CN108504588A - 一种复合微生态制剂及其制备方法和应用 - Google Patents

一种复合微生态制剂及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN108504588A
CN108504588A CN201810224108.7A CN201810224108A CN108504588A CN 108504588 A CN108504588 A CN 108504588A CN 201810224108 A CN201810224108 A CN 201810224108A CN 108504588 A CN108504588 A CN 108504588A
Authority
CN
China
Prior art keywords
powder
composite
lactobacillus plantarum
bacillus subtilis
lactobacillus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN201810224108.7A
Other languages
English (en)
Inventor
刘晓军
包维臣
贺润晶
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Qingdao Jiuheyisheng Biological Technology Co ltd
Original Assignee
Qingdao Jiuheyisheng Biological Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Qingdao Jiuheyisheng Biological Technology Co ltd filed Critical Qingdao Jiuheyisheng Biological Technology Co ltd
Priority to CN201810224108.7A priority Critical patent/CN108504588A/zh
Publication of CN108504588A publication Critical patent/CN108504588A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K10/00—Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10—Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18—Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23K—FODDER
    • A23K50/00—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals
    • A23K50/70—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds
    • A23K50/75—Feeding-stuffs specially adapted for particular animals for birds for poultry
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P39/00—Processes involving microorganisms of different genera in the same process, simultaneously

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本申请公开了一种复合微生态制剂，所述复合微生态制剂包括植物乳杆菌LP3，枯草芽孢杆菌HM‑66和植物乳杆菌LP6，其由包括上述菌体的复合菌菌粉以及所述菌体的复合代谢产物粉复配而得，所述复合微生态制剂用于蛋鸡的饲养料中能够保持鸡蛋原有营养的基础上降低蛋鸡所产鸡蛋的胆固醇含量，本申请还公开了制备所述复合微生态制剂的方法，所述方法操作简单，条件温和，能够最大限度地利用植物乳酸菌以及枯草杆菌发酵液中的活性成分。本申请还公开了所述复合微生态制剂用于蛋鸡饲养料的用途。

Description

一种复合微生态制剂及其制备方法和应用
技术领域
本申请属于生物技术领域，特别涉及一种用于降低鸡蛋中胆固醇含量的鸡饲养料的复合微生态制剂及其制备方法和应用。
背景技术
鸡蛋含有丰富的优质蛋白、不饱和脂肪酸和微量元素，营养价值很高，但是蛋黄中胆固醇的含量较高，如果食入量过多，会对食用者的身体健康产生不利影响，例如，可能引发高胆固醇血症等。对于高胆固醇血症患者以及潜在患者，食用鸡蛋可能引发健康问题。如果能够在保持鸡蛋原有营养成分的基础上降低蛋黄中胆固醇的含量，其营养组成有益于普通消费者以及高胆固醇血症患者。
