CN116359371A - 一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法 - Google Patents
一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN116359371A CN116359371A CN202310145177.XA CN202310145177A CN116359371A CN 116359371 A CN116359371 A CN 116359371A CN 202310145177 A CN202310145177 A CN 202310145177A CN 116359371 A CN116359371 A CN 116359371A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- urea
- standard
- high performance
- performance liquid
- mobile phase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 81
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 title claims abstract description 81
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 30
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 title claims abstract description 18
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 20
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims abstract description 14
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical group CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 12
- 238000010812 external standard method Methods 0.000 claims abstract description 8
- 239000012535 impurity Substances 0.000 claims abstract description 8
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 claims abstract description 7
- REFMEZARFCPESH-UHFFFAOYSA-M sodium;heptane-1-sulfonate Chemical compound [Na+].CCCCCCCS([O-])(=O)=O REFMEZARFCPESH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 3
- 238000010606 normalization Methods 0.000 claims abstract description 3
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 21
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 claims description 12
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 9
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 5
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 3
- 238000009210 therapy by ultrasound Methods 0.000 claims description 3
- 239000000945 filler Substances 0.000 claims description 2
- 239000012085 test solution Substances 0.000 claims description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 3
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 6
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 5
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 3
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 2
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N methanol;hydrate Chemical compound O.OC GBMDVOWEEQVZKZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000005464 sample preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 125000005372 silanol group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/26—Conditioning of the fluid carrier; Flow patterns
