CN116267583A - 一种玉米优异性状精准导入与鉴定方法 - Google Patents
一种玉米优异性状精准导入与鉴定方法 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了一种玉米优异性状精准导入与鉴定方法，属于作物育种领域。本发明要解决的技术问题是如何实现玉米优异性状的精准导入。本发明提供一种玉米目标性状导入的方法，所述方法包括S1)将具有目标性状的玉米与受体自交系进行杂交，获得F1；S2)以单倍体诱导系为父本、以S1)所述F1为母本进行杂交，筛选具有目标性状的单倍体；S3)以S1)所述受体自交系为父本，以S2)所述单倍体为母本进行杂交获得HBC1群体；S4)将所述HBC1群体分穗行种植，以所述HBC1群体单株作为母本、以所述受体自交系作为父本进行回交，连续N代，获得目标性状稳定的株系；S5)将S4)所述的株系与玉米杂交获得具有目标性状的杂交株系。
Description
技术领域
本发明属于作物育种领域，具体涉及一种玉米优异性状精准导入与鉴定方法。
背景技术
玉米自交系是选育玉米商业化杂交种的基础。随着玉米遗传基础的解析与关键基因的克隆，越来越多的优异性状被发现和利用。为应对极端环境变化，将优异性状导入受体亲本，而后多次回交，在保留原有受体亲本遗传背景的基础上，实现优良性状的聚合，是目前主要采取的育种方法。但在对优异性状进行导入的过程中，目标性状的鉴定至关重要，利用常规回交方法时，一般是对单株进行目标性状的鉴定，但单株表型易受环境影响，可能导致目标性状的丢失，后续工作量加大，浪费大量人力物力，阻滞育种进程。因此开发玉米优异性状精准导入与鉴定方法，可在性状导入过程中，确保目标性状鉴定的准确性，实现玉米优异性状的精准导入。创制一种玉米优异性状精准导入与鉴定方法可实现优异性状聚合，创制优良种质，从而促进玉米育种技术的发展。
发明内容
本发明要解决的技术问题是如何实现玉米目标性状，尤其是优异性状的精准导入。
为解决上述技术问题，第一个方面，本发明提供一种玉米目标性状导入的方法，所述方法包括如下步骤：
S1)、将具有目标性状的玉米与受体自交系进行杂交，获得F1；
S2)、以单倍体诱导系为父本、以S1)所述F1为母本进行杂交，筛选具有目标性状的单倍体；
S3)、以S1)所述受体自交系为父本，以S2)所述单倍体为母本进行杂交获得HBC1群体；
S4)、将所述HBC1群体分穗行种植，以所述HBC1群体单株作为母本、以所述受体自交系作为父本进行回交，连续N代，获得目标性状稳定的株系；所述N为大于等于1的自然数；
S5)、将S4)所述的株系自交获得具有目标性状的受体自交系或将S4)所述的株系与玉米杂交获得具有目标性状的杂交株系。
进一步地，所述的方法中，S2)所述单倍体诱导系携带显性遗传标记或者分子标记。
进一步地，所述的方法中，S2)所述单倍体诱导系携带显性遗传标记可用于鉴别单倍体且具备较高的单倍体诱导率。
进一步地，所述的方法中，S2)所述具有目标性状的单倍体还包括抗锈病基因RppM。
在本发明的一个实施例中，所述抗锈病基因RppM通过引物序列上游引物F1:GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCTGAAGCTAYCAATTGGGGCCAC，上游引物F2：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCTGAAGCTAYCAATTGGGGCCAC和下游引物R:GCAGCGATTCCCTGAAGAAACCAT进行鉴定。以检测待测玉米第10号染色体第1608911位脱氧核糖核苷酸的基因型是G还是A，G基因型待测玉米含有抗锈基因RppM；A基因型的待测玉米不含有抗锈基因RppM。
进一步地，所述的方法中，S4)中，所述HBC1群体单株具有所述目标性状且与所述受体自交系中所述目标性状以外的表型相近。