然而，鸡蛋是在活鸡体内自然形成的，对鸡蛋中的成分很难进行人工干预，因此，如何能够在保持鸡蛋原有营养成分的基础上降低蛋黄中胆固醇的含量成为亟待解决的问题。
发明内容
为解决上述问题，本申请提供一种复合微生态制剂，所述复合微生态制剂包括植物乳杆菌LP3、植物乳杆菌LP6、枯草芽孢杆菌HM-66及它们的代谢产物，将所述复合微生态制剂通过鸡饲养料，如日料或者饮水中被蛋鸡摄取，能够使鸡蛋在保持原有营养成分不变的基础上降低蛋黄中胆固醇含量，最高可降低40％以上。
本申请的目的在于提供以下几个方面：
第一方面，本申请提供一种复合微生态制剂，所述复合微生态制剂包括：植物乳杆菌LP3，枯草芽孢杆菌HM-66和植物乳杆菌LP6，其中，所述植物乳杆菌LP3的保藏编号为CGMCC No.14531，所述植物乳杆菌LP6的保藏编号为CGMCC No.13458，所述枯草芽孢杆菌HM-66 的保藏编号为CGMCC No.6733。
其中，植物乳杆菌LP3(Lactobacillus plantarum LP3)的保藏编号为CGMCCNo.14531，分类命名为：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心(国家专利局指定专利微生物保藏中心)保藏；保藏时间：2017 年8月18日；保藏地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
植物乳杆菌LP6(Lactobacillus plantarum LP6)的保藏编号为CGMCC No.13458，分类命名为：植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)；保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物菌种保藏中心(国家专利局指定专利微生物保藏中心)保藏；保藏时间：2017年 9月25日；保藏地址：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。
本申请中所述枯草芽孢杆菌HM-66为现有技术中公开的菌株，如中国专利CN103421712A公开了枯草芽孢杆菌HM-66。
在一种可实现的方式中，所述复合微生态制剂中有效菌数≥5.0×109CFU/g。
在一种可实现的方式中，所述复合微生态制剂包括以下重量配比的组分：
复合乳酸菌菌粉 0.5～2重量份
芽孢杆菌菌粉 0.5～2重量份
复合代谢产物粉剂 90～110重量份；
其中，基于1kg计为1重量份，
所述复合乳酸菌菌粉由植物乳杆菌LP3和植物乳杆菌LP6制备；
所述芽孢杆菌菌粉由枯草芽孢杆菌HM-66制备；
所述复合代谢产物粉剂由植物乳杆菌LP3、植物乳杆菌LP6和枯草芽孢杆菌HM-66的代谢产物制备。
本申请将植物乳杆菌LP3、植物乳杆菌LP6和枯草芽孢杆菌HM-66经过发酵后，通过真空冷冻干燥技术制成菌粉，并将发酵后的上清液经过低温真空浓缩后进行干燥，最终得到复合代谢产物粉，并将所述菌粉与所述复合代谢产物粉进行复配，得到用于降低鸡蛋胆固醇的鸡饲养料的复合微生态制剂。
第二方面，本申请还提供一种制备所述复合微生态制剂的方法，所述方法包括以下步骤：
步骤1，制备包括植物乳杆菌LP3、植物乳杆菌LP6的复合乳酸菌菌粉；
步骤2，制备枯草芽孢杆菌HM-66菌粉；
步骤3，制备包括植物乳杆菌LP3、植物乳杆菌LP6以及枯草芽孢杆菌HM-66代谢产物的复合代谢产物粉；
步骤4，用步骤1制备的复合乳酸菌菌粉、步骤2制备的枯草芽孢杆菌HM-66菌粉以及步骤3制备的复合代谢产物粉制备复合微生态制剂。
本申请提供的制备方法，既提高了复合乳酸杆菌菌粉以及枯草芽孢杆菌菌粉的稳定性，也回收了发酵后的代谢产物，最大限度保留液体发酵液中的活性物质，可有效替代目前应用于蛋鸡养殖的液体产品，提高产品应用的稳定性，同时低温浓缩干燥后的水通过冷凝回收，可以达到直排要求，减少对环境的污染。
第三方面，本申请还提供所述复合微生态制剂用于降低鸡蛋胆固醇含量的鸡饲养料的用途。
在一种可实现的方式中，可以在蛋鸡饮水中按照100～500g/m3的比例投放所述复合微生态制剂。
在另一种可实现的方式中，可以在蛋鸡饲料中按照100～300g/吨的比例投放所述复合微生态制剂。
饲喂所述复合微生态制剂能够有效降低鸡蛋中的胆固醇含量，该复合微生态制剂在蛋鸡养殖方面具有良好的应用前景。
具体实施方式
下面结合实施例解释本发明，实施案例仅用于说明本发明。除非特别说明，本发明中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本发明的范围，本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本发明实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本发明的保护范围。
