CN116554151A - 驱动蛋白kif18a抑制剂及其应用 - Google Patents

驱动蛋白kif18a抑制剂及其应用 Download PDF

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李铭曦
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Abstract

本发明提供了一种KIF18抑制剂及其制备方法，本发明的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物，能够调节KIF18A蛋白，从而影响细胞周期和细胞增殖过程以治疗癌症和癌症相关疾病。本发明还包括包含所述化合物的药物组合物以及用于治疗与KIF18A活性相关的病况的方法。

Description

驱动蛋白KIF18A抑制剂及其应用
技术领域
本发明属于医药领域，涉及一类驱动蛋白KIF18A抑制剂及其作为抑制癌细胞增殖和治疗癌症的用途。
背景技术
KIF18A是驱动蛋白kinesin-8家族中的一员，在细胞内能够依靠水解ATP释放的能量，以微管为轨道向正极方向运动。同时，KIF18A定位在微管正极末端，可调控微管的动态不稳定性，发挥类似于微管解聚酶的活性。在有丝分裂过程中，KIF18A能够调控纺锤体微管动力学和染色体振幅，对有丝分裂期染色体及时完成整列、维持基因组稳定和顺利完成有丝分裂具有关键作用。
KIF18A基因属于驱动蛋白kinesin-8亚家族并且是一个正端定向马达。KIF18A被认为影响着丝粒微管的正端的动力学以控制正确的染色体定位和纺锤体张力。人KIF18A的耗尽在HeLa宫颈癌细胞中导致更长的纺锤体，在中期增加的染色体振荡(chromosomeoscillation)以及有丝分裂纺锤体组装检查点的激活(MI Mayr等人，CurrentBiology[当代生物学]17, 488–98, 2007)。KIF18A似乎是癌症治疗的可行靶标。KIF18A在多种类型的癌症中过表达，包括但不限于结肠癌、乳腺癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、头癌、颈癌、子宫颈癌和卵巢癌。此外，在癌细胞系中，基因缺失或敲除或KIF18A抑制影响有丝分裂纺锤体装置。特别地，已发现抑制KIF18A来诱导有丝分裂细胞停滞，这是一种已知的弱点，其可以通过凋亡、有丝分裂灾变或多相驱动致死性或分裂间期中有丝分裂滑脱后的死亡来促进有丝分裂细胞死亡。因此，对寻找KIF18A蛋白的抑制剂存在着强烈的兴趣。因此，KIF18A ATP酶活性的抑制是一种有前途的开发新的抗癌剂的方法。
发明内容
本发明属于医药领域，涉及一类驱动蛋白KIF18A抑制剂，具体涉及所述化合物或其立体异构体，互变异构体，内消旋体，外消旋体，对映异构体，非对映异构体或其混合物形式或其可药用的盐，共晶，代谢产物，溶剂化物，前药或同位素标记物，其制备方法及含有该类化合物的药物组合及其作为治疗剂，尤其作为抑制癌细胞增殖和治疗癌症的用途。
本发明提供了一类新的化合物，所述化合物单独或在与微管的结合复合物中用于调节KIF18A蛋白，用以治疗KIF18A介导的病症和/或疾病，包括癌症、炎症或纤毛病理学。
本发明提供的化合物具有基于MT的KIF18A调节活性，特别地，具有KIF18A抑制活性。为此，本发明还提供了这些化合物及其药学上可接受的盐在制备和制造用于治疗性、预防性、急性或慢性治疗KIF18A介导的疾病和障碍(包括但不限于癌症)的药物组合物或药物中的用途。
本发明提供了技术方案I：具有式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物：
式(I)
其中，
X、Y各自独立地表示C或N；
L1表示不存在、C1-C6亚烷基、-NRa-、-NRaSO2-、-SO2NRa-、-S(=O)(NRa)-、-P(O)(ORa)2、-NRaP(O)(ORa)2或-NRaP(O)(Ra)2;
L2表示不存在、C1-C6亚烷基、-C(O)NH-或-NHC(O)-；
L3表示不存在、-C(O)-、-C(O)NRa-、-NRaC(O)-；
R1表示不存在、氢或者被0-3个选自卤素、-ORa、-NRaRb、氰基、-O-卤代C1-C6烷基取代的C1-C6烷基；
R2表示6元环，该环中任意地含有0-2个选自O、N和S的杂原子，且该环任意地被0-3个选自以下组的基团所取代：卤素、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-ORa和-NRaRb；
R3表示氢、卤素、-SF5、氰基、硝基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-ORa、-O-卤代C1-C6烷基、-NRaRb、-OC(O)Ra、-S(O)Ra、-S(O)2Ra、-S(O)2NRaRb、-P(O) RaRb或5-6元环，该5-6元环含有0-2个选自O、N和S的杂原子，并且该5-6元环任意地被0-3个选自以下组的基团所取代：卤素、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-ORa、-SRa、-SF5、氰基、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-C(O)NRaRb、-OC(O)Ra、-C(O)ORa；
或者R3与R5通过化学键连接，且R3、R5、L3、Y同与L3和Y共同连接的碳原子一起构成5-6元环，该5-6元环中任意地含有0-2个选自O、S和N的杂原子；
R4、R5各自独立地表示不存在、氢、卤素、氰基、硝基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-ORa、-C(O)Ra或者被0-3个选自卤素、-ORa、-NRaRb、C1-C6烷基取代的5-6元环，该5-6元中任意地含有0-2个选自O、S和N的杂原子；
Ra、Rb各自独立地表示氢、卤素、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、卤代C1-C6烷基或羟基C1-C6烷基。
在一些优选方案中，
L1表示-NRaSO2-或-SO2NRa-；
L2表示-C(O)NH-或-NHC(O)-；
R1表示-CH2CH2OH；
R2表示。
在一些优选方案中，式(I)中的结构片段(I-1)选自/>、、/>或/>。
在另一些优选方案中，
L3表示不存在、-C(O)-、-C(O)NRa-、-NRaC(O)-；
R3表示氢、-SF5、氰基、硝基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-ORa、-S(O)2Ra、-S(O)2NRaRb、-P(O) RaRb、或5-6元环，所述的5-6元环表示选自以下组的任意结构之一：
且所述的5-6元环中的氢原子任意地被0-3个选自以下组的基团所取代：卤素、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基；
R5表示不存在、氢、硝基、C1-C6烷基、-ORa、-C(O)Ra或者；
或者，R3与R5通过化学键连接，且R3、R5、L3、Y同与L3和Y共同连接的碳原子一起构成结构片段，其中虚线表示单键或双键；
Ra、Rb各自独立地表示氢、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基或羟基C1-C6烷基。
在另一些优选方案中，所述化合物具有选自以下组的结构：
。
在另一些优选方案中，所述化合物具有选自以下组的结构：
除此之外，本发明还提供了本发明技术方案中任意一种化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物的用途，用于制备预防或治疗与KIF18A活性或表达量相关的病症和/或疾病的药物；这些与KIF18A活性或表达量相关的病症和/或疾病为癌症、炎症或纤毛病理学病症；更优地，所述病症和/或疾病为结肠癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、头癌、颈癌、子宫颈癌和/或乳腺癌等。
除此之外，本发明还提供了一种药物组合物，其含有本发明技术方案中任意一种化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物，以及其药学上可接受的载体。
除此之外，本发明还提供了一种通过抑制KIF18A来治疗肿瘤的方法，包括向有需要的个体施用本发明中任意一种化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物。
定义
除非另有述及，否则于本专利说明书与权利请求中使用的下述术语具有下文所讨论的意义。再者，此处定义的许多基团可选择性地被取代。在此定义部分中典型取代基的清单是作为举例，并非意欲限制本专利说明书与权利要求书中别处所定义的取代基。
术语“烷基”是指饱和脂族烃基团或连接臂，包括1至20个碳原子，优选为1至12个碳原子，更优选为1至8个碳原子，或1至6个碳原子，或1至4个碳原子的直链与支链基团。“低级烷基”特别指具有1至4个碳原子的烷基。烷基的实例包括-(CH2)3-，甲基、三氟甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、戊基等。烷基可为被取代或未被取代。典型取代基包括环烷基、芳基、杂芳基、杂环烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳基硫基、氰基、卤代基、羰基、硫代羰基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰胺基、C-羧基、O-羧基、硝基、硅烷基、氨基及-NRxRy，其中Rx与Ry独立选自包括氢、烷基、环烷基、芳基、羰基、乙酰基、磺酰基、三氟甲烷磺酰基及合并的5-或6-元杂环基环。
术语“烷氧基”或“烷基氧基”是指-O-烷基。“C1-C6烷氧基”(或烷基氧基)意欲包括C1、C2、C3、C4、C5、C6烷氧基。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基(例如正丙氧基和异丙氧基)和叔丁氧基。类似地，“烷基硫基”或“硫代烷氧基”表示具有指定数量碳原子的经硫桥连接的如上文所定义的烷基；例如甲基-S-和乙基-S-。
术语“环烷基”是指3至8元全碳单环状环或二环结构，全碳5-元/6-元或6-元/6-元经稠合的双环状环，或多环状稠合环(“经稠合”环系统是指在此系统中的每一个环系与此系统中的其它环至少共有一个相邻碳原子)基团，其中一或多个环可含有一或多个双键，但这样的环均不具有完整的共轭π-电子系统，亦或双环通过共用一个碳形成螺环。环烷基的实例是(但不限于)环丙烷、环丁烷、环戊烷、环戊烯、环己烷、环己二烯、金刚烷、环庚烷、环庚三烯等。二环的环状烷基包括桥环、螺环或融合环的环烷基。环烷基的说明性实例衍生自(但不限于)下列:
“芳基”是指6至12个碳原子的全碳单环状或稠合环多环基团，具有完整共扼π-电子系统。芳基的实例是但不限于苯基、萘基及蒽基。芳基可为被取代或未被取代。典型取代基包括卤代基、三卤代甲基、烷基、羟基、烷氧基、芳氧基、巯基、烷硫基、芳基硫基、氰基、硝基、羰基、硫代羰基、C-羧基、O-氨基甲酰基、N-氨基甲酰基、O-硫代氨基甲酰基、N-硫代氨基甲酰基、C-酰氨基、N-酰胺基、亚磺酰基、磺酰基、氨基及-NRaRb，其中Ra与Rb系如上文定义。芳基稠合饱和或不饱和环烷基/饱和或不饱和杂环烷基可看作为芳基的特殊取代基，典型的实例包括但不限于:
“杂芳基”是指5至12个环原子的单环状或稠合环，含有一、二、三或四个选自N, O及S的环杂原子，其余环原子为C，且此外，具有完整共扼π-电子系统。典型的杂芳基的实例是但不限于吖啶基、氮杂环丁基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并硫代呋喃基、苯并噻吩基、苯并噁唑基、苯并噁唑啉基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异噁唑基、苯并异噻唑基、苯并咪唑啉基、咔唑基、4aH-咔唑基、咔啉基、色满基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃基、呋喃基、呋咱 基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1H-吲唑基、咪唑并吡啶基、假吲哚基(indolenyl)、二氢吲哚基、吲嗪基、吲哚基、3H-吲哚基、靛红酰基(isatinoyl)、异苯并呋喃基、异色满基、异吲唑基、异二氢吲哚基、异吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异噻唑并吡啶基、异噁唑基、异噁唑并吡啶基、亚甲基二氧基苯基、吗啉基、二氮杂萘基、八氢异喹啉基、噁二唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、噁唑烷基、噁唑基、噁唑并吡啶基、噁唑烷基、萘嵌间二氮杂苯基、羟吲哚基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩噁噻基、吩噁嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、喋啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑并吡啶基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并噁唑基、吡啶并咪唑基、吡啶并噻唑基、吡啶基、嘧啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、2-吡咯烷酮基、2H-吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4H-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四唑基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、6H-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻唑并吡啶基、噻吩并噻唑基、噻吩并噁唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、1,3,4-三唑基和呫吨基、喹啉基、异喹啉基、酞嗪基、喹唑啉基、吲哚基、异吲哚基、二氢吲哚基、1H-吲唑基、苯并咪唑基、1,2,3,4-四氢喹啉基、1,2,3,4-四氢异喹啉基、5,6,7,8-四氢-喹啉基、2,3-二氢-苯并呋喃基、色满基、1,2,3,4-四氢-喹喔啉基和1,2,3,4-四氢-喹唑啉基。术语“杂芳基”还可以包括由 上述所定义的“芳基”与单环“杂芳基”所形成的联芳基结构，例如但不限于“-苯基联吡啶基-”、“-苯基联嘧啶基”、“-吡啶基联苯基”、“-吡啶基联嘧啶基-”、“-嘧啶基联苯基-”；其中本发明还包括含有例如上述杂环的稠环和螺环化合物。
药学上可接受的杂芳基是足够稳定以被连接至本发明的化合物被配制成药物组合物，及随后被施用有需要的病患者。
除非另有定义，本发明的取代基的定义是各自独立而非互相关联的，例如对于取代基中Ra(或者Rb)而言，其在不同的取代基的定义中是各自独立的。具体而言，对于Ra(或者Rb)在一种取代基中选择一种定义时，并不意味着该Ra(或者Rb)在其他取代基中都具有该相同的定义。更具体而言，例如(仅列举非穷举)对于NRaRb中，当Ra(或者Rb)的定义选自氢时，其并不意味着在-C(O)-NRaRb中Ra(或者Rb)必然为氢。
“卤代”或“卤素”包括氟、氯、溴和碘。“卤代烷基”意欲包括具有指定碳原子数且取代有1个或多个卤素的支链和直链饱和脂族烃基团。卤代烷基的实例包括但不限于氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、三氯甲基、五氟乙基、五氯乙基、2,2,2-三氟乙基、七氟丙基和七氯丙基。卤代烷基的实例还包括意欲包括具有指定碳原子数且取代有1个或多个氟原子的支链和直链饱和脂族烃基团的“氟烷基”。
“环”也称“环状基团”或“环状结构”，指原子互相连接成环的基团，既包括环内全是碳原子的碳环基团，如芳基、环烷基，也包括环内有杂原子（非碳原子，通常为氮原子N、氧原子O、硫原子S）的杂环基团，如杂芳基、杂环烷基、内酯基、内酰胺基等。内酯基、内酰胺基的典型实例衍生自(但不限于)下列:
本公开内容中，当提到一些取代基团时使用Cx1-Cx2的表述，这表示所述取代基团中的碳原子数可以是x1至x2个。例如，C1-C6表示所述基团含有1、2、3、4、5或6个碳原子，C3-C6表示所述基团含有3、4、5或6个碳原子。
本公开内容中，当提到环状基团(例如芳基、杂芳基、环烷基、杂环烷基和内酰胺基)时使用“x1-x2元环”的表述，这表示该基团的环原子数可以是x1至x2个。例如，3-6元环表示该环状基团可以是3、4、5或6元环，其环原子数可以是3、4、5或6个。所述环原子可以是碳原子或杂原子，例如选自N、O和S的杂原子。当所述环是杂环时，所述杂环可以含有1或多个环杂原子，例如选自N、O和S的杂原子。
本发明内容中，一个或更多个卤素可以各自独立地选自氟、氯、溴和碘。
本文中所用的术语“取代”意指至少一个氢原子被非氢基团替代，条件是维持正常化合价且所述取代得到稳定的化合物。本文所用的环 双键为在两个相邻环原子之间形成的双键(例如C＝C、C＝N或N＝N)。
在本发明化合物上存在氮原子(例如胺)的情形下，可通过使用氧化剂(例如mCPBA和/或过氧化氢)进行处理来将这些氮原子转化成N-氧化物以获得本发明的其它化合物。因此，所显示和要求保护的氮原子视为均涵盖所显示氮及其N-氧化物以获得本发明衍生物。
当任何变量在化合物的任何组成或式中出现一次以上时，其每次出现时的定义均独立于其在其它每种情况下出现时的定义。因此，例如如果显示基团取代有0-3个R，则所述基团可任选地取代有至多三个R基团，且在每次出现时R独立地选自R的定义。此外，取代基和/或变量的组合仅在上述组合可产生稳定的化合物时才容许存在。
本文使用的术语“患者”是指通过本发明的方法进行治疗的有机体。这类有机体优选包括但不限于哺乳动物(例如鼠类、猿/猴、马、牛、猪、犬、猫等)且最优选是指人类。
本文使用的术语“有效量”意指将会引起例如研究人员或临床医师所寻求的组织、系统、动物或人的生物学或医学响应的药物或药剂(即本发明化合物)的量。此外，术语“治疗有效量”意指这样的量：与未接受上述量的相应受试者相比，所述量导致改善的治疗、治愈、预防或减轻疾病、病症或副作用，或降低在疾病或病症的进展速度。有效量可以一个或更多个给药、施用或剂量给予且不意欲被特定的制剂或给药途径限制。该术语还包括在其范围内的增强正常生理机能的有效量。
本文使用的术语“治疗”包括其广义上的含义，涵盖对对象的治疗性处理和/或预防性处理。具体而言，所述“治疗”包括导致病症、疾病、障碍等的缓和、抑制、消除和改善和/或预防的任何处理，例如减轻、减少、调节、改善、消除、预防、防止或改善其症状。所述治疗性处理包括缓和、抑制或改善疾病的症状或状况；抑制并发症的产生；改善潜在代谢综合征；抑制疾病或症状的产生，如控制疾病或情况的发展；减轻疾病或症状；使疾病或症状减退；减轻由疾病或症状引起的并发症，或治疗由疾病或症状引起的征兆。所述预防性处理包括事先处理以防止、阻断或延迟、减缓疾病或病症的发生或发展或者减弱疾病或病症的严重程度。
同样，“治疗剂”也包括对对象具有治疗性处理和/或预防性处理的药剂或试剂。
术语“药用”或“药学上可接受的”在本文中用于指如下那些化合物、物质、组合物和/或剂型：在合理医学判断的范围内，其适于与人类和动物的组织接触使用而无过高毒性、刺激性、过敏反应和/或其它问题或并发症，并与合理的益处/风险比相称。
特定药学及医学术语
术语“癌症”，如本文所用，指一种不能控制的细胞的异常生长，并且在某种条件下能够转移(传播)。这种类型的癌症包括但不限于，实体肿瘤(如膀胱、肠、脑、胸、子宫、心脏、肾、肺、淋巴组织(淋巴瘤)、卵巢、胰腺或其它内分泌器官(如甲状腺)、前列腺、皮肤(黑色素瘤)或血液瘤(如非白血性白血病)。
术语“联合给药”或其类似术语，如本文所用，指将几种所选的治疗药物给一个病人用药，以相同或不同的给药方式在相同或不同的时间给药。
术语“增强”或“能增强”，如本文所用，指预期的结果能够在效价或是持续时间方面都有增加或延长。因此，在增强药物的治疗效果方面，术语“能增强”指药物在系统中有提高或延长效价或持续时间的能力。本文所用的“增效值”，指在理想的系统中，能够最大限度地的增强另外一个治疗药物的能力。
术语“免疫性疾病”指对内源性或外源性抗原产生的不良或有害反应的疾病或症状。结果通常会造成细胞的功能障碍、或因此而破坏并造成机能障碍、或破坏可能产生免疫症状的器官或组织。
术语“试剂盒”与“产品包装”是同义词。
术语“对象”、“受试者”或“病人”包括哺乳动物和非哺乳动物。哺乳动物包括但不限于，哺乳类：人、非人灵长类如猩猩、猿及猴类；农业动物如牛、马、山羊、绵羊、猪；家畜如兔、狗；实验动物包括啮齿类，如大鼠、小鼠及豚鼠等。非哺乳类动物包括但不限于，鸟、鱼等。在一优选例中，所选哺乳动物是人。
如本文所用，某一化合物或药物组合物，给药后，可以使某一疾病、症状或情况得到改善，尤指其严重度得到改善，延迟发病，减缓病情进展，或减少病情持续时间。无论固定给药或临时给药、持续给药或断续给药，可以归因于或与给药有关的情况。
给药途径
适合的给药途径包括但不限于，口服、静脉注射、直肠、气雾剂、非肠道给药、眼部给药、肺部给药、经皮给药、阴道给药、耳道给药、鼻腔给药及局部给药。此外，仅作举例说明，肠道外给药，包括肌肉注射、皮下注射、静脉注射、髓内注射、心室注射、腹膜内注射、淋巴管内注射、及鼻内注射。
本发明化合物给药方式可以是局部的给药方式。在特定的具体实施例中，长效制剂通过植入给药(例如皮下或肌肉)或通过肌肉注射。此外，在另一具体化实施例中，药物通过靶向药物给药系统来给药。例如，由器官特异性抗体包裹的脂质体。在这种具体实施例中，所述脂质体被选择性的导向特定器官并吸收。
药物组合物和剂量
