CN116287456A - 一种肺淋巴上皮瘤样癌诊断和/或发病风险评估产品 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种肺淋巴上皮瘤样癌诊断和/或发病风险评估产品，其含有检测EB病毒loc7209、loc132048和/或loc156013中的一个或几个的基因型的试剂。本发明提供了一组与肺淋巴上皮瘤样癌发病风险相关的EB病毒基因组变异位点，并根据这组变异位点制备了一种可用于EB病毒变异位点检测及分型的试剂盒，该变异位点组合联合患者性别、年龄信息，可以精确评估EB病毒感染者罹患肺淋巴上皮瘤样癌的患病风险，对EB病毒相关肿瘤的预防、筛查、预后提升以及对EB病毒疫苗研制均具有重要指导意义与实际应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及肺淋巴上皮瘤样癌分子诊断技术领域，具体地，涉及一种肺淋巴上皮瘤样癌诊断和/或发病风险评估产品。
背景技术
肺淋巴上皮瘤样癌是一种特殊类型的非小细胞肺癌，与其他类型非小细胞肺癌不同的是，肺淋巴上皮瘤样癌好发于亚洲的年轻女性，且多为非吸烟者。此外由于疾病早期症状不典型，易被忽视或误诊为其他疾病而延误治疗。并且一些经典的肺癌驱动变异如表皮生长因子受体变异、间变性淋巴瘤激酶重排等在肺淋巴上皮瘤样癌患者中相当罕见，使得现有靶向治疗药物难以奏效。目前对肺淋巴上皮瘤样癌的研究认为，EB病毒感染是其发病的重要原因，因此EB病毒可能是提升其筛查和治疗手段的重要突破口。
EB病毒是一种广泛分布的人类疱疹病毒，并且是人类最早鉴定出的致瘤病毒，与全球1.8％的恶性肿瘤死亡事件相关。除肺淋巴上皮瘤样癌外，EB病毒还与多种恶性肿瘤相关，如鼻咽癌、EB病毒相关胃癌及多种淋巴瘤。全球有95％的人有EB病毒感染史并终身携带病毒，但仅有极少部分个体会发展为EB病毒相关的恶性肿瘤。EB病毒基因组为172kb的双链DNA，编码超过90种蛋白及多种RNA。已有研究表明EB病毒基因组的遗传变异在多种EB病毒相关的肿瘤中发挥重要作用，它们可以通过改变EB病毒编码基因的表达水平及功能，从而影响EB病毒的致病能力，因此推测EB病毒的特定单倍型可能与包含肺淋巴上皮瘤样癌在内的恶性肿瘤的发病风险相关。
发明内容
本发明的目的是提供一种肺淋巴上皮瘤样癌诊断和/或发病风险评估产品。鉴定肺淋巴上皮瘤样癌相关的EB病毒基因组变异位点，构建肺淋巴上皮瘤样癌的高危EB病毒单倍型，对肺淋巴上皮瘤样癌的病因学研究、肿瘤预防、早期筛查、治疗手段改进具有重要意义，并且对EB病毒疫苗的设计与研发提供重要参考。鉴定出肺淋巴上皮瘤样癌风险相关的EB病毒变异位点及病毒单倍型，可用于肺淋巴上皮瘤样癌的预防、早期筛查，并有助于EB病毒疫苗的研发和肿瘤治疗靶点的研究，减轻个人及社会的肿瘤负担。
本发明的第一个目的是提供检测受检者EB病毒loc7209、loc132048和/或loc156013中的一个或几个的基因型的试剂在制备肺淋巴上皮瘤样癌诊断和/或发病风险评估产品中的应用。
本发明的另一个目的是提供一种肺淋巴上皮瘤样癌诊断和/或发病风险评估产品。
为了实现上述目的，本发明是通过以下方案予以实现的：
发明人基于肺淋巴上皮瘤样癌患者和健康对照人群进行EB病毒全基因组关联研究，发现了3个肺淋巴上皮瘤样癌发病风险相关的EB病毒基因组变异位点(loc7209、loc132048以及loc156013)，并研制出本发明所述的EB病毒变异位点检方法及分型试剂盒，用于评估受检者罹患肺淋巴上皮瘤样癌的风险程度。
因此本发明要求保护以下内容：
检测受检者EB病毒loc7209、loc132048和/或loc156013中的一个或几个的基因型的试剂在制备肺淋巴上皮瘤样癌诊断和/或发病风险评估产品中的应用。
其中，loc7209位于NC_007605.1的7209个碱基，loc132048位于NC_007605.1的132048个碱基，loc156013位于NC_007605.1的156013个碱基。
优选地，所述loc7209基因型为T该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率高；所述loc7209基因型为C该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率低。
优选地，所述loc132048基因型为A该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率高；所述loc132048基因型为G该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率低。
