CN116515683A - 一株植物乳杆菌hew-a490代谢产物及其制备方法和应用 - Google Patents

一株植物乳杆菌hew-a490代谢产物及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一株植物乳杆菌HEW‑A490代谢产物及其制备方法和应用，所述植物乳杆菌HEW‑A490于2016年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.12554。用‑80℃保藏的植物乳杆菌HEW‑A490甘油菌悬液活化得到种子液；种子液经扩繁培养得到植物乳杆菌种子扩繁液；扩繁液经高密度发酵获得植物乳杆菌高密度发酵液，其活菌数达到1.9～2.4×1010CFU/mL，发酵液最终pH为3.3～4.0；发酵液浓缩后加入载体，经喷雾干燥获得植物乳杆菌代谢产物，其总酸含量以乳酸计达到30～35％，灭活菌数达到8.0～9.0×1010个/g，具有良好的稳定性和抗逆性，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和产气荚膜梭菌的体外抑制效果均达到高敏，对副溶血弧菌、嗜水气单胞菌等水产致病菌也有良好的抑制效果。

Description

一株植物乳杆菌HEW-A490代谢产物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及一株植物乳杆菌HEW-A490代谢产物及其制备方法和应用，属于饲用益生菌领域。
背景技术
植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,Lp)是一种多功能乳酸菌，能快速在肠道中繁殖，粘附于肠道上皮细胞，形成一层天然的保护膜。植物乳杆菌具有调节动物肠道菌群环境，提高机体免疫能力和改善生长性能等生理功能，其代谢产物包含多种有机酸、细菌素、小分子肽等活性物质，对革兰氏阳性和阴性菌均具有良好的抑制作用。
伴随禁抗法规的公布，规模化养殖在不使用抗生素的情况下如何保障稳定性，降低疾病感染率，是一个急需解决的问题。研究表明，植物乳杆菌作为一种益生菌，其代谢产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏伤寒菌、产气夹膜梭菌等具有明显的抑制效果，对副溶血弧菌、嗜水气单胞菌和诺卡氏菌等水产致病菌也有良好的抑制效果；并且能耐受胆盐溶液、人工胃液和人工肠液。以植物乳杆菌及其代谢产物作为饲料添加剂饲喂动物，既能减少抗生素的使用，又能保障规模化养殖，是饲料和养殖行业有效应对禁抗、降本增效的途径之一。
目前市场上植物乳杆菌主要以高活性冻干产品呈现，其优势在于高活性菌体通过饮水进入动物体内能够快速改善肠道环境，产生代谢物抑制致病菌。但该产品需存储于低温环境延缓菌体死亡，增加了运输、储存等能耗成本；同时由于饲料加热制粒等原因，植物乳杆菌活菌产品没办法直接用于饲料端进行加工；其次，乳酸菌杆菌类活菌产品的储存稳定性较差是其天然缺点。
研究表明，乳酸菌无论是活菌还是灭活菌，均可粘附于肠黏膜上皮细胞，并且灭活乳酸菌具有与活菌相似的生态效应。灭活乳酸菌对肠道中菌群平衡具有一定的调节作用，可以通过与其他益生菌一起占据肠道黏膜表面，形成生物学屏障，阻止致病菌入侵和定植来减少肠源性感染的发生。植物乳杆菌在发酵过程中产生大量乳酸、短链脂肪酸、细菌素等抑菌物质，在灭活产品中会被大量保留，可以与灭活乳酸菌共同起到调节肠道菌群平衡的作用，为饲料无抗时代助力。现如今，灭活乳酸菌类产品经过市场验证，已经得到广泛应用。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一株植物乳杆菌HEW-A490代谢产物及其制备方法和应用，所制备的植物乳杆菌及代谢产物产品，其丰富的代谢产物大部分得以保留的前提下，还能保持菌体完整。相较于传统的植物乳杆菌活菌产品，本发明所得产品具有耐存储、耐制粒、耐高温高湿等优良特性。
为了达成上述的目的，本发明提供了一株植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的制备方法，包括以下步骤：
步骤一，植物乳杆菌HEW-A490菌种活化及种子液的制备
将冷冻的活性为1.0～1.5×109CFU/mL的植物乳杆菌HEW-A490甘油菌悬液解冻后，用接种环蘸取菌悬液，四区划线法接种至MRS固体培养基上，37℃培养40～48h长出单菌落；用灭菌牙签挑取单菌落，接种至装有100mL种子培养基的摇瓶中，进行第一次振荡培养，得到植物乳杆菌一级种子液；
将植物乳杆菌一级种子液以5～8％(v/v)的接种量接种至装有500mL种子培养基的摇瓶中，进行第二次振荡培养，得到植物乳杆菌二级种子液；
步骤二，植物乳杆菌HEW-A490种子液扩繁
种子罐中以65～85％(v/v)的装液量装入发酵培养基，121℃灭菌30min；搅拌降温至37℃，用20％的氢氧化钠溶液调节发酵培养基的初始pH为7.0±0.2；将植物乳杆菌的二级种子液，以2～5％(v/v)的接种量接种至种子罐中，进行扩繁培养，得到植物乳杆菌种子扩繁液；
步骤三，植物乳杆菌HEW-A490高密度发酵
发酵罐中以70～80％(v/v)的装液量装入发酵培养基，121℃灭菌30min；搅拌降温至37℃，用20％(w/v)的氢氧化钠溶液调节发酵培养基的初始pH为7.0±0.2；将植物乳杆菌的种子扩繁液，以2～5％(v/v)的接种量接种至发酵罐中，进行发酵培养；发酵10～12h后，对发酵罐进行一次补料操作；程序控制发酵体系pH，18～20h发酵结束，得到植物乳杆菌高密度发酵液，活菌数达到1.9～2.4×1010CFU/mL，最终pH为3.3～4.0；
步骤四，植物乳杆菌HEW-A490高密度发酵液喷雾干燥
将植物乳杆菌HEW-A490高密度发酵液输送至储罐，减压浓缩至发酵液原体积的50～70％；按发酵液浓缩后重量的15～20％添加载体，搅拌均匀；进行喷雾干燥及物料冷却除湿，得到植物乳杆菌HEW-A490代谢产物。
进一步地，其中步骤一中，所述植物乳杆菌HEW-A490甘油菌悬液保藏在-80℃下；所述单菌落为独立且形态规整的菌落。
进一步地，其中步骤一中，所述种子培养基的配方如下：绵白糖25～40g/L，大豆蛋白胨18～30g/L，酵母浸粉5～8g/L，三水合磷酸氢二钾1～3g/L，无水硫酸镁0.8～1.5g/L，一水合硫酸锰0.2～0.5g/L，氯化钠2～4g/L，氯化钙1～3g/L，吐温-80 1～3g/L，pH为7.0±0.2，121℃灭菌30min；优选为：绵白糖30g/L，大豆蛋白胨25g/L，酵母浸粉6g/L，三水合磷酸氢二钾2g/L，无水硫酸镁1.2g/L，一水合硫酸锰0.3g/L，氯化钠3g/L，氯化钙2g/L，吐温-802g/L，pH为7.0±0.2，121℃灭菌30min。
进一步地，其中步骤一中，所述第一振荡培养的温度为37℃，转速为130rpm，时间为16～20h；所述第二振荡培养的温度为37℃，转速为130rpm，时间为8～10h。
进一步地，其中步骤二中，所述氢氧化钠溶液的浓度为20％(w/v)；所述扩繁培养的转速为80～120rpm，温度为37℃，时间为12～16h。
进一步地，其中步骤二和三中，所述的发酵培养基的配方如下：绵白糖40～60g/L，大豆蛋白胨14～25g/L，酵母膏4～6g/L，氯化钠1～3g/L，无水硫酸镁0.9～1.6g/L，氯化钙1.6～3g/L，一水合硫酸锰0.4～2g/L，吐温-80 0.8～3g/L，消泡剂0.01～0.03g/L；优选为：绵白糖50g/L，大豆蛋白胨20g/L，酵母膏5g/L，氯化钠2g/L，无水硫酸镁1.2g/L，氯化钙2.5g/L，一水合硫酸锰1.2g/L，吐温-80 2g/L，消泡剂0.02g/L。
进一步地，其中步骤三中，所述发酵培养的转速为60～80rpm，温度为37℃；所述的补料，以发酵液体积为基准，配比如下：葡萄糖1～2％(w/v)，酵母浸粉0.1～0.2％(w/v)，水2～5％(v/v)；优选为：葡萄糖1.5％(w/v)，酵母浸粉0.15％(w/v)，水3％(v/v)。在补料罐中搅拌溶解，121℃灭菌30min，降温至37℃。
进一步地，其中步骤三中，所述的程序控制发酵体系pH的方法：0h至12h，用20％(w/v)的氢氧化钠溶液控制发酵液pH6.0±0.2；12h后不控pH，任其自然下降至pH稳定不变，结束发酵。
进一步地，其中步骤四中，所述的发酵液浓缩温度为70～90℃，浓缩罐压为-0.4～-0.2MPa，喷雾干燥的进风温度为120～150℃，出风温度为75～90℃，进料速度为150～300L/h；优选为：发酵液浓缩温度为85℃，浓缩罐压为-0.3MPa，喷雾干燥的进风温度为130℃，出风温度为85℃，进料速度为200L/h。
进一步地，其中步骤四中，所述的冷却除湿温度为4～10℃。
进一步地，其中步骤四中，所述的载体的组成为水溶淀粉、麦芽糊精、蔗糖及脱脂奶粉，四者的质量比例为(3～6)：(1～3)：(0.8～2)：(0.3～1)；水溶淀粉、麦芽糊精、蔗糖、脱脂奶粉的质量比例优选为5：2：1：0.5。
此外，本发明还提供了一株植物乳杆菌HEW-A490代谢产物，所述植物乳杆菌HEW-A490代谢产物通过上述的方法制得，其总酸(以乳酸计)含量达到30～35％(w/w)，灭活菌数达到8.0～9.0×1010个/g，水分含量为7.0～9.0wt％。
进一步地，其中所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,Lp)HEW-A490已于2016年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮政编码：100101)，保藏编号为CGMCC NO.12554，分类命名为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,Lp)。
另本发明还提供了上述植物乳杆菌HEW-A490代谢产物在制备黄羽肉鸡中的应用。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明所制备的植物乳杆菌代谢产物，其总酸(以乳酸计)含量达到30～35％，灭活菌数达到8.0～9.0×1010个/g，具有良好的稳定性和抗逆性，对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和产气荚膜梭菌的体外抑制效果均达到高敏，对副溶血弧菌、嗜水气单胞菌和诺卡氏菌等水产致病菌也有良好的抑制效果；
通过本发明制备的植物乳杆菌HEW-A490代谢产物，其灭活植物乳杆菌的菌体数量多，菌体形态完整；总酸含量高，代谢产物种类丰富；抑制有害菌生长的能力强；能够耐受饲料加工阶段高温环境，抗逆性强；存储条件宽松，使用便利。
具体实施方式
下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。本发明中涉及到的百分号“％”，若未特别说明，是指质量百分比；但溶液的百分比，除另有规定外，是指100mL溶液中含有溶质的克数。
下面结合实施例解释本发明，实施例仅用于说明本发明。除特别说明外，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法，实施例中所用的设备、物料和试剂均可从商业途径获得。
实施例1植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的制备
(1)植物乳杆菌HEW-A490菌种活化及种子液的制备
活性为1.3×109CFU/mL的植物乳杆菌HEW-A490甘油菌悬液，保藏在-80℃的超低温冰箱内。解冻后，用接种环蘸取菌悬液，四区划线法接种至MRS固体培养基上，37℃培养48h长出单菌落。用灭菌牙签挑取一个独立且形态规整的单菌落，接种至装有100mL种子培养基的摇瓶中，37℃，130rpm振荡培养18h，得到植物乳杆菌一级种子液。
将植物乳杆菌一级种子液以5％(v/v)的接种量接种至装有500mL种子培养基的摇瓶中，37℃，130rpm振荡培养8h，得到植物乳杆菌二级种子液。
上述种子培养基的配方如下：绵白糖30g/L，大豆蛋白胨25g/L，酵母浸粉6g/L，三水合磷酸氢二钾2g/L，无水硫酸镁1.2g/L，一水合硫酸锰0.3g/L，氯化钠3g/L，氯化钙2g/L，吐温-80 2g/L，pH为7.0，121℃灭菌30min。
(2)植物乳杆菌HEW-A490种子液扩繁
200L种子罐中装入140L发酵培养基，121℃灭菌30min。搅拌降温至37℃，用20％(w/v)的氢氧化钠溶液调节发酵培养基的初始pH为7.0。将植物乳杆菌的二级种子液，以3％(v/v)的接种量接种至200L的种子罐中，搅拌桨转速100rpm，37℃培养12h，得到植物乳杆菌种子扩繁液。
(3)植物乳杆菌HEW-A490高密度发酵
20T发酵罐中以80％(v/v)的装液量装入发酵培养基，121℃灭菌30min。搅拌降温至37℃，用20％(w/v)的氢氧化钠溶液调节发酵培养基的初始pH为7.0。将上述得到的植物乳杆菌种子扩繁液，以3％(v/v)的接种量接种至该发酵罐中，搅拌桨转速为70rpm，37℃培养。发酵10h后，对该发酵罐进行一次补料操作。程序控制发酵体系pH，20h发酵结束，得到植物乳杆菌HEW-A490高密度发酵液，活菌数为2.1×1010CFU/mL，最终pH为3.5。
上述步骤(2)和(3)所述的发酵培养基的配方如下：绵白糖50g/L，大豆蛋白胨20g/L，酵母膏5g/L，氯化钠2g/L，无水硫酸镁1.2g/L，氯化钙2.5g/L，一水合硫酸锰1.2g/L，吐温-80 2g/L，消泡剂0.02g/L。
上述步骤(3)所述的补料，以发酵液体积为基准，配比如下：葡萄糖1.5％(w/v)，酵母浸粉0.15％(w/v)，水3％(v/v)。在补料罐中搅拌溶解，121℃灭菌30min，降温至37℃。
上述步骤(3)所述的程序控制发酵体系pH的方法：0h至12h，用20％(w/v)氢氧化钠溶液控制发酵液pH6.0；12h后不控pH，任其自然下降至pH稳定不变，结束发酵。
(4)植物乳杆菌HEW-A490高密度发酵液喷雾干燥
将上述得到的植物乳杆菌HEW-A490高密度发酵液输送至20T储罐，减压浓缩至发酵液原体积的55％。按发酵液浓缩后重量的17％添加载体，搅拌均匀。设置喷雾干燥、冷却除湿设备的参数进行喷雾干燥及物料冷却，得到植物乳杆菌HEW-A490代谢产物，其总酸(以乳酸计)含量为33.5％，灭活总菌体数为8.4×1010个/g，水分含量7.3wt％。
设计实验筛选最佳的浓缩和喷雾干燥条件，结果表明，浓缩温度和喷雾干燥的进风温度对产品总酸含量有显著的影响：温度越高，产品中的总酸含量越低，进而影响抑菌效果，但温度不宜过低，否则喷雾干燥的效率降低，成本增加，实验数据统计见表1。根据数据分析，综合成本因素和总酸含量，考虑设备的承受能力和生产效率等因素，将浓缩罐压设置为-0.3Mpa，通过调整进料速度将出风温度保持在85℃，浓缩温度设置为85℃，喷雾干燥设备的进风温度设置为130℃，此条件下生产植物乳杆菌HEW-A490代谢产物为最优方案。因此，上述步骤(4)所述发酵液的浓缩温度设置为85℃，浓缩罐压设置为-0.3MPa，喷雾干燥设备的进风温度设置为130℃，出风温度设置为85℃，进料速度设置为200L/h。
表1浓缩温度和喷雾干燥的进风温度对总酸(以乳酸计)含量的影响
上述步骤(4)所述的冷却除湿温度设置为5℃。
上述步骤(4)所述的载体的组成为水溶淀粉、麦芽糊精、蔗糖及脱脂奶粉，四者的质量比例为5：2：1：0.5。
实施例2植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的指标测定
对实施例1所生产的植物乳杆菌HEW-A490代谢产物进行产品评价，用酸碱滴定法测得其总酸(以乳酸计)含量为33.5％(w/w)；用血球计数法测定其灭活总菌体数8.1×1010个/g；产品的抑菌能力及其耐高温和耐胃蛋白酶、胰蛋白酶结果如表2所示。由表2的数据可以看出，植物乳杆菌HEW-A490代谢产物经高温、胃蛋白酶、胰蛋白酶处理后的抑菌效果与原始抑菌效果无明显差异，显示所述植物乳杆菌HEW-A490代谢产物具有优良的抗逆性和稳定性。所述植物乳杆菌HEW-A490代谢产物可以耐受制粒过程的高温处理，被动物采食后，不会被胃肠道中的胃蛋白酶、胰蛋白酶等分解。所述植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的优良抗逆性和稳定性，可以保证其顺利抵达动物肠道并发挥其益生作用，提高动物的生产性能。
表2植物乳杆菌HEW-A490代谢产物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、产气荚膜梭菌、副溶血弧菌、嗜水气单胞菌、诺卡氏菌的抑菌结果及其耐温和耐胃蛋白酶、胰蛋白酶结果统计。
实施例3植物乳杆菌HEW-A490代谢产物对黄羽肉鸡生产性能的影响
选用平均体重106g的一周龄黄羽肉鸡12000只，随机分为两个处理组，其中对照组6000只，饲喂基础日粮；实验组6000只，饲喂添加了植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的基础日粮，每吨基础日粮添加300g植物乳杆菌HEW-A490代谢产物。
基础日粮组分及其重量百分比为：玉米65％，豆粕25％，棉粕4％，鱼粉2％，植物油1.5％，磷酸氢钙1.2％，石粉0.8％，氯化钠0.5％。
连续饲喂61天，期间，观察统计死淘数量、平均日采食量、料重比、出栏重量和平均日增重，数据统计见表3。
表3植物乳杆菌HEW-A490代谢产物对黄羽肉鸡的成活率、出栏重、平均日采食量、平均日增重、料重比的影响。
项目 对照组 实验组
初始数量(只) 6000 6000
结束数量(只) 5830 5913
成活率(％) 97.17 98.55
出栏均重(Kg) 2.17 2.24
平均日采食量(g/d) 79.70 80.42
平均日增重(g/d) 33.84 34.98
料重比 2.24 2.19
与植物乳杆菌活菌类似，灭活植物乳杆菌可以吸附在动物肠道表面，形成一道生物学屏障，能阻止有害菌的入侵和定植，降低动物肠道感染的风险；同时，经喷雾干燥后，植物乳杆菌的有益代谢产物得以大量保留，如乳酸、短链脂肪酸、细菌素等，可有效抑制动物肠道中致病菌的生长，调节肠道菌群平衡。由表3的数据可以看出，植物乳杆菌HEW-A490代谢产物显著提高了黄羽肉鸡的各项生产性能，其中成活率较对照组提高1.38％，出栏重较对照组提高70g/只，料重比较对照组降低0.05。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一株植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一，植物乳杆菌HEW-A490菌种活化及种子液的制备
将冷冻的活性为1.0～1.5×109CFU/mL的植物乳杆菌HEW-A490甘油菌悬液解冻后，用接种环蘸取菌悬液，四区划线法接种至MRS固体培养基上，37℃培养40～48h长出单菌落；用灭菌牙签挑取单菌落，接种至装有100mL种子培养基的摇瓶中，进行第一次振荡培养，得到植物乳杆菌一级种子液；
将植物乳杆菌一级种子液以5～8％(v/v)的接种量接种至装有500mL种子培养基的摇瓶中，进行第二次振荡培养，得到植物乳杆菌二级种子液；
步骤二，植物乳杆菌HEW-A490种子液扩繁
种子罐中以65～85％(v/v)的装液量装入发酵培养基，121℃灭菌30min；搅拌降温至37℃，用氢氧化钠溶液调节发酵培养基的初始pH为7.0±0.2；将植物乳杆菌的二级种子液，以2～5％(v/v)的接种量接种至种子罐中，进行扩繁培养，得到植物乳杆菌种子扩繁液；
步骤三，植物乳杆菌HEW-A490高密度发酵
发酵罐中以70～80％(v/v)的装液量装入发酵培养基，121℃灭菌30min；搅拌降温至37℃，用20％(w/v)的氢氧化钠溶液调节发酵培养基的初始pH为7.0±0.2；将植物乳杆菌的种子扩繁液，以2～5％(v/v)的接种量接种至发酵罐中，进行发酵培养；发酵10～12h后，对发酵罐进行一次补料操作；程序控制发酵体系pH，18～20h发酵结束，得到植物乳杆菌高密度发酵液，活菌数达到1.9～2.4×1010CFU/mL，最终pH为3.3～4.0；
步骤四，植物乳杆菌HEW-A490高密度发酵液喷雾干燥
将植物乳杆菌HEW-A490高密度发酵液输送至储罐，减压浓缩至发酵液原体积的50～70％；按发酵液浓缩后重量的15～20％添加载体，搅拌均匀；进行喷雾干燥及物料冷却除湿，得到植物乳杆菌HEW-A490代谢产物。
