CN116380881A - 用于光激化学检测的试剂容置盒、试剂盒及其使用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用于光激化学检测的试剂容置盒、试剂盒及其使用方法。试剂容置盒，包括：盒体；间隔设置于所述盒体上的加样槽和测试槽，所述加样槽用于容置待测试样品溶液；联通于所述加样槽和所述测试槽之间的通道，所述通道用于容置反应干试剂；与所述通道联通的试剂添加口，以及用于封堵所述加样口的堵头，所述试剂添加口用于添加所述反应干试剂；其中，所述试剂容置盒被使用时，所述待测试样品溶液从所述加样槽流经所述通道并与所述干试剂反应最终停留于所述测试槽中进行测试。

Description

用于光激化学检测的试剂容置盒、试剂盒及其使用方法
技术领域
本发明涉及一种用于光激化学检测的试剂容置盒、试剂盒及其使用方法。
背景技术
光激化学发光（Light Initiated Chemiluminescent Assay）是一种均相免疫检测技术，该技术主要依托供体微球与受体微球两种纳米聚合物微球实现检测。两种微球表面修饰的抗体与待测物发生抗原抗体结合反应，形成免疫复合物。复合物经680nm红色激发光照射后，复合物中的供体微球激发氧分子产生的单线态氧，单线态氧扩散至受体微球，结合受体微球的化学发光试剂捕获单线态氧后可产生520-618nm光信号，光信号的强度与检测物的浓度高度相关。由于单线态氧活性高、半衰期短，只有当供体微球和受体微球距离足够接近（免疫复合物直径小于200nm）的情况下，供体微球释放的单线态氧才能有效地到达受体微球，从而产生光化学反应。当体系中不存在待测物时，即不形成免疫复合物，游离供体微球产生的单线态氧快速在体系中耗散，受体微球中的发光试剂几乎不产生光信号。由于光激化学发光技术具有高灵敏度，宽检测范围、低噪音背景、免洗操作节省时间、不易受PH值及离子强度和温度的影响等特点，该技术可用在临床免疫的各项检测、新药的筛选、生命科学的基础研究等各领域。
光激化学发光技术应用于POCT有着较明显的优势，相较于传统的侧向免疫荧光层析技术，光激化学发光具有更高的检测精度；与传统的化学发光免疫技术相比，由于光激化学发光不需要清洗步骤，可明显的缩短检测时间。用于POCT检测的样本多数来源为全血样本，由于光激化学发光的激发光采用680nm 的红色光，全血样本中的红细胞对激发光有着明显的散射效应，影响测试准确度，因此，光激化学应用POCT测试全血样本有其局限性。
发明内容
本发明提供了一种用于光激化学检测的试剂容置盒、试剂盒及其使用方法，可以有效解决上述问题。
本发明是这样实现的：
本发明进一步提供一种用于光激化学检测的试剂容置盒，包括
盒体；
间隔设置于所述盒体上的加样槽和测试槽，所述加样槽用于容置待测试样品溶液；
联通于所述加样槽和所述测试槽之间的通道，所述通道用于容置反应干试剂；
与所述通道联通的加样口，以及用于封堵所述加样口的堵头，所述加样口用于添加所述反应干试剂；
其中，所述试剂容置盒被使用时，所述待测试样品溶液从所述加样槽流经所述通道并与所述干试剂反应最终停留于所述测试槽中进行测试。
本发明进一步提供一种用于光激化学检测的试剂盒，包括：
上述的试剂容置盒；以及
容置于所述试剂容置盒中通道的反应干试剂。
本发明进一步提供一种上述的试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
S1，将全血样本倒入加样槽中，并加入血红细胞凝集稀释液使所述全血反应样本中的血红细胞凝集并沉淀；
S2，将所述测试槽顶部接负压，使所述全血反应样本的上清液流经所述通道并与所述反应干试剂反应形成测试液，使所述测试液最终停留于所述测试槽；
S3，对所述测试液进行测试。
本发明的有益效果是：用于光激化学检测的试剂容置盒、试剂盒及其使用方法，能快速滤除全血样本中红细胞，消除红细胞对测试结果的影响，同时该装置能有效的控制反应样本的体积及控制反应样本与反应试剂接触时间，使得测试结果更精准，能有效发挥光激化学发光用于POCT项目检测的优势。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施方式的技术方案，下面将对实施方式中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1是本发明实施例提供的用于光激化学检测的试剂容置盒的结构示意图。
