CN113248633B

CN113248633B - 一种低分子壳聚糖的制备方法

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Publication number: CN113248633B
Application number: CN202110708981.5A
Authority: CN
Inventors: 项斌
Original assignee: Shiyin Shanghai Biotechnology Co ltd
Current assignee: Shiyin Shanghai Biotechnology Co ltd
Priority date: 2021-06-25
Filing date: 2021-06-25
Publication date: 2022-06-21
Anticipated expiration: 2041-06-25
Also published as: CN113248633A

Abstract

一种低分子壳聚糖的制备方法，是先用稀盐酸超声处理蟹壳，再加入去离子水稀释稀盐酸，再加入苯甲酸持续超声处理，低浓度氢氧化钠脱蛋白，洗涤后再用高浓度氢氧化钠热处理脱乙酰的湿品壳聚糖，然后将湿品壳聚糖溶于稀盐酸水溶液中，加入以石墨板作为阳极、泡沫钛作为阴极、银/氯化银电极作为参比电极的三电极体系中，阳极与阴极保持很定的间距为3~5cm，恒点电位为‑1.2~‑1.5V，电解0.5~1h。本发明简化了脱乙酰过程氢氧化钠反复脱乙酰的过程，并减少了氢氧化钠的使用量，通过一步氢氧化钠脱乙酰结合电解制备的低分子壳聚糖脱乙酰度高达94.8%，分子量低，达到0.25万左右，分子量分布窄，分子量分布系数为1.13，低分子壳聚糖中蛋白质杂质含量低至0.072%。

Description

一种低分子壳聚糖的制备方法

技术领域

本发明涉及壳聚糖降解技术领域，具体涉及一种低分子壳聚糖的制备方法。

背景技术

壳聚糖是一种天然高分子聚合物，属于氨基多糖，是至今为止发现的唯一带阳离子电荷的碱性多糖，具有独特的生物活性，同时具有无毒、生物相容性好以及易于降解等优点。壳聚糖是由甲壳素通过脱乙酰化处理制得，一般而言，N-乙酰基脱去55％以上的甲壳素可称之为壳聚糖，制备的壳聚糖分子内外的氢键相互作用，形成有序的大分子结构，由于其分子量通常在几十万上百万，使其只溶于稀盐酸、硝酸等无机酸和大多数有机酸，而不溶于水和碱性溶液，致使壳聚糖的应用受到很大的限制。壳聚糖的脱乙酰度和分子量对其物理，化学和生物性质均有很大影响，若能够制备高的脱乙酰度壳聚糖，并通过适当的方法将高分子量壳聚糖降低为低分子量壳聚糖，特别是分子量小于7000的低分子量聚壳聚糖，不仅溶于水，还能展现出独特优越的生理活性和物理化学性质，例如在医药、食品、化妆品、水处理等方面的应用。

目前，国内提出的降解方法有化学降解法(酸降解法、氧化降解法)、物理降解法(微波、超声波或者γ射线等)和生物降解法(酶降解)。酸降解法是制备单糖和一系列相应低分子量壳聚糖主要途径之一，但是酸降解法不好控制，选择性差、分离纯化比较困难，产率较低，在制备低分子量壳聚糖时主要得到的单糖，其次是双糖，很难得到所需活性的低分子量壳聚糖；双氧水氧化降解法是目前研究较多的方法，但是存在的最大问题是反应过程不易控制，容易发生褐变，在降解过程中引入了各种反应试剂，增加了控制降解副反应及降解产物分离纯化的难度；酶降解法的降解过程及产物分子质量分布较易控制，缺点是所使用的酶较为特殊，成本高，生产周期长，且产物中含有极少量的糖和酶蛋白的复合物，复合物产物会导致热原反应使其无法应用于食品、医药等领域。物理降解法主要是利用微波、超声波、γ射线等物理方式处理降解壳聚糖，但是物理降解法也存在一定的局限性，目前也不容易实现产业化。现有技术中有采用电化学降解壳聚糖制备小分子壳聚糖，但是壳聚糖的脱乙酰度高，使得其结晶度高，高结晶度的壳聚糖使得电化学降解程度不受控，电解的壳聚糖分子量分布宽。

