CN116711641B - 一种茶菊组培苗快速繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明属于植物组织培养领域，特别涉及一种用于茶菊组培苗快速繁殖的增殖培养基，所述增殖培养基以MS基本培养基为基础，并添加有：NAA、6‑BA、2,4‑D；以及使用该培养基的组培苗快速繁殖的方法，包括：将茶菊无菌苗的茎段接种于增殖培养基，进行不定芽增殖培养，从而得到不定芽。采用本发明提供的增殖培养基和组培苗快速繁殖的方法，仅用时约60天即可得到大量不定芽用于培养成为再生植株，繁殖效率非常高，并且成本低廉。
Description
技术领域
本发明属于植物组织培养领域，特别涉及一种茶菊组培苗快速繁殖的增殖培养基，以及使用该培养基的茶菊组培苗快速繁殖的方法。
背景技术
“玉台1号”作为获得国内首个茶用菊花(Chrysanthemum Ramat.)新品种权的新品种，由北京市农林科学院北京农业生物技术研究中心黄丛林研究团队培育而成，日前获得农业农村部植物新品种权。这是国内首个获得授权的茶菊新品种。目前，业内尚未建立起“玉台1号”的高效组培快繁体系，现有的快繁体系的繁殖系数仅为21.6，繁殖效率过低，并不适用于进行大规模工厂化育苗。
因此，在目前的科研和实践中，需要找到一种不定芽增殖率高、操作简便、成本低廉的“玉台1号”茶菊快速繁殖方法。
发明内容
为了解决现有技术中存在的上述问题，本发明提供了一种茶菊组培苗快速繁殖的增殖培养基，以及使用该培养基茶菊组培苗快速繁殖的方法。使用本发明提供的上述培养基和方法能够使“玉台1号”茶菊的外植体在短时间内产生大量不定芽用于快速繁殖。
本发明提供了一种用于茶菊组培苗快速繁殖的增殖培养基，所述增殖培养基以MS基本培养基为基础，并添加有：NAA、6-BA、2,4-D。
优选地，NAA在所述增殖培养基的终浓度为0.5～1.5mg/L，优选为1mg/L；
6-BA在所述增殖培养基的终浓度为4～6mg/L，优选为5mg/L；
2,4-D在所述增殖培养基的终浓度为0.05～0.15mg/L，优选为0.1mg/L。
本发明还提供了一种茶菊组培苗快速繁殖的方法，所述方法包括将茶菊无菌苗的茎段接种于增殖培养基，进行不定芽增殖培养，从而得到不定芽的不定芽增殖步骤；
其中，所述增殖培养以MS基本培养基为基础，并添加有：NAA、6-BA、2,4-D。
相比现有技术，本发明具有如下有益效果：
1、本发明通过对茶菊“玉台1号”无菌苗茎段进行不定芽增殖培养，仅用时约60天即可得到大量不定芽用于培养成为再生植株，繁殖效率特别高。
2、本发明的不定芽增殖培养中添加的NAA、6-BA、2,4-D，成本十分低廉。
3、本发明的各个步骤、参数之间协同作用，共同提高了茶菊“玉台1号”的繁殖效率。
4、本发明操作简便易行，成本低廉，适合广泛使用。
5、本发明在组培间进行，一年四季均可不间断操作，节约成本又高产。
附图说明
图1：实施例1步骤(2)不定芽增殖培养60天后单个茎段生出的不定芽的形态示意图。
图2：图1中单个茎段生出的不定芽移至培养皿中的形态示意图。
图3：将图1中的各个不定芽分开之后的形态示意图。
图4：对比例1步骤(2)不定芽增殖培养60天后单个茎段生出的不定芽和愈伤组织的形态示意图。
图5：图4中的培养物移至培养皿中的形态示意图。
图6：将图4中的各个不定芽分开之后的形态示意图。
图7：对比例2步骤(2)不定芽增殖培养60天后单个茎段生出的不定芽和愈伤组织的形态示意图。
图8：图7中愈伤组织移至培养皿中的形态示意图。
图9：对比例3步骤(2)不定芽增殖培养60天后单个茎段生出的不定芽和愈伤组织的形态示意图。
图10：图9中愈伤组织移至培养皿中的形态示意图。
具体实施方式
为使本发明的技术方案、目的和优点更加清楚，下面通过具体的实施例子对本发明做进一步的详细描述。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。
本发明第一方面提供了一种用于茶菊组培苗快速繁殖的增殖培养基。
根据本发明的第一方面，所述增殖培养基以MS基本培养基为基础，并添加有：NAA(萘乙酸)、6-BA(6-苄氨基嘌呤)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)。
根据本发明的第一方面，NAA在所述增殖培养基的终浓度为0.5～1.5mg/L，例如可以为0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4和1.5mg/L中的任意一个或两个之间的范围，例如0.5-1.1mg/L、0.6-0.9mg/L、0.7-1.3mg/L、0.8-1.4mg/L中的任意一个；优选为1mg/L。6-BA在所述增殖培养基的终浓度为4～6mg/L，例如可以为4、4.2、4.4、4.5、4.7、4.9、5、5.2、5.4、5.5、5.7、5.9和6mg/L中的任意一个或两个之间的范围，例如4-5.2mg/L、4.2-5.4mg/L、4.4-5.5mg/L、4.5-5.7mg/L、4.7-5.9mg/L、4.5-5.5mg/L中的任意一个；优选为5mg/L。2,4-D在所述增殖培养基的终浓度为0.05～0.15mg/L，例如可以为0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14和0.15mg/L中的任意一个或两个之间的范围，例如0.05-0.11mg/L、0.06-0.12mg/L、0.07-0.13mg/L、0.08-0.14mg/L、0.09-0.15mg/L、0.08-0.12mg/L中的任意一个；优选为0.1mg/L。
根据本发明的第一方面，所述茶菊的品种优选为“玉台1号”。
本发明第一方面提供的用于茶菊组培苗快速繁殖的增殖培养基在茶菊组培苗无菌苗快速繁殖中的应用也属于本发明的保护范围。
本发明第二方面提供了一种茶菊组培苗快速繁殖的方法，该方法包括将茶菊无菌苗的茎段接种于本发明第一方面提供的用于茶菊组培苗快速繁殖的增殖培养基中得到不定芽的操作。进一步地，再将获得的不定芽培养成为茶菊植株。
优选地，本发明第二方面提供的茶菊无菌苗快速繁殖的方法可以包括以下步骤：
步骤一、无菌苗的制备：
将灭菌后的外植体接种于MS基本培养基，进行无菌苗培养20～30天(优选25天)后，得到该茶菊无菌苗。
上述无菌苗培养的条件为：温度为22～26℃，光照强度为1000～2000Lx(优选为1500Lx)，光照时间为12～20h/d(优选为16h/d)。
其中，所述灭菌后的外植体可以采用如下方式制备得到：
(1)选取茶菊当年生健壮未开花的植株，去掉叶片，将茎部剪为带2-3个腋芽的茎段作为外植体；将该外植体加入体积比为3％的洗涤灵溶液中，浸泡15min；之后摇床震荡10min，用自来水冲洗30min，得到清洗后的外植体。
(2)在超净台中，将该清洗后的外植体转移到无菌组培瓶中，无菌水冲洗2～3次，用75％酒精溶液快速冲洗消毒后，用无菌水冲洗2～3次，转移至无菌吸水纸或无菌培养皿上待用；然后把该外植体在5％次氯酸钠溶液中消毒12～15min，用无菌水清洗3～5次，最后置于放有无菌吸水纸的无菌培养皿上，得到灭菌后的外植体。
步骤二、不定芽增殖培养：
取上述步骤一获得的茶菊无菌苗的茎段(不包括无菌苗的顶芽)，每个茎段保留2～3个腋芽，置于增殖培养基，进行不定芽增殖培养50～65天(优选60天)，得到不定芽。
所述增殖培养基为本发明上述第一方面提供的用于茶菊组培苗快速繁殖的增殖培养基，即：所述增殖培养基以MS基本培养基为基础，并添加有：NAA(萘乙酸)、6-BA(6-苄氨基嘌呤)、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)。
优选地，NAA在所述增殖培养基的终浓度为0.5～1.5mg/L，例如可以为0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2、1.3、1.4和1.5mg/L中的任意一个或两个之间的范围，例如0.5-1.1mg/L、0.6-0.9mg/L、0.7-1.3mg/L、0.8-1.4mg/L中的任意一个；优选为1mg/L。
优选地，6-BA在所述增殖培养基的终浓度为4～6mg/L，例如可以为4、4.2、4.4、4.5、4.7、4.9、5、5.2、5.4、5.5、5.7、5.9和6mg/L中的任意一个或两个之间的范围，例如4-5.2mg/L、4.2-5.4mg/L、4.4-5.5mg/L、4.5-5.7mg/L、4.7-5.9mg/L、4.5-5.5mg/L中的任意一个；优选为5mg/L。
优选地，2,4-D在所述增殖培养基的终浓度为0.05～0.15mg/L，例如可以为0.05、0.06、0.07、0.08、0.09、0.1、0.11、0.12、0.13、0.14和0.15mg/L中的任意一个或两个之间的范围，例如0.05-0.11mg/L、0.06-0.12mg/L、0.07-0.13mg/L、0.08-0.14mg/L、0.09-0.15mg/L、0.08-0.12mg/L中的任意一个；优选为0.1mg/L。
上述不定芽增殖培养的培养条件为：温度为22～28℃，优选为26℃；光照强度为1000～2500Lx，优选为1500Lx；光照时间为12～18h/d，优选为16h/d。
上述不定芽增殖培养50～65天后，得到的不定芽的数量是该茶菊无菌苗茎段数量的60倍以上，这些不定芽均可以用于下一步的生根。
步骤一的无菌苗的制备用时20～30天，步骤二的不定芽增殖培养用时50～65天，总用时70～95天，可见在较短时间内即可以获得大量不定芽，以用于组培苗的生产。
步骤三、不定芽生根：将上述步骤二获得的不定芽接种于生根培养基，进行生根培养，25～35天(优选为30天)后，得到组培苗(即再生植株)。
上述生根培养基为：以1/2MS基本培养基为基础，添加NAA至终浓度为0.02～0.3mg/L，优选为0.05mg/L。
上述生根培养的培养条件为：温度为22～26℃，优选为25℃；光照强度为1500～2500Lx，优选为2000Lx；光照时间为12～18h/d，优选为16h/d。
通过步骤三的操作，90％以上的不定芽都能生根成为组培苗。
步骤四、炼苗驯化：将上述步骤三获得的组培苗进行炼苗处理5～10天(优选为5天)后，清洗干净再移至放置有生长基质的平盘中进行驯化处理。驯化处理7～14天(优选为14天)后，得到茶菊植株，该茶菊植株即可用于定植。
上述生长基质包括：炭土和蛭石粉末。其中，炭土和蛭石粉末的质量比为(0.5～1.5)：(1.5～3)，优选为1：2。
上述驯化处理的温度为22～30℃，前10天(早期)的湿度为50～70％(优选为50％)，10天之后(或者称为晚期)的湿度为50～60％(优选为60％；)驯化处理过程中逐渐加大通风量。
通过步骤四的炼苗驯化操作，95％以上的组培苗能够定植成活。
根据本发明的第二方面，所述茶菊的品种优选为“玉台1号”。
本发明中采用的MS基本培养基(不含琼脂)的成分及含量为：
大量元素，包括：
硝酸钾(KNO3)：1900mg/L，硝酸铵(NH4NO3)：1650mg/L，硫酸镁(MgSO4·7H2O)：370mg/L，磷酸二氢钾(KH2PO4)：170mg/L，氯化钙(CaCl2·2H2O)：440mg/L。
微量元素，包括：
硫酸锰(MnSO4·H2O)：16.9mg/L，硫酸锌(ZnSO4·7H2O)：8.6mg/L，硼酸(H3BO3)：6.2mg/L，碘化钾(KI)：0.83mg/L，钼酸钠(Na2MoO4·2H2O)：0.25mg/L，硫酸铜(CuSO4·5H2O)：0.025mg/L，氯化钴(CoCl2·6H2O)：0.025mg/L。
铁盐，包括：
二水合乙二胺四乙酸二钠(Na2-EDTA)：37.3mg/L，硫酸亚铁(FeSO4·4H2O)：27.8mg/L。
有机物，包括：
甘氨酸：2.0mg/L，盐酸吡哆醇：0.5mg/L，盐酸硫胺素：0.1mg/L，烟酸：0.5mg/L，肌酸：100mg/L。
蔗糖：30g/L，琼脂5g/L。
本发明中采用的1/2MS基本培养基，是在上述MS基本培养基的基础上，将大量元素的含量减至1/2，其他成分不变。
本发明中采用的MS基本培养基和1/2MS基本培养基的pH值均为5.8～6.0。
下述实施例中所使用的各种试剂、材料等，若无特别说明，均为可以从商业渠道获得的产品；下述实施例中所使用的各种测试、检测方法若无特别说明，均为本领域中的常规测试、检测方法，均可以从教科书、工具书或学术期刊中获得。
实施例1
本实施例用来说明本发明提供的茶菊无菌苗快速繁殖的方法，包括以下步骤：
(1)无菌苗的制备：将灭菌后的“玉台1号”茶菊外植体接种于MS基本培养基，进行无菌苗培养25天后，得到“玉台1号”茶菊无菌苗。其中，无菌苗培养的条件为：温度控制在22～26℃，光照强度为1500Lx，光照时间为16h/d。图1示出了步骤(1)获得的无菌苗。
其中，灭菌后的“玉台1号”茶菊外植体采用如下方式制备得到：
选取“玉台1号”茶菊当年生健壮未开花的植株，去掉叶片，将茎部剪为带2～3个腋芽的茎段作为外植体；将外植体加入体积比为3％的洗涤灵溶液中，浸泡15min；之后摇床震荡10min，用自来水冲洗30min。在超净台中将清洗后的外植体转移到无菌组培瓶中，无菌水冲洗2～3次，用75％酒精溶液快速冲洗消毒后，用无菌水冲洗2～3次，转移至无菌吸水纸上或无菌培养皿上待用；然后在5％次氯酸钠溶液中消毒12～15min，用无菌水清洗3～5次，最后置于放有无菌吸水纸的无菌培养皿上，得到灭菌后的外植体。
(2)不定芽增殖培养：取上述步骤(1)获得的“玉台1号”茶菊无菌苗置于增殖培养基，进行不定芽增殖培养60天后，得到“玉台1号”茶菊不定芽。
不定芽增殖培养所采用的培养基为：以MS基本培养基为基础，添加NAA 1mg/L，6-BA 5mg/L，2,4-D 0.1mg/L。不定芽增殖培养的条件为：温度26℃，光照强度1500Lx，光照时间16h/d。
不定芽增殖培养60天后，得到的不定芽的数量是“玉台1号”茶菊无菌苗茎段的数量的98倍，这些不定芽均可用于下一步的生根。
图1示出了步骤(2)中不定芽增殖培养60天后得到的不定芽，可见不定芽增殖培养60天后，同一个茎段生长出了大量不定芽。图2示出了将图1的不定芽转移至培养皿中的情形。图3示出了将图2中的各个不定芽分开之后的情形，可见不定芽增殖培养60天后，该茎段长出了98个不定芽，这些不定芽都可以用于之后的生根。由此可见本发明中采用的上述增殖培养基能够达到快速、高效的繁殖茶菊的效果。
(3)不定芽生根：将上述步骤(2)获得的“玉台1号”茶菊不定芽接种于生根培养基，进行生根培养30天后，经统计发现有92％的不定芽可以生根得到“玉台1号”茶菊组培苗(即再生植株)。
不定芽生根所采用的生根培养基为：以1/2MS基本培养基为基础，添加NAA0.05mg/L。不定芽生根的培养条件为：温度为25℃，光照强度为2000Lx，光照时间为16h/d。
(4)炼苗驯化步骤：将上述步骤(3)获得的“玉台1号”茶菊组培苗进行炼苗处理5天后，清洗干净再移至放置有生长基质(质量比为1：2的炭土和蛭石粉末)的平盘汇总进行驯化处理。驯化处理的温度为22～30℃，前10天(早期)的湿度约为50％，之后(晚期)的湿度约为60％，驯化处理过程中逐渐加大通风量。驯化14天后，经统计发现有96％的组培苗可以形成用于定植的“玉台1号”茶菊植株。
实施例2：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
步骤(1)中：
将灭菌后的“玉台1号”茶菊外植体接种于MS基本培养基，进行无菌苗培养20天。
步骤(2)中：
不定芽增殖培养所采用的培养基为：以MS基本培养基为基础，添加NAA 0.5mg/L，6-BA 4mg/L，2,4-D 0.05mg/L。不定芽增殖培养的条件为：温度22℃，光照强度2000Lx，光照时间12h/d。
进行不定芽增殖培养50天后，得到的不定芽的数量是“玉台1号”茶菊无菌苗茎段的数量的72倍，这些不定芽均可用于下一步的生根。
步骤(3)中：
不定芽生根所采用的生根培养基为：以1/2MS基本培养基为基础，添加NAA 0.1mg/L。不定芽生根的培养条件为：温度为22℃，光照强度为1500Lx，光照时间为12h/d。
进行生根培养25天后，经统计发现有90％的不定芽可以生根得到“玉台1号”茶菊组培苗(即再生植株)。
步骤(4)中：
将上述步骤(3)获得的“玉台1号”茶菊组培苗进行炼苗处理7天，之后再进行驯化处理10天，95％的组培苗可以形成用于定植的“玉台1号”茶菊植株。
实施例3：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
步骤(1)中：
将灭菌后的“玉台1号”茶菊外植体接种于MS基本培养基，进行无菌苗培养30天。
步骤(2)中：
不定芽增殖培养所采用的培养基为：以MS基本培养基为基础，添加NAA 1.5mg/L，6-BA 6mg/L，2,4-D 0.15mg/L。不定芽增殖培养的条件为：温度25℃，光照强度2000Lx，光照时间16h/d。
进行不定芽增殖培养65天后，得到的不定芽的数量是“玉台1号”茶菊无菌苗茎段的数量的61倍，这些不定芽均可用于下一步的生根。
步骤(3)中：
不定芽生根所采用的生根培养基为：以1/2MS基本培养基为基础，添加NAA 0.2mg/L。不定芽生根的培养条件为：温度为26℃，光照强度为2000Lx，光照时间为16h/d。
进行生根培养35天后，经统计发现有96％的不定芽可以生根得到“玉台1号”茶菊组培苗(即再生植株)。
步骤(4)中：
将上述步骤(3)获得的“玉台1号”茶菊组培苗进行炼苗处理10天，之后再进行驯化处理14天，98％的组培苗可以形成用于定植的“玉台1号”茶菊植株。
实施例4：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
步骤(2)中：
不定芽增殖培养所采用的培养基为：以MS基本培养基为基础，添加NAA 0.5mg/L，6-BA 6mg/L，2,4-D 0.05mg/L。
进行不定芽增殖培养60天后，得到的不定芽的数量是“玉台1号”茶菊无菌苗茎段的数量的86倍，这些不定芽均可用于下一步的生根。
步骤(3)中：
进行生根培养30天后，经统计发现有96％的不定芽可以生根得到“玉台1号”茶菊组培苗(即再生植株)。
步骤(4)中：
将上述步骤(3)获得的“玉台1号”茶菊组培苗进行炼苗处理7天，之后再进行驯化处理14天，96％的组培苗可以形成用于定植的“玉台1号”茶菊植株。
实施例5：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
步骤(2)中：
不定芽增殖培养所采用的培养基为：以MS基本培养基为基础，添加NAA 1.5mg/L，4-BA 6mg/L，2,4-D 0.15mg/L。
进行不定芽增殖培养60天后，得到的不定芽的数量是“玉台1号”茶菊无菌苗茎段的数量的82倍，这些不定芽均可用于下一步的生根。
步骤(3)中：
进行生根培养30天后，经统计发现有98％的不定芽可以生根得到“玉台1号”茶菊组培苗(即再生植株)。
步骤(4)中：
将上述步骤(3)获得的“玉台1号”茶菊组培苗进行炼苗处理7天，之后再进行驯化处理14天，97％的组培苗可以形成用于定植的“玉台1号”茶菊植株。
实施例6：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
步骤(2)中：
不定芽增殖培养所采用的培养基为：以MS基本培养基为基础，添加NAA 1.2mg/L，4-BA 5.5mg/L，2,4-D 0.12mg/L。
进行不定芽增殖培养60天后，得到的不定芽的数量是“玉台1号”茶菊无菌苗茎段的数量的93倍，这些不定芽均可用于下一步的生根。
步骤(3)中：
进行生根培养30天后，经统计发现有98％的不定芽可以生根得到“玉台1号”茶菊组培苗(即再生植株)。
步骤(4)中：
将上述步骤(3)获得的“玉台1号”茶菊组培苗进行炼苗处理7天，之后再进行驯化处理14天，98％的组培苗可以形成用于定植的“玉台1号”茶菊植株。
对比例1：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
实施例1步骤(2)的增殖培养基中，以MS培养基为基础，添加NAA 0.5mg/L，6-BA3mg/L，2,4-D 0.1mg/L。
图4示出了步骤(2)中不定芽增殖培养60天后得到的不定芽。图5示出了将图4的培养物移至培养皿中。图6示出了将图4中的各个不定芽分开之后的情形，可见不定芽增殖培养60天后，该茎段仅长出了25个不定芽，该不定芽为丛生畸形变异叶相不定芽，不定芽基部着生大量淡绿色且泛白的团状愈伤组织，边缘玻璃化；叶相伴有加厚、矮小、肥大的畸形变异特征。
对比例2：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
实施例1步骤(2)的增殖培养基中，以MS培养基为基础，添加NAA 0.5mg/L，6-BA1mg/L，2,4-D 0.1mg/L。
图7示出了步骤(2)中不定芽增殖培养60天后得到的不定芽，明显可见数量较少且畸形。图8示出了将图7的培养物中的愈伤组织移至培养皿中，可见淡绿色团状愈伤组织，表层泛白、少量褐化且边缘玻璃化；诱导生出极少量5-8株畸形非正常不定芽，表现多为叶面朝向背面卷曲、不规则化、叶片肥厚、不定芽矮小，极个别不定芽玻璃化、黄化枯死。
对比例3：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
实施例1步骤(2)的增殖培养基中，以MS培养基为基础，添加NAA 0.5mg/L，6-BA2mg/L，2,4-D 0.1mg/L。
图9示出了步骤(2)中不定芽增殖培养60天后得到的不定芽，明显可见数量较少。图10示出了将图9的培养物中的愈伤组织移至培养皿中，可见可见大量玻璃化、褐化并伴有少量黄绿色的团状愈伤组织，诱导生出直径约1.5cm黄化、矮小、肥厚的畸形丛生芽。
对比例4：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
步骤(1)中：
将灭菌后的“玉台1号”茶菊外植体接种于MS基本培养基，进行无菌苗培养30天。
步骤(2)中：
不定芽增殖培养所采用的培养基为：以MS基本培养基为基础，添加NAA 2mg/L，6-BA 7mg/L，2,4-D 0.15mg/L。不定芽增殖培养的条件为：温度26℃，光照强度2500Lx，光照时间16h/d。
进行不定芽增殖培养65天后，得到的不定芽的数量是“玉台1号”茶菊无菌苗茎段的数量的29倍，这些不定芽均可用于下一步的生根。
步骤(3)中：
不定芽生根所采用的生根培养基为：以1/2MS基本培养基为基础，添加NAA 0.3mg/L。不定芽生根的培养条件为：温度为25℃，光照强度为1500Lx，光照时间为16h/d。
进行生根培养30天后，经统计发现有93％的不定芽可以生根得到“玉台1号”茶菊组培苗(即再生植株)。
步骤(4)中：
将上述步骤(3)获得的“玉台1号”茶菊组培苗进行炼苗处理7天，之后再进行驯化处理14天，97％的组培苗可以形成用于定植的“玉台1号”茶菊植株。
对比例5：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
实施例1步骤(2)的增殖培养基中，以MS培养基为基础，添加NAA1mg/L，6-BA 5mg/L，2,4-D 0.25mg/L。
步骤(2)中，在不定芽增殖培养60天后，仅有愈伤组织产生，无不定芽出现。
对比例6：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
实施例1步骤(2)的增殖培养基中，以MS培养基为基础，添加NAA 0.4mg/L，6-BA5mg/L，2,4-D 0.1mg/L。
步骤(2)中，在不定芽增殖培养60天后，仅有愈伤组织产生，无不定芽出现。
对比例7：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
实施例1步骤(2)的增殖培养基中，以MS培养基为基础，添加NAA 1mg/L，6-BA 7mg/L，2,4-D 0.1mg/L。
步骤(2)中，在不定芽增殖培养60天后，得到的不定芽的数量是“玉台1号”茶菊无菌苗茎段的数量的13倍。
对比例8：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
实施例1步骤(2)的增殖培养基中，以MS培养基为基础，添加NAA 1mg/L，6-BA 5mg/L。
步骤(2)中，在不定芽增殖培养60天后，得到的不定芽的数量是“玉台1号”茶菊无菌苗茎段的数量的18倍。
对比例9：
除了以下操作和参数之外，其余均与实施例1相同：
实施例1步骤(2)的增殖培养基中，以MS培养基为基础，添加NAA 0.1mg/L，6-BA1.5mg/L。
步骤(2)中，在不定芽增殖培养60天后，得到的不定芽的数量是“玉台1号”茶菊无菌苗茎段的数量的19倍。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (19)
1.一种茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述方法包括将茶菊无菌苗的茎段接种于增殖培养基，进行不定芽增殖培养，从而得到不定芽的不定芽增殖步骤；
其中，所述增殖培养基以MS基本培养基为基础，并添加有：NAA、6-BA、2,4-D，其中：
NAA在所述增殖培养基中的终浓度为0.5～1.5mg/L；
6-BA在所述增殖培养基中的终浓度为4～6mg/L；
2,4-D在所述增殖培养基中的终浓度为0.05～0.15mg/L；
其中，所述茶菊的品种为“玉台1号”。
2.根据权利要求1所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
NAA在所述增殖培养基中的终浓度为1 mg/L；
6-BA在所述增殖培养基中的终浓度为5 mg/L；
2,4-D在所述增殖培养基中的终浓度为0.1mg/L。
3.根据权利要求2所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述不定芽增殖培养的时间为50～65天。
4.根据权利要求3所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述不定芽增殖培养的时间为60天。
5.根据权利要求3所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述不定芽增殖培养中，培养条件包括：温度为22～28℃，光照强度为1000～2500Lx，光照时间为12～18 h/d。
6.根据权利要求3所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述不定芽增殖培养中，培养条件包括：温度为26℃，光照强度为1500Lx，光照时间为16 h/d。
7.根据权利要求3所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述方法还包括不定芽生根培养的步骤：将不定芽接种于生根培养基，进行生根培养，得到组培苗。
8.根据权利要求7所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述生根培养基中含有：以1/2 MS基本培养基为基础，添加NAA至终浓度为0.02～0.3mg/L。
9.根据权利要求8所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述生根培养基中含有：以1/2 MS基本培养基为基础，添加NAA至终浓度为0.05 mg/L。
10.根据权利要求7所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述不定芽生根培养中，培养条件包括：温度为22～26℃，光照强度为1500～2500Lx，光照时间为12～18 h/d。
11.根据权利要求10所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述不定芽生根培养中，培养条件包括：温度为25℃，光照强度为2000Lx，光照时间为16 h/d。
12.根据权利要求10或11所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述不定芽生根培养的时间为25～35天。
13.根据权利要求12所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述不定芽生根培养的时间为30天。
14.根据权利要求10所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述方法还包括炼苗驯化的步骤：将所述组培苗进行炼苗处理，再移至生长基质中进行驯化处理，得到茶菊植株。
15.根据权利要求14所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述生长基质包括炭土和蛭石粉末，所述炭土和蛭石粉末的质量比为（0.5～1.5）：（1.5～3）。
16.根据权利要求15所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述炭土和蛭石粉末的质量比为1：2。
17.根据权利要求14所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述驯化处理的温度为22～30℃。
18.根据权利要求17所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述驯化处理的前10天的湿度为50～70%，10天之后的湿度为50～60%。
19.根据权利要求18所述的茶菊组培苗快速繁殖的方法，其特征在于：
所述驯化处理的前10天的湿度为50%，10天之后的湿度为60%。
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