CN110545831A - Withania somnifera提取物提供针对空气污染相关疾病的保护的用途 - Google Patents

Withania somnifera提取物提供针对空气污染相关疾病的保护的用途 Download PDF

Info

Publication number
CN110545831A
CN110545831A CN201880027471.8A CN201880027471A CN110545831A CN 110545831 A CN110545831 A CN 110545831A CN 201880027471 A CN201880027471 A CN 201880027471A CN 110545831 A CN110545831 A CN 110545831A
Authority
CN
China
Prior art keywords
extract
air pollution
withaferin
composition
cells
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201880027471.8A
Other languages
English (en)
Inventor
伊戈尔·本迪克
贝蒂娜·博兰诺夫
休伯特·保罗·哈格
伯恩德·穆斯勒
纳萨列·理查德
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DSM IP Assets BV
Original Assignee
DSM IP Assets BV
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by DSM IP Assets BV filed Critical DSM IP Assets BV
Publication of CN110545831A publication Critical patent/CN110545831A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A61K31/585—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin containing lactone rings, e.g. oxandrolone, bufalin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/05—Phenols
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/045—Hydroxy compounds, e.g. alcohols; Salts thereof, e.g. alcoholates
    • A61K31/07—Retinol compounds, e.g. vitamin A
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
    • A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
    • A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
    • A61K31/202—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids having three or more double bonds, e.g. linolenic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A61K31/352—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings, e.g. methantheline 
    • A61K31/353—3,4-Dihydrobenzopyrans, e.g. chroman, catechin
    • A61K31/355—Tocopherols, e.g. vitamin E
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/56—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids
    • A61K31/58—Compounds containing cyclopenta[a]hydrophenanthrene ring systems; Derivatives thereof, e.g. steroids containing heterocyclic rings, e.g. danazol, stanozolol, pancuronium or digitogenin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/81—Solanaceae (Potato family), e.g. tobacco, nightshade, tomato, belladonna, capsicum or jimsonweed
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A61K9/0056—Mouth soluble or dispersible forms; Suckable, eatable, chewable coherent forms; Forms rapidly disintegrating in the mouth; Lozenges; Lollipops; Bite capsules; Baked products; Baits or other oral forms for animals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P39/00—General protective or antinoxious agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)

Abstract

本发明涉及通过使用Withaniasmnifera(南非醉茄)提取物及其Nrf2活化组分醉茄素‑A、12‑脱氧魏察曼陀罗内酯和Quresimine A进行全身解毒。当被摄入时，细胞内解毒途径中的关键要素转录因子Nrf2导致潜在有毒化合物的消除。与此同时，炎性细胞因子的表达降低。因此，所述提取物一般可用于减少空气污染(并且尤其是微粒空气污染)的不良作用，所述不良作用包括：心血管问题、呼吸系统疾病，以及与空气中传播的颗粒接触的组织的慢性炎症。