此外，现有技术中制备高脱乙酰度的壳聚糖，是采用高浓度氢氧化钠等强碱通过多次重复热处理，以达到高度脱乙酰的目的，该方法虽然可以制备高脱乙酰度的壳聚糖，但是重复使用强碱，使得高浓度碱的用量大，对环境不友好，且多次重复耗时，并且多次强碱处理会过度破坏壳聚糖的分子结构，还大大提高了后续降解过程中壳聚糖的结晶度、导致壳聚糖中分子量发生不可控变化，分子量分布宽，从而降低了壳聚糖的性能。

发明内容

本发明目的在于提供一种低分子壳聚糖的制备方法，最终制备的壳聚糖脱乙酰度高、分子量小且分布窄，蛋白质杂质低。

本发明目的通过如下技术方案实现：

一种低分子壳聚糖的制备方法，其特征在于：是先用质量浓度为2～5％的稀盐酸水溶液超声处理蟹壳进行脱钙，再加入去离子水将稀盐酸的质量浓度降至0.5～1％，随后加入质量浓度为0.5～3％的苯甲酸形成混合酸持续超声处理溶胀甲壳素，过滤后在固体不溶物中加入过量的质量浓度为8～12％的氢氧化钠热处理脱蛋白，洗涤后再用质量浓度为30～45％的氢氧化钠热处理脱乙酰得湿品壳聚糖，然后采用电解法降解壳聚糖，所述电解法是将湿品壳聚糖溶于质量浓度为0.01～0.05％的稀盐酸水溶液中，加入以石墨板作为阳极、泡沫钛作为阴极、银/氯化银电极作为参比电极的三电极体系中，阳极与阴极保持很定的间距为3～5cm，恒点电位为-1.2～-1.5V，电解0.5～1h。

本领域知晓甲壳素脱乙酰形成壳聚糖过程中，其结晶度随着脱乙酰度的升高呈先减小后增大的趋势：初始时，随着脱乙酰度上升，壳聚糖的结晶性呈减小趋势，当脱乙酰度达到85％以上时，壳聚糖的分子结构更加规整，从而结晶度增大。降解过程中，结晶区和非结晶区的降解存在不同步，非结晶区较结晶曲更容易被降解。当壳聚糖具有较高脱乙酰度时，则其结晶度增大，在降解过程中大量的结晶区存在使得降解时间长，非结晶区被有效降解时，结晶区降解不完全，当有效降解结晶区时，非结晶区的壳聚糖被过度降解，形成单糖、二聚糖等小分子，导致制备的低分子壳聚糖纯度和收率显著降低，且制备的壳聚糖分子量分布较宽。

现有技术中为了制备高脱乙酰度壳聚糖，会采用重复高浓度氢氧化钠热处理4～5次操作使脱乙酰度达到85％以上，但是这种操作不仅使用大量的氢氧化钠，重复步骤耗时，会破坏壳聚糖的分子结构，还使得在降解前壳聚糖的结晶度大，导致降解的均匀程度很难控制，制备的低分子壳聚糖的分子量大小及分布不受控，分子量分布很宽。即小分子壳聚糖同时具有高脱乙酰度和较小分子量分布是非常困难的。