图2是本发明实施例提供的用于光激化学检测的试剂盒的结构示意图。
图3是本发明实施例提供的用于光激化学检测的试剂盒的使用方法流程图。
图4是本发明实施例提供的用于光激化学检测的试剂盒中测试TSH的精密度检测时的数据拟合图。
图5是本发明实施例提供的用于光激化学检测的试剂盒中测试FT3的精密度检测时的数据拟合图。
图6是本发明另一实施例提供的用于光激化学检测的试剂盒中测试FT3的精密度检测时的数据拟合图。
具体实施方式
为使本发明实施方式的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明实施方式中的附图，对本发明实施方式中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施方式是本发明一部分实施方式，而不是全部的实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。因此，以下对在附图中提供的本发明的实施方式的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施方式。基于本发明中的实施方式，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施方式，都属于本发明保护的范围。
在本发明的描述中，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括一个或者更多个该特征。在本发明的描述中，“多个”的含义是两个或两个以上，除非另有明确具体的限定。
参照图1所示，本发明实施例提供一种用于光激化学检测的试剂容置盒，包括
盒体10；
间隔设置于所述盒体10上的加样槽11和测试槽15，所述加样槽11用于容置待测试样品溶液；
联通于所述加样槽11和所述测试槽15之间的通道12，所述通道12用于容置反应干试剂17；
与所述通道12联通的试剂添加口 13，以及用于封堵所述试剂添加口 13的堵头4，所述试剂添加口 13用于添加所述反应干试剂17；
其中，所述试剂容置盒被使用时，所述待测试样品溶液从所述加样槽11流经所述通道12并与所述干试剂反应最终停留于所述测试槽15中进行测试。
作为进一步改进的，在其他实施例中，所述加样槽11的底部还进一步包括多个形成容置固形物的微槽110。所述微槽110的数量不限，可以根据实际需要选择。通过所述微槽110的设置，可以使待测试样品溶液中的固定物沉积于所述微槽110中，从而防止待测试样品溶液中的固定物对后续的激光化学测试，产生影响。
作为进一步改进的，在其他实施例中，所述通道12与所述加样槽11联通的一端设置在所述加样槽11的中部；所述通道12与所述测试槽15联通的另一端也设置在所述测试槽15的中部。这样设置的好处是，后续在对所述测试槽15施加负压，使待测试样品溶液从所述加样槽11流经所述通道12并与所述干试剂反应最终停留于所述测试槽15中时，使待测试样品溶液中的固定物不会被吸引到所述测试槽15中。
作为进一步改进的，在其他实施例中，定义所述加样槽11和所述试剂添加口 13之间的通道12为第一孔道120；定所述测试槽15和所述试剂添加口13之间的通道12为第二孔道122，其中，所述第二孔道122用于容置所述反应干试剂17。作为进一步改进的，所述第二孔道122靠近所述测试槽15的一端的直径小于所述反应干试剂的粒径，从而使所述反应干试剂17可以保存在第二孔道122中。
作为进一步改进的，在其他实施例中，所述第二孔道122对应所述试剂添加口 13的位置设置有倾斜面124，所述倾斜面124朝向所述测试槽15设置。这样的好处是：当所述反应干试剂17通过所述试剂添加口 13添加试剂时，可顺利通过倾斜面124的阻挡从而进入到所述第二孔道122中。
