CN116685297A - 齿面着色用组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种齿面着色用组合物及包含其的齿面着色剂，其特征在于，根据本发明的齿面着色用组合物不仅可以对齿面细菌膜(生物膜)进行着色(染色)，还可以对齿面细菌膜的预计形成区域即获得性膜进行着色(染色)，通过分析本发明核黄素5‑磷酸钠发散的荧光的颜色和强度，可以获得多种关于齿面细菌膜的量和性质的信息，特别是期待可有效使用于观察初期的齿面细菌膜。
Description
技术领域
本发明涉及齿面着色用组合物，具体而言涉及一种包含核黄素5-磷酸钠的齿面着色用组合物。
背景技术
一般而言，大量的细菌总是通过食物进入人体口腔，口腔内高温潮湿，因此为细菌提供了适宜的繁殖场所。
口腔中的细菌分解食物中糖和淀粉中的碳水化合物，破坏围绕牙齿的组织。这些细菌不断持续附着在牙齿表面，形成无色的薄膜，称之为齿面细菌膜。
这种齿面细菌膜因新细菌和现有细菌的增殖以及细菌与宿主的代谢物的堆积导致块体越变越大，是引发蛀牙、风齿、口臭和牙龈疾病的主要原因。这不能通过口腔的自我清洁作用(即通过唾液)去除，只能通过刷牙等物理方法去除。如果忽视刷牙，细菌就不能明确地去除，而是残留在牙龈和牙齿之间或牙齿之间，随着时间的流逝，细菌会附着在牙齿上，再次形成齿面细菌膜。
另一方面，齿面细菌膜可以由齿面的称为齿面细膜或获得性膜的薄的膜形成。目前，已经开发出利用光学装置确认齿面细菌膜的方法，但现有技术存在着无法观察到刚形成或预期形成的初期齿面细菌膜的问题。另外，在使用化学着色产品确认齿面细菌膜的方法的情况下，由于使用后的残留物质，美观性差，存在需要直接物理地去除化学着色产品附着的齿面细菌膜的不便。
发明内容
技术问题
发明人经过深入研究，开发了一种能够观察齿面细菌的预计形成区域和初期齿面细菌膜的齿面着色用组合物。结果，查明核黄素5-磷酸钠不仅可着色于生物膜，还可以着色于获得性膜，从而完成了本发明。
因此，本发明的目的是提供包含核黄素5-磷酸钠的齿面着色用组合物。
本发明的另一目的是提供包含含有核黄素5-磷酸钠的齿面着色用组合物的齿面着色剂。
解决问题的手段
发明人经过深入研究，开发了一种能够观察齿面细菌的预计形成区域和初期齿面细菌膜的齿面着色用组合物。结果，查明核黄素5-磷酸钠不仅可着色与生物膜，还可以着色于获得性膜。
本发明涉及包含核黄素5-磷酸钠的齿面着色用组合物及包含所述齿面着色用组合物的齿面着色剂。
下面对于本发明进行更为详细的说明。
本发明的一实施方式涉及包含核黄素5-磷酸钠的齿面着色用组合物。
本发明中“核黄素5-磷酸钠”用下面化学式1表示，具有分子式C17H24N4NaO11P和分子量514.4，意为作为天然生成的维生素B复合物的主要生长促进因子的核黄素的磷酸钠盐形态。
作为核黄素5-磷酸钠盐的具体例子，可以是核黄素5-磷酸钠盐二水合物或核黄素5-磷酸钠盐水合物，但不限于此。
化学式1
所述组合物可以对齿面细菌膜或获得性膜进行着色(染色)。
在本发明中“齿面细菌膜”也称牙菌斑，是形成作为蛀牙和牙周病的主要原因的牙垢的初始物质，意为细菌附着在获得性膜形成群体的状态。
在本发明中“获得性膜”是形成于齿面、修复体、牙石、人造物体等表面的无结构、无细胞性的有机体膜，即使刷牙也能在数分钟内重新形成，对牙齿起到防止酸的影响的保护作用，另一方面意为着细菌附着于牙齿上时起到重要作用的后天性薄膜。
本发明对于获得用所述化学式1表示的核黄素5-磷酸钠的方法没有特别的限制，可以利用本领域已知的方法化学合成或使用市售的物质。
所述核黄素5-磷酸钠的存在可以是溶剂化的形态，也可以是非溶剂化的形态。本发明的核黄素5-磷酸钠可以以结晶型或无定型形态存在，所有这些物理形态都包括在本发明的范围内。
所述核黄素5-磷酸钠在水溶液中生成带负电荷的核黄素磷酸盐，这种材料可以在齿面细菌膜及获得性膜上静电结合。
此时，核黄素磷酸盐用405nm的光照射时，根据浓度发散淡绿色至红色光的荧光，因此用本发明的组合物处理后用405nm照射时，可以观察齿面细菌膜待形成区域和初期的齿面细菌膜。
所述核黄素5-磷酸钠的浓度可以是0.1mg/ml至50.0mg/ml、0.1mg/ml至40.0mg/ml、0.1mg/ml至30.0mg/ml、0.1mg/ml至20.0mg/ml、0.1mg/ml至10.0mg/ml、0.1mg/ml至5.0mg/ml、0.1mg/ml至4.0mg/ml、0.1mg/ml至3.0mg/ml、0.1mg/ml至2.0mg/ml或0.1mg/ml至1.0mg/ml。所述核黄素5-磷酸钠的浓度不足0.1mg/ml时，由于荧光强度太低，则可能观察不到齿面细菌膜。另外，所述核黄素5-磷酸钠的浓度超过50.0mg/ml时，由于荧光材料的消光效果，会出现荧光强度反而降低以及残留物可能损害美观的结果。
另一方面，本发明的核黄素5-磷酸钠是食品医药品安全处认证的食品添加剂及水溶性维生素(没有服用剂量限制)，因此具有可以安全地用作作为口腔用组合物的齿面着色用组合物的优点。
另外，如上所述，本发明的核黄素5-磷酸钠只有405nm的光照射时，才会发散荧光，无需单独的清洗，与将发出荧光的化学着色产品涂在齿面进行确认，确认后必须伴随单独的清洗过程的现有着色组合物相比，具有使用简便和美观的优点。
本发明的齿面着色用组合物的剂型没有特别的限制，可以是粉末、颗粒、片剂、乳液、气雾、软胶囊或硬胶囊、无菌注射液或无菌粉末的形态，且可以另外含有分散剂或稳定剂。
本发明的齿面着色用组合物，根据剂型及使用目的可包含通常使用的研磨剂、润湿剂、发泡剂、粘合剂、甜味剂、pH调节剂、防腐剂、药效成分、香料、增白剂、色素、溶剂等。
本发明另一形态涉及包括含有核黄素5-磷酸钠的齿面着色用组合物的齿面着色剂。
本发明的“齿面着色剂”是指用于对齿面细菌膜(牙菌斑)或获得性膜等进行着色(染色)的制剂。
所述齿面着色剂的剂型没有特别的限制，可以是液体、凝胶、霜、薄膜、贴剂、粉末、片剂或固体的制剂。
上述本发明的齿面着色用组合物及所述齿面着色剂之间共同的内容的记载被省略，以避免在本说明书中过度的复杂性。
发明效果
本发明涉及一种齿面着色用组合物及包含其的齿面着色剂，其特征在于，根据本发明的齿面着色用组合物，不仅可以对齿面细菌膜(生物膜)进行着色(染色)，还可以对齿面细菌膜的预计形成区域，即获得性膜进行着色(染色)，可以通过分析本发明核黄素5-磷酸钠发散的荧光的颜色和强度，可以获得多种关于齿面细菌膜的量和性质的信息，特别期待可以有效地用于观察初期的齿面细菌膜。
附图说明
图1是对根据本发明的一实施例的组合物的荧光强度进行评价的结果，图1a是用Qraycam Pro(AIOBIO，韩国首尔(Seoul,Korea))拍摄的图(左侧：白光，右侧：蓝光)，图1b是用荧光光谱仪测量结果的曲线图。
图2呈现了对根据本发明的一实施例的组合物的获得性膜染色的评价结果(左侧：白光，右侧：蓝光)。
图3呈现了对根据本发明的一实施例的组合物的变形链球菌(Streptococcusmutans)生物膜的染色评价结果(左侧半圆：对照组，右侧半圆：实验组)。
图4呈现了对根据本发明的一个实施例的组合物的多菌性生物膜的染色评价结果(左侧半圆：对照组，右侧半圆：实验组)。
具体实施方式
在下文中，通过实施例对本发明进行更为详细地描述。这些实施例仅用于更详细地解释本发明，根据本发明的主旨，本发明的范围不受这些实施例的限制，对于本领域技术人员来说这是显而易见的。
实验例1.评价核黄素5-磷酸钠(以下RPS)的荧光强度。
为无菌蒸馏水(DW,①)、漱口水(GG，呼吸绿色漱口水，②)、唾液(S(F-X)，③)及过滤唾液(S(F-O),④)配制100mg/ml RPS储存溶液后，以100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.5、0.78、0.39、0.19及0.1mg/ml浓度稀释并制备成板。
将制作的各个板用Qraycam Pro(AIOBIO，韩国首尔)拍摄并获得白光及蓝光影像。然后利用荧光光谱仪(Varioskan,Excitation＝405nm/Emission＝520nm)测量荧光强度。
从图1a、图1b可确认，作为图像肉眼评估的结果，白光(图1a的左侧)和蓝光(图1a的右侧)图像的全部中溶剂之间的荧光未见差异，并且可以了解到从高浓度(100mg/ml)到低浓度(0.01mg/ml)，荧光颜色从红色变为绿色。
另外，利用荧光光谱仪测量每个浓度的RPS的荧光强度结果，从0.01mg/ml至0.39mg/ml，荧光强度呈现增大后再减小的趋势。这种增减趋势并没有因溶剂而异，并且在所有溶剂中0.4mg/ml的浓度下确认了最大荧光强度(图1b)。
实验例2.对RPS的获得性膜(AP)的染色评价
为了评价RPS也是否对作为唾液成分的获得性膜染色，进行了如下实验。
将牛牙浸入人工唾液中4小时，形成了人工获得性膜。将形成获得性膜的样本浸入2T(2-Tone)、RPS50(RPS 50mg/ml)和RPS0.4(RPS0.4mg/ml)中。浸泡后，用蒸馏水进行3次水洗。然后，(使用Qraycam Pro)拍摄使用染色剂即刻后((Application)、在第1次洗涤后(1stwashing)、第2次洗涤后(2nd washing)、第3次洗涤后(3rd washing)的图像，确认了各阶段的染色程度。
[通过将临床实践中使用的牙菌斑染色剂(2-Tone(2T))稀释至10％的浓度，设为对照组，作为实验组以所述实验例1的结果为基础，将实验组设为2个浓度：RPS完全溶解的最高浓度50mg/ml和荧光强度最强的0.4mg/ml。]
从图2中可以看出，在使用染色剂的即刻后RPS50及RPS0.4的获得性膜都被染色。第三次洗涤后的RPS50只有在蓝光(图2的右侧)观察到荧光，RPS0.4洗涤后荧光消失了。特别是RPS50显示出荧光从水洗前的红色变为水洗后的黄色的特征。
这些结果意味着，根据附着在齿面细菌膜上的RPS的残留量，会显示不同的荧光，因此通过分析RPS发散的荧光的颜色和强度，可以获得更多关于齿面细菌膜量和性质的信息。
实验例3.对RPS的变形链球菌(Streptococcus mutans)生物膜的染色评价。
由于S.mutans是口腔中的主要病原菌并能很好地形成生物膜，为了使用单一菌种S.mutans生物膜模型评估对生物膜的RPS染色程度，进行了以下实验。
