CN116179522A - 一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体及其应用 - Google Patents

一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN116179522A
CN116179522A CN202211378047.2A CN202211378047A CN116179522A CN 116179522 A CN116179522 A CN 116179522A CN 202211378047 A CN202211378047 A CN 202211378047A CN 116179522 A CN116179522 A CN 116179522A
Authority
CN
China
Prior art keywords
deacetylase
ornithine
variant
lysine
mutant
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202211378047.2A
Other languages
English (en)
Inventor
胡丹
杨帆
王亚迪
赵津津
李岩
张金龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jilin Meihua Amino Acid Co ltd
Original Assignee
Jilin Meihua Amino Acid Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jilin Meihua Amino Acid Co ltd filed Critical Jilin Meihua Amino Acid Co ltd
Priority to CN202211378047.2A priority Critical patent/CN116179522A/zh
Publication of CN116179522A publication Critical patent/CN116179522A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/78—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • C12N9/80—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in linear amides (3.5.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/70—Vectors or expression systems specially adapted for E. coli
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y305/00—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5)
    • C12Y305/01—Hydrolases acting on carbon-nitrogen bonds, other than peptide bonds (3.5) in linear amides (3.5.1)
    • C12Y305/01016—Acetylornithine deacetylase (3.5.1.16)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/185—Escherichia
    • C12R2001/19—Escherichia coli
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提出了一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体及其应用，属于基因工程技术领域。所述乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体其氨基酸序列第85位的脯氨酸突变为丝氨酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1。或者所述乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体其氨基酸序列第85位的脯氨酸突变为苏氨酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3。将携带乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体的大肠杆菌应用于赖氨酸的发酵生产，其赖氨酸产率得到显著提高。乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体1和变体2应用于赖氨酸的发酵生产，其赖氨酸积累量及转化率比出发菌均有显著提高，并且在不同的出发菌上均有正效果。

Description

一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体及其应用
技术领域
本发明涉及基因工程技术领域，具体涉及一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体及其应用。
背景技术
