CN116472960B - 一种马来良姜离体再生的方法 - Google Patents
一种马来良姜离体再生的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116472960B CN116472960B CN202310410663.XA CN202310410663A CN116472960B CN 116472960 B CN116472960 B CN 116472960B CN 202310410663 A CN202310410663 A CN 202310410663A CN 116472960 B CN116472960 B CN 116472960B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- callus
- adventitious
- culture medium
- differentiated
- root
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 title claims abstract description 24
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 claims abstract description 58
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims abstract description 29
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 19
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims abstract description 18
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 14
- 235000006886 Zingiber officinale Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 235000008397 ginger Nutrition 0.000 claims abstract description 12
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 44
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 25
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 20
- 229920002148 Gellan gum Polymers 0.000 claims description 18
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 18
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 18
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 18
- 240000002768 Alpinia galanga Species 0.000 claims description 7
- 235000006887 Alpinia galanga Nutrition 0.000 claims description 7
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000005286 illumination Methods 0.000 claims description 5
- 244000273928 Zingiber officinale Species 0.000 claims 1
- 241000234314 Zingiber Species 0.000 abstract description 11
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 abstract description 8
- 238000009395 breeding Methods 0.000 abstract description 3
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 abstract description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 3
- 229940102465 ginger root Drugs 0.000 abstract description 2
- 239000001841 zingiber officinale Substances 0.000 abstract description 2
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 3
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 1
- 244000062241 Kaempferia galanga Species 0.000 description 1
- 235000013421 Kaempferia galanga Nutrition 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 206010016766 flatulence Diseases 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/002—Culture media for tissue culture
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明公开了一种马来良姜离体再生的方法，本发明采用马来良姜的根段为外植体，诱导根段分化愈伤组织，再诱导愈伤组织分化不定根和不定芽，整个过程利用植物细胞的全能性，完成离体再生。本发明马来良姜根的愈伤组织的诱导率达97%，从愈伤组织诱导分化不定根不定芽时的分化率可达100%。本发明实现了马来良姜中的离体再生，对于后续马来良姜的育种研究和基因研究较为重要。
Description
技术领域
本发明属于植物再生技术领域，具体涉及一种马来良姜离体再生的方法。
背景技术
植物组织离体培养技术作为细胞工程与基因工程研究的基本方法，具有实验条件人为可控、重复性强等特点，是获得基因改良植株的技术基础。马来良姜（Alpinia muticaRoxb.）是姜科（Zingiberaceae）山姜属（Alpinia）植物，它的根状茎可用于治疗肠胃胀气，果实可用于治疗腹泻，果皮油具有良好的抗氧化活性，可用作天然的抗氧化剂，也具有抗微生物活性，可用于抗菌杀虫，药用价值潜力巨大。由于马来良姜本身含有大量次生代谢产物，对于建立它的离体再生体系显得尤为困难，但马来良姜具有较大的药用价值和研究潜力，因此，建立一个高效稳定的离体再生体系是马来良姜基因遗传转化体系的前提，为后续育种研究、基因研究提供技术平台，具有深远意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种马来良姜离体再生的方法。
本发明的目的是这样实现的，马来良姜离体再生的方法，按以下步骤实现：
1）在超净工作台取马来良姜35-45d苗龄无菌组培苗的根段，将其剪成0.5-1cm长度的小段，接种至愈伤组织诱导培养基上，于28-30℃温度、60%-70%湿度下暗培养直至分化出愈伤组织，期间每13-15d更换一次培养基直至分化出愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基为：MS基本培养基+ 0.1-0.4mg/L 2,4-D + 0.5-1.5mg/L 6-BA+ 30g/L蔗糖 +3g/LSigma Phytagel，pH=5.8-5.85。
2）将分化出的愈伤组织接种至不定根不定芽分化培养基中，于28-30℃温度、60%-70%湿度下每天光照培养16-18h，暗培养6-8h，培养120d-150d直至分化出不定根不定芽点，期间每13-15d更换一次新鲜培养基；所述不定根不定芽分化培养基为：MS基本培养基+0.5-1.5mg/L TDZ +0.5-1.5mg/L NAA +1.5-2.5mg/L 6-BA + 30g/L蔗糖 + 3g/L SigmaPhytagel，pH=5.8-5.85；
3）将愈伤组织分化的不定根不定芽点后接种至添加了 1.5-2.5mg/L 6-BA和0.5-1mg/L NAA的MS基本培养基上，在与步骤2）相同的培养条件下培养至长出叶片，即完成整个离体再生过程。
本发明的有益效果为：本发明采用马来良姜的根段为外植体，诱导根段分化愈伤组织，再诱导愈伤组织分化不定根和不定芽，整个过程利用植物细胞的全能性，完成离体再生。本发明马来良姜根的愈伤组织的诱导率达97%，从愈伤组织诱导分化不定根不定芽时的分化率可达100%。本发明实现了马来良姜中的离体再生，对于后续马来良姜的育种研究和基因研究较为重要。
附图说明
图1为马来良姜离体再生的外植体-根；
图2为根分化出的愈伤组织；
图3为愈伤组织分化出的不定根；
图4为在愈伤组织分化不定根的基础上继续分化不定芽点；
图5为分化出的完整植株，从左至右依次为出叶后生长10d、25d、40d的完整植株。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的详细说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。
本发明一种马来良姜离体再生的方法，按以下步骤实现：
1）在超净工作台取马来良姜35-45d苗龄无菌组培苗的根段，将其剪成0.5-1cm长度的小段，接种至愈伤组织诱导培养基上，于28-30℃温度、60%-70%湿度下暗培养直至分化出愈伤组织，期间每13-15d更换一次培养基直至分化出愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基为：MS基本培养基+ 0.1-0.4mg/L 2,4-D + 0.5-1.5mg/L 6-BA+ 30g/L蔗糖 +3g/LSigma Phytagel，pH=5.8-5.85。
2）将分化出的愈伤组织接种至不定根不定芽分化培养基中，于28-30℃温度、60%-70%湿度下每天光照培养16-18h，暗培养6-8h，培养120d-150d直至分化出不定根不定芽点，期间每13-15d更换一次新鲜培养基；所述不定根不定芽分化培养基为：MS基本培养基+0.5-1.5mg/L TDZ +0.5-1.5mg/L NAA +1.5-2.5mg/L 6-BA + 30g/L蔗糖 + 3g/L SigmaPhytagel，pH=5.8-5.85；
3）将愈伤组织分化的不定根不定芽点接种至添加了 1.5-2.5mg/L 6-BA和0.5-1mg/L NAA的MS基本培养基上，在与步骤2）相同的培养条件下培养至长出叶片，即完成整个离体再生过程。
步骤2）中，光照照度为11000-13000Lx。
实施例1
1、在超净工作台取马来良姜40d苗龄无菌组培苗的根段，将其剪成0.5cm长度的小段，接种至愈伤组织诱导培养基（MS基本培养基+ 0.2mg/L 2,4-D + 1.0mg/L 6-BA+ 30g/L蔗糖 + 3g/LSigma Phytagel，pH=5.8）上，于30℃温度、60%湿度下暗培养直至分化出愈伤组织，期间每15d更换一次培养基直至分化出愈伤组织，愈伤组织的诱导率为97%；
2、将分化出的愈伤组织接种至不定根不定芽分化培养基（MS基本培养基+ 1mg/LTDZ +1mg/L NAA +2mg/L 6-BA + 30g/L蔗糖 + 3g/L Sigma Phytagel，pH=5.8）中，于30℃温度、60%湿度下每天在光照照度为12000Lx下培养16h，暗培养8h，培养120d至分化出不定根不定芽点，期间每15d更换一次新鲜培养基；不定根不定芽的分化率为100%。
3、将愈伤组织分化的不定根不定芽点接种至添加了 2mg/L 6-BA和0.5mg/L NAA的MS基本培养基上，在与步骤2相同的培养条件下培养至长出叶片，即完成整个离体再生过程。
实施例2
1、在超净工作台取马来良姜35d苗龄无菌组培苗的根段，将其剪成0.5cm长度的小段，接种至愈伤组织诱导培养基（MS基本培养基+ 0.3mg/L 2,4-D + 0.5mg/L 6-BA+ 30g/L蔗糖 +3g/L Sigma Phytagel，pH=5.8）上，于28℃温度、70%湿度下暗培养直至分化出愈伤组织，期间每15d更换一次培养基直至分化出愈伤组织，愈伤组织的诱导率为96%；
2、将分化出的愈伤组织接种至不定根不定芽分化培养基（MS基本培养基+ 0.5mg/L TDZ +0.5mg/L NAA +2.5mg/L 6-BA + 30g/L蔗糖 + 3g/L Sigma Phytagel，pH=5.8）中，于30℃温度、60%湿度下每天在光照照度为11000Lx下培养18h，暗培养6h，培养至分化出不定根不定芽点，期间每15d更换一次新鲜培养基；不定根不定芽的分化率为98%。
3、将愈伤组织分化的不定根不定芽点接种至添加了 2.5mg/L 6-BA和0.5mg/LNAA的MS基本培养基上，在与步骤2相同的培养条件下培养至长出叶片，即完成整个离体再生过程。
实施例3
1、在超净工作台取马来良姜45d苗龄无菌组培苗的根段，将其剪成1cm长度的小段，接种至愈伤组织诱导培养基（MS基本培养基+0.2mg/L 2,4-D + 1.5mg/L 6-BA+ 30g/L蔗糖 + 3g/L Sigma Phytagel，pH=5.8）上，于28℃温度、70%湿度下暗培养直至分化出愈伤组织，期间每13d更换一次培养基直至分化出愈伤组织；愈伤组织的诱导率为95%；
2、将分化出的愈伤组织接种至不定根不定芽分化培养基（MS基本培养基+ 0.5mg/L TDZ +1.5mg/L NAA +1.5mg/L 6-BA + 30g/L蔗糖 + 3g/L Sigma Phytagel，pH=5.5）中，于30℃温度、60%湿度下每天在光照照度为11000Lx下培养18h，暗培养6h，培养至分化出不定根不定芽点，期间每13d更换一次新鲜培养基；不定根不定芽的分化率为99%。
3、将愈伤组织分化的不定根不定芽点接种至添加了 1.5mg/L 6-BA和0.8mg/LNAA的MS基本培养基上，在与步骤2相同的培养条件下培养至长出叶片，即完成整个离体再生过程。
实施例4
1、在超净工作台取马来良姜40d苗龄无菌组培苗的根段，将其剪成0.5cm长度的小段，接种至愈伤组织诱导培养基（MS基本培养基+ 0.4mg/L 2,4-D + 1.0mg/L 6-BA+ 30g/L蔗糖 +3g/L Sigma Phytagel，pH=5.8）上，于30℃温度、60%湿度下暗培养直至分化出愈伤组织，期间每14d更换一次培养基直至分化出愈伤组织；愈伤组织的诱导率为97%。
2、将分化出的愈伤组织接种至不定根不定芽分化培养基（MS基本培养基+ 0.5mg/L TDZ +1.5mg/L NAA +2.5mg/L 6-BA + 30g/L蔗糖 +3g/L Sigma Phytagel，pH=5.8）中，于30℃温度、60%湿度下每天在光照照度为12000Lx下培养16h，暗培养8h，培养至分化出不定根不定芽点，期间每14d更换一次新鲜培养基；不定根不定芽的分化率为99%。
3、将愈伤组织分化的不定根不定芽点接种至添加了 2.5mg/L 6-BA和1mg/L NAA的MS基本培养基上，在与步骤2相同的培养条件下培养至长出叶片，即完成整个离体再生过程。
实施例5
与实施例1相同，不同在于：愈伤组织诱导培养基为MS基本培养基+ 0.3mg/L 2,4-D + 1.5mg/L 6-BA+ 30g/L蔗糖 + 3g/L Sigma Phytagel，pH=5.85。
不定根不定芽分化培养基为MS基本培养基+ 1.5mg/L TDZ +1mg/L NAA +1.5mg/L6-BA + 30g/L蔗糖 +3g/L Sigma Phytagel，pH=5.85。
生叶培养基为添加了 1.5mg/L 6-BA和0.5mg/L NAA的MS基本培养基。
实施例5愈伤组织的诱导率为96%，不定根不定芽的分化率为99%。
实施例6
与实施例1相同，不同在于：愈伤组织诱导培养基为MS基本培养基+ 0.3mg/L 2,4-D + 1.5mg/L 6-BA+ 30g/L蔗糖 + 3g/L Sigma Phytagel，pH=5.85。
不定根不定芽分化培养基为MS基本培养基+ 1.5mg/L TDZ +0.5mg/L NAA +2.5mg/L 6-BA + 30g/L蔗糖 +3g/L Sigma Phytagel，pH=5.85。
生叶培养基为添加了 2.5mg/L 6-BA和0.5mg/L NAA的MS基本培养基。
实施例6愈伤组织的诱导率为97%，不定根不定芽的分化率为98%。
实施例1-6方法马来良姜根部的愈伤组织的诱导率达97%，不定根不定芽的分化率为98%-100%，成苗率为100%。
Claims (2)
1.一种马来良姜离体再生的方法，其特征在于，按以下步骤实现：
1）在超净工作台取马来良姜35-45d苗龄无菌组培苗的根段，将其剪成0.5-1cm长度的小段，接种至愈伤组织诱导培养基上，于28-30℃温度、60%-70%湿度下暗培养直至分化出愈伤组织，期间每13-15d更换一次培养基直至分化出愈伤组织；所述愈伤组织诱导培养基为：MS基本培养基+ 0.1-0.4mg/L 2,4-D + 0.5-1.5mg/L 6-BA+ 30g/L蔗糖 + 3g/L SigmaPhytagel，pH=5.8-5.85；
2）将分化出的愈伤组织接种至不定根不定芽分化培养基中，于28-30℃温度、60%-70%湿度下每天光照培养16-18h，暗培养6-8h，培养120d-150d直至分化出不定根不定芽点，期间每13-15d更换一次新鲜培养基；所述不定根不定芽分化培养基为：MS基本培养基+ 0.5-1.5mg/L TDZ +0.5-1.5mg/L NAA +1.5-2.5mg/L 6-BA + 30g/L蔗糖 + 3g/L SigmaPhytagel，pH=5.8-5.85；
3）将愈伤组织分化的不定根不定芽点接种至添加了 1.5-2.5mg/L 6-BA和0.5-1mg/LNAA的MS基本培养基上，在与步骤2）相同的培养条件下培养至长出叶片，即完成整个离体再生过程。
