CN116348494A

CN116348494A - 双特异性分子和使用其的治疗方法

Info

Publication number: CN116348494A
Application number: CN202180067694.9A
Authority: CN
Inventors: E·夏; V·M·加西亚冈萨雷斯
Original assignee: Almirall SA
Current assignee: Almirall SA
Priority date: 2020-10-13
Filing date: 2021-10-12
Publication date: 2023-06-27
Also published as: CA3191403A1; JP2023546071A; AU2021361083A1; WO2022079036A1; EP4229085A1; AU2021361083A9; US20230374158A1

Abstract

本发明涉及靶向(i)IL‑13或IL‑13R和(ii)OX40L或OX40的双特异性抗原结合分子、包含其的药物组合物和使用其的治疗方法，例如用于治疗皮肤疾病或病症，如特应性皮炎。

Description

双特异性分子和使用其的治疗方法

技术领域

本发明涉及靶向(i)IL-13或IL-13R和(ii)OX40L或OX40的双特异性抗原结合分子、包含其的药物组合物和使用其的治疗方法，例如用于治疗皮肤疾病或病症，如特应性皮炎。

背景技术

特应性皮炎(AD)是慢性、复发/缓解、非传染性、瘙痒性炎性全身性皮肤疾病。它是一种常见且日益流行的疾病，在发达国家，估计影响约15-30％的儿童和2-10％的成人，估计20％的人被认为在其生命的某个时间点受到AD的影响。虽然AD可发生于任何年龄，但其通常始于儿童期，且该疾病在儿童中更常见。虽然许多人长大后不再患病，但该疾病仍在成人中流行，可能从儿童期开始作为持续性疾病发生，也可能作为成年型或复发性AD发生。AD通常与血清IgE水平升高相关，并且患者通常具有过敏性病症的个人或家族史，例如过敏性鼻结膜炎、哮喘或食物过敏(Boguniewicz等人(2017)，J Allergy Clin Immunol Pract 5(6)：1519-1531)。AD与感染和发生严重临床状况(如冠状动脉疾病、缺血性卒中和其他心血管疾病)的风险增加相关。AD患者患淋巴瘤的风险同样增加，尽管这可能是由于AD患者使用类固醇所致(Boguniewicz等人(2017))。AD的症状包括红斑、水肿、干燥、糜烂/表皮脱落、脓液渗出和结痂以及苔藓样硬化，瘙氧被认为是该疾病的标志(Kirchhof等人(2018)，JCutan Med Surg.，22(IS)6S-9S)。

AD的病理生理学被认为是复杂的，有证据表明存在遗传、环境和免疫因素的作用以及2型炎症途径的中心作用(Kirchhof等人(2018))。与主要由Th17驱动的银屑病(psoriasis)不同，AD具有多因素的病理生理学，因此，最佳疗效可能需要靶向多个途径。

双特异性药物具有靶向多个途径的潜力，与目前正在开发的其他AD生物制剂相比具有竞争优势。双特异性药物的优点可包括优于“单体(monad)”的功效，并且双特异性药物可提供与“单体”相当或更好的PK值(给药频率)以及与“单体”相当或更好的安全性特征。

许多细胞因子和其它因子与AD有关，靶向多种分子的抗体目前正处于AD的临床试验或开发中。实例包括抗IL-1a、抗IgE、抗IL-4、抗IL-4Ra、抗IL-5、抗12/23p40、抗IL-13、抗13R、抗17A、抗17C、抗IL-22R、抗IL-23A、抗IL-31、抗IL-31Ra、抗IL-33、抗IL-33R、抗OX40L和抗TSLP抗体。

辅助性T细胞2型(Th2)相关细胞因子对先天性和适应性免疫系统具有多效性作用。IL-4和IL-13与肿瘤坏死因子α协同诱导角质形成细胞产生胸腺基质淋巴细胞生成素(TSLP)，并增强免疫系统正在进行的Th 2偏斜。IL-4和IL-13下调包括丝聚蛋白、外皮蛋白和兜甲蛋白在内的几种结构屏障蛋白的mRNA表达和蛋白质合成，从而诱导皮肤屏障功能障碍和角质形成细胞介导的免疫激活的加重。由于AD的Th2驱动的炎性特征，Th2相关分子可以提供有吸引力的靶点以减少炎症并打破有害的反馈环。

然而，AD的病理生理学是复杂的。虽然2型机制占主导地位，但越来越多的证据表明，该疾病涉及多种免疫途径。在AD患者中，OX40L阳性树突状细胞(DC)的数量高度增加，并且其配体OX40在浸润淋巴细胞上的炎症部位上调。阻断OX40-OX40L途径已显示在人自身免疫性疾病的几种动物模型中具有保护性，所述疾病例如AD、哮喘、肠易激综合征、移植排斥、自身免疫性糖尿病、GvHD、自身免疫性脑脊髓炎。双重IL-13+OX-40L阻断将阻断IL-13诱发的2型反应，并且将对不同Th亚群具有广泛的抑制作用。

许多药物和治疗可用于控制AD。这些药物通常旨在减轻皮肤炎症和瘙痒，恢复皮肤屏障功能，改善健康相关生活质量(HRQoL)。可用的治疗包括保湿和基本护理(例如避免触发)、植物疗法、局部疗法和全身疗法。用于治疗AD的药物实例包括止痒霜、抗组胺药、局部皮质类固醇(TCS)和钙调磷酸酶抑制剂。近年来，已经开发了基于抗体的治疗。

现有技术中已经报道了可用治疗方法的各种缺点，包括安全性和毒性问题、对治疗的抗性发展(例如对TCS或对钙调磷酸酶抑制剂产生抗性)以及患者耐受性和便利性导致患者依从性差。因此，需要开发新的AD治疗方法。

除AD外，IL-13和OX40L已被鉴定为许多其它疾病和病症中的重要因子，因此这些细胞因子的拮抗作用可用于治疗这些疾病和病症。

其中涉及IL-13的疾病和病症的实例包括：皮肤疾病(例如特应性皮炎、结节性痒疹、慢性手部湿疹、过敏性皮炎)、哮喘、过敏性鼻炎、COPD、癌症、炎性肠病、纤维化、硬皮病和嗜酸细胞性食管炎(参见例如May R and Fung M.Cytokine 2015；75：89-116，和GandhiN.等人Nat.Rev.Drug Discover.2016；15：35-50)。

其中涉及OX40L的疾病和病症的实例包括：皮肤疾病(例如特应性皮炎、结节性痒疹、慢性手部湿疹、过敏性皮炎)、胃肠自身免疫性疾病(例如溃疡性结肠炎或克罗恩病)、过敏性脑炎、移植物抗宿主病、增生性狼疮肾炎、类风湿性关节炎、炎性肌肉疾病、炎性血管炎、哮喘和胶原诱导性关节炎(参见例如Murata等人J Immunol 2002；169：4628-4636和Hori，Internat.J.Hematol.2006；83：17-22))。

发明内容

本发明提供了双特异性抗原结合分子，其包含：第一抗原结合结构域(B1)，其为IL-13或IL-13R抗原结合结构域，和第二抗原结合结构域(B2)l其为OX40L或OX40抗原结合结构域，并且其中所述双特异性抗原结合分子特异性结合至(i)IL-13或IL-13R和(ii)OX40L或OX40。

所述双特异性抗原结合分子拮抗来自IL-13R的IL-13信号转导和来自OX40的OX40L信号转导。对信号转导的拮抗作用可以实现，因为双特异性抗原结合分子干扰每个配体和每个受体之间的相互作用，或者可以实现，因为该分子干扰配体接触之后的受体多聚化。

本发明还提供了药物组合物，其包含本发明的双特异性抗原结合分子和药学上可接受的载体。

本发明进一步提供了用于药物的本发明的双特异性抗原结合分子。

还提供了治疗患者疾病或病症的方法，其中所述疾病或病症与IL-13和/或OX40L相关或由IL-13和/或OX40L介导，并且其中所述方法包括向所述患者给予本发明的双特异性抗原结合分子。

本发明还提供了用于治疗患者疾病或病症的方法中的本发明的双特异性抗原结合分子，其中所述疾病或病症与IL-13和/或OX40L相关或由IL-13和/或OX40L介导，并且其中所述方法包括向所述患者给予本发明的双特异性抗原结合分子。

本发明还提供了本发明的双特异性抗原结合分子，其用于制备治疗患者疾病或病症的药物，其中所述疾病或病症与IL-13和/或OX40L相关或由IL-13和/或OX40L介导。

具体实施方式

应当理解，所公开的产品和方法的不同应用可以根据本领域的具体需要进行调整。还应当理解，本文所用的术语仅用于描述本发明的具体实施方案的目的，而不旨在进行限制。

此外，如本说明书和所附权利要求书中所使用的，单数形式“一种(a、an)”和“所述(the)”包括复数对象，除非内容明确地另外指明。因此，例如，术语“试剂(an agent)”包括涉及单一试剂以及多种试剂(包括试剂的混合物)。

如本文所用，术语“约”在与数值相关时是指例如数值的±25％，优选±15％，更优选±10％，还更优选±5％，最优选±2％或±1％。必要时，词语“约”可从本发明的定义中省略。

术语“多肽”在本文中以其最广泛的意义使用，是指两个或多个亚基氨基酸、氨基酸类似物或其它肽模拟物的化合物。因此，术语“多肽”包括短肽序列、较长的多肽和蛋白质。术语“氨基酸”可以指天然和/或非天然或合成的氨基酸，包括D或L光学异构体，以及氨基酸类似物和肽模拟物。