本发明在保证高脱乙酰度同时，有效解决了分子量分布宽的问题：

本发明在制备湿品壳聚糖时采用质量浓度为0.5～1％的稀盐酸与质量浓度为0.5～3％的苯甲酸混合后在超声环境下溶胀甲壳素，低浓度氢氧化钠脱蛋白后，采用一步高浓度氢氧化钠脱乙酰，和现有技术采用多步高浓度氢氧化钠脱乙酰相比，本发明一步高浓度氢氧化钠脱乙酰可控制其脱乙酰度不会太高，从而保证了在电解前湿品壳聚糖的结晶度较低，同时壳聚糖的分子结构不被破坏。在电解前，溶胀的湿品壳聚糖表面及内部残留大量在采用高浓度氢氧化钠脱乙酰过程产生的还原性杂质以及氢氧化钠，在电解过程中，在电解作用下壳聚糖内部残留的氢氧化钠进一步脱乙酰，从而实现了脱乙酰和电解降解同时进行，脱乙酰形成结晶区的同时，电解降解消除结晶区，从而实现动态平衡，使得整个过程中始终保持较低的结晶度，从而缩短了结晶区和非结晶区的电解差异，有利于电解的均匀性，保证了电解降解的低分子壳聚糖具有较窄的分子量分布，避免了壳聚糖非结晶区被过度降解形成各种单糖、二糖等小分子。

此外，溶胀的湿品壳聚糖在电解前采用质量浓度为0.01～0.05％的盐酸溶解，一方面本领域公知可降低壳聚糖的结晶度，增加了非结晶区域，另一方面，低浓度的酸中的H⁺中和了湿品壳聚糖表面的氢氧化钠，剩余的H⁺来不及进入壳聚糖内部就与壳聚糖上的氨基形成缺电子微体系，保证了残留在壳聚糖内部的氢氧化钠不被H⁺完全中和，从而使得后续电解过程中进一步促进氢氧化钠持续脱乙酰，提高了最终壳聚糖的脱乙酰度；缺电子微体系的形成，增强了壳聚糖的吸电子能力，使得在电解过程中，阳极释放出的电子有效进攻电极附近的缺电子微体系，缺电子微体系中连接各单元的糖苷键吸收电子后，发生断裂，从而达到促进降解的作用；随着电解降解过程中壳聚糖分子量降低，氨基与H⁺结合能力减弱，小分子量的壳聚糖与H⁺形成的缺电子微体系吸电子能力降低，大分子壳聚糖的电解降解速率快于较小分子壳聚糖的电解降解速率，从而缩短了不同分子量的壳聚糖之间的降解差异，使得最终降解的低分子壳聚糖的分子量分布窄。

最终，本发明既提高了壳聚糖的脱乙酰度，同时又简化了氢氧化钠脱乙酰的重复步骤，减少了氢氧化钠的使用，还有效促进电解过程的均匀进行，并通过盐酸与壳聚糖不同分子量形成的缺电子微体系的吸电子能力差异，调节了电解过程中不同分子量的电解速率，使得电解降解的低分子壳聚糖的分子量分布窄。

电解过程中，湿品壳聚糖中残留的还原性杂质与湿品壳聚糖上的缺电子微体系产生电子竞争，消除了还原性杂质，使得制备的低分子壳聚糖纯度高，产率高。

进一步，上述电解法降解壳聚糖过程中湿品壳聚糖和质量浓度为0.01～0.05％稀盐酸水溶液的质量比为8～10:80～100。

进一步，所述稀盐酸超声处理蟹壳具体是将蟹壳清洗、干燥、破碎为直径0.5～1cm，加入质量浓度为2～5％稀盐酸水溶液，淹没蟹壳，开启超声，升温至40～50℃，保持2～3h。

进一步，质量浓度为0.5～1％的稀盐酸和质量浓度为0.5～3％的苯甲酸水溶液混合后持续超声1～2h，稀盐酸和苯甲酸的摩尔比为1:0.2～0.3。

对甲壳素进行溶胀处理，有助于氢氧化钠进入甲壳素内部，促进脱蛋白和脱乙酰。但是，甲壳素溶胀过程中，如果控制不好，溶胀的同时，甲壳素的大分子链会发生断裂，形成不同程度的溶解，导致去除酸液后收集的固体不溶物中甲壳素的分子分布宽、不均匀，对后续降解造成一定的负面影响，从而导致制备的低分子壳聚糖分子量分布宽，且甲壳素的溶解造成了甲壳素流失，降低了壳聚糖的收率。

