CN116593603A - 一种高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，色谱柱为Shim‑pack GIS‑C18；流动相为己烷磺酸钠、氯化钠混合水溶液。本发明通过对流动相和色谱柱的改进，实现了采用液相色谱法直接、准确的检测双氰胺含量以及使双氰胺与杂质充分分离的技术效果。流动相的制备上加入已烷磺酸钠能够改善峰形、增加保留；氯化钠可以调节双氰胺和杂质的分离效果，防止出现峰拖尾。双氰胺属于弱碱性化合物，选用Shim‑pack GIS‑C18色谱柱通过超密键合和双封端，可覆盖尽可能多的活性硅醇基，使双氰胺具有出色的峰形和保留。
Description
技术领域
本申请涉及化学分析技术领域，具体而言，涉及一种高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法。
背景技术
双氰胺是一种化工原料,医药上主要用于生产“长效黄胺”,农业上用来作氮肥的增效制剂。作为原料主要用于生产胍胺、双缩胍、多重树脂、三聚氰胺、阻火剂等，在人造革中用作填料，在粘合剂中用作添加剂。医药工业用于制取硝酸胍、磺胺嘧啶、病毒灵等。双氰胺含量决定下游产品投料的比例及收率。目前双氰胺的检测以总氮含量为标准，此方法操作繁琐且耗时较长，要求具有良好的密封性，且所得结果不能代表双氰胺的真实含量。液相色谱法通常以不同比例的甲醇-水溶液或者乙腈-水溶液为流动相，而在此条件下双氰胺色谱峰形差，且双氰胺和杂质峰重叠、分离度差。另外，也有相关文献采用离子色谱或液相质谱法进行含量的测定，但是这些方法要么所用仪器价格昂贵，要么试剂耗材标准要求严格且仪器维护保养成本较高，不符合大化工检测要求。
另外，双氰胺中存在杂质较多，对下游产品的质量影响较高。因此，如何提供一个既能简单、准确检测双氰胺真实含量，又能使杂质和双氰胺达到充分分离的一种检测方法是研发分析人员亟待解决的问题。
发明内容
本发明提供了一种高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，其色谱条件为：色谱柱为Shim-pack GIS-C18；流动相为己烷磺酸钠、氯化钠混合水溶液。
具体的，所述流动相为含2.0g/L已烷磺酸钠和2.0g/L氯化钠混合水溶液；流速为1.0mL/min；柱温为室温；检测波长为218nm。
所述流动相的配制方法如下：
每2.0000g已烷磺酸钠、2.0000g氯化钠加纯化水1000mL溶解，用0.45μm滤膜滤过，超声5min。
所述色谱柱长度250mm，内径为4.6mm，填料粒径为5.0μm。
所述高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，包括如下步骤：
(1)配制流动相、双氰胺标准品溶液和供试品溶液；
(2)调节高效液相色谱仪条件，平衡色谱柱；
(3)将双氰胺标准品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积；
(4)采用外标法或标准曲线法计算双氰胺的含量。
采用外标法计算双氰胺含量时，双氰胺含量(％)＝(供试样峰面积×标样质量×标样含量)/(标样峰面积×供试样质量)×100％。
采用标准曲线法计算双氰胺含量时，以双氰胺标准品溶液的峰面积为纵坐标，以双氰胺标准品溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线，根据标准曲线计算供试品中双氰胺的含量。绘制标准曲线时，所述双氰胺标准品溶液的最低浓度不低于55μg/mL。
将双氰胺标准品和供试品溶于水获得所述双氰胺标准品溶液和供试品溶液。
所述方法还包括利用面积归一法测定杂质含量。
本发明的有益效果包括：
本发明通过对流动相和色谱柱的改进，实现了采用液相色谱法直接、准确的检测双氰胺含量以及使双氰胺与杂质充分分离的技术效果。流动相的制备上已烷磺酸钠能够改善峰形、增加保留；氯化钠可以调节双氰胺和杂质的分离效果，防止出现峰拖尾。双氰胺属于弱碱性化合物，选用Shim-pack GIS-C18色谱柱通过超密键合和双封端，可覆盖尽可能多的活性硅醇基，使双氰胺具有出色的峰形和保留。
附图说明
图1为本发明实施例2中获得的标准曲线；
图2为本发明实施例2中获得的检测限色谱图；
图3为本发明实施例2中获得的定量限色谱图；
图4为本发明实施例2中获得的标准品色谱图；
图5为本发明实施例2中获得的供试品色谱图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明进行进一步说明和描述，但所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明和实施例中，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他发明和实施例，都属于本发明保护的范围。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1、一种高效快速测定复杂组份中双氰胺含量的色谱分析方法
包括以下操作步骤：
1)流动相溶液的制备
流动相为含2.0g/L已烷磺酸钠和2.0g/L氯化钠混合水溶液，其配置方法如下：精密称取2.0g己烷磺酸钠、2.0g氯化钠溶于1000ml水中，用0.45um有机膜过滤，超声5min。
2)标准品溶液的配制
精密称取双氰胺标准品0.1000g(±0.0002g)至100mL容量瓶中，加纯化水超声溶解，降至室温，加纯化水定容至刻度，摇匀得双氰胺标准品溶液。
3)供试品溶液的配制
精密称取双氰胺供试品0.1000g(±0.0002g)至100ml容量瓶中，加纯化水超声溶解，降至室温，加纯化水定容至刻度，摇匀得双氰胺供试品溶液。
4)HPLC色谱条件
色谱柱：岛津Shim-pack GIS-C18，4.6×250mm，粒径5.0μm；
流动相：步骤1)制备的已烷磺酸钠、氯化钠混合水溶液；
流速：1.0mL/min；
柱温：室温；
波长：218nm；
进样量：10μL。
5)外标法或标准曲线法计算双氰胺含量
采用外标法计算双氰胺含量时，双氰胺含量(％)＝(供试样峰面积×标样质量×标样含量)/(标样峰面积×供试样质量)×100％。
采用标准曲线法计算双氰胺含量时，以双氰胺标准品溶液的峰面积为纵坐标，以双氰胺标准品溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线，根据标准曲线计算供试品中双氰胺的含量。所述双氰胺标准品溶液的最低浓度不低于55μg/mL。
实施例2、实施例1提供的色谱分析方法的效果验证
1)检测限、定量限
检测限是方法和仪器灵敏度体现的重要指标之一，是指检出该物质的最低浓度；定量限体现了分析方法是否具备灵敏的定量检测能力，是指准确定量出该物质的最低浓度。实施例1中步骤1)配制的流动相按照第四步色谱条件用高效液相色谱仪(LC3000型)进行基线噪音监测，按照色谱条件进一针空白溶剂水，在主峰位置1-2min左右检测到最大基线噪音值为0.036mV。按照检测限为2～5倍的最大基线噪音值(信号值应在：0.072～0.18mV)、定量限为8～12倍的最大基线噪音值(信号值应在：0.288～0.432mV)进行检测限和定量限的浓度测定，以实施例1中步骤2)配制的双氰胺标准品浓度进行稀释进样测定，信号值在要求范围内，最终测得双氰胺检测限浓度为4.4ng/mL(信号值0.178mV，色谱图见图2)；双氰胺定量限浓度为0.02μg/mL(信号值0.412mV，色谱图见图3)，双氰胺的定量限精密度RSD(相对标准偏差)值为0.19，详细数据见下表1。
表1双氰胺定量限精密度
2)线性：以本实施例中步骤1)测定的双氰胺定量限浓度为起点，按下表2中所示浓度，总计设置5个浓度的双氰胺标准品样品，对这5个样品按照实施例1步骤4)中色谱条件检测，峰面积如下表2所示。
表2双氰胺线性结果
| 浓度c(μg/mL) | 0 | 0.02 | 0.08 | 0.56 | 1.20 | 1.80 |
| 峰面积(A) | 0 | 2745 | 10362 | 75682 | 156892 | 246652 |
以双氰胺标准品浓度为横坐标、峰面积为纵坐标，根据双氰胺标准品的检测结果绘制标准曲线(如图1所示)，得到标准曲线方程：
y＝135554x-632.5，R2＝0.9992
由标准曲线方程可知R2＞0.999，符合线性要求。
3)可重复性检测：取实施例1中步骤3)制备的供试品溶液，重复进样6针，按照实施例1中步骤4)的色谱条件进行检测，测定双氰胺的可重复性，结果如下表3所示(其中一个标准品色谱图见图4、一个供试品色谱图见图5)，RSD值小于2％，符合药典规定，说明本发明采用高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法可重复性良好。