本文所指的术语“抗体”包括完整抗体及其任何抗原结合片段。虽然抗体可以呈现多种形式和特征，但抗体通常是指包含通过二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白，或其抗原结合片段。每条重链由重链可变区(本文缩写为HCVR或VH)和重链恒定区组成。每条轻链由轻链可变区(本文缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区组成。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。VH和VL区可进一步细分为高变区，称为互补决定区(CDR)，散布有更保守的区域，称为框架区(FR)。

抗体可包含具有全长重链和轻链的完整抗体分子或其抗原结合片段或由完整抗体分子或其抗原结合片段组成。术语抗体的“抗原结合片段”等包括提及保留特异性结合抗原的能力的抗体部分。已经显示抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来执行。抗体及其抗原结合片段可以是但不限于Fab、修饰的Fab、Fab’、修饰的Fab’、F(ab’)₂、Fv、单链抗体(例如VH或VL或VHH)、scFv、二价、三价或四价抗体、Bis-scFv、双体、三体、四体和上述任何一种的表位结合片段(参见例如Holliger和Hudson，2005，Nature Biotech.23(9)：1126-1136；Adair和Lawson，2005，Drug Design Reviews-Online 2(3)，209-217)。用于制造和生产这些抗体片段的方法是本领域公知的，并且可以以与完整抗体相同的方式筛选片段的用途。用于本发明的其它抗体片段包括Fab和Fab’片段，其记载于WO2005/003169、WO2005/003170和WO2005/003171，Fab-dAb片段记载于WO2009/040562。多价抗体可以包含多特异性或可以是单特异性的(参见例如WO 92/22853和WO 05/113605，DVD-Ig公开于WO2007/024715，或所谓的(FabFv)₂Fc记载于WO2011/030107)。备选的多特异性抗原结合片段包含与两个scFv或dsscFv连接的Fab，每个scFv或dsscFv结合相同或不同的靶标(例如一种scFv或dsscFv结合治疗靶标，一种scFv或dsscFv通过结合例如白蛋白而延长半衰期)。此类抗体片段描述于WO2015/197772中，其全文且特别是关于抗体片段的讨论通过引用纳入本文。这些抗体片段可以使用本领域技术人员已知的常规技术获得，并且可以以与完整抗体相同的方式筛选片段的用途。

术语抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、单特异性抗体和多特异性(例如双特异性)抗体，以及它们的抗原结合片段。多特异性抗体能够结合至少两个靶表位，通常在单独的抗原上。在本发明的双特异性抗原结合分子的情况下，所述双特异性抗原结合分子能够结合两种单独的抗原((i)IL-13或IL-13R和(ii)OX40L或OX40)。

术语抗体包括任何类别(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY抗体)或亚类(例如IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)的抗体。抗体可以是例如嵌合抗体、CDR-移植抗体、纳米抗体、人或人源化抗体、或任何前述抗体的抗原结合片段。典型地，抗体是人抗体或人抗体衍生物。术语“人抗体衍生物”等包括指人抗体的任何修饰形式，例如抗体和另一种试剂(例如药物)或抗体的缀合物。完全人抗体是重链和轻链的可变区和恒定区(如果存在)都是人源的，或与人源序列基本相同，但不一定来自同一抗体的那些抗体。

术语“疾病”、“病况”和“病症”可以在此互换使用，除非上下文明确规定。

本文引用的所有出版物、专利和专利申请，无论是上文还是下文，均全文纳入本文作为参考。

IL-13和OX40L

术语“靶向”和“针对(directed to)”等在本文中可以互换使用。本发明提供的双特异性抗原结合分子靶向(i)IL-13或IL-13R和(ii)OX40L或OX40。所述分子可用于本发明的方法中，例如用于治疗皮肤疾病或病症，如AD。本发明的分子的总类别在本文中可称为“抗IL-13/IL-13R&OX40L/OX40双特异性抗原结合分子”。

靶向IL-13/IL-13R的双特异性抗原结合分子可以特异性结合IL-13或IL-13R，靶向OX40L/OX40的双特异性抗原结合分子可以特异性结合OX40L或OX40。因此，在本发明的分子的总体类别中，提供了以下具体实施方案：

(i)特异性结合IL-13和OX40L的双特异性抗原结合分子(本文任选地称为“抗IL-13/OX40L双特异性抗原结合分子”)；

(ii)特异性结合IL-13和OX40的双特异性抗原结合分子(本文任选地称为“抗IL-13/OX40双特异性抗原结合分子”)；

(iii)特异性结合IL-13R和OX40L的双特异性抗原结合分子(本文任选地称为“抗IL-13R/OX40L双特异性抗原结合分子”)；以及

(iv)特异性结合IL-13R和OX40的双特异性抗原结合分子(本文任选地称为“抗IL-13R/OX40双特异性抗原结合分子”)。

选项(i)是特别优选的。

通过结合每个IL-13/IL-13R和OX40L/OX40相互作用的至少一个配体，双特异性抗原结合分子拮抗IL-13和OX40L。因此，本发明的双特异性抗原结合分子是IL-13拮抗剂以及OX40L拮抗剂。术语“拮抗剂”等包括指抑制或减弱配体分子(例如IL-13或OX40L)的一种或多种生物活性(例如当与其受体结合时由配体分子介导的细胞内信号转导)的物质(例如本发明的双特异性抗原结合分子)。拮抗剂可以抑制或减弱配体与其受体的结合或相互作用(通过结合靶标或受体)，但也可以例如抑制受体的二聚化而不影响配体与受体的结合。在一些实施方案中，配体与其受体之间的结合被完全或基本阻断。拮抗剂可以例如是中和抗体。

在一些实施方案中，拮抗剂可抑制受体的二聚化或多聚化，而不抑制或减弱配体与一种或多种受体的结合或相互作用。例如，在IL-13拮抗作用的情况下，抗原结合分子可通过抑制IL4 Ra/IL13Ra1二聚化来抑制IL-13信号转导，而不抑制IL13与IL13Ra1或IL13Ra2的结合。在一些实施方案中，受体的二聚化可被完全或基本抑制。作为另一个实例，在OX40L拮抗作用的情况下，抗原结合分子可以通过抑制OX40多聚化来抑制OX40L信号转导，而不抑制OX40L与OX40的结合。在一些实施方案中，受体的多聚化可被完全或基本抑制。

本文所用的表述“IL-13”(白介素-13)包括任何天然哺乳动物IL-13序列(例如人、非人灵长类动物(例如猴)或小鼠)，优选人IL-13。该术语包括全长、未加工的IL-13以及由细胞加工产生的任何形式的IL-13。该术语包括野生型蛋白质、天然存在的变体，例如剪接变体或等位基因变体，以及任何其它同种型和突变形式，以及任何前述蛋白质的修饰和未修饰形式。IL-13包括例如可以重组或通过合成方法产生的蛋白质，其具有与天然存在的或内源性哺乳动物IL-13相同的氨基酸序列。当相应的哺乳动物是人时，所述蛋白质可称为hIL-13。来自不同物种的IL-13的核苷酸和氨基酸序列已经被确定，并可容易地从公共序列数据库获得。术语hIL-13包括可在UniProtKB登录号P35225获得的或如SEQ ID NO.1和SEQID NO.2(分别含有和不含有信号肽)中所示的示例性hIL-13序列，以及其生物活性片段和其它可能由其细胞加工产生的hIL-13序列。在某些情况下，IL-13序列可以包含信号肽，其可以任选地是外源的，即非天然的信号肽。在其它情况下，IL-13蛋白是不含信号肽的成熟蛋白。

本文所用的表述“IL-13R”(白介素-13受体)通常指“共有的”IL-4/IL-13受体，其由IL-4Ra链亚基和IL-13Ra1链亚基形成的复合物组成，但也可包括“私有的”IL-13受体，其由单个IL-13Rα2链亚基组成。IL-4Rα和IL-13Rα1的异源二聚化以形成IL-13R是由IL-13结合诱导的，并促进Janus激酶(JAK)/信号转导因子和转录激活因子(STAT)途径的激活，导致STAT6磷酸化。磷酸化的STAT6作为转录因子激活许多基因。IL-13还可以以非常高的亲和力与单链IL-13Rα2结合，所述单链IL-13Rα2被认为是IL-13的负调节因子。

IL-13R通常是哺乳动物的(例如人、非人灵长类动物(例如猴)或小鼠)，优选人。该术语包括全长、未加工的亚基以及由细胞加工产生的任何形式的亚基。该术语包括野生型蛋白质、天然存在的变体，例如剪接变体或等位基因变体，以及任何其它同种型和突变形式，以及任何前述蛋白质的修饰和未修饰形式。IL-13R包括例如可以重组或通过合成方法产生的蛋白质，其具有与天然存在的或内源性哺乳动物IL-13R亚基相同的氨基酸序列。当相应的哺乳动物是人时，所述蛋白质可称为hIL-13R。来自不同物种的IL-13R亚基的核苷酸和氨基酸序列已经被确定，并可容易地从公共序列数据库获得。术语hIL-13R包括蛋白质，该蛋白质包含以下序列或由以下序列组成：

-可在UniProtKB登录号P78552获得的或如SEQ ID NO.5中所示的示例性hIL-13Rα1序列；

-可在UniProtKB登录号Q14627获得的或如SEQ ID NO.6中所示的示例性hIL-13Rα2序列；

-可在UniProtKB登录号P24394获得的或如SEQ ID NO.7中所示的示例性IL-4Rα序列；

以及其生物活性片段和其它可能由其细胞加工产生的序列。在某些情况下，上述序列可以包含信号肽，其可以任选地是外源的，即非天然的信号肽。在其它情况下，IL-13R蛋白是不含信号肽的成熟蛋白。

存在能够拮抗IL-13信号转导的不同结合模式。例如，来瑞组单抗(lebrikizumab)通过以极高亲和力结合IL-13并阻断IL-13与IL-4Rα结合来抑制IL-13信号转导(Ultsch等人J Mol Biol.2013)，而曲罗芦单抗(tralokinumab)可阻止IL-13与IL-13Rα1和IL-13Rα2结合(Popovic等人J Mol Biol.2017)。在这两种情况下，STAT6的磷酸化和随后的基因表达结果都被阻止。

测定IL-13拮抗作用的测定法是已知的，并且可以使用任何合适的测定法。合适的测定法包括使用已设计用于评估IL-13诱导的STAT6途径的活化的细胞系。合适的细胞系可以在STAT6应答性启动子的控制下表达报告基因。例如，可以修饰细胞，使其在与4个STAT6结合位点融合的IFN-β最小启动子的控制下表达分泌型胚胎碱性磷酸酶(SEAP)。在这些细胞中，STAT6途径的激活诱导报告基因的表达(例如SEAP)。报告分子的表达可以使用任何已知的方法检测。例如，使用SEAP检测试剂(如QUANTI-Blue Solution)可以很容易地评估分泌到上清液中的SEAP。试验中使用的细胞系必须具有完全活性的STAT6信号转导途径。因此，当细胞系是HEK(例如，HEK293)，人STAT6基因必须被稳定转染。在一个实施方案中，用于IL-13拮抗试验的HEK细胞是HEK-Blue IL-4/IL-13报告细胞(InvivoGen)。

或者，在人原代角质形成细胞(两个供体)中IL-13诱导的STAT6磷酸化测定可用于测定IL-L3拮抗作用。

例如，原代角质形成细胞(例如NHEK，成人皮肤，Lonza)可在补充有牛垂体提取物(25μg/ml)和重组表皮生长因子(EGF)(0.25ng/ml)的角质形成细胞无血清培养基(SFM)中培养。角质形成细胞在刺激前缺乏生长因子，然后用人重组IL-13的系列稀释液刺激。在10-60次刺激后，测定pSTAT6的细胞内水平，例如，使用AlphaLISA SureFire Ultra p-STAT6(Tyr641)分析试剂盒(ALSU-PST6-A500，PerkinElmer)。

本文所用的表述“OX40L”(OX40配体，肿瘤坏死因子配体超家族成员4)包括任何天然哺乳动物OX40L序列(例如人、非人灵长类动物(例如猴)或小鼠)，优选人OX40L。该术语包括全长、未加工的OX40L以及由细胞加工产生的任何形式的OX40L。该术语包括野生型蛋白质、天然存在的变体，例如剪接变体或等位基因变体，以及任何其它同种型和突变形式，以及任何前述蛋白质的修饰和未修饰形式。OX40L包括例如可以重组或通过合成方法产生的蛋白质，其具有与天然存在的或内源性哺乳动物OX40L相同的氨基酸序列。当相应的哺乳动物是人时，所述蛋白质可称为hOX40L。来自不同物种的OX40L的核苷酸和氨基酸序列已经被确定，并可容易地从公共序列数据库获得。术语hOX40L包括OX40L的全长、未加工的183个氨基酸序列，例如可在UniProtKB登录号P43489获得的或如SEQ ID NO.3中所示的，以及其生物活性片段和其他可能由其细胞加工产生的hOX40L序列，例如通过蛋白酶或替代性剪接(例如全长hOX40L蛋白的残基51-183)。包含SEQ ID No.3的残基51-183的示例性hOX40L序列如SEQ ID No.4所示。

本文所用的表述“OX40”(OX40，肿瘤坏死因子受体超家族成员4)包括任何天然哺乳动物OX40序列(例如人、非人灵长类动物(例如猴)或小鼠)，优选人OX40。该术语包括全长、未加工的OX40以及由细胞加工产生的任何形式的OX40。该术语包括野生型蛋白质、天然存在的变体，例如剪接变体或等位基因变体，以及任何其它同种型和突变形式，以及任何前述蛋白质的修饰和未修饰形式。OX40包括例如可以重组或通过合成方法产生的蛋白质，其具有与天然存在的或内源性哺乳动物OX40相同的氨基酸序列。

当相应的哺乳动物是人时，所述蛋白质可称为hOX40。来自不同物种的OX40L的核苷酸和氨基酸序列已经被确定，并可容易地从公共序列数据库获得。术语hOX40包括蛋白质，其包含可在UniProtKB登录号P43489获得的或如SEQ ID NO.8中所示的示例性OX40序列，以及其生物活性片段和其它可能由其细胞加工产生的序列，或由上述序列组成。在某些情况下，上述序列可以包含信号肽，其可以任选地是外源的，即非天然的信号肽。在其它情况下，OX40蛋白是不含信号肽的成熟蛋白。

OX40L是肿瘤坏死因子超家族的成员，其安排形成功能性同源三聚体。OX40的三个拷贝与三聚体配体结合形成OX40-OX40L复合物。受体聚集是信号转导途径完全激活所必需的。与OX40和OX40L结合的抗体被描述为能够拮抗由OX40L-OX40复合物形成诱导的细胞内信号转导(Compaan等人Structure 2006；Croft等人Immunol Rev.2009；Webb等人Review.Clinic Rev Allerg Immunol.2016；Guttman-Yassky等人J Allergy ClinImmunol)。

测定OX40L拮抗作用的测定法是已知的，并且可以使用任何合适的测定法。合适的测定法包括设计用于通过监测NF-κB和AP-1途径的活化来检测生物活性OX40L的那些测定法。例如，所述测定法可以使用在NF-κB/AP-1应答性启动子控制下表达报告基因的细胞系。根据这些测定法，人OX40L与这些细胞表面上的同源三聚体OX40受体的结合触发了信号级联，导致NF-κB活化和随后报告基因的产生。

或者，在用次优浓度的抗CD3(引发(primed))处理的CD3阳性T细胞或PBMC(来自两个供体)中的OX40L诱导的IL2和IFNγ表达可用于测定OX40L-OX40拮抗作用。例如，PBMC可以通过密度梯度离心从来自供体的新鲜人全血中纯化。然后将分离的PBMC在补充有10％FBS、2mM L-谷氨酰胺、100U/mL青霉素和100μg mL链霉素的RPMI 1640中铺板，然后将细胞与次优浓度的抗CD3和人重组OX40L的系列稀释液一起孵育。将细胞孵育过夜，然后可以根据制造商的说明书通过ELISA(R&D Systems，#D2050和#DY285)测量培养物上清液中的IL2和IFNγ水平。

或者，表达OX40L的细胞中的OX40L反向信号转导(back-signalling)可用于测定OX40L-OX40拮抗作用。例如，THP-1细胞系的细胞可由LPS引发，并在OX40(ECD)和/或基准和鉴定的抗体存在下孵育。IL6水平可以根据制造商的说明书通过ELISA(R&D Systems，#D6050)测量。OX40L的内化也可以通过FACS在相同条件下使用生物素缀合的人OX40蛋白的系列稀释液或使用生物素缀合的抗OX40L抗体并使用例如链霉亲和素-别藻蓝蛋白染色来测量。

前面段落或本文其它地方所述的所有数据库条目的内容通过全文引用纳入本文。

本文使用的术语IL-13、IL-13R、OX40L和OX40通常分别指hIL-13、hIL13R、hOX40L和hOX40。因此，除非上下文清楚地另外指明，本文提及的IL-13、IL-13R、OX40L和OX40应理解为是指其人形式。

双特异性抗原结合分子

如本文所用，术语“双特异性抗原结合分子”包括任何抗原结合构建体，其具有结合并优选地中和两种不同的抗原/靶标(在本发明中(i)IL-13或IL-13R和(ii)OX40L或OX40)的生物学功能的能力。双特异性抗原结合分子可以采取多种形式，并且可以例如是蛋白质、多肽或分子复合物。双特异性抗原结合分子可以是例如单个多功能多肽，或者它可以是两个或多个共价或非共价结合多肽的多聚体复合物。在示例性实施方案中，双特异性抗原结合分子是双特异性抗体。本发明的双特异性结合分子在治疗与IL-13和/或OX40L相关或由IL-13和/或OX40L介导的疾病或病症(例如AD)中可以有利地显示比使用分别针对两种靶向相互作用之一的单特异性药物的组合的治疗方案更高的效力和/或功效。

本发明的双特异性抗原结合分子包括特异性结合(i)IL-13或IL-13R和(ii)OX40L或OX40的抗IL13/OX40L结合分子。测定两个分子是否彼此特异性结合的方法是本领域公知的。K_D可用作结合分子及其靶标/抗原的亲和力的量度。较低的K_D值表示对靶标的较高亲和力。如本文所用，术语“特异性结合”等可指存在以K_D值≤1μM、≤500nM、≤250nM、≤100nM、≤50nM、≤25nM、≤10nM、≤5nM、≤2.5nM、≤2nM、≤1nM、≤0.5nM、≤0.4nM、≤0.25nM、≤0.1nM、≤0.05nM、≤0.01nM、≤0.005nM或≤0.001nM为特征的结合亲和力。

因此，本发明的抗IL-13/OX40L双特异性抗原结合分子可特异性结合IL-13或IL-13R，其K_D值≤1μM、≤500nM、≤250nM、≤100nM、≤50nM、≤25nM、≤10nM、≤5nM、≤2.5nM、≤2nM、≤1nM、≤0.5nM、≤0.4nM、≤0.25nM、≤0.1nM、≤0.05nM、≤0.01nM、≤0.005nM或≤0.001nM，和/或可特异性结合OX40L或OX40，其K_D值≤1μM、≤500nM、≤250nM、≤100nM、≤50nM、≤25nM、≤10nM、≤5nM、≤2.5nM、≤2nM、≤1nM、≤0.5nM、≤0.4nM、≤0.25nM、≤0.1nM、≤0.05nM、≤0.01nM、≤0.005nM或≤0.001nM。