作为进一步改进的，在其他实施例中，所述试剂容置盒还可以进一步包括：向外延伸的手持部16，从而使所述试剂容置盒方便手持使用。
请参见图2，本发明实施例还进一步提供一种用于光激化学检测的试剂盒，包括：
上述的试剂容置盒；以及
容置于所述试剂容置盒中通道12的反应干试剂17。所述反应干试剂为光激化学发光测试试剂。具体的，在其中一个实施例中，所述光激化学发光测试试剂分别为标记有抗原抗体的受体微球的干试剂R3溶液、生物素标记的抗原抗体的干试剂R1溶液、标记有链霉亲和素标记的供体微球的干试剂R2溶液制备而成的干试剂。在其中一个实施例中，所述光激化学发光测试试剂分别为由抗T3抗体包被的受体微球溶液、生物素标BSA标记的T3抗原溶液、亲和素包被的供体微球溶液制备而成的干试剂。
所述TSH干试剂的制备方法包括以下步骤：
1.1标记有抗原抗体的受体微球的干试剂R3溶液的制备
将200μL浓度为10mg/mL受体微球混悬液去除上清液，加入两倍体积的pH5.0 MES缓冲液清洗两遍，加入400μL的pH5.0 MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I，向初级微球混悬液I中分别加入100μg抗TSH抗体、4μL 10mg/mL的EDC-DMSO，混匀，在30 ℃摇床下震荡2 h，反应结束后加入20μL100mg/mL牛血清白蛋白和2μL乙醇胺，混匀，置于30℃摇床上封闭30min，于14000rpm转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积0.05M、pH=7.4的Tris缓冲液清洗两遍，使用Tris缓冲液稀释至工作浓度为0.5mg/mL。
1.2 生物素标记的抗原抗体的干试剂R1溶液的制备
将100μg的抗体和3.8μg的sigma长链生物素加入到100μL，pH7.4，0.01M的PBS缓冲液中，于25℃下震荡2h，反应后加入2μL 100mg/mL甘氨酸，于25℃下震荡封闭30min。生物素标记抗TSH抗体溶液在pH7.4，0.01M的PB缓冲液中透析24h，使用0.25M、pH=7.4Tris缓冲液稀释至工作浓度为5.0μg/mL。
1.3标记有链霉亲和素标记的供体微球的干试剂R2溶液的制备
将200μL浓度为10mg/mL供体微球混悬液去除上清液，加入两倍体积的pH5.0 MES缓冲液清洗两遍，加入400μL的pH5.0 MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I，向初级微球混悬液I中分别加入100μg亲和素、4μL10mg/mL的EDC-DMSO，混匀，在30 ℃摇床下震荡2h，反应结束后加入20μL 100mg/mL牛血清白蛋白和2μL乙醇胺，混匀，置于30℃摇床上封闭30min，于14000rpm转速下离心15min，去除上清液，使用0.25M、pH=7.4Tris缓冲液稀释至工作浓度为0.25mg/mL。
1.4液氮冷冻小球制备
将滴珠机出液体积大小调整至10μL，抗TSH抗体标记的受体微球溶液、生物素标记抗TSH抗体溶液、亲和素标记的供体微球溶液经滴珠机呈小液滴滴落，滴落的液滴经液氮冷冻后呈小球状。
1.5干燥
将液氮冷冻小球转移至已预冻至-40℃的冻干机，后进行冷冻干燥。干燥结束后，3种冻干第一微球分别取1颗分装至快速分离血红细胞的装置的联通孔道中，分装结束对试剂盒进行封口，并将试剂盒放入装有干燥剂的密封袋密封。
1.6检测
1.6.1精密度
取5个已知浓度的TSH抗原定标品10μL，150μL的稀释液，加入快速分离血红细胞的装置的加样孔道中，采用发光仪进行读数，每个定标品重复20次，计算各浓度定标品精密度如下表2所示：
表2为各浓度定标品精密度
Figure SMS_1
1.6.2相关性
选择已经得到医疗结构认可使用的产品(罗氏促甲状腺激素检测试剂盒(电化学发光法))用于比对。测试时本产品取全血样本20μL，150μL的稀释液，加入快速分离血红细胞的装置的加样孔道中，采用发光仪进行读数，比对产品采用血清样本，按照其说明书设置参数进行测试。根据测试结果，以比对系统对照组数据为x，以专利系统数据为y, 数据拟合结果如下图4所示。