2.如权利要求1所述的植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的制备方法，其特征在于，步骤一中，所述植物乳杆菌HEW-A490甘油菌悬液保藏在-80℃下；所述单菌落为独立且形态规整的菌落；所述种子培养基的配方如下：绵白糖25～40g/L，大豆蛋白胨18～30g/L，酵母浸粉5～8g/L，三水合磷酸氢二钾1～3g/L，无水硫酸镁0.8～1.5g/L，一水合硫酸锰0.2～0.5g/L，氯化钠2～4g/L，氯化钙1～3g/L，吐温-80 1～3g/L，pH为7.0±0.2，121℃灭菌30min。
3.如权利要求1所述的植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的制备方法，其特征在于，步骤一中所述第一次振荡培养的温度为37℃，转速为130rpm，时间为16～20h；所述第二次振荡培养的温度为37℃，转速为130rpm，时间为8～10h；步骤二中，所述氢氧化钠溶液的浓度为20％(w/v)；所述扩繁培养的转速为80～120rpm，温度为37℃，时间为12～16h。
4.如权利要求1所述的植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的制备方法，其特征在于，步骤二和三中，所述的发酵培养基的配方如下：绵白糖40～60g/L，大豆蛋白胨14～25g/L，酵母膏4～6g/L，氯化钠1～3g/L，无水硫酸镁0.9～1.6g/L，氯化钙1.6～3g/L，一水合硫酸锰0.4～2g/L，吐温-80 0.8～3g/L，消泡剂0.01～0.03g/L。
5.如权利要求1所述的植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的制备方法，其特征在于，步骤三中，所述发酵培养的转速为60～80rpm，温度为37℃；所述的补料，以发酵液体积为基准，配比如下：葡萄糖1～2％(w/v)，酵母浸粉0.1～0.2％(w/v)，水2～5％(v/v)。
6.如权利要求1所述的植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的制备方法，其特征在于，步骤三中，所述的程序控制发酵体系pH的方法：0h至12h，用20％(w/v)的氢氧化钠溶液控制发酵液pH6.0±0.2；12h后不控pH，任其自然下降至pH不变，结束发酵。
7.如权利要求1所述的植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的制备方法，其特征在于，步骤四所述的发酵液浓缩温度为70～90℃，浓缩罐压为-0.4～-0.2MPa，喷雾干燥设备的进风温度为120～150℃，出风温度为75～90℃，进料速度为150～300L/min；所述的冷却除湿温度为4～10℃。
8.如权利要求1所述的植物乳杆菌HEW-A490代谢产物的制备方法，其特征在于，步骤四中，所述的载体组成为水溶淀粉、麦芽糊精、蔗糖及脱脂奶粉，四者的质量比例为(3～6)：(1～3)：(0.8～2)：(0.3～1)。
9.一株植物乳杆菌HEW-A490代谢产物，其特征在于，所述植物乳杆菌HEW-A490代谢产物是由权利要求1-8任一项所述的方法制得，以乳酸计其总酸含量达到30～35％(w/w)，灭活菌数达到8.0～9.0×1010个/g，水分含量为7.0～9.0wt％；所述植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum,Lp)HEW-A490于2016年5月27日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.12554。
10.一种权利要求9所述的植物乳杆菌HEW-A490代谢产物在用于制备黄羽肉鸡中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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CN117448213A (zh) * 2023-10-24 2024-01-26 山东宝来利来生物工程股份有限公司 一种抑制产气荚膜梭菌的植物乳杆菌及其后生元和应用
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