进一步地，所述的方法中，S4)中所述1≤N≤5，N为自然数。
进一步地，3≤N≤4。
进一步地，所述的方法中，所述目标性状选自下述任一种或几种：
A1)、所述目标性状为生育期相关性状，例如早熟性；
A2)、所述目标性状为植株性状，例如抗锈病、抗青枯、抗斑病、抗倒伏等；
A3)、所述目标性状为果穗性状，例如穗长、穗粗、穗行数，抗穗腐等；
A4)、所述目标性状为籽粒性状，例如粒长、粒宽、抗粒腐等。
进一步地，所述的方法中，所述目标性状选自下述至少一种：抗锈病、抗青枯病、抗斑病和/或抗倒伏。
进一步地，所述的方法中，所述目标性状为抗锈病性状。
第二个方面，本发明提供一种玉米育种的方法，所述方法包括上述的S1)-S5)。
进一步地，所述的方法中，所述育种目的包括培育抗锈病玉米。
第三个方面，本发明提供一种培育抗锈病玉米的方法，所述方法包括上述的S1)-S5)。
第四个方面，本发明提供一种玉米目标性状导入的鉴定方法，所述方法包括鉴定上述的S1)-S5)中S3)和S4)所述HBC1群体的表型。
进一步，本发明中所述HBC1群体的表型可为穗行表型鉴定。
本发明中通过受体自交系回交S2)所述单倍体获得HBC1，由于单倍体仅含有一套染色体组，所得HBC1果穗上籽粒基因型均一致。即，将单株表型扩展至穗行表型鉴定，从而增加表型鉴定的准确性，同时回交单倍体，保证了受体材料的背景恢复率。
而常规育种中的表型鉴定，主要通过单株表型鉴定完成，由于受到环境、基因位点纯合或杂合状态的影响，可能会导致表型鉴定不准的情况。
在本发明的实施例中，以玉米抗锈病性状的导入举例，提供了具体的操作步骤。
在本发明的实施例中，所述目标性状是抗锈病性状。
在本发明的实施例中，以所述具有目标性状的玉米为父本，以所述受体自交系为母本，杂交获得F1。
在本发明的实施例中，所述具有目标性状的玉米为玉米抗锈自交系京2416K。
在本发明的实施例中，所述受体自交系为感锈自交系C1120。
在本发明的实施例中，所述单倍体诱导系为京科诱046，京科诱046携带显性遗传标记，即R1-nj标记。
在本发明的实施例中，具有目标性状的单倍体携带R1-nj标记。其中，单倍体胚乳含有父本染色体，而盾片仅含有母本一套染色体组，因此单倍体籽粒糊粉层为紫色，而盾片表现正常，不显色。对单倍体籽粒进行鉴别，从而获得单倍体分离群体种子。
在本发明的实施例中，S5)中所述的与S4)所述的株系杂交的玉米为京B547。
本发明中，所述HBC1群体即单倍体回交群体，以受体材料为父本，上述杂交所得F1的单倍体为母本进行杂交，由于单倍体仅含有一套染色体组，因此同一株单倍体果穗所得籽粒基因型完全一致。
本发明中，首先将含有目标性状的材料与受体自交系组配，获得F1，所述目标性状可为生育期相关性状，例如早熟性；可为植株性状，例如抗锈病、抗青枯、抗斑病、抗倒伏等；可为果穗性状，例如穗长、穗粗、穗行数，抗穗腐等；可为籽粒性状，例如粒长、粒宽、抗粒腐等。而后利用单倍体诱导系对所得F1进行诱导，获得单倍体分离群体种子或幼胚。将所得单倍体籽粒或幼胚成苗播种于对目标性状具有筛选条件的环境中，对于具有连锁分子标记的性状，结合分子标记和胁迫环境对目标性状进行筛选，保留具有目标性状的单倍体植株，并对其雌穗进行套袋，防止花粉污染。鉴于单倍体高度不育，能够产生正常花粉的比例较低，以受体亲本为父本，对单倍体雌穗进行授粉，获得HBC1群体，并分穗行保存。由于单倍体仅有1套染色体组，所产生配子体基因型相同，因此在与受体自交系杂交后，同一单倍体雌穗所得籽粒基因型一致，将HBC1群体按穗行种植，同一穗行基因型一致，根据穗行表型对目标性状进行鉴定，避免常规分离群体中单株表型鉴定准确性低的问题，而后对具有目标性状且表型与受体自交系更接近的穗行，继续用受体自交系进行回交，直至获得稳定的具有目标性状的株系，而后自交，获得具有目标性状的受体自交系。
常规的性状导入，一般采取直接从F2或BC1分离群体中筛选具有目标形状的单株进行连续回交多代后自交的方式。因此早代目标性状的鉴别是实现精准导入的关键，而常规方法中仅对具有目标性状的单株表型进行鉴定，单株表型易受环境影响，且F2或BC1分离群体中具有目标性状的单株存在纯合或杂合两种基因型，最终导致单株表型准确性低，无法保证后续工作的持续性，同时具有杂合基因型单株与受体亲本再次回交，会产生一半的不具有目标性状的籽粒，因此也加大了后续回交鉴定的工作量。
本方法，对早代分离群体进行诱导，获得单倍体分离群体，而后结合胁迫环境和分子标记对单倍体目标性状进行鉴定，由于单倍体仅含有一套染色体组，因此具有目标性状的单倍体基因型均为纯合，而后以受体自交系为父本与单倍体雌穗杂交，所得HBC1，同一果穗基因型一致，且均为杂合状态，常规回交方法，利用受体亲本与含有杂合状态目标性状的单株杂交时，所得BC1种子会发生分离，其中一半种子不表现目标性状，另一般含有目标性状的种子遗传背景也同样发生分离，后代表型鉴定仅可通过单株进行鉴定。利用本方法对玉米优异性状进行导入时，可通过单倍体世代鉴定在早代固定目标性状，利用单倍体回交群体，在有序推进回交背景纯化的同时，扩大后代表型鉴定的群体量，使目标性状表型鉴定更加精准。
对生育期性状的鉴定，可将单倍体世代分别种植于长日照地区，例如海南，或短日照地区，例如北京，从而根据单倍体植株对光周期的反应不同，选择所得目标单株进行回交，同样后续HBC1代在同一环境中进行鉴定。
对植株性状的鉴定，果穗性状中的抗穗腐、籽粒性状中的抗粒腐等，可选择具有相应病害高发区进行环境胁迫，例如黄淮海地区可进行玉米锈病、青枯、倒伏、穗粒腐等病害的鉴定与筛选，东北地区可进行玉米斑病、倒伏、穗粒腐等病害的鉴定与筛选，或采取人工接种的方式进行鉴定，同时可结合分子标记进行辅助选择。
对果穗性状的鉴定，穗长、穗粗、穗行数；籽粒性状中的粒长，粒宽等性状，可先结合分子标记进行初步筛选，而后根据收获后果穗或粒子情况进行二次鉴定。
本发明取得的有益技术效果如下：
本发明针对将优异性状导入特定种质的问题，对具有玉米优异性状的基础群体，结合单倍体诱导技术，对基础群体进行诱导，获得单倍体，在单倍体世代对目标性状进行鉴定，同时结合分子标记进行辅助选择，而后将以受体材料为父本与单倍体雌穗进行杂交，获得相应回交群体HBC1，鉴于单倍体仅有一套染色体组，因此回交所得HBC1单一果穗上种子基因型一致，而后将HBC1分穗行种植，将常规方法中单株表型鉴定转换为穗行表型鉴定，在进行材料背景纯化的同时，实现目标性状的精准鉴别，从而实现优异性状的精准导入与鉴定。
为解决玉米性状导入筛选周期长，工作量大、鉴定困难的问题提供了一个可行的方案，可大大增加优异性状导入的准确性，提高优异种质创制效率。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的定量试验，如无特殊说明均设置三次重复，结果取平均值。
下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中玉米(Zea mays L.)自交系C1120为公知材料，在文献“张华生,段民孝,陈传永,张春原,张雪原,刘新香,毛振武,张亮,王元东,赵久然.京津冀夏播早熟玉米新品种NK815选育过程及配套栽培技术[J].农业科技通讯,2018(06):269-270.”中公开过，公众可从北京市农林科学院获得，该材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
下述实施例中玉米(Zea mays L.)单倍体诱导系京科诱046，(植物新品种权授权号CNA20110155.6)，玉米自交系京2416K(植物新品种权申请号20170479.9)，玉米自交系京B547(植物新品种权授权号CNA20162100.3)与NK815(植物新品种权授权号CNA20171510.8)为公知材料，均由北京市农林科学院玉米研究所自选育，公众可从北京市农林科学院玉米研究所获得，该材料只为重复本发明的相关实验所用，不可作为其它用途使用。
下述实施例中的蔗糖和琼脂糖均为北京吉普腾生物技术有限公司产品。
下述实施案例中的PCR扩增Mix试剂为北京艾德莱生物科技有限公司产品。
下述实施例采用Excel对数据进行处理，实验结果以平均值±标准偏差表示，采用One-way ANOVA检验。同一行不同的字母代表在0.05水平差异显著，相同的字母代表在0.05水平差异不显著。
实施例1、材料选择与准备
种植玉米抗锈自交系京2416K与感锈自交系C1120，并组配获得F1。
具体地，于2018年5月在北京市农林科学院小汤山实验基地，将玉米抗锈自交系京2416K、感锈自交系C1120，分别种植10行，每行种植10株。以玉米抗锈自交系京2416K作为父本、以感锈自交系C1120作为母本进行杂交获得100株玉米植株，100株玉米植株收获的果穗上的籽粒为F1代种子。
实施例2、单倍体的诱导与鉴定
2.1、常规方法获得BC1种子
种植上述F1，常规性状导入方法为以受体C1120为轮回亲本，即以C1120为父本，以上述F1为母本进行杂交，从而获得BC1种子。
具体地，于2018年10月在北京市农林科学院海南实验基地，将实施例获得的C1120/京2416K杂交F1种子播种10行，每行10株，受体C1120，分期播种，每期2行，每行10株，分3期，从而保证花期相遇，以C1120为父本，以上述F1为母本进行杂交，从而获得BC1种子。
2.2、单倍体分离群体种子的获得
另外以单倍体诱导系京科诱046为父本，上述F1为母本，进行杂交，杂交果穗收获后，因单倍体诱导系京科诱046携带显性遗传标记，即R1-nj标记，杂交后，杂合二倍体籽粒糊粉层和盾片由正常双受精发育而来，因此均携带R1-nj标记，因此糊粉层和盾片均表现为紫色。单倍体胚乳含有父本染色体，而盾片仅含有母本一套染色体组，因此单倍体籽粒糊粉层为紫色，而盾片表现正常，不显色。对单倍体籽粒进行鉴别，从而获得单倍体分离群体种子。
具体地，于2018年10月在北京市农林科学院海南实验基地，将C1120/京2416K杂交F1种子播种10行，每行10株；单倍体诱导系京科诱046，分期播种，每期5行，每行10株，分3期，从而保证花期相遇，以京科诱046为父本，以上述F1为母本进行杂交，从而获得杂交诱导果穗，根据单倍体籽粒糊粉层和盾片颜色标记对单倍体籽粒进行鉴别，收获籽粒，从而获得单倍体分离群体。
实施例3、单倍体抗锈性状鉴定与HBCI的获得
对上述2.2获得的单倍体分离群体进行发苗，获得单倍体幼苗。幼苗移栽前，取叶片提取DNA。利用分子标记对所提取DNA的抗锈病基因RppM进行检测，所用引物序列为上游引物F1：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTCTGAAGCTAYCAATTGGG GCCAC，上游引物F2：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTCTGAAGCTAYCAATTGG GGCCAC和下游引物R：GCAGCGATTCCCTGAAGAAACCAT，引物F1和F2中Y表示C或T，该引物在申请号为CN202210415127.4、发明名称为与玉米南方锈病抗性相关的KASP标记及其应用的专利中公开。玉米锈病为质量性状受单基因控制，所使用抗锈材料京2416K携带抗锈病基因RppM。利用上述标记对所得单倍体进行基因型鉴定。由于单倍体仅存在一套染色体组，检测待测玉米第10号染色体第1608911位(参考基因组版本号：B73_RefGen_v4)脱氧核糖核苷酸的基因型是G还是A，G基因型待测玉米含有抗锈基因RppM；A基因型的待测玉米不含有抗锈基因RppM。
保留含有抗锈病基因的单倍体分离群体幼苗。将上述单倍体幼苗移栽于锈病高发区，雌穗严格套袋，以受体亲本C1120为父本，与单倍体进行杂交。锈病一般发生于授粉后至果穗成熟，果穗收获时，结合单倍体田间表现，收获抗锈单株的杂交果穗，从而获得HBC1，并分穗行保存。
具体地，于2019年3月在北京市农林科学院海南实验基地，将上述含有抗锈病基因的单倍体幼苗移栽至田间，同时受体亲本C1120分3期种植，每期5行，每行10株，单倍体植株雌穗吐丝前，严格套袋，取受体亲本C1120花粉，与单倍体进行授粉，结合单倍体植株田间锈病发生情况，收获抗锈单株的杂交果穗，从而获得HBC1，不同果穗分开保存。
实施例4、BC1与HBC1抗锈鉴定
分别种植2.1所述常规方法所得BC1群体与实施例3所得HBC1，其中HBC1分穗行种植。
具体地，于2019年5月在北京市农林科学院荥阳实验基地，将BC1群体种子播种30行，每行11株；HBC1分穗行种植，于收获期对BC1群体单株和HBC1不同穗行锈病发生情况进行调查，同时播种受体材料C1120，作为父本对两群体进行杂交。
而后对其锈病发生情况进行鉴定，结果发现(表1)，由于F1抗锈基因为杂合状态，利用感锈自交系C1120回交所得BC1籽粒中，杂合状态抗锈与感锈理论分离比为1：1，这一结果与田间鉴定结果较为一致，田间播种BC1群体中，抗锈单株与感锈单株分别为147株和168株。
而单倍体仅含有母本一套染色体组，因此所携带抗锈基因均为纯合，在利用感锈自交系C1120回交所得HBC1种子理论上均携带杂合状态的抗锈基因，且同一果穗上基因型完全一致，因此同一穗行HBC1表型一致，抗锈病鉴定发现，所种植213个穗行HBC1中，188个穗行表现为抗锈，占比为88.3％，远超常规BC1群体中的抗锈单株占比(46.7％)。
此外，BC1群体抗锈表型鉴定，仅通过单株进行鉴定，易受环境影响，例如对于弱苗或生育期较长的单株发病晚，可能导致抗锈单株的误选，而通过回交获得HBC1的方式，可将单株鉴定扩展为穗行鉴定，大大保证了表型鉴定的准确性。
表1不同群体抗锈表型鉴定
实施例5、受体遗传背景恢复比较
为加速表型恢复同时抗锈性状的精准导入，还需要对受体背景进行选择，常规方法每代选择抗锈且与轮回亲本遗传背景和表型最为相近的单株，与轮回亲本继续回交，获得BC1来源的抗锈C1120。同样，BC1来源的抗锈C1120单株表型易受环境影响。其中，BC1来源的抗锈C1120玉米植株培育方式为：于2019年10月在北京市农林科学院海南实验基地，将BC1群体抗锈单株与C1120继续回交所得种子，分穗行种植，每个穗行播种1行，每行11株，同时播种C1120，分3期播种，每期3行，每行11株。针对BC1群体各穗行挑选抗锈单株，继续与C1120回交，连续回交3-4次，而后自交获得BC1来源的抗锈C1120。
本方法利用HBC1将单株表型鉴定扩展至穗行，可保证目标性状鉴定与受体背景选择的准确性。最终选择抗锈且与受体材料表型相近的单株或穗行，继续与受体材料C1120回交，连续回交3-4代，而后自交，获得HBC1来源的抗锈C1120。
根据主要农作物品种真实性和纯度SSR分子标记检测玉米(标准号：GB/T39914-2021)，对40对差异位点比对分别对常规回交方法和利用单倍体回交方法所得抗锈C1120背景种质与C1120进行比较，差异位点数小于等于4的可视为同一种质，即背景恢复，结果发现(见表2)，利用HBC1所得抗锈种质背景恢复占比为95.24％，而常规回交方法背景恢复占比仅为80.28％，且HBC1所得种质差异位点数均在7个以下，BC1所得种质中2份位点数超过7个。由此说明利用HBC1可实现目标性状的精准鉴别，同时有效提升背景恢复效率，实现目标性状的精准导入。
表2不同来源抗锈C1120背景种质与C1120差异位点比对
实施例6、抗锈杂交种的评价
2020年冬海南利用感锈自交系C1120与京B547组配获得玉米品种NK815(也称为非抗锈NK815)，HBC1来源的抗锈C1120与京B547组配获得抗锈版NK815。而后2021年将其种植于各生态区进行鉴定与比较。成熟后进行测产，结果发现(见表3)，在非锈病发生区(北京)，抗锈NK815产量略低于NK815但差异不显著，说明抗锈C1120与C1120遗传背景接近，对组配杂交种影响不显著。但在锈病高发区(荥阳、鹤壁、济南、济宁、德州)，抗锈NK815表现出明显的产量优势，相比于非抗锈NK815，产量提升在104.0-150.3kg，增产幅度在21.65-29.03％之间，抗锈NK815表现出明显的产量优势。
其中，抗锈版NK815与非抗锈NK815在同一地块种植，播种时间为6月中旬，种植密度每亩4500株，每个小区播种5行，行长5米，选择中间3行测产，每个地块设置3个重复。
表3NK815与抗锈版NK815产量对比
同地点不同的字母代表在0.05水平差异显著，相同的字母代表在0.05水平差异不显著。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。
Claims (10)
1.一种玉米目标性状导入的方法，所述方法包括如下步骤：
S1)、将具有目标性状的玉米与受体自交系进行杂交，获得F1；
S2)、以单倍体诱导系为父本、以S1)所述F1为母本进行杂交，筛选具有目标性状的单倍体；
S3)、以S1)所述受体自交系为父本，以S2)所述单倍体为母本进行杂交获得HBC1群体；
S4)、将所述HBC1群体分穗行种植，以所述HBC1群体单株作为母本、以所述受体自交系作为父本进行回交，连续N代，获得目标性状稳定的株系；所述N为大于等于1的自然数；
S5)、将S4)所述的株系自交获得具有目标性状的受体自交系或将S4)所述的株系与玉米杂交获得具有目标性状的杂交株系。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：S2)所述单倍体诱导系携带显性遗传标记。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：S4)中，所述HBC1群体单株具有所述目标性状且与所述受体自交系中所述目标性状以外的表型相近。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于：S4)中所述1≤N≤5，N为自然数。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于：所述目标性状选自下述任一种或几种：
A1)、所述目标性状为生育期相关性状，例如早熟性；
A2)、所述目标性状为植株性状，例如抗锈病、抗青枯、抗斑病、抗倒伏等；
A3)、所述目标性状为果穗性状，例如穗长、穗粗、穗行数，抗穗腐等；
A4)、所述目标性状为籽粒性状，例如粒长、粒宽、抗粒腐等。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于：所述目标性状选自下述至少一种：抗锈病、抗青枯病、抗斑病和/或抗倒伏。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其特征在于：所述目标性状为抗锈病性状。
8.一种玉米育种的方法，所述方法包括权利要求1-7中任一项所述的S1)-S5)。
9.一种培育抗锈病玉米的方法，所述方法包括权利要求1-7中任一项所述的S1)-S5)。
10.一种玉米目标性状导入的鉴定方法，所述鉴定方法包括鉴定权利要求1-7中任一项中S3)和S4)所述HBC1群体的表型。
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