本文使用的短语“可药用载体”意指药用物质、组合物或媒介物，诸如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、制造助剂(例如润滑剂、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸钙或硬脂酸锌或硬脂酸)或溶剂包囊物质，其涉及将主题化合物从一个器官或身体的部分携带或运送至另一个器官或身体的部分。每种载体在与制剂的其它成分相容和对患者无害的意义上必须是“可接受的”。
术语“药物组合物”意指包含本发明化合物与任选的其它可药用载体的组合物。“可药用载体”是指本领域中通常接受用于将生物活性剂递送至动物(具体为哺乳动物)的介质，包括(即)佐剂、赋形剂或媒介物，诸如稀释剂、防腐剂、填充剂、流动调控剂、崩解剂、润湿剂、 乳化剂、悬浮剂、增甜剂、矫味剂、芳香剂、抗细菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分散剂，这取决于给药模式和剂型的性质。
本发明的药用组合物可包含治疗有效量的与任选的一种或多种可药用载体(添加剂)和/或稀释剂一起配制的一种或多种本发明的化合物，以及任选的一种或多种其它治疗剂。可通过任意合适方式给予本发明化合物以用于任意上述用途，例如口服，诸如片剂、丸剂、粉剂、颗粒剂、酏剂、酊剂、悬浮液(包括纳米悬浮液、微悬浮液、喷雾干燥的分散液)、糖浆和乳液；经舌下；含服；经肠胃外，诸如通过皮下、静脉内、肌内或胸骨内注射或输注技术(例如以无菌可注射水性或非水性溶液或悬浮液形式)；经鼻，包括向鼻膜给药，诸如通过吸入喷雾；局部，诸如以乳膏剂或软膏剂形式；或经直肠，诸如以栓剂形式；或经瘤内注射。它们可单独给药，但通常使用基于所选给药途径和标准药学实践选择的药物载体给药。
根据本领域技术人员认识范围内的诸多因素来调配可药用载体。这些因素包括，但不限于：所调配活性剂的类型和性质；含有活性剂的组合物所要给药的受试者；组合物的预期给药途径；及所靶向的治疗适应症。药用载体包括水性和非水性液体介质及各种固体和半固体剂型。
上述载体可包括除活性剂外的诸多不同成分和添加剂，上述其它成分出于本领域技术人员公知的各种原因包括于制剂中，例如稳定活性剂、粘合剂等。关于合适的药用载体和载体选择中所涉及的因素的描述可参见多个容易获得的来源，例如Allen L.V.Jr.etal.Remington: The Science and Practice of Pharmacy(2 Volumes),22nd Edition(2012),Pharmaceutical Press。
当然，本发明化合物的剂量方案取决于已知因素而有所变化，诸如具体药剂的药效学特性及其给药模式和途径；接受者的物种、年龄、性别、健康状况、医学病状和重量；症状的性质和程度；同时治疗的种类；治疗频率；给药途径、患者的肾和肝功能及期望效应。根据一般指导，当用于指定效应时，各活性成分的日口服剂量应为约0.001mg/天至约10-5000mg/天，优选地为约0.01mg/天至约1000mg/天，且最优选地为约0.1mg/天至约250mg/天。在恒速输注期间，静脉内最优选剂量应为约0.01mg/kg/分钟至约10mg/kg/分钟。本发明化合物可以单一日剂量给药，或可以每日两次、三次或四次的分开剂量给药总日剂量。
所述化合物通常以与根据预期给药形式(例如口服片剂、胶囊剂、酏剂和糖浆剂)适当地选择且与常规药学实践相符合的合适药物稀释剂、赋形剂或载体(在本文中统称为药物载体)的混合物形式进行给药。
适于给药的剂型(药物组合物)可含有约1毫克至约2000毫克活性成分/剂量单位。在这些医药组合物中，以组合物的总重量计，活性成分通常将以约0.1-95重量％的量存在。
本发明范围包括(单独或与可药物载体组合)包含治疗有效量的至少一种本发明化合物作为活性成分的药物组合物。任选地，本发明化合物可单独使用、与本发明其它化合物组合使用或与一种或多种其它治疗剂(例如抗癌剂或其它药学活性物质)组合使用。
不考虑所选择的给药路径，通过本领域技术人员已知的常规方法来将本发的化合物(其可以合适的水合形式使用)和/或本发明的药物组合物配制成药用剂量形式。
可改变活性成分在本发明的药物组合物中的实际剂量水平，从而获得对于实现特定患者的期望的治疗响应、组成和给药模式有效的而对患者无毒的活性成分量。
选定的剂量水平会取决于多种因素，包括所用的本发明的特定化合物或其酯、盐或酰胺的活性；给药路径；给药时间；所用的特定化合物的排泄速率；吸收速率和程度；治疗的持续时间；与所用的特定化合物组合使用的其它药物、化合物和/或物质；所治疗的患者的年龄、性别、重量、状况、一般健康和先前的医学史等医学领域公知的因素。
具有本领域普通技术的医生或兽医可容易地确定并开出有效量的所需药物组合物。例如，为了达到所期望的治疗效果，医师或兽医可在低于所需的水平开始药物组合物中所用的本发明化合物的较量，并逐步增加剂量直至实现所期望的效果。通常，合适日剂量的本发明 化合物将是有效产生治疗效果的最低剂量的化合物的量。此种有效剂量通常取决于上述因素。通常，口服、静脉内、脑室内和皮下剂量的用于患者的本发明化合物的范围为约0.01至约50mg/kg体重/天。如果需要的话，有效日剂量的活性化合物可以两个、三个、四个、五个、六个或更多个亚剂量在一天当中的适当的间隔分别给药，任选地呈单位剂型形式。在本发明的某些方面中，服药为每天一次给药。
虽然本发明化合物可单独给药，但优选以药物制剂(组合物)形式给予化合物。
试剂盒/产品包装
为了用于上述适应症的治疗，试剂盒/产品包装也在此进行描述。这些试剂盒可以由输送器、药包或容器盒组成，容器盒可被划分成多格，以容纳一种或多种容器，如管形瓶、试管及类似物等，每个容器中包含所述方法中的单独一种成分。合适的容器包括瓶子，管形瓶，注射器和试管等。容器由可接受的玻璃或塑料等材料制作而成。
举例来讲，容器可装有一种或多种在此所述的化合物，化合物可能以药物组分形式存在，也可能与在本文中所述的其它成分组成混合物体存在。容器可有一个无菌输出口(例如容器可为静脉输液包或瓶，瓶塞可被皮下注射器针头刺破)。这样的试剂盒可带有一种化合物，及本文中所述的使用方法的说明、标签或操作说明。
一个典型的试剂盒可包括一种或多种容器，为适应商业推广和使用者对化合物使用的需求，每个容器装有一种或多种材料(如试剂，也可以是浓缩的母液，和/或器械)。这些材料包括但不局限于缓冲液， 稀释液，滤器，针头，注射器，输送器，包，容器，瓶和/或试管，附有内容清单和/或使用说明书，内置包装也附有说明书。整套的说明都要包括在内。
标签可显示在容器上或与容器紧密相关。标签出现在容器上即指标签字母、数字或其它特征被粘贴、铸模、刻在容器上；标签也可出现在装有多种容器的容器盒或运输盒内，如在产品插页中。一个标签可用来提示内容物的某种特定治疗用途。标签也可标示内容物使用说明，诸如在上述方法中描述的。
在本说明书中被描述的所有特征(包括任何所述的权利要求或摘要),和/或任何方法或过程中涉及的所有步骤，均有可能以任意一种组合存在，除非某些特征或步骤在同一组合中是相互排斥的。
本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本案说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则所有的百分数、比率、比例、或份数按重量计。
本发明中的重量体积百分比中的单位是本领域技术人员所熟知的，例如是指在100毫升的溶液中溶质的重量。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。
具体实施方式
下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。
NMR的测定是用Bruker AVANCE-400核磁仪。测定溶剂在谱图解析中注明。
MS的测定用Agilent 1200-G1956A/1200-6110A/1200-6140A/ 1260-6125B/Prime-6125B/1260-6120液质联用仪，SHIMADZU 20A-2010/20A-2020液质联用仪，WatersACQ-QDA液质联用仪。
HPLC分析使用SHIMADZU 20A 高效液相色谱仪。
SFC分析测定使用Waters UPCC with PDA Detector and QDa Detector超高效合相色谱仪，Waters UPC2 with PDA detector超高效合相色谱仪，Agilent 1260 with DADdetector高效液相色谱仪，Shimadzu LC-20AB with PDA detector高效液相色谱仪，Shimadzu LC-20AD with PDA detector高效液相色谱仪。
制备型HPLC分离使用Shimadzu LC-20AP pump, Shimadzu LH-40 LiquidHandler, Shimadzu SPD-20A Detector，Gilson GX-281 Liquid Handler, Gilson 322pump, Gilson 156 UV Detector制备型色谱仪。
SFC分离使用The Berger MG II、MG III，Sepiatec's Prep SFC 100 system，Waters Prep 80Q SFC SYSTEM、Prep 150 AP SFC SYSTEM、Prep 200 SFC SYSTEM、Prep350 SFC SYSTEM。
快速柱色谱分离使用Biotage IsoleraOne快速制备色谱仪。
薄层层析硅胶板使用安徽良臣硅源材料有限公司的GF254丙烯酸粘合剂硅胶板，薄层色谱法（TLC）使用的硅胶板采用的规格是0.25mm，薄层层析分离纯化产品采用的规格是0.5mm。
加压氢化反应氢化瓶和氢气钢瓶。
微波反应使用Biotage Initiator+ 微波合成仪。
手套箱使用德力斯DELLIX定制手套箱。
下面通过实施例对本发明进行详细描述，但并不意味着对本发明任何不利限制。本发明的化合物可以通过本领域技术人员所熟知的多种合成方法来制备，包括下面列举的具体实施方式、其与其他化学合成方法的结合所形成的实施方式以及本领域技术上人员所熟知的等同替换方式，优选的实施方式包括但不限于本发明的实施例。对本领域的技术人员而言，在不脱离本发明精神和范围的情况下针对本发明具体实施方式进行各种变化和改进将是显而易见的。
实施例1：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物1）的制备
第一步:向5-溴-6-氟吡啶-2-胺(25.0 g, 130 mmol)和盐酸4,4-二氟哌啶(26.8g, 170 mmol)的二甲基亚砜(250 mL)溶液中加入碳酸钾 (54.3 g, 392 mmol)。将混合物加热至150℃搅拌16小时。向反应混合物中加入水(500 mL)，用二氯甲烷(500 mL × 2)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色油状物5-溴-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-2-胺(21.0 g, 71.5 mmol，收率55%)。LCMS (ESI): [M+H]+ =293.8。
第二步:向5-溴-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-2-胺 (2.00 g, 6.85 mmol)，1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-1H-吡唑(1.56 g, 7.53 mmol)和碳酸钾 (2.83 g, 20.5 mmol)的二氧六环(40 mL)和水（8 mL）溶液中加入1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯(0.52 g, 0.68 mmol)。将混合物在氮气的保护下加热至100℃搅拌16小时。向反应混合物中加入水(50 mL)，用乙酸乙酯(50 mL × 2)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺(1.10g, 3.70 mmol，收率 54%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 294.1。
第三步: 向6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺 (300mg, 1.02 mmol)和4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰氯化(461 mg, 1.23 mmol)的二氯甲烷(6 mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(404 mg, 3.07 mmol)。将混合物在25℃搅拌16小时。向反应液中加入水(20 mL)，用乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-30%梯度的四氢呋喃/石油醚)得到黄色固体N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(300 mg, 0.47 mmol, 收率46%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 633.1。
第四步:向2-羟基乙磺酰胺(77.1 mg, 0.62 mmol)，2-(甲基氨基)乙酸(42.2 mg,0.47 mmol)，磷酸钾(410 mg, 1.90 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5 mL)溶液中加入碘化亚铜(46.1 mg, 0.24 mmol)。将混合物在50℃搅拌5分钟。然后将N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(300 mg, 0.47 mmol)在50℃加入到反应混合物中，将混合物在氮气的保护下加热至100℃搅拌16小时。向反应液中加入水(10 mL)，用乙酸乙酯(10 mL × 2)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用制备型HPLC (C18，34-74%梯度的水(甲酸)/乙腈)纯化，得到黄色固体化合物N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(60.9mg, 0.09 mmol，收率20%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 630.0。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δppm 13.15 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.09 (d, J = 1.0 Hz, 1H),7.92 (t, J = 1.0 Hz, 2H), 7.80 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.12 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.83 - 3.68 (m, 2H), 3.40 - 3.34(m, 2H), 3.22 - 3.14 (m, 4H), 3.05 - 2.93 (m, 4H), 2.21 - 2.08 (m, 4H), 2.05- 1.32 (m, 4H), 0.46 - 0.33 (m, 4H)。
实施例2：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物2）的制备
化合物2 参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ = 616.3。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.16 (s, 1H), 10.25 (s, 1H), 8.14 - 8.06 (m,3H), 7.97 - 7.91 (m, 1H), 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 2.0 Hz, 1H),7.14 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 5.06 - 4.96 (m, 1H), 3.77 (t, J = 6.8 Hz,2H), 3.37 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.22 - 3.12 (m, 4H) 3.05 - 2.95 (br s, 4H),2.26 - 2.06 (m, 4H), 2.07 - 1.38 (m, 4H), 0.40 (s, 4H)。
实施例3：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-(2-羟基乙基)-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物3）的制备
化合物3参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ = 660.4。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.19 (s, 1H), 10.95 - 9.53 (m, 1H), 8.21 (s,1H), 8.12 - 8.01 (m, 1H), 7.98 - 7.86 (m, 2H), 7.85 - 7.78 (m, 1H), 7.24 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.10 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 4.94 (t, J = 5.2 Hz, 1H),4.20 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.82 - 3.66 (m, 4H), 3.33 - 3.30 (m, 2H), 3.18 -3.16 (m, 4H), 2.99 - 2.97 (m, 4H), 2.17 - 2.04 (m, 4H), 2.01 - 1.42 (m, 4H),0.39 (s, 4H)。
实施例4：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1,3,5-三甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物4）的制备
化合物4参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ = 658.4。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.22 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.10 (d, J = 8.8Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 2.0Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 5.15 - 4.79 (m, 1H), 3.77 (t, J =6.8 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.37 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.26 - 3.10 (m, 4H),3.08 - 2.88 (m, 4H), 2.12 (s, 3H), 2.04 (s, 3H), 1.98 - 1.43 (m, 8H), 0.40(s, 4H)。
实施例5: N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物5）的制备
化合物5参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ = 630.4。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.19 (s, 1H), 10.90 - 9.69 (m, 1H), 8.09 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 8.00 - 7.90 (m, 2H), 7.76 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.28 (d, J =2.0 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 6.76 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 5.16 -4.70 (m, 1H), 3.89 (s, 3H), 3.76 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.44 - 3.35 (m, 2H),3.26 - 3.11 (m, 4H), 3.10 - 2.72 (m, 4H), 2.15 - 2.06 (m, 4H), 2.05 - 1.52(m, 4H), 0.40 (s, 4H)。
实施例6：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物6）的制备