本申请提供一种复合微生态制剂，所述复合微生态制剂包括：植物乳杆菌LP3，枯草芽孢杆菌HM-66和植物乳杆菌LP6，其中，所述植物乳杆菌LP3的保藏编号为CGMCC No.14531，所述枯草芽孢杆菌HM-66的保藏编号为CGMCC No.6733，所述植物乳杆菌LP6的保藏编号为CGMCC No.13458。
通过本申请的实施例可知，本发明人认为本申请提供复合微生态制剂能够水解蛋鸡肠道内胆盐，吸收或吸附肠道内胆固醇，提高蛋鸡肠道内丙酸和丁酸含量，从而抑制肝脏脂肪酸和胆固醇合成，降低甘油三酯和胆固醇的分泌速率，并且能够将蛋鸡体内的胆固醇转化为肾固醇随粪便排出体外，从而降低鸡蛋中胆固醇的含量。
具体地，本发明人经研究发现，枯草芽孢杆菌HM-66能够很好的定植于蛋鸡的胃肠道粘膜，从而改善蛋鸡肠道的有益菌群，吸收或吸附肠道内胆固醇；植物乳杆菌LP3具有良好的胆盐耐受性，能够提高蛋鸡肠道内丙酸和丁酸含量，从而抑制肝脏脂肪酸和胆固醇合成；植物乳杆菌LP6能够降低蛋鸡甘油三酯和胆固醇的分泌速率，并且能够将胆固醇转化为肾固醇随粪便排出体外。
在一种可实现的方式中，所述复合微生态制剂有效菌数≥5.0×109CFU/g，其中，所述有效菌数是指复合微生态制剂中活菌总数。
在另一种可实现的方式中，所述复合微生态制剂包括以下重量配比的组分：
复合乳酸菌菌粉 0.5～2重量份
芽孢杆菌菌粉 0.5～2重量份
复合代谢产物粉剂 90～110重量份；
优选地，
复合乳酸菌菌粉 1重量份
芽孢杆菌菌粉 1重量份
复合代谢产物粉剂 98重量份；
其中，
基于1kg计为1重量份，
所述复合乳酸菌菌粉由植物乳杆菌LP3和植物乳杆菌LP6制备；
所述芽孢杆菌菌粉由枯草芽孢杆菌HM-66制备；
所述复合代谢产物粉剂由植物乳杆菌LP3、植物乳杆菌LP6和枯草芽孢杆菌HM-66的代谢产物制备。
可选地，所述复合乳酸菌菌粉由包括以下步骤的方法制备：
步骤1-1，将活化好的植物乳杆菌LP3以及植物乳杆菌LP6的种子液，分别按照2％(V/V) 的比例接种到存有经过121℃灭菌15min的MRS培养基的发酵罐中，37±1℃恒温培养，调节体系初始pH＝6.5±0.5，通过流加中和剂控制体系恒pH＝5.9±0.5，发酵8～12小时，如10 小时后，再自然发酵20～30小时，如24小时，直至体系pH低于4.5，结束发酵。
在一种可实现的方式中，所述活化好的植物乳杆菌LP3以及植物乳杆菌LP6的种子液可以根据以下方法获得：
将冷冻保存的植物乳杆菌LP3和植物乳杆菌LP6分别接种于MRS液体培养基中，在温度37±1℃下培养20h～25h，如22h，如此传代培养3次，分别得到活化的植物乳杆菌LP3的种子液和植物乳杆菌LP6的种子液。
所述的MRS液体培养基按照如下配比制备：10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三钠、1mL吐温80、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰，加入1000mL蒸馏水，调节体系的pH至6.5，121℃灭菌15min。
植物乳杆菌LP3以及植物乳杆菌LP6在37±1℃，pH＝5.9±0.5的条件下生长速度最快，将体系的温度调节至此温度范围，能够使体系中快速的繁殖出大量的植物乳杆菌LP3以及植物乳杆菌LP6。
而在体系pH不受控制，进行自然发酵的过程中，在体系中的活菌的数量并不显著减少的情况下，体系中能够产生大量的植物乳杆菌LP3以及植物乳杆菌LP6的代谢产物，这些代谢产物能够与所述植物乳杆菌菌体、枯草芽孢杆菌HM-66及其代谢产物协同作用，降低蛋鸡体内胆固醇含量。
在本实施例中，所述中和剂可以为现有技术中任意一种用于调节发酵体系pH的中和剂，如氢氧化钠溶液、氨水等，在本实施例中优选使用碱性相对较为温和的氨水。
当发酵体系的pH低于4.5后，可以认为体系中已经产生了充足的植物乳杆菌代谢产物，此时，可以终止发酵。
步骤1-2，将步骤1-1获得的发酵后的体系在2℃～8℃，优选为4℃条件下，用高速转鼓离心机以12000rpm～20000rpm，如16000rpm的转速收集菌体细胞。
将步骤1-1发酵得到的体系置于2℃～8℃能够使菌体细胞进行休眠状态，降低菌体细胞的代谢，有利于保持菌体细胞的活性。
在此温度条件下，以12000rpm～20000rpm的转速对所述发酵体系进行离心分离，能够将菌体细胞与代谢产物充分分离，便于后续处理。
步骤1-3，基于乳酸菌菌体的总重量，向离心分离到的菌体细胞中添加小分子糖，蛋白质，纯化水，搅拌均匀后上机，进行真空冷冻干燥后制得乳酸菌菌粉，所述乳酸菌菌粉的水分含量≤5％，活菌数>1×1011CFU/g。
在本实施例中，所述小分子糖选自葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、果糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的一种或者多种，优选为蔗糖。
所述蛋白质选自脱脂乳粉、大豆蛋白粉、脱盐乳清蛋白中的一种或者多种，优选为脱盐乳清蛋白。