大肠杆菌(Escherichia coli)是革兰氏阴性细菌，具有生长速度快、背景清晰、代谢工程手段成熟的优点。鉴于此，大肠杆菌广泛应用于工业发酵领域，可用于生产L-氨基酸、核苷酸及其他有机酸等。用于生产L-氨基酸，包括赖氨酸、苏氨酸、色氨酸和缬氨酸等，大肠杆菌是非常优良的底盘菌。
赖氨酸是世界上第二大氨基酸生产品种,广泛应用于动物饲料、医药和食品工业。其中约90％用于饲料工业，10％用于食品和医药行业。用于动物饲料添加剂，赖氨酸可帮助机体吸收其他氨基酸，从而提高饲料质量。
从生物化学角度分类，赖氨酸属于天冬氨酸家族氨基酸。大肠杆菌合成赖氨酸，从天冬氨酸开始，经过多步酶催化反应得到赖氨酸。天冬氨酸作为赖氨酸合成的直接前体，前者供应的强化可以有效提高赖氨酸的产率。肠杆菌中催化天冬氨酸生成的一个关键酶是天冬氨酸铵离子裂合酶，该酶由argE基因编码，该酶可将TCA循环的中间产物延胡索酸一步氨化为天冬氨酸。已有研究中提高天冬氨酸铵离子裂合酶的表达效率的方式有多种，包括基因的多拷贝，或启动子的强化表达，或在酶的特定位置的引入氨基酸的突变，导致酶的催化活性或催化效率的变化。
此外，还有大量关于提高赖氨酸合成效率的报道，比如通过强化赖氨酸合成路径的相关基因，来提高相关酶的表达水平。或者优化中央碳代谢的相关基因的表达水平，来重新分配碳流比例。或者强化还原力辅因子的供应，来解除相关的限速瓶颈。除此之外，也有文献报道通过干扰全局调控或压力应答等来改善细胞的调控机理，亦可对氨基酸合成有正效果。
但至今尚未有相关报道，精氨酸代谢路径的基因或酶的变化对赖氨酸的合成有影响。本发明的发明人在多年的研究和实践中发现，精氨酸代谢相关的乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶可微妙的调控赖氨酸的合成。该酶的一些特定的变体，可以显著地提高肠杆菌对赖氨酸的合成效率，从而完成了本发明。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体，及携带其变体的重组菌株的发酵应用。
本发明的技术方案是这样实现的：
本发明提供一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体，所述乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体其第85位的脯氨酸突变为丝氨酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1。
本发明进一步保护编码上述乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2。
本发明进一步保护一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体，所述乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体其第85位的脯氨酸突变为苏氨酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3。
本发明进一步保护编码上述乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体的基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4。
本发明进一步保护一种包含上述乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体的基因的工程菌。
作为本发明进一步的优选，所述工程菌为大肠杆菌。
作为本发明进一步的优选，所述工程菌为赖氨酸生产菌株MHZ-0914，保藏编号为CGMCC No.22648。
本发明进一步保护一种上述工程菌在生产赖氨酸中的应用。
本发明具有如下有益效果：将携带乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体的大肠杆菌应用于赖氨酸的发酵生产，其赖氨酸产率得到显著提高。乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体1和变体2应用于赖氨酸的发酵生产，其赖氨酸积累量及转化率比出发菌均有显著提高，并且在不同的出发菌上均有正效果。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
赖氨酸生产菌株MHZ-0914的保藏编号为CGMCC No.22648，于2021年6月1日保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为：大肠埃希菌Escherichia coli。
模式菌MG1655为MG1655 E.coli Strain，购于上海泽叶生物科技有限公司。
术语解释：
本发明中涉及的基因名称解释如下：Acetylornithinedeacetylase：乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶，缩写为AO。argE：乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶编码基因。
以下实施例中使用的引物序列信息如表1所示：
表1、引物序列信息
引物名称 序列(5’-3’) SEQ ID
pTF-argE-sgRNA-F tcctaggtataatactagtgttcaggacttcatcacatggttttagagctagaaatagc SEQ ID NO.5