图4中线性分析结果：拟合线性方程为y=0.9401x+0.5651，线性相关系数R²=0.9844，即r=0.9922。采用快速分离血红细胞的装置进行检测全血样本中的TSH与罗氏产品检测血清中的TSH测试结果比对，线性相关系数r=0.9922，故本装置在保证其性能的前提下，可直接进行全血样本检测，在保证其准确性的同时提升了操作的简便性。
所述FT3干试剂的制备方法包括以下步骤：
2.1 抗T3抗体包被的受体微球溶液制备
将200μL浓度为10mg/mL受体微球混悬液去除上清液，加入两倍体积的pH5.0 MES缓冲液清洗两遍，加入400μL的pH5.0 MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I，向初级微球混悬液I中分别加入100μL T3抗体、4μL10mg/mL的EDC-DMSO，混匀，在30 ℃摇床下震荡2h，反应结束后加入20μL 100mg/mL牛血清白蛋白和2μL乙醇胺，混匀，置于30℃摇床上封闭30min，于14000rpm转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积0.05M、pH7.4的Tris缓冲液清洗两遍，使用Tris缓冲液稀释至工作浓度为0.5mg/mL。
2.2 生物素标BSA标记的T3抗原溶液制备
将100μg的BSA标记的T3抗原和3.78μg的sigma长链生物素加入到100μL，pH7.4，0.01M的PBS缓冲液中，于25℃下震荡2h，反应后加入2μL100mg/mL甘氨酸，于25℃下震荡封闭30min。生物素标记BSA标记的T3抗原溶液在pH7.4，0.01M的PB缓冲液中透析24h，使用0.25M、pH=7.4的Tris缓冲液稀释至工作浓度为5.0μg/mL。
2.3亲和素包被的供体微球溶液制备
将200μL浓度为10mg/mL供体微球混悬液去除上清液，加入两倍体积的pH5.0 MES缓冲液清洗两遍，加入400μL的pH5.0 MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I，向初级微球混悬液I中分别加入100μg亲和素、4μL10mg/mL的EDC-DMSO，混匀，在30 ℃摇床下震荡2h，反应结束后加入20μL 100mg/mL牛血清白蛋白和2μL乙醇胺，混匀，置于30℃摇床上封闭30min，于14000rpm转速下离心15min，去除上清液，加入两倍体积0.05M、pH=7.4的Tris缓冲液清洗两遍。使用0.25M、pH=7.4的Tris缓冲液稀释至工作浓度为0.25mg/mL。
2.4液氮冷冻小球制备
将滴珠机出液体积大小调整至10μL，抗T3抗体包被的受体微球溶液、生物素标BSA标记的T3抗原溶液、亲和素包被的供体微球溶液经滴珠机呈小液滴滴落，滴落的液滴经液氮冷冻后呈小球状。
2.5干燥
将液氮冷冻小球转移至已预冻至-40℃的冻干机，后进行冷冻干燥，得到第二微球三种。干燥结束后，采用两种放置方式进行：
方式1：3种第二微球分别取1颗分装至试剂容置盒的通道12中；
方式2：包被有抗T3抗体的受体微球冻干小球分装至加样槽11中，生物素标记的BSA标记的T3抗原冻干小球、包被有亲和素的供体微球冻干小球分装至试剂容置盒的通道12中；
分装结束进行封口，并将试剂盒放入装有干燥剂的密封袋密封。
2.6检测
2.6.1精密度
取5个已知浓度的T3抗原定标品10μL，150μL的稀释液，加入两种放置方式的快速分离血红细胞的装置的加样孔道中，采用发光仪进行读数，每个定标品重复20次，计算各浓度定标品精密度如下表3：
表3为各浓度定标品精密度
Figure SMS_2
2.6.2相关性
选择已经得到医疗结构认可使用的产品(罗氏游离三碘甲状腺原氨酸检测试剂盒(电化学发光法))用于比对。测试时本产品取全血样本20μL，150μL的稀释液，加入两种放置方式的快速分离血红细胞的装置的加样孔道中，采用发光仪进行读数，比对产品采用血清样本，按照其说明书设置参数进行测试。
根据测试结果，以比对系统对照组数据为x，以方式1放置方式的专利系统数据为y1,数据拟合结果如下图5所示。图5中线性分析结果：拟合线性方程为y1=1.0064x+0.0473，线性相关系数R²=0.8896，即r=0.9432。
根据测试结果，以比对系统对照组数据为x，以方式2放置方式的专利系统数据为y2,数据拟合结果如下图6所示：
图6中线性分析结果：拟合线性方程为y2=0.9698x+0.1082，线性相关系数R²=0.9875，即r=0.9937。
采用方式1放置方式的快速分离血红细胞的装置进行检测全血样本中的FT3与罗氏产品检测血清中的FT3测试结果比对，线性相关系数r=0.9432，其相关性明显差于采用方式2放置方式的快速分离血红细胞的装置进行检测全血样本中的FT3与罗氏产品检测血清中的FT3测试结果比对(线性相关系数r=0.9937)。
方式1放置方式使得反应按照一步法进行，方式2的放置方式使得测试样本能够与抗体组分先反应，实现反应两步法进行，使得其准确性明显提升，且整个流程由测试仪器完成，能有效减少误差，提高检测的精密度并能缩短检测时间，故本装置在保证其性能的前提下，不但可直接进行全血样本检测，还可实现分步骤反应，提升其精密度、简便性、快速性。
进一步的，光激化学发光测试试剂主要由标记供体微球及标记受体微球组成，由于标记供体微球对环境光比较敏感，所以测试过程中应该尽量避免测试试剂暴露在环境光中。本发明试剂盒能对测试试剂提供较好的保护，本发明试剂盒中的通道12中可存放反应干试剂，该通道12两端开口分别在加样槽11和测试槽15壁上，在使用测试过程中，加样槽11和测试槽15直接暴露在环境光中，而环境光接触不到通道12中的标记供体微球，从而能保证使用过程中的环境光对标记供体微球的影响降到最低。
请参见图3-5所示，本发明实施例还进一步提供一种上述的试剂盒的使用方法，包括以下步骤：
S1，将全血反应样本18倒入加样槽11中，并加入血红细胞凝集稀释液19使所述全血反应样本18中的血红细胞20凝集并沉淀；
S2，将所述测试槽15顶部接负压，使所述全血反应样本的上清液流经所述通道12并与所述反应干试剂17反应形成测试液21，使所述测试液21最终停留于所述测试槽15；
S3，对所述测试液21进行测试
在步骤S1中，所述血红细胞凝集稀释液19的作用是能快速凝集红细胞，对红细胞凝集稀释液中的红细胞抗体浓度、全血样本与红细胞凝集稀释液比例进行测试。红细胞抗体用0.9% 生理盐水稀释，稀释浓度梯度为30ug/mL、60ug/mL、90ug/mL、120ug/mL、150ug/mL、180ug/mL、220ug/mL。抗体稀释液与全血样本体积比例梯度为：1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1。分别记录不同抗体稀释液浓度及不同比例的红细胞凝集并沉淀时间。数据见表1 所示：
表1为不同抗体稀释液浓度及不同比例的红细胞凝集并沉淀时间
Figure SMS_3
由上表实验数据表明，全血样本需要用红细胞凝集稀释液19稀释到一定的比例，血红细胞凝集并沉淀 效应才能有效的显现。当红细胞凝集稀释液17中抗体稀释液浓度大于150ug/mL、红细胞凝集稀释液与全血样本体积比大于7时，血红细胞能较快速的凝集并沉淀。因此综合红细胞凝集时间及成本考虑，优选选择抗体稀释液浓度150ug/mL、抗体稀释液与全血样本的稀释比例为7。优选的，红细胞凝集稀释液与全血样本按照体积比3:1-7:1的比例进行混合后，红细胞凝集稀释液中的红细胞抗体可快速凝集血红细胞，凝集的红细胞在2-5分钟内可快速的沉淀。
在其他实施例中，能和血红细胞产生凝集反应的活性物质还有植物血球凝集素。植物血球凝集素浓度范围2ug/mL-10ug/mL。红细胞抗体浓度范围30-100ug/mL。
本发明的试剂盒由于是采用红细胞凝集重力去除法，不需要滤血膜，可避免滤血膜对待测物的吸附效应，从而可以为定量检测提供良好基础。