化合物6参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ = 630.4。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.30 (s, 1H), 10.59 - 9.96 (m, 1H), 8.10 (d, J= 8.8 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.52 (d, J= 2.0 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 6.39(d, J = 2.0 Hz, 1H), 5.18 - 4.71 (m, 1H), 3.77 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.70 (s,3H), 3.45 - 3.35 (m, 2H), 3.24 - 3.15 (m, 4H), 3.05 - 2.92 (m, 4H), 2.05 -1.38 (m, 8H), 0.40 (s, 4H)。
实施例7：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-咪唑-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物7）的制备
化合物7参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI+) [M+H]+= 630.3。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.17 (s, 1H), 8.23 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.07(d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.66 (s, 1H),7.25 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.11 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 4.44 - 4.27 (m,1H), 3.76 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.37 - 3.34 (m, 2H), 3.26 - 3.11(m, 4H), 3.08 - 2.87 (m, 4H), 2.23 - 2.12 (m, 4H), 2.03 - 1.38 (m, 4H), 0.39(s, 4H)。
实施例8：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(2,4-二甲基噻唑-5-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物8）的制备
化合物8参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ = 661.2。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.29 (s, 1H), 10.24 (br s, 1H), 8.10 (d, J =8.8 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.29 (d, J =2.0 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 2.4, 8.4 Hz, 1H), 4.96 (s, 1H), 3.77 (t, J = 6.4Hz, 2H), 3.40 - 3.36 (m, 2H), 3.25 - 3.21 (m, 4H), 3.00 (m, 4H), 2.64 (s,3H), 2.29 (s, 3H), 2.12 - 1.40 (m, 8H), 0.40 (s, 4H)。
实施例9：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(3,5-二甲基异噻唑-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物9）的制备
化合物9参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ = 645.3。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.38 (br s, 1H), 10.44 (br s, 1H), 8.06 (d, J =8.4 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.23 (s,1H), 7.08 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.87 - 4.35 (m, 1H), 3.84 - 3.70 (m, 2H),3.27 - 3.23 (m, 2H), 3.20 - 3.07 (m, 4H), 3.03 - 2.87 (m, 4H), 2.37 - 2.27(m, 3H), 2.19 - 2.09 (m, 3H), 2.04 - 1.35 (m, 8H), 0.40 (s, 4H)。
实施例10：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-苯基吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物10）的制备
化合物10参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ = 626.6。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.20 (s, 1H), 10.23 (s, 1H), 8.11 (d, J = 1.0Hz, 1H), 7.95 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.69 - 7.57 (m, 3H), 7.50 - 7.41 (m, 2H),7.38 - 7.31 (m, 1H), 7.30 - 7.26 (m, 1H), 7.14 (t, J = 1.0 Hz, 1H), 5.02 -4.89 (m, 1H), 3.82 - 3.66 (m, 2H), 3.41 - 3.34 (m, 2H), 3.23 - 3.12 (m, 4H),3.06 - 2.94 (m, 4H), 2.13 - 1.48 (m, 8H), 0.51 - 0.31 (m, 4H)。
实施例11：N-(2'-(4,4-二氟哌啶-1-基)-[2,3'-联吡啶]-6'-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物11）的制备
化合物11参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI+) (M+H)+= 627.3。1HNMR (400 MHz, DMSO-d 6 ) δ ppm 13.32 (s, 1H), 8.67 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.06(d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.02 - 7.93 (m, 3H), 7.86 (dt, J = 1.6, 7.6 Hz, 1H),7.35 - 7.29 (m, 1H), 7.23 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.08 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz,1H), 3.76 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.32 - 3.28 (m, 2H), 3.20 (br t, J = 4.8, 5.2Hz, 4H), 3.08 - 2.92 (m, 4H), 2.07 - 1.30 (m, 8H), 0.40 (s, 4H)。
实施例12：N-(2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-[3,3'-联吡啶]-6-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物12）的制备
化合物12参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ = 627.3。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.30 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.83 (d, J = 1.6Hz, 1H), 8.55 (dd, J = 1.2, 4.8 Hz, 1H), 8.14 - 8.07 (m, 2H), 7.99 (d, J =8.4 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.49 (dd, J = 4.8, 8.0 Hz, 1H), 7.29(d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 5.21 - 4.78 (m, 1H),3.77 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.37(t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.26 - 3.10 (m, 4H), 3.07- 2.92 (m, 4H), 2.18 - 1.57 (m, 8H), 0.40 (s, 4H)。
实施例13：N-(2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-[3,4'-联吡啶]-6-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物13）的制备
化合物13参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ =627.3。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.31 (s, 1H), 10.21 (br s, 1H), 8.64 (dd, J =0.8 Hz, 4.4 Hz 2H), 8.10 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.78(d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.69 (dd, J = 1.6, 4.4 Hz 2H), 7.29 (d, J = 2.0 Hz, 1H),7.14 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 5.39 - 4.56 (m, 1H), 3.81 - 3.74 (m, 2H),3.41 - 3.37 (m, 2H), 3.22 - 3.17 (m, 4H), 3.05 - 2.97 (m, 4H), 2.06 - 1.94(m, 4H), 1.92 - 1.64 (m, 4H), 0.41 (s, 4H)。
实施例14：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(4-甲基-1H-吡唑-1-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物14）的制备
化合物14参照化合物1的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ =630.7。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.28 (s, 1H), 10.27 (br s, 1H), 8.09 (d, J =8.8 Hz, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.93 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.4 Hz,1H), 7.56 (s, 1H), 7.28 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 1.6, 8.8 Hz, 1H),5.25 - 4.69 (m, 1H), 3.80 - 3.74 (m, 2H), 3.37 - 3.35 (m, 2H), 3.08 - 2.94(m, 8H), 2.11 (s, 3H), 2.04 - 1.52 (m, 9H), 0.39 (s, 4H)。
实施例15：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(2-氧亚基吡咯烷-1-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物15）的制备
第一步：向5-溴-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-2-胺(1.00 g, 3.42 mmol)和吡咯烷-2-酮 (350 mg, 4.10 mmol)的二甲基甲酰胺(16 mL)的溶液中加入磷酸钾(2.17 g,10.3 mmol)和碘化亚铜(66.5 mg, 1.71 mmol)和N,N-二甲基乙二胺(150 mg, 1.71mmol)，将反应混合物在100℃拌16小时。将反应混合物加入水(50 mL)中，用二氯甲烷(50mL × 3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(50 mL)洗一遍，有机相合并用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-15%梯度的四氢呋喃/石油醚)得到白色固体1-(6-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-酮(0.55 g, 1.85mmol, 收率54%)。LCMS (ESI): [M+H]+ =297.1。
第二步：向1-(6-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-3-基)吡咯烷-2-酮 (450mg, 1.51 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10 mL)的溶液中加入2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)-4-碘苯甲酸(650 mg, 1.82 mmol)和N,N-二异丙基乙胺(600 mg, 4.55 mmol), 最后把O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦盐(883 mg, 2.27 mmol)加入反应瓶中，将反应混合物在25℃搅拌12小时。将反应混合物加入水(50 mL)中，用乙酸乙酯(60 mL× 3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(50 mL)洗一遍，有机相合并用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-40%梯度的四氢呋喃/石油醚)得到黄色固体N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(2-氧亚基吡咯烷-1-基)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(0.40 g, 0.63 mmol, 收率41%)。LCMS (ESI): [M+H]+ =636.2。
第三步：向磷酸钾(545 mg, 2.51 mmol)，2-羟基乙磺酰胺(157 mg, 1.25 mmol)和肌氨酸(56.0 mg, 0.63 mmol)的二甲基甲酰胺(5.00 mL)溶液中加入碘化亚铜(61.1mg, 0.31 mmol)。将混合物加热至50℃搅拌5分钟。并将N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(2-氧亚基吡咯烷-1-基)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(400 mg,0.63 mmol)加入到混合物中，然后在氮气的保护下加热至100℃搅拌16小时。反应液用水/氨水(10 mL/5 mL)稀释,用二氯甲烷(10 mL × 3)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用制备型HPLC(C18，30-70%梯度的水(甲酸)/乙腈)纯化，得到白色固体化合物N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(2-氧亚基吡咯烷-1-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(170 mg, 0.27 mmol，收率42.7%)。LCMS (ESI): [M+H]+ =633.3。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.15 (s,1H), 10.23 (br s, 1H), 8.08 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.4 Hz, 1H),7.59 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.27 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 2.0, 8.4Hz, 1H), 5.04 - 4.82 (m, 1H), 3.76 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.67 (t, J = 6.8 Hz,2H), 3.39 - 3.35 (m, 2H), 3.33 - 3.30 (m, 4H), 3.10 - 2.88 (m, 4H), 2.42 (t,J = 8.0 Hz, 2H), 2.14 - 1.14 (m, 10H), 0.39 (s, 4H)。
实施例16：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物16）的制备
第一步: 向2,6-二氯-3-硝基吡啶(10.0 g, 51.8 mmol)的二甲基亚砜(100 mL)的溶液中加入三乙胺(16.1 g, 155 mmol)和4,4-二氟哌啶盐酸盐(8.16 g, 67.4 mmol)，将混合物加热至100℃搅拌2小时，向反应混合物中加入水(100 mL)，用乙酸乙酯(200 mL× 2)萃取。合并有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-6%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色油状物6-氯-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-3-硝基吡啶(4.00 g, 20.7 mmol, 收率40%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 277.8。1H-NMR(400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 8.16 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.80 (d, J = 8.4 Hz,1H), 3.61 - 3.56 (m, 4H), 2.22 - 2.09 (m, 4H)。
第二步: 向6-氯-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-3-硝基吡啶(4.00 g, 14.1 mmol)的1,4-二氧六环(40 mL)的溶液中加入二苯基甲亚胺(5.09 g, 28.1 mmol)，碳酸铯(9.34 g,28.1 mmol)，4,5-双(二苯基磷)-9,9-二甲基氧杂蒽(1.66 g, 2.81 mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(1.31 g, 1.40 mmol)。将混合物用氮气置换三次，在80℃搅拌12小时。向反应混合物中加入水(100 mL)，用乙酸乙酯(150 mL × 2)萃取。合并有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-28%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色油状物6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-N-(二苯亚甲基)-5-硝基吡啶-2-胺(3.80 g, 14.0mmol, 收率64%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 423.2。1H-NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm8.15 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.86 - 7.83 (m, 2H), 7.82 - 7.74 (m, 2H), 7.68 -7.62 (m, 3H), 7.55 - 7.48 (m, 4H), 3.43 - 3.36 (m, 4H), 2.05 - 1.90 (m, 4H)。