pTF-argE-sgRNA-R actagtattatacctaggactgagctagctgtcaag SEQ ID NO.6
argE-P85-UF cattgctttgcgctgaaaca SEQ ID NO.7
argE-P85S-UR ggggcataccgatacggtgagttttgatgacggtcgctgg SEQ ID NO.8
argE-P85S-DF ccagcgaccgtcatcaaaactcaccgtatcggtatgcccc SEQ ID NO.9
argE-P85-DR ggttagaagcgtcgccaccg SEQ ID NO.10
argE-P85T-UR ggggcataccgatacggtgacttttgatgacggtcgctgg SEQ ID NO.11
argE-P85T-DF ggggcataccgatacggtgacttttgatgacggtcgctgg SEQ ID NO.12
argE-P85-F1 ctaaactcgctgatatccga SEQ ID NO.13
argE-P85-R1 tcatagccagggatcggcgg SEQ ID NO.14
实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件，或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可通过正规渠道商购买得到的常规产品。
实施例1在模式菌MG1655中引入乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体1
(1)pTargetF-N20-argE(P85S)质粒及Donor DNA构建
步骤1：使用pTF-argE-sgRNA-F/pTF-argE-sgRNA-R为引物，以质粒pTargetT为模板(可参见Multigene Editing in the Escherichiacoli Genome via the CRISPR-Cas9System，Jiang Y,ChenB,etal.Appl.EnvironMicrobiol，2015)，扩增出带有N20的pTF线性质粒，使用无缝组装Clone Express试剂盒将此线性质粒37℃进行组装，随后转化Trans1-T1感受态细胞，获得pTargetF-N20-argE(P85S)，并进行PCR鉴定及测序验证；
步骤2：以MG1655基因组为模板，选用argE-P85-UF/argE-P85S-UR引物对，扩增出上游同源臂①，选用argE-P85S-DF/argE-P85-DR引物对，扩增出下游同源臂②，以①、②为模板，选用argE-P85-UF/argE-P85-DR引物对，扩增出Donor DNA，Donor DNA的作用是提供同源重组片段。
(2)感受态细胞制备及电转化
步骤1：将pCas质粒(可参见Multigene Editing in the EscherichiacoliGenome via the CRISPR-Cas9 System,JiangY,ChenB,etal.Appl.EnvironMicrobiol，2015)电转入模式株MG1655的感受态细胞中(转化方法及感受态制备方法均参照《分子克隆III》)。
步骤2：挑取单菌落于5mL含卡那霉素和终浓度为10mM阿拉伯糖的LB试管中，30℃，200r/min培养至OD 650为0.4后制备电转感受态细胞(感受态制备方法参照《分子克隆III》)。
步骤3：将(1)中构建得到的pTargetF-N20-argE(P85S)质粒和Donor DNA同时电转入带有pCas的感受态细胞中(电转条件：2.5kV，200Ω，25μF)，涂布于含壮观霉素和卡那霉素的LB平板上，30℃静置培养至单菌落可见。
(3)重组验证
步骤1：使用引物对argE-P85-F1/argE-P85-R1对上述单菌落进行菌落PCR验证；步骤2：将PCR鉴定正确的菌株用引物对argE-P85-F1/argE-P85-R1扩增，扩增产物送测序，以验证序列的完整性。
(4)质粒的消除
步骤1：挑取测序验证正确的单菌落接种于5mL含卡那霉素及终浓度为0.5mM IPTG的LB试管中，30℃过夜培养后划线于含卡那霉素的LB平板上；
步骤2：挑取单菌落对点于含卡那霉素、壮观霉素LB平板和只含卡那霉素的LB平板上，30℃过夜培养，若在含卡那霉素、壮观霉素的LB平板上不能生长，在卡那霉素的LB平板上生长，表明pTargetF-N20质粒已成功消除；
步骤3：挑取pTargetF-N20质粒成功消除的阳性菌落，接种于无抗LB试管中，42℃培养8h后划线于LB平板上，37℃过夜培养；
步骤4：挑取单菌落对点于含卡那霉素LB平板和无抗LB平板上，若在含卡那霉素的LB平板上不能生长，在无抗LB平板上生长，表明pCas质粒丢失，得到的菌株命名为1655-argE85S。
实施例2在菌株MHZ-0914中引入乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体1
实施例2所用到的方法同实施例1，包括工具质粒、Doner DNA、感受态制备和基因重组的筛选方法，区别在于目标改造菌的替换。最后获得的菌株命名为22648-argE85S。
实施例3在模式菌MG1655中引入乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体2
构建原理及方法同实施例1，获得含有目的突变的菌株，其乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶第85位氨基酸突变为苏氨酸，获得的菌株命名为1655-argE85T。