在步骤S2中，加入血红细胞凝集稀释液19使所述全血反应样本18中的血红细胞20凝集并沉淀后，所述加样槽11的液面与所述通道12中的开口处保持一定的高度，不同测试项目所要求的样本体积确定后，液面距通道12开口处的高度能保持一致。从而，在所述测试槽15顶部接负压时，加样槽11的样本通过通道12进入测试槽15，加样槽11的样本液面逐渐下降，待液面下降到与通道12开口处齐平时，通道12与外界大气联通，此时加样槽11中的样本不再被负压抽吸进入通道12，从而保证不同的项目对于样本量的体积控制的要求。
在步骤S3中，将所述试剂盒进行光激化学发光检测。如，血清游离三碘甲腺原氨酸(FT3),孕酮（Prog），雌二醇（E2)检测。
在检测血清游离三碘甲腺原氨酸 (FT3),孕酮（Prog），雌二醇（E2)等小分子抗原的免疫学方法中，为保证测试准确度，多采用二步竞争法检测。既先加入待测抗原结合抗体进行抗原抗体反应，待反应一段时间后，再加入竞争性标记竞争性抗体。本发明的试剂盒及测试流程也可用于两步温育法测试小分子抗原。第一步往加样槽11加入待测试样本，加样孔中的抗体试剂溶解形成抗原抗体反应液，并进行反应抗原抗体反应。第二步，待第一步反应一段时间，对反应孔进行负压抽吸，加样槽11中的反应液通过通道12并溶解联通孔道中的其含有竞争性抗原的试剂组分进入反应孔中进一步进行抗原的竞争反应。本发明的两步法测试小分子抗原过程中，由于相关试剂已经预装载入到通道12中，不需要在两步法测试过程中分步添加试剂，整个流程可由测试仪器完成，能有效减少人为操作误差，提高检测的精密度并能缩短检测时间。
以上所述仅为本发明的优选实施方式而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种用于光激化学检测的试剂容置盒，其特征在于，包括
盒体（10）；
间隔设置于所述盒体（10）上的加样槽（11）和测试槽（15），所述加样槽（11）用于容置待测试样品溶液；
联通于所述加样槽（11）和所述测试槽（15）之间的通道（12），所述通道（12）用于容置反应干试剂；
与所述通道（12）联通的试剂添加口（13），以及用于封堵所述试剂添加口（13）的堵头（4），所述试剂添加口（13）用于添加所述反应干试剂；
其中，所述试剂容置盒被使用时，所述待测试样品溶液从所述加样槽（11）流经所述通道（12）并与所述干试剂反应最终停留于所述测试槽（15）中进行测试。
2.如权利要求1所述的用于光激化学检测的试剂容置盒，其特征在于，所述通道（12）与所述加样槽（11）联通的一端设置在所述加样槽（11）的中部；所述通道（12）与所述测试槽（15）联通的另一端也设置在所述测试槽（15）的中部。
3.如权利要求1所述的用于光激化学检测的试剂容置盒，其特征在于，所述加样槽（11）的底部形成容置固形物的微槽（110）。
4.如权利要求1所述的用于光激化学检测的试剂容置盒，其特征在于，定义所述加样槽（11）和所述试剂添加口（13）之间的通道（12）为第一孔道（120）；定所述测试槽（15）和所述试剂添加口（13）之间的通道（12）为第二孔道（122），其中，所述第二孔道（122）用于容置所述反应干试剂。
5.如权利要求4所述的用于光激化学检测的试剂容置盒，其特征在于，所述第二孔道（122）靠近所述测试槽（15）的一端的直径小于所述干试剂的粒径，从而使所述反应干试剂保存在所述第二孔道（122）中。
6.如权利要求1所述的用于光激化学检测的试剂容置盒，其特征在于，所述第二孔道（122）对应所述试剂添加口（13）的位置设置有倾斜面（124），所述倾斜面（124）朝向所述测试槽（15）设置。
7.一种用于光激化学检测的试剂盒，其特征在于，包括：
如权利要求1-6任一项所述的试剂容置盒；以及
容置于所述试剂容置盒中通道（12）的反应干试剂。
8.如权利要求7所述的用于光激化学检测的试剂盒，其特征在于，所述反应干试剂为光激化学发光测试试剂。
9.如权利要求8所述的用于光激化学检测的试剂盒，其特征在于，所述光激化学发光测试试剂为：生物素标记的抗原抗体的干试剂R1、标记有链霉亲和素标记的供体微球的干试剂R2、标记有抗原抗体的受体微球的干试剂R3。