第三步: 向6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-N-(二苯亚甲基)-5-硝基吡啶-2-胺(1.00g, 2.37 mmol)的1,4-二氧六环(40 mL)的溶液中加入盐酸-二氧六环(40 mL, 4 M)，将反应混合物在25℃搅拌2小时。将反应液浓缩旋干，用甲基叔丁基醚(20 mL)打浆，过滤，滤渣为黄色固体6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基吡啶-2-胺(600 mg, 2.37 mmol, 收率98%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 259.0。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.07 (d, J = 8.8Hz,1H), 6.04 (d, J = 8.8Hz, 1H), 3.51 - 3.31 (m, 4H), 2.16 - 1.99 (m, 4H)。
第四步: 向6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基吡啶-2-胺(300 mg, 1.16 mmol)的四氢呋喃(3.00 mL)的溶液中加入2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-碘苯甲酰氯(567 mg,1.51 mmol)，在25℃下搅拌十分钟，加入叔丁醇钾-四氢呋喃溶液(3.49 mL, 1M, 3.49mmol)，将反应混合物在25℃搅拌2小时。向反应混合物中加入水(100 mL)，用乙酸乙酯(150mL × 2)萃取。合并有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(120 mg, 0.17mmol, 收率17%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 598.0。1H-NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm13.48 (s, 1H), 8.29 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.97 - 7.87 (m, 2H), 7.68 - 7.59 (m,2H), 3.53 - 3.44 (m, 4H), 3.05 - 2.97 (m, 4H), 2.15 - 2.04 (m, 4H), 1.56 -1.46 (m, 4H), 0.37 (s, 4H)。
第五步: 将2-羟基乙基磺酰氨(38.1 mg, 0.30 mmol)和肌氨酸(20.9 mg, 0.23mmol)加入至N,N-二甲基甲酰胺(1.00 mL)中，在25℃下加入碘化亚铜(22.8 mg, 0.12mmol)和磷酸钾(203 mg, 0.94 mmol)，并在50℃搅拌5分钟。随后将N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(120 mg, 0.17mmol)分批加入，混合物在100℃搅拌12小时。向反应混合物中加入水(20 mL)和乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合并有机相，盐水洗涤两次，用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用制备型HPLC(C18，36-76%梯度的水(甲酸)/乙腈)纯化，得到黄色固体化合物N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-硝基吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(32.0 mg, 0.16 mmol, 收率23%)。LCMS (ESI): [M+H]+ =595.0。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.64 (s, 1H), 10.31(br s, 1H), 8.45 (d,J = 8.8 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.85 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.30 (d,J = 2.0 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 8.8 Hz, 1H), 4.98 (br s, 1H), 3.84 - 3.70 (m,2H), 3.53 - 3.48 (m, 4H), 3.40 - 3.36 (m, 2H), 2.99 -2.94 (m, 4H), 2.21 -2.09 (m, 4H), 1.90 - 1.51 (m, 4H), 0.40 (s, 4H)。
实施例17：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(甲磺酰)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物17）的制备
第一步: 向5-溴-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-2-胺(3.00 g, 10.3 mmol), 甲基亚磺酸钠(1.26 g, 12.3 mmol), L-脯氨酸 (0.24 g, 2.05 mmol) 和氢氧化钠 (0.08g, 2.05 mmol)的二甲基亚砜(30 mL)的溶液中加入碘化亚铜(1.00 g, 5.13 mmol)。将混合物在氮气的保护下加热至120℃搅拌16小时。将反应混合物加入到水(60 mL)中，用乙酸乙酯(60 mL × 2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(60 mLx2)洗涤，有机相合并用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-60%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(甲磺酰)吡啶-2-胺(100 mg, 0.31mmol, 收率3%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 292.0。
第二步: 向6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(甲磺酰)吡啶-2-胺(100 mg, 0.34mmol),4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰氯化(167 mg, 0.45 mmol)的四氢呋喃(2 mL)溶液中加入叔丁醇钾的四氢呋喃溶液(1.03 mL, 1.04 mmol, 1 mol/L)和N,N-二异丙基乙胺(135 mg, 1.03 mmol)。将反应混合物在25℃搅拌16小时。向反应混合物中加入水(20 mL)，用乙酸乙酯(20 mL × 2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-12%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体化合物N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(甲磺酰)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺 (80 mg, 0.12mmol，收率37%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 631.1。1H-NMR(400 MHz, CDCl3-d) δ ppm 13.75 (s, 1H), 8.29 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.22 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.68 - 7.59 (m, J = 3.0 Hz, 2H),3.40 - 3.25 (m, 4H), 3.17 (s, 3H), 3.05 - 2.98 (m, 4H), 2.17 - 2.06 (m, 4H),1.58 - 1.44 (m, 4H), 0.38 (s, 4H)。
第三步: 向2-羟基乙磺酰胺(20.6 mg, 0.16 mmol)，2-(甲基氨基)乙酸(11.3mg, 0.12 mmol)，磷酸钾(110 mg, 0.50 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1 mL)溶液中加入碘化亚铜(12.3 mg, 0.06 mmol)。将混合物在50℃搅拌5分钟。然后将N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(甲磺酰)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(80 mg,0.12 mmol)在50℃加入到反应混合物中，将混合物在氮气的保护下加热至100℃搅拌16小时。向反应液中加入水(10 mL)，用乙酸乙酯(10 mL × 2)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用制备型HPLC(C18，34-74%梯度的水(甲酸)/乙腈)纯化，得到白色固体化合物N-(2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-甲基嘧啶-4-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-6-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯并呋喃-7-甲酰胺(22 mg, 0.03 mmol，收率28%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 628.5。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.94 (s, 1H),10.34 (s, 1H), 8.32 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.11 (d, J= 1.0 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.16 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 5.05(s, 1H), 3.76 (t, J = 1.0 Hz, 2H), 3.41 - 3.36 (m, 2H), 3.36 (br s, 4H), 3.32(s, 3H), 3.08 - 2.90 (m, 4H), 2.29 - 2.11 (m, 4H), 2.04 - 1.41 (m, 4H), 0.42(s, 4H)。
实施例18：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(二甲基膦酰爪基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物18）的制备
第一步: 向6-(4,4-二氟哌啶基)-5-溴-2-吡啶基胺(2.00 g, 6.85 mmol)和二甲基氧化膦(538 mg, 6.85 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(40 mL)的溶液中加入磷酸钾(2.18g, 10.3 mmol)，(9,9-二甲基-9H-呫吨-4,5-叉基)二(二苯基膦) (0.79 g, 1.37 mmol)和醋酸钯 (0.15 g, 0.69 mmol)，将反应混合物在130℃搅拌16小时。将反应混合物加入冰水(200 mL)中，用乙酸乙酯(300 mL × 2)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(200 mL)洗一遍，有机相合并用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-40%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体(6-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-3-基)二甲基膦氧化(240 mg, 0.82 mmol, 收率12%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 290.2。
第二步: 向(6-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-3-基)二甲基膦氧化(100 mg,0.35 mmol)的四氢呋喃(2 mL)的溶液中加入2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)-4-碘苯甲酰氯化(260 mg, 0.52 mmol)和叔丁醇钾的四氢呋喃溶液(1 mol/L, 1.04 mL, 1.04 mmol)，将反应混合物在25℃搅拌16小时。向反应混合物中加入N,N-二甲基甲酰胺(5 mL)，过滤，收集滤液用制备型HPLC (C18，46-86%梯度的水(甲酸)/乙腈)纯化，得到白色固体化合物N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(二甲基膦酰爪基)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(74 mg, 0.12mmol，收率 34%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 628.9。
第三步: 将2-羟基乙基磺酰氨(17.9 mg, 0.14 mmol)和肌氨酸(9.36 mg, 0.11mmol)加入至N,N-二甲基甲酰胺(2.00 mL)中，在25℃下加入碘化亚铜(9.09 mg, 0.05mmol)和磷酸钾(81.1 mg, 0.38 mmol)，并在50℃搅拌5分钟。随后将N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(二甲基膦酰爪基)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(60.0 mg, 0.10 mmol)分批加入，将混合物在氮气的保护下加热至100℃搅拌16小时。向反应混合物中加入N,N-二甲基甲酰胺(5 mL)，过滤，收集滤液用制备型HPLC (C18，20-60%梯度的水(甲酸)/乙腈)纯化，得到白色固体化合物N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(二甲基膦酰爪基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(33.0 mg, 0.06 mmol, 收率55%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 626.2。1H-NMR (400 MHz,DMSO-d6) δ ppm 13.60 (s, 1H), 10.27 (s, 1H), 8.27 - 7.99 (m, 3H), 7.29 (d, J= 1.6 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 1.8, 8.5 Hz, 1H), 4.96(br s, 1H), 3.76 (t, J =6.4 Hz, 2H), 3.41 - 3.34 (m, 6H), 3.06 - 2.91 (m, 4H), 2.19 - 2.10 (m, 4H),2.01 - 1.39 (m, 10H), 0.39 (s, 4H)。
实施例19：N-(5-乙酰基-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物19）的制备
第一步:向5-溴-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-2-胺(3.00 g, 10.3 mmol)和三丁基(1-乙氧基乙烯基)锡烷(5.56 g, 15.4 mmol)的二氧六环(60 mL)的溶液中加入双三苯基磷二氯化钯(0.02 g, 0.03 mmol)。将混合物在氮气的保护下加热至100℃搅拌16小时。将反应混合物加入到水(100 mL)中，用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(60 mL × 2)洗涤，有机相合并用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体1-(6-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-3-基)乙酮(0.90 g, 3.5 mmol, 收率34%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 256.0。
第二步:向1-(6-氨基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-3-基)乙酮(300 mg, 1.17mmol),4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰氯化(573 mg, 1.52 mmol)的四氢呋喃(6 mL)溶液中加入叔丁醇钾的四氢呋喃溶液(3.52 mL, 3.52 mmol, 1 mol/L)和N,N-二异丙基乙胺(465 mg, 3.52 mmol)。将反应混合物在25℃搅拌16小时。向反应混合物中加入水(20 mL)，用乙酸乙酯(20 mL × 2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-8%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体化合物N-(5-乙酰基-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(250 mg, 0.42mmol，收率36%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 595.1。1H-NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.33 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.89 - 7.79 (m,3H), 7.75 (dd, J = 1.5, 8.3 Hz, 1H), 3.48 - 3.38 (m, 4H), 3.04 (br t, J = 5.1Hz, 4H), 2.50(s, 3H), 2.16 - 2.02 (m, 4H), 1.96 - 1.57 (m, 4H), 0.39 (s, 4H)。
第三步: 向2-羟基乙磺酰胺(68.4 mg, 0.54 mmol)，2-(甲基氨基)乙酸(37.4mg, 0.42 mmol)，磷酸钾(364 mg, 1.68 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(1 mL)溶液中加入碘化亚铜(40.8 mg, 0.21 mmol)。将混合物在50℃搅拌5分钟。然后将N-(5-乙酰基-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(250 mg, 0.42mmol)在50℃加入到反应混合物中，将混合物在氮气的保护下加热至100℃搅拌16小时。向反应液中加入水(10 mL)，用乙酸乙酯(10 mL × 2)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用制备型HPLC(C18，36-76%梯度的水(甲酸)/乙腈)纯化，得到白色固体化合物N-(5-乙酰基-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(104 mg, 0.17 mmol，收率42%)。LCMS(ESI): [M+H]+ =592.3。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.32 (s, 1H), 10.26 (s,1H), 8.08 (dd, J = 3.8, 8.5 Hz, 2H), 7.83 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.28 (d, J =1.9 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 4.95(m, 1H), 3.76 (t, J = 6.3Hz, 2H), 3.52 - 3.40 (m, 4H), 3.40 - 3.36 (m, 2H), 3.11 - 2.85 (m, 4H), 2.52(br s, 3H), 2.18 - 1.99 (m, 4H), 2.00 - 1.34 (m, 4H), 0.40 (s, 4H)。
实施例20：甲基-2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-(4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺)烟酸（化合物20）的制备
第一步：25℃下，将碳酸钾(6 g, 43.68 mmol)加到2,6-二氯吡啶-3-羧酸甲酯(3.0 g, 14.6 mmol)和4,4-二氟哌啶盐酸盐(2.65 g, 21.84 mmol)的1,4-二氧六环(50mL)溶液中，所得的反应混合物在130℃下搅拌8小时。向反应液中加入乙酸乙酯(100 mL)，用饱和氯化钠溶液(50 mL × 3)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得残余物，残余物经快速柱层析纯(硅胶，0-15%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得甲基2-(4,4-二氟哌啶基)-6-氯吡啶-3-羧酸酯(1.8 g，收率42%)为白色固体。LCMS (ESI): [M+H]+=291.10。
第二步：25℃下，将 三(二亚苄基丙酮)二钯 (190 mg, 0.21 mmol)和1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(260 mg，0.41 mmol)加到甲基2-(4,4-二氟哌啶基)-6-氯吡啶-3-羧酸酯(0.80 g，2.75 mmol)、胺基甲酸叔丁酯 (0.64 g, 5.50 mmol)、碳酸铯(2.7 g, 8.25mmol) 的1,4-二氧六环(10 mL)溶液中。所得反应混合物用氮气鼓气3分钟，在120℃下搅拌16小时。将反应混合物过滤，用乙酸乙酯(30 mL)稀释，用饱和氯化钠溶液(10 mL × 3)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得残余物，残余物经快速柱层析纯化(硅胶，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚) 得 甲基2-(4,4-二氟哌啶)-6-[(叔丁基)酰胺基]吡啶-3-羧酸酯(0.8 g, 收率78%) 为黄色固体。LCMS (ESI): [M+H]+=372.20。
第三步：甲基2-(4,4-二氟哌啶)-6-[(叔丁基)酰胺基]吡啶-3-羧酸酯 (0.80 g,2.15 mmol)和三氟乙酸(2 mL)的二氯甲烷(2 mL)溶液在25℃ 下搅拌16小时。向反应液中加入乙酸乙酯(10 mL)，用饱和碳酸氢钠溶液(30 mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得粗品甲基6-胺-2-(4,4-二氟哌啶基)吡啶-3-羧酸酯(680 mg, 粗品)为黄色固体。LCMS (ESI): [M+H]+=272.10。
第四步：将正丙基磷酸酐(4.0 g, 6.27 mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.3 mL,12.5 mmol)加到 2-氟-4-碘苯甲酸(680 mg, 2.56 mmol)、甲基6-胺-2-(4,4-二氟哌啶基)吡啶-3-羧酸酯(680 mg, 2.51 mmol)的1,2-二氯乙烷(10 mL)溶液中，所得的反应混合物在80℃下搅拌4小时。反应混合物用二氯甲烷(20 mL)稀释，用饱和氯化钠溶液(30 mL ×3)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得残余物，残余物经快速柱层纯化(硅胶，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得甲基2-(4,4-二氟哌啶)-6-[(2-氟-4-碘苯基)酰胺基]吡啶-3-羧酸酯(800 mg, 收率61%) 为白色固体。LCMS (ESI): [M+H]+=520.10。
第五步：25℃下，将碳酸钾(1.2 g, 8.47 mmol)加到甲基2-(4,4-二氟哌啶)-6-[(2-氟-4-碘苯基)酰胺基]吡啶-3-羧酸酯(550 mg, 1.06 mmol)和6-氮杂螺环[2.5]辛烷盐酸盐(778 mg, 5.30 mmol) 的甲苯(10 mL)溶液中，所得反应混合物在120℃下16小时。反应液经过滤、浓缩得残余物，残余物经快速柱层析纯化(硅胶，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚) 得甲基6-{[2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)-4-碘苯基]酰胺基}-2-(4,4-二氟哌啶)吡啶-3-羧酸酯(600 mg，收率92%)为淡褐色固体。LCMS (ESI): [M+H]+=611.30。
第六步：将碘化亚铜(32 mg, 0.16 mmol)和(1R,2R)-(-)-N,N'-二甲基-1,2-环己二胺(12 mg, 0.08 mmol)加到甲基6-{[2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)-4-碘苯基]酰胺基}-2-(4,4-二氟哌啶)吡啶-3-羧酸酯(100 mg, 0.16 mmol)、2-羟乙基磺酰胺(41 mg,0.33 mmol)和磷酸钾(106 mg, 0.49 mmol)的1,4-二氧六环(5 mL)溶液中，所得反应液用氮气鼓气3分钟，在120℃下搅拌12小时。反应液用乙酸乙酯(20 mL)稀释，用饱和氯化钠溶液(15 mL × 3)洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得残余物，残余物经快速柱层析纯化(硅胶，30-70%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得甲基2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-(4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺)烟酸(50 mg, 收率50%)为白色固体。LCMS (ESI): [M+H]+=608.30。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.31 (s, 1H),10.25 (s, 1H), 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.81 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H), 4.94(t, J = 5.6 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.76 (q, J = 6.1 Hz, 2H), 3.46 (t, J = 5.7Hz, 4H), 3.37 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.99 (s, 4H), 2.18 – 2.02 (m, 4H), 1.73(s, 4H), 0.40 (s, 4H)。
实施例21：2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-(4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺)烟酸（化合物21）的制备
25℃下，将氢氧化锂(70 mg, 1.64 mmol)加到甲基 2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-(4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺)烟酸 (100 mg,0.16 mmol)的四氢呋喃(5mL)甲醇(2 mL)水(0.7 mL)的混合溶液中，所得的反应混合物在25℃下搅拌36小时。向反应混合物种加入稀盐酸(1 M)，将pH调到3。将反应夜浓缩至大量白色固体生成，将固体过滤并冻干得2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6- (4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺)烟酸(50 mg, 收率51%) 为白色固体。LCMS（ESI）: [M+H]+=594.4。1H NMR (400 MHz, DMSO) δ 13.28 (s, 1H), 12.78 (s, 1H),10.25 (s, 1H), 8.13 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.79 (d, J= 8.4 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1H), 4.94(s, 1H), 3.76 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.54 – 3.41 (m, 4H), 3.36 (t, J = 6.5 Hz,2H), 2.99 (t, J = 5.3 Hz, 4H), 2.18 – 2.01 (m, 4H), 1.73 (s, 4H), 0.40 (s,4H)。
实施例22：2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-(4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺)烟酰胺（化合物22）的制备
25℃下，将氨水(2.0 mL)加到甲基 2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-(4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺)烟酸 (50 mg, 0.08 mmol)的甲醇(2.0 mL)溶液中，所得的反应混合物在75℃下搅拌12小时。用稀盐酸(1M)将pH调到7，浓缩反应液得白色残余物，残余物经高效液相色谱制备纯化(C18，40-90%梯度的乙腈/水) 得2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-(4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺)烟酰胺(22 mg, 45%)为白色固体。LCMS（ESI）: [M+H]+=593.4。1H NMR (400 MHz,DMSO) δ 13.28 (s, 1H), 10.34 (s, 1H), 8.07 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.89 (d, J =8.2 Hz, 1H), 7.83 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 7.47 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.12 (d, J= 8.7 Hz, 1H), 4.93 (s, 1H), 3.76 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.36 (s, 4H), 3.34 (s,2H), 2.98 (s, 4H), 2.12 (td, J = 17.4, 15.9, 8.7 Hz, 4H), 1.75 (s, 4H), 0.39(s, 4H)。
实施例23：2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-(4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺)-N,N-二甲基烟酰胺（化合物23）的制备
化合物23参照化合物22的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ =621.4。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.20 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.6 Hz,1H), 7.81 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 2.2 Hz,1H), 7.13 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 3.76 (t, J = 6.6 Hz, 2H),3.44 (d, J = 6.8 Hz, 4H), 3.36 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.99 (d, J = 4.2 Hz, 7H),2.87 (s, 3H), 2.05 (tq, J = 13.5, 5.5 Hz, 4H), 1.82 (d, J = 69.3 Hz, 4H),0.39 (s, 4H)。
实施例24：2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-N-乙基-6-(4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺)烟酰胺（化合物24）的制备
化合物24参照化合物22的合成路线制备得到：LCMS (ESI): [M+H]+= 621.40。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.21 (s, 1H), 10.23 (s, 1H), 8.37 (t, J = 5.7 Hz,1H), 8.08 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.83 (s, 2H), 7.28 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.13(dd, J = 8.7, 2.2 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 3.76 (s, 2H), 3.39 (dd, J = 9.8, 3.9Hz, 4H), 3.35 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.30 – 3.22 (m, 2H), 2.99 (s, 4H), 2.10(td, J = 14.1, 7.1 Hz, 4H), 1.74 (s, 4H), 1.12 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.39 (s,4H)。
实施例25：2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-N-(2-羟乙基)-6-(4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺)烟酰胺（化合物25）的制备
化合物25参照化合物22的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ =637.40。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.31 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.58 (t, J = 5.6 Hz,1H), 8.08 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 8.3 Hz,1H), 7.28 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H),4.82 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 3.76 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.54 (q, J = 5.6 Hz, 2H),3.36 (td, J = 6.0, 5.6, 2.2 Hz, 8H), 2.99 (t, J = 5.3 Hz, 4H), 2.15 (tt, J =13.7, 5.6 Hz, 4H), 1.95 – 1.33 (m, 4H), 0.39 (s, 4H)。
实施例26：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(吗啉-4-羰基)吡啶-2-基)-4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物26）的制备
化合物26参照化合物22的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ =663.4。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.19 (s, 1H), 10.20 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.6 Hz,1H), 7.83 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.31 - 7.24 (m, 1H),7.13 (dd, J = 8.6, 2.1 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 3.76 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.70- 3.57 (m, 4H), 3.51 (s, 4H), 3.45 (s, 2H), 3.35 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.22(s, 2H), 2.98 (s, 4H), 2.12 - 1.97 (m, 4H), 1.73 (s, 4H), 0.39 (s, 4H)。
实施例27：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(4-甲基哌嗪-1-羰基)吡啶-2-基)-4-((2-羟乙基) 磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物27）的制备
化合物27参照化合物22的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+=676.4。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.18 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.08 (d, J = 8.7 Hz,1H), 7.82 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 2.2 Hz,1H), 7.13 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 3.76 (t, J = 6.5 Hz, 2H),3.63 (s, 2H), 3.55 - 3.40 (m, 4H), 3.36 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.21 (s, 2H),2.99 (d, J = 5.4 Hz, 4H), 2.36 (s, 2H), 2.25 (s, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.06 (q,J = 14.5, 10.8 Hz, 4H), 1.73 (s, 4H), 0.39 (s, 4H)。
实施例28：2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-(4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)烟酰胺（化合物28）的制备
化合物28参照化合物22的合成路线制备得到的：LCMS (ESI): [M+H]+ =673.5。1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.30 (s, 1H), 10.36 (s, 1H), 10.22 (s, 1H), 8.09(d, J = 8.6 Hz, 1H), 8.03 – 7.97 (m, 1H), 7.88 (q, J = 8.2 Hz, 2H), 7.52 (d,J = 0.7 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.14 (dd, J = 8.7, 2.1 Hz, 1H),4.95 (s, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.77 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.42 (d, J = 5.7 Hz,4H), 3.37 (d, J = 6.4 Hz, 2H), 3.00 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 2.07 (q, J = 8.4 Hz,4H), 1.75 (d, J = 48.7 Hz, 4H), 0.40 (s, 4H)。