表3可重复性检测结果
4)准确度：采用直接回收方式来验证准确度，要求回收率在95％～105％之间，RSD值小于2％。分别称取0.0800g、0.1000g和0.1500g的供试品各三份，按照实施例1中步骤3)样品配制方法进行配样，按照实施例1中步骤4)色谱条件各进样一针，按照实施例1中步骤5)外标法含量计算公式计算测得双氰胺含量，以可重复性测得结果99.84％为理论含量计算回收率，回收率＝测得含量/理论含量*100％。结果如下表4所示，回收率和RSD值符合要求。
表4准确度检测结果
实施例3、实施例1提供的色谱分析方法中不同流动相效果验证
1)不同比例甲醇-水溶液为流动相：配制20％甲醇-水溶液、50％甲醇-水溶液、80％甲醇-水溶液为流动相，用0.45um滤膜过滤，超声脱气5min。
2)氯化钠水溶液作为流动相：称取2.0g氯化钠溶于1000mL水中，搅拌溶解，用0.45um滤膜过滤，超声脱气5min。
3)己烷磺酸钠和氯化钠混合水溶液作为流动相：分别称取2.0g已烷磺酸钠和2.0g氯化钠于1000mL水中，搅拌溶解，用0.45um滤膜过滤，超声脱气5min。
取实施例1中步骤3)制备的供试品溶液，分别以本实施例中步骤1)-3)的溶液作为流动相，按照实施例1中步骤4)的色谱条件进行检测，考察双氰胺保留时间、分离度及色谱峰的拖尾情况。结果如表5所示。
表5采用不同流动相检测结果
Claims (10)
1.一种高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，其特征在于，色谱条件为：
色谱柱为Shim-pack GIS-C18；流动相为己烷磺酸钠、氯化钠混合水溶液。
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，其特征在于所述流动相为含2.0g/L已烷磺酸钠和2.0g/L氯化钠混合水溶液；流速为1.0mL/min；柱温为室温；检测波长为218nm。
3.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，其特征在于，所述流动相的配制方法如下：
每2.0000g已烷磺酸钠、2.0000g氯化钠加纯化水1000mL溶解，用0.45μm滤膜滤过，超声5min。
4.根据权利要求1所述的高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，其特征在于，所述色谱柱长度250mm，内径为4.6mm，填料粒径为5.0μm。
5.根据权利要求1-4任一项所述的高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)配制流动相、双氰胺标准品溶液和供试品溶液；
(2)调节高效液相色谱仪条件，平衡色谱柱；
(3)将双氰胺标准品溶液和供试品溶液注入高效液相色谱仪，记录色谱图及峰面积；
(4)采用外标法或标准曲线法计算双氰胺的含量。
6.根据权利要求5所述的高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，其特征在于，采用外标法计算双氰胺含量时，双氰胺含量(％)＝(供试样峰面积×标样质量×标样含量)/(标样峰面积×供试样质量)×100％。
7.根据权利要求5所述的高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，其特征在于，采用标准曲线法计算双氰胺含量时，以双氰胺标准品溶液的峰面积为纵坐标，以双氰胺标准品溶液的浓度为横坐标绘制标准曲线，根据标准曲线计算供试品中双氰胺的含量。
8.根据权利要求7所述的高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，其特征在于，绘制标准曲线时，所述双氰胺标准品溶液的最低浓度不低于55μg/mL。
9.根据权利要求5所述的高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，其特征在于，将双氰胺标准品和供试品溶于水获得所述双氰胺标准品溶液和供试品溶液。
10.根据权利要求5所述的高效液相色谱法测定双氰胺含量的方法，其特征在于，所述方法还包括利用面积归一法测定杂质含量。
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