在方法领域中存在用于确定解离常数K_D值的各种方法，例如表面等离子体共振(SPR)。在本发明的上下文中，K_o值优选地于25℃和/或37℃下使用表面等离子体共振(例如具有Biacore^TM系统)测定。

在某些实施方案中，抗IL-13/IL-13R和OX40L/OX40双特异性抗原结合分子可包含抗IL-13或抗IL13R抗体(例如人或人源化抗IL-13或抗IL-13R抗体)或其抗原结合片段和/或可包含抗OX40L或抗OX40抗体(例如人或人源化抗OX40L或抗OX40抗体)或其抗原结合片段。在一些实施方案中，双特异性抗原结合分子是双特异性抗体，例如二价、三价或四价双特异性抗体。在某些实施方案中，双特异性抗原结合分子是DVD-Ig形式的抗体和/或包含抗体可变结构域和T细胞受体的多肽复合物(TCR)恒定区，其中所述TCR恒定区能够形成包含至少一个非天然链间键的二聚体(WO2019057122中记载了这种类型的复合物，并且在本文中可以称为WuXibody)。

抗原结合结构域和其他组分

本发明的双特异性抗原结合分子包括包含第一抗原结合结构域(B1)和第二抗原结合结构域(B2)的双特异性抗原结合分子，其中第一抗原结合结构域是IL-13或IL-13R抗原结合结构域，其中第二抗原结合结构域是OX40L或OX40抗原结合结构域；此类双特异性抗原结合分子在本文中通常称为“抗IL-13/IL-13R&OX40L/OX40双特异性抗原结合分子”。在本发明的此类分子中，提供了以下具体实施方案：

换言之，双特异性抗原结合分子是此类分子，其中：

i)B1特异性结合IL-13，并且B2特异性结合OX40L；

ii)B1特异性结合IL-13R，并且B2特异性结合OX40L；

iii)B1特异性结合IL-13，并且B2特异性结合OX40；或

iv)B1特异性结合IL-13R，并且B2特异性结合OX40；

选项(i)是特别优选的。

本发明的抗IL-13/IL-13R&OX40L/OX40双特异性抗原结合分子可以包含一个或多个其他的IL-13或IL-13R结合结构域。因此，设想了存在例如两个或三个IL-13结合结构域，或例如两个或三个IL-13R结合结构域的实施方案。在存在多于一个IL-13结合结构域的实施方案中，两个或多个IL-13结合结构域可以彼此相同、基本相同或不同。在存在多于一个IL-13R结合结构域的实施方案中，两个或多个IL-13R结合结构域可以彼此相同、基本相同或不同。

本发明的抗IL-13/IL-13R&OX40L/OX40双特异性抗原结合分子可以包含一个或多个其他的OX40L或OX40结合结构域。因此，设想存在例如两个或三个OX40L结合结构域，或例如两个或三个OX40结合结构域的实施方案。在存在多于一个OX40L结合结构域的实施方案中，两个或多个OX40L结合结构域可以彼此相同、基本相同或不同。在存在多于一个OX40结合结构域的实施方案中，两个或多个OX40结合结构域可以彼此相同、基本相同或不同。

术语“抗原结合结构域”和“结合结构域”等在本文中可互换使用。抗原结合结构域通常能够特异性结合特定的目标抗原(例如IL-13、IL-13R、OX40L或OX40)，例如以≤1μM、≤500nM、≤250nM、≤100nM、≤50nM、≤25nM、≤10nM、≤5nM、≤2.5nM、≤2nM、≤1nM、≤0.5nM、≤0.4nM、≤0.25nM、≤0.1nM、≤0.05nM、≤0.01nM、≤0.005nM或≤0.001nM的K_D值特异性结合。

可用于本发明的抗原结合结构域的实例包括基于免疫球蛋白的抗原结合结构域和非基于免疫球蛋白的抗原结合结构域。因此，抗原结合结构域的实例包括衍生自免疫球蛋白或抗体或衍生自除免疫球蛋白或抗体以外的来源(例如，衍生自具有免疫球蛋白样结合特性的蛋白质结合分子)的结合结构域。如本文所用，术语“衍生自”等包括提及无论是直接还是间接，可以从特定来源获得的给定实体(例如抗原结合结构域、抗体)，并且任选地具有一个或多个修饰，例如具有一个或多个突变。

抗原结合结构域(例如IL-13或IL-13R抗原结合结构域或OX40L或OX40抗原结合结构域)可以例如包含抗体或其抗原结合片段(例如Fab、scFab、Fv和scFv)或由抗体或其抗原结合片段组成。可用于实施本发明的抗原结合片段的非限制性实例包括Fab片段、F(ab’)₂片段、Fab’片段、Fd片段、Fv片段、dAb片段、分离的互补决定区(CDR)、单链抗体，如scFv以及重链抗体，如VHH和骆驼抗体(camel antibody)以及本文其它地方公开的其它抗原结合片段。通常抗体的抗原结合片段包含一个或多个CDR(例如HCDR3任选地与一个或多个其他的CDR(例如来自HCVR/LCVR对的一组六个CDR)组合)。

用于本发明的抗体可以通过任何合适的方法获得。例如，抗体可以通过使用公知的和常规的方案将多肽给予动物(例如非人动物)来获得(参见例如Handbook ofExperimental Immunology，D.M.Weir(ed.)，Vol 4，Blackwell Scientific Publishers，Oxford，England，1986)。许多温血动物，如兔、小鼠、大鼠、绵羊、牛、骆驼或猪可以被免疫。然而，小鼠、兔、猪和大鼠通常是最合适的。单克隆抗体可以通过本领域已知的任何方法制备，例如杂交瘤技术(Kohler&Milstein，1975，Nature，256：495-497)、三瘤技术、人B细胞杂交瘤技术(Kozbor等人，1983，Immunology Today，4：72)和EBV-杂交瘤技术(Cole等人，Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy，pp77-96，Alan R Liss，Inc.，1985)。抗体也可以使用单淋巴细胞抗体方法通过克隆和表达免疫球蛋白可变区cDNA来产生，所述cDNA由选择用于产生特异性抗体的单淋巴细胞产生，所述方法例如记载于Babcook，J.等人，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93(15)：7843-78481；WO 92/02551；WO 2004/051268andWO 2004/106377。抗体也可使用本领域已知的各种噬菌体展示法产生，包括以下方法：公开于Brinkman等人(在J.Immunol.Methods，1995，182：41-50)、Ames等人(J.Immunol.Methods，1995，184：177-186)、Kettleborough等人(Eur.J.Immunol.1994，24：952-958)、Persic等人(Gene，1997 187 9-18)、Burton等人(Advances in Immunology，1994，57：191-280)和WO90/02809；WO91/10737；WO92/01047；WO92/18619；WO93/11236；WO95/15982；WO95/20401；和US5,698,426、5,223,409、5,403,484、5,580,717、5,427,908、5,750,753、5,821,047、5,571,698、5,427,908、5,516,637、5,780,225、5,658,727、5,733,743和5,969,108。获得和鉴定可用于实施本发明的抗体的方法包括以下方法：记载于ImmunoQure专利申请WO2013/098419(“Methods of Providing Monoclonal Auto-Antibodies with Desired Specificity”)、WO2013/098420(“Method of IsolatingHuman Antibodies”)、和WO2015/001407(“Method of Providing Anti-Human CytokineAntibodies for Pharmaceutical Use”)。

非抗体抗原结合结构域也预期用于本发明的实施。因此，抗原结合结构域(例如IL-13或IL-13R抗原结合结构域或OX40L或OX40抗原结合结构域)可以例如衍生自或包含或由以下组成：非抗体支架蛋白、DARPin(设计的锚蛋白重复蛋白)、抗运载蛋白(anticalin)或脂质运载白蛋(lipocalin)、affibody、avimer、adnectin、atrimer或evasin等。

本文所述的不同类型抗原结合结构域的组合涵盖在本发明的双特异性抗原结合分子内。因此，例如，抗原结合结构域可各自独立地包含抗体或抗体的抗原结合片段或由其组成，或衍生自、或包含非抗体支架蛋白、DARPin(设计的锚蛋白重复蛋白)、抗运载蛋白(anticalin)或脂质运载白蛋(lipocalin)、affibody、avimer、adnectin、atrimer或evasin等，或由其组成。

在某些实施方案中，B1和/或B2可包含抗体(例如IgG抗体，如IgG1或IgG4)或由其组成。

在某些实施方案中，BI和/或B2可包含抗体的抗原结合片段(例如Fv片段(例如scFv)、Fab片段)或由其组成。

在某些实施方案中，B1和/或B2可衍生自、或包含非抗体支架蛋白、DARPin(设计的锚蛋白重复蛋白)、抗运载蛋白(anticalin)或脂质运载白蛋(lipocalin)、affibody、avimer、adnectin、atrimer或evasin或由其组成。

在某些实施方案中，B1包含抗体(例如IgG抗体，如IgG1或IgG4)或由其组成，B2包含抗体的抗原结合片段(例如Fv片段(例如scFv)、Fab片段)或由其组成。

在某些实施方案中，B1包含抗体的抗原结合片段(例如Fv片段(例如scFv)、Fab片段)或由其组成，B2包含抗体(例如IgG抗体如IgG1或IgG4)或由其组成。

本发明的双特异性抗原结合分子可通过任何合适的方法生产。例如，所述分子的全部或部分可以由包含编码所述分子的核苷酸的细胞表达为融合蛋白。或者，分子的各部分可以分别生产，例如通过任选地在单独的细胞中由单独的核苷酸表达，随后连接在一起。

除了所述至少两个抗原结合结构域之外，所述双特异性抗原结合分子可以任选地包含一种或多种其它组分。此类一种或多种其它组分可以例如促进抗原结合结构域彼此的缔合或结合。可纳入本发明的双特异性抗原结合分子中的一种或多种其它组分的非限制性实例包括接头(例如肽接头和铰链区)和Fc结构域及其片段，例如重链Fc区或CH3结构域。因此，在某些实施方案中，本发明的双特异性抗原结合分子包含Fc结构域，优选人Fc结构域，或其片段。人Fc结构域可以是天然或变体的人Fc结构域。

Fc结构域由两条多肽链组成，每条多肽链称为重链Fc区，其二聚化形成Fc结构域。Fc结构域可以是天然或变体的Fc结构域(例如具有一个或多个氨基酸插入、缺失或替换)。Fc结构域可以例如被修饰或工程化以使其更好地适合于其预期的药理学用途，例如改变(例如增加)半衰期和/或改变效应物功能。优选Fc结构域是人Fc结构域。Fc结构域或区可以来自任何合适的抗体类别，例如IgA、IgD、IgE、IgG或IgM，或其亚类(例如IgA1、IgA2、IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。优选地，Fc结构域是人的和/或IgG结构域，例如IgG1或IgG4。在天然抗体中，Fc结构域内的Fc区通常是相同的，但出于本发明的目的，Fc结构域内的两个Fc区(如果存在)可以是相同的或不同的，例如来自不同的抗体类别或亚类(例如来自两个不同的IgG类别)。

本文所用的术语“接头”等包括指连接本发明双特异性抗原结合分子的两个或多个不同组分的任何分子或实体。接头的实例包括肽接头和非免疫球蛋白多肽，如白蛋白(例如，两个或多个抗原结合结构域可与白蛋白(例如HSA)连接以形成双特异性抗原结合分子，其包含分别与白蛋白分子结合的两个或多个抗原结合结构域)。铰链区也可用于连接本发明的抗原结合分子的组分，例如将抗原结合结构域(例如以抗体的抗原结合片段，如Fab片段的形式)结合至Fc区。铰链区通常位于Fc区的N-末端。铰链区可以是天然的或修饰的/变体的铰链区。

本发明的抗原结合分子的组分(例如B1和B2)可以通过任何合适的方式彼此连接。组分可以直接彼此连接，或通过一个或多个合适的分子(例如通过接头或铰链区)间接彼此连接。因此，例如，本发明的双特异性抗原结合分子可包含融合蛋白或由其组成，所述融合蛋白包含B1和B2，任选地通过肽接头连接。在本发明的实践中设想了直接和/或间接方式的各种组合，因此可以使用各种直接和/或间接方式来连接本发明的双特异性抗原结合分子的组分。在一些实施方案中，抗原结合结构域通过Fc结构域或其片段彼此连接。通常，Fc结构域需要使用铰链区，因此抗原结合结构域可以例如经由一个或多个铰链区通过Fc结构域连接。

本发明的双特异性抗原结合分子可以任选地直接或间接连接到其他部分，例如治疗性部分。因此，在一些实施方案中，双特异性抗原结合分子(例如双特异性抗体)与一种或多种其他治疗剂缀合。

双特异性抗体

本发明的双特异性抗原结合分子可以是双特异性抗体。本发明的抗体通常是单克隆抗体。本发明的抗体可以例如是嵌合抗体、CDR-移植抗体、纳米抗体、人或人源化抗体或任何前述抗体的抗原结合片段。通常所述抗体是人抗体。如上所述，抗体可包含具有全长重链和轻链或其抗原结合片段的完整抗体分子。因此，本发明的抗体可包含具有全长重链和轻链的完整抗体分子或由其组成，或可包含其抗原结合片段或由其组成。

本发明的双特异性抗体分子的恒定区结构域(如果存在)可以根据所提出的抗体分子的功能，特别是可能需要的效应物功能来选择。例如，恒定区结构域可以是人IgA、IgD、IgE、IgG或IgM结构域。通常，恒定区结构域是人的。特别地，可以使用人IgG(即IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)恒定区结构域，例如人IgG1或IgG4恒定区结构域。轻链恒定区可以是λ或κ。

本发明的双特异性抗体可以是人抗体。本文所用的术语“人抗体”包括具有可变区的抗体，其中构架区和CDR区均来源于人种系免疫球蛋白序列。此外，如果抗体含有恒定区，则恒定区也衍生自人种系免疫球蛋白序列。人抗体可包括不是由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机或位点特异性诱变或体内体细胞突变引入的突变)。然而，本文所用的术语“人抗体”不需包括其中衍生自另一哺乳动物物种(例如小鼠)种系的CDR序列已经移植到人框架序列上的抗体。

本领域技术人员还应当理解，抗体可以经历多种翻译后修饰。修饰的类型和程度通常取决于用于表达抗体的宿主细胞系以及培养条件。此类修饰可能包括糖基化、甲硫氨酸氧化、二酮哌嗪形成、天冬氨酸异构化和天冬酰胺脱酰胺的变异。常见的修饰是由于羧肽酶的作用而丢失羧基末端碱性残基(如赖氨酸或精氨酸)(如记载于Harris，RJ.Journal ofChromatography 705：129-134，1995)。

完全人抗体是重链和轻链的可变区和恒定区(如果存在)都是人源的，或与人源序列基本相同，但不一定来自同一抗体的那些抗体。完全人抗体的实例可包括例如通过上述噬菌体展示法生产的抗体和由小鼠生产的抗体，其中鼠免疫球蛋白可变区和任选地恒定区基因已被它们的人对应物取代，例如以一般术语记载于EP0546073、US5,545,806、US5,569,825、US5,625,126、US5,633,425、US5,661,016、US5,770,429、EP0438474和EP0463151。

术语“人源化抗体”是指CDR-移植的抗体分子，其中衍生自另一哺乳动物物种种系(如小鼠)的CDR序列已经移植到人框架序列上。可以在人框架序列内进行其它框架区修饰。如本文所用，术语“CDR-移植的抗体分子”是指此类抗体分子，其中重链和/或轻链含有一个或多个来自供体抗体(例如鼠或大鼠单克隆抗体)的CDR(如果需要，包括一个或多个修饰的CDR)，所述CDR被移植到受体抗体(例如人抗体)的重链和/或轻链可变区框架中。关于综述，参见Vaughan等人，Nature Biotechnology，16，535-539，1998。在一个实施方案中，不是转移整个CDR，而是仅将来自任何一个CDR的一个或多个特异性决定残基转移至人抗体框架(参见例如Kashmiri等人，2005，Methods，36，25-34)。当CDR或特异性决定残基被移植时，考虑到CDR来源的供体抗体的种类/类型，可以使用任何合适的受体可变区框架序列，包括小鼠、灵长类和人框架区。合适地，根据本发明的CDR移植抗体具有包含人受体框架区以及一个或多个CDR或特异性决定残基的可变结构域。

本发明的抗体可以是“分离的”抗体。分离的抗体是基本上不含具有不同抗原特异性的其它抗体的抗体。

多种双特异性抗体形式和生产方法是本领域已知的，并且任何合适的形式和生产方法可用于本发明的实践。有许多可用的双特异性抗体形式，但一般而言，双特异性抗体可分为IgG样和非IgG样双特异性抗体。IgG样双特异性抗体包含Fc结构域，并且可以进一步分类为对称IgG样双特异性抗体(例如双可变结构域(DVD)-Ig)和非对称IgG样双特异性抗体。非IgG样双特异性抗体缺少Fc结构域，并且可以例如通过将两种不同的抗原结合抗体片段融合到非免疫球蛋白蛋白(例如人血清白蛋白(HSA))上、通过直接融合两种抗原结合抗体片段、或通过化学缀合两种不同的抗体或较小的抗原结合抗体片段来制备。这些IgG样和非IgG样形式和生产技术中的任何一种都可用于本发明的实践。对于双特异性抗体的综述，包括可用于实施本发明的示例性双特异性抗体形式和生产方法(如下文讨论中所概述的)，参考了Kontermann和Brinkmann(2017)，“The making of bispecific antibodies”，Mabs，Feb-Mar 9(2)：182-199；Kontermann和Brinkmann(2015年6月)，“Bispecificantibodies”，Drug Discovery Today，20(7)：838-847；Sedykh等人(2018)，“Bispecificantibodies：design，therapy，perspectives”，Drug Design，Development and Therapy，12：195-208；和Fan等人(2015)，“Bispecific antibodies and their applications”，Journal of Hematology and Oncology，8：130。

根据本发明的示例性双特异性抗体和技术包括但不限于不对称IgG样、对称IgG样(例如，包含两个Fab区和一个Fc结构域)、非IgG样、四价体瘤(quadromas)、WuXi抗体、DVD-Ig、杵臼(knob-in-hole)(kih)、IgG-scFv融合体、二合一或双重作用Fab(DAF)抗体、半分子交换、κλ抗体、CrossMab、CrossFab、Triomab(SEED)抗体、亮氨酸拉链、共同轻链(例如，kihIgG共同LC)、ortho-Fab IgG、二合一IgG、scFv2-Fc、三抗体(triabodies)、基于scFv的或双抗体双特异性形式、串联scFv、单链双抗体、纳米抗体、dock-and-lock(DNL)方法、双纳米抗体、双特异性T细胞衔接子(BiTE)、串联双抗体(tandAbs)、化学连接的Fab、二价和三价scFv、双亲和重靶向(DART)、DART-Fc、scFv-HSA-scFv和DNL-Fab3双特异性抗体。

在一个实施方案中，双特异性抗体是双可变结构域免疫球蛋白(DVD-Ig)。DVD-Ig可从两个亲本mAb产生，通过将来自亲本mAb之一的两个可变结构域(而非一个可变结构域)置于另一亲本抗体的重链和轻链上以产生四价IgG样分子。

本发明的双特异性抗体可以是WuXibody。WuXibody的详细描述可参见WO 2019/057122(WuXi Biologics)。术语“WuXibody”包括双特异性抗体，其包含具有抗体可变结构域和T细胞受体(TCR)恒定区的可溶性嵌合蛋白，其中TCR恒定区能够形成包含至少一个非天然链间键的二聚体；在WO 2019/057122中沿着其的生产方法和各种可能的WuXibody形式更详细地描述了此类WuXi抗体。

更具体地，本文所用的术语WuXibody可以指双特异性多肽复合物，其包含与第二抗原结合部分结合的第一抗原结合部分，其中：

(i)所述第一抗原结合部分包含：第一多肽，其从N末端至C末端包含与第一TCR恒定区(C1)可操作连接的第一抗体的第一重链可变结构域(VH)，和第二多肽，其从N末端至C末端包含与第二TCR恒定区(C2)可操作连接的第一抗体的第一轻链可变结构域(VL)，其中：C1和C2能够形成二聚体，所述二聚体包含C1中包含的第一突变残基和C2中包含的第二突变残基之间的至少一个非天然链间键，并且所述非天然链间键能够稳定所述二聚体，且所述第一抗体具有第一抗原特异性；

(ii)所述第二抗原结合部分具有不同于所述第一抗原特异性的第二抗原特异性，

并且与第一和第二抗原结合部分都是天然Fab的对应物的情况相比，第一抗原结合部分和第二抗原结合部分更不易错配。

在本发明的双特异性抗体中，WuXibody的第一抗原特异性可以针对IL-13或IL-13R，第二抗原特异性可以针对OX40L或OX40。或者，第一抗原特异性可针对OX40L或OX40，第二抗原特异性可针对IL-13或IL13R。

可用于本发明的WuXibody的TCR恒定区对(C1和C2)的实例包括，例如，α/β、前α/β和γ/δTCR恒定区。TCR恒定区可为全长或片段，且可经工程化改造(例如，以包含一个或一个以上突变)，只要该TCR恒定区对能够彼此缔合以形成二聚体。

本发明的WuXibody可以以任何合适的双特异性形式提供。双特异性形式的实例包括本文所述的那些以及WO2019/057122中记载的双特异性形式。WuXi抗体的抗原结合片段包括在本发明的范围内，并且也记载于WO2019/057122中。

药物组合物

本发明的双特异性抗原结合分子(例如本发明的双特异性抗体)可以配制成药物组合物给药。因此，本发明的双特异性抗原结合分子可以以包含双特异性抗原结合分子和药学上可接受的载体的药物组合物的形式提供。

如本文所用，“药学上可接受的载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣(coating)、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等生理上相容的物质。优选地，所述载体适合于肠胃外给药，例如静脉内、肌内或皮下给药(例如，通过注射或输注)、局部或口服给药。优选的药学上可接受的载体包括水性载体或稀释剂。可用于本发明的组合物的合适水性载体的实例包括水、缓冲水和盐水。其它载体的实例包括乙醇、多元醇(例如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合适的混合物、植物油(例如橄榄油)和可注射的有机酯(例如油酸乙酯)。在许多情况下，优选在组合物中包括等渗剂，例如糖、多元醇(如甘露醇)、山梨醇或氯化钠。

药物组合物通常必须是无菌的并且在制造和储存条件下是稳定的。该组合物可以配制成溶液、微乳液、脂质体或其它适合于高药物浓度的有序结构。

本发明的药物组合物可以包含一种或多种额外的活性成分以及本发明的双特异性抗原结合分子。

治疗用途

在本发明的另一方面，提供了用作药物的本发明的双特异性抗原结合分子。本发明还提供了治疗疾病或病症的方法，所述方法包括将本发明的双特异性抗原结合分子给予需要其的受试者，从而治疗所述疾病或病症。

如上所述，IL-13和OX40L已被鉴定为多种疾病和病症中的重要因子，因此，本发明的双特异性抗原结合分子可用于治疗此类疾病和病症。因此，本发明的一个方面提供了治疗患者中与IL-13和/或OX40L相关或由IL-13和/或OX40L介导的疾病或病症的方法，该方法包括给予患者本发明的抗IL-13/IL-13R&OX40L/OX40双特异性抗原结合分子(例如双特异性抗体)。本发明还提供了本发明的抗IL-13/IL-13R&OX40L/OX40双特异性抗原结合分子，其用于治疗与IL-13和/或OX40相关或由IL-13和/或OX40L介导的疾病或病症的方法。本发明还提供了本发明的抗IL-13/IL-13R&OX40L/OX40双特异性抗原结合分子，其用于制备治疗与IL-13和/或OX40L相关或由IL-13和/或OX40L介导的疾病或病症的药物。

与特定细胞因子(此处为IL-13或OX40L)相关的短语“与……相关或由其介导的疾病或病症”等包括提及与细胞因子的表达、信号传导或活性相关或由其介导的疾病或病症，或可通过拮抗细胞因子治疗，例如通过阻断细胞因子与细胞因子配体之间的相互作用或通过抑制活性和/或细胞因子的信号转导。与IL-13和/或OX40L相关或由IL-13和/或OX40L介导的疾病或病症的实例包括皮肤疾病(例如，特应性皮炎、结节性痒疹、慢性手部湿疹、过敏性皮炎、银屑病、扁平苔藓、化脓性汗腺炎)、哮喘、过敏性疾病(例如，过敏性鼻炎)、心血管疾病(例如，心肌梗塞、心脏肥大相关疾病)、动脉粥样硬化、肌肉骨骼疾病(类风湿性关节炎)、COPD、年龄相关性黄斑变性、牙周炎葡萄膜炎、癌症、炎性肠病、纤维变性、硬皮病或嗜酸性食管炎。

本发明的双特异性抗原结合分子可用于治疗皮肤疾病或病症，例如特应性皮炎、结节性痒疹、慢性手部湿疹、过敏性皮炎、银屑病、扁平苔藓或化脓性汗腺炎。因此，本发明提供了治疗患者的皮肤疾病或病症的方法，包括给予患者本发明的双特异性抗原结合分子(例如双特异性抗体)。本发明还提供了本发明的双特异性抗原结合分子，其用于治疗皮肤疾病或病症的方法。本发明还提供了本发明的双特异性抗原结合分子，其用于制备治疗皮肤疾病或病症的药物。

在本发明中，治疗可以是针对患有疾病或病症的患者，或者可以是针对要预防疾病或病症的患者，例如倾向于患有疾病或病症或处于患有疾病或病症的风险中的患者。因此，本文所用术语“治疗”等包括治疗性和预防性治疗。术语“治疗”可以例如指预防疾病或病症的发生、延迟疾病或其一种或多种症状的发作、使患者的疾病或医学病症消退、抑制疾病或医学病症(例如减缓疾病或医学病症的发展，或降低突发的严重性和/或频率)，或在一定程度上减轻患者疾病或医学病症的一种或多种症状。AD的症状包括瘙痒、红斑、水肿、干燥、糜烂/表皮脱落、脓液渗出和结痂、苔藓样硬化、皮肤屏障受损和泛红。术语“治疗”等不一定需要完全的治疗或预防，因此该术语可以包括不同程度的治疗或预防。

在治疗性应用中，给药是对已经患有疾病或病症的受试者。此类治疗性处理可以例如治愈、减轻或部分阻止疾病或病症或其一种或多种症状。因此，治疗性给药可导致症状严重性降低，或无症状期的频率或持续时间增加。足以实现治疗有用效果的量可称为“治疗有效量”。

在预防性应用中，给药对象是尚未或目前尚未表现出疾病或病症症状的对象。此类预防性治疗可以例如预防、延迟或降低疾病或病症或其一种或多种症状的发展的严重程度。足以实现预防有用效果的量可称为“预防有效量”。可以通过任何合适的方法将受试者鉴定为处于发生疾病或病症的风险中。所述患者可能倾向于患有所述疾病或病症或处于患所述疾病或病症的风险中(例如，具有所述疾病或病症的家族史或个体史的患者)，或在其中所述病症需要预防。

治疗和预防有效量将取决于疾病或病症的严重程度以及受试者的体重和一般状态。应当理解，通过构建数值矩阵并测试矩阵中的不同点，可以使用常规实验来确定合适的剂量，这均在受过训练的医师的普通技能范围内。

本文所用术语“治疗”可以指疾病或病症的严重程度或生活质量(QoL)的改善。各种测试程序和评分系统可用于评估疾病严重程度(例如轻度、中度、中度至重度或重度)和生活质量，并且可使用任何一种或多种合适的测量法。AD的疾病严重程度和生活质量指标概述参见例如Rehal和Armstrong(2011)，Plos ONE 6(4)：e17520和Gooderham等人(2018)，J Cutan Med Surg.，22(IS)10S-16S)。AD患者疾病严重程度的一个常用指标是湿疹面积严重程度指数(EASI)。AD的合适疾病严重程度和QoL测量的其它实例包括：特应性皮炎评分(SCORAD)、体表面积(BSA)评估、医生的总体评估(PGA)、研究者总体评估(IGA)、皮炎严重程度指数(ADSI)、六面积、六体征特应性皮炎(SASSAD)、研究者特应性皮炎总体评估(IGADA)、瘙痒-视觉模拟量表(瘙痒-VAS)、5-D瘙痒量表、皮肤病生活质量指数(DLQI)、儿童皮肤病生活质量指数(CDLQI)、皮炎家庭影响(DFI)、婴儿皮肤病学和生活质量(IDQOL)以及医疗结果睡眠研究(MOSS)。

本发明的双特异性抗原结合分子可以例如用于治疗急性或慢性AD。本发明的双特异性抗原结合分子可用于治疗轻度、中度、中度至重度或重度AD。疾病严重程度可以由技术人员使用标准测试方法容易地确定，例如通过使用一种或多种上述疾病严重程度的测量法或AD的生活质量测量法，例如EASI。

术语“患者”和“受试者”在本文中可互换使用，并且所述术语包括任何人或非人动物(优选地为哺乳动物)。本文所用的术语“哺乳动物”是指哺乳动物纲的任何成员，包括但不限于人和非人灵长类动物(如黑猩猩)和其它猿和猴物种；家畜，如牛、绵羊、猪、山羊和马；家养/伴侣动物，如狗和猫：以及兔和啮齿类动物，如小鼠、大鼠和豚鼠等。通常，本发明涉及对人类患者的给药。人类患者可以是成年患者(18岁或更大)。或者，人类患者可以是儿科患者(小于18岁)。在一些情况下，患者可能小于12岁。在某些实施方案中，所述受试者是已被鉴定为患有可能对本发明的双特异性抗原结合分子有反应的病症或症状的人类患者。

给药

本发明的双特异性抗原结合分子和药物组合物可以使用本领域已知的多种方法中的一种或多种通过一种或多种给药途径给药。如本领域技术人员所理解的，给药途径和/或模式将根据所需结果而变化。给药途径可包括静脉内、肌内、皮内、腹膜内、皮下或其它肠胃外给药途径，例如通过注射或输注。本文所用短语“肠胃外给药”是指除肠内和局部给药(通常通过注射)以外的给药方式。在一些实施方案中，本发明的双特异性抗原结合分子(例如本发明的双特异性抗体)通过注射(优选地通过皮下或静脉内注射)给予患者。或者，本发明的双特异性抗原结合分子可以通过非肠胃外途径给药，例如通过局部或口服给药。

本发明的双特异性抗原结合分子的合适剂量可由熟练的医务人员确定。本发明的药物组合物中活性成分的实际剂量水平可以变化，以便获得对于特定患者、组合物和给药方式有效地实现所需治疗反应而对患者没有毒性的活性成分的量。所选择的剂量水平将取决于多种药代动力学因素，包括所用特定双特异性抗原结合分子的活性、给药途径、给药时间、双特异性抗原结合分子的排泄速率、治疗持续时间、与所用特定组合物组合使用的其它药物、化合物和/或材料、被治疗患者的年龄、性别、体重、状态、一般健康状况和既往病史，以及医学领域公知的类似因素。

本发明的双特异性抗原结合分子的合适剂量可以是例如，在约0.1μg/kg至约100mg/kg待治疗患者体重的范围内。例如，合适的剂量可以是每天约1μg/kg至约10mg/kg体重或每天约10g/kg至约5mg/kg体重。

在初始剂量之后可以给予第二或多个后续剂量。第二和后续剂量可以间隔适当的时间。剂量和频率可以根据患者中双特异性抗原结合分子的半衰期和所需的治疗持续时间而变化。给药剂量和频率也可以根据治疗是预防性还是治疗性的而变化。在预防性应用中，可以在长时间内以相对不频繁的间隔给予相对低的剂量。在治疗性应用中，可以给予相对高的剂量，例如直到患者表现出症状的部分或完全改善。

额外的药物/单独治疗方法

本发明的双特异性抗原结合分子可以与用于预防或治疗疾病或病症的额外的药物和/或治疗方法组合给药。两种或多种药剂的联合给药可以通过许多不同的方式实现。在一个实施方案中，双特异性抗原结合分子和另一种药剂可以在单一组合物中一起给药。在另一个实施方案中，双特异性抗原结合分子和另一种药剂可以作为联合治疗的一部分在单独的组合物中给药。例如，双特异性抗原结合分子可以在另一种药剂之前、同时或之后给药。单独的组合物可以通过相同的途径或不同的途径给药。

合适的药物和/或治疗的实例在本领域中有记载。例如，关于AD，参见例如Dhadwal等人(2018)，J Cutan Med Surg.，22(IS)21S-29S)。在AD的情况下，实例包括局部治疗(例如局部皮质类固醇和局部钙调磷酸酶抑制剂)、光线疗法和全身性治疗(例如全身性皮质类固醇、甲氨蝶呤、环孢菌素A、霉酚酸酯和硫唑嘌呤)。

序列表的简要描述

SEQ ID NO：1是包括信号肽的示例性人IL-13序列的氨基酸序列(对应于Swiss-Prot登录号P35225)。

SEQ ID NO：2是不含SEQ ID NO.1的氨基酸残基1-35的信号肽的示例性人IL-13序列的氨基酸序列。

SEQ ID NO：3是示例性全长未加工的人OX40L序列的氨基酸序列(对应于UniProtKB登录号P43489)。

SEQ ID NO：4是对应于SEQ ID NO.3的残基51-183的示例性人OX40L序列的氨基酸序列。

SEQ ID NO：5是示例性人IL-13Rα1序列的氨基酸序列(对应于UniProtKB登录号P78552)。

SEQ ID NO：6是示例性人IL-13Rα2序列的氨基酸序列(对应于UniProtKB登录号Q14627)。

SEQ ID NO：7是示例性人IL-4Rα序列的氨基酸序列(对应于UniProtKB登录号P24394)。

SEQ ID NO：8是示例性人OX40序列的氨基酸序列(对应于UniProtKB登录号P43489)。

非正式序列表

SEQ ID NO:1

SEQ ID NO:2

PVPPSTALRELIEELVNITQNQKAPLCNGSMVWSINLTAGMYCAALESLINVSGCSAIEKTQRMLSGFCPHKVSAGQFSSLHVRDTKIEVAQFVKDLLLHLKKLFREGRFN

SEQ ID NO:3

MERVQPLEENVGNAARPRFERNKLLLVASVIQGLGLLLCFTYICLHFSALQVSHRYPRIQSIKVQFTEYKKEKGFILTSQKEDEIMKVQNNSVI INCDGFYLISLKGYFSQEVNISLHYQKDEEPLFQLKKVRSVNSLMVASLTYKDKVYLNVTTDNTSLDDFHVNGGELILIHQNPGEFCVL

SEQ ID NO:4

QVSHRYPRIQSIKVQFTEYKKEKGFILTSQKEDEIMKVQNNSVI INCDGFYLISLKGYFSQEVNISLHYQKDEEPLFQLKKVRSVNSLMVASLTYKDKVYLNVTTDNTSLDDFHVNGGELILIHQNPGEFCVL

SEQ ID NO:5

MEWPARLCGLWALLLCAGGGGGGGGAAPTETQPPVTNLSVSVENLCTVIWTWNPPEGASSNCSLWYFSHFGDKQDKKIAPETRRSIEVPLNERICLQVGSQCSTNESEKPSILVEKCISPPEGDPESAVTELQCIWHNLSYMKCSWLPGRNTSPDTNYTLYYWHRSLEKIHQCENIFREGQYFGCSFDLTKVKDSSFEQHSVQIMVKDNAGKIKPSFNIVPLTSRVKPDPPHIKNLSFHNDDLYVQWENPQNFISRCLFYEVEVNNSQTETHNVFYVQEAKCENPEFERNVENTSCFMVPGVLPDTLNTVRIRVKTNKLCYEDDKLWSNWSQEMSIGKKRNSTLYITMLLIVPVIVAGAIIVLLLYLKRLKII IFPPIPDPGKIFKEMFGDQNDDTLHWKKYDIYEKQTKEETDSVVLIENLKKASQ

SEQ ID NO:6

MAFVCLAIGCLYTFLISTTFGCTSSSDTEIKVNPPQDFEIVDPGYLGYLYLQWQPPLSLDHFKECTVEYELKYRNIGSETWKTI ITKNLHYKDGFDLNKGIEAKIHTLLPWQCTNGSEVQSSWAETTYWISPQGIPETKVQDMDCVYYNWQYLLCSWKPGIGVLLDTNYNLFYWYEGLDHALQCVDYIKADGQNIGCRFPYLEASDYKDFYICVNGSSENKPIRSSYFTFQLQNIVKPLPPVYLTFTRESSCEIKLKWSIPLGPIPARCFDYEIEIREDDTTLVTATVENETYTLKTTNETRQLCFVVRSKVNIYCSDDGIWSEWSDKQCWEGEDLSKKTLLRFWLPFGFILILVIFVTGLLLRKPNTYPKMIPEFFCDT

SEQ ID NO:7

MGWLCSGLLFPVSCLVLLQVASSGNMKVLQEPTCVSDYMSISTCEWKMNGPTNCSTELRLLYQLVFLLSEAHTCIPENNGGAGCVCHLLMDDVVSADNYTLDLWAGQQLLWKGSFKPSEHVKPRAPGNLTVHTNVSDTLLLTWSNPYPPDNYLYNHLTYAVNIWSENDPADFRIYNVTYLEPSLRIAASTLKSGISYRARVRAWAQCYNTTWSEWSPSTKWHNSYREPFEQHLLLGVSVSCIVILAVCLLCYVSITKIKKEWWDQIPNPARSRLVAI I IQDAQGSQWEKRSRGQEPAKCPHWKNCLTKLLPCFLEHNMKRDEDPHKAAKEMPFQGSGKSAWCPVEISKTVLWPESISVVRCVELFEAPVECEEEEEVEEEKGSFCASPESSRDDFQEGREGIVARLTESLFLDLLGEENGGFCQQDMGESCLLPPSGSTSAHMPWDEFPSAGPKEAPPWGKEQPLHLEPSPPASPTQSPDNLTCTETPLVIAGNPAYRSFSNSLSQSPCPRELGPDPLLARHLEEVEPEMPCVPQLSEPTTVPQPEPETWEQILRRNVLQHGAAAAPVSAPTSGYQEFVHAVEQGGTQASAVVGLGPPGEAGYKAFSSLLASSAVSPEKCGFGASSGEEGYKPFQDLIPGCPGDPAPVPVPLFTFGLDREPPRSPQSSHLPSSSPEHLGLEPGEKVEDMPKPPLPQEQATDPLVDSLGSGIVYSALTCHLCGHLKQCHGQEDGGQTPVMASPCCGCCCGDRSSPPTTPLRAPDPSPGGVPLEASLCPASLAPSGISEKSKSSSSFHPAPGNAQSSSQTPKIVNFVSVGPTYMRVS