实施例29：N-(1-(4,4-二氟哌啶-1-基)-8-氧亚基-5,6,7,8-四氢-2,7-萘啶-3-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物29）的制备
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第一步: 在25℃下，向甲基2,6-二氯-4-甲基吡啶-3-甲酸基酯(3.00 g, 13.6mmol)的N,N-二异丙基乙胺(30 mL)的溶液中加入N,N-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(4.97 g,40.9 mmol)，该混合物在100℃搅拌12小时。反应液缓慢滴加到水(60 mL)里，有黄色沉淀析出，然后收集所得到的沉淀物用油泵拉干，得到黄色固体粗品甲基 4-[(1E)-2-(二甲氨基)乙烯基]-2,6-二氯吡啶-3-甲酸基酯(3.60 g，39.3 mmol，收率96%)。
第二步: 在25℃下，将甲基 4-[(1E)-2-(二甲氨基)乙烯基]-2,6-二氯吡啶-3-甲酸基酯(2.10 g, 7.63 mmol)加入到四氢呋喃(30 mL)中,然后滴加浓盐酸(18 mL)， 反应液在25℃下继续搅拌4小时。反应液中加入食盐水(100 mL)，用乙酸乙酯(100 mL × 3)萃取。合并有机相，用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得到黄色油状物粗品甲基 2,6-二氯-4-(2-氧亚基乙基)吡啶-3-甲酸基酯(1.80 g, 7.25 mmol, 收率95%)。1H NMR (400 MHz,CHLOROFORM-d) δ ppm 9.65 (s, 1H), 7.18 - 7.10 (m, 1H), 3.88 (s, 3H), 3.76 (s,2H)。
第三步: 在25℃下，向异丙醇(18 mL)和甲醇(18 mL)溶液中加入甲基 2,6-二氯-4-(2-氧亚基乙基)吡啶-3-甲酸基酯（1.8 g, 7.26 mmol)和4-甲氧苄基胺（1.01 g, 7.26mmol)，将混合物在25℃下搅拌2小时。然后再将反应液中加入醋酸(1.31 g, 21.8 mmol)和氰基硼氢化钠(1.35 g, 21.8 mmol)，将反应液加热到80℃搅拌12小时。向反应液中缓慢分次倒入饱和碳酸氢钠溶液(100 mL)调节pH到7-8，然后加入乙酸乙酯(150 × 2 mL)萃取，有机相合并用饱和氯化钠(100 mL)洗涤。有机相用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化（硅胶，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚）得到白色固体6,8-二氯-2-[(4-甲氧苯基)甲基]-2,3,4-三氢吡啶并[3,4-c]吡啶-1-酮(1.60 g, 4.72 mmol,收率65%)。LCMS (ESI): [M+H]+= 336.6。
第四步: 25℃下，向6,8-二氯-2-[(4-甲氧苯基)甲基]-2,3,4-三氢吡啶并[3,4-c]吡啶-1-酮(1.80 g, 5.34 mmol)的二甲基亚砜(40.0 mL) 溶液中加入碳酸钾(2.21 g,16.0 mmol) 和4,4-二氟哌啶盐酸(0.85 g, 5.34 mmol)，反应混合物在120℃下搅拌12小时。反应体系用水(100 mL)稀释，用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取，有机相用饱和氯化钠(100 mL)洗涤。有机相用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化（硅胶，0-10%梯度的四氢呋喃/石油醚得白色固体化合物8-(4,4-二氟哌啶基)-6-氯-2-[(4-甲氧苯基)甲基]-2,3,4-三氢吡啶并[3,4-c]吡啶-1-酮(1.26 g, 2.99 mmol,收率56%)。LCMS (ESI): [M+H]+= 421.9。1H NMR (400 MHz, CHLOROFORM-d) δ ppm 7.17 (d, J= 8.4 Hz, 2H), 6.78 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.45 (s, 1H), 4.60 (s, 2H), 3.73 (s,3H), 3.57 - 3.51 (m, 4H), 3.39 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.63 (t, J = 6.0 Hz, 2H),2.14 - 2.04 (m, 4H)。
第五步: 25℃下，向8-(4,4-二氟哌啶基)-6-氯-2-[(4-甲氧苯基)甲基]-2,3,4-三氢吡啶并[3,4-c]吡啶-1-酮(1.00 g, 2.37 mmol) 的二氧六环 (20.0 mL) 溶液中加入二苯甲酮亚胺(0.44 g, 2.37 mmol)，碳酸铯(2.32 g, 7.11 mmol)，(9,9-二甲基-9H-呫吨-4,5-叉基)二(二苯基膦) (0.27 g, 0.47 mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.22 g,0.24 mmol)。在氮气的保护下将混合物加热至100℃搅拌12小时。向反应液中加入水(100mL)，用乙酸乙酯(150 mL × 3)萃取。合并有机相，有机相用饱和氯化钠(100 mL)洗涤。有机相用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-25%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到白色固体8-(4,4-二氟哌啶基)-6-(2,2-二苯基-1-氮杂乙烯基)-2-[(4-甲氧苯基)甲基]-2,3,4-三氢吡啶并[3,4-c]吡啶-1-酮(1.06 g, 1.87 mmol ，收率79%)。LCMS (ESI): [M+H]+=567.3。
第六步: 25℃下，向8-(4,4-二氟哌啶基)-6-(2,2-二苯基-1-氮杂乙烯基)-2-[(4-甲氧苯基)甲基]-2,3,4-三氢吡啶并[3,4-c]吡啶-1-酮(1.2 g, 2.12 mmol) 的二氧六环 (10 mL) 溶液中滴加盐酸二氧六环 (10 mL)，反应混合物在氮气的保护下搅拌12小时。反应液直接在真空下浓缩旋干得残余物。残留物用甲基叔丁基醚(20 mL)打浆过滤，油泵旋干得到黄色固体化合物6-氨基-8-(4,4-二氟哌啶-1-基)-2-(4-甲氧苄基)-3,4-二氢-2,7-萘啶-1(2H)-酮(760 mg,1.88 mmol，收率89%)。LCMS (ESI): [M+H]+=402.9。
第七步: 25℃下，向6-氨基-8-(4,4-二氟哌啶基)-2-[(4-甲氧苯基)甲基]-2,3,4-三氢吡啶并[3,4-c]吡啶-1-酮(300 mg, 0.75 mmol)的甲苯(6 mL)溶液中加入一水合对甲苯磺酸(709 mg, 3.73 mmol)，反应混合物在100℃下搅拌12小时。向反应液中加入饱和碳酸钠(10 mL)，用乙酸乙酯(20 mLx2)萃取,有机相合并用饱和食盐水(20 mL)洗涤，最后有机相用硫酸镁干燥过滤，在真空减压下浓缩得到残留物。残留物用甲基叔丁基醚(10 mL)打浆过滤，油泵旋干得到黄色固体化合物6-氨基-8-(4,4-二氟哌啶基)-2,3,4-三氢吡啶并[3,4-c]吡啶-1-酮(165 mg, 0.59 mmol，收率78%)。LCMS (ESI): [M+H]+= 283.0。
第八步: 向6-氨基-8-(4,4-二氟哌啶基)-2,3,4-三氢吡啶并[3,4-c]吡啶-1-酮(150 mg, 0.53 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(3 mL)的溶液中加入2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)-4-碘苯甲酸(247 mg, 0.69 mmol)和N,N-二异丙基乙胺(206 mg, 1.59 mmol), 最后把O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦盐(263 mg, 0.69 mmol)加入反应瓶中，将反应混合物在80℃搅拌12小时。将反应混合物加入水(20 mL)中，用乙酸乙酯(30mL × 3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(30 mL)洗一遍，有机相合并用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-30%梯度的四氢呋喃/石油醚)得到黄色固体[2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)-4-碘苯基]-N-[8-(4,4-二氟哌啶基)-1-氧亚基(2,3,4-三氢吡啶并[5,4-c]吡啶-6-基)]甲酰胺(0.21 g, 0.34 mmol, 收率64%)。LCMS(ESI): [M+H]+ =621.9。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.10 (s, 1H), 7.84 (brd, J = 8.4 Hz, 3H), 7.76 - 7.71 (m, 1H), 7.62 (s, 1H), 3.49 (br s, 4H), 3.03(br t, J = 4.8 Hz, 4H), 2.08 (br t, J = 13.2 Hz, 4H), 1.90 - 1.37 (m, 8H),0.38 (s, 4H)。
第九步: 25℃下，向2-羟基乙磺酰胺(40.3 mg, 0.32 mmol)，(1R,2R)-N1,N2-二甲基环己烷-1,2-二胺 (23.0 mg, 0.16 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(2 mL)溶液中加入碘化亚铜(15.3 mg, 0.08 mmol) 和磷酸钾(137 mg, 0.64 mmol)，反应混合物在氮气的保护下加热到50℃搅拌5分钟，然后在50℃下加入[2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)-4-碘苯基]-N-[8-(4,4-二氟哌啶基)-1-氧亚基(2,3,4-三氢吡啶并[5,4-c]吡啶-6-基)]甲酰胺(100 mg,0.16 mmol)重新置换氮气，最后反应液在100℃下搅拌16小时。向反应混合物中加入氨水(5mL)和水(15 mL)，用二氯甲烷(20 mL × 3)萃取。合并有机相，用饱和食盐水(20 mL)洗一遍，有机相合并用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。用N,N-二甲基甲酰胺(5 mL)稀释残渣。稀释液用制备型HPLC (C18，26-66%梯度的水(甲酸)/乙腈)纯化，得到黄色固体化合物(2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)-4-{[(2-羟基乙基)磺酰]氨基}苯基)-N-[8-(4,4-二氟哌啶基)-1-氧亚基(2,3,4-三氢吡啶并[5,4-c]吡啶-6-基)]甲酰胺(33 mg, 0.05 mmol,收率33%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 619.3。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.30 (s,1H), 10.53 - 9.86 (m, 1H), 8.06 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.83 (br s, 1H), 7.63(s, 1H), 7.26 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.13(dd, J = 2.0, 6.8 Hz, 1H), 5.14 - 4.76(m, 1H), 3.76 (br t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.56 - 3.46 (m, 4H), 3.30 (br d, J =5.6 Hz, 4H), 2.90 - 3.00 (m, 4H), 2.84 (br t, J = 5.6 Hz, 2H), 2.20 - 1.35(m, 8H), 0.39 (s, 4H)。
实施例30：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物30）的制备
第一步: 将2,6-二氟-4-碘吡啶(22.0 g, 91.3 mmol)加入至二甲基亚砜(220mL)中，然后加入4,4-二氟哌啶盐酸盐(13.0 g, 82.2 mmol)和N,N-二异丙基乙胺(24.1 g,183 mmol)，反应液在70℃下搅拌4小时。将反应液冷却至室温，用水(400 mL)和乙酸乙酯(300 mL × 3)进行萃取，合并有机相，用饱和食盐水(400 mL × 2)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-5%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到无色液体2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-氟-4-碘吡啶(30.0 g, 87.7 mmol, 收率96%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 342.9。
第二步: 向2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-6-氟-4-碘吡啶(30.0 g, 87.7 mmol)的N-甲基-2-吡咯烷酮(300 mL)溶液中加入碳酸钾(37.1 g, 263 mmol)和双(4-甲氧基苄基)胺(22.6 g, 87.7 mmol)。混合物在150℃下搅拌3天。将反应液冷却至室温，用水(600 mL)和乙酸乙酯(400 mL × 3)进行萃取，合并有机相，用饱和食盐水(500 mL × 3)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到无色液体6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-碘-N,N-二(4-甲氧苄基)吡啶-2-胺(22.4 g, 38.6 mmol, 收率44%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 580.1。
第三步: 向6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-碘-N,N-二(4-甲氧苄基)吡啶-2-胺(10.0g, 17.3 mmol)的二氧六环(100 mL)和水(20 mL)溶液中加入碳酸铯(17.2 g, 51.8mmol)，1-甲基-4-吡唑硼酸频哪醇酯(3.59 g, 17.3 mmol)和四(三苯基膦)钯(2.04 g,1.73 mmol)。将混合物用氮气置换三次，并在氮气氛围下加热至100℃搅拌16小时。将反应液冷却至室温，用水(250 mL)和乙酸乙酯(250 mL × 3)进行萃取，合并有机相，用饱和食盐水(250 mL)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-33%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到橙色固体6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-N,N-二(4-甲氧苄基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺(5.80 g, 10.9 mmol, 收率63%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 534.2。
第四步: 将6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-N,N-二(4-甲氧苄基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺(5.00 g, 9.37 mmol)加入至三氟乙酸(50 mL)中。混合物在80℃搅拌16小时。反应液旋干得到黑色固体6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺(4.8 g, 粗品)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 294.1。
第五步: 向6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-胺(1.50g, 5.11 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(30 mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(1.35 g, 10.2mmol)和4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸(1.83 g, 5.11 mmol)。混合物在25℃搅拌30分钟后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸酯(2.38 g, 6.14mmol)，并在25℃下搅拌16小时。反应液加入水(100 mL)和乙酸乙酯(100 mL × 3)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗涤(100 mL)，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化（硅胶，0-17%梯度的乙酸乙酯/石油醚）得到黄色固体N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(0.65 g, 1.02 mmol, 收率20%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 633.1。
第六步: 将2-羟基乙基磺酰氨(103 mg, 0.82 mmol)和肌氨酸(56.3 mg, 0.63mmol)加入至N,N-二甲基甲酰胺(8 mL)中，在25℃下加入碘化亚铜(61.5 mg, 0.32 mmol)和磷酸钾(548 mg, 2.53 mmol)，并在50℃搅拌5分钟。随后将N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(400mg, 0.63 mmol)分批加入，将混合物用氮气置换三次，并在氮气氛围下加热至100℃搅拌16小时。反应液冷却至室温，用水(20 mL)和乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗涤(20 mL × 3)，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用制备型HPLC (C18，34-74%梯度的水(甲酸)/乙腈)纯化，得到白色固体化合物N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(136 mg, 0.04 mmol，收率34%)。LCMS (ESI): [M+H]+ =630.0。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 12.90 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 8.30 (s,1H), 8.08 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.27 (d, J = 2.0Hz, 1H), 7.13 (dd, J = 2.0, 8.8 Hz, 1H), 6.91 (s, 1H), 5.18 - 4.71 (m, 1H),3.89 (s, 3H), 3.83 - 3.70 (m, 6H), 3.43 - 3.35 (m, 2H), 3.10 - 2.87 (m, 4H),2.21 - 1.25 (m, 8H), 0.39 (s, 4H)。
实施例31：N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物31）的制备
第一步: 将5-溴-6-氯吡嗪-2-胺(5.00 g, 24.0 mmol)加入至二甲基亚砜(50mL)中，然后加入4,4-二氟哌啶盐酸盐(3.78 g, 24.0 mmol)和碳酸钾(10.2 g, 72.0mmol)，反应液在140℃下搅拌24小时。将反应液冷却至室温，用水(100 mL)和乙酸乙酯(100mL × 3)进行萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100 mL × 2)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-25%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体5-溴-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡嗪-2-胺(5.20 g, 17.8 mmol, 收率74%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 292.9。