本发明人发现，向菌体细胞中加入所述小分子糖以及蛋白质，能够在菌体细胞的表面形成保护膜层，减少真空冷冻干燥过程中温度骤降对菌体细胞造成的损伤。
进一步地，基于所述菌体细胞的总重量，向菌体细胞中加入2wt％～5wt％，如4wt％的小分子糖和1～5wt％，如3wt％的蛋白质，以及1～4倍，如2.5倍重量的水能够在菌体表面形成完整的保护膜层，实现对菌体细胞的保护。
在一种可实现的方式中，所述真空冷冻干燥的方法具体为：向发酵离心后获得的菌泥中每1Kg加入10Kg水，2Kg蔗糖、0.5Kg脱脂乳和1Kg酵母粉，并保持50-100r/min搅拌的转速，在20℃条件下，作用2min后直接装盘放入真空冷冻干燥。其冻干曲线为：-40℃，5h； -20℃，25h；-10℃，10h；0℃，5h；10℃，4h；20℃，4h，在本实施例中，所添加的物料均经过高能级电子束流扫描物料，以快速杀灭物料中的活性菌体，物料厚度2cm，物料传送速度为1-5m/min。
在一种可实现的方式中，制备所述芽孢杆菌菌粉的方法包括：
将活化好的枯草芽孢杆菌HM-66种子液，按照4％(V/V)的比例同时接种到存有经过 121℃灭菌15min的培养基的发酵罐中，37±1℃恒温培养，调节体系初始pH＝6.5±0.5，以 50rpm的速度进行搅拌，通过调节进气量保持体系中溶氧40％～60％，如50％(V/V)左右，发酵35小时左右，直至体系中芽孢率达到90％以上，结束发酵。
在一种可实现的方式中，所述活化好的枯草芽孢杆菌可以根据以下方法获得：
步骤2-1，将冷冻保存的枯草芽孢杆菌HM-66分别接种于MRS液体培养基中，在温度37±1℃下培养20～25h，如22h，如此传代培养3次，得到活化的枯草芽孢杆菌HM-66的种子液。
所述的MRS液体培养基按如下配比制备：10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三钠、1mL吐温80、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰，加入1000mL蒸馏水，调节体系的pH至6.5，121℃灭菌15min。
在37±1℃温度下，枯草芽孢杆菌HM-66生长繁殖速度最快，而所述枯草芽孢杆菌HM-66 为需氧菌，因此，保持体系中溶氧为40％～60％(V/V)能够满足菌体生长过程的需氧量，促进所述枯草芽孢杆菌的生长。当体系中芽孢率达到90％以上认为枯草芽孢杆菌已经充分繁殖生长，可以结束发酵。
步骤2-2，将步骤2-1获得的体系在2℃～8℃，如4℃条件下，用高速转鼓离心机以12000rpm～20000rpm，如16000rpm的转速收集菌体细胞，向离心分离得到的菌体细胞中添加小分子糖、多糖以及纯化水，搅拌均匀后上机，进行真空冷冻干燥后制得枯草芽孢杆菌菌粉，所述枯草芽孢杆菌菌粉的水分含量≤5％，活菌数>1.0×1011CFU/g。
将步骤2-1发酵得到的体系置于2℃～8℃能够使菌体细胞进行休眠状态，降低菌体细胞的代谢，有利于保持菌体细胞的活性。
在本实施例中，所述小分子糖选自葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、果糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的一种或者多种，优选为蔗糖。
所述多糖选自纤维素、麦芽糊精、海藻酸钠、明胶、果胶、黄原胶、普鲁兰多糖、大豆多糖、β-葡聚糖、刺云实胶、瓜尔豆胶、葫芦巴胶、槐豆胶、褐藻糖胶、阿拉伯胶中的一种或者多种，优选为麦芽糊精。
进一步地，基于枯草芽孢杆菌菌体的总重量，所述小分子糖的添加量为添加1wt％～6wt％，如4wt％；所述多糖的添加量为1wt％～5wt％，如3wt％；纯化水的添加量为2.5倍枯草芽孢杆菌总重量。
本发明人经研究发现，小分子糖与多糖在所述枯草芽孢杆菌的菌体表面能够形成保护膜层，从而防止所述枯草芽孢杆菌的菌体在真空冷冻干燥过程中由于温度骤降而造成菌体损伤。
在一种可实现的方式中，所述复合代谢产物粉由包括以下步骤的方法制备：
将步骤1-2离心分离得到的复合乳酸杆菌发酵上清液以及步骤2-2离心分离得到的枯草芽孢杆菌发酵上清液按照(0.5～2):(0.5～2)，如1:1(V/V)的比例混合，通过低温浓缩设备进行浓缩，低温浓缩条件为：物料温度30±5℃，真空度10pa，当浓缩至固形物达到80％以后，通过泵将浓缩液输送至真空带式干燥机组，使用低温真空带式干燥机进行干燥的条件为：物料温度30℃，增加干燥环境的真空度，至真空度为20pa，使用低温干燥手段对复合代谢产物进行干燥，对代谢产物的结构几乎无损坏，对发酵上清液中的菌体损伤也比较小，因此能够得到具有高生物活性的复合代谢产物粉，所述复合代谢产物粉的水分含量≤5％。
在本实施例中，在浓缩前期，体系中水分含量较高，因此，通过提高隔板温度，如使隔板温度升高至90℃以使物料的温度为30±5℃。在体系被浓缩后，体系中水分含量较低，此时可降低隔板温度使物料的温度保持在30±5℃，如40℃。
