CN116333028A - 一种从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物及其方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物及其方法和应用，其结构式如式（Ⅰ）所示。该甾体内酯类化合物是以干燥的南非醉茄提取物为原料，经甲醇回流提取、硅胶柱层析、C18反相色谱分离等步骤提取分离得到，为一种具有新型结构及药理活性的新的甾体内酯类化合物，可作为在制备抗肺癌药物中的应用，并为制备抗癌新药以及在甾体内酯类物质药用研究等方面提供了可靠的依据。
Description
技术领域
本发明属于植物化学技术领域，具体来说，涉及一种从南非醉茄提取物中提取分离得到的具有药理活性的甾体内酯类化合物及其方法和在抗癌药物中的应用。
背景技术
南非醉茄(Withania somnifera)，又叫冬樱花，虽然其学名为“南非醉茄”，其实是印度土生土长，且随处可见的地道药材。南非醉茄属植物广泛分布于南非、南美洲、亚洲西部、大西洋东北部等地，特别是在印度阿育吠陀医药中得到广泛运用，其中南非醉茄又被称为印度人参。南非醉茄被公认具有显著的抗氧化能力和增强免疫力的功能。南非醉茄内含有醉茄内酯、甾类内酯、生物碱、铁等，其
中醉茄内酯可以抑制癌细胞生长，有消炎作用；同时可用于慢性发炎如狼疮及风
湿性关炎；并且具有减少白带，提高性功能的作用；还有助于慢性疾病的康复。
生物碱有降血压、镇静止痛的功能。据民间报道，其鲜叶捣烂敷用可治烧伤、日
光灼伤、肿胀；与大蒜共捣敷用可治虫蝎、蛇咬伤；根粉末治妇女不育。巴基斯
坦用其治疗各种溃疡、肿瘤、腺结核和痈，还被用作利尿剂和解热药。南非醉茄内酯类化合物基本分布在茄科Solanaceae的一些植物属中，主要有南非醉茄（睡茄）属Withania Panqug，其次还有酸浆属Physalis L.、曼陀罗属Datura L.、枸杞属Lycium L.、Trechonuetes Miers.、Nicandra Adans等。
南非醉茄提取物(Ashwagandha Ayurvedic Extract) 与我国的人参一样具有强壮、兴奋与提高人体免疫力等多种功效。本发明在对南非醉茄提取物活性成分进行研究时，发现并分离得到了一种新的药用化合物，该化合物为甾体内酯类化合物，药理活性研究表明其具有一定的抗肺癌活性，对研究和开发新型抗肺癌药物提供了科学依据。
发明内容
本发明的目的之一在于提供一种从南非醉茄提取物中提取分离到的甾体内酯类化合物。通过从南非醉茄提取物药材中提取分离得到具有新型结构及药理活性的新化合物，为进一步探明南非醉茄提取物的化学成分以及药理作用提供了参考依据。
本发明的目的之二在于提供一种从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物的方法。它是以干燥的南非醉茄提取物为原料，经甲醇回流提取、减压浓缩、硅胶柱层析分离纯化、C18反相色谱填料高压制备分离等工艺步骤，获得一种具有新型结构及药理活性的甾体内酯类化合物，该方法操作步骤简单、易于控制，可确保新化合物的纯度达99%以上，且整个生产流程耗时短，适用于工业化生产。
本发明的目的之三在于提供一种从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物在制备抗肺癌药物中的应用，为制备抗肺癌新药提供可靠的依据。
本发明的目的通过下述技术方案实现：一种从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物，结构式如式（Ⅰ）所示：
所述结构式如式（Ⅰ）所示的甾体内酯类化合物为从干燥的南非醉茄提取物中经提取分离得到，其化学名称为：6-((1S)-1-((3aS，5bS，8R)-6，8-二羟基-3a，5 b-二甲基-1，2，3，3a，4，5，5a，5b，8，9，9a，10，10a，10 b-四十氢环戊二烯[a]芴-3-基)乙基)-3-(羟甲基)-4-甲基-5，6-二氢-2H-吡喃-2-酮，自命名为：南非醉茄内酯A2，其分子量为444，分子式为C27H40O5。
所述南非醉茄提取物为南非醉茄Withania somnifera的提取物。
该化合物的结构目前未见有文献报道，同时药理实验表明该化合物对体外培养的PC-9细胞增殖具有抑制活性，具有一定的抗肺癌活性。因此，本发明提供的从南非醉茄提取物中提取分离的南非醉茄内酯A2化合物可应用于抗肺癌药物的制备。
本发明一种从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物的方法，包括以下步骤：
（1）回流提取：将干燥的南非醉茄提取物，用浓度为90wt%的甲醇加热回流提取，得到提取液；
（2）减压浓缩：将步骤（1）得到的提取液减压至无醇后，再将浓缩液甲醇溶解（甲醇可将目标物溶解出），过滤，滤液硅胶拌样后，经干燥处理得到拌样物；
（3）硅胶柱层析：将步骤（2）得到的拌样物湿法上硅胶柱进行柱层析分离纯化，收集含甾体内酯类化合物的流分，减压浓缩至干得到目标产品；
（4）C18反相色谱柱分离：将步骤（3）得到的目标产品用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离，得到产品收集液，浓缩至干得到白色粉末产物，即式（Ⅰ）所示结构的甾体内酯类化合物。
在步骤（1）中，所述甲醇的用量为干燥南非醉茄提取物重量的8～10倍。
在步骤（1）中，所述回流提取为3～5次，每次1小时。
在步骤（3）中，所述硅胶柱层析是以二氯甲烷:甲醇=10:1 V/V为流动相。
在步骤（4）中，所述C18反相色谱柱分离纯化，采用A：乙腈 B：水，A:B= 40:60 V/V为流动相；检测波长227nm。
本发明提取分离得到的白色粉末物，10wt%硫酸甲醇溶液显红色，进一步证明其为甾体内酯类化合物。
本发明的有益效果在于：
1、本发明提供的新甾体内酯类化合物为从干燥的南非醉茄提取物中提取分离而得到，该化合物具有式（Ⅰ）所示的结构式，其结构确定，同时化合物抗肺癌活性实验表明，其对PC-9细胞增殖具有抑制活性，具有一定的抗肺癌活性，为南非醉茄提取物化学成分及药理作用的系统研究提供了科学依据。
2、本发明以南非醉茄提取物为原料，经甲醇回流提取、减压浓缩、硅胶柱层析分离纯化、C18反相色谱填料高压制备分离等工艺步骤得到甾体内酯类化合物，该方法操作步骤简单易于控制，可确保南非醉茄内酯A2的纯度达99%以上，且整个生产流程耗时短，适用于工业化生产。
3、本发明为首次报道了南非醉茄内酯A2的结构，根据植物来源、核磁数据和质谱数据确定了其相对构型，为一种新型的甾体内酯类化合物。化合物抗肺癌活性实验证明，南非醉茄内酯A2对体外培养的PC-9细胞增殖具有抑制活性，在研究剂量内的最大抑制率为86.15%，IC50为30.670（11.114-215.597）μmol /ml。因此，该化合物能够作为一种潜体结构进行开发利用，并为研究开发抗癌新药提供了可靠的依据。
附图说明
图1为本发明南非醉茄提取物原料中南非醉茄内酯A2的色谱图。
图2为本发明提取分离得到的南非醉茄内酯A2的色谱图。
图3为本发明式（Ⅰ）所示结构的化合物的核磁共振碳谱。
图4为本发明式（Ⅰ）所示结构的化合物的核磁共振氢谱。
图5为本发明式（Ⅰ）所示结构的化合物的HSQC谱。
图6为本发明式（Ⅰ）所示结构的化合物的HMBC谱。
图7为本发明式（Ⅰ）所示结构的化合物的NOESY谱。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。但有必要在此指出的是以下实施例不能理解为对本发明保护范围的限制，如果该领域的技术人员根据上述本发明内容作出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。
实施例1
一种从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物，该化合物为白色粉末，10wt%硫酸甲醇溶液显红色，分子量为444，分子式为C27H40O5，结构式如式（Ⅰ）所示：
提取分离的具体步骤如下：
（1）回流提取：将干燥的南非醉茄提取物，用浓度为90wt%的甲醇加热回流提取，得到提取液；
由于90%甲醇对甾体内酯类化合物有很好的溶解性，提取率高，采用回流提取能够进一步缩短提取时间和提高提取效率。
（2）减压浓缩：将步骤（1）得到的提取液减压至无醇后，再将浓缩液甲醇溶解，过滤，滤液硅胶拌样后，经干燥处理得到拌样物；
浓缩液中甾体内酯类化合物溶于甲醇，通过过滤可除去浓缩液中的甲醇不溶物。滤液吸附于硅胶后，硅胶中含大量的甲醇溶剂，影响硅胶柱层析的分离效果，需通过干燥处理除去。
（3）硅胶柱层析：将步骤（2）得到的拌样物湿法上硅胶柱进行柱层析分离纯化，收集含甾体内酯类化合物的流分，减压浓缩至干得到目标产品；
通过硅胶柱层析可进一步分离甾体内酯类化合物中极性差异较大的其它杂质，有利于下一步制备分离。
（4）C18反相色谱柱分离：将步骤（3）得到的目标产品用甲醇溶解（甲醇可将目标物溶解出），过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离，得到产品收集液，浓缩至干得到白色粉末产物，即式（Ⅰ）所示结构的甾体内酯类化合物。
经硅胶柱层析分离后的目标产品（南非醉茄内酯A2混合物）中，还含有大量的结构相似、极性差异小的化合物，利用以C18填料的高压制备分离系统，采用乙腈-水流动相体系，可以有效除去杂质，收集南非醉茄内酯A2的制备液，即可分离出纯度达99%以上的南非醉茄内酯A2目标成分。
实施例2
（1）回流提取：取干燥的南非醉茄提取物1kg，用8倍重量、浓度为90wt%的甲醇加热回流提取3次，每次1小时，得到提取液24L；
（2）减压浓缩：将步骤（1）得到的提取液减压至无醇后，再将浓缩液甲醇溶解（甲醇可将目标物溶解出），过滤，滤液硅胶拌样后，经干燥处理得到拌样物；
（3）硅胶柱层析：将步骤（2）得到的拌样物湿法上硅胶柱进行柱层析分离纯化（二氯甲烷:甲醇= 10:1 V/V为流动相），收集含甾体内酯类化合物的流分，减压浓缩至干得到目标产品；
（4）C18反相色谱柱分离：将步骤（3）得到的目标产品用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离（A：乙腈 B：水，A:B= 40:60 V/V为流动相；检测波长227nm），收集如图1所示的相对应的色谱峰产品，产品收集液至干得到白色粉末产物5g，即式（Ⅰ）所示结构的甾体内酯类化合物，为南非醉茄内酯A2，色谱图如图2所示。
实施例3
（1）回流提取：取干燥的南非醉茄提取物2kg，用10倍重量、浓度为90wt%的甲醇加热回流提取5次，每次1小时，得到提取液100L；
（2）减压浓缩：将步骤（1）得到的提取液减压至无醇后，再将浓缩液甲醇溶解，过滤，滤液硅胶拌样后，经干燥处理得到拌样物；
（3）硅胶柱层析：将步骤（2）得到的拌样物湿法上硅胶柱进行柱层析分离纯化（二氯甲烷:甲醇= 10:1 V/V为流动相），收集含甾体内酯类化合物的流分，减压浓缩至干得到目标产品；
（4）C18反相色谱柱分离：将步骤（3）得到的目标产品用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离（A：乙腈 B：水，A:B= 40:60 V/V为流动相；检测波长227nm），收集如图1所示的相对应的色谱峰产品，产品收集液至干得到白色粉末产物11g，即式（Ⅰ）所示结构的甾体内酯类化合物，色谱图如图2所示。
实施例4
（1）回流提取：取干燥的南非醉茄提取物3kg，用9倍重量、浓度为90wt%的甲醇加热回流提取4次，每次1小时，得到提取液108L；
（2）减压浓缩：将步骤（1）得到的提取液减压至无醇后，再将浓缩液甲醇溶解，过滤，滤液硅胶拌样后，经干燥处理得到拌样物；
（3）硅胶柱层析：将步骤（2）得到的拌样物湿法上硅胶柱进行柱层析分离纯化（二氯甲烷:甲醇= 10:1 V/V为流动相），收集含甾体内酯类化合物的流分，减压浓缩至干得到目标产品；
（4）C18反相色谱柱分离：将步骤（3）得到的目标产品用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离（A：乙腈 B：水，A:B= 40:60 V/V为流动相；检测波长227nm），收集如图1所示的相对应的色谱峰产品，产品收集液至干得到白色粉末产物15g，即式（Ⅰ）所示结构的甾体内酯类化合物，为南非醉茄内酯A2，色谱图如图2所示。
实施例5
（1）取干燥的南非醉茄提取物5kg，粉碎后用9倍重量、浓度为90wt%的甲醇加热回流提取4次，每次1小时，得到提取液180L；
（2）减压浓缩：将步骤（1）得到的提取液减压至无醇后，再将浓缩液甲醇溶解，过滤，滤液硅胶拌样后，经干燥处理得到拌样物；
（3）硅胶柱层析：将步骤（2）得到的拌样物湿法上硅胶柱进行柱层析分离纯化（二氯甲烷:甲醇= 10:1 V/V为流动相），收集含甾体内酯类化合物的流分，减压浓缩至干得到目标产品；
（4）C18反相色谱柱分离：将步骤（3）得到的目标产品用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离（A：乙腈 B：水，A:B= 40:60 V/V为流动相；检测波长227nm），收集如图1所示的相对应的色谱峰产品，产品收集液至干得到白色粉末产物32g，即式（Ⅰ）所示结构的甾体内酯类化合物，为南非醉茄内酯A2，色谱图如图2所示。
整个生产流程用时约7天；
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）复检产品纯度，测得结果为99.21%。
实施例6
（1）取干燥的南非醉茄提取物5kg，粉碎后用10倍重量、浓度为90wt%的甲醇加热回流提取5次，每次1小时，得到提取液250L；
（2）减压浓缩：将步骤（1）得到的提取液减压至无醇后，再将浓缩液甲醇溶解（甲醇可将目标物溶解出），过滤，滤液硅胶拌样后，经干燥处理得到拌样物；
（3）硅胶柱层析：将步骤（2）得到的拌样物湿法上硅胶柱进行柱层析分离纯化（二氯甲烷:甲醇= 10:1 V/V为流动相），收集含甾体内酯类化合物的流分，减压浓缩至干得到目标产品；
（4）C18反相色谱柱分离：将步骤（3）得到的目标产品用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离（A：乙腈 B：水，A:B= 40:60 V/V为流动相；检测波长227nm），收集如图1所示的相对应的色谱峰产品，产品收集液至干得到白色粉末产物38g，即式（Ⅰ）所示结构的甾体内酯类化合物，为南非醉茄内酯A2，色谱图如图2所示。
整个生产流程用时约9天；
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）复检产品纯度，测得结果为99.34%。
实施例7
（1）取干燥的南非醉茄提取物5kg，粉碎后用9倍重量、浓度为90wt%的甲醇加热回流提取3次，每次1小时，得到提取液135L；
（2）减压浓缩：将步骤（1）得到的提取液减压至无醇后，再将浓缩液甲醇溶解（甲醇可将目标物溶解出），过滤，滤液硅胶拌样后，经干燥处理得到拌样物；
（3）硅胶柱层析：将步骤（2）得到的拌样物湿法上硅胶柱进行柱层析分离纯化（二氯甲烷:甲醇= 10:1 V/V为流动相），收集含甾体内酯类化合物的流分，减压浓缩至干得到目标产品；
（4）C18反相色谱柱分离：将步骤（3）得到的目标产品用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离（A：乙腈 B：水，A:B= 40:60 V/V为流动相；检测波长227nm），收集如图1所示的相对应的色谱峰产品，产品收集液至干得到白色粉末产物35g，即式（Ⅰ）所示结构的甾体内酯类化合物，为南非醉茄内酯A2，色谱图如图2所示。
整个生产流程用时约8天；
通过更换流动相组分，利用反相分析型液相色谱（RP-HPLC）复检产品纯度，测得结果为99.19%。
实施例8
本发明提取分离得到的式（Ⅰ）所示结构的甾体内酯类化合物，即南非醉茄内酯A2结构鉴定如下：
电喷雾电离质谱ESI-MS显示：m/z 467.0[M+Na]+；443.62 [M-H]─，说明该化合物的分子量为444，分子式为C27H40O5。
结合植物来源、核磁图谱数据和质谱数据，可初步判断该化合物为甾体内酯类化合物。比较碳谱（图3所示）发现有些碳化学位移基本一致，说明结构与Withalongolide A类似。通过HSQC（图5所示）对其进行碳氢全归属，由HMBC（图6所示）发现δH 1.13 (H-19)与δC153.4 (C-1)，54.2 (C-10)，47.9(C-9)相关，同时δH 5.83 (H-2)与δC 153.4 (C-1)，67.8(C-3)，54.2 (C-10)相关，说明1，2位形成烯醇式结构，2.04 (H-28)与δC 153.0 (C-24)，125.6 (C-25)，29.8 (C-23)相关；结合文献核磁数据，确定该化合物为：
6-((1S)-1-((3aS,5bS,8R)-6,8-dihydroxy-3a,5b-dimethyl-1,2,3,3a,4,5,5a,5b,8,9,9a,10,10a,10b-tetradecahydrocyclopenta[a]fluoren-3-yl)ethyl)-3-(hydroxymethyl)-4-methyl-5,6-dihydro-2H-pyran-2-one，中文名称为：6-((1S)-1-((3aS，5bS，8R)-6，8-二羟基-3a，5 b-二甲基-1，2，3，3a，4，5，5a，5b，8，9，9a，10，10a，10 b-四十氢环戊二烯[a]芴-3-基)乙基)-3-(羟甲基)-4-甲基-5，6-二氢-2H-吡喃-2-酮。经scifinder检索，未见有该化合物的相关报道，通过1H-NMR、13C-NMR以及DEPT135º和核磁二维HSQC，HMBC，H-HCOSY，NOESY等分析技术手段，确定了该化合物为新甾体内酯类结构，并具有如式（Ⅰ）所示的化学结构。1H-NMR和13C-NMR表征数据见表1。
实施例9
化合物抗肺癌活性实验
任意选取上述实施例5提取分离得到的具有式（Ⅰ）所示结构的白色粉末化合物（即下列实验中所称的南非醉茄内酯A2）进行下述实验：
（1）实验材料与仪器
细胞：PC-9细胞（武汉普诺赛尔生命科技有限公司）
药物与试剂：南非醉茄内酯A2（纯度＞99.0%，自制）；DMSO溶液进行溶解，配制成的母液浓度为200μmol/L，每次取1μL用无血清培养基稀释至1ml，按照1：4的比例进行稀释。RPMI-1640培养基（美国Gibco公司，批号8120139），FBS（美国Procell公司，批号SA201126），PBS缓冲液粉末（无锡傲锐东源生物科技有限公司），胰酶（biofrox公司，批号:EZ6688C183），青霉素-链霉素溶液（biosharp公司，批号：1334GR005），MTT（biofrox公司，批号：EZ6688D183），DMSO（成都科隆化学品有限公司，批号：67-68-5）
仪器：Thermo Varlosks酶标仪 (美国Thermo Fisher Scientific公司)，AllegraX-30R离心机 (美国Beckman Coulter公司)，超净台（长虹美菱股份有限公司），倒置显微镜（德国zeiss公司），CO2恒温培养箱（苏州捷美电子有限公司）。
（2）实验方法
采用10%的1640完全培养基在37℃，5% CO2浓度条件下进行培养。将对数生长期的细胞消化制成细胞悬液后，按1×104个/ml接种于96孔板，于CO2恒温培养箱中培养24h。弃去培养基，用PBS清洗1次，然后分别加入不同浓度南非醉茄内酯A2（每组设置3个复孔），另给予3孔空白培养基作为正常对照组；将之放回CO2恒温培养箱中培养24h。随后每孔20μL MTT溶液，置培养基中培养4h，弃去培养液，加入DMSO溶液150μL/孔，放入酶标仪中振荡5min后，于490nm波长下进行检测吸光值（OD）。
运用SPSS 26.0统计软件处理数据，结果用平均值±标准差表示（）。多组之间比较采用单因素方差分析（One way-ANOVA）。
（3）实验结果
下表2可见，南非醉茄内酯A2对体外培养的PC-9细胞增殖具有抑制活性，在研究剂量内的最大抑制率为86.15%，IC50为30.670（11.114-215.597）μmol /ml。
从以上抗肺癌活性实验结果可以得知：南非醉茄内酯A2对体外培养的PC-9细胞增殖具有抑制活性，在研究剂量内的最大抑制率为86.15%，IC50为30.670（11.114-215.597）μmol /ml。因此，本发明提取分离得到的式（Ⅰ）所示结构的甾体内酯类化合物可应用于抗肺癌药物的制备。
Claims (9)
1.一种从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物，其特征在于：所述甾体内酯类化合物的结构式如式（Ⅰ）所示：
其化学名称为：6-((1S)-1-((3aS，5bS，8R)-6，8-二羟基-3a，5 b-二甲基-1，2，3，3a，4，5，5a，5b，8，9，9a，10，10a，10 b-四十氢环戊二烯[a]芴-3-基)乙基)-3-(羟甲基)-4-甲基-5，6-二氢-2H-吡喃-2-酮，自命名为：南非醉茄内酯A2。
2.如权利要求1所述的一种从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物，其特征在于：所述式（Ⅰ）所示的甾体内酯类化合物为白色粉末物，10wt%硫酸甲醇溶液显红色。
3.如权利要求1所述的一种从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物，其特征在于：所述式（Ⅰ）所示的甾体内酯类化合物电喷雾电离质谱ESI-MS显示：m/z 467.0[M+Na]+；443.62 [M-H]─，说明该化合物的分子量为444，分子式为C27H40O5。
4.一种如权利要求1所述的从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物的方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）回流提取：将干燥的南非醉茄提取物，用浓度为90wt%的甲醇加热回流提取，得到提取液；
（2）减压浓缩：将步骤（1）得到的提取液减压至无醇后，再将浓缩液甲醇溶解（甲醇可将目标物溶解出），过滤，滤液硅胶拌样后，经干燥处理得到拌样物；
（3）硅胶柱层析：将步骤（2）得到的拌样物湿法上硅胶柱进行柱层析分离纯化，收集含甾体内酯类化合物的流分，减压浓缩至干得到目标产品；
（4）C18反相色谱柱分离：将步骤（3）得到的目标产品用甲醇溶解，过滤，滤液用C18反相色谱填料高压制备分离，得到产品收集液，浓缩至干得到白色粉末产物，即式（Ⅰ）所示结构式的甾体内酯类化合物。
5.如权利要求4所述的从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物的方法，其特征在于：在步骤（1）中，所述甲醇的用量为干燥南非醉茄提取物重量的8～10倍。
6.如权利要求4所述的从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物的方法，其特征在于：在步骤（1）中，所述回流提取为3～5次，每次1小时。
7.如权利要求4所述的从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物的方法，其特征在于：在步骤（3）中，所述硅胶柱层析是以二氯甲烷:甲醇=10:1 V/V为流动相。
8.如权利要求4所述的从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物的方法，其特征在于：在步骤（4）中，所述C18反相色谱柱分离纯化，采用A：乙腈 B：水，A:B= 40:60 V/V为流动相；检测波长227nm。
9.一种如权利要求1所述的从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物在制备抗肺癌药物中的应用。
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Legal Events
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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