第二步: 向5-溴-6-(4,4-二氟哌啶-1-基)吡嗪-2-胺(4.00 g, 13.7 mmol)的二氧六环(40 mL)和水(8 mL)溶液中加入碳酸铯(13.6 g, 40.9 mmol)，1-甲基-4-吡唑硼酸频哪醇酯(2.84 g, 13.65 mmol)和四(三苯基膦)钯(1.61 g, 1.36 mmol)。将混合物用氮气置换三次，并在氮气氛围下加热至100℃搅拌16小时。将反应液冷却至室温，用水(100mL)和乙酸乙酯(100 mL × 3)进行萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100 mL)洗涤，再用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-33%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-胺(2.20 g, 7.51 mmol, 收率55%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 295.0。
第三步: 向6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-胺(500mg, 1.70 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10 mL)溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(672 mg,5.10 mmol)和4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸(607 mg, 1.70 mmol)。混合物在25℃搅拌30分钟后加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N,N-四甲基脲六氟磷酸酯(791 mg,2.04 mmol)。反应液用水(25 mL)和乙酸乙酯(25 mL × 3)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗涤(25 mL)，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化（硅胶，0-33%梯度的乙酸乙酯/石油醚）得到黄色固体N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(450 mg, 0.71mmol, 收率42%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 634.1。
第四步: 将2-羟基乙基磺酰氨(51.4 mg, 0.41 mmol)和肌氨酸(28.1 mg, 0.32mmol)加入至N,N-二甲基甲酰胺(4 mL)中，在25℃下加入碘化亚铜(30.7 mg, 0.16 mmol)和磷酸钾(274 mg, 1.26 mmol)，并在50℃搅拌5分钟。随后将N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(200mg, 0.32 mmol)分批加入，将混合物用氮气置换三次，并在氮气氛围下加热至100℃搅拌16小时。反应液冷却至室温，用水(20 mL)和乙酸乙酯(20 mL × 3)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗涤(20 mL × 3)，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用制备型HPLC (C18，30-70%梯度的水(甲酸)/乙腈)纯化，得到白色固体化合物N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)吡嗪-2-基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(124 mg, 0.20 mmol，收率62%)。LCMS (ESI): [M+H]+ =631.4；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.53 (s, 1H), 10.64 - 9.87 (m, 1H),9.10 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.10 (dd, J = 1.6, 8.8 Hz, 1H), 8.03(d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.14 (br d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.40 - 4.48(m, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.80 - 3.71 (m, 2H), 3.38 - 3.34 (m, 2H), 3.29 - 3.23(m, 4H), 3.09 - 2.89 (m, 4H), 2.27 - 2.10 (m, 4H), 2.08 - 1.36 (m, 4H), 0.40(s, 4H)。
实施例32：N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺（化合物32）的制备
第一步: 向2-溴-1-碘-4-硝基苯 (5.00 g, 15.2 mmol) , 1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二噁硼戊环-2-基)-1H-吡唑 (3.17 g, 15.2 mmol) , 碳酸钾(6.31 g,45.7 mmol) 的二氧六环(100 mL)和水(20 mL)溶液中加入1,1-双(二苯基磷)二茂铁氯化钯 (1.15 g, 1.52 mmol)。将混合物在氮气的保护下加热至60℃搅拌16小时。将反应混合物加入到水(100 mL)中，用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mLx2)洗涤，有机相合并用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体4-(2-溴-4-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(4.30 g, 15.2 mmol, 收率99.9%)。LCMS (ESI): [M+H]+= 281.8。
第二步: 向4-(2-溴-4-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑 (4.50 g, 15.9 mmol)，盐酸4,4-二氟哌啶 (3.05 g, 19.3 mmol)，碳酸铯(15.7 g, 48.4 mmol)的二氧六环(80 mL)中加入三(二亚苄基丙酮)二钯 (1.49 g, 1.59 mmol)和45-双二苯基膦-99-二甲基氧杂氧杂蒽杂蒽 (0.94 g, 1.59 mmol)。将混合物在氮气的保护下加热至100℃搅拌16小时。将反应混合物加入到水(100 mL)中，用乙酸乙酯(100 mL × 2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100 mLx2)洗涤，有机相合并用无水硫酸镁干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-30%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体4-(2-溴-4-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(2.60 g, 8.06 mmol, 收率51%)。LCMS (ESI): [M+H]+= 323.0。
第三步: 向4-(2-溴-4-硝基苯基)-1-甲基-1H-吡唑(2.60 g, 8.06 mmol)的甲醇（48 mL）和水（12 mL）溶液中加入氯化铵(0.99 g, 18.6 mmol)和铁粉 (4.51 g, 80.6mmol)。将混合物加热至60℃搅拌4小时。将反应液用硅藻土过滤，滤液用乙酸乙酯(100 mL× 3)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得到黄色固体3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯胺(2.00 g, 6.85 mmol，收率85%)。LCMS (ESI):[M+H]+ =293.0。
第四步: 向3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯胺 (1.96 g,6.72 mmol)，4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酸 (2.00 g, 5.60 mmol)和N,N-二异丙基乙胺(2.22 g, 16.8 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(20 mL)的溶液中加入O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)-N,N,N,N-四甲基脲六氟膦盐(3.26 g, 8.40 mmol)。将反应混合物在25℃搅拌16小时。向反应混合物中加入水(40 mL)，用乙酸乙酯(40 mL × 2)萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体化合物N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(甲磺酰)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺 (1.50 g, 2.37mmol，收率42%)。LCMS(ESI): [M+H]+ = 632.1。
第五步: 向2-羟基乙磺酰胺(198 mg, 1.58 mmol)，2-(甲基氨基)乙酸(63.4 mg,0.79 mmol)，磷酸钾(514 mg, 2.37 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(5 mL)溶液中加入碘化亚铜(153 mg, 0.79 mmol)。将混合物在50℃搅拌5分钟。然后将N-(6-(4,4-二氟哌啶-1-基)-5-(甲磺酰)吡啶-2-基)-4-碘-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(500 mg, 0.79mmol)在50℃加入到反应混合物中，将混合物在氮气的保护下加热至100℃搅拌16小时。向反应液中加入水(20 mL)，用乙酸乙酯(20 mL × 2)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用制备型HPLC(C18，40-80%梯度的水(甲酸)/乙腈)纯化，得到白色固体化合物N-(3-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)苯基)-4-(2-羟基乙基磺酰氨基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺(88.6 mg, 0.14 mmol，收率18%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 629.5。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 11.84 (s, 1H),10.20 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.61 (d,J = 1.6 Hz, 1H), 7.50(dd, J = 2.0, 8.4 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.4 Hz, 1H),7.17 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.04 (dd, J = 1.6, 8.4 Hz, 1H), 5.68 - 4.50 (m,1H), 3.90 (s, 3H), 3.77 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.42 - 3.35 (m, 2H), 3.04 - 2.85(m, 8H), 2.25 - 2.02 (m, 4H), 1.78 - 1.40 (m, 4H), 0.37 (s, 4H)。
实施例33：(2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)-4-{[(2-羟乙基)磺酰基]胺基}苯基)-N-[3-(4,4-二氟哌啶基)-4-(吗啉-4-基羰基)苯基]甲酰胺（化合物33）的制备
20℃下，向4-[(2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)-4-{[(2-羟乙基)磺酰基]胺基}苯基)酰胺基]-2-(4,4-二氟哌啶)苯甲酸(0.30 g, 0.51 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10mL)溶液中加入吗啉(70 mg, 0.76 mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (0.29 g, 0.76 mmol)和N,N-二异丙基乙胺 (0.20 g,1.52 mmol)。所得反应混合物在20℃下搅拌16小时。将反应混合物用乙酸乙酯(30 mL)稀释、用饱和氯化钠溶液 (30mL × 3)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得残余物，经快速柱层析(二氧化硅,0-10%梯度的甲醇/二氯甲烷)纯化得(2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)-4-{[(2-羟乙基)磺酰基]胺基}苯基)-N-[3-(4,4-二氟哌啶基)-4-(吗啉-4-基羰基)苯基]甲酰胺(140 mg,0.21 mmol, 收率42%)。LCMS (ESI): [M+H]+ =662.4；1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.82(s, 1H), 10.11 (s, 1H), 7.83 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.61 (d, J = 1.9 Hz, 1H),7.46 (dd, J = 8.3, 1.8 Hz, 1H), 7.28 – 7.10 (m, 2H), 7.04 (dd, J = 8.5, 2.1Hz, 1H), 4.95 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 3.76 (q, J = 6.3 Hz, 2H), 3.73 – 3.39 (m,6H), 3.34 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.27 – 3.15 (m, 3H), 3.11 – 2.92 (m, 7H), 2.18– 2.02 (m, 4H), 1.63 – 1.46 (m, 4H), 0.36 (s, 4H)。
实施例34：2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-(4-((2-羟乙基)磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺基)-N-(1-甲基-1-氢-吡唑-4-基)苯甲酰胺（化合物34）的制备
第一步：25℃下，向甲基2-氟-4-硝基苯甲酸酯(5.80 g, 29.13 mmol)，4,4-二氟哌啶盐酸盐(15.99 g, 100.43 mmol)的1,4-二氧六环 (15 mL)加入碳酸钾(35.41 g,251.08 mmol)，所得反应混合物在100℃下搅拌16小时。将反应混合物过滤，滤饼用乙酸乙酯(300 mL)洗涤，滤液用饱和食盐水(200 mL × 3)洗涤，有机相经过浓缩、干燥 、过滤、浓缩得残余物，经快速柱层层析(二氧化硅，0-10%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得甲基2-(4,4-二氟哌啶基)-4-硝基苯甲酸酯(3.40 g, 11.29 mmol, 收率38.8%) ，为黄色固体。LCMS(ESI): [M+H]+ =301.3；1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.92 – 7.73 (m, 3H), 3.89 (s,3H), 3.21 (dd, J = 6.8, 4.5 Hz, 4H), 2.10 (tdd, J = 11.2, 9.3, 5.5 Hz, 4H)。
第二步：25℃下，向甲基2-(4,4-二氟哌啶基)-4-硝基苯甲酸酯(3.40 g, 17.07mmol)的乙醇(30 ml)/水(30 ml)混合液中加入氯化铵(3.06 g, 56.62 mmol)，铁粉(3.19g, 56.62 mmol)。所得反应混合物在80℃下搅拌2小时。将反应混合物过滤，滤饼用乙醇(100 mL)洗涤。将滤液浓缩，用乙酸乙酯(150 mL)稀释，用饱和氯化钠溶液(100 mL × 3)洗涤。有机相经过浓缩、干燥、过滤、浓缩得甲基4-胺基-2-(4,4-二氟哌啶基)苯甲酸酯(2.50 g, 9.21 mmol, 收率82.0%)，为橘黄色固体。LCMS (ESI): [M+H]+ =271.3。
第三步：20°C下，甲基4-胺基-2-(4,4-二氟哌啶基)苯甲酸酯(3.40 g, 17.07mmol)的四氢呋喃(30 mL)溶液中加入2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)-4-溴苯甲酰氯(3.06g, 56.62 mmol)和N,N-二异丙基乙胺(3.19 g, 56.62 mmol)，所得的反应混合物在45℃下搅拌2小时。向反应混合物中加入叔丁醇钾(17 mL，1mol/L四氢呋喃溶液)并在45℃下搅拌2小时。反应液用乙酸乙酯(100 mL)稀释，用饱和氯化钠溶液(100 mL × 3)洗涤。有机相经浓缩、干燥 、过滤、浓缩得残余物，经快速柱层层析(二氧化硅，0-20%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得甲基4-{[2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)-4-溴苯基]羰基胺基}-2-(4,4-二氟哌啶基)苯甲酸酯(1.20 g, 5.48 mmol, 收率39%)，为淡黄色固体。LCMS (ESI): [M+H]+ =564.1。
第四步：25°C下,向甲基4-{[2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)-4-溴苯基]羰基胺基}-2-(4,4-二氟哌啶基)苯甲酸酯(1.10 g, 1.96 mmol),2-羟乙基磺酰胺(0.49 g, 3.91mmol)，三(二亚苄基丙酮)二钯(0.18 g, 0.20 mmol), 2-二叔丁基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(0.17 g, 0.39 mmol)，磷酸钾(1.27 g,5.87 mmol)中加入1,4-二氧六环(15 mL)，所得反应混合物用氮气鼓气1分钟，在100℃下搅拌2小时。反应液经过滤，滤饼用乙酸乙酯(20mL)洗涤。滤液用饱和氯化钠溶液 (10 mL × 3)洗涤、水(10 mL × 3)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得残余物，经快速柱层析纯化(二氧化硅,0-60%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得甲基4-[(2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)-4-{[(2-羟乙基)磺酰胺}苯基)酰胺基]-2-(4,4-二氟哌啶基)苯甲酸酯(1.00 g，1.65 mmol，收率84%)，为白色固体。LCMS(ESI): [M+H]+ =607.4；1HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.88 (s, 1H), 10.12 (s, 1H),7.81 (dd, J = 11.3, 8.5 Hz, 2H), 7.56 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.48 (dd, J = 8.6,1.9 Hz, 1H), 7.17 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.04 (dd, J = 8.5, 2.1 Hz, 1H), 4.96(s, 1H), 3.78 (d, J = 14.8 Hz, 5H), 3.35 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 3.11 (t, J =5.4 Hz, 4H), 2.97 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 2.13 (tt, J = 13.3, 5.2 Hz, 4H), 1.54(t, J = 5.2 Hz, 4H), 0.35 (s, 4H)。