在本实施例中，本发明人发现，在复合代谢产物的液相体系中含有大量无机盐，难以直接冻干，需要先经过浓缩的步骤除去体系中大部分的液相物质，如果将复合植物乳杆菌以及枯草芽孢杆菌的菌体与所述复合代谢产物的液相体系混合直接进行冻干操作，会由于体系中大量无机盐的存在降低体系的冰点，导致难以冻干，增加冻干的时间和成本，从而导致复合微生态制剂的成本升高，而且，由于体系中大量无机盐的存在会导致在冻干过程中菌体细胞受到损伤，降低复合微生态制剂中活菌数量。
而将复合菌的菌体与复合代谢产物分别进行冻干则避免了上述问题，制备速度快，而且制得的复合微生态制剂中活菌数量达到最大。
进一步地，本发明人发现，将所述复合植物乳杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉以及复合代谢产物粉按照上述重量比进行混合，所述复合植物乳杆菌菌粉以及枯草芽孢杆菌菌粉的使用量可以降低，从而降低养殖成本，而且，所述复合代谢产物粉能够与所述复合植物乳杆菌菌粉、枯草芽孢杆菌菌粉协同作用，增强鸡蛋中胆固醇含量降低的效果。具体可参见试验例1 和2。
本申请还提供一种制备上述复合微生态制剂的方法，所述方法包括：
步骤1，制备包括植物乳杆菌LP3、植物乳杆菌LP6的复合乳酸菌菌粉。
本步骤所用方法具体可参见步骤1-1至步骤1-3，在此不再赘述。
步骤2，制备枯草芽孢杆菌HM-66菌粉。
本步骤所用方法具体可参见步骤2-1至步骤2-2，在此不再赘述。
步骤3，制备包括植物乳杆菌LP3、植物乳杆菌LP6以及枯草芽孢杆菌HM-66代谢产物的复合代谢产物粉。
本步骤所用方法具体可参见前述制备复合代谢产物粉可实现方式部分，在此不再赘述。
步骤4，用步骤1制备的复合乳酸菌菌粉、步骤2制备的枯草芽孢杆菌HM-66菌粉以及步骤3制备的复合代谢产物粉制备复合微生态制剂。
在一种可实现的方式中，本步骤所述方法可以为现有技术中任意一种将固体微粒混合均匀的方式，如可以将所述复合乳酸菌菌粉、所述枯草芽孢杆菌HM-66菌粉以及所述复合代谢产物粉根据所述重量比进行物理混合。
本申请还提供所述复合微生态制剂用于能够降低鸡蛋胆固醇含量的鸡饲养料的用途，所述鸡饲养料包括用于饲养蛋鸡的日料，用于饲养蛋鸡的水以及其它用于饲养蛋鸡的饲料。
在一种可实现的方式中，所述复合微生态制剂的使用方法为，基于蛋鸡饮水的总体积，在蛋鸡饮水中按照100～500g/m3的比例投放所述复合微生态制剂。
在另一种可实现的方式中，所述复合微生态制剂的使用方法为，基于蛋鸡饲料的总重量，在蛋鸡饲料中按照100g/吨～300g/吨，如200g/吨的比例投放所述复合微生态制剂。
按照上述方法饲养的蛋鸡，所产的鸡蛋中胆固醇含量明显降低，最多可降低46.63％以上，而且，在蛋鸡饲料中使用的效果优于在蛋鸡饮水中使用的效果，具体请参见试验例1和2。
实施例
实施例1复合微生态制剂的制备
(一)菌种活化和培养
将冷冻保存的植物乳杆菌LP3、枯草芽孢杆菌HM-66和植物乳杆菌LP6分别接种于MRS 液体培养基中，在温度37℃下培养22h，如此传代培养3次，分别得到活化的植物乳杆菌LP3 的种子液，枯草芽孢杆菌HM-66的种子液和植物乳杆菌LP6的种子液。
所述的MRS液体培养基组成如下：10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三钠、1mL吐温80、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰，加入1000mL蒸馏水，调节体系的pH至6.5，121℃灭菌15min。
(二)复合乳酸菌的发酵
将(一)获得的活化好的植物乳杆菌LP3以及植物乳杆菌LP6的种子液，分别按照2％ (V/V)的比例接种到存有经过121℃灭菌15min的MRS培养基的发酵罐中，37℃恒温培养，调节体系初始pH＝6.5，通过流加中和剂(氨水)控制体系恒pH＝5.9，发酵10小时后，再自然发酵24h，直至体系pH低于4.5，结束发酵。
(三)枯草芽孢杆菌的发酵
将活化好的枯草芽孢杆菌HM-66种子液，按照4％(V/V)的比例同时接种到存有经过 121℃灭菌15min的培养基的发酵罐中，37℃恒温培养，调节体系初始pH＝6.5，以50rpm的速度进行搅拌，通过调节进气量保持体系中溶氧50％(V/V)左右，发酵35小时左右，直至体系中芽孢率达到90％以上，结束发酵。
(四)乳酸菌菌粉的制备
将(二)获得的发酵后的体系在4℃条件下，用高速转鼓离心机以16000rpm的转速收集菌体细胞，并将离心分离得到的发酵上清液暂存于罐体中。基于乳酸菌菌体的总重量，向离心分离到的菌体细胞中添加4wt％的蔗糖，3wt％的脱盐乳清蛋白，2.5倍重量的纯化水，搅拌均匀后上机，进行真空冷冻干燥后制得乳酸菌菌粉，所述乳酸菌菌粉的水分含量≤5％，活菌数>1×1011CFU/g。
(五)芽孢杆菌菌粉的制备
将(三)获得的发酵后的体系在4℃条件下，用高速转鼓离心机以16000rpm的转速收集菌体细胞，并将离心分离得到的发酵上清液暂存于罐体中。基于复合芽孢杆菌菌体的总重量，向离心分离得到的菌体细胞中添加4wt％蔗糖，3wt％麦芽糊精，2.5倍重量的纯化水，搅拌均匀后上机，进行真空冷冻干燥后制得复合芽孢杆菌菌粉，所述复合芽孢杆菌菌粉的水分含量≤5％，活菌数>1.0×1011CFU/g。
(六)复合代谢产物粉的制备
将(四)离心分离得到的发酵上清液以及(五)离心分离得到的复合芽孢杆菌发酵上清液按照1:1(V/V)比例混合，通过低温浓缩设备进行浓缩，低温浓缩条件为：加热温度40-50℃，使得物料温度为30±5℃，控制真空度10pa，当浓缩至固形物达到80％以后，通过泵将浓缩液输送至真空带式干燥机组，使用低温真空带式干燥机进行干燥的条件为：第一段加热温度 90℃，物料温度30±5℃，第二段加热温度60℃，物料温度30±5℃，第三段加热温度20℃，物料温度25±2℃，真空度始终维持在20pa，得到具有高生物活性复合代谢产物粉，所述复合代谢产物粉的水分含量≤5％。
本步骤浓缩产生的蒸汽通过低温冷凝器液化回收，可直排。
(七)复合微生态制剂的制备
将(四)制备的乳酸菌菌粉、(五)制备的复合芽孢杆菌菌粉以及(六)制备的复合代谢产物粉按照重量比为乳酸菌菌粉:枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌复合菌粉:复合代谢产物＝1:1:98的比例进行均匀混合，即，得到复合微生态制剂。
试验例
试验例1饮水中添加复合微生态制剂对鸡蛋中胆固醇含量的影响
本试验例使用实施例1制备的复合微生态制剂。
试验组和对照组各100只蛋鸡，试验组按照每吨水300g的添加量添加到蛋鸡的饮水中，正常饲喂，对照组与试验组的区别仅在于在蛋鸡的饮水中不添加复合微生态制剂。
分别在0天、7天和12天取20枚鸡蛋检测其中胆固醇含量，结果如下表1所示：
表1复合微生态液体制剂添加到蛋鸡饮水中对鸡蛋中胆固醇含量影响
由表1的试验结果可知，养殖第0天时，试验组与对照组鸡蛋液中胆固醇平均含量相近，不具有显著差异。而在养殖7天后，试验组鸡蛋液中胆固醇平均含量下降为438.55mg/100g，与养殖第0天相比，下降了16.81％，而对照组在养殖7天后，鸡蛋液中胆固醇含量下降不明显，试验组鸡蛋液中胆固醇含量较对照组降低16.17％；养殖12天后，试验组鸡蛋液中胆固醇平均含量为387.3mg/100g，与养殖第0天相比，下降了26.53％，而对照组鸡蛋液中胆固醇含量降低仍不显著，试验组鸡蛋胆固醇较对照组降低26.91％。
由此表明本申请提供的复合微生态制剂具有良好的降低鸡蛋中胆固醇含量的效果，具有很高的实际应用价值。
试验例2饲料中添加复合微生态制剂对鸡蛋中胆固醇含量的影响
试验组和对照组各100只蛋鸡，试验组按照每吨200g的添加量添加到蛋鸡的饲料中，对照组正常饲喂，分别在0天、7天和12天取20枚鸡蛋进行胆固醇检测，结果表明：养殖7天后，试验组鸡蛋胆固醇较对照组降低26.82％养殖；养殖12天后，试验组鸡蛋胆固醇较对照组降低46.55％。
表2复合微生态液体制剂添加到蛋鸡饲料中对鸡蛋中胆固醇含量影响
由表2的试验结果可知，养殖第0天时，试验组与对照组鸡蛋液中胆固醇平均含量相近，不具有显著差异。而在养殖7天后，试验组鸡蛋液中胆固醇平均含量下降为389.35mg/100g，与养殖第0天相比，下降了26.82％，而对照组在养殖7天后，鸡蛋液中胆固醇含量下降不明显，试验组鸡蛋液中胆固醇含量较对照组降低27.19％；养殖12天后，试验组鸡蛋液中胆固醇平均含量为284.4mg/100g，与养殖第0天相比，下降了46.55％，而对照组鸡蛋液中胆固醇含量降低仍不显著，试验组鸡蛋胆固醇较对照组降低46.63％。以上结果表明该复合微生态制剂具有良好的降低鸡蛋中胆固醇效果，具有很高的实际应用价值。
结果试验例1以及试验例2的结果可知，本申请提供的复合微生态制剂无论添加在鸡饲料中还是添加到鸡的饮水中，都能够起到降低鸡蛋胆固醇的效果，而且，添加到鸡饲料中的效果更为显著。
以上结合具体实施方式和范例性实例对本申请进行了详细说明，不过这些说明并不能理解为对本申请的限制。本领域技术人员理解，在不偏离本申请精神和范围的情况下，可以对本申请技术方案及其实施方式进行多种等价替换、修饰或改进，这些均落入本申请的范围内。本申请的保护范围以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种复合微生态制剂，其特征在于，所述复合微生态制剂包括：植物乳杆菌LP3，枯草芽孢杆菌HM-66和植物乳杆菌LP6，其中，所述植物乳杆菌LP3的保藏编号为CGMCCNo.14531，所述枯草芽孢杆菌HM-66的保藏编号为CGMCC No.6733，所述植物乳杆菌LP6的保藏编号为CGMCC No.13458。
2.根据权利要求1所述的复合微生态制剂，其特征在于，所述复合微生态制剂包括以下重量配比的组分：
复合乳酸菌菌粉 0.5～2重量份
芽孢杆菌菌粉 0.5～2重量份
复合代谢产物粉剂 90～110重量份；
其中，
基于1kg计为1重量份，
所述复合乳酸菌菌粉由植物乳杆菌LP3和植物乳杆菌LP6制备；
所述芽孢杆菌菌粉由枯草芽孢杆菌HM-66制备；
所述复合代谢产物粉剂由植物乳杆菌LP3、植物乳杆菌LP6和枯草芽孢杆菌HM-66的代谢产物制备。
3.根据权利要求2所述的复合微生态制剂，其特征在于，所述复合微生态制剂有效菌数≥5.0×109CFU/g。
4.根据权利要求1至3任一项所述的复合微生态制剂，其特征在于，所述复合乳酸菌菌粉由包括以下步骤的方法制备：
步骤1-1，将活化好的植物乳杆菌LP3以及植物乳杆菌LP6的种子液，分别按照2％(V/V)的比例接种到存有经过121℃灭菌15min的MRS培养基的发酵罐中，37±1℃恒温培养，调节体系初始pH＝6.5±0.5，通过流加中和剂控制体系恒pH＝5.9±0.5，发酵8～12小时后，再自然发酵20～30小时，直至体系pH低于4.5，结束发酵；
步骤1-2，将步骤1-1获得的发酵后的体系在2℃～8℃的条件下，用高速转鼓离心机以12000rpm～20000rpm的转速收集菌体细胞；
步骤1-3，基于乳酸菌菌体的总重量，向离心分离到的菌体细胞中添加小分子糖，蛋白质，纯化水，搅拌均匀后上机，进行真空冷冻干燥后制得乳酸菌菌粉。
5.根据权利要求1至4任一项所述的复合微生态制剂，其特征在于，所述芽孢杆菌菌粉由包括以下步骤的方法制备：
步骤2-1，将冷冻保存的枯草芽孢杆菌HM-66分别接种于MRS液体培养基中，在温度37±1℃下培养20～25h，如此传代培养3次，得到活化的枯草芽孢杆菌HM-66的种子液；
步骤2-2，将步骤2-1获得的体系在2℃～8℃条件下，用高速转鼓离心机以12000rpm～20000rpm的转速收集菌体细胞，向离心分离得到的菌体细胞中添加小分子糖、多糖以及纯化水，搅拌均匀后上机，进行真空冷冻干燥后制得枯草芽孢杆菌菌粉。
6.根据权利要求1至5任一项所述的复合微生态制剂，其特征在于，
在步骤1-3中，
所述小分子糖选自葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、果糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的一种或者多种，优选为蔗糖，和/或
所述蛋白质选自脱脂乳粉、大豆蛋白粉、脱盐乳清蛋白中的一种或者多种，优选为脱盐乳清蛋白；和/或
在步骤2-2中，
所述小分子糖选自葡萄糖、蔗糖、乳糖、麦芽糖、海藻糖、果糖、低聚果糖、低聚半乳糖中的一种或者多种，优选为蔗糖，和/或
所述多糖选自纤维素、麦芽糊精、海藻酸钠、明胶、果胶、黄原胶、普鲁兰多糖、大豆多糖、β-葡聚糖、刺云实胶、瓜尔豆胶、葫芦巴胶、槐豆胶、褐藻糖胶、阿拉伯胶中的一种或者多种，优选为麦芽糊精。
7.一种制备权利要求1至6任一项所述复合微生态制剂的方法，其特征在于，所述方法包括：
步骤1，制备包括植物乳杆菌LP3、植物乳杆菌LP6的复合乳酸菌菌粉；
步骤2，制备枯草芽孢杆菌HM-66菌粉；
步骤3，制备包括植物乳杆菌LP3、植物乳杆菌LP6以及枯草芽孢杆菌HM-66代谢产物的复合代谢产物粉；
步骤4，用步骤1制备的复合乳酸菌菌粉、步骤2制备的枯草芽孢杆菌HM-66菌粉以及步骤3制备的复合代谢产物粉制备复合微生态制剂。
8.权利要求1至6任一项所述复合微生态制剂用于降低鸡蛋胆固醇的鸡饲养料的用途。
9.根据权利要求8所述复合微生态制剂用于能够降低鸡蛋胆固醇的鸡饲养料的用途，其特征在于，在蛋鸡饮水中按照100～500g/m3的比例投放所述复合微生态制剂。
10.根据权利要求8或9所述复合微生态制剂用于降低鸡蛋胆固醇的鸡饲养料的用途，其特征在于，在蛋鸡饲料中按照100～300g/吨的比例投放所述复合微生态制剂。
CN201810224108.7A 2018-03-19 2018-03-19 一种复合微生态制剂及其制备方法和应用 Withdrawn CN108504588A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810224108.7A CN108504588A (zh) 2018-03-19 2018-03-19 一种复合微生态制剂及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810224108.7A CN108504588A (zh) 2018-03-19 2018-03-19 一种复合微生态制剂及其制备方法和应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108504588A true CN108504588A (zh) 2018-09-07

Family

ID=63375852

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810224108.7A Withdrawn CN108504588A (zh) 2018-03-19 2018-03-19 一种复合微生态制剂及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108504588A (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110172413A (zh) * 2019-03-21 2019-08-27 内蒙古和美科盛生物技术有限公司 一种用于制备液体生物肥的复合益生菌剂及其应用
CN110387330A (zh) * 2019-07-17 2019-10-29 上海理工大学 利用复合保护剂提高植物乳杆菌存活率的冷冻干燥方法
CN112725248A (zh) * 2021-03-05 2021-04-30 福州大学 枯草芽孢杆菌喷雾干燥复合保护剂及其制备方法
CN113951375A (zh) * 2021-11-23 2022-01-21 成都大学 一种利用冷水鱼内脏废弃物生产功能性饲料添加剂的方法
CN114158485A (zh) * 2021-12-03 2022-03-11 安徽省农业科学院农业工程研究所 一种零排放生猪养殖秸秆垫料及其制备方法

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110172413A (zh) * 2019-03-21 2019-08-27 内蒙古和美科盛生物技术有限公司 一种用于制备液体生物肥的复合益生菌剂及其应用
CN110387330A (zh) * 2019-07-17 2019-10-29 上海理工大学 利用复合保护剂提高植物乳杆菌存活率的冷冻干燥方法
CN112725248A (zh) * 2021-03-05 2021-04-30 福州大学 枯草芽孢杆菌喷雾干燥复合保护剂及其制备方法
CN113951375A (zh) * 2021-11-23 2022-01-21 成都大学 一种利用冷水鱼内脏废弃物生产功能性饲料添加剂的方法
CN114158485A (zh) * 2021-12-03 2022-03-11 安徽省农业科学院农业工程研究所 一种零排放生猪养殖秸秆垫料及其制备方法
CN114158485B (zh) * 2021-12-03 2022-12-27 安徽省农业科学院农业工程研究所 一种零排放生猪养殖秸秆垫料及其制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108504588A (zh) 一种复合微生态制剂及其制备方法和应用
CN106858066B (zh) 协同促进肠道益生菌增殖与定植的添加剂及使用方法
CN106282072B (zh) 一种复合乳酸菌微生态制剂及其制备方法与应用
CN102586155B (zh) 一种植物乳杆菌n13及其用途
CN105483007A (zh) 植物乳杆菌固定化制剂
CN108753650B (zh) 屎肠球菌以及由其制备的复合微生态制剂
CN115349639B (zh) 一种提高免疫力的益生菌缓释体系及其制备方法和应用
CN111820419B (zh) 靶向调控肠道艾克曼菌和短链脂肪酸产生菌的组合物
CN112980735B (zh) 丁酸梭菌、菌剂及它们的应用以及菌剂的制备方法
CN112280720B (zh) 一株多形拟杆菌gl-02及其与胆汁酸复配的复合菌剂与应用
CN104673726A (zh) 一种猪源嗜酸乳杆菌冻干制剂及其应用
CN106635886A (zh) 一种利用产胆盐水解酶的副干酪乳杆菌降低鸡蛋胆固醇的方法
CN116083262A (zh) 有水产病原菌拮抗特性的植物乳杆菌菌株及其制剂的制备及应用
CN108893434B (zh) 一种降解黄曲霉素b1的微生物处理剂及其制备方法与应用
WO2008091137A1 (en) Antibiotic feedstuff additives comprising ethanol extract of house fly larvae as active ingredient and manufacturing method thereof
CN1831114A (zh) 屎肠球菌菌株及其用途
CN108179122B (zh) 一种高粘附益生性屎肠球菌及其应用
CN112961806B (zh) 高产乳酸的凝结芽孢杆菌、生物发酵饲料及其制备方法和应用
CN116515683A (zh) 一株植物乳杆菌hew-a490代谢产物及其制备方法和应用
CN108902982B (zh) 一种益生菌微胶囊冻干粉及其制备方法
CN116144555A (zh) 一种拮抗肉鸡肠道损伤的发酵饲料添加剂及其制备方法和应用
CN116286514A (zh) 多功能菌剂及其所含的罗伊氏乳杆菌及其应用
CN105483008A (zh) 植物乳杆菌固定化制剂制备方法
CN106615609B (zh) 一种可提高饲料青贮品质的布氏乳杆菌及其应用
CN111728081B (zh) 一种饲料添加剂用复合菌发酵液及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20180907

WW01 Invention patent application withdrawn after publication