- G01N30/28—Control of physical parameters of the fluid carrier
- G01N30/34—Control of physical parameters of the fluid carrier of fluid composition, e.g. gradient
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N2030/042—Standards
- G01N2030/047—Standards external
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本申请公开了一种高效液相色谱法(HPLC)测定尿素含量的方法，色谱条件为：色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB‑C18；流动相：流动相A与流动相B体积比为95:5；所述流动相A为含0.8g/L庚烷磺酸钠和体积百分比0.05％磷酸的水溶液，所述流动相B为乙腈；流速：0.8mL/min；柱温：35.0℃；检测波长：205nm。本发明通过优化色谱条件，利用高效液相色谱技术测定尿素含量，利用外标法或标准曲线法测定尿素含量，利用面积归一法测定杂质含量，各物质分离效果良好，此方法专属性强、稳定性好、精密度和准确度高，操作简便，适用于医药和农化行业下游产品的质量控制，可有效节约检测成本与检测时间。
Description
技术领域
本申请涉及化学分析技术领域，具体而言，涉及一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法。
背景技术
目前尿素的检测以总氮含量为标准，此方法操作繁琐且所得结果不能代表尿素的真实含量。液相色谱通常以不同比例的甲醇-水溶液或者乙腈-水溶液为流动相，而在此条件下尿素色谱峰形差，且尿素和杂质峰重叠、分离度差。另外，也有相关文献采用柱前衍生-液相色谱法或柱后衍生-液相色谱法来检测尿素含量，但上述方法存在一定的技术缺陷，例如，衍生剂适配难、尿素与衍生剂是否反应完全、检测器昂贵等。
尿素中存在杂质较多，对下游产品的质量影响较高。因此，如何提供一个既能简单、准确检测尿素真实含量，又能使杂质和尿素达到充分分离的一种检测方法是研发分析人员亟待解决的问题。
发明内容
本发明提供了一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法，色谱条件为：
色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18；
流动相：流动相A与流动相B体积比为95:5；所述流动相A为含0.8g/L庚烷磺酸钠和体积百分比0.05％磷酸的水溶液，所述流动相B为乙腈；
流速：0.8mL/min；
柱温：35.0℃；
检测波长：205nm。
所述色谱柱长度250mm，内径为4.6mm，填料粒径为5.0μm。
所述流动相A的配制方法如下：
每0.8000g庚烷磺酸钠加纯化水1000mL溶解，再加磷酸0.5mL混匀，用0.45μm滤膜滤过，超声3min。
进一步的，所述高效液相色谱法测定尿素含量的方法，包括如下步骤：
(1)配制流动相、尿素标准品溶液和供试品溶液；
(2)调节高效液相色谱仪条件，平衡色谱柱；
(3)将尿素标准品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积；
(4)采用外标法或标准曲线法计算尿素的含量；
将尿素标准品和供试品溶于水获得所述尿素标准品溶液和供试品溶液。
其中，采用外标法计算尿素含量时，尿素含量(％)＝(供试样峰面积×标样质量×标样含量)/(标样峰面积×供试样质量)×100％。
采用标准曲线法计算尿素含量时，以尿素标准品溶液的峰面积为纵坐标，以尿素标准品溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线，根据标准曲线计算供试品中尿素的含量。绘制标准曲线时，所述尿素标准品溶液的最低浓度不低于69μg/mL。
所述高效液相色谱法测定尿素含量的方法还可以包括利用面积归一法测定杂质含量。
本发明的有益效果包括：
本发明通过对流动相和色谱柱的改进，实现了采用液相色谱法直接、准确的检测尿素含量以及使尿素与杂质充分分离的技术效果。流动相的制备上加入庚烷磺酸钠能够改善峰形、增加保留；加入磷酸可以调节尿素和杂质的分离效果，防止出现峰拖尾。尿素属于弱碱性化合物，在色谱柱的选择上选用Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18，4.6×250mm，粒径5.0μm色谱柱，该色谱柱通过超密键合和双封端，可覆盖尽可能多的活性硅醇基，使尿素具有出色的峰形和保留。
附图说明
图1为本发明实施例获得的标准曲线；
图2为本发明实施例获得的检测限色谱图；
图3为本发明实施例获得的定量限色谱图；
图4为本发明实施例获得的标准品色谱图；
图5为本发明实施例获得的供试品色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行进一步说明和描述，但所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明和实施例中，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他发明和实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、一种高效快速测定复杂组份中尿素含量的色谱分析方法