第五步：20℃下，向甲基4-[(2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)-4-{[(2-羟乙基)磺酰胺}苯基)酰胺基]-2-(4,4-二氟哌啶基)苯甲酸酯(1.00 g, 1.65 mmol)的四氢呋喃/甲醇/水(3/5/5 mL)混合溶液中加入氢氧化锂(400 mg, 16.50 mmol)，所得反应混合物在20℃下搅拌16小时。将反应混合物浓缩，加入水(10 mL)、用稀盐酸将pH调到3至白色固体出现。经过过滤干燥得4-[(2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)-4-{[(2-羟乙基)磺酰基]胺基}苯基)酰胺基]-2-(4,4-二氟哌啶)苯甲酸(750 mg,1.65 mmol,收率77%)，为白色固体。LCMS(ESI): [M+H]+ =593.4。
第六步: 20℃下，向4-[(2-(6-氮杂螺环[2.5]辛烷-6-基)-4-{[(2-羟乙基)磺酰基]胺基}苯基)酰胺基]-2-(4,4-二氟哌啶)苯甲酸(0.30 g, 0.51 mmol)的N,N-二甲基甲酰胺(10 mL)溶液中加入1-甲基-1氢-吡唑-4-胺(0.07 g, 0.76 mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯 (0.29 g, 0.76 mmol)和N,N-二异丙基乙胺(0.20 g，1.52 mmol)。所得反应混合物在20℃下搅拌16小时。将反应混合物用乙酸乙酯(30mL)稀释、用饱和氯化钠溶液 (30 mL × 3)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥、过滤、浓缩得残余物，在甲醇(5 mL)中打浆得2-(4,4-二氟哌啶-1-基)-4-(4-((2-羟乙基) 磺酰胺基)-2-(6-氮杂螺[2.5]辛烷-6-基)苯甲酰胺基)-N-(1-甲基-1氢-吡唑-4-基)苯甲酰胺(240mg，0.36 mmol，收率70%)。LCMS (ESI): [M+H]+ =672.5；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ11.82 (s, 1H), 10.69 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 8.04 (s, 1H), 7.83 (d, J = 8.5Hz, 1H), 7.74 – 7.64 (m, 2H), 7.59 – 7.51 (m, 2H), 7.17 (d, J = 2.1 Hz, 1H),7.04 (dd, J = 8.5, 2.1 Hz, 1H), 4.96 (s, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.76 (t, J = 6.5Hz, 2H), 3.35 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 3.08 (t, J = 5.5 Hz, 4H), 2.98 (q, J =5.5, 4.0 Hz, 4H), 2.13 (td, J = 13.6, 13.1, 6.8 Hz, 4H), 1.55 (s, 4H), 0.35(s, 4H)。
实施例35：(2-(6-氮杂螺)[2.5]辛基-6-基)-4-{[(2-羟乙基)磺酰基]氨基]苯基)-N-[3-(4,4-二氟哌啶基)-4-硝基苯基]甲酰胺（化合物35）的制备
第一步：向4,4-二氟哌啶盐酸盐(4.34 g, 27.27 mmol)和4-溴-2-氟-1-硝基苯(5.00 g, 22.73 mmol)的N,N-二甲基乙酰胺(50 mL)的溶液中加入碳酸钾(1.92 g, 13.6mmol) ，将混合物加热至80℃搅拌6小时。待反应完成后，向反应混合物中加入水(50 mL)，用乙酸乙酯(100 mL × 3)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-25%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体1-(5-溴-2-硝基苯基)-4,4-二氟哌啶(6.30 g，19.49 mmol，收率: 86.4%)。LCMS (ESI): [M+H]+= 323.1。
第二步: 向1-(5-溴-2-硝基苯基)-4,4-二氟哌啶(3.00 g, 9.34 mmol) 和4-甲氧基苄胺(1.92 g, 14.01 mmol)的二甲基亚砜(30 mL)的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(3.69 g, 28.03 mmol)，将混合物加热至120℃搅拌6小时。待反应完成后，向反应混合物中加入水(100 mL)，用乙酸乙酯(200 mL × 3)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-25%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体[3-(4,4-二氟哌啶基)-4-硝基苯基][(4-甲氧基苯基)甲基]胺(1.50 g，3.96mmol，收率：42.7%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 378.3。
第三步：将[3-(4,4-二氟哌啶基)-4-硝基苯基][(4-甲氧基苯基)甲基]胺(1.50g，3.96 mmol)溶解在三氟乙酸(15 mL)中，反应混合物在75℃下搅拌5小时。减压除去溶剂，将残渣溶解在水(50 mL)中，然后用饱和碳酸氢钠水溶液(50 mL)将水层调节至pH = 8，并用乙酸乙酯(100 mL × 3)萃取，合并有机相，饱和氯化钠水溶液(50 mL)洗涤有机层，无水硫酸钠干燥，减压浓缩，粗品用快速柱色谱纯化(硅胶，0-20%梯度的甲醇/二氯甲烷)得到绿色固体3-(4,4-二氟哌啶基)-4-硝基苯胺(800 mg，3.11 mmol, 收率：78.4%)。LCMS (ESI):[M+H]+ = 258.1。
第四步：向3-(4,4-二氟哌啶基)-4-硝基苯胺(600 mg, 2.33 mmol)和2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯甲酰氯 (1150 mg, 3.50 mmol) 的四氢呋喃(6 mL)的溶液中加入N,N-二异丙基乙胺(922 mg, 7.00 mmol)，混合物于室温下搅拌4小时。待反应完成后，向反应混合物中加入水(20 mL)，用二氯甲烷(50 mL × 3)萃取。合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液旋干得残余物。残留物用快速柱色谱纯化(硅胶，0-50%梯度的乙酸乙酯/石油醚)得到黄色固体2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯基]-N-[3-(4,4-二氟哌啶基)-4-硝基苯基]甲酰胺(600 mg，1.09 mmol，收率：46.8%)。LCMS (ESI): [M+H]+ = 549.3；1H NMR(400 MHz, DMSO-d6) δ 11.54 (s, 1H), 8.05 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.76 (d, J =2.2 Hz, 1H), 7.65 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.51 (dd, J = 9.0, 2.1 Hz, 1H), 7.45(d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.38 (dd, J = 8.3, 1.8 Hz, 1H), 3.15 (t, J = 5.5 Hz,4H), 3.02 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 2.14 (tt, J = 13.9, 5.6 Hz, 4H), 1.46 (t, J =5.2 Hz, 4H), 0.31 (s, 4H)。
第五步：在氮气气氛下，将2-羟乙烷磺酰胺 (68 mg，0.54 mmol),碘化亚铜(106mg，0.54 mmol)，磷酸钾(236 mg，1.09 mmol)和反式-N,N'-二甲基环己烷-1,2-二胺 (156mg，1.09 mmol)放入瓶中，N,N-二甲基甲酰胺(4 mL)加入反应瓶，混合物在50℃下搅拌0.5小时，再将2-(6-氮杂螺[2.5]辛-6-基)-4-溴苯基]-N-[3-(4，4-二氟哌啶基)-4-硝基苯基]甲酰胺(150 mg，0.27 mmol)加入瓶中，混合物在50℃下搅拌5分钟后。将反应体系升高温度至120℃搅拌12小时.反应结束后将体系降至室温后，将体系倒入水(10 mL)中，用乙酸乙酯(30 mL×3)萃取，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩后制备HPLC纯化(C18，0-100%梯度的乙腈/水)，得到化合物固体(2-(6-氮杂螺)[2.5]辛基-6-基)-4-{[(2-羟乙基)磺酰基]氨基]苯基)-N-[3-(4，4-二氟哌啶基)-4-硝基苯基]甲酰胺 (115 mg，0.19 mmol，收率：70.9%)，为黄色固体。LCMS(ESI)m/z: [M+H]+ =594.5；1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ11.93 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 8.06 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 7.91 – 7.62 (m, 2H),7.51 (dd, J = 9.1, 2.1 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 7.03 (dd, J = 8.5,2.1 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 3.76 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.35 (d, J = 6.5 Hz,2H), 3.16 (t, J = 5.5 Hz, 4H), 2.97 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 2.14 (tq, J = 19.4,8.2, 6.8 Hz, 4H), 1.52 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 0.34 (s, 4H)。
实施例36：酶学活性检测实验
材料：人源KIF18A (氨基酸序列1-417)，购于上海维亚生物科技有限公司；ADP-GloTM 蛋白激酶试剂盒购自美国普洛麦格公司；微管蛋白购自美国Cytoskeleton公司；384孔检测板以及多功能酶标仪Envision购自美国珀金埃尔默公司。
酶学活性检测：使用DMSO将化合物粉末溶解成10 mM的储存液；在微孔板中对化合物进行梯度稀释，并使其最终浓度为0-10 μM之间。然后依次在微孔板中加入微管蛋白，化合物，ATP，以及KIF18A蛋白各2.5 μL，并在室温反应120分钟。酶反应终浓度为微管60 μg/mL，ATP 25 μM, KIF18A蛋白2.5 nM。酶反应结束后，每孔加入10 μl ADP-GLO反应试剂，常温孵育30分钟。之后，每孔再加入20 μL 检测试剂，常温避光孵育30分钟。最后使用珀金埃尔默Envision进行化学发光检测。
本发明化合物对KIF18A ATP酶学活性抑制数据详见表1。
表1：本发明化合物的KIF18A ATP酶学活性抑制
化合物 IC50(nM) 化合物 IC50(nM) 化合物 IC50(nM)
1 68 13 60 25 33
2 117 14 66 26 92
3 59 15 44 27 81
4 174 16 49 28 22
5 92 17 97 29 28
6 125 18 160 30 110
7 33 19 23 31 46
8 307 20 41 32 52
9 255 21 23 33 211
10 464 22 12 34 39
11 60 23 32 35 42
12 70 24 30
。
实施例37：细胞増殖活性检测实验1
材料与细胞：OVCAR3细胞购于南京科佰生物科技有限公司。RPMI-1640培养基，胎牛血清，CyQUANT Direct Cell Proliferation Assay试剂盒购于美国赛默飞公司； 96孔细胞培养板购于美国康宁公司。
细胞培养：用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养液对OVCAR3细胞进行培养，并放置在37°C、5% CO2的培养箱中。处于对数生长期细胞方可用于实验。
细胞増殖活性检测：
将OVCAR3细胞接种于96孔细胞培养板，每孔90 μl，置于37°C、5%CO2的培养箱中培养过夜。使用DMSO将化合物粉末溶解成10 mM的储存液；在微孔板中对化合物进行梯度稀释，并使其最终浓度为0-10 μM之间。每孔加入10 μL含化合物的细胞培养液，使最终的DMSO含量为0.2%。细胞板置于37°C、5% CO2的培养箱中培养3天。每孔加入100 μl的CyQUANT检测试剂，37°C反应60分钟，并使用珀金埃尔默公司的Envision进行荧光检测。
本发明化合物对OVCAR3细胞的抗增殖活性数据详见表2。OVCAR3细胞为人卵巢癌细胞，因此本发明化合物对卵巢癌具有优良的抗肿瘤活性。
表2：本发明化合物抑制OVCAR-3细胞增殖的活性
化合物 IC50(nM) 化合物 IC50(nM) 化合物 IC50(nM)
1 7 13 14 25 28
2 18 14 14 26 57
3 7 15 15 27 2
4 18 16 18 28 6.6
5 6 17 129 29 28
6 142 18 >500 30 5
7 3 19 5 31 6
8 74 20 7 32 317
9 38 21 659 33 3
10 >500 22 6 34 17
11 11 23 21 35 28
12 13 24 3
。
实施例38：细胞増殖活性检测实验2
材料与细胞： HT29细胞购于南京科佰生物；RPMI-1640培养基购于ThermoFisher公司（美国）；胎牛血清购于ThermoFisher公司（美国）； Trypsin-EDTA (0.25%)购于ThermoFisher公司（美国）；DMSO购于SIGMA公司（美国）；96孔板购于ThermoFisher公司（美国）；CyQuant试剂购于ThermoFisher公司（美国）。
细胞培养：HT29细胞用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基于37°C、5% CO2条件下培养。处于对数生长期细胞方可用于实验。
细胞増殖活性检测：利用CyQuant试剂检测化合物对HT29细胞的增殖抑制活性。调整细胞密度，每孔100 μL接种96孔板（HT29为2000/孔），置于37°C、5% CO2条件下培养过夜。加入各目的浓度化合物（起始浓度3000 nΜ，3倍稀释，9个浓度梯度），DMSO含量为0.2%。细胞板置于37 °C、5% CO2条件下孵育3天。加入CyQuant试剂孵育1小时，Envision读板，利用XLFIT计算IC50。
本发明化合物对HT29细胞的抗增殖活性数据详见表3。HT29为人结肠癌细胞，因此本发明化合物对结肠癌具有优良的抗肿瘤活性。
表3：本发明化合物抑制HT-29细胞增值的活性
化合物 IC50(nM) 化合物 IC50(nM) 化合物 IC50(nM)
1 13 13 46 25 33
2 83 14 15 26 73
3 18 15 19 27 106
4 33 16 30 28 6
5 16 17 207 29 17
6 133 18 >500 30 29
7 8 19 8 31 7
8 102 20 12 32 9
9 68 21 1000 33 513
10 >500 22 10 34 10
11 19 23 17 35 33
12 21 24 3
本发明化合物，具有良好的KIF18A抑制活性和抗癌细胞增值活性，具备优异的抗肿瘤药物开发前景。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.具有式(I)结构的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物：
式(I)
其中，
X、Y各自独立地表示C或N；
L1表示不存在、C1-C6亚烷基、-NRa-、-NRaSO2-、-SO2NRa-、-S(=O)(NRa)-、-P(O)(ORa)2、-NRaP(O)(ORa)2或-NRaP(O)(Ra)2;
L2表示不存在、C1-C6亚烷基、-C(O)NH-或-NHC(O)-；
L3表示不存在、-C(O)-、-C(O)NRa-、-NRaC(O)-；
R1表示不存在、氢或者被0-3个选自卤素、-ORa、-NRaRb、氰基、-O-卤代C1-C6烷基取代的C1-C6烷基；
R2表示6元环，该环中任意地含有0-2个选自O、N和S的杂原子，且该环任意地被0-3个选自以下组的基团所取代：卤素、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-ORa和-NRaRb；
R3表示氢、卤素、-SF5、氰基、硝基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-ORa、-O-卤代C1-C6烷基、-NRaRb、-OC(O)Ra、-S(O)Ra、-S(O)2Ra、-S(O)2NRaRb、-P(O) RaRb或5-6元环，该5-6元环含有0-2个选自O、N和S的杂原子，并且该5-6元环任意地被0-3个选自以下组的基团所取代：卤素、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-ORa、-SRa、-SF5、氰基、硝基、-NRaRb、-NRaC(O)Rb、-C(O)NRaRb、-OC(O)Ra、-C(O)ORa；
或者R3与R5通过化学键连接，且R3、R5、L3、Y同与L3和Y共同连接的碳原子一起构成5-6元环，该5-6元环中任意地含有0-2个选自O、S和N的杂原子；
R4、R5各自独立地表示不存在、氢、卤素、氰基、硝基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-ORa、-C(O)Ra或者被0-3个选自卤素、-ORa、-NRaRb、C1-C6烷基取代的5-6元环，该5-6元中任意地含有0-2个选自O、S和N的杂原子；
Ra、Rb各自独立地表示氢、卤素、C1-C6烷基、C3-C6环烷基、卤代C1-C6烷基或羟基C1-C6烷基。
2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物，
其中，
L1表示-NRaSO2-或-SO2NRa-；
L2表示-C(O)NH-或-NHC(O)-；
R1表示-CH2CH2OH；
R2表示。
3.根据权利要求2所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物，
其中，式(I)中的结构片段(I-1)选自/>、/>、或/>。
4.根据权利要求3所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物,
其中，
R3表示氢、-SF5、氰基、硝基、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基、-ORa、-S(O)2Ra、-S(O)2NRaRb、-P(O) RaRb、或5-6元环，所述的5-6元环表示选自以下组的任意结构之一：
；
且所述的5-6元环中的氢原子任意地被0-3个选自以下组的基团所取代：卤素、C1-C6烷基、羟基C1-C6烷基；
R5表示不存在、氢、硝基、C1-C6烷基、-ORa、-C(O)Ra或者；
或者，R3与R5通过化学键连接，且R3、R5、L3、Y同与L3和Y共同连接的碳原子一起构成结构片段，其中虚线表示单键或双键；
Ra、Rb各自独立地表示氢、C1-C6烷基、卤代C1-C6烷基或羟基C1-C6烷基。
5.根据权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物，所述化合物具有选自以下组的结构：
。
6.根据权利要求4所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物，所述化合物具有选自以下组的结构：
。
7.权利要求1至6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物的用途，其特征在于，用于制备预防或治疗与KIF18A活性或表达量相关的病症和/或疾病的药物。
8.根据权利要求7所述的用途，其特征在于，所述与KIF18A活性或表达量相关的病症和/或疾病为癌症、炎症或纤毛病理学病症。
9.根据权利要求8所述的用途，其特征在于，所述癌症为结肠癌、卵巢癌、肺癌、胰腺癌、前列腺癌、膀胱癌、头癌、颈癌、子宫颈癌和乳腺癌。
10.一种药物组合物，其特征在于，包含权利要求1至6中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐、立体异构体、同位素异构体、前药、水合物或溶剂合物，以及药学上可接受的载体。
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