Description

WITHANIA SOMNIFERA提取物提供针对空气污染相关疾病的保 护的用途
发明概述
本发明涉及通过使用Withania somnifera(南非醉茄(ashwagandha))提取物及其Nrf2活化组分醉茄素A(withaferin A)、12-脱氧魏察曼陀罗内酯(12-deoxywithastramonolide)和quresimine A进行全身解毒。当被摄入时，细胞内解毒途径中的关键要素转录因子Nrf2导致潜在有毒化合物的消除。与此同时，炎性细胞因子的表达降低。因此，所述提取物一般可用于减少空气污染(并且尤其是微粒空气污染)的不良作用，所述不良作用包括：心血管问题、呼吸系统疾病，以及与空气中传播的颗粒接触的组织的慢性炎症。
背景技术
空气污染与主要由肺疾病和心血管疾病导致的发病率和死亡率相关(Miyata R等人，2011Toxicol Appl Pharmacol.2011 257(2):209-26；Yamamoto SS等人，2014Int JHyg Environ Health 217(2-3)：133-44)。
细胞解毒途径的增强被认为对诸如衰老、心血管疾病和肺部疾病(诸如慢性阻塞性肺病(COPD))的病症是有帮助的。类似地，增强细胞解毒途径应改善由空气污染引起的疾患。核因子红系2相关因子2(Nrf2)是一种活化编码解毒蛋白的基因的转录因子。当其处于非活性状态下时，其是与Kelch样ECH相关蛋白1(KEAP1)的胞质复合物的一部分，该KEAP1为69kDa传感蛋白，其含有27个半胱氨酸残基并且充当二聚体以结合Nrf2和E3泛素连接酶Cul3两者。
Nrf2属于碱性亮氨酸拉链转录因子的帽和领(cap‘n’collar)家族。Nrf2通过以下方式而变成被活化的：修饰KEAP1的SH基团并转运到细胞核中，在所述细胞核处其与小MAF蛋白一起与在其靶基因的启动子中的其抗氧化反应元件(ARE)结合。Nrf2的靶基因参与抗氧化反应、II期反应和运输。在人类COPD患者中，已经表明Nrf2的活化能够恢复肺泡巨噬细胞的吞噬作用。
多种Nrf2活化剂正处于作为药物的开发下。合成的齐墩果烷三萜类化合物甲基巴多索隆正处于用于治疗肺疾病的临床研究下。同样，具有抗氧化和抗炎活性的合成三萜RTA408已经局部地施用在人皮肤上，并且被健康的人类志愿者很好地耐受。
老化部分地归因于氧化应激，即氧化作用，以及由此引起的细胞分子的破坏。许多慢性疾病与衰老相关联。因为Nrf2是用于解毒和抗氧化宿主防御的重要因子，所以其可有助于减缓衰老。这已在不同的完善确立的动物模型中得到证实，并且怀疑在长寿人类中Nrf2被组成型地活化(Bruns等人，2015Oxid Med Cell Longev.2015：732596)。
富含Ngf2活化剂萝卜硫素的前体萝卜硫苷的花椰菜芽减弱对柴油机废气颗粒的鼻过敏反应(Heber D.等人，2014Food Funct.5(1):35-41.doi:10.1039/c3fo60277j)。在最近的一项人类干预研究中，证实了花椰菜芽增强对一些空气传播的污染物的解毒，其中尿液中能够显示出谷胱甘肽衍生的苯和丙烯醛共轭物(即II期代谢物)的较高存在(Egner等人，2014.Cancer Prev Res，在2014年6月9日首次在线发布)。
Nrf2活化剂具有减少由臭氧处理介导的上呼吸道粘膜炎症的潜能(Pecorelli等人，2013Toxicol Appl Pharmacol.267(1):30-40)。
炎症是由空气污染微粒物质诱发的疾病的发展中的关键过程。白细胞介素8(IL-8)是先天免疫系统的一部分并且在免疫应答的启动中是重要的，但是过度刺激和所导致的气道内募集的嗜中性粒细胞的功能障碍可导致促炎分子释放，从而导致损害而不是保护肺组织。
白细胞介素-6(IL-6)由T淋巴细胞和巨噬细胞分泌，并且还有助于刺激免疫应答。IL-6抑制肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白介素-1(IL-1)的作用。其主要与抗炎作用有关，但也与一些促炎功能有关。因此，对其抑制的益处取决于感染的状态。在慢性炎症中，减少IL-6的表达是有帮助的。
单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)将单核细胞、记忆T淋巴细胞和树突状细胞募集到炎症部位。同样，在由空气污染介导的慢性炎症或炎症中，可为有利的是降低MCPO-1表达。
前列腺素E2(PGE2)是一种炎性细胞因子，其增强由如缓激肽或组氨酸的其他炎症介质引起的疼痛。其也与其他细胞因子参与诱发发热。另外，其在许多组织中有其他复杂的功能。PGE2被认为是炎症的一般标志物(等人，2017Expert Opin InvestigDrugs.，2017年1月；26(1):51-61.)。
Withanina somnifera通常被称为南非醉茄、印度人参、毒醋栗和冬樱。它的浆果外用于印度式草药中，作为对肿瘤和溃疡的治疗。在传统医学中，将来自其根部的粉末与温牛奶和蜂蜜混合，在入睡前服用。在也门，已经使用干燥的叶子来治疗烧伤和创伤。在White等人，2016Anti-inflammatory Nurtaceuticals and Chronic Diseases(S.C.Gupta等人编.Springer Int'l Pub 329-373)中讨论了Withania的潜在临床应用。
期望具有这样的天然化合物或提取物，所述天然化合物或提取物可用作针对空气污染提供保护的营养品、药物或食物添加剂。
发明详述
根据本发明，已发现Withania somnifera提取物是有效的Nrf2途径活化剂，因此可以用作通用解毒剂，如萝卜硫素。优选地，它们可用于保护暴露于空气污染特别是微粒空气污染(particulate air pollution)或有暴露于空气污染特别是微粒空气污染的风险的人或动物的心脏、肺和呼吸系统。此外，它们可作为健康方案的一部分用于解毒，增强机体的清洁能力，以及作为通用的生物保护或屏蔽剂。另外，它可以加强机体的防御系统。本发明涉及实现上述的方法，所述方法包括向期望实现上述的人施用Withania somnifera提取物或其活性组分(如下所述)。
还已经发现，具有显著活性的提取物组分已被鉴定为醉茄素A、12-脱氧魏察曼陀罗内酯和quresimine A。
因此，本发明的一个方面是一种口服组合物，所述口服组合物包含选自由以下项组成的组的活性成分：
a)W.somnifera提取物，其包含醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯，和/或quresimine A(在下文中称为“WSE”)
b)醉茄素A，
c)12-脱氧魏察曼陀罗内酯，
d)quresimine A；以及
e)它们的混合物。
所述口服组合物用于提供针对空气污染的不良作用的保护。
WSE可以富含醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A以增大它们在提取物中的浓度。
因此，本发明的另一个方面是口服WSE、醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A用于改善对暴露于空气污染或有暴露于空气污染的风险的人的心血管系统、肺和呼吸系统的不良作用的风险的用途。在一些优选的实施方式中，其所提供保护的污染类型是空气微粒。
本发明的另一方面是减轻由于暴露于微粒空气污染而对肺和呼吸系统或其他组织的不良作用的方法，所述方法包括向有此需要的人施用有效量的WSE、醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A。
定义
“WSE”是指Withania somnifera提取物，其含有至少作为有效的Nrf2途径活化剂的量的醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A。
“健康人”是指a)没有被诊断出以下疾病或病症或经历以下疾病或病症中的任一者的症状的人：心血管疾病(包括有过非致命性心脏病发作、心律不齐，以及循环系统受损)、2型糖尿病，以及呼吸系统疾病、哮喘或加重性哮喘、肺功能下降，或导致呼吸困难的其他病症)。
“微粒空气污染”是指其中的空气含有被分类为纳米颗粒或粒度为PM2.5或更小的颗粒。这些大小的颗粒可以是“自然来源”的结果，诸如火山喷发、沙尘暴、森林火灾、来自草原火灾的烟雾等，或是人类活动的结果，诸如汽车废气、制造业废气或其他活动，包括抽烟。
“心血管健康”被定义为不存在与心血管功能异常相关的病症，诸如：关节硬化、心肌梗塞、血栓形成、外周动脉疾病、或脑血流量减少，以及糖尿病(I型或2型)及其相关的心血管问题。出于本专利的目的，中风被特别排除不作考虑。
“呼吸健康”被定义为不存在与呼吸功能异常相关的病症，诸如：哮喘、肺气肿、支气管炎、慢性阻塞性肺病(COPD)、花粉热型过敏、因刺激引起的咳嗽、肺感染、普通感冒症状，以及慢性鼻窦炎。
如本文所用，“空气污染”是指已经将潜在有害的微粒、生物分子或其他物质引入空气中的条件。污染物类别的示例包括：
·硫氧化物，诸如作为煤和石油燃烧的结果而产生的那些硫氧化物；
·氮氧化物，诸如从高温燃烧产生的那些氮氧化物，包括二氧化氮(一种较突出的空气污染物，是具有特征性强气味的红褐色气体)；
·一氧化碳，其可通过车辆废气和燃料的不完全燃烧产生；
·挥发性有机化合物，其可包括甲烷型或非甲烷型化合物，并且通常被称为温室气体；
·微粒(也称为微粒物质或PM)，其是悬浮在大气中的小固体或液体颗粒。起源可能是“自然的”，诸如来自火山喷发、沙尘暴或森林火灾和草原火灾，或者可能是人类活动的结果。
·烟灰、气体和其他物质(为细小颗粒形式)形式的污染，被称为“可呼吸微粒物质”。可呼吸微粒物质按大小分类，诸如低于10或2.5微米空气动力学直径(分别为PM10或PM2.5)，或为纳米颗粒(小于100nm直径，或PM0.1)。这些颗粒通常来自车辆废气，特别是柴油燃料，或来自柴油动力机械。
·对于不良病症的“减轻风险”是指：针对该病症的发生提供保护；预防该病症的发生；延缓该病症的发作；减轻已经发生的病症的严重性；缩短病症持续的时间；和/或消除病症。
来自人类活动的微粒与许多健康危害相关，包括心脏病和不良的呼吸道病症，包括肺癌。本发明不特别地排除中风的预防、治疗或改善。
本发明的又一方面是一种组合物，所述组合物为口服药物、营养品、食物补充剂或食物组合物，所述组合物包含WSE、醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯、quresimine A或提取物，所述组合物用于改善空气污染，优选地微粒空气污染的不良作用的风险。本发明的另一方面是改善空气污染的不良作用的风险的方法，所述方法包括向有风险的人施用有效量的WSE、醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A。
本发明还有的一个重要部分是组合物中的WSE、醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A不仅作为调味剂或着色剂存在，其以使得其有效地作为生物活性成分(即Nfr2活化剂)的量存在。在一些实施方式中，其是组合物中的唯一活性成分。
香烟烟雾也含有PM以及在污染空气中也发现的其他化学物质。因此，本发明的另一个方面是WSE、醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A用于保护暴露于香烟烟雾或有暴露于香烟烟雾的风险的人的用途。另一个方面是一种减少暴露于香烟烟雾的人的不良病症的风险的方法，所述方法包括向有风险的人施用有效量的WSE、醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A。
PM包括灰尘(dust)、污垢(dirt)、烟灰(soot)和烟雾(smoke)。被称为“可吸入粗颗粒”的颗粒的直径大于2.5微米，但小于10微米。“细颗粒”较小，直径小于2.5微米。它们通常是可见度降低和霾的原因。许多细颗粒是“二级颗粒”，其是大气中化学反应的最终产物，当发电厂、汽车和其他工业活动排放二氧化硫和氮氧化物时发生这种化学反应。
细颗粒特别麻烦，因为它们能够深入肺部和血流并可潜在地引起严重的健康问题，包括：
患有心脏病或肺部疾病的人过早死亡，
非致命性心脏病发作
心律不齐
哮喘或加重性哮喘
肺部功能下降
慢性阻塞性肺病(COPD)的急性加重
呼吸道症状增加，诸如气道刺激、咳嗽和/或呼吸困难。
因此，本发明的另一个方面是WSE、醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A用于保护、改善或减少由于暴露于空气污染优选地微粒物质空气污染而导致的心血管和/或呼吸系统不良病症的风险的用途，其中所述不良病症选自由以下项组成的组：患有心脏或肺部疾病的人的过早死亡、非致命性心脏病发作、心律不齐、哮喘或加重性哮喘、肺部功能下降、慢性阻塞性肺病(COPD)的急性加重，和呼吸道症状增加，例如气道刺激、咳嗽和/或呼吸困难。另一个方面是一种减少暴露于空气污染的人的不良病症的风险的方法，所述方法包括向有此需要的人施用有效量的WSE、醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A，以及其中所述不良病症选自由以下项组成的组：患有心脏或肺部疾病的人的过早死亡、非致命性心脏病发作、心律不齐、哮喘或加重性哮喘、肺部功能下降、慢性阻塞性肺病(COPD)的急性加重，以及呼吸道症状增加，气道刺激、咳嗽和/或呼吸困难。
本发明的另一个方面是一种保护、改善或减少由于暴露于空气污染优选地微粒物质空气污染而导致的心血管和/或呼吸系统不良病症的风险的方法，其中所述不良病症选自由以下项组成的组：患有心脏或肺部疾病的人的过早死亡、非致命性心脏病发作、心律不齐、哮喘或加重性哮喘、肺部功能下降、慢性阻塞性肺病(COPD)的急性加重，以及呼吸道症状增加，诸如气道刺激、咳嗽和/或呼吸困难，所述方法包括向有此需要的人施用有效量的Withania somnifera提取物醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A。
与其他活性成分的组合
可以将本发明的WSE、醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A与其他活性成分组合以制备具有有益结果的组合物。其他活性成分的示例包括维生素E、水溶性番茄提取物、白藜芦醇、含有白藜芦醇的植物提取物、维生素D、25-羟基维生素D3、羟基酪醇、多不饱和脂肪酸(PUFA)、维生素A，以及它们的混合物。因此，本发明还包括以下成分的组合：
W.somnifera提取物醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A与维生素E
W.somnifera提取物醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A与水溶性番茄提取物(诸如可从DSM Nutritional Products,Switzerland购得的)
W.somnifera提取物醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A与白藜芦醇或含有白藜芦醇的植物提取物
W.somnifera提取物醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A与维生素D
W.Somnifera提取物醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A与25-OH维生素D3
W.somnifera提取物醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A与羟基酪醇或含有3-羟基酪醇的植物提取物
W.somnifera提取物醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A与多不饱和脂肪酸(PUFA)
W.somnifera提取物醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A与维生素A。
在上述情况中的每一种中，W.somnifera提取物醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A的量为在本说明书中所详述的，并且第二成分的存在量为各成分的本领域已知的最大每日量的量。
剂量
推荐每日剂量是对于成人，足量的Withania somnifera提取物至多2克/天；其中所述提取物至少含有如下详述剂量的醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯和/或quresimine A。
对于以醉茄素A作为唯一活性成分，每日剂量为0.1mg至50mg；优选地每天0.5至20mg，更优选地每天1-10mg。
对于以12-脱氧魏察曼陀罗内酯作为唯一活性成分，每日剂量为0.1mg至10mg；优选地每天0.5至8mg，更优选地每天1-6mg。
对于以Quresimine A作为唯一活性成分，每日剂量为0.1mg至10mg；优选地每天0.5至8mg，更优选地每天1-6mg。
对于所述活性成分的组合，可以调节剂量使得组合成分的剂量为每天至少0.1至10mg，但不应超过每天30mg。
如果期望的话，每日摄入量可以分为两个或更多个剂量，诸如每天两次片剂。对于非人动物，可以将上述人类剂量根据动物体重进行调节。
制剂
本发明的组合物优选为营养组合物形式，诸如强化食物、强化饲料或强化饮料，或为强化液体食物/饲料(诸如饮料或烈酒(shots))，用于包括人类在内的动物的丸剂或胶囊剂的形式。
根据本发明的膳食和药物组合物可以为适用于向包括人体在内的动物机体施用的任何盖仑剂型，尤其是常规用于口服施用的任何形式，例如为固体形式，诸如食物或饲料(用于食物或饲料的添加剂/补充剂)、食物或饲料预混料、强化食物或饲料、片剂、丸剂、颗粒剂、糖衣丸、胶囊剂和泡腾制剂(诸如粉剂和片剂)；或为液体形式，诸如溶液剂、乳剂或混悬剂，如例如饮料、糊剂和油性混悬剂。糊剂可封装在硬壳或软壳胶囊中，其中所述胶囊提供例如(鱼、猪、家禽、牛)明胶、植物蛋白或木质素磺酸盐的基质。其他应用形式的示例是用于经皮、肠胃外或注射施用的形式。膳食和药物组合物可以呈受控(延迟)释放制剂的形式。本发明的组合物不是局部施用的，诸如施用至鼻腔通道。
根据本发明的膳食组合物还可包含保护性水胶体(诸如树胶、蛋白质、改性淀粉)、粘合剂、成膜剂、包囊剂/材料、壁/壳材料、基质化合物、包衣、乳化剂、表面活性剂、增溶剂(油、脂肪、蜡、卵磷脂等)、吸附剂、载体、填充剂、复合化合物(co-compounds)、分散剂、润湿剂、加工助剂(溶剂)、流动剂、掩味剂、增重剂、胶凝剂、凝胶形成剂、抗氧化剂和抗微生物剂。
食物的示例是谷物棒、乳制品(诸如酸乳)，以及烘焙食物(诸如蛋糕和饼干)。强化食物的示例是谷物棒，以及烘焙食物，诸如面包、面包卷、百吉饼、蛋糕和饼干。膳食补充剂的示例为片剂、丸剂、颗粒剂、糖衣丸、胶囊剂和泡腾制剂；为非酒精饮料形式，诸如软饮料、果汁、柠檬水、近水饮料(near-water drink)、茶和乳基饮料；为液体食物形式，诸如汤和乳制品(牛奶什锦饮料(muesli drink))。
饮料涵盖非酒精饮料和酒精饮料，以及要添加到饮用水和液体食物中的液体制备物。非酒精饮料是例如软饮料、运动饮料、果汁、蔬菜汁(例如番茄汁)、柠檬水、茶和乳基饮料。液体食物是例如汤和乳制品(例如牛奶什锦饮料)。
除了Withania somnifera提取物以外，本发明的药物组合物还可含有常规药物添加剂和佐剂、赋形剂或稀释剂，包括但不限于水、任何来源的明胶、植物胶、木质素磺酸盐、滑石、糖、淀粉、阿拉伯树胶、植物油、聚烷撑乙二醇、调味剂、防腐剂、稳定剂、乳化剂、缓冲剂、润滑剂、着色剂、润湿剂、填充剂等。
提出以下非限制性实施例以更好地说明本发明。
实施例1
Nrf2途径的活化
方法：
使用H4IIE-ARE8L细胞进行萤光素酶报告子测定：
H4IIE-ARE8L细胞是被萤光素酶报道基因稳定转染的大鼠肝癌细胞系，该基因受八次重复的抗氧化反应元件(ARE)的控制(Kratschmar DV等人，2012.PLoS One.2012；7(5):e36774)。
H4IIE-ARE8L细胞的培养基是含有热灭活的10％胎牛血清(FBS)的高葡萄糖杜氏改良伊格尔培养基(DMEM)。每两到三天更换一次培养基。DMEM测定培养基使用经木炭处理的FBS(DMEMct)。
在96孔板中执行反式活化测定。将平板以每孔100μl DMEMct中约40,000个细胞进行接种，并在37℃下孵育过夜。然后将测试化合物在DMEDct中稀释，并按如下所述给予至细胞。将细胞在37℃和5％CO2下孵育至少另外16h。将细胞均衡至室温。通过加入100μL裂解液、每孔含有0.5mM DTT的根据制造商(Promega)的Steady-荧光素酶缓冲液来进行细胞裂解，并在室温下轻轻振荡孵育10min。在发光仪(Mithras,Berthold Technologies)上孵育后2小时内测量发光。
阳性对照分别为在0.5％DMSO中的5μM R-萝卜硫素(LKT LaboratoriesCat.S8046)、最终浓度。阴性对照是在0.5％DMSO中的细胞。
根据制造商的方案，使用细胞活力试剂(ThermoFisherScientific)来执行H4IIE-ARE8L细胞的细胞存活测定。选择无毒浓度的提取物、级分和单一化合物以进行Nrf2活性测定。
所测试的Withania somnifera样品是来自Spectrum chemical MFG Corp.(USA)(样品ID：NIG-018909)和Apin Chemicals,UK(样品ID：NIG-018911)的整体提取物
使用BEAS-2B细胞进行内源性Nrf2活化测定：
人支气管上皮细胞系BEAS-2B来自ATCC(美国典型培养物保藏中心，弗吉尼亚州马纳萨斯(American Type Culture Collection,Manassas,VA))，并在表面塑料烧瓶(Corning Inc.,Corning,NY)中的支气管上皮细胞生长培养基(BEGM,Lonza,Wakersville,MD)中培养。将BEAS-2B细胞以1×106个细胞/孔接种在6孔表面培养板(Corning Inc.)中，并在37℃以及5％CO2下孵育24小时。
在DMSO(ABCAM，产品目录号ab141971，批次号GR303041-2)中制备100mM的R-萝卜硫素储备液。将R-萝卜硫素储备液在DMSO中稀释以获得期望的最终浓度。在DMSO中制备Withania somnifera提取物(NIG-018911)的储备液。
24h后，用不同浓度的Withania somnifera提取物(5μg/ml、10μg/ml、25μg/ml)、R-萝卜硫素(2μM、5μM、10μM)或DMSO(0.1％)处理细胞，并在37℃以及5％CO2下孵育4小时或24小时。每种处理一式三份进行。
RNA提取、cDNA合成和基于TaqMan的实时PCR：在4小时和24小时后，细胞收获在RLT缓冲液中，使用来自Qiagen的RNeasy微型试剂盒(产品目录号74106)进行RNA分离。使用用于RT-PCR的SuperScriptTM第一链合成系统(Invitrogen，产品目录号11904-018)，用2500ng总RNA制备cDNA。
在20μL的PCR反应中，使用快速先进主混合物(LifeTechnologies产品目录号4444557)、用于18S rRNA内部对照的50nM引物和100nM(经VIC-TAMRA标记的)探针(5'至3'CGGCTACCACATCCAAGG(SEQ.ID.NO:1)的h18s rRNA for；5'至3'CGGGTCGGGAGTGGGT(SEQ ID NO.2)的h18s rRNA rev；5'至3'TTGCGCGCCTGCTGCCT)(SEQ ID NO 3)的h18s rRNA探针)，以及用于感兴趣的基因人NQO1的300nM引物和100nM(经FAM-TAMRA标记的)探针(5'至3'CCAGATATTGTGGCTGAACAAAAG(SEQ ID NO 4)的hNQO1for；5'至3'TCCTATGAACACTCGCTCAAACC(SEQ ID NO 5)的hNQO1rev；5'至3'CAGACCTTGTGATATTCCAGTTCCCCCTG)(SEQ ID NO 6)的hNQO1探针)和人HMOX(5'至3'GGATGGAGCGTCCGCA(SEQ ID NO 7)的hHMOX for；5'至3'GCCGTCTCGGGTCACCT(SEQ ID NO 8)的hHMOX rev；以及5'至3'CCCGACAGCATGCCCCAGGA)(SEQ ID NO 9)的hHMOX探针)，将总输入为50ng/mL的cDNA在ABI 7900HT实时PCR系统(Applied Biosystems)中扩增。
热循环方案由在50℃下2min以进行尿嘧啶-N-糖基化酶活化，在95℃下20秒以进行聚合酶活化，之后是40个循环的在95℃下1秒，以及在60℃下进行引物退火20秒组成。
通过从靶基因的CT中减去核糖体RNA的阈值循环(CT)来执行相对基因表达(ΔCT)。然后将相对mRNA水平计算为2-ΔΔCT，其中ΔΔCT是指用DMSO处理的细胞减去用Withaniasomnifera提取物或R-萝卜硫素处理的细胞的ΔCT。
结果：
使用H4IIE-ARE8L细胞进行萤光素酶报告子测定：
我们使用被构建体稳定转染的大鼠肝癌细胞系，所述构建体含有在萤光素酶报道基因前面的八个串联ARE元件(H4IIE-ARE8L)(Kratschmar DV等人，2012.PLoS One.2012；7(5)：e36774)。测试所有提取物、级分和纯化合物诱发毒性的浓度。然后如方法部分所述选择无毒浓度来处理细胞。
在用我们的重组Nrf-2活化测定筛选各种提取物、级分和纯化合物时，与阳性对照萝卜硫素相比，Withania somnifera提取物表现出两倍高的活性。与萝卜硫素相比，筛选中包括的Withania somnifera提取物的所有四种测试级分给出120％至170％的活性(数据未显示)。所有筛选样品显示出至少50％的萝卜硫素活性，测定的命中率为19％。Withaniasomnifera提取物NIG-018911是阳性命中。
与阳性对照萝卜硫素的活性相比，Withania somnifera NIG-018911提取物的Nrf-2活性反复为两倍高。
目前尚不清楚Withania Smnifera提取物中Nrf2活化的活性原理。Nrf2活化不是由于垂死细胞中的活性引起的，因为Withania somnifera提取物的连续稀释显示出Nrf2活化的线性依赖性(数据未显示)。在所使用的浓度下，所有测试的提取物和组分均对H4IIE-ARE8L细胞无毒。
使用BEAS-2B细胞进行内源性Nrf2活化测定：
下一个问题是Withania somnifera提取物是否能够活化人肺细胞系中Nrf2靶标的表达。我们选择了NAD(P)H：醌氧化还原酶1(NQO1)和血红素加氧酶1(HO1)作为靶标(Lewis KN等人，2010 Integr Comp Biol.50(5)：829-43)和BEAS-2B细胞。内源性Nrf2活化的阳性对照是萝卜硫素，萝卜硫素是一种众所周知的Nrf2活化剂(Boddupalli S等人，2012Frontiers in Genetics 3：7)。用Withania somnifera提取物NIG-018911分别处理4h和24h。浓度分别显示于表1A和表1B中。在所使用的浓度下未观察到毒性。两种Nrf2靶基因的表达通过用Withania somnifera提取物NIG-018911处理而显著增加。
表1A中显示了NQO1的mRNA表达的数据。与萝卜硫素相比，Withania somnifera提取物对HMOX mRNA的诱导较低，但是在所有测试浓度下在24h处为显著的，并且在使用高于10μg/ml的浓度时在4h处为显著的。在24h处，使用25μg/ml的Withania somnifera提取物的最高诱导是3.7倍。
表1B中显示了编码HO1的HMOX基因的mRNA表达的数据。同样，萝卜硫素或Withaniasomnifera提取物导致NQO1mRNA表达增加。在这种情况下，治疗4h效果更强。在浓度25μg/ml下，Withania somnifera提取物在4h处表现出17.5倍增加。
这表明Withania somnifera提取物能增加Nrf2的内源性靶标在人肺细胞中的表达，从而活化细胞内解毒和抗氧化途径。这表明Withania somnifera提取物可以增加Nrf2的内源性靶标在人肺细胞中的表达，从而活化细胞内解毒和抗氧化途径。
表1：指定浓度下R-萝卜硫素、DMSO、纯化合物和来自LH20色谱的级分(WS-9.1-WS-9.6)的Nrf-2活化。Nrf-2活性以萤光素酶荧光的相对单位给出。为了比较，将阳性对照R-萝卜硫素的值设置为1.0：n.s.：非显著的。
化合物 最终浓度μg/ml 平均值 标准偏差 归一化的数据 p值
R-萝卜硫素 4.55 29384 7479 1.0000 <0.01
DMSO 0.45％ 3020 242 0.0000
NIG-018911 22.73 5488 2425 0.0936 <0.01
睡茄素(Withanolide) 22.73 4677 178 0.0629 <0.01
12-脱氧魏察曼陀罗内酯 22.73 33869 20019 1.1701 <0.01
醉茄素A 0.28 32053 1601 1.1012 <0.01
表1A：NQO1mRNA在人肺上皮细胞BEAS-2B中的表达。将使用0.1％DMSO时的mRNA表达设为1以用于比较。同样，p值是指DMSO对照。
表1B：HMOX mRNA在人肺上皮细胞BEAS-2B中的表达。将使用0.1％DMSO时的mRNA表达设为1以用于比较。同样，p值是指DMSO对照。
实施例2
柴油机颗粒诱导的炎性标志物的减少
方法：
人支气管上皮细胞系BEAS-2B来自ATCC(美国典型培养物保藏中心，弗吉尼亚州马纳萨斯(American Type Culture Collection,Manassas,VA))，并在表面塑料烧瓶(Corning Inc.,Corning,NY)中的支气管上皮细胞生长培养基(BEGM,Lonza,Wakersville,MD)中培养。腺癌人肺泡基底上皮A549细胞系从ATCC获得，并在补充有10％FBS(Sigma,Saint-Louis,MO)的Kaighn改良的Ham F-12培养基(F-12K培养基)(LifeTechnologies,USA)中培养。将这些细胞在含有5％CO2的潮湿气氛中于37℃下培养。
将BEAS-2B细胞以3至4×105个细胞/孔接种到12孔表面培养板(Corning Inc.)中。将A549细胞以2×105个细胞/孔接种在12孔板中。
将柴油机微粒物质(标准参照材料SRM 1650b，美国国家标准技术研究院，NIST，马里兰州盖瑟斯堡(Standard Reference Material SRM 1650b,National Institute ofStandards&Technology,NIST,Gaithersburg,MD))以80mg/ml DMSO(100％)超声处理5min，然后在培养基中稀释400倍。将该稀释液进一步稀释两倍以用于测定。
24h后，在所示的不同浓度的Withania somnifera提取物、其他植物提取物、级分和化合物的存在下，将细胞用100μg/ml的稀释柴油机微粒物质处理。最终DSMO浓度为0.175％。将未处理的细胞或用0.175％DMSO处理的细胞用作对照。24h后，收集细胞上清液。
通过在LiquiChip工作站IS 200(Qiagen,Hilden,Germany)中使用Luminex试剂盒(BIO-RAD Laboratories,Hercules,CA)来测定上清液中IL-6和IL-8的浓度。使用LiquiChip Analyser软件(Qiagen)评估数据。
根据制造商的方案，使用细胞活力试剂(ThermoFisherScientific)来执行BEAS-2B和A549细胞的细胞存活测定。选择无毒浓度的提取物、级分和单一化合物以用于测定。
通过酶免疫测定(EIA)(Cayman Chemicals,Ann Harbor,WI)来测定分泌的PGE 2。
使用Excel计算具有学生t检验的p值和平均值、标准偏差。P值大于0.05被认为指示显著性。
结果：
测试了几种植物提取物、级分和纯化合物抑制人肺细胞系中柴油机微粒物质(PM)诱导的IL-6分泌的能力。Withania somnifera提取物能够活化Nrf2，萝卜硫素是众所周知的Nrf2活化剂。
溶剂DMSO表现为BEAS-2B细胞的IL-6分泌略有减少，因此必须将测试的提取物和化合物的所有值与DMSO存在下的PM对照进行比较。TiO2颗粒并不导致IL-6分泌增加，这表明所述颗粒的物理效应不是所述效应的原因。IL-6的已知诱导剂脂多糖(LPS)具有强效应；其是PM和DMSO的超过40倍。未经处理的细胞不分泌IL-6。
Nrf2活化剂萝卜硫素显著降低了PM诱导的IL-6分泌。因此，Nrf2活化可抵抗导致细胞因子分泌的PM诱导途径。
我们测试了Withania somnifera的两种市售提取物样品。所述提取物能够减少PM诱导的IL-6分泌。在较高的浓度下，Withania somnifera NIG-018909和NIG-018911变得更具活性。
已在IL-6测定中测试了被描述为存在于Withania somnifera中的纯化合物睡茄素A、12-脱氧魏察曼陀罗内酯、醉茄素A和quresimine A。在这些纯化合物中，醉茄素A在0.3μg/ml的极低浓度下降低PM诱导的IL-6分泌。在更高的浓度下，其开始变得对BEAD-2B细胞有毒。我们得出的结论是，醉茄素A很可能是Withania提取物中的活性化合物中的一种，其他活性化合物仍待鉴定，因为醉茄素A必须以非常低的浓度存在于Withania sominfera中。
与对BEAS-2B细胞相似，Nrf2活化剂萝卜硫素使PM诱导的IL-6分泌减少约两倍。同样在A549细胞中，Withania somnifera提取物也是最具活性的。
提取物Withania somnifera NIG-018911是有活性的，但是Withania somniferaNIG-018909在5μg/ml时没有活性。同样，提取物应以更高的浓度使用。
同样，如前所述，已在IL-6测定中用A549细胞测试了被描述为存在于Withaniasomnifera中的纯化合物睡茄素A、12-脱氧魏察曼陀罗内酯、醉茄素A和quresimine A。睡茄素A、12-脱氧魏察曼陀罗内酯、醉茄素A和quresimine A显示出IL-6分泌减少，具有极低的p值。与BEAS-2B细胞相比，在A549细胞中quresimine A中还显示出更低的IL-6浓度值。
与BEAS-2B细胞相比之下，A549细胞在用PM刺激后分泌IL-8。对照、PM和DMSO中的IL-8浓度是IL-6浓度的约25倍。DMSO没有显示出任何明显效应。LPS刺激的IL-8分泌处于与PM诱导的IL-8分泌相同的范围内或更高。同样，萝卜硫素使PM诱导的IL-6分泌降低了几乎两倍。
提取物NIG-018909和NIG-018911在低浓度下对IL-8分泌没有活性。同样，如果可行，应使用较高的浓度。
睡茄素A对A549细胞的IL-8分泌没有影响。12-脱氧魏察曼陀罗内酯和QuresimineA表现出明显的抑制；12-脱氧魏察曼陀罗内酯具有极低的p值。处于0.31μg/ml(更高浓度对细胞有毒)的醉茄素A显示出纯化合物的最高抑制，其中p值接近0。
但是抑制细胞因子分泌的总体模式是相似的。
用LPS或PM处理后，A549细胞也分泌MCP-1。因此，我们测试了我们的提取物和纯化合物对PM诱导的MCP-1释放的抑制。LPS或PM两者均使培养基中的MCP-1浓度增加明显，但是不显著，p值高于0.5。DMSO没有影响。萝卜硫素显示出对MCP-1分泌的明显抑制，具有非常低的p值。
测试了相同的Withania somnifera提取物对A549细胞的MCP-1分泌的影响。无法检测到显著变化。与使用IL-6和IL-8时观察到的效应相比，原因可能是PM诱导MCP-1分泌增加。
在Withania somnifera提取物中存在的四种测试的单一化合物中，12-脱氧魏察曼陀罗内酯和醉茄素A导致MCP-1显著减少。睡茄素A和quresimine A显示出低而不显著的MCP-1减少。由于纯化合物的效应弱，因此预期可无法检测到Withania somnifera提取物级分的显著作用。
然后，我们测量了经PM处理的BEAS-2B细胞的上清液中分泌的PGE2的浓度。在一些情况下，在我们的提取物存在下，我们观察到PGE2分泌减少的趋势。与LPS相比，PM导致略强的PEG2分泌。在所有测试的植物提取物中，与具有DMSO的对照PM相比，Withania somniferaNIG-018911导致POGE2分泌显著减少。从测试的单一化合物中，12-脱氧魏察曼陀罗内酯显示出对PGE分泌的显著减少。使用quresimine A的结果是边界线。
在下面的实验中，我们想了解Withania Smnifera NIG-018911提取物是否能够抑制BEAS-2B细胞中由LPS诱导的抗炎细胞因子分泌。LPS处理导致了生长培养基中IL-6(表11，a)、IL-8(表11，b)和MCP-1(表11，c)的浓度的强增加。在所有三种情况下，该分泌均被Withania somnifera NIG-018911提取物显著抑制；p值分别低于0.002(表11)。因此，Withania somnifera NIG-018911提取物不仅能够抑制PM诱导的炎症参数，而且还能够抑制LPS诱导的炎症参数。Withania somnifera提取物的一些组分已经显示出了这种抗炎活性(White等人，Adv.Exp.Med.Biol.928,(2016),329-373)。此外，由于TLR-4是LPS的受体，我们怀疑Toll样受体4(TLR-4)参与了PM诱导的炎症(Zhang等人，Carohydr.Polym.149,(2016),186-206)，并且在我们的实验设置下，两种诱导物PM或LPS均导致相似的结果。
表2：在不同的Withania somnifera提取物存在下，用柴油机微粒物质(PM)处理的BEAS-2B细胞的IL-6分泌(pg/ml)。PM浓度始终为100μg/ml。将具有DMSO的阳性对照PM的IL-6浓度设为100％以供比较。
表3：在Withania somnifera提取物NIG-018911和纯化合物存在下，用柴油机微粒物质(PM)处理的BEAS-2B细胞的IL-6分泌(pg/ml)。PM浓度始终为100μg/ml。将具有DMSO的阳性对照PM的IL-6浓度设为100％以供比较。
表4：在不同的Withania somnifera提取物存在下，用柴油机微粒物质(PM)处理的A549细胞的IL-6分泌(pg/ml)。PM浓度始终为100μg/ml。将具有DMSO的阳性对照PM的IL-6浓度设为100％以供比较。
表5：在不同Withania somnifera提取物NIG-018911和纯化合物存在下，用柴油机微粒物质(PM)处理的A549细胞的IL-6分泌(pg/ml)。PM浓度始终为100μg/ml。将具有DMSO的阳性对照PM的IL-6浓度设为100％以供比较。
表6：在不同Withania somnifera提取物存在下，用柴油机微粒物质(PM)处理的A549细胞的IL-8分泌(pg/ml)。PM浓度始终为100μg/ml。将具有DMSO的阳性对照PM的IL-8浓度设为100％以供比较。
表7：在不同Withania somnifera提取物NIG-018911和纯化合物存在下，用柴油机微粒物质(PM)处理的A549细胞的IL-8分泌(pg/ml)。PM浓度始终为100μg/ml。将具有DMSO的阳性对照PM的IL-8浓度设为100％以供比较。
表8：在不同Withania somnifera提取物存在下，用柴油机微粒物质(PM)处理的A549细胞的MCP-1分泌(pg/ml)。PM浓度始终为100μg/ml。将具有DMSO的阳性对照PM的MCP-1浓度设为100％以供比较。
表9：在Withania somnifera提取物NIG-018911和纯化合物存在下，用柴油机微粒物质(PM)处理的A549细胞的MCP-1分泌(pg/ml)。PM浓度始终为100μg/ml。将具有DMSO的阳性对照PM的MCP-1浓度设为100％以供比较。
表10：在Withania somnifera提取物NIG-018911和纯化合物存在下，用柴油机微粒物质(PM)处理的BEAS-2B细胞的PGE2分泌(pg/ml)。PM浓度始终为100μg/ml。将具有DMSO的阳性对照PM的PGE2浓度设为100％以供比较。
表11：
A)BEAS-2B中的IL-6分泌
B)BEAS-2B中的IL-8分泌
10μg/mL的LPS
C)BEAS-2B中的MCP-1分泌
10μg/mL的LPS
序列表
<110> 帝斯曼知识产权资产管理有限公司
<120> WITHANIA SOMNIFERA提取物提供
针对空气污染相关疾病的保护的用途
<130> Case 32465
<160> 9
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 1
cggctaccac atccaagg 18
<210> 2
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 2
cgggtcggga gtgggt 16
<210> 3
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 3
ttgcgcgcct gctgcct 17
<210> 4
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 4
ccagatattg tggctgaaca aaag 24
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 5
tcctatgaac actcgctcaa acc 23
<210> 6
<211> 29
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 6
cagaccttgt gatattccag ttccccctg 29
<210> 7
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 7
ggatggagcg tccgca 16
<210> 8
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 8
gccgtctcgg gtcacct 17
<210> 9
<211> 20
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> primer
<400> 9
cccgacagca tgccccagga 20

Claims (13)

1.一种口服组合物，所述口服组合物包含选自由以下项组成的组的活性成分：
a)Withania somnifera提取物，其包含有效活化Nrf2的量的醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯；
b)醉茄素A；
c)12-脱氧魏察曼陀罗内酯；
d)Quresimine A；以及
d)它们的混合物
所述口服组合物用于预防或改善空气污染的不良作用。
2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述空气污染是微粒空气污染。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其中所述不良作用选自由以下项组成的组：心血管问题、呼吸系统疾病，以及与空气中传播的颗粒接触的组织的慢性炎症。
4.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，其中所述微粒空气污染来自香烟烟雾。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的组合物，所述组合物还包含选自由以下项组成的组的活性成分：维生素E、水溶性番茄提取物、白藜芦醇、含有白藜芦醇的植物提取物、维生素D、25-羟基维生素D3、羟基酪醇、多不饱和脂肪酸(PUFA)、维生素A，以及它们的混合物。
6.一种营养品、功能性食物或食物补充剂，其包含根据权利要求1-5中任一项所述的组合物。
7.一种改善暴露于空气污染的不良作用的方法，所述方法包括向暴露于空气污染或有暴露于空气污染的风险的人或动物施用有效量的包含选自由以下项组成的组的活性成分的组合物：
a)Withania.somnifera提取物，其包含有效活化Nrf2的量的醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯；
b)醉茄素A；
c)12-脱氧魏察曼陀罗内酯；
d)Quresimine A；以及
d)它们的混合物。
8.根据权利要求7所述的方法，其中所述空气污染是微粒空气污染。
9.根据权利要求7所述的方法，其中所述不良作用选自由以下项组成的组：心血管问题、呼吸系统疾病，以及与空气中传播的颗粒接触的组织的慢性炎症。
10.根据权利要求9所述的方法，其中所述微粒空气污染来自香烟烟雾。
11.根据权利要求7所述的方法，所述方法还包含选自由以下项组成的组的活性成分：维生素E、水溶性番茄提取物、白藜芦醇、含有白藜芦醇的植物提取物、维生素D、25-羟基维生素D3、羟基酪醇、多不饱和脂肪酸(PUFA)、维生素A，以及它们的混合物。
12.根据权利要求7所述的方法，其中所述组合物是营养品、功能性食物或食物补充剂。
13.一种口服组合物，所述口服组合物包含选自由以下项组成的组的活性成分：
a)Withania somnifera提取物，其包含有效活化Nrf2的量的醉茄素A和/或12-脱氧魏察曼陀罗内酯；
b)醉茄素A；
c)12-脱氧魏察曼陀罗内酯；
d)Quresimine A；以及
d)它们的混合物
所述口服组合物用于解毒，和/或增强机体的清洁能力。
CN201880027471.8A 2017-04-27 2018-04-23 Withania somnifera提取物提供针对空气污染相关疾病的保护的用途 Pending CN110545831A (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP17168412.9 2017-04-27
EP17168412 2017-04-27
EP17172347 2017-05-23
EP17172347.1 2017-05-23
PCT/EP2018/060301 WO2018197394A1 (en) 2017-04-27 2018-04-23 Use of withania somnifera extract to protect against air pollution related diseases

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110545831A true CN110545831A (zh) 2019-12-06

Family

ID=62017291

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880027471.8A Pending CN110545831A (zh) 2017-04-27 2018-04-23 Withania somnifera提取物提供针对空气污染相关疾病的保护的用途

Country Status (7)

Country Link
US (1) US20200129531A1 (zh)
EP (1) EP3615051A1 (zh)
JP (1) JP2020517594A (zh)
KR (1) KR20190139998A (zh)
CN (1) CN110545831A (zh)
BR (1) BR112019022184A2 (zh)
WO (1) WO2018197394A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116333028A (zh) * 2021-12-22 2023-06-27 成都普思生物科技股份有限公司 一种从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物及其方法和应用

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005082392A1 (ja) * 2004-03-02 2005-09-09 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology アシュワガンダの葉抽出物による腫瘍細胞選択的増殖阻害
US20110064712A1 (en) * 2009-09-16 2011-03-17 Daniel Moses Amato Dietary Supplement Compositions and Methods of Making and Using the Same
US8501186B2 (en) * 2009-05-05 2013-08-06 Serum Institute Of India, Ltd. Adjuvant composition for vaccine
CN103432144A (zh) * 2013-09-12 2013-12-11 山东大学 醉茄内酯类化合物在制备治疗或预防肿瘤、神经退行性疾病的药物或保健品中的应用
US20140271944A1 (en) * 2004-03-23 2014-09-18 Lifeline Nutraceuticals Compositions for Alleviating Inflammation and Oxidative Stress in a Mammal
WO2017041054A1 (en) * 2015-09-03 2017-03-09 Pathways Bioscience, Llc Compositions for improved nrf2 activation and methods of their use

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2016183111A (ja) * 2015-03-25 2016-10-20 国立大学法人 琉球大学 Ｎｒｆ２活性化剤

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005082392A1 (ja) * 2004-03-02 2005-09-09 National Institute Of Advanced Industrial Science And Technology アシュワガンダの葉抽出物による腫瘍細胞選択的増殖阻害
US20140271944A1 (en) * 2004-03-23 2014-09-18 Lifeline Nutraceuticals Compositions for Alleviating Inflammation and Oxidative Stress in a Mammal
US8501186B2 (en) * 2009-05-05 2013-08-06 Serum Institute Of India, Ltd. Adjuvant composition for vaccine
US20110064712A1 (en) * 2009-09-16 2011-03-17 Daniel Moses Amato Dietary Supplement Compositions and Methods of Making and Using the Same
CN103432144A (zh) * 2013-09-12 2013-12-11 山东大学 醉茄内酯类化合物在制备治疗或预防肿瘤、神经退行性疾病的药物或保健品中的应用
WO2017041054A1 (en) * 2015-09-03 2017-03-09 Pathways Bioscience, Llc Compositions for improved nrf2 activation and methods of their use

Non-Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ARJUN RAM，等: "Medicinal plants useful for treating chronic obstructive pulmonary disease (COPD): current status and future perspectives", 《FITOTERAPIA》 *
ETHERESIA PRETORIUS，等: "Ultrastructure of platelets and fibrin networks of asthmatic mice exposed to selenium and Withania somnifera", 《ANATOMICAL SCIENCE INTERNATIONAL》 *
RAVI K，等: "Separation, identification, and quantification of selected withanolides in plant extracts of Withania somnifera by HPLC-UV(DAD)--positive ion electrospray ionisation-mass spectrometry", 《JOURNAL OF SEPARATION SCIENCE》 *
S. ARSHAD JAMAL，等: "BIOACTIVITIES AND STRUCTURAL STUDIES OF WITHANOLIDES FROM Withania somnifera", 《CHEMISTRY OF HETEROCYCLIC COMPOUNDS》 *
SHASHA TAO，等: "Withaferin A Analogs That Target the AAA+ Chaperone p97", 《ACS CHEMICAL BIOLOGY》 *
叶鸣，等: "Nrf2在炎症相关疾病中的保护作用", 《药物生物技术》 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116333028A (zh) * 2021-12-22 2023-06-27 成都普思生物科技股份有限公司 一种从南非醉茄提取物中提取分离的甾体内酯类化合物及其方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
EP3615051A1 (en) 2020-03-04
WO2018197394A1 (en) 2018-11-01
US20200129531A1 (en) 2020-04-30
JP2020517594A (ja) 2020-06-18
BR112019022184A2 (pt) 2020-05-12
KR20190139998A (ko) 2019-12-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Nair et al. Grape seed extract proanthocyanidins downregulate HIV-1 entry coreceptors, CCR2b, CCR3 and CCR5 gene expression by normal peripheral blood mononuclear cells
Pratheeshkumar et al. Ameliorative action of Vernonia cinerea L. on cyclophosphamide-induced immunosuppression and oxidative stress in mice
Yang et al. Suppression of LPS‐induced inflammation by chalcone Flavokawain A through activation of Nrf2/ARE‐mediated antioxidant genes and inhibition of ROS/NFκB signaling pathways in primary splenocytes
Pegoraro et al. Oleic acid exhibits an expressive anti-inflammatory effect in croton oil-induced irritant contact dermatitis without the occurrence of toxicological effects in mice
Chan et al. Nutraceuticals: Unlocking newer paradigms in the mitigation of inflammatory lung diseases
Maldonado-Garcia et al. Antioxidant and immunostimulant potentials of Chenopodium ambrosioides L. in Pacific red snapper (Lutjanus peru)
Deng et al. Gly-Pro-Ala peptide and FGSHF3 exert protective effects in DON-induced toxicity and intestinal damage via decreasing oxidative stress
Arafa et al. Influence of Echinacea extract pre-or postnatal supplementation on immune and oxidative status of growing rabbits
Salem et al. Effects of white mustard (Sinapis alba) oil on growth performance, immune response, blood parameters, digestive and antioxidant enzyme activities in rainbow trout (Oncorhynchus mykiss)
Aluta et al. Inclusion effect of onion peel powder in the diet of African catfish, Clarias gariepinus: Growth, blood chemistry, hepatic antioxidant enzymes activities and SOD mRNA responses
Lim et al. Echinacea purpurea
CN110545831A (zh) Withania somnifera提取物提供针对空气污染相关疾病的保护的用途
JPWO2014171333A1 (ja) ミトコンドリア活性化剤
Nallathamby et al. Lipid-rich fraction of the sclerotium of Tiger Milk Mushroom Lignosus rhinocerotis (Agaricomycetes) attenuates LPS-induced inflammation in BV2 cells via Nrf2 pathway
CN113347985A (zh) 月桂提取物级分用于抵抗空气污染相关疾病的用途
Bahr et al. Renal genomic instability induced by aspartame and the possible influence of the flaxseed oil and coenzyme Q10 in male rats
Mahmoud et al. Prevention of tri-nitrobenzene of sulfonic acid-induced colitis in chicken by using extract of Aloe vera.
El-baz et al. Berry extracts improved inflammatory cytokines, antioxidant enzyme and suppressed the gene expression alterations in diabetic rats
El-Najjar et al. Onopordum cynarocephalum induces apoptosis and protects against 1, 2 dimethylhydrazine-induced colon cancer
KR101802671B1 (ko) 테로스틸벤 4’-글루코시드를 유효성분으로 함유하는 염증성 질환 예방 또는 치료용 약학조성물
Osman et al. Comparative evaluation of antioxidant and hepatoprotective effects of three olive leave species cultivated in aljouf region, Saudi arabia
Lu et al. Mutagenicity and safety evaluation of ethanolic extract of Prunus mume
Kurdi et al. Cytotoxicity Effect of 5-fluorouracil and bee products on the HTC-116 Human colon Cancer Cell Line in vitro
Indap et al. Inhibitory effect of cinnamoyl compounds against human malignant cell line
Bartak et al. Homemade onion syrup. Why is it a great common cold remedy

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20191206