包括以下操作步骤：
第一步、流动相溶液的制备
流动相A：精密称取庚烷磺酸钠(分析纯)0.8000g，加纯化水1000mL，搅拌溶解；加磷酸(分析纯)0.5mL，摇匀，用0.45μm滤膜滤过，超声3min；流动相B：乙腈(色谱纯)1000mL，用0.45μm滤膜滤过，超声3min。
第二步、标准品溶液的配制
精密称取尿素标准品0.1500g(±0.0002g)至100mL容量瓶中，加纯化水超声溶解，降至室温，加纯化水定容至刻度，摇匀得尿素标准品溶液。
第三步、供试品溶液的配制
精密称取尿素供试品0.1500g(±0.0002g)至100ml容量瓶中，加纯化水超声溶解，降至室温，加纯化水定容至刻度，摇匀得尿素供试品溶液。
第四步、HPLC色谱条件
色谱柱：安捷伦ZORBAX Eclipse XDB-C18，4.6×250mm，粒径5.0μm；
流动相：流动相A：流动相B(体积比)＝95:5；
流速：0.8mL/min；
柱温：35.0℃；
波长：205nm；
进样量：20μL。
第五步、外标法或标准曲线法计算尿素含量
采用外标法计算尿素含量时，尿素含量(％)＝(供试样峰面积×标样质量×标样含量)/(标样峰面积×供试样质量)×100％。
采用标准曲线法计算尿素含量时，以尿素标准品溶液的峰面积为纵坐标，以尿素标准品溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线，根据标准曲线计算供试品中尿素的含量。所述尿素标准品溶液的最低浓度不低于69μg/mL。
实施例2、本发明提供的色谱方法效果验证
1)检测限、定量限：检测限是方法和仪器灵敏度体现的重要指标之一，是指检出该物质的最低浓度；定量限体现了分析方法是否具备灵敏的定量检测能力，是指准确定量出该物质的最低浓度。实施例1中第一步配制的流动相按照第四步色谱条件用高效液相色谱仪(LC3000型)进行基线噪音监测，按照色谱条件进一针空白溶剂水，在主峰位置1-2min左右检测到最大基线噪音值为1.9mV。按照检测限为2～5倍的最大基线噪音值(信号值应在：3.8～9.5mV)，定量限为8～12倍的最大基线噪音值(信号值应在：15.2～22.8mV)进行检测限和定量限的浓度测定，以第二步配制的尿素标准品浓度进行稀释进样测定，信号值在要求范围内，最终测得尿素检测限浓度为23μg/mL(信号值6.37mV，色谱图见图2)；尿素定量限浓度为69μg/mL(信号值21.18mV，色谱图见图3)，尿素的定量限精密度RSD(相对标准偏差)值为1.8，详细数据见下表1。
表1尿素定量限精密度
2)线性：以步骤1)测定的尿素定量限浓度为起点，按下表2中所示浓度，总计设置5个浓度的尿素标准品样品，对这5个样品按照第四步色谱条件检测，峰面积如下表2所示。
表2尿素线性结果
| 浓度c(μg/mL) | 0.0 | 69.0 | 120.0 | 1500.0 | 2400.0 | 3000.0 |
| 峰面积(A) | 0.0 | 182265.2 | 306913.0 | 3089648.0 | 4831956.0 | 5880023.0 |
以尿素标准品浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，根据尿素标准品的检测结果绘制标准曲线(如图1所示)，得到标准曲线方程：
y＝1968.7x+55796，R2＝0.9994
由标准曲线方程可知R2＞0.999，符合线性要求。
3)可重复性检测：取第三步制备的供试品溶液，重复进样6针，按照第四步的色谱条件进行检测，测定尿素的可重复性，结果如下表3所示(其中一个标准品色谱图见图4、一个供试品色谱图见图5)，RSD值小于2％，符合药典规定，说明本申请采用高效液相色谱法测定尿素含量的方法可重复性良好。
表3可重复性检测结果
4)准确度：采用直接回收方式来验证准确度，要求回收率在95％～105％之间，RSD值小于2％。分别称取80％、100％和120％三个浓度的供试品各三份，按照实施例1中第三步样品配制方法进行配样，按照第四步色谱条件各进样一针，按照第五步外标法含量计算公式计算测得尿素含量，以可重复性测得结果96.48％为理论含量计算回收率，回收率＝测得含量/理论含量*100％。结果如下表4所示，回收率和RSD值符合要求。
表4准确度检测结果
Claims (8)
1.一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法，其特征在于，色谱条件为：
色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18；
流动相：流动相A与流动相B体积比为95:5；所述流动相A为含0.8g/L庚烷磺酸钠和体积百分比0.05％磷酸的水溶液，所述流动相B为乙腈；
流速：0.8mL/min；
柱温：35.0℃；
检测波长：205nm。
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定尿素含量的方法，其特征在于，所述色谱柱长度250mm，内径为4.6mm，填料粒径为5.0μm。
3.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定尿素含量的方法，其特征在于，所述流动相A的配制方法如下：
每0.8000g庚烷磺酸钠加纯化水1000mL溶解，再加磷酸0.5mL混匀，用0.45μm滤膜滤过，超声3min。
4.根据权利要求1-3任一项所述的高效液相色谱法测定尿素含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)配制流动相、尿素标准品溶液和供试品溶液；