2.根据权利要求1所述马来良姜离体再生的方法，其特征在于，步骤2）中，光照照度为11000-13000Lx。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310410663.XA CN116472960B (zh) | 2023-04-18 | 2023-04-18 | 一种马来良姜离体再生的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310410663.XA CN116472960B (zh) | 2023-04-18 | 2023-04-18 | 一种马来良姜离体再生的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116472960A CN116472960A (zh) | 2023-07-25 |
| CN116472960B true CN116472960B (zh) | 2024-01-26 |
Family
ID=87224514
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310410663.XA Active CN116472960B (zh) | 2023-04-18 | 2023-04-18 | 一种马来良姜离体再生的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116472960B (zh) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105409768A (zh) * | 2015-11-11 | 2016-03-23 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 花叶良姜愈伤再生体系建立的方法 |
-
2023
- 2023-04-18 CN CN202310410663.XA patent/CN116472960B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105409768A (zh) * | 2015-11-11 | 2016-03-23 | 广西壮族自治区林业科学研究院 | 花叶良姜愈伤再生体系建立的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 基于组织培养技术的马来良姜快繁体系构建;卢宪雯;《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）农业科技辑》(第3期);D047-191 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN116472960A (zh) | 2023-07-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Fracaro et al. | Micropropagation of Cunila galioides, a popular medicinal plant of south Brazil | |
| CN109479715B (zh) | 利用组培苗叶片快速繁育大花绣球无尽夏的方法 | |
| Sengupta et al. | Organogenesis and tuberization in cultures of Dioscorea floribunda | |
| Gharyal et al. | Differentiation in explants from mature leguminous trees | |
| CN108029559B (zh) | 一种快速培育落叶冬青组培苗的方法 | |
| CN111084104B (zh) | 一种橙心姜花快速扩繁的方法 | |
| CN112753582B (zh) | 一种千年桐茎段消毒和快速增殖的方法 | |
| CN110583488A (zh) | 石蒜属新品种‘桃红’组培快繁技术体系的建立方法 | |
| CN109169287A (zh) | 一种基于愈伤组织分化的新疆野苹果再生体系建立的方法 | |
| CN116472960B (zh) | 一种马来良姜离体再生的方法 | |
| WO1981003255A1 (en) | Aseptic serial propagation of above ground portion of plants | |
| CN106258976B (zh) | 一种芥菜型油菜的组织培养快速育苗方法 | |
| CN112425506A (zh) | 一种黄金艾草的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN116267620A (zh) | 一种利用苍术叶柄进行愈伤组织诱导及不定芽再生体系建立的方法 | |
| Sehgal et al. | Morphogenesis and plant regeneration from cultured endosperm of Emblica officinalis Gaertn | |
| Maity et al. | Rapid and large scale micropropagation of true to type clone of Mentha arvensis Linn.(Lamiaceae)-A valuable medicinal plant | |
| CN116019013A (zh) | 一种三角梅快速繁育的方法 | |
| CN112616675B (zh) | 一种舞花姜组织培养快速繁殖方法 | |
| CN110024694B (zh) | 一种快速诱导花生幼叶再分化形成不定芽的方法 | |
| CN112042532B (zh) | 一种诱导彩色马蹄莲产生愈伤组织的培养基及其在建立彩色马蹄莲再生体系中的应用 | |
| CN108575751B (zh) | 棉花胚性愈伤组织与胚状体的培养方法 | |
| CN102090333B (zh) | 一串红植株的再生方法 | |
| CN101248760A (zh) | 一种延胡索块茎的培植法 | |
| CN116472963B (zh) | 一种宜昌荚蒾叶片诱导愈伤组织及快繁体系建立的方法 | |
| CN115176704B (zh) | 一种组培杨树品种‘森海2号’的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |