CN103509805A - 野生茄子StoNPR1基因及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物领域，公开了野生茄子StoNPR1基因及其应用。野生茄子StoNPR1基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。采用农杆菌介导法将StoNPR1基因过表达及RNAi载体转入马铃薯中，分别获得5株过表达及4株RNAi转基因植株。过表达转基因马铃薯的发病率和病情指数均明显地低于野生型对照，约为其1/2；而RNAi转基因马铃薯的发病率和病情指数均高于野生型对照，几乎全部发病。这表明StoNPR1基因在植物对黄萎病的防卫反应中起重要作用。本发明可以用于在植物中表达以增强植物对黄萎病的抗病能力，因而具有重要的育种价值。

Description

野生茄子StoNPR1基因及其应用

技术领域

本发明属于生物领域，涉及野生茄子StoNPR1基因的克隆、重组及其应用。

背景技术

黄萎病（Verticillium Wilt）是由大丽轮枝菌（Verticillium dahliae Kleb）侵染引起的茄子重要病害之一,使植株果实小、质硬，且内部有褐色维管束病变，茎和根部的维管束变成褐色或棕褐色。植株在各个生长期均可发病，病害多在座果后开始表现症状，自下而上、或从一侧向全株扩展，是一种危害性很大的植物维管束病害。发病初期，叶缘或叶脉间褪绿变黄，逐渐发展到半边叶或整叶变黄，或黄化斑驳，或呈掌状黄斑。随着病情的发展，病株上的病叶由黄渐变成黄褐色向上卷曲，凋萎下垂以致脱落。重病株叶片往往落光，植株呈光杆或仅剩几张心叶，整株死亡。黄萎病严重影响着番茄、茄子、棉花、马铃薯等重要农作物的产量和品质，造成巨大的经济损失。

NPR1（Non-expressor of pathogenesis-related proteins-1），也被称为NIM1或SAI1，是植物防卫反应中一个重要的转录因子，参与了由水杨酸介导的SAR（Systemic acquired resistance）(Gaffney et al.1993,Cao et al.1994,Glazebrook et al.1996,Ryals et al.1997,Shah et al.1997,Wu et al.2012)。

NPR1蛋白含有一个二联核定位序列以及两个标志性的蛋白互作域，一个是处于C末端的BTB/POZ（broad-complex tramtrack bric-a-brac/POX virus andzinc finger domain），另一个是处于蛋白序列中部的ARD（ankyrin repeatdomain）(Cao et al.1997,Aravind and Koonin1999,Kinkema et al.2000,Mou et al.2003)。在没有外界刺激时，NPR1蛋白定位于细胞核和细胞质(Despréset al.2000)。当用SA处理或者是病菌侵染植株时，细胞质中NPR1寡聚物就会降解为有活性的单体转运到细胞核中。而且，该过程对于植物体内PR基因的激活是必不可少的(Tada et al.2008)。

茄子(Solanum melongena)是一种世界性的茄科蔬菜作物，大部分茄子栽培品种的抗病性不高，常常受到自然界中病菌的侵害，导致产量损失。它的野生种托鲁巴姆（Solanum torvum Swartz）对许多植物病害都有很强的抵抗能力，是一种重要的种质资源(Gousset et al.2005)。从托鲁巴姆中克隆NPR1基因并对其黄萎病抗病性评价，将为茄科作物育种提供抗性基因资源，同时将有利于加快茄子抗黄萎病品种选育进程。

发明内容

针对现有技术的上述不足，本发明提供一种野生茄子StoNPR1基因，该基因具有较高的抗黄萎病能力，可以被用于植物抗黄萎病新品种的培育。

本发明是通过如下技术方案实现的：

提供一种野生茄子StoNPR1基因，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。StoNPR1基因cDNA的全长为1743bp，编码581个氨基酸,蛋白分子量为64.46kDa,理论等电点为5.58。

本发明还提供含有所述的StoNPR1基因的重组表达载体。

本发明还提供含有所述的StoNPR1基因或所述的重组表达载体的宿主细胞。

本发明还提供所述的StoNPR1基因在构建抗黄萎病转基因植株中的应用。

有益效果：本发明克隆获得了一种新的野生茄子StoNPR1基因，采用农杆菌介导法将StoNPR1基因过表达及RNAi载体转入马铃薯中，分别获得5株过表达及4株RNAi PCR阳性转基因植株。转基因马铃薯的黄萎病抗性分析表明，过表达转基因马铃薯的发病率和病情指数均明显地低于野生型对照，而RNAi转基因马铃薯的发病率和病情指数均高于野生型对照。这表明StoNPR1基因在植物对黄萎病的防卫反应中起重要作用，将可以被用于植物抗黄萎病育种研究。

附图说明

图1StoNPR1组织表达，其中1、2、3分别表示：根、茎、叶。

图2SA和JA处理下StoNPR1的表达分析

图36叶期野生茄子接种大丽轮枝菌指定时间下，半定量RT-PCR分析。

图4pCAMBIA1304-StoNPR1的表达载体结构及酶切位点

图5pGSA1285-StoNPR1的表达载体结构及酶切位点

图6转基因株系的PCR检测

P：质粒；WT:野生型植株；M：分子量标记；O13,O20,O26,O28,O38:过表达转基因株系13,20,26,28,38.

图7转基因株系的PCR检测

P：质粒；WT:野生型植株；M：分子量标记；R1,R2,R8和R11:RNAi转基因株系1,2,8,11

图8不同转基因株系中StoNPR1表达的半定量RT-PCR分析

WT：野生型马铃薯；O13,O20,O26,O28,O38:过表达转基因株系13,20,26,28,38

图9不同转基因株系中StoNPR1表达的qRT-PCR分析

WT：野生型马铃薯；O28,O38:过表达转基因株系28,38.

图10不同转基因株系中StoNPR1表达的半定量RT-PCR分析

WT：野生型马铃薯；R1,R2,R8和R11:RNAi转基因株系1,2,8,11

图11不同转基因株系中StoNPR1表达的qRT-PCR分析

WT：野生型马铃薯；R1,R2,R8和R11:RNAi转基因株系1,2,8,11

图12V.dahliae侵染14天后转基因马铃薯及其野生型对照植株的表型

具体实施方式

实施例1StoNPR1基因的克隆

采用Trizol试剂盒法提取野生茄子托鲁巴姆（Solanum torvum Swartz）总RNA。使用宝生物工程公司的反转录酶体系进行合成cDNA第一链。

设计中间保守序列引物p0(正向引物C1:5’-CTAAAGATGTGTGTGTTTGTGTGGAC-3’（SEQ ID NO.3）和反向引物C2:5’-CAAATCATCGCCYGCCATAG-3’（SEQ ID NO.4）)，以合成的cDNA第一链PCR扩增得到StoNPR1cDNA中间保守区域。PCR产物经1.0%的琼脂糖电泳后用宝生物公司的胶回收试剂盒回收，连接到pMD18-T Vector，转化大肠杆菌DH5α，PCR检测单克隆，阳性克隆送华大基因进行测序，测序得到长约829bp的中间片段。

根据上述测序的野生茄子StoNPR1cDNA中间片段序列在NCBI上的blastn比对结果，依据序列（NP_001234558）5′端及3′端设计引物p1(正向引物C4:5’-ATGGATAGTAGRACTGCKTTTTCRGAT-3’（SEQ ID NO.5），反向引物C2:5’-CAAATCATCGCCYGCCATAG-3’)（SEQ ID NO.6）以及p2(正向引物C1:5’-CTAAAGATGTGTGTGTTTGTGTGGAC-3’（SEQ ID NO.7），反向引物C5:5’-CTATTTCCTAAADGGRAGMTTATTGGK-3’（SEQ ID NO.8）)。利用引物P1和P2进行扩增，PCR产物经1.0%的琼脂糖电泳后用宝生物公司的胶回收试剂盒回收，连接到pMD18-T Vector，转化大肠杆菌DH5α，PCR检测单克隆，送阳性克隆到华大基因进行测序，分别得到大小分别约为1220bp和1352bp两端序列。

两个扩增产物测序结果中均可以找到与中间保守区段的重叠区，这表明所获得片段均为同一基因的两端序列。拼接中间片段和两端的序列，得到全长序列。以幼叶cDNA为模板进行基因全长序列的扩增，利用引物p3(正向引物5’-CCGGATCCCTATGGGTAGTAGAGCTGCGCTT-3’（SEQ ID NO.9），反向引物5’-GACTAGTCGGTCGACGATTCTATTTCCTAGAAG-3’（SEQ ID NO.10）)进行PCR，PCR产物经1.0%的琼脂糖电泳后用宝生物公司的胶回收试剂盒回收，连接到pMD18-TVector，转化大肠杆菌DH5α，PCR检测单克隆，送阳性克隆进行测序。用DNAssist软件对测序结果进行分析，该基因ORF大小为1743bp，如SEQ ID NO.1所示，起始密码子ATG；终止密码子TAG；cDNA编码一个由581个氨基酸残基组成的蛋白序列：SEQ ID NO.2；蛋白分子量为64.46kDa；理论等电点为5.58，氨基酸序列分析表明，该基因含有NPR1蛋白所特有的结构域，因此将它命名为StoNPR1。

实施例2StoNPR1基因组织表达分析

分别提取6叶期野生茄子根、茎、叶总RNA，反转录后得到的cDNA作为模板,利用引物QN(正向引物5’-TACAGCAGAAGAGCGTCAAC-3’（SEQ ID NO.11）和反向引物5’-GCGTAGATGTAGAGGAACCAGAT-3’（SEQ ID NO.12）),进行半定量RT-PCR分别检测StoNPR1基因在野生茄子不同组织的表达。PCR扩增条件94℃预变性4min，然后94℃40s；58℃40s；72℃30s，进行30个循环，最后72℃10min。PCR产物点样,经1%的琼脂糖凝胶电泳检测。内参采用组成型表达的EF1α基因，引物分别为EF1α1：5′-GTGGTGGAGTCAATAATGAGGAC-3′（SEQ ID NO.13）和EF1α2：5′-TCGACAACAGAAACATCAGCAGT-3′（SEQ ID NO.14）。PCR条件为：94℃预变性4min，然后94℃40s；58℃30s；72℃30s，最后72℃10min，循环数为30个。结果表明该基因在所有检测的组织中都有表达，但出现差异性。其中，在根中表达量最高，茎中表达量最低（图1）。

实施例3SA、JA及大丽轮枝菌诱导下StoNPR1基因表达半定量分析

研究水杨酸（SA）和茉莉酸（JA）来胁迫下StoNPR1的表达情况。取生长整齐、健康无病的6叶期幼苗进行化学处理如下：水杨酸和茉莉酸的终浓度分别为300mM和200μm，对照处理为Tween20/水，以使其与相应的化学处理条件相似。所有植株在处理后于0h、2h、4h、12h、48h采样叶片并全部冻存与-70冰箱中。提取RNA用于半定量反转录PCR（RT-PCR）分析，内参采用组成型表达的EF1α基因。利用引物QN进行半定量RT-PCR分别检测在SA和JA处理下，野生茄子植株中StoNPR1基因的表达。PCR产物点样,经1%的琼脂糖凝胶电泳检测。半定量结果显示：StoNPR1在未处理的野生茄子叶子中有一定量的表达，在SA处理2h后表达开始上升，在12h时达到最大，随后出现下降。经JA处理后，StoNPR1的表达也出现上升，但相对于SA组，上升幅度很小，在4h时达到最高，48h时回到本底水平（图2）。

取茄子黄萎病病原菌（Verticillium dahliae Kleb）强致病菌株（由南京农业大学植保学院提供），用以下两种方法培养：①在PDA固体培养基上25℃恒温培养2周，用灭菌水收集孢子制成孢子悬浮液（浓度5×10⁷/mL）；②菌落在PDA培养基上长至直径为3～5cm，从边缘打取直径0.4cm的菌片，移入Czapeck’s液体培养基中（配方见附录11），每瓶移入2个菌片，于25℃恒温下振荡（120rpm）培养2周后，用8层纱布过滤，以考马斯亮蓝法测定并调整粗毒素浓度至8mg/mL。混合两种液体进行植株侵染以达到最强致病效果。侵染过程：从基质中小心取出整株幼苗用自来水洗净，将第1片真叶以下部分置于5mL离心管中，加入上述混合液直至与管口平，用封口膜密封管口，以防止液体蒸发。以无菌水处理为对照，接种苗置于25℃恒温生长箱，12h/12h光照/黑暗，光照度为200mmol/(m·s)。接种后于0d、1d、2d、3d、4d采样叶片并全部冻存与-70冰箱中，提取RNA用于半定量反转录PCR（RT-PCR）分析，内参采用组成型表达的EF1α基因。半定量结果显示：StoNPR1在未处理的野生茄子叶子中有一定量的表达，经大丽轮枝菌侵染2d后表达开始上升，在第3d达到最高，然后表达有所下降（图3）。

实施例4StoNPR1表达载体构建与转基因植株的获得

（1）StoNPR1过表达载体的构建

将StoNPR1基因插入到pCAMBIA1304表达载体（购买自中国质粒载体菌株细胞株基因保藏中心）CaMV35S启动子和NOS终止子之间。分别设计引物p3(正向引物5’-CCGGATCCCTATGGGTAGTAGAGCTGCGCTT-3’（SEQ ID NO.9），反向引物5’-GACTAGTCGGTCGACGATTCTATTTCCTAGAAG-3’（SEQ ID NO.10）)，下划线分别为Spe I和Bgl II酶切位点序列。以野生茄子cDNA为模板，p3为引物进行PCR扩增StoNPR1基因，琼脂糖凝胶电泳检测，回收产物，在37℃进行Spe I和Bgl II双酶切；同时，将提取pCAMBIA1304载体37℃进行SpeI和Bgl II双酶切5h后，电泳回收pCAMBIA1304载体大片段，此即为带有Spe I和Bgl II酶切位点粘性末端的质粒，可以用于连接；将上述两种酶切产物按照3～10：1摩尔比混合，在T4DNA连接酶的作用下16℃连接12h，连接产物直接用于对转化感受态大肠杆菌DH5α，PCR检测抗生素抗性单克隆，扩大培养阳性单克隆，提取重组质粒，测序验证。测序正确，表达载体构建成功，命名为pCAMBIA1304-StoNPR1。StoVe1插入载体位置见图4。

（2）StoNPR1RNAi载体的构建

将StoNPR1基因部分正义和反义片段部分分别插入到表达载体pGSA1285（invitrogen）360bp GUS内含子两端。分别设计引物P4(正向引物5’-CATGCCATGGCATGTTGTATGCCAGCAGTCGC-3’（SEQ ID NO.15）和反向引物5’-GGATTTAAATCCTCTGAGTCCAATGCCCTATG-3’（SEQ ID NO.16），下划线分别为NcoI和SwaI酶切位点)和P5(正向引物5’-GACTAGTCTTGTATGCCAGCAGTCGC-3’（SEQ ID NO.17）和反向引物5’-CGGGATCCCGTCTGAGTCCAATGCCCTATG-3’（SEQ ID NO.18），下划线分别为SpeI和BamHI酶切位点)，以野生茄子cDNA为模板，P4及P5为引物，分别进行PCR扩增，得到StoNPR1基因部分正义片段和反义片段，琼脂糖凝胶电泳检测，回收产物，进行相应的双酶切。构建RNAi载体时，首先，将提取pGSA1285载体在37℃用NcoI和SwaI进行对应的双酶切5h后，电泳回收pGSA1285载体大片段，与双酶切后的正义片段相连，连接产物直接用于对转化感受态大肠杆菌DH5α，PCR检测后，提取质粒后再用SpeI和BamHI进行双酶切，回收后与与双酶切后的反义片段相连，连接产物转化感受态大肠杆菌DH5α，PCR检测抗生素抗性单克隆，扩大培养阳性单克隆，提取重组质粒，送北京六合华大生物公司测序。测序正确，表达载体构建成功，命名为pGSA1285-StoNPR1。StoNPR1插入载体位置见图5。

（3）农杆菌转化

将构建好的pCMBIA1304-StoNPR1和pGSA1285-StoNPR1RNAi两种重组载体分别导入农杆菌GV3101和LBA4404(购买自北京天恩泽基因科技有限公司)，采用冻融热激法进行农杆菌的转化。

（4）StoNPR1转化马铃薯Désirée

预培养与共培养：选取生长期20d左右的马铃薯组培苗，将无菌苗剪切成长约0.5cm不带叶片和腋芽的茎段，接种于预培养基Y₂(MS+0.2mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+0.2mg/L2,4-D)上，在25℃黑暗条件下预培养2d。然后用OD₆₀₀=0.6的农杆菌菌液侵染茎段，侵染时间为5～10min，用滤纸吸干多余菌液后，将外植体置于共培养基Y₂(MS+0.2mg/L6-BA+0.2mg/L NAA+0.2mg/L2,4-D)上，25℃黑暗条件下共培养2d。

芽的分化再生：将共培养后的茎段用MS液洗去外植体周围的农杆菌，在滤纸上吹干，转到愈伤分化培养基MGT(MS+0.3mg/L GA₃+0.1mg/L TDZ+250mg/LCef+10mg/L Hyg B)上，在光下培养，进行愈伤诱导及芽分化培养。每15天换一次培养基。对于RNAi实验组，就是将培养基中的10mg/L Hyg B替换为2mg/LGeneticin（G418）。

再生植株的抗性筛选：一个月后，当抗性分化芽长到约1～2cm高时，剪下转入生根筛选培养基(MS+10mg/L Hyg B+250mg/L Cef)中，RNAi组将培养基中的10mg/L Hyg B替换为2mg/L G418。当幼苗生长4周左右后，具有Hyg B和G418抗性的再生植株将生根生长，保持翠绿，将抗性苗转入MS培养基，进行进行壮苗培养一个月，转移到基质塑料杯中炼苗半个月，最后被移栽在盆中，置于大棚内生长。

（5）转基因马铃薯植株的分子鉴定

提取转pCMBIA1304-StoNPR1的抗性植株总DNA，用半基因半载体特异引物P6(正向引物5’-GACAACAGTGGATTTGAACG-3’（SEQ ID NO.19）和反向引物5’-CTTGAAAAGCATTGAACACC-3’（SEQ ID NO.20）)对过表达StoNPR1马铃薯转基因组进行PCR检测，以转化植株的总DNA为模板，pCMBIA1304-StoNPR1质粒为阳性对照，野生型植株总DNA作为阴性对照。采用PCR对41株Hyg B抗性植株进行检测，有5株得到了与阳性质粒同样的目的基因片段扩增条带(583bp)，对照马铃薯植株没有产生条带(图6)，图中为PCR阳性的电泳图。

提取转pGSA1285-StoNPR1的抗性植株总DNA，用特异引物P7(正向引物5’-TACAGCGAAGAGGCAGTCAAC-3’（SEQ ID NO.21）和反向引物5’-GCGCTCTATCATAGATGTCGCT-3’（SEQ ID NO.22）)对RNAi马铃薯转基因组进行PCR检测，以转化植株的总DNA为模板，pGSA1285-StoNPR1质粒为阳性对照，野生型植株总DNA作为阴性对照。采用PCR对9株G418抗性植株进行检测，有4株得到了与阳性质粒同样的目的基因片段扩增条带(570bp)，对照马铃薯植株没有产生条带(图7)，图中为PCR阳性的电泳图。

（6）转基因马铃薯植株StoNPR1mRNA的表达分析

分别提取植物总RNA，反转录成cDNA，用EF-1a基因做内参。用目的基因引物QN对转基因马铃薯过表达组和RNAi组PCR阳性植株进行PCR，比较不同转基因株系间的表达情况。在上述均一化的模板中加入基因特异引物QN，按照以下PCR程序进行扩增。取相同体积扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳观察，通过目标条带的亮度来大致判断目标基因的表达量。分别选取苗龄约为一个月的PCR阳性盆栽转StoNPR1基因马铃薯株系和野生型马铃薯为材料，分别提取RNA，进行半定量PCR分析。结果表明，转基因株系StoNPR1mRNA表达量均比对照高，其中O28和O38两个株系的表达量最高。所以，我们选择这两个株系进行实时荧光定量PCR检测。

将反转录的cDNA稀释6倍后用作qRT-PCR的模板，以QN为引物。以EF-1a为内参，在Applied Biosystems7300实时荧光定量PCR仪(ABI公司)上进行实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析，一次平行实验设3次重复。扩增程序：94℃4min，40×(95℃20s，57℃20s,72℃40s)

相对表达量的计算：在进行完qRT-PCR后，可根据得到的CT值计算目标基因在不同株系，不同组织中的相对表达量，即2^-△△CT。其中：

ΔΔCT=(C_T.Target-C_T.EF-1α)×X-(C_T.Target-C_T.EF-1α)×T.

X表示各物种的不同组织，T表示经GAPDH校正后一倍量的目标基因表达量。

结果显示O28和O38两个株系中StoNPR1mRNA的表达量分别比对照高9.5和58.5倍。半定量PCR和实时荧光定量PCR结果基本一致(图8和图9)。

选取苗龄约为一个月的PCR阳性盆栽RNAi转基因马铃薯株系和野生型马铃薯为材料，分别提取RNA，进行半定量PCR分析（方法同上）。结果表明，RNAi转基因株系StoNPR1mRNA表达量均比对照低，其中R2的表达量最低。随后，对这四个株系进行实时荧光定量PCR检测。结果显示R1、R2、R8和R11四个RNAi株系中StoNPR1mRNA的表达量分别是对照的6/10-,1/10000-,1/10-,2/100倍。半定量PCR和实时荧光定量PCR结果基本一致(图10和图11)。

实施例5转StoNPR1基因株系的抗病性鉴定

（1）病原菌与粗毒素液的制备

取茄子黄萎病病原菌(V.dahliae)强致病菌株，用以下两种方法培养：(1)接种大丽轮枝菌于新鲜的PDA固体培养基上，25℃培养14天。用灭菌的蒸馏水收集病原菌孢子获得孢子悬浮液，浓度为5×10⁷个mL^-1。(2)菌落在PDA培养基上长至直径为3～5cm，从边缘打取直径0.4cm的菌片，移入Czapeck’s液体培养基中，每瓶移入2个菌片，于25℃恒温下振荡(120rpm·min-1)培养2周后，用8层纱布过滤，以考马斯亮蓝法测定并调整粗毒素浓度至8mg·ml^-1，混合两种液体进行植株侵染以达到最强致病效果，备用。

（2）病原菌与粗毒素液的侵染

将转基因植株与对照种于营养土中，放置于大棚，常规管理。取苗龄40天的转基因植株与对照植株，分为两组，一组用孢子浓度为5×107个mL-1的病原菌和粗毒素的混合液侵染根部，另一组用水出理做对照。

（3）病情指数调查分析

选取转基因马铃薯过表达株系O28、O38，RNAi株系R2、R11及其野生型Désirée进行黄萎病菌V.dahliae接种试验并进一步调查其病情指数。采用浓度5×10⁷个mL^-1浓度的大丽轮枝菌孢子悬浮液对40天苗龄期的转基因马铃薯和其野生型马铃薯进行侵染，每个株系各10株。接种后2d～12d内进行发病调查，以无新增发病植株时的最后一次调查结果计算病情指数和发病率。分级标准计算方法：0级：叶片上无病斑；1级：1～2枚叶片出现萎凋；2级：3～5枚叶片出现萎凋；3级：大部分叶片出现萎凋；4级：植株萎凋枯死或即将萎凋枯死(叶鹏盛，2006)。

病情指数计算方法采用反应型记载标准：免疫(I)：病情指数为0；高抗(HR)：病情指数在15以下；抗病(R)：病情指数在15～30；中抗(MR)：病情指数在30～40；感病(S)：病情指数在40～60；高感(HS)：病情指数在60以上。病情指数＝[∑(病级株数×代表数值)／(株数总和×发病最高级的代表数值)]×100。发病率的计算公式为发病率＝发病株数／调查总株数×100％。

如图12和表1所示，无论病情指数还是发病率，过表达StoNPR1的转基因株系都明显地低于对照植株，其中O38的病情指数和发病率最低，病情指数和发病率只有30和30%，而对照株系的这两个指标分别为67.5和80%。对于RNAi株系，特别是R2，其病情指数和发病率分别达到90和100%。而R11株系的这两个指标也达到了72.5和90%，都高于对照植株。在表型上，接种V.dahliae14天后，O28、O38叶片基本保持绿色，只有个别叶片变黄，而野生型马铃薯植株叶片枯黄，落叶较多。而两个RNAi株系的叶片基本都变成枯黄色，特别是R2株系整株都葳焉，茎段也出现腐烂。

表1转基因马铃薯抗病性鉴定统计结果

Claims (5)

1.一种野生茄子StoNPR1基因，其特征在于核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.含有权利要求1所述的StoNPR1基因的重组表达载体。

3.根据权利要求2所述的重组表达载体，其特征在于所述的重组表达载体是将所述的StoNPR1基因插入pCAMBIA1304表达载体CaMV35S启动子和NOS终止子之间所得。

4.含有权利要求1所述的StoNPR1基因或权利要求2所述的重组表达载体的宿主细胞。

5.权利要求1所述的StoNPR1基因在构建抗黄萎病转基因植株中的应用。

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