(1)pTargetF-N20-argE(P85T)质粒及Donor DNA构建
步骤1：使用pTF-pykA-sgRNA-F/pTF-pykA-sgRNA-R为引物，以质粒pTargetT为模板，扩增出带有N20的pTF线性质粒，使用无缝组装Clone Express试剂盒将此线性质粒37℃进行组装，随后转化Trans1-T1感受态细胞，获得pTargetF-N20-argE(P85T)，并进行PCR鉴定及测序验证；该质粒用于提供靶向序列，可与pTargetF-N20-argE(P85S)质粒共用。
步骤2：以MG1655基因组为模板，选用argE-P85-UF/argE-P85T-UR引物对，扩增出上游同源臂①，选用argE-P85T-DF/argE-P85-DR引物对，扩增出下游同源臂②，以①、②为模板，选用argE-P85-UF/argE-P85-DR引物对，扩增出Donor DNA。
(2)感受态细胞制备及电转化
步骤1：制备MG1655的感受态细胞，将pCas质粒电转入该感受态细胞中(转化方法及感受态制备方法均参照《分子克隆III》)。
步骤2：挑取单菌落于5mL含卡那霉素和终浓度为10mM阿拉伯糖的LB试管中，30℃，200r/min培养至OD 650为0.4后制备电转感受态细胞(感受态制备方法参照《分子克隆III》)。
步骤3：将(1)中构建得到的pTargetF-N20-argE(P85T)质粒和Donor DNA同时电转入带有pCas的感受态细胞中(电转条件：2.5kV，200Ω，25μF)，涂布于含壮观霉素和卡那霉素的LB平板上，30℃静置培养至单菌落可见。
(3)重组验证
步骤1：使用引物对argE-P85-F1/argE-P85-R1对上述单菌落进行菌落PCR验证；步骤2：将PCR鉴定正确的菌株用引物对argE-P85-F1/argE-P85-R1扩增，扩增产物送测序，以验证序列的完整性。
(4)质粒的消除
步骤1：挑取测序验证正确的单菌落接种于5mL含卡那霉素及终浓度为0.5mM IPTG的LB试管中，30℃过夜培养后划线于含卡那霉素的LB平板上；
步骤2：挑取单菌落对点于含卡那霉素、壮观霉素LB平板和只含卡那霉素的LB平板上，30℃过夜培养，若在含卡那霉素、壮观霉素的LB平板上不能生长，在卡那霉素的LB平板上生长，表明pTargetF-N20质粒已丢失；
步骤3：挑取pTargetF-N20质粒丢失的阳性菌落，接种于无抗LB试管中，42℃培养8h后划线于LB平板上，37℃过夜培养；
步骤4：挑取单菌落对点于含卡那霉素LB平板和无抗LB平板上，若在含卡那霉素的LB平板上不能生长，在无抗LB平板上生长，表明pCas质粒丢失，得到的菌株命名为1655-argE85T。
实施例4在菌株MHZ-0914中引入乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体2
实施例4所用到的方法同实施例3，包括工具质粒、Doner DNA、感受态制备和基因重组的筛选方法，区别在于目标改造菌的替换。最后获得的菌株命名为22648-argE85T。
实施例5重组菌株生产赖氨酸的性能
培养基：
活化培养基：蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，酵母粉5g/L，18g/L琼脂粉，调节pH至7.0。
种子培养基：葡萄糖10g/L，硫酸铵4g/L，酵母膏2.0g/L，磷酸二氢钾3g/L，七水硫酸镁0.4g/L，硫酸亚铁0.01g/L，硫酸锰0.01g/L，pH7.0。
发酵培养基：葡萄糖50g/L，硫酸铵25g/L，酵母膏4.0g/L，磷酸二氢钾1.6g/L，七水硫酸镁1.0g/L，硫酸亚铁0.03g/L，硫酸锰0.03g/L，碳酸钙25，pH7.0。
性能验证方法：
(1)种子活化：从冻存管中取待验证菌株，在种子活化培养基上划线活化，37℃培养12h；
(2)种子培养：挑取平板活化种子1环接至装有20mL种子培养基的500mL三角瓶中，33℃，220r/min振荡培养7h；
(3)发酵培养：将2mL种子液接种至装有20mL发酵培养基的500mL三角瓶中，33℃、220r/min振荡培养12h。
(4)取2mL发酵液离心(12000rpm，2min)，收集上清液，用HPLC检测重组菌与对照菌发酵液中的L-赖氨酸含量，其检测结果如下表2表示(表中数据为三批次平均值)。
表2重组菌株生产赖氨酸的性能测试
菌株 OD L-赖氨酸(g/L) 消耗底糖(g/L) 转化率％ 转化率提升幅度
MG1655 13.2 0.2 29 0.7 --
1655-argE85S 13.3 0.4 31 1.3 85.7％
1655-argE85T 13.4 0.3 25 1.2 71.4％
CGMCC No.22648 12.5 10.5 45 23.3 --
22648-argE85S 12.6 13.0 48 27.1 16.3％
22648-argE85T 12.5 12.3 47 26.2 12.4％
从以上发酵结果可知，携带乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体的菌株比出发菌株的赖氨酸积累量有显著提升。二种变体均有正效果，且在不同的出发菌上均有正效果。尤其在低生产水平的菌株上，其影响程度更为显著。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体，其特征在于，所述乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体其第85位的脯氨酸突变为丝氨酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1。