SEQ ID NO:8

MCVGARRLGRGPCAALLLLGLGLSTVTGLHCVGDTYPSNDRCCHECRPGNGMVSRCSRSQNTVCRPCGPGFYNDVVSSKPCKPCTWCNLRSGSERKQLCTATQDTVCRCRAGTQPLDSYKPGVDCAPCPPGHFSPGDNQACKPWTNCTLAGKHTLQPASNSSDAICEDRDPPATQPQETQGPPARPITVQPTEAWPRTSQGPSTRPVEVPGGRAVAAILGLGLVLGLLGPLAILLALYLLRRDQRLPPDAHKPPGGGSFRTPIQEEQADAHSTLAKI

б

<110> ALMIRALL, S.A.

<120> 双特异性分子和使用其的治疗方法

<130> N422962WO

<150> EP20382897

<151> 2020-10-13

<160> 4

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 146

<212> PRT

<213> 智人 Homo sapiens

<400> 1

Met His Pro Leu Leu Asn Pro Leu Leu Leu Ala Leu Gly Leu Met Ala

1 5 10 15

Leu Leu Leu Thr Thr Val Ile Ala Leu Thr Cys Leu Gly Gly Phe Ala

20 25 30

Ser Pro Gly Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu

35 40 45

Glu Leu Val Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly

50 55 60

Ser Met Val Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala

65 70 75 80

Leu Glu Ser Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr

85 90 95

Gln Arg Met Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln

100 105 110

Phe Ser Ser Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe

115 120 125

Val Lys Asp Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg

130 135 140

Phe Asn

145

<210> 2

<211> 111

<212> PRT

<213> 智人 Homo sapiens

<400> 2

Pro Val Pro Pro Ser Thr Ala Leu Arg Glu Leu Ile Glu Glu Leu Val

1 5 10 15

Asn Ile Thr Gln Asn Gln Lys Ala Pro Leu Cys Asn Gly Ser Met Val

20 25 30

Trp Ser Ile Asn Leu Thr Ala Gly Met Tyr Cys Ala Ala Leu Glu Ser

35 40 45

Leu Ile Asn Val Ser Gly Cys Ser Ala Ile Glu Lys Thr Gln Arg Met

50 55 60

Leu Ser Gly Phe Cys Pro His Lys Val Ser Ala Gly Gln Phe Ser Ser

65 70 75 80

Leu His Val Arg Asp Thr Lys Ile Glu Val Ala Gln Phe Val Lys Asp

85 90 95

Leu Leu Leu His Leu Lys Lys Leu Phe Arg Glu Gly Arg Phe Asn

100 105 110

<210> 3

<211> 183

<212> PRT

<213> 智人 Homo sapiens

<400> 3

Met Glu Arg Val Gln Pro Leu Glu Glu Asn Val Gly Asn Ala Ala Arg

1 5 10 15

Pro Arg Phe Glu Arg Asn Lys Leu Leu Leu Val Ala Ser Val Ile Gln

20 25 30

Gly Leu Gly Leu Leu Leu Cys Phe Thr Tyr Ile Cys Leu His Phe Ser

35 40 45

Ala Leu Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val

50 55 60

Gln Phe Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln

65 70 75 80

Lys Glu Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn

85 90 95

Cys Asp Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu

100 105 110

Val Asn Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln

115 120 125

Leu Lys Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr

130 135 140

Tyr Lys Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu

145 150 155 160

Asp Asp Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn

165 170 175

Pro Gly Glu Phe Cys Val Leu

180

<210> 4

<211> 133

<212> PRT

<213> 智人 Homo sapiens

<400> 4

Gln Val Ser His Arg Tyr Pro Arg Ile Gln Ser Ile Lys Val Gln Phe

1 5 10 15

Thr Glu Tyr Lys Lys Glu Lys Gly Phe Ile Leu Thr Ser Gln Lys Glu

20 25 30

Asp Glu Ile Met Lys Val Gln Asn Asn Ser Val Ile Ile Asn Cys Asp

35 40 45

Gly Phe Tyr Leu Ile Ser Leu Lys Gly Tyr Phe Ser Gln Glu Val Asn

50 55 60

Ile Ser Leu His Tyr Gln Lys Asp Glu Glu Pro Leu Phe Gln Leu Lys

65 70 75 80

Lys Val Arg Ser Val Asn Ser Leu Met Val Ala Ser Leu Thr Tyr Lys

85 90 95

Asp Lys Val Tyr Leu Asn Val Thr Thr Asp Asn Thr Ser Leu Asp Asp

100 105 110

Phe His Val Asn Gly Gly Glu Leu Ile Leu Ile His Gln Asn Pro Gly

115 120 125

Glu Phe Cys Val Leu

130

Claims

1.双特异性抗原结合分子，其包含第一抗原结合结构域(B1)和第二抗原结合结构域(B2)，其中第一抗原结合结构域是IL-13或IL-13R抗原结合结构域，其中第二抗原结合结构域是OX40L或OX40抗原结合结构域，并且其中所述双特异性抗原结合分子特异性结合至(i)IL-13或IL-13R和(ii)OX40L或OX40。

2.根据权利要求1所述的双特异性抗原结合分子，其拮抗来自IL-13R的IL-13信号转导和来自OX40的OX40L信号转导。

3.根据权利要求1或2所述的双特异性抗原结合分子，其中

v)B1特异性结合IL-13，并且B2特异性结合OX40L；

vi)B1特异性结合IL-13R，并且B2特异性结合OX40L；

vii)B1特异性结合IL-13，并且B2特异性结合OX40；或

viii)B1特异性结合IL-13R，并且B2特异性结合OX40。

4.根据前述权利要求任一项所述的双特异性抗原结合分子，其中所述IL-13或IL-13R抗原结合结构域包含抗体或其抗原结合片段或由抗体或其抗原结合片段组成，且其中所述抗体优选为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

5.根据前述权利要求任一项所述的双特异性抗原结合分子，其中所述OX40L或OX40抗原结合结构域包含抗体或其抗原结合片段或由抗体或其抗原结合片段组成，且其中所述抗体优选为嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

6.根据前述权利要求任一项所述的双特异性抗原结合分子，其中所述双特异性抗原结合分子是双特异性抗体或其抗原结合片段，并且任选地其中所述双特异性抗体是单克隆抗体和/或嵌合抗体、人源化抗体或人抗体。

7.根据权利要求6所述的双特异性抗原结合分子，其中：(a)所述双特异性抗体包含IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区，任选地为人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4恒定区；和/或(b)所述双特异性抗体为：i)IgG样双特异性抗体；或ii)非IgG样双特异性抗体。

8.根据权利要求7所述的双特异性抗原结合分子，其中所述IgG样双特异性抗体为：i)对称IgG样双特异性抗体(例如DVD-Ig双特异性抗体)；或ii)非对称IgG样双特异性抗体。

9.根据权利要求6所述的双特异性抗原结合分子，其中所述双特异性抗体包含抗体的可变结构域和T细胞受体(TCR)恒定区，其中所述TCR恒定区能够形成包含至少一个非天然链间键的二聚体。

10.药物组合物，其包含权利要求1至9中任一项所述的双特异性抗原结合分子和药学上可接受的载体。

11.治疗患者疾病或病症的方法，其中：(i)所述疾病或病症与IL-13和/或OX40L相关或由其介导，且其中所述方法包括向所述患者给予根据权利要求1至9任一项所述的双特异性抗原结合分子，或根据权利要求9的包含双特异性抗原结合分子的药物组合物。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述疾病或病症选自：皮肤疾病(例如，特应性皮炎、结节性痒疹、慢性手部湿疹、过敏性皮炎、银屑病、扁平苔藓、化脓性汗腺炎)、哮喘、过敏性疾病(例如，过敏性鼻炎)、心血管疾病(例如，心肌梗塞、心脏肥大相关疾病)、动脉粥样硬化、肌肉骨骼疾病(类风湿性关节炎)、COPD、年龄相关性黄斑变性、牙周炎葡萄膜炎、癌症、炎性肠病、纤维变性、硬皮病或嗜酸性食管炎。

13.根据权利要求11或12所述的方法，其中：(i)所述疾病或病症是皮肤疾病，例如特应性皮炎；(ii)通过注射(任选地为皮下注射)向患者给予所述双特异性抗原结合分子；和/或(iii)所述患者是人类患者。

14.根据权利要求11至13任一项所述的方法，其中所述方法进一步包括给予额外的药物和/或进行单独的平行治疗方法以治疗所述疾病或病症。

15.根据权利要求1至9任一项所述的双特异性抗原结合分子，其用于治疗患者的疾病或病症的方法，其中所述疾病或病症与IL-13和/或OX40L相关或由IL-13和/或OX40L介导。

16.双特异性抗原结合分子在制备用于治疗疾病或病症的方法中的药物中的用途，其中所述双特异性抗原结合分子和所述方法如权利要求1至14任一项所定义。