本发明中稀释后的盐酸和苯甲酸形成强酸和弱酸的混合，在超声环境下对甲壳素进行温和持续溶胀，同时保证了甲壳素不发生分子链断裂和溶解，甲壳素大分子不被破坏，促进后期脱蛋白和脱乙酰的同时，不影响后续制备的低分子壳聚糖的分子量分布，此外，苯甲酸在超声及热处理过程中还能有效水解角质蛋白。

进一步，上述脱蛋白和脱乙酰具体是混合酸超声处理后过滤去除酸性液体后，将固体不溶物洗涤后加入质量浓度为8～12％的氢氧化钠水溶液充分脱蛋白，在80～90℃下热处理1～1.5h，过滤后用去离子水洗涤至中性，再加入质量浓度为30～45％的氢氧化钠水溶液，升温至85～95℃，反应1.5～2h，得湿品壳聚糖。

进一步，上述固体不溶物和质量浓度为8～12％的氢氧化钠水溶液的质量体积比为1g：2～4mL。

本发明采用混合酸在超声处理过程中，有效溶胀甲壳素，苯甲酸在超声环境下有效水解角质蛋白，再通过低浓度的氢氧化钠热处理过程中，促进低浓度的氢氧化钠达到全面、高效去除蛋白质，并缩短了碱处理的时间。

最具体的，一种低分子壳聚糖的制备方法，其特征在于，按如下步骤进行：

步骤一、制备湿品壳聚糖

(1)、酸处理

将蟹壳清洗、干燥、破碎为直径0.5～1cm，加入质量浓度为2～5％稀盐酸水溶液，淹没蟹壳，开启超声，升温至40～50℃，保持2～3h，然后加入去离子水，使得原稀盐酸的浓度降至0.5～1％，再加入质量浓度为0.5～3％的苯甲酸，与稀盐酸形成混合酸溶液，稀盐酸和苯甲酸的摩尔比为1:0.2～0.3，持续超声1～2h；

(2)、碱处理

过滤去除酸性液体后，在固体不溶物中加入质量浓度为8～12％的氢氧化钠水溶液，在80～90℃下热处理1～1.5h充分去除蛋白，过滤后用去离子水洗涤至中性，再加入质量浓度为30～45％的氢氧化钠水溶液，升温至85～95℃，反应1.5～2h脱乙酰，得溶胀的湿品壳聚糖；

步骤二、电解壳聚糖

(1)湿品壳聚糖预处理

将步骤1制备的湿品壳聚糖加入质量浓度为0.01～0.05％的稀盐酸水溶液中，湿品壳聚糖和稀盐酸水溶液的质量比为8～10:80～100；

(2)电解

将湿品壳聚糖的稀盐酸水溶液加入电解池，以石墨板作为阳极、泡沫钛作为阴极、银/氯化银电极作为参比电极的三电极体系中，阳极与阴极保持很定的间距为3～5cm，恒点电位为-1.2～-1.5V，电解反应时间为0.5～1h；

反应结束后，加入氢氧化钠调节pH值为9-10，再加入过量无水乙醇后生成沉淀，静置12后过滤、洗涤并干燥至恒重。

本发明具有如下技术效果：

本发明简化了脱乙酰过程氢氧化钠反复脱乙酰的过程，并减少了氢氧化钠的使用量，通过一步氢氧化钠脱乙酰结合电解制备的低分子壳聚糖脱乙酰度高达94.8％，分子量低，达到0.25万左右，分子量分布窄，分子量分布系数为1.13，低分子壳聚糖中蛋白质杂质含量低至0.072％，可有效应用于医药领域。

