碱降解法是利用碱性环境对糖苷键断裂以得到低分子量目标产物,但两种降解方法对糖苷键的断裂是随机的,产物分子量分布范围广,副产物多,对产物的结构和活性有较大的破坏性。氧化降解法主要以过氧化氢降解法为代表,降解反应条件较温和,但降解产物中易残留氧化剂,降解产物的分子量依然较高,且产物中存在有毒的过氧化物。
酶降解法虽然反应条件温和,但目前还没有适用于魔芋葡甘聚糖降解的成熟经济的专用酶。
另外,根据降解体系中魔芋葡甘聚糖分子的分散状态,可将降解反应分为均相降解和非均相降解。
在均相降解反应中,需先将魔芋葡甘聚糖制成水溶胶,体系的黏度会随底物魔芋葡甘聚糖浓度的增大而急剧升高,因而难以通过增大底物浓度而大量获取目标产物,且反应结束后需脱除质量数十倍于目标产物的溶剂,极为耗能费时。
而在非均相降解反应,魔芋葡甘聚糖一般保持颗粒状态,在已报道的非均相降解反应中,需使用大量的有机溶剂如乙醇来限制魔芋多糖的溶胀以增加其作为反应体系中底物的投料量,对有机溶剂需求量大,且应结束后需脱除大量的溶剂才能获取目标产物。
发明内容
基于此,有必要提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,通过非均相湿热降解魔芋葡甘聚糖,无需使用有机溶剂体系即可获得分子量分布均匀的低分子量魔芋多糖产物,便于实现大规模高效降解。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下:
本发明提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,包括如下步骤:
制备含水魔芋粉混合物,所述含水魔芋粉混合物的含水量为5%-60%;
将所述含水魔芋粉混合物进行非均相湿热降解,所述非均相湿热降解的工艺条件为:降解温度110℃-160℃,降解压力0.105MPa-0.630MPa,得低分子量魔芋多糖。
优选地,所述含水魔芋粉混合物的含水量为15%-45%;所述非均相湿热降解的工艺条件为:降解温度115℃-140℃,降解压力0.145MPa-0.550MPa,降解时间10min-60min,整体上可控制天然魔芋多糖降解产物的平均分子量降至700kDa以下,降低体系(含1wt%魔芋降解产物的溶液)的表观黏度至10000mPa·S以下。
优选地,所述含水魔芋粉混合物的含水量为20%-40%;所述非均相湿热降解的工艺条件为:降解温度120℃-135℃,降解压力0.205MPa-0.325MPa,降解时间20min-40min,整体上可控制天然魔芋多糖降解产物的平均分子量降至150-400kDa之间,降低体系(含1wt%魔芋降解产物的溶液)的表观黏度至1000mPa·S以下。
更优选地,所述含水魔芋粉混合物的含水量为20%;所述非均相湿热降解的工艺条件为:降解温度130℃,降解压力0.275MPa,降解时间30min-40min,整体上可控制天然魔芋多糖降解产物的平均分子量150kDa-190kDa之间,降低体系(含1wt%魔芋降解产物的溶液)的表观黏度至350mPa·S以下。
在其中一些实施例中,所述制备含水魔芋粉混合物包括如下步骤:称取魔芋粉,向所述魔芋粉中加入水,研磨混匀。由于魔芋葡甘聚糖分子极强的束水能力,通过研磨处理可避免魔芋粉末各处的水分含量不均导致粉末各处降解程度不一致的问题。
在其中一些实施例中,所述魔芋粉选自纯化魔芋粉、纯化魔芋精粉、纯化魔芋微粉中的至少一种。
在其中一些实施例中,所述魔芋葡甘聚糖的降解方法还包括对所述魔芋降解产物进行干燥的步骤。优选地,所述干燥采用热风干燥、真空加热干燥或真空冷冻干燥。
本发明还提供一种上述任一项所述的魔芋葡甘聚糖的降解方法制备而成的魔芋降解产物,分子量分布范围较窄,并可以有效降解作为添加剂使用时的体系黏度,提高生物活性,可以在制备食品、化妆品、药品、保健品中的应用,尤其是在减肥产品中的应用。
本发明的有益效果是:
本发明魔芋葡甘聚糖的降解方法工艺采用非均相体系进行降解反应,操作步骤简单,省时高效,可通过控制反应条件来调节降解产物的分子量分布范围,有利于规模化生产,具体来讲:
(1)在均相降解反应中,通常需将魔芋葡甘聚糖配制成溶胶,其浓度的增加受限于魔芋葡甘聚糖溶胶极高的黏度。而本发明采用非均相体系对魔芋葡甘聚糖进行降解,一次可对大量底物进行降解,且无需对降解产物进行耗能耗时的脱水操作,节能高效。
(2)与常规非均相的降解方式相比,本发明的降解方法无需使用大量的有机溶剂如乙醇来限制魔芋葡甘聚糖在含水体系中地溶胀,节约降解成本。
(3)与常规降解方法相比,本发明的降解方法无需酸碱试剂、酶试剂或氧化剂等,仅在水的参与下,通过控制含水量、温度、压力及时间即可获得不同降解程度且分子量分布范围窄的低分子量魔芋葡甘聚糖降解产物。
(4)密封的含水魔芋葡甘聚糖经湿热降解后,可长时间储存备用,无需添加防腐剂。
具体实施方式
以下对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。
除非另有定义,本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。
实施例1
本实施例提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,包括如下步骤:
S1,制备含水魔芋粉混合物:称取0.5kg纯化魔芋微粉(葡甘聚糖含量≥90%,分子量1133.6kDa),按重量加入20%的蒸馏水,研磨使水与多糖充分混匀,得含水魔芋粉混合物。
S2,非均相湿热降解:将步骤S1制备的含水魔芋粉混合物置于密封加热装置中,采用如下工艺参数:降解温度130℃,降解压力0.275MPa,降解时间30min,得低分子量魔芋多糖。
S3,干燥:取将步骤S2制备的低分子量魔芋多糖置于鼓风干燥箱中,80℃干燥至恒重,得降解的魔芋葡甘聚糖,即降解魔芋粉。
实施例2
本实施例提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,包括如下步骤:
S1,制备含水魔芋粉混合物:0.5kg纯化魔芋微粉(葡甘聚糖含量≥90%,分子量1133.6kDa),按重量加入5%的蒸馏水,研磨使水与多糖充分混匀,得含水魔芋粉混合物。
S2,非均相湿热降解:将步骤S1制备的含水魔芋粉混合物置于密封加热装置中,采用如下工艺参数:降解温度130℃,降解压力0.275MPa,降解时间30min,得低分子量魔芋多糖。
S3,干燥:取将步骤S2制备的低分子量魔芋多糖置于鼓风干燥箱中,80℃干燥至恒重,得降解魔芋粉。
实施例3
本实施例提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,其采用的原料及工艺步骤与实施例1的基本相同,区别在于:在步骤S1中,含水魔芋粉混合物中含40%水分。
实施例4
本实施例提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,其采用的原料及工艺步骤与实施例1的基本相同,区别在于:在步骤S2中,降解温度为120℃,降解压力0.205MPa。
实施例5
本实施例提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,包括如下步骤:
S1,制备含水魔芋粉混合物:0.5kg纯化魔芋微粉(葡甘聚糖含量≥90%,分子量1133.6kDa),按重量加入5%的蒸馏水,研磨使水与多糖充分混匀,得含水魔芋粉混合物。
S2,非均相湿热降解:将步骤S1制备的含水魔芋粉混合物置于密封容器中,采用如下工艺参数:降解温度110℃,降解压力0.145MPa,降解时间30min,得低分子量魔芋多糖。
S3,干燥:取将步骤S2制备的低分子量魔芋多糖置于鼓风干燥箱中,80℃干燥至恒重,得降解魔芋粉。
实施例6
本实施例提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,其采用的原料及工艺步骤与实施例1的基本相同,区别在于:在步骤S2中,降解时间为20min。