(2)调节高效液相色谱仪条件，平衡色谱柱；
(3)将尿素标准品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积；
(4)采用外标法或标准曲线法计算尿素的含量；
将尿素标准品和供试品溶于水获得所述尿素标准品溶液和供试品溶液。
5.根据权利要求4所述的高效液相色谱法测定尿素含量的方法，其特征在于，采用外标法计算尿素含量时，尿素含量(％)＝(供试样峰面积×标样质量×标样含量)/(标样峰面积×供试样质量)×100％。
6.根据权利要求4所述的高效液相色谱法测定尿素含量的方法，其特征在于，采用标准曲线法计算尿素含量时，以尿素标准品溶液的峰面积为纵坐标，以尿素标准品溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线，根据标准曲线计算供试品中尿素的含量。
7.根据权利要求6所述的高效液相色谱法测定尿素含量的方法，其特征在于，绘制标准曲线时，所述尿素标准品溶液的最低浓度不低于69μg/mL。
8.根据权利要求4所述的高效液相色谱法测定尿素含量的方法，其特征在于，所述方法还包括利用面积归一法测定杂质含量。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310145177.XA CN116359371A (zh) | 2023-02-21 | 2023-02-21 | 一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202310145177.XA CN116359371A (zh) | 2023-02-21 | 2023-02-21 | 一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN116359371A true CN116359371A (zh) | 2023-06-30 |
Family
ID=86940268
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202310145177.XA Pending CN116359371A (zh) | 2023-02-21 | 2023-02-21 | 一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN116359371A (zh) |
-
2023
- 2023-02-21 CN CN202310145177.XA patent/CN116359371A/zh active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN115097023B (zh) | 佐米胺有关物质的高效液相色谱检测方法 | |
| CN111443151B (zh) | 复方氨基酸注射液中微量半胱氨酸含量的检测方法 | |
| CN113125611B (zh) | 叶酸中杂质6-甲酰蝶呤含量的检测方法 | |
| CN111965273B (zh) | 一种坎地沙坦酯中基因毒杂质的hplc法检测方法 | |
| CN111679010B (zh) | 瑞德西韦中间体gs-441524的高效液相色谱检测方法 | |
| CN113533578A (zh) | 一种盐酸溴己新片中有关物质的质量控制方法 | |
| CN110687223B (zh) | 一种丙戊酸钠原料乙酰乙酸甲酯的含量测定方法 | |
| CN114839287B (zh) | 一种米铂中十四烷酸钠的检测方法 | |
| CN101216468A (zh) | 2-甲氧甲基-4-氨基苯酚及其杂质的高效液相色谱分析方法 | |
| CN116359371A (zh) | 一种高效液相色谱法测定尿素含量的方法 | |
| CN111398442B (zh) | 一种检测盐酸溴己新吸入溶液中n-(2-硝基苄)–n-甲基环己胺的方法 | |
| CN107976489B (zh) | 一种测定普瑞巴林中残留吡啶的方法 | |
| CN116593603A (zh) | 一种高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法 | |
| CN116930368B (zh) | 一种司替戊醇异构体的检测方法 | |
| CN114200067B (zh) | 一种6-溴-3-羟基吡嗪-2-甲酰胺及杂质的高效液相色谱分析方法 | |
| CN117630202B (zh) | 盐酸丁螺环酮中间体杂质的检测方法 | |
| CN112557541B (zh) | 一种枸橼酸马罗匹坦及其有关物质的检测方法 | |
| CN115327003B (zh) | 一种氧化氯吡格雷有关物质的检测方法 | |
| CN111426762B (zh) | 一氨基胍硝酸盐和二氨基胍硝酸盐含量的测定方法 | |
| CN114200050B (zh) | 一种对溴苯甲醚中的有关物质含量的hplc检测方法 | |
| CN114113395B (zh) | 一种奥贝胆酸中对甲苯磺酸乙酯的检测方法 | |
| CN117538471A (zh) | 一种氨基三乙酸的检测方法 | |
| CN115656356A (zh) | 4-羟基-7-苯氧基异喹啉-3-甲酸甲酯及其有关物质的测定方法 | |
| CN117554549A (zh) | 一种同时检测盐酸达克罗宁残留甲酸和乙酸的方法 | |
| CN118209656A (zh) | 分离、测定糠酸莫米松起始原料sm及其有关物质的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |