CN116355069A - 基因MdPGIP1在植物抗病性调控中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了基因MdPGIP1在植物抗病性调控中的应用，基因MdPGIP1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，编码蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。在苹果中过表达基因MdPGIP1可显著提高苹果对苹果树腐烂病菌的抗性。在本氏烟中过表达基因MdPGIP1还可提高对核盘菌的抗性。基因MdPGIP1编码蛋白能够结合苹果树腐烂病菌分泌的多聚半乳糖醛酸酶，抑制多聚半乳糖醛酸酶对植物细胞壁的降解作用，提高苹果的抗病性。本发明尤其揭示了基因MdPGIP1在苹果抗腐烂病方面的重要功能，为创制苹果抗病新种质提供了基因材料和技术支持。
Description
技术领域
本发明属于基因工程技术领域，涉及植物抗病相关基因的利用，具体涉及苹果抗病相关基因MdPGIP1及其在抗病中的应用。
背景技术
在植物生长的环境中，存在种类繁多的微生物，其中一些微生物为了获取生存所需的营养而危害植物，成为植物的病原微生物。病原微生物攻击植物，不仅影响植物正常的生长发育，还表现出不同的植物病害病状。细胞壁是植物抵御病原菌侵染的第一道屏障，主要成分为纤维素和果胶。病原菌为了实现对植物的成功侵染，已经进化出一系列胞壁降解酶，比如多聚半乳糖醛酸酶（Polygalacturonases，PGs）、果胶酶、果胶酸裂合酶、葡聚糖酶等来克服植物细胞壁的阻碍。其中，PGs是一种细胞壁结合蛋白，广泛存在于细菌、真菌和植物中，具有水解酶的性质，是降解植物细胞壁果胶骨架结构的主要酶之一。
植物为了抵御病原微生物的入侵，除了植物组织表面的物理屏障外，还在与病原微生物长期斗争的过程中进化形成复杂的免疫系统来抵抗病原微生物的胁迫。植物产生的多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白（polygalacturonase inhibiting protein，PGIP）属于LRR超家族蛋白，在阻止病原物侵入，激活防卫系统方面具有重要而独特的作用。研究表明，植物产生的PGIP能与病原菌分泌的PGs专一地、可逆地结合，形成一种高亲和复合物，从而控制PGs的部分活性，引起高浓度的寡聚半乳糖醛酸在植物体内积累，使具有生物活性的寡聚半乳糖醛酸的稳定期相对延长，更有效地激活植物体内的防御系统，以抵抗病原真菌的侵入。此外，PGIP与PGs结合后，减少了PGs对植物细胞壁的降解，从而有助于维护植物细胞壁的完整性。迄今为止，已经从双子叶植物和单子叶植物中克隆、鉴定到数量众多的PGIP基因，然而其中仅有少数基因编码的蛋白质具有与PGs结合和抑制活性，而利用基因工程技术将植物PGIP基因应用于植物病害综合治理的研究更是鲜有报道。
由黑腐皮壳属真菌侵染树干引起的苹果树腐烂病危害严重，导致树皮腐解溃烂，枝干枯死甚至果园大面积死树损毁，严重制约了苹果产业的健康持续发展。苹果树腐烂病一直是苹果生产的毁灭性灾害和重点防控对象。目前虽然已经研发了科学用药病害高效防控技术，并取得了较好的防病效果，但随着经济社会的发展，人们对食品安全和绿色果品的要求越来越高，病害的绿色防控就成为当前产业发展的重要趋势。科学运用抗病品种是实现病害绿色持久防控最经济、有效、环保的途径，而如何挖掘和利用抗病资源则是助推抗病遗传改良的关键前提和重要基础。
发明内容
本发明的主要技术目的在于利用分子生物学和基因工程提高苹果树的抗病性，发掘具有调控苹果树抗病性的功能基因，采取有效手段拓展功能基因在提高苹果树抗病性，特别是抗苹果树腐烂病方面的应用。
本发明提供了基因MdPGIP1在植物抗病性调控中的应用。所述基因MdPGIP1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，过表达所述基因MdPGIP1提高苹果对苹果树腐烂病菌的抗性。
本发明进一步揭示所述应用的实施方式，所述基因MdPGIP1编码蛋白MdPGIP1结合苹果树腐烂病菌分泌的多聚半乳糖醛酸酶，所述蛋白MdPGIP1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
本发明进一步揭示所述应用的实施方式，通过抑制多聚半乳糖醛酸酶对植物细胞壁的降解作用，提高苹果对苹果树腐烂病菌的抗性。
本发明进一步揭示所述应用的实施方式，所述蛋白MdPGIP1的1-24位氨基酸编码信号肽，所述信号肽具备外泌功能。
本发明进一步揭示所述应用的实施方式，将所述基因MdPGIP1编码蛋白MdPGIP1渗透苹果叶片，提高苹果对苹果树腐烂病菌的抗性。
本发明进一步揭示所述应用的实施方式，过表达所述基因MdPGIP1提高本氏烟对核盘菌的抗性。
基于所述基因MdPGIP1及其编码蛋白的功能验证，本发明还请求保护一种提高苹果抗病性的方法。本方法的技术核心在于过表达所述基因MdPGIP1提高对苹果树腐烂病菌的抗性，所述基因MdPGIP1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
本发明进一步给出所述应用的实施方式，所述基因MdPGIP1编码蛋白MdPGIP1，所述蛋白MdPGIP1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，通过蛋白MdPGIP1结合苹果树腐烂病菌分泌的多聚半乳糖醛酸酶，抑制多聚半乳糖醛酸酶对植物细胞壁的降解作用，提高对苹果树腐烂病菌的抗性。
本发明进一步给出所述应用的实施方式，将所述编码蛋白MdPGIP1渗透至苹果叶片，提高对苹果树腐烂病菌的抗性。
本发明还请求保护一种提高烟草抗病性的方法。基于同一技术思路，过表达所述基因MdPGIP1提高本氏烟对核盘菌的抗性，所述基因MdPGIP1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
需要说明的是，本发明并没有限定培育抗病植株（品种）的具体实现方式。基于抗病相关基因MdPGIP1的功能，本领域普通技术人员结合现有技术，不难实现基因MdPGIP1在植物中的表达丰度。
本发明基于苹果抗病相关基因MdPGIP1给出的提高苹果抗病性方法，以及获得抗苹果树腐烂病的植株，为解决苹果抗病育种研究难题提供了一种行之有效的技术路径。可以说是目前为止最经济、有效、绿色、持久的防治苹果树腐烂病的方法。同时，本发明有效克服了以农业防治和化学防治为主防治苹果树腐烂病的技术缺陷。
此外，本发明给出的苹果抗病相关基因MdPGIP1在本氏烟中的过表达提高了本氏烟对核盘菌的抗病性，意味着MdPGIP1基因具有作为广谱抗病因子用于植物抗病育种的潜力。
本发明还进一步研究了所述苹果抗病相关基因MdPGIP1编码蛋白的生物学特性。苹果抗病相关基因MdPGIP1编码蛋白MdPGIP1结合苹果树腐烂病菌分泌的多聚半乳糖醛酸酶。
为了完整无异议地理解本发明的技术方案，本发明所述“苹果”的含义是指苹果树（苗），或通过组织培养的方式获得的组培苗，而非单纯地理解为可食用的苹果果实；本发明所述“MdPGIP1”由斜体表示是指基因；本发明所述“MdPGIP1”由非斜体表示基因“MdPGIP1”的编码蛋白。当然，本领域普通技术人员根据本发明的记载，可以清楚、完整地理解相关基因及其编码蛋白的含义与表述。
与现有技术相比，本发明“基因MdPGIP1在植物抗病性调控中的应用”的技术有益效果或技术优点如下。
（1）本发明首次揭示苹果抗病相关基因MdPGIP1，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。苹果抗病相关基因MdPGIP1编码蛋白氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。通过调控苹果抗病相关基因MdPGIP1的过表达，提高苹果对苹果树腐烂病的抗病性。本发明为解决苹果抗病育种研究难题提供了一种行之有效的技术方案，为创制抗病新种质提供基因材料和技术支持。
（2）本发明在提高苹果抗病性方面具有较为重要的意义。借助基因工程技术，通过苹果抗病相关基因MdPGIP1过表达，可提高对苹果树腐烂病菌的抗性，本发明为从分子生物学角度防治苹果树腐烂病提供了新的解决思路。
（3）本发明进一步揭示苹果抗病相关基因MdPGIP1编码蛋白MdPGIP1与苹果树腐烂病菌分泌的PGs蛋白互作，更重要的是，生物信息学分析发现，苹果抗病相关基因MdPGIP1高度保守且广泛分布，可以广泛应用于基因工程领域，有着巨大的经济价值和应用前景，预测其可能成为一个用于多种植物遗传改良的优质基因资源。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，描述中的附图仅用于说明本发明实施例。
图1是基因MdPGIP1及其在抗病中的应用研究技术路线图。
图2是基因MdPGIP1在苹果响应苹果树腐烂病菌侵染的表达模式分析结果。
图3是基因MdPGIP1编码蛋白MdPGIP1信号肽功能的验证。将INF1蛋白、INF1△SP蛋白、SPMdPGIP1-INF1△SP蛋白以及空载（ev）分别在本氏烟中进行瞬时表达，观察重组蛋白诱发本氏烟细胞坏死反应。
图4是基因MdPGIP1编码蛋白MdPGIP1在植物中的亚细胞定位结果。其中，A图为植物组织质壁分离后，明场下的细胞视野图；B图为植物组织质壁分离后，膜定位蛋白TaWPI6-mCherry的亚细胞定位图；C图为MdPGIP1-GFP融合蛋白在植物组织质壁分离处理后绿色荧光示意图；D图为绿色荧光和红色荧光叠加光场下的蛋白亚细胞定位图；白色箭头所指位置为质外体区域。
图5是在本氏烟中过表达基因MdPGIP1，本氏烟叶片接种核盘菌36 h后的发病症状。
图6是在本氏烟中过表达基因MdPGIP1，本氏烟叶片病变直径统计结果。
图7是在本氏烟中过表达基因MdPGIP1，利用Western Blot检测MdPGIP1蛋白在本氏烟叶片中的表达情况。
图8是在苹果中过表达基因MdPGIP1，苹果叶片接种苹果树腐烂病菌36 h后的发病症状。
图9是在苹果中过表达基因MdPGIP1，苹果叶片病变面积统计结果。
图10是在苹果中过表达基因MdPGIP1，利用Western Blot检测MdPGIP1蛋白在苹果中的表达情况。
图11是基因MdPGIP1编码蛋白MdPGIP1在植物体内与多聚半乳糖醛酸酶MdPGs互作的免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，CoIP）鉴定结果。“Input”表示未经免疫共沉淀的总蛋白样品；“IP”表示经GFP免疫共沉淀的蛋白样品；“+”表示总蛋白样品包含的组分；“-”表示总蛋白样品不包含的组分；“Anti-His”和“Anti-GFP”分别表示利用His标签抗体检测His标签融合蛋白和利用GFP标签抗体检测GFP标签融合蛋白；“Ponceau S”表示丽春红染色结果。
图12是MdPGIP1纯化蛋白渗透苹果叶片，利用SDS-PAGE凝胶电泳和考马斯亮蓝染色检测MdPGIP1纯化蛋白的结果。
图13是MdPGIP1纯化蛋白渗透苹果叶片，苹果叶片接种苹果树腐烂病菌36 h后的发病症状。
图14是MdPGIP1纯化蛋白渗透苹果叶片，苹果叶片病变面积统计结果。
附图中，统计分析采用Student-t检验计算P值，*表示P<0.05；**表示P<0.01；***表示P<0.001。
具体实施方式
结合具体实施例对本发明的技术方案进行说明，但是，本发明并不限于下述的实施例。各实施例中涉及的实验方法和检测方法，如无特殊说明，均为常规方法；涉及的药剂和材料，如无特殊说明，均可在市场上购买得到。整体而言，苹果抗病相关基因MdPGIP1及其抗病性能表征技术思路见图1。
实施例1
本实施例给出苹果抗病相关基因MdPGIP1的获取方法。本发明所述苹果抗病相关基因MdPGIP1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，其是从网站National Center forBiotechnology Information（NCBI）（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/）中获得，基因号为NM_001329030.2。
实施例2
本实施例对苹果抗病相关基因MdPGIP1响应苹果树腐烂病菌侵染的表达模式进行分析。本实施例选用苹果品种“富士苹果”的枝条作为供试材料，以苹果树腐烂病菌（Valsa mali）作为供试菌株（保藏编号CGMCC No. 22441）。将长度10 cm、粗细均匀的苹果枝条表面消毒后用石蜡密封两端。在枝条中部用打孔器（Φ=5 mm）制造接种创口并接种苹果树腐烂病菌，25℃保湿培养，分别在接种病菌0、3、6、12、24、36、48、72 h后取病健交界处植物组织提取组织总RNA，反转录后进行定量检测。
qRT-PCR分析苹果抗病相关基因MdPGIP1在苹果树腐烂病菌侵染苹果组织不同时间的相对表达量，以反转录得到的cDNA为模板。qRT-PCR程序如下：95℃ 10分钟，95℃ 15秒进行40个循环，60℃ 30秒，72℃ 30秒。通过2–ΔΔCT方法对qPCR结果进行定量分析，分析结果（平均值±标准差）见图2。如图2所示，苹果抗病相关基因MdPGIP1在“富士苹果”响应V. mali侵染过程中显著上调表达。
实施例3
本实施例利用在线数据库（https://services.healthtech.dtu.dk/services/SignalP-4.1/）分析了苹果抗病相关基因MdPGIP1编码蛋白（氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示）的信号肽，结果表明MdPGIP1蛋白1-24位氨基酸编码信号肽序列。
利用植物异源表达进行MdPGIP1信号肽的分泌功能验证。INF1激发素是一个已知坏死诱导因子，本身需要信号肽发挥功能，用MdPGIP1信号肽替换INF1信号肽，若重组后的INF1能恢复坏死诱导能力则证明MdPGIP1信号肽具备外泌功能。基于此，同时克隆MdPGIP1预测信号肽片段以及INF1去信号肽片段，用ClonExpress MultiS一步克隆试剂盒（Vazyme）将重组片段SPMdPGIP1-INF1△SP片段连接至pGR106载体并转化到农杆菌GV3101菌株。在本氏烟叶片中表达SPMdPGIP1-INF1△SP重组蛋白，观察重组蛋白能否诱发细胞坏死反应。结果如图3，表明INF1△SP不能引起本氏烟细胞坏死，而INF1和SPMdPGIP1-INF1△SP能够引起坏死，结果表明MdPGIP1的信号肽具有分泌功能。
实施例4
本实施例给出苹果抗病相关基因MdPGIP1编码蛋白的亚细胞定位，所用载体为含有GFP标签的pCAMBIA1302载体。通过同源重组的方法将苹果抗病相关基因MdPGIP1构建到植物双元表达载体pCAMBIA1302，酶切位点为Nco1和Spe1。将构建好的重组载体转化到农杆菌GV3101菌株，180 rpm震荡摇菌16 h，随后5000 rpm离心3 min，使用侵染液（10 mMMgCl2，10 mM MES和150 μM Ace）悬浮菌体后用无针注射器注射4周龄烟草叶片，在温室中培养两天后观察荧光。
图4给出了MdPGIP1蛋白在植物中的亚细胞定位结果。如图4所示，在烟草细胞质壁分离处理后，在植物细胞的质外体空间观察到GFP荧光，表明苹果抗病相关基因MdPGIP1编码蛋白MdPGIP1能够被植物分泌到胞外空间。
实施例5
本实施例给出苹果抗病相关基因MdPGIP1在本氏烟和苹果组培苗的瞬时表达。将携带目的质粒的农杆菌接种于含卡那霉素（50μg/mL）和利福平（25μg/mL）的LB培养基中，在220 rpm，28°C振荡培养16-18 h。6000 rpm，室温离心3 min收集菌体，用MES缓冲液（10mMMgCl2、10mM MES，pH 5.7）对菌体重复洗涤3次。加入1mL MES-AS缓冲液（10mM MgCl2、10mMMES、200μM乙酰丁香酮，pH 5.7）重悬菌体，室温避光静置3 h。
将携带目的质粒的农杆菌菌液调整浓度至OD600=0.6。使用无针注射器将农杆菌菌液注射至4周龄的本氏烟叶片中，使目的蛋白质在本氏烟中进行表达。
为了使携带目的质粒的农杆菌顺利侵染苹果组培叶片，将8-10周龄的苹果组培苗浸润在携带目的质粒的农杆菌菌液中，置于密闭真空箱中，在真空度100 kPa的气压条件下，将农杆菌缓慢渗透至苹果叶片中，连续进行3次，每次10 min。随后，将苹果组培苗在MS培养基中继续培养，使目的基因在苹果组培苗中过表达。
本实施例中获得的本氏烟和苹果植物材料用于实施例6中病原菌接种实验和实施例7中蛋白检测实验。
实施例6
在实施例5的基础上，本实施例给出本氏烟叶片接种核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）和苹果组培叶片接种苹果树腐烂病菌的方法。
在PDA平板培养基中25°C恒温避光培养核盘菌。随后，使用直径为3 mm的打孔器在菌落边缘打取菌饼。从4周龄本氏烟植株上剪下生长均匀、叶面平展的叶片。将叶片平铺于托盘中，在叶片正面主叶脉两侧对称位置用无菌牙签分别制造2个微创口。将5 mm直径的核盘菌菌饼接种至创口处，并用浸泡无菌水的脱脂棉包裹在叶片的叶柄处。用保鲜膜对盛有叶片的托盘进行遮盖，创造适宜的湿度环境。接种核盘菌36 h后，观察叶片发病程度并统计病变直径。如图5和图6所示，过表达苹果抗病相关基因MdPGIP1的本氏烟叶片发病程度显著低于对照组，平均病变直径降低约32%。
参考本实施中本氏烟接种核盘菌的方法，在PDA平板培养基上活化苹果树腐烂病菌，25°C恒温避光培养2 d。随后，使用直径为3 mm的打孔器在菌落边缘打取菌饼。从浸染农杆菌5 d后的苹果组培苗上剪下生长均匀、叶面平展的苹果叶片。将叶片平铺在10 cm直径的培养皿中，在叶片正面主叶脉两侧对称位置用无菌针头分别制造2个微创口。将3 mm直径的菌饼接种至创口出，并用浸泡无菌水的脱脂棉包裹在叶片的叶柄处。在接种苹果树腐烂病菌36 h后，观察叶片发病症状并利用Image J软件统计病变面积。如图8和图9所示，过表达苹果抗病相关基因MdPGIP1的苹果叶片发病程度显著低于对照组，平均病变面积降低约40%。
实施例7
在实施例5的基础上，本实施例给出植物中蛋白的提取方法以及通过免疫共沉淀与Western Blot鉴定MdPGIP1与MdPGs互作。
农杆菌侵染本氏烟叶片48小时或苹果叶片4天后，收集植物叶片组织。利用液氮快速冷冻并快速研磨成粉状。使用裂解缓冲液（非变性组织/细胞裂解液，1 mM苯基甲烷磺酰氟（PMSF），1%蛋白酶抑制剂混合物）在4℃条件下裂解植物组织30 min。裂解期间，每隔10min用涡旋仪对样品进行震荡混匀。裂解完成后，15000×g，4°C离心10 min，收集上清液至新的1.5 mL离心管中。向样品中加入等体积的2×SDS缓冲液混合煮沸10 min，获得植物组织总蛋白。Western Blot检测结果如图7和图10所示，MdPGIP1蛋白在植物组织中成功表达，“*”表示目标蛋白在PVDF膜上的位置。
用农杆菌介导的植物瞬时表达体系进行免疫共沉淀试验。首先，用携带正确质粒的农杆菌浸染4周龄的本氏烟叶片，使目标蛋白在本氏烟叶片中共表达。农杆菌渗透本氏烟叶片48小时后，提取本氏烟叶片总蛋白。其中，100 μL蛋白样品与100 μL体积的2×SDS缓冲液混合煮沸10 min，获得的样品用于input检测。剩余的样品在4°C条件下与GFP-Trap（Chrometek，Planegg Martinsried，Germany）共孵育2小时。2500×g离心2 min收集GFP-Trap样品，并用裂解缓冲液洗涤3-5次，直至样品中没有植物组织残留。最后，GFP-Trap样品加入100 μL Dilution Buffer溶解缓冲液，并与100 μL体积的2×SDS缓冲液混合煮沸10min，所获得的样品用于IP检测。Western Blot检测结果如图11表示，在Input样品中成功检测到MdPGIP1-His融合蛋白，GFP标签蛋白以及MdPGs-GFP融合蛋白，在GFP免疫沉淀的IP样品中成功检测到GFP标签蛋白和MdPGs-GFP融合蛋白，并且只在MdPGIP1-His与MdPGs-GFP共表达的样品中检测到MdPGIP1-His融合蛋白。结果表明，MdPGIP1与MdPGs蛋白互作。
实施例8
利用原核表达系统获取MdPGIP1纯化蛋白，如图12所示，SDS-PAGE凝胶电泳和考马斯亮蓝染色检测MdPGIP1蛋白纯化成功。将MdPGIP1纯化蛋白渗透苹果叶片提高苹果叶片对苹果树腐烂病菌的抗性。
为了使MdPGIP1纯化蛋白顺利侵染苹果组培叶片，将8-10周龄生长健壮、状态一致的苹果组培叶片浸润在MdPGIP1纯化蛋白液中（浓度为600 mg/mL），置于密闭真空箱中，在真空度100kPa的气压条件下，连续进行3次，每次3 min。用无菌水将叶片表面冲洗干净，在叶片正面主叶脉两侧对称位置用无菌针头分别制造2个微创口。将苹果树腐烂病菌菌饼（直径3 mm）接种至叶片创口处。并用浸泡无菌水的脱脂棉包裹在叶片的叶柄处，防止叶片过度失水。在接种苹果树腐烂病菌36 h后，拍照观察叶片发病症状并利用Image J软件统计病变面积。如图13和图14所示，渗透MdPGIP1纯化蛋白的苹果叶片发病程度显著低于对照组，平均病变面积降低约50%。
如上所述，即可较好地实现本发明，上述的实施例仅仅是对本发明的优选实施方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种改变和改进，均应落入本发明确定的保护范围内。
Claims (10)
1.基因MdPGIP1在植物抗病性调控中的应用，其特征在于，所述基因MdPGIP1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，过表达所述基因MdPGIP1提高苹果对苹果树腐烂病菌的抗性。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述基因MdPGIP1编码蛋白MdPGIP1结合苹果树腐烂病菌分泌的多聚半乳糖醛酸酶，所述蛋白MdPGIP1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，通过抑制多聚半乳糖醛酸酶对植物细胞壁的降解作用，提高苹果对苹果树腐烂病菌的抗性。
4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述蛋白MdPGIP1的1-24位氨基酸编码信号肽，所述信号肽具备外泌功能。
5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，将所述基因MdPGIP1编码蛋白MdPGIP1渗透苹果叶片，提高苹果对苹果树腐烂病菌的抗性。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，过表达所述基因MdPGIP1提高本氏烟对核盘菌的抗性。
7.一种提高苹果抗病性的方法，其特征在于，过表达基因MdPGIP1提高对苹果树腐烂病菌的抗性，所述基因MdPGIP1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述基因MdPGIP1编码蛋白MdPGIP1，所述蛋白MdPGIP1的氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示，通过蛋白MdPGIP1结合苹果树腐烂病菌分泌的多聚半乳糖醛酸酶，抑制多聚半乳糖醛酸酶对植物细胞壁的降解作用，提高对苹果树腐烂病菌的抗性。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，将所述编码蛋白MdPGIP1渗透至苹果叶片，提高对苹果树腐烂病菌的抗性。
10.一种提高烟草抗病性的方法，其特征在于，过表达基因MdPGIP1提高本氏烟对核盘菌的抗性，所述基因MdPGIP1的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。
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Citations (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2700245A1 (fr) * | 1993-01-14 | 1994-07-13 | Bretagne Ste Indle Agricole | Purée de pomme ou de poire et son procédé de préparation. |
| KR20050086077A (ko) * | 2004-02-24 | 2005-08-30 | 주식회사 에프앤피 | 신규한 폴리갈락투로나제 저해제 단백질 및 이의 용도 |
| CN101736015A (zh) * | 2010-01-22 | 2010-06-16 | 昆明理工大学 | 火把梨多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因PpPGIP及应用 |
| CN102250921A (zh) * | 2011-06-14 | 2011-11-23 | 山东农业大学 | 一种多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因CaPGIP1及其抗病性技术 |
| CN103509806A (zh) * | 2013-09-17 | 2014-01-15 | 浙江大学 | 茶树多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因CamPGIP及其应用 |
| WO2016102586A1 (en) * | 2014-12-23 | 2016-06-30 | Università Degli Studi Di Roma "La Sapienza" | Fusion protein and transgenic plant expressing said protein |
| CN106480163A (zh) * | 2016-10-19 | 2017-03-08 | 山东农业大学 | 一种联合苹果愈伤组织细胞培养和遗传转化鉴定苹果抗病基因的方法 |
| CN110699360A (zh) * | 2019-08-23 | 2020-01-17 | 浙江大学 | 白菜抗病相关基因BrPGIP4及其应用 |
| CN114317569A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-04-12 | 西北农林科技大学 | 苹果基因MdBGLU40及在苹果树抗腐烂病中的应用 |
| CN114395565A (zh) * | 2022-03-28 | 2022-04-26 | 西北农林科技大学深圳研究院 | 苹果感病基因及其在抗病性调控中的应用 |
-
2023
- 2023-05-31 CN CN202310633873.5A patent/CN116355069B/zh active Active
Patent Citations (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2700245A1 (fr) * | 1993-01-14 | 1994-07-13 | Bretagne Ste Indle Agricole | Purée de pomme ou de poire et son procédé de préparation. |
| KR20050086077A (ko) * | 2004-02-24 | 2005-08-30 | 주식회사 에프앤피 | 신규한 폴리갈락투로나제 저해제 단백질 및 이의 용도 |
| CN101736015A (zh) * | 2010-01-22 | 2010-06-16 | 昆明理工大学 | 火把梨多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因PpPGIP及应用 |
| CN102250921A (zh) * | 2011-06-14 | 2011-11-23 | 山东农业大学 | 一种多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因CaPGIP1及其抗病性技术 |
| CN103509806A (zh) * | 2013-09-17 | 2014-01-15 | 浙江大学 | 茶树多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白基因CamPGIP及其应用 |
| WO2016102586A1 (en) * | 2014-12-23 | 2016-06-30 | Università Degli Studi Di Roma "La Sapienza" | Fusion protein and transgenic plant expressing said protein |
| US20180002705A1 (en) * | 2014-12-23 | 2018-01-04 | Università Degli Studi Di Roma "La Sapienza" | Fusion protein and transgenic plant expressing said protein |
| CN106480163A (zh) * | 2016-10-19 | 2017-03-08 | 山东农业大学 | 一种联合苹果愈伤组织细胞培养和遗传转化鉴定苹果抗病基因的方法 |
| CN110699360A (zh) * | 2019-08-23 | 2020-01-17 | 浙江大学 | 白菜抗病相关基因BrPGIP4及其应用 |
| CN114317569A (zh) * | 2021-12-15 | 2022-04-12 | 西北农林科技大学 | 苹果基因MdBGLU40及在苹果树抗腐烂病中的应用 |
| CN114395565A (zh) * | 2022-03-28 | 2022-04-26 | 西北农林科技大学深圳研究院 | 苹果感病基因及其在抗病性调控中的应用 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| DAVE K BERGER ET AL.: "Inhibitory Activities of Two Apple Polygalacturonase Inhibiting Proteins (MdPGIPs)", 《RESEARCHGATE》, pages 1 - 2 * |
| LERATO BT MATSAUNYANE ET AL.: "In silico analysis of the polygalacturonase inhibiting protein 1 from apple, Malus domestica", 《BMC》, pages 1 - 8 * |
| ZAFER DALLAL BASHI ET AL.: "Brassica napus polygalacturonase inhibitor proteins inhibit Sclerotinia sclerotiorum polygalacturonase enzymatic and necrotizing activities and delay symptoms in transgenic plants", 《CAN. J. MICROBIOL.》, vol. 59, pages 79 - 86 * |
| ZHIYUAN YIN ET AL.: "Apple resistance responses against Valsa mali revealed by transcriptomics analyses", 《PHYSIOLOGICAL AND MOLECULAR PLANT PATHOLOGY》, vol. 93, pages 85 - 92 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
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