实施例7
本实施例提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,其采用的原料及工艺步骤与实施例1的基本相同,区别在于:在步骤S2中,降解时间为40min。
实施例8
本实施例提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,其采用的原料及工艺步骤与实施例1的基本相同,区别在于:在步骤S1中,含水魔芋粉混合物中含55%水分;在步骤S2中,降解温度为155℃,降解压力0.550MPa,降解时间为55min。
实施例9
本对比例提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,其采用的原料及工艺步骤与实施例1的基本相同,区别在于:在步骤S2中,降解时间为10min。
对比例1
本对比例提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,其采用的原料及工艺步骤与实施例1的基本相同,区别在于:在步骤S1中,含水魔芋粉混合物中含2.3%水分。
对比例2
本对比例提供一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,其采用的原料及工艺步骤与实施例1的基本相同,区别在于:在步骤S2中,降解温度为100℃。
采用凝胶渗透色谱(SEC-MALLS-RI联用装置,WyattTechnology Co.,USA)分别对实施例1-9和对比例1-2制备的降解魔芋粉进行平均分子量的测定:将各个样品分别溶于0.02%NaN3水溶液中,配制其浓度为1mg/mL,搅拌2h使其充分溶解后,过0.45μm的微孔滤膜除去杂质。流动相为0.02%NaN3水溶液(以0.45μm的微孔滤膜过滤后进行超声脱气)。测试温度为25℃,进样量为100μL,流速为0.4mL/min。以Astra(Version 6.1.2.84)软件对散射信号进行采集和数据分析。
以NDJ-8S型旋转黏度计,依据NY/T494-2010《魔芋粉》,分别对施例1-9和对比例1-2制备的降解魔芋粉进行表观黏度的测定:量取500mL蒸馏水于500mL烧杯中,以恒温水浴锅恒定其温度为30℃,以直流调速翼形搅拌器进行搅拌(转速为150r/min),并缓慢加入待测的降解魔芋粉5g。连续搅拌,选用4号转子以12r/min进行黏度测定,每10min测定一次,每次测定连续读取3个测定值,计算平均值,以最大平均值为样品黏度。
所得结果如表1所示:
表1降解魔芋粉测试统计表
由表1可以看出,与对比例1至2相比,实施例1至9的魔芋葡甘聚糖的降解方法通过控制控制含水量5%-55%、降解温度110℃-160℃及降解时间10min-60min,能够整体获得平均分子量在700kDa以下且分子量分布均匀的低分子量魔芋多糖降解产物。
另外,发明人团队经大量研究发现:魔芋粉中的杂质如蛋白,当其含量过高时,在加热的条件下会与多糖发生反应,如美拉德褐变,不仅会降低产品质量(如色泽、杂质),也降低会产品得率。因此,试验中所用的魔芋粉优选魔芋葡甘聚糖含量大于90%的纯化魔芋粉、纯化魔芋精粉、纯化魔芋微粉,降解魔芋粉的品质更好,便于在食品、化妆品、药品、保健品中作为添加剂使用。
关于降解魔芋葡甘聚糖的生物活性评估,进行了如下动物实验。