优选地，所述loc156013基因型为T该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率高；所述loc156013基因型为C该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率低。
更优选地，检测loc7209、loc132048和loc156013的基因型，loc7209、loc132048和loc156013的基因单倍型为TAT或TGT该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率高；loc7209、loc132048和loc156013的基因单倍型为CGC该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率低。
进一步优选地，根据loc7209、loc132048和loc156013的基因型得到风险评分，风险评分＝(0.08×年龄的评分)-(1.65×性别的评分)+(17.3×loc7209分型的评分)+(1.35×loc132048分型的评分)+(16.9×SNP156013分型的评分)；
其中，年龄的评分：以实际的年龄代入；性别的评分：男性＝“1”，女性＝“0”；分型的评分：对于EB病毒基因组变异位点分型，危险型＝“1”，非危险型＝“0”；
其中，loc7209的非危险型为“C”，危险型为“T”；loc132048的非危险型为“G”，危险型为“A”；loc156013的非危险型为“C”，危险型为“T”；
受检者的风险评分小于40时，认定该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群；当受检者的风险评分高于40时，认定该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群。
优选地，所述试剂为引物。
本发明还要求保护一种肺淋巴上皮瘤样癌诊断和/或发病风险评估产品，含有检测EB病毒loc7209、loc132048和/或loc156013中的一个或几个的基因型的试剂。
优选地，含有检测EB病毒loc7209、loc132048和loc156013的基因型的试剂。
更优选地，检测EB病毒loc7209基因型的试剂为SEQ ID NO.1～2所示的引物；
检测EB病毒oc132048基因型的试剂为SEQ ID NO.3～4所示的引物；
检测EB病毒loc156013基因型的试剂为SEQ ID NO.5～6所示的引物。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
(1)病毒基因组变异位点是一种新型遗传性生物标志物，且EB病毒以唾液方式传播，且基因组稳定、变异率低，唾液EB病毒的基因组和肿瘤组织中的基因组高度相似，使唾液样本具有无创、易获取、易于检测的优点。
(2)本发明提供了一种系统的EB病毒变异位点检测及分型试剂盒，此试剂盒操作简单，可同时检测EB病毒基因组多个变异位点的基因型，鉴别EB病毒不同单倍型，以评估受检者罹患肺淋巴上皮瘤样癌的相对风险程度，是一种简单高效、具有高敏感性和特异性的疾病风险评估手段；同时可联合受检者的性别、年龄因素，评估个体罹患肺淋巴上皮瘤样癌的相对风险程度，对肿瘤预防、筛查及预后提升具有重要应用价值，并对EB病毒疫苗研发具有重要指导意义。
综上所述，本发明提供了一组与肺淋巴上皮瘤样癌发病风险相关的EB病毒基因组变异位点，并根据这组变异位点制备了一种可用于EB病毒变异位点检测及分型的试剂盒，该变异位点组合联合患者性别、年龄信息，可以精确评估EB病毒感染者罹患肺淋巴上皮瘤样癌的患病风险，对EB病毒相关肿瘤的预防、筛查、预后提升以及对EB病毒疫苗研制均具有重要指导意义与实际应用价值。
附图说明
图1为训练集中，联合性别、年龄和EB病毒基因组变异位点构建预测受检者是否罹患肺淋巴上皮瘤样癌的ROC曲线。
图2为验证集中，联合性别、年龄和EB病毒基因组变异位点构建预测受检者是否罹患肺淋巴上皮瘤样癌的ROC曲线。
具体实施方式
下面结合说明书附图及具体实施例对本发明作出进一步地详细阐述，所述实施例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。下述实施例中所使用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所使用的材料、试剂等，如无特殊说明，为可从商业途径得到的试剂和材料。
实施例1与肺淋巴上皮瘤样癌风险相关的EB病毒基因组变异位点
一、实验方法
1、招募、样本收集与资料整理
(1)EB病毒的基因组高度稳定，同一个体内的变异度低，因此唾液样本和肿瘤样本具有可比性的。
在中山大学肿瘤防治中心共招募78例肺淋巴上皮瘤样癌患者，纳入标准为：具有明确病理诊断的肺淋巴上皮瘤样癌患者；年龄≥18岁；可获得肿瘤组织样本；具有完整的病历资料(病史、体检、相关检查等)；自愿参加并签署知情同意书。
同时，排除出现以下任意情况者：已进行任何形式的抗恶性肿瘤治疗者；既往罹患恶性肿瘤者。
(2)同时发明人还基于社区招募了37名健康对照者，具体纳入标准如下：无肿瘤病史的健康人；年龄≥18岁；可获得唾液样本；自愿参加并签署知情同意书。
对招募的受试者(淋巴上皮瘤样癌患者和健康对照者)性别、年龄等人口统计学信息进行整理，并收集唾液、肿瘤组织等生物样本，对收集的生物样本进行DNA提取和EB病毒全基因组测序。
2、DNA提取
对收集的生物样本进行DNA提取，使用Hamilton自动化提取工作站，按照chemagicSTAR DNABlood Kit提供的标准磁珠法完成总DNA提取，具体步骤为：
(1)生物样本前处理：对于组织样本，剪取2mm3肿瘤组织，加入5粒研磨珠并添加200μl生理盐水、100μl裂解缓冲液及20μl蛋白酶K，使用组织研磨仪充分研磨15分钟得到组织匀浆；对于唾液样本，使用漩涡震荡仪充分震荡混匀得到均质溶液。
(2)细胞及细胞核裂解：将前处理后的样本溶液350μl转移至配套的深孔板中，加入350μl裂解缓冲液1在常温下裂解样本20分钟。
(3)DNA吸附：裂解后每个样本中加入50μl磁珠和950μl结合缓冲液2，使裂解释放的核酸充分结合到磁珠上。
(4)DNA漂洗：将样本-磁珠混合液放置于设备专用的磁力架上，磁棒从溶液上方采用顶部法使磁珠吸附于磁棒套上，先后用各800μl洗脱缓冲液3、4、5对磁珠进行洗脱，随后用1.6ml洗脱缓冲液6进行最后洗脱。
(5)DNA再溶解：分别加入150μl、50μl溶解缓冲液7溶解磁珠上吸附的组织和唾液样本DNA。
(6)测量浓度：使用NanoDrop 2000测量DNA浓度和纯度，并使用Qubit双链DNA试剂盒进行DNA浓度的精确测量。
3、EB病毒全基因组测序及数据分析
对收集的样本进行EB病毒全基因组测序，具体方法如下：
(1)EB病毒拷贝数检测：基于EB病毒基因组BamHI-W区域，使用实时荧光定量PCR技术完成EB病毒基因组定量。
(2)EB病毒捕获文库构建：根据EB病毒拷贝数水平，取500ng DNA经超声打断为250bp左右的DNA片段，使用基于NC_007605、NC_009334、AY961628、JQ009376和LN824209五种EB病毒基因组序列合成的EB病毒单链寡核苷酸探针，进行EB病毒序列靶向富集，并按照NanoPrep试剂盒提供的protocol进行测序文库的构建。
(3)EB病毒全基因组测序：对构建好的EB病毒序列富集文库，使用IlluminaNovaSeq6000平台进行双端150bp测序。
测序的得到的数据进行分析，具体方法如下：
(1)测序数据的预处理：对测序数据使用Trimmomatic(v0.38)过滤低质量数据后，去除比对到人类参考基因组hg19的序列及PCR重复序列，得到高质量的EBV基因组序列。
(2)EB病毒基因组变异的检测：将预处理后的序列用Velvet进行从头组装。组装后的EBV基因组用与参考基因组NC_007605比对以进行变异检测。此外，还纳入了两个华南地区健康对照人群的公开EB病毒测序数据集(SRP152584和PRJNA522388，共180例)，以相同的标准和流程完成变异检测。
(3)EB病毒全基因组关联分析：选择最小等位基因频率大于0.05，缺失率小于0.1的变异位点，使用logistic回归模型对变异位点进行分析，校正性别年龄后，去掉高度连锁的变异位点后，
二、实验结果
EB病毒全基因组测序数据分析发现，位点loc7209、loc132048以及loc156013与肺淋巴上皮瘤样癌的发病风险显著相关，上述的3个变异位点与肺淋巴上皮瘤样癌的发病风险关联程度见表1。
表1 EB病毒基因组3个位点与肺淋巴上皮瘤样癌的关联程度
| 位点名称 | P值 | 比值比(95％置信区间) | 危险型 | 非危险型 |
| loc7209 | 3.637E-05 | 21.303(6.282-133.505) | T | C |
| loc132048 | 2.390E-07 | 10.024(4.705-24.179) | A | G |
| loc156013 | 7.253E-07 | 21.178(7.384-89.777) | T | C |
注：危险型为某受检者EB病毒位点为该基因型的情况下，该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率高；低危险型为某受检者EB病毒位点为该基因型的情况下，该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率低。
实施例2肺淋巴上皮瘤样癌发病风险相关的高危EB病毒单倍型的鉴定
一、实验方法
基于单体型分析，选择上述loc7209、loc132048和loc156013三个变异位点的不同碱基组合形式，形成肺淋巴上皮瘤样癌相关EB病毒单倍型的分类标准，对受检者进行肺淋巴上皮瘤样癌发病风险的评估。
二、实验结果
如表2所示，共鉴定出8个病毒单倍型，其中1型(loc7209、loc132048和loc156013的基因型依次为CGC)和2型(loc7209、loc132048和loc156013的基因型依次为TAT)为华南地区人群的最常见单倍型。使用logistic回归对数据进行分析提示，1型(loc7209、loc132048和loc156013的基因型依次为CGC)为危险度较低的肺淋巴上皮瘤样癌的低危单倍型，而2型(loc7209、loc132048和loc156013的基因型依次为TAT)和3型(loc7209、loc132048和loc156013的基因型依次为TGT)为肺淋巴上皮瘤样癌的高危单倍型。
表2肺淋巴上皮瘤样癌发病风险与EB病毒单倍型的关联分析
实施例3肺淋巴上皮瘤样癌发病风险评分模型的构建及验证
一、实验方法
从实施例1的78例肺淋巴上皮瘤样癌患者中随机选取50％，联合本研究中招募的37名健康对照作为训练集，使用logistics回归，基于上述3个病毒变异位点联合性别、年龄两个人口统计学指标构建肺淋巴上皮瘤样癌的发病风险预测模型，得到的风险预测模型如下所示：
风险评分＝(0.08×年龄的评分)-(1.65×性别的评分)+(17.3×loc7209分型的评分)+(1.35×loc132048分型的评分)+(16.9×SNP156013分型的评分)；
公式中，性别的评分：男性＝“1”，女性＝“0”；年龄的评分：以实际的年龄代入；分型的评分：对于EB病毒基因组变异位点分型，非危险型＝“0”，危险型＝“1”；
其中，loc7209的非危险型为“C”，危险型为“T”；loc132048的非危险型为“G”，危险型为“A”；loc156013的非危险型为“C”，危险型为“T”。
当受检者的风险评分小于40时，认定该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群；当受检者的风险评分高于40时，认定该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群。
基于上述模型，选取剩余50％肺淋巴上皮瘤样癌患者，联合数据库中180名健康对照作为验证集，进行肿瘤罹患风险评估以验证模型效果。
二、实验结果
对该风险评分绘制ROC曲线用于评估模型预测的敏感度和特异度。
在训练集中该风险评分以87.1％的曲线下面积将肺淋巴上皮瘤样癌患者和健康对照区分开，最佳临界点的灵敏度为88.6％，特异度为81.1％(如图1)。
在验证集中，该风险评分以79.2％的曲线下面积将肺淋巴上皮瘤样癌患者和健康对照区分开，在最佳临界点的灵敏度为86.0％，特异度为67.2％(如图2)。
上述结果显示，联合EB病毒基因组变异位点和性别、年龄信息的风险评分可以很好地预测肺淋巴上皮瘤样癌的发病风险。且该风险评分的预测效果优于性别年龄模型(训练集曲线下面积为0.744，验证集曲线下面积为0.622)及任意单个位点的模型(loc7209模型，训练集曲线下面积0.649，验证集曲线下面积0.660；loc132048模型，训练集曲线下面积0.714，验证集曲线下面积0.702；loc156013模型，训练集曲线下面积0.662，验证集曲线下面积0.702)；
其中，性别年龄模型为：风险评分＝(0.07×年龄的评分)-(1.41×性别的评分)，公式中，性别的评分：男性＝“1”，女性＝“0”；年龄的评分：以实际的年龄代入，当受检者评分低于2时，认定该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群，当受检者评分高于2时，认定该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群。
实施例4肺淋巴上皮瘤样癌风险相关EB病毒基因组变异位点检测
一、检测受检者上述loc7209、loc132048和loc156013三个EB病毒基因组变异位点的基因型：
具体检测方法为：
1.DNA提取
使用QIAGEN DNeasy Blood&Tissue Kit试剂盒或类似产品，提取组织或唾液样本的总DNA备用。
2.PCR扩增
利用特定EB病毒基因组变异位点(loc7209、loc132048和loc156013)的PCR扩增引物，对样本总DNA中包含特定EB病毒位点的短片段进行扩增。
PCR扩增引物的具体序列如下：
loc7209上游引物：CCCGCTACCCCTACAACAC(SEQ ID NO.1)，
loc7209下游引物：GCGTGAATTTTCGCTGCTT(SEQ ID NO.2)，
loc132048上游引物：CTGCGGAAATTAGACTCATCC(SEQ ID NO.3)，
loc132048下游引物：CAAAAGCCTACTGCCCCTAC(SEQ ID NO.4)，
loc156013上游引物：AAGGCCGGAGGCAGACAC(SEQ ID NO.5)，
loc156013下游引物：GCCCAGTAGCTTGATGACGA(SEQ ID NO.6)；
对于各扩增反应，在200μl EP管中配置如下PCR体系：
使用PCR仪进行PCR扩增，设定PCR反应条件为：94℃3分钟；94℃30秒；58℃30秒；72℃1分钟；35个循环；72℃10分钟；4℃保持。将EP管放置于PCR仪中，启动PCR反应。
3.利用EB病毒位点特异性引物，对PCR产物进行Sanger测序；
二、收集受检者人口统计学资料，主要包括性别及采样时的年龄；
三、通过以下风险评分公式计算受检者罹患肺淋巴上皮瘤样癌的个体风险评分；
风险评分＝(0.08×年龄的评分)-(1.65×性别的评分)+(17.3×loc7209分型的评分)+(1.35×loc132048分型的评分)+(16.9×SNP156013分型的评分)；
公式中，性别的评分：女性＝“0”，男性＝“1”；
年龄的评分：以实际的年龄代入；
分型的评分：对于EB病毒基因组变异位点分型，非危险型＝“0”，危险型＝“1”；
其中，loc7209的非危险型为“C”，危险型为“T”；loc132048的非危险型为“G”，危险型为“A”；loc156013的非危险型为“C”，危险型为“T”；
S4.当受检者的风险评分小于40时，认定该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群；当受检者的风险评分高于40时，认定该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群。
实施例5肺淋巴上皮瘤样癌风险相关EB病毒基因组变异位点的检测试剂盒
一、组成：
(1)检测loc7209、loc132048及loc156013的PCR扩增引物，具体如下：
loc7209上游引物：CCCGCTACCCCTACAACAC(SEQ ID NO.1)，
loc7209下游引物：GCGTGAATTTTCGCTGCTT(SEQ ID NO.2)，
loc132048上游引物：CTGCGGAAATTAGACTCATCC(SEQ ID NO.3)，
loc132048下游引物：CAAAAGCCTACTGCCCCTAC(SEQ ID NO.4)，
loc156013上游引物：AAGGCCGGAGGCAGACAC(SEQ ID NO.5)，
loc156013下游引物：GCCCAGTAGCTTGATGACGA(SEQ ID NO.6)。
(2)PCR试剂：
PCR酶，dNTPs混合液，缓冲液和双蒸水。
二、使用方法
1.DNA提取
使用QIAGEN DNeasy Blood&Tissue Kit试剂盒或类似产品，提取组织或唾液样本的总DNA备用。
2.PCR扩增
利用检测loc7209、loc132048及loc156013的PCR扩增引物，对样本总DNA中包含EB病毒的loc7209、loc132048及loc15601位点的短片段进行扩增。对于各扩增反应，在200μlEP管中配置如下PCR体系：
| 样本总DNA | 2μl |
| 10×PCR缓冲液 | 2μl |
| dNTPs | 1.5μl |
| Taq酶 | 0.5μl |
| MgCl2 | 2μl |
| PCR扩增引物 | 上下游引物各1μl(10μM) |
| 双蒸水 | 10μl |
| 总体积 | 20μl |
使用PCR仪进行PCR扩增，设定PCR反应条件为：94℃3分钟；94℃30秒；58℃30秒；72℃1分钟；35个循环；72℃10分钟；4℃保持。将EP管放置于PCR仪中，启动PCR反应。
3.利用EB病毒位点特异性引物，对PCR产物进行Sanger测序。
三、结果判读
1、使用Chromas或类似的DNA序列分析软件打开Sanger测序的结果，以参考EB病毒基因组NC_007605为基准，匹配寻找各目标位点的基因型。
2、收集受检者人口统计学资料，主要包括性别及采样时的年龄；
3、通过以下风险评分公式计算受检者罹患肺淋巴上皮瘤样癌的个体风险评分；
风险评分＝(0.08×年龄的评分)-(1.65×性别的评分)+(17.3×loc7209分型的评分)+(1.35×loc132048分型的评分)+(16.9×SNP156013分型的评分)；
公式中，性别的评分：女性＝“0”，男性＝“1”；
年龄的评分：以实际的年龄代入；
分型的评分：对于EB病毒基因组变异位点分型，非危险型＝“0”，危险型＝“1”；
其中，loc7209的非危险型为“C”，危险型为“T”；loc132048的非危险型为“G”，危险型为“A”；loc156013的非危险型为“C”，危险型为“T”；
S4.当受检者的风险评分小于40时，认定该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群；当受检者的风险评分高于40时，认定该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群。
最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，对于本领域的普通技术人员来说，在上述说明及思路的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动，这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明权利要求的保护范围之内。
Claims (10)
1.检测受检者EB病毒loc7209、loc132048和/或loc156013中的一个或几个的基因型的试剂在制备肺淋巴上皮瘤样癌诊断和/或发病风险评估产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述loc7209基因型为T该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率高；所述loc7209基因型为C该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率低。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述loc132048基因型为A该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率高；所述loc132048基因型为G该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率低。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述loc156013基因型为T该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的高危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率高；所述loc156013基因型为C该受检者为肺淋巴上皮瘤样癌的低危人群，患有肺淋巴上皮瘤样癌概率低。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，检测loc7209、loc132048和loc156013的基因型。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，根据loc7209、loc132048和loc156013的基因型得到风险评分，风险评分＝(0.08×年龄的评分)-(1.65×性别的评分)+(17.3×loc7209分型的评分)+(1.35×loc132048分型的评分)+(16.9×SNP156013分型的评分)；
其中，年龄的评分：以实际的年龄代入；性别的评分：男性＝“1”，女性＝“0”；分型的评分：对于EB病毒基因组变异位点分型，危险型＝“1”，非危险型＝“0”；
其中，loc7209的非危险型为“C”，危险型为“T”；loc132048的非危险型为“G”，危险型为“A”；loc156013的非危险型为“C”，危险型为“T”。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂为引物。
8.一种肺淋巴上皮瘤样癌诊断和/或发病风险评估产品，其特征在于，含有检测EB病毒loc7209、loc132048和/或loc156013中的一个或几个的基因型的试剂。
9.根据权利要求8所述的肺淋巴上皮瘤样癌诊断和/或发病风险评估产品，其特征在于，含有检测EB病毒loc7209、loc132048和loc156013的基因型的试剂。
10.根据权利要求8所述的肺淋巴上皮瘤样癌诊断和/或发病风险评估产品，其特征在于，检测EB病毒loc7209基因型的试剂为SEQ ID NO.1～2所示的引物；
检测EB病毒oc132048基因型的试剂为SEQ ID NO.3～4所示的引物；检测EB病毒loc156013基因型的试剂为SEQ ID NO.5～6所示的引物。
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