在牛牙标本上形成获得性膜后，接种S.mutans种子。如同实验例2，分为3组(2T、RPS50、RPS0.4)，每组形成成熟24、48、72小时的生物膜。然后，按照时间(24、48和72小时)在生物膜染色即刻后(No washing)及第三次清洗后(After washing 3times)拍摄QraycamPro影像。此时，将所述实验例2的获得性膜的实验结果图像作为对照图像使用。
如从图3中可以确认的，呈现出使用染色剂即刻后，RPS50在标本整体显示红色荧光，第3次水洗后，随着培养时间的增加，从黄色荧光变为黄色+红色荧光的特点。
另外，使用染色剂即刻后，在RPSO.424小时生物膜上只观察到浅浅的黄色荧光，在48小时及72小时的生物膜标本中心部位观察到红色荧光。第三次清洗后的24小时生物膜中几乎未显示荧光，在48小时生物膜上观察到浅浅的黄色荧光，在72小时生物膜上观察到一点红色荧光。
这些结果意味着，根据附着在齿面细菌膜上的RPS的残留量及齿面细菌膜的成熟度，会各自显示不同的荧光，因此通过分析RPS发散的荧光的颜色和强度，可以获得更多关于齿面细菌膜的成熟度、量及性质的信息。
实验例4.对RPS的Microcosm生物膜的染色评价。
由于口腔中的牙菌斑是一个多菌性微生物群落，因此进行了以下实验，以使用模拟它的多菌性microcosm生物膜模型评价生物膜的RPS染色程度。
用刺激性唾液接种牛牙标本以形成多菌性生物膜。如同所述实验例2分为3组(2T，RPS50及RPS0.4)，且每组应用到24、48和72小时形成的生物膜。然后，每个时间(24、48和72小时)在生物膜上使用染色剂即刻后(No washing)及第三次清洗后(Afterwashing3times)拍摄Qraycam Pro影像。此时，将所述实验例2的获得性膜的实验结果图像作为对照图像使用。
如从图4中可以确认的，与上述实验例3的S.mutans生物膜结果相比较时，没有呈现特点性的差异。但是观察到整体生物膜的量小，这可以解释为在多菌性微生物群落的生物膜的情况下，由于每种细菌的相互作用和竞争而抑制齿面细菌膜形成的结果。
小结
本发明的特征在于，根据本发明的齿面着色用组合物不仅可以对齿面细菌膜(生物膜)进行着色(染色)，还可以对齿面细菌膜的预计形成区域即获得性膜进行着色(染色)，通过分析本发明的核黄素5-磷酸钠发散的荧光的颜色和强度，可以获得多种关于齿面细菌膜的量和性质的信息，特别是期待可有效使用于观察初期的齿面细菌膜。
Claims (9)
1.一种齿面着色用组合物，包含核黄素5-磷酸钠。
2.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物用于对齿面细菌膜或获得性膜进行着色。
3.根据权利要求1所述的组合物，包含的所述核黄素5-磷酸钠的浓度为0.1mg/ml至50.0mg/ml。
4.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物的剂型是粉末、乳液、气雾剂或者软胶囊或硬胶囊。
5.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物在用405nm的光照射时发散荧光。
6.根据权利要求1所述的组合物，所述组合物在齿面着色后不需要单独清洗。
7.一种齿面着色剂，包括权利要求1至6中任一项所述的组合物。
8.根据权利要求7所述的齿面着色剂，所述齿面着色剂的剂型为液体、凝胶、霜、粉末、膜、贴片、片剂或固体。
9.根据权利要求7所述的齿面着色剂，所述着色剂在齿面着色后不需要单独清洗。
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