具体实施方式

下面通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是，以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术人员可以根据上述本发明内容对本发明作出一些非本质的改进和调整。

实施例1

一种低分子壳聚糖的制备方法，按如下步骤进行：

步骤一、制备湿品壳聚糖

(1)、酸处理

将蟹壳清洗、干燥、破碎为直径0.5～1cm，加入质量浓度为5％稀盐酸水溶液，淹没蟹壳，开启超声，升温至50℃，保持2h，然后加入去离子水，使得原稀盐酸的浓度降至1％，再加入质量浓度为0.5％的苯甲酸水溶液，与稀盐酸形成混合酸溶液，稀盐酸和苯甲酸的摩尔比为1:0.2，持续超声2h；

(2)、碱处理

过滤去除酸性液体后，在固体不溶物中加入质量浓度为12％的氢氧化钠水溶液，在90℃下热处理1h，过滤后用去离子水洗涤至中性，再加入质量浓度为45％的氢氧化钠水溶液，升温至85℃，反应2h，得溶胀的湿品壳聚糖；

步骤二、电解壳聚糖

(1)湿品壳聚糖预处理

将步骤1制备的湿品壳聚糖加入质量浓度为0.05％的稀盐酸水溶液中，湿品壳聚糖和稀盐酸水溶液的质量比为8:100；

(2)电解

将湿品壳聚糖的稀盐酸水溶液加入电解池，以石墨板作为阳极、泡沫钛作为阴极、银/氯化银电极作为参比电极的三电极体系中，阳极与阴极保持很定的间距为5cm，恒点电位为-1.5V，电解反应时间为0.5h。

电解完成后，加入氢氧化钠调节pH值为10，没有沉淀生成，再加入过量无水乙醇，生成沉淀后，静置12h后过滤，用无水乙醇洗涤，干燥至恒重。

实施例2

一种低分子壳聚糖的制备方法，按如下步骤进行：

步骤一、制备湿品壳聚糖

(1)、酸处理

将蟹壳清洗、干燥、破碎为直径0.5～1cm，加入质量浓度为2％稀盐酸水溶液，淹没蟹壳，开启超声，升温至40℃，保持3h，然后加入去离子水，使得原稀盐酸的浓度降至0.5％，再加入质量浓度为3％的苯甲酸水溶液，与稀盐酸形成混合酸溶液，稀盐酸和苯甲酸的摩尔比为1:0.3，持续超声1h；

(2)、碱处理

过滤去除酸性液体后，在固体不溶物中加入质量浓度为8～12％的氢氧化钠水溶液，在80℃下热处理1.5h，过滤后用去离子水洗涤至中性，再加入质量浓度为30％的氢氧化钠水溶液，升温至95℃，反应1.5h，得溶胀的湿品壳聚糖；

步骤二、电解壳聚糖

(1)湿品壳聚糖预处理

将步骤1制备的湿品壳聚糖加入质量浓度为0.01％的稀盐酸水溶液中，湿品壳聚糖和稀盐酸水溶液的质量比为10:80；

(2)电解

将湿品壳聚糖的稀盐酸水溶液加入电解池，以石墨板作为阳极、泡沫钛作为阴极、银/氯化银电极作为参比电极的三电极体系中，阳极与阴极保持很定的间距为3cm，恒点电位为-1.2V，电解反应时间为1h。

实施例3

一种低分子壳聚糖的制备方法，按如下步骤进行：

步骤一、制备湿品壳聚糖

(1)、酸处理

将蟹壳清洗、干燥、破碎为直径0.5～1cm，加入质量浓度为3％稀盐酸水溶液，淹没蟹壳，开启超声，升温至45℃，保持2.5h，然后加入去离子水，使得原稀盐酸的浓度降至0.8％，再加入质量浓度为1.5％的苯甲酸水溶液，与稀盐酸形成混合酸溶液，稀盐酸和苯甲酸的摩尔比为1:0.25，持续超声1.5h；

(2)、碱处理

过滤去除酸性液体后，在固体不溶物中加入质量浓度为10％的氢氧化钠水溶液，在85℃下热处理1.2h，过滤后用去离子水洗涤至中性，再加入质量浓度为30～45％的氢氧化钠水溶液，升温至90℃，反应1.8h，得溶胀的湿品壳聚糖；

步骤二、电解壳聚糖

(1)湿品壳聚糖预处理

将步骤1制备的湿品壳聚糖加入质量浓度为0.04％的稀盐酸水溶液中，湿品壳聚糖和稀盐酸水溶液的质量比为9:100；

(2)电解

将湿品壳聚糖的稀盐酸水溶液加入电解池，以石墨板作为阳极、泡沫钛作为阴极、银/氯化银电极作为参比电极的三电极体系中，阳极与阴极保持很定的间距为4cm，恒点电位为-1.3V，电解反应时间为0.8h。

电解完成后，加入氢氧化钠调节pH值为9，没有沉淀生成，再加入过量无水乙醇，生成沉淀后，静置12h后过滤，用无水乙醇洗涤，干燥至恒重。

对比例1

一种低分子壳聚糖的制备方法，按如下步骤进行：

步骤一、制备湿品壳聚糖

(1)、酸处理

将蟹壳清洗、干燥、破碎为直径0.5～1cm，加入质量浓度为3％稀盐酸水溶液，淹没蟹壳，开启超声，升温至45℃，保持3h；

(2)、碱处理

过滤去除酸性液体后，在固体不溶物中加入质量浓度为10％的氢氧化钠水溶液，在85℃下热处理2h，过滤后用去离子水洗涤至中性，再加入质量浓度为30～45％的氢氧化钠水溶液，升温至90℃，反应1.8h，过滤、洗涤至中性得大分子壳聚糖；

步骤二、电解壳聚糖

将大分子壳聚糖溶解在乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，并加入电解池，以石墨板作为阳极、泡沫钛作为阴极、银/氯化银电极作为参比电极的三电极体系中，阳极与阴极保持很定的间距为4cm，恒点电位为-1.3V，电解反应时间为0.8h。

反应结束后，加入氢氧化钠调节pH值为9，有沉淀产生，加入过量无水乙醇后生成沉淀量增加，静置12后过滤、洗涤并干燥至恒重。

电解完成后加入氢氧化钠，有沉淀生成，说明电解后的壳聚糖中存在不溶于水的壳聚糖，加入无水乙醇后沉淀量增加，说明电解后的壳聚糖中存在溶于水的壳聚糖；可见对比例1中的壳聚糖分子量分布较宽或者脱乙酰度较低。

蛋白质含量、分子量及其分布的测定：

采用GPC(凝胶渗透色谱)法测定本发明和对比例1制备的低分子壳聚糖的分子量及其分布，采用考马斯亮蓝法测定本发明和对比例1制备的低分子壳聚糖中蛋白质含量，结果如表1所示。

表1：本发明和对比例1制备的低分子壳聚糖的分子量及其分布。

序号	处理方法	平均分子量	分子量分布指数	蛋白质杂质含量
					1	本发明制备的湿品壳聚糖	21.12万	1.98	0.12％
2	本发明制备的低分子壳聚糖	0.25万	1.13	0.072％
					3	对比例1制备的低分子壳聚糖	0.94万	2.29	0.29％

从上述数据可知，本发明制备的低分子壳聚糖具有更小的分子量，分子量分布窄，且本发明制备的壳聚糖的蛋白质杂质含量为0.072％，远低于组织工程医药行业标准YY/T0606.7-2008规定的壳聚糖中杂质蛋白质质量分数≤0.2％的标准。

本发明采用酸碱实际滴定法测定壳聚糖的脱乙酰度，测定方法如下：

准确称取0.25g干燥至恒重的低分子量壳聚糖置于250mL三角瓶中，加人20mL0.1mol/L盐酸标准溶液，室温下磁力搅拌1h至全溶,加入10mL蒸馏水稀释，滴加3滴1％甲基橙指示剂。在磁力搅拌下，用0.1mo/L氢氧化钠标准溶液滴定，当溶液由红色变为黄色时即为滴定终点，本发明制备的低分子壳聚糖和对比例制备的低分子壳聚糖脱乙酰度如表2所示。

表2：本发明和对比例制备的低分子壳聚糖的脱乙酰度对比。

本领域知晓，工业壳聚糖的N-脱乙酰度一般在70％以上。N-脱乙酰度介于55～70％的是第脱乙酰度壳聚糖，介于70～85％的是中脱乙酰度壳聚糖，介于85～95％的是高脱乙酰度壳聚糖，达到95～100％的则是超高脱乙酰度壳聚糖。从上述数据可知，本发明制备的是高脱乙酰度壳聚糖。壳聚糖的脱乙酰度高低，直接关系到其溶解能力，粘度离子交换能力，絮凝能力及其与氨基有关的化学反应能力等多方应用。

Claims

1.一种低分子壳聚糖的制备方法，其特征在于：是先用质量浓度为2~5%的稀盐酸水溶液超声处理蟹壳，再加入去离子水将稀盐酸的质量浓度降至0.5~1%，随后加入质量浓度为0.5~3%的苯甲酸形成混合酸持续超声处理超声1~2h，稀盐酸和苯甲酸的摩尔比为1:0.2 ~0.3；过滤后在固体不溶物中加入过量的质量浓度为8~12%的氢氧化钠热处理脱蛋白，洗涤后再用质量浓度为30~45%的氢氧化钠热处理脱乙酰得湿品壳聚糖，然后采用电解法降解壳聚糖，所述电解法是将湿品壳聚糖溶于质量浓度为0.01~0.05%的稀盐酸水溶液中，加入以石墨板作为阳极、泡沫钛作为阴极、银/氯化银电极作为参比电极的三电极体系中，阳极与阴极保持很定的间距为3~5cm，恒点电位为-1.2~-1.5V，电解0.5~1h。

2.如权利要求1所述的一种低分子壳聚糖的制备方法，其特征在于：所述电解法降解壳聚糖过程中湿品壳聚糖和质量浓度为0.01~0.05%稀盐酸水溶液的质量比为8~10:80~100。

3.如权利要求1或2所述的一种低分子壳聚糖的制备方法，其特征在于：所述稀盐酸超声处理蟹壳具体是将蟹壳清洗、干燥、破碎为直径0.5~1cm，加入质量浓度为2~5%稀盐酸水溶液，淹没蟹壳，开启超声，升温至40~50℃，保持2~3h。

4.如权利要求1或2所述的一种低分子壳聚糖的制备方法，其特征在于：所述脱蛋白和脱乙酰具体是混合酸超声处理后过滤去除酸性液体后，将固体不溶物洗涤后加入质量浓度为8~12%的氢氧化钠水溶液充分脱蛋白，在80~90℃下热处理1~1.5h，过滤后用去离子水洗涤至中性，再加入质量浓度为30~45%的氢氧化钠水溶液，升温至85~95℃，反应1.5~2h，得湿品壳聚糖。

5.如权利要求3所述的一种低分子壳聚糖的制备方法，其特征在于：所述脱蛋白和脱乙酰具体是混合酸超声处理后过滤去除酸性液体后，将固体不溶物洗涤后加入质量浓度为8~12%的氢氧化钠水溶液充分脱蛋白，在80~90℃下热处理1~1.5h，过滤后用去离子水洗涤至中性，再加入质量浓度为30~45%的氢氧化钠水溶液，升温至85~95℃，反应1.5~2h，得湿品壳聚糖。