10.一种如权利要求7-9任一项所述的试剂盒的使用方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1，将全血反应样本倒入加样槽（11）中，并加入血红细胞凝集稀释液使所述全血反应样本中的血红细胞凝集并沉淀；
S2，将所述测试槽（15）顶部接负压，使所述全血反应样本的上清液流经所述通道（12）并溶解与所述反应干试剂形成测试液，使所述测试液最终停留于所述测试槽（15）；
S3，对所述测试液进行测试。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117269513A (zh) * 2023-09-22 2023-12-22 厦门宝太和瑞生物技术有限公司 一种孕酮检测试剂盒、制备及应用方法
CN118111976A (zh) * 2023-12-29 2024-05-31 厦门宝太和瑞生物技术有限公司 C反应蛋白均相化学发光检测试剂盒及其制备方法和应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150285793A1 (en) * 2008-10-17 2015-10-08 Medmira, Inc. Downward or vertical flow diagnostic device and assay
CN110736739A (zh) * 2018-07-18 2020-01-31 博阳生物科技（上海）有限公司 一种均相化学发光检测试剂盒及其应用
CN110857904A (zh) * 2018-08-22 2020-03-03 厦门大学 从全血样本中获取血浆的方法、滤血器及微流控芯片
CN112169853A (zh) * 2020-12-01 2021-01-05 南京岚煜生物科技有限公司 一种多功能微流控检测芯片
CN114002443A (zh) * 2021-11-03 2022-02-01 厦门宝太生物科技股份有限公司 可滤血色素冻干球均相发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN115436620A (zh) * 2022-11-10 2022-12-06 科美诊断技术股份有限公司 预存试剂检测卡、均相发光免疫检测试剂盒及其制备和使用方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20150285793A1 (en) * 2008-10-17 2015-10-08 Medmira, Inc. Downward or vertical flow diagnostic device and assay
CN110736739A (zh) * 2018-07-18 2020-01-31 博阳生物科技（上海）有限公司 一种均相化学发光检测试剂盒及其应用
CN110857904A (zh) * 2018-08-22 2020-03-03 厦门大学 从全血样本中获取血浆的方法、滤血器及微流控芯片
CN112169853A (zh) * 2020-12-01 2021-01-05 南京岚煜生物科技有限公司 一种多功能微流控检测芯片
CN114002443A (zh) * 2021-11-03 2022-02-01 厦门宝太生物科技股份有限公司 可滤血色素冻干球均相发光免疫检测试剂盒及其制备方法
CN115436620A (zh) * 2022-11-10 2022-12-06 科美诊断技术股份有限公司 预存试剂检测卡、均相发光免疫检测试剂盒及其制备和使用方法

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN117269513A (zh) * 2023-09-22 2023-12-22 厦门宝太和瑞生物技术有限公司 一种孕酮检测试剂盒、制备及应用方法
CN118111976A (zh) * 2023-12-29 2024-05-31 厦门宝太和瑞生物技术有限公司 C反应蛋白均相化学发光检测试剂盒及其制备方法和应用

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