动物实验设计:40只3周龄的C57BL/6JSlac肥胖易感小鼠,随机分为4组,记为正常膳食组、高脂膳食组、高脂膳食+5%纯化魔芋微粉组以及高脂膳食+5%降解魔芋粉组,每10只1组,每组2笼,每笼5只。其中,高脂膳食组采用10%高脂饲料替代等量的常规小鼠饲料进行饲喂,高脂膳食+5%纯化魔芋微粉组采用含5%高脂饲料+5%纯化魔芋微粉(分子量1133.6kDa)替代等量的常规小鼠饲料进行饲喂,高脂膳食+5%降解魔芋粉组采用含5%高脂饲料+5%降解魔芋粉替代等量的常规小鼠饲料进行饲喂,降解魔芋粉选用实施例1制备的降解魔芋粉。环境温度为21±2℃,湿度为55±10%,光照控制12h/12h(开灯时间为8:30AM)。适应性喂养1周后开始膳食干预。小鼠自由采食,14周后结束干预。小鼠禁食8h后称量其体重,尾尖取血,测其空腹血糖浓度。之后,进行口服葡萄糖耐量实验。按2g/kg体重灌胃葡萄萄溶液,在灌胃结束后的第0、15、30、60、90和120min时尾尖取血,监测血糖变化,并计算血糖的曲线下面积(area under the curve,AUC),用于评估小鼠胰岛素对血糖响应。之后,对小鼠进行眼球取血,全血以含肝素钠的抗凝管收集,离心取血浆存于液氮用于胰岛素的测定。之后将小鼠断颈处死,解剖取小鼠腹部脂肪,记录其重量。
表2降解魔芋葡甘聚糖改善胰岛素抵抗及抑制肥胖效果:
注:以SPSS 26.0进行数据的统计分析,采用One-Way ANVOA进行方差分析,以Duncan法进行组间多重对比:每行均值的不同字母上标表示存在显著性差异(P<0.05);
胰岛素抵抗指数采用稳态模型评估(homeostatic assessment for insulinresistance,HOMA-IR),HOMA-IR=空腹血糖(mmol/L)×胰岛素(mU/L)/22.5
由表2可以看出,与高脂膳食组饲喂的小鼠相比,高脂膳食+5%降解魔芋粉组可以显著性地抑制腹部脂肪的积累,从而减少体重的增加;同时还显著性地降低空腹血糖浓度和胰岛素浓度,提高了胰岛素灵敏度,改善高脂膳食诱导地胰岛素抵抗。
与添加常规纯化魔芋微粉饲喂的肥胖小鼠相比,高脂膳食+5%降解魔芋粉可以显著性地降低腹部脂肪的积累,其空腹血糖浓度和胰岛素抵抗指数也显著性的减小了。因此,对魔芋葡甘聚糖进行降解,有利于进一步发挥去生物活性。高脂饲料中添加降解魔芋葡甘聚糖能够显著性地改善肥胖小鼠的胰岛素抵抗,并具有明显地抗肥胖效果。
以上实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种魔芋葡甘聚糖的降解方法,其特征在于,包括如下步骤:
制备含水魔芋粉混合物,所述含水魔芋粉混合物的含水量为5%-60%;
将所述含水魔芋粉混合物进行非均相湿热降解,所述非均相湿热降解的工艺条件为:降解温度110℃-160℃,降解压力0.105MPa-0.630MPa,得低分子量魔芋多糖。
2.根据权利要求1所述的魔芋葡甘聚糖的降解方法,其特征在于,所述含水魔芋粉混合物的含水量为15%-45%;
所述非均相湿热降解的工艺条件为:降解温度115℃-140℃,降解压力0.145MPa-0.550MPa,降解时间10min-60min。
3.根据权利要求2所述的魔芋葡甘聚糖的降解方法,其特征在于,所述含水魔芋粉混合物的含水量为20%-40%;
所述非均相湿热降解的工艺条件为:降解温度120℃-135℃,降解压力0.205MPa-0.325MPa,降解时间20min-40min。
4.根据权利要求3所述的魔芋葡甘聚糖的降解方法,其特征在于,所述含水魔芋粉混合物的含水量为20%;
所述非均相湿热降解的工艺条件为:降解温度130℃,降解压力0.275MPa,降解时间30min-40min。
5.根据权利要求1至4任一项所述的魔芋葡甘聚糖的降解方法,其特征在于,所述制备含水魔芋粉混合物包括如下步骤:
称取魔芋粉,向所述魔芋粉中加入水,研磨混匀。
6.根据权利要求5所述的魔芋葡甘聚糖的降解方法,其特征在于,所述魔芋粉选自纯化魔芋粉、纯化魔芋精粉、纯化魔芋微粉中的至少一种。
7.根据权利要求1至4任一项所述的魔芋葡甘聚糖的降解方法,其特征在于,还包括对所述低分子量魔芋多糖进行干燥的步骤。
8.根据权利要求7所述的魔芋葡甘聚糖的降解方法,其特征在于,所述干燥采用热风干燥、真空加热干燥或真空冷冻干燥。
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