CN1163575A - 免疫原性组合物 - Google Patents
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Abstract
包括在无亲水相的情况下溶于或分配于疏水溶剂中的免疫原的免疫原性的组合物。优选的该免疫原性的组合物为口服疫苗。
Description
本发明涉及包含非正常地溶于疏水性溶剂的免疫原的免疫原性的组合物，涉及制备这些组合物的方法及其在治疗或预防疾病中的用途，或在制备具有上述用途的制剂中的应用。特别地，本发明涉及用作口服疫苗的免疫原性的组合物。
由于它们的亲水性和高极化度限制了它们相互作用或混合成液相的程度，使蛋白质和相似的大分子在，例如药物学，食品技术或化妆品工业中的应用受到限制。很多天然系统使用脂类载体(例如皮肤，细胞膜)以防止过量亲水性分子进入区室内部；脂类载体分散蛋白质的能力展示了将这些大分子导入生物系统的新途径，由此可将含蛋白质的脂类介质与载体的疏水性成分结合在一起，而不是被它们所排斥。
应用疏水溶剂中亲水性大分子的增溶作用的另一领域是用来诱发免疫反应的组合物，例如，疫苗，特别是口服疫苗。疫苗在宿主动物中发挥它们的效力，对特定的抗原或抗原组产生免疫反应。抗原组分或疫苗组分常包括一种或多种蛋白质，例如病毒膜蛋白质。对患者使用疫苗可通过从其中可衍生一种或多种抗原的特定的试剂诱导患者体内抗体的产生，导致对抗感染的保护反应。
但是，包含蛋白质的口服疫苗存在与上述反应有关的问题。因此，仍需要发明患者服用时可诱导适当的免疫反应，又无上述问题的口服疫苗。
现在已经发现这样的免疫反应可通过使用其中免疫原被溶于疏水溶剂如油的制剂而诱导，特别地，溶于油中的蛋白或肽可被用于一般的免疫反应，因而可用于疫苗，特别是口服疫苗中。
在油相而非水介质中的亲水性物质的分散在增加对温度介导的变性，水解，光敏感性等的稳定性方面有着另外的好处。油可在比水溶液宽的温度范围内保持流动，或者具有较高的粘性，对物理损伤产生很好的保护作用。在混合相系统中，油中的蛋白质螯合物可与水溶性化合物相互限制有害的相互作用，例如氧化或水解。
已有一些同时含有大分子和油的制剂的例子，其中之一公开于EP-A-0366277。该文献公开的制剂为同时含有疏水和亲水相的乳剂，其中疏水相含多种或单种乳糜粒形成的脂类。但是，该大分子只溶于亲水相不溶于疏水相。
EP-A-0521994也涉及一种大分子的适于口服给药的组合物，其中包括一种与卵磷脂有关的生物活性材料或可在体内作为卵磷脂前体的化合物。所有被例举的组合物都为包括亲水和亲脂相的制剂。另外，该在先技术文献中，大分子被溶解在亲水相中而不是亲脂相中。
尽管上述制剂都含有大分子和油。但显然所有上述制剂中的大分子都被溶解在亲水相中而不是亲脂相中。制备真正溶于油的大分子的尝试遇到了限制，尚无已知的用于疫苗中的这样的溶液的例子。
US-A-5340588公开了基于室温下为固体的脂球的疫苗制剂。其中在脂球芯表面包埋着一层磷脂，抗原，或者免疫原被固定在芯中，可被附着在磷脂表面或中间或者兼而有之。
UK专利申请No.9323588.5公开了一种可将亲水性物质溶于通常不能溶解在其中的疏水性溶剂中的方法。该方法依赖于下述惊人的发现，即：如果亲水性物质在某种情况下与一种两亲物质混合，所得到的组合物将易溶于亲脂性物质如油中。
本发明涉及下述惊人的发现，即：溶于亲脂性溶剂如油中的免疫原可诱发服用它的动物体内部的免疫反应。特别是可有利于口服给药。
该脂类介质也可作为更有效的微粒释放系统，容易地通过噬菌作用而被吸收。
因此，本发明首先提供一种包含在无亲水相存在的情况下溶于或分配于疏水溶剂的免疫原的免疫原性的组合物。在优选的实施方案中，免疫原是抗原而组合物是疫苗，例如口服疫苗。
这里使用的术语“免疫原”指可诱发免疫作用的物质，该免疫作用可以是典型的免疫反应，例如产生抗体，触发分化作用或扩张特定的T细胞群，并可为全身的或局部的，例如限于粘膜反应。选择性地，该免疫作用可以是，例如，免疫耐受性的，其中天然的免疫系统对特定抗原的激发无反应。另一种选择性的免疫作用可以是脱敏的，其中对特定抗原的自体免疫或变应性反应(IgE)的预先存在的趋势被缓减。
合适的免疫原的例子包括白喉类毒素，破伤风类毒素，肉毒杆菌类毒素，蛇毒抗原，肝炎B抗原，百日咳亚单位，流感和/或b(全部杀死的病毒或蛋白亚单位)，霍乱抗原，H.Pylori抗原，全菌或其提取物例如，铜绿假单胞菌，衣原体，奈瑟氏球菌，耶尔森氏菌，沙门氏菌，真菌或真菌的抗原，例如，来自Candida，狂犬病毒，脊髓灰质炎病毒，轮状病毒，麻疹病毒，风疹病毒，呼吸道合胞病毒，HIV，BCG，其他分枝杆菌抗原，原生动物抗原，例如，疟原虫，利什曼原虫，弓形虫，锥虫，吸虫抗原，例如，血吸虫属，绦虫抗原，例如，囊尾蚴属，棘球绦虫属，线虫抗原，例如弓蛔虫属，钩虫和丝虫，螺旋体抗原，例如疏螺旋体，癌细胞特异性的表面膜表位，和针对抗炎的免疫调制剂的细胞受体(治疗炎症如Crohn′s病和风湿性关节炎)，例如抗TNF-R和抗IL-1R。
也可使用非蛋白质抗原，例如，多糖或者甾体的聚合物缀合物。
本发明的一个优点是不同的抗原(例如蛋白质和多糖)可共存于相同的介质中激发增强的免疫反应，其好处是其中一个组分作为另一个组分的载体，而不需要任何共价键。
可用于减轻或限制针对它们的免疫反应的抗原的例子包括HLA抗原和多核苷酸和RNA，和DNA包括质粒DNA。
可用于激发脱敏免疫反应的抗原的例子包括花粉，尘螨抗原，蜂毒和食物变应原。
当免疫原是肽，多糖或其他抗原时，也可使其与至少一个中长-或长链烃尾缀合。
在另一个实施方案中，为了增强反应使免疫原与一种或多种细胞因子共溶。合适的细胞因子的例子包括IL-4，IL-10，IL-12和γ-干扰素。其他免疫刺激剂也可被掺入，例如单磷酰基类酯A，氢化的细菌提取物，胞壁酰二肽及类似物，吞噬刺激素和霍乱毒素亚基B以及大肠杆菌的热易变毒素。
本发明的另一个方面提供了一种制备免疫原性的组合物的方法，其中包括将免疫原溶于或分散于通常不能溶于其中的疏水溶剂中的步骤。优选的组合物为口服疫苗。
UK专利申请No.9323588.5公开的方法特别适于将免疫原溶于用于本发明组合物的制备中的疏水性溶剂中。
因此，本发明的优选方案中，溶解亲脂性物质的方法包括下列步骤：
(i)将免疫原用两亲物缔合在液体介质中；
(ii)除去液体介质，留下一系列两亲物分子，它们的亲水端基指向免疫原，并且，其中两亲物和免疫原之间无化学相互作用；以及
(iii)在免疫原/两亲物系列周围提供疏水溶剂。
可用于本发明的两亲物很多，已发现的特别合适的两亲物是两性离子两亲物如磷脂。具有磷脂酰胆碱端基的磷脂已被成功地使用，这样的磷酯的例子包括磷脂酰胆碱本身(PC)，溶血磷脂酰胆碱(lyso-PC)，鞘磷酯，它们的衍生物，例如十六烷基磷酸胆碱，或含磷酸胆碱的两亲聚合物，以及卤代两亲物，例如氟代磷脂。在本申请中，术语磷脂酰胆碱(PC)和卵膦脂可互换作用。合适的天然卵磷脂可由任何方便的来源，例如鸡蛋，以及特别是大豆衍生。在大多数情况下，优选与所选择的疏水溶剂化学性质相似的两亲物，这将在下文中详细讨论。可使用辛基葡糖苷，α-生育酚，或其酯，或者这些化合物的混合物。
本发明者已经发现两性离子两亲物如磷脂特别适用于本发明的方法，这进一步显示了本发明与Okahata等人的方法的显著差异。显然，在先技术文献的作者断定阴离子和两性离子脂类完全不适用于它们的方法并指明他们用这些脂类得到了产率为零的络合物。
疏水溶剂的选择依赖于被溶解的物质和两亲物的类型。合适的溶剂包括烃类，例如非极性油如矿物油，角鲨烷和角鲨烯，长链脂肪酸与不饱和脂肪酸例如优选油酸和亚油酸，醇类，特别是中长链醇如辛醇和带分枝的长链醇如植醇，类异戊二烯，例如橙花醇和香叶醇，其他醇如正丁醇，松油醇，单甘油醇如甘油单油酸酯(GMO)，其他酯类，例如乙酯乙酯，乙酸戊酯，和乙酸冰片酯，中长或长链单，双或三甘油酯及其混合物，上述物质的卤代类似物，其中包括卤代油，例如长链碳氟化合物和碘三甘油，例如lipidiol。
将疏水溶剂和两亲物合适地匹配时，通常可得到最理想的结果。例如，当溶剂为油酸时，两亲物选择lyso-PC比PC更合适，而疏水溶剂为三甘油时却正好相反。
另外，在某些情况下，我们发现在将其与免疫原/两亲物接触以前在疏水溶剂中加入一定的两亲物很有益处。这将确保两亲物分子不会因两亲物对疏水溶剂的高亲合性而从亲水性物质的周围剥离。
两亲物分子由它们的亲水性端基向着免疫原部分进入免疫原/两亲物粒子的定向(作用)可由数种方法实现，特别优选的方法的例子将在下文中更详细地讨论。
在第一种方法中，该方法开始部分与kirby等人在生物/技术，1984年11月，979-984和在脂质体技术，第1卷，第19-27页，Gregoriadis，编辑，CRC出版公司，Boca Raton，弗罗里达，美国中描述方法相似，将免疫原与两亲物在亲水性溶剂中的分散系混合，以便使两亲物分子形成亲水性端基指向含免疫原的亲水相表面的组合物。然后除去亲水溶剂，留下其中两亲物分子亲水性端基指向免疫原的干燥组合物。
在第一种方法中，尽管可使用其他极性溶剂，但亲水性溶剂优选水。
两亲物组合件的形成可为微胶囊，单层状囊，优选常见的直径约为25nm的小单层状囊，多层状囊或管状结构，例如，匙孔筒状物(cochleatecylinders)，六角形状物，立方体状物或髓磷脂类结构。所采用的形式将取决于所使用的两亲物，例如，如磷脂酰胆碱(PC)的两亲物倾向于形成小单层状囊，而溶血磷脂酰胆碱形成微胶囊。但是，在所有上述结构中，两亲物分子的疏水端基指向结构中心的内部，而亲水性端基指向分散有免疫原的溶剂的外周。
两亲物：免疫原的重量比通常在1∶1到100∶1的范围内，优选从2∶1到20∶1，对于PC最优选约8∶1而对于lyso-PC最优选4∶1。
这些比例仅为优选的比例，应当特别指出。该比例的上限是建立在尽可能使用最少量的两亲物的经济因素上的。有时下限更为关键，当免疫原具有明显的疏水部分或者特殊地大时，2∶1或更低的比例也是可能的。
当溶剂被快速除去时将得到好的结果，尽管可使用其他方法，但冷冻干燥是简便的除去溶剂的方法。
在某些情况下，在亲水溶液中包含盐可能是有益的，特别是当免疫原是大分子化合物如大分子蛋白质。但是，由于大量无机盐的存在导致结晶的形成，因而产生了浑浊的溶液，因此优选使用有机盐而不使用无机盐如氯化钠。由于另外具有易于冷冻干燥除去的优点，乙酸铵特别适于该目的。
制备含两亲物端基指向免疫原部分的粒子的组合物的第二种方法是将免疫原和两亲物共溶于一种公共溶剂中，随后除去该溶剂。
因此，在本发明第二个方面的另一优选方案中提供了一种制备疫苗的方法，其中包括将免疫原和两亲物共溶于一种公共溶剂中，随后除去该溶剂，因而形成免疫原/两亲物粒子，其两亲物分子的亲水端基指向免疫原。
使用该方法时，两亲物：免疫原的重量比优选约1∶1到50∶1，更优选2∶1到10∶1，最优的比例约为4∶1。
当然，普通溶剂必须能溶解两亲物和免疫原，优选极性有机溶剂如二甲基甲酰胺，二甲亚砜，最优选冰醋酸。
该方法中，与第一种方法相反，粒子不可能在除去普通溶剂之前形成。
在除去溶剂时，两亲物分子趋向有序排于一种片状结构中，该结构中它们的亲水性端基指向免疫原而它们的亲脂性端基背向免疫原。但是，本发明的效果并不取决于该项观察的精确与否。
已经发现，当缓慢地除去溶剂，例如通过在氮气流中干燥，可得到好的结果，这可能是因为给了两亲物分子重新排列更多的时间。
对于两亲物可使用任何疏水性溶剂，但是，对于小分子免疫原优选使用的油包水型乳液来说，优选使用低沸点的溶剂，因为已经发现当使用温和的方法如蒸发慢慢除去疏水溶剂时，将获得最佳结果，显然，使用低沸点的溶剂最有利于这种情况。尽管冷冻干燥是更适合的除去溶剂的方法，但低沸点溶剂也适于油包水型油液。亲水性溶剂优选水。
两亲物：免疫原的重量比可从约1∶1到50∶1，优选从2∶1到10∶1，最优选约4∶1。
亲水溶液与疏水溶液的比例不是关键，但使用小分子免疫原时，形成油包水型乳液优于形成水包油型乳液。
特别适于水分子免疫原的一种选择性的形成粒子的方法是，将免疫原截留在封闭的液体囊如分散在亲水溶剂中的小单层状囊(SUVs)中，然后除去溶剂。
不能形成脂质体的两亲物的一个例子是溶血卵磷脂。在大多数小环境中，该两亲物形成微胶囊而不是小单层状囊，因而它不适用于脂质体的制备，但它在本发明中极其有用，特别是它适用与可混溶的疏水性溶剂如油酸的混合。
第三方面，本发明提供了免疫原在疏水溶剂中的单相疏水制剂，该制剂可使用这里所述的方法得到。
第四方面，与发明提供了一种两相组合物，其中包括亲水相和疏水相，亲水相中又包括本发明免疫原性的组合物。特别地，疏水相分散于连续的亲水相中，并优选地为一种乳剂。
第五方面，本发明提供了溶于疏水溶剂中的免疫原的用途。通常情况下它不溶于免疫原组合物的制剂，特别是口服疫苗中。
第六方面，本发明提供了一种含免疫原组合物或本发明单相疏水制剂的肠溶膜胶囊。
上述单相制剂的一个优点是它们实际上是含水的，因而不易被水解。它们在冰冻-熔化时也是稳定的并在高温下也有很好的稳定性，这可能是因为欲使蛋白质伸展及变性必须有水的存在。这意味着它们比免疫原的含水制剂将有更长的贮存期。
下列将参照实施例进一步描述本发明，这些实施例不应被认为是对本发明的限制。
实施例与本申请附图有关，其中：
图1：显示口服本发明制剂后对破伤风类毒素的反应；以及
图2：显示皮下注射本发明制剂后对破伤风类毒素的反应。
实施例1
将浓度为3000Lf/ml(6mg/ml)的1ml破伤风类毒素用1升蒸馏水透析过夜。10分钟内，通过探针超声波与冷却将大豆磷脂酰胆碱以100mg/ml的浓度分散在蒸馏水中。将1ml该溶液分配在具有玻璃螺帽的2ml管形瓶中。然后浸入40μl破伤风类毒素(稀释后5mg/ml)。将该混合物冷冻干燥过夜，并加入1ml油酸。得到了一种清澈的溶液，使用前将其冷藏。
将100μl该制剂(称为制剂‘A’)皮下注射或通过胃管对控制条件下每笼关三只并适宜喂以食物和水的近交的年轻的成年Swiss小鼠给药(每组3-4只小鼠，每只动物20μg破伤风类毒素)。给药两星期后从尾静脉取出血浆样品，以1∶100稀释后按夹心ELISA法则量针对破伤风抗原的抗体(IgG)水平。在450nm处的光密度如图1和2所示。实施例2
10分钟内，通过探针超声波与冷却将大豆磷脂酰胆碱以100mg/ml的浓度分散在蒸馏水中。将1ml该溶液分配于具有玻璃螺丝帽的2ml管形瓶中，如实施例‘A’，混入40μl破伤风类毒素。将该混合物冷冻干燥过夜，并加入1ml Miglyol 818。得到了一种清澈的溶液，使用前将其冷藏。
将100μl该制剂(称为制剂‘B’)皮下注射或通过胃管对控制条件下每笼关三只并适宜喂以食物和水的近交的年轻的成年Swiss小鼠给药(每组3-4只小鼠，每只动物20μg破伤风类毒素。给药两星期后从尾静脉取出血浆样品。以1∶100稀释后按夹心ELISA法测量抗体(IgG)水平。在450nm处的光密度如图1和2所示。实施例3
10分钟内，通过探针超声波与冷却将大豆磷脂酰胆碱以100mg/ml的浓度分散在蒸馏水中。将1ml该溶液分配于具有玻璃螺丝帽的2ml管形瓶中，如实施例‘A’，混合入40μl破伤风类毒素。将该混合物冷冻干燥过夜，产加入1ml市场购买的葵花油。得到了一种清澈的溶液，使用前将其冷藏。
将100μl该制剂(称为制剂‘C’)皮下注射或通过胃管对控制条件下每笼关三只并适宜喂以食物和水的近交的年轻的成年Swiss小鼠给药(每组3、4只小鼠，每只动物20μg破伤风类毒素)。给药两星期后从尾静脉取出血浆样品，以1∶100的比例稀释后按夹心ELISA法测量抗体(IgG)的水平。450nm处的光密度如图1所示。实施例4
将十六烷基磷酸胆碱以100mg/ml的浓度溶于蒸馏水中。将500μl该溶液分配于具有玻璃螺丝帽的2ml管形瓶中，如实施例‘A’，混入20μl破伤风类毒素(稀释后5mg/ml)。将该混合物冷冻干燥过夜，并加入500μl油酸。得到了一种清澈的溶液，使用前将其冷藏。
将100μl该制剂(称为制剂‘D’)通过胃管对控制条件下每笼三只并适宜喂以食物和水的近交的年轻的成年Swiss小鼠给药(每组3-4只小鼠，每只动物20μg破伤风类毒素)。给药两星期后从尾静脉取出血浆样品，以1∶100的比例稀释后按夹心ELISA法测量抗体(IgG)的水平。450nm处的光密度如图1所示。实施例5
将β-辛基葡糖苷以100mg/ml的浓度溶于蒸馏水中。将500μl该溶液分配于具有玻璃螺丝帽的2ml管形瓶中，如实施例‘A’，混入20μl破伤风类毒素(稀释后5mg/ml)。将该混合物冷冻干燥过夜，并加500μl甘油单油酸酯。得到一种清澈的溶液，使用前将其冷藏。
将100μl该制剂(称为制剂‘E’)皮下注射或通过胃管对控制条件下每笼关三只并适宜喂以食物和水的近交的年轻的成年Swiss小鼠给药(每组3-4只小鼠，每只动物20μg破伤风类毒素)。给药两星期后从尾静脉取出血浆样品，以1∶100的比例稀释后按夹心ELISA法测量抗体(IgG)的水平。450nm处的光密度如图2所示。实施例6
将两亲物β-辛基葡糖苷以100mg/ml的浓度溶于蒸馏水中。将500μl该溶液分配于具有玻璃螺丝帽的2ml管形瓶中，如实施例‘A’，混合20μl破伤风类毒素，(稀释后5mg/ml)。将该混合物冷冻干燥过夜，并加入500μl植醇。得到一种清澈的溶液，使用前将其冷藏。
将100μl该制剂(称为制剂‘F’)皮下注射或通过胃管对控制条件下每笼关三只并适宜喂以食物和水的近交的年轻的成年Swiss小鼠给药(每组3-4只小鼠，每只动物20μg破伤风类毒素)。给药两星期后从尾静脉取出血浆样品，以1∶100的比例稀释后按夹心ELISA法测量抗体(IgG)的水平。450nm处的光密度如图所示。
Claims (37)
1.一种免疫原性的组合物，其中包括在无亲水相的情况下溶于，或分配于疏水溶剂的免疫原。
2.权利要求1的免疫原性的组合物，其中免疫原溶于疏水溶剂形成单相。
3.权利要求1或2的免疫原性的组合物，其中免疫原是抗原。
4.权利要求1到3中任意一项的免疫原性组合物，其中该免疫原性组合物为疫苗或可用于疫苗的制备。
5.权利要求4的免疫原性组合物，其中疫苗是口服疫苗。
6.权利要求1到5中任意一项的免疫原性组合物，其中免疫原选自白喉类毒素，破伤风类毒素，肉毒杆菌类毒素，蛇毒抗原，肝炎B抗原，百日咳亚单位，流感和/或b(或全部被杀死的病毒或蛋白亚单位)，霍乱抗原，H.pylori抗原，全菌，或其提取物，例如铜绿假单胞菌，衣原体，奈瑟氏球菌，耶尔森氏菌，沙门氏菌，真菌或真菌的抗原，例如来自Candida，狂犬病毒，脊髓灰质炎病毒，轮状病毒，麻疹病毒，风疹病毒，呼吸道合胞病毒，HIV，BCG，其他分枝杆菌抗原，H.inflnenza A或B(有或没有载体蛋白)，原生动物抗原，例如疟原虫，利什曼原虫，弓形虫，锥虫，吸虫抗原，例如血吸虫属，绦虫抗原，例如囊尾蚴属，棘球绦虫属，线虫抗原，例如弓蛔虫属钩虫和丝虫，螺旋体抗原，例如疏螺旋体，癌细胞特异性的表面膜表位，和针对抗炎的免疫调制剂的细胞受体(治疗炎症如Crohn’s病和风湿性关节炎)，例如抗TNF-R和抗IL-IR，甾体化合物的多糖或聚合物缀合物。
7.权利要求1到6中任意一项的免疫原性组合物，其中组合物中共存两种或更多的抗原。
8.权利要求7的免疫原性组合物，其中蛋白质抗原与多糖抗原共存。
9.权利要求1到8中任意一项的免疫原性组合物，其中免疫原是缀合在至少一个中长或长链烃尾上的肽，多糖或其他抗原。
10.权利要求1到9中任意一项的免疫原性组合物，其中存在一种或多种另外的免疫刺激剂。
11.权利要求10的免疫原性组合物，其中另外的免疫刺激剂选自IL-4，IL-10，IL-12，γ-干扰素，单磷酰基类脂A，分枝杆菌提取物，胞壁酰二肽及类似物，吞噬刺激素和毒素亚基B，以及大肠杆菌热易变毒素。
12.权利要求1到3中任意一项的免疫原性组合物，其中免疫原将减少对抗抗原的免疫反应的消除。
13.权利要求12的免疫原性组合物，其中抗原是HLA抗原或DNA。
14.权利要求1到3中任意一项的免疫原性组合物，其中该组合物可使免疫反应脱敏。
15.权利要求14的免疫原性组合物，其中抗原选自花粉，尘螨抗原或食物变应原。
16.一种制备免疫原性组合物的方法，其中包括将免疫原溶于，或分配于通常情况不能溶解免疫原的疏水溶剂的步骤：
17.权利要求16的方法，其中包括下列步骤：
(i)将免疫原用两亲物缔合在液体介质中；
(ii)除去液体介质，留下一系列两亲物分子，它们的亲水性端基指向免疫原，而且两亲物和免疫原之间无化学相互作用；以及
(iii)在免疫原/两亲物粒子系列周围提供疏水溶剂。
18.权利要求16或17的方法，其中该方法由权利要求3至15中任意一项或多项的特征限定。
19.权利要求17或18的方法，其中两亲物是磷酯，辛基葡糖苷，α-生育酚，或其酯，或胆汁盐，或其混合物。
20.权利要求19的方法，其中磷脂具有磷脂酰胆碱端基。
21.权利要求20的方法，其中磷脂为磷脂酰胆碱(PC)，溶血性磷脂酰胆碱(lyso-PC)，鞘磷脂，它们之一的衍生物如十六烷基胆碱磷酸或含磷酸胆碱的两亲聚合物。
22.权利要求16至21中任意一项的方法，其中疏水溶剂包括烃类，例如矿物油或角鲨烯，长链脂肪酸，中长链醇，多元醇，例如α-生育酚，中长或长链单，双或三甘油酯，或其混合物。
23.权利要求17到22中任意一项的方法，其中两亲物包括PC，疏水溶剂为三甘油酯，或其中两亲物包括lyso-PC而疏水溶剂为油酸。
24.权利要求17到22中任意一项的方法，其中免疫原/两亲物粒子由免疫原与两亲物在亲水溶剂中的分散系混合并除去该亲水溶剂而生成。
25.权利要求24的方法，其中亲水溶剂是水。
26.权利要求24或25的方法，其中两亲物组合件包括微胶囊，单层状囊，例如单层状囊，多层状囊或管状结构如匙孔筒状结构，六角形结构，立方体结构或髓磷脂类结构。
27.权利要求24到26中任意一项的方法，其中通过冷冻干燥除去亲水性溶剂。
28.权利要求17到24中任意一项的方法，其中免疫原/两亲物粒子是通过将免疫原和两亲物共溶于-和公共溶剂中随后除去该溶剂形成的。
29.权利要求28的方法，其中两亲物与免疫原的重量比为从约1∶1到50∶1。
30.权利要求29的方法，其中疏水溶剂是低沸点的有机溶剂如乙醚。
31.一种由权利要求17到30中任意一项中的方法得到的，免疫原在疏水溶剂中的单相疏水制剂。
32.一种包括亲水相和疏水相的两相组合物，其中疏水相包括权利要求1到15中任意一项的组合物或权利要31的制剂。
33.权利要求32的组合物，其中疏水相被分散在连续的亲水相中。
34.权利要求32或33的组合物，其中该组合物是乳剂。
35.免疫原组合物制剂中溶于通常情况下不能溶解免疫原的疏水溶剂中的免疫原的用途。
36.权利要求35的用途，其中免疫原性组合物是口服疫苗。
37.一种含权利要求1到15中任意一项中的免疫原性的组合物或权利要求31中的单相疏水制剂的肠溶膜胶囊。
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