2.编码权利要求1所述乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.2。
3.一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体，其特征在于，所述乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶变体其第85位的脯氨酸突变为苏氨酸，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3。
4.编码权利要求3所述乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体的基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.4。
5.一种包含权利要求2或4所述乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体的基因的工程菌。
6.根据权利要求5所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌为大肠杆菌。
7.根据权利要求5所述的工程菌，其特征在于，所述工程菌为赖氨酸生产菌株MHZ-0914，保藏编号为CGMCC No.22648。
8.一种如权利要求5-7任一项所述工程菌在生产赖氨酸中的应用。
CN202211378047.2A 2022-11-04 2022-11-04 一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体及其应用 Pending CN116179522A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211378047.2A CN116179522A (zh) 2022-11-04 2022-11-04 一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202211378047.2A CN116179522A (zh) 2022-11-04 2022-11-04 一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN116179522A true CN116179522A (zh) 2023-05-30

Family

ID=86433356

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202211378047.2A Pending CN116179522A (zh) 2022-11-04 2022-11-04 一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN116179522A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5254353B2 (ja) ２−デオキシ−シロ−イノソース（ｄｏｉ）生産細菌及びこれを用いた２−デオキシ−シロ−イノソース（ｄｏｉ）生産方法
CN110468092B (zh) 一株高产l-缬氨酸的基因工程菌及其构建方法与应用
TW200306352A (en) Method for producing L-amino acid
CN109777763B (zh) 一株用于l-茶氨酸生产的基因工程菌及其构建与应用
CN105255849B (zh) 一种酶活提高的谷氨酸脱羧酶突变体构建及其应用
CN110373370B (zh) 一种耦合atp再生系统的催化体系及其在生产谷胱甘肽过程中的应用
CA2942990A1 (en) The use of glycerol with limited feed of carbohydrates for fermentation
CN101463358B (zh) 一种腈水合酶基因簇及其应用
CN106164252A (zh) 用于琥珀酸产生的改进微生物
CN111286520B (zh) 用于发酵生产l-赖氨酸的重组dna、菌株及其应用
US20210324391A1 (en) Recombinant microorganism, preparation method therefor and application thereof in producing coenzyme q10
CN115948402A (zh) 产5-氨基乙酰丙酸的重组希瓦氏菌及其应用
CN116121160A (zh) 过表达pyrB基因的基因工程菌及其生产L-精氨酸的方法
CN116063417A (zh) Bbd29_14255基因突变体及其在制备l-谷氨酸中的应用
CN116179522A (zh) 一种乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶突变体及其应用
JP2024509290A (ja) Ｌ－リジン生産能が向上したコリネバクテリウム・グルタミカム変異株およびこれを用いたｌ－リジンの生産方法
JP2023540518A (ja) Ｌ－リジン生産能が向上したコリネバクテリウムグルタミクム変異株およびこれを用いたｌ－リジンの生産方法
CN101892228B (zh) 一种高丙烯酰胺和丙烯腈耐受性产腈水合酶工程菌及应用
CN110872595A (zh) 抗酸表达盒及其在发酵产有机酸中的应用
CN116536292A (zh) 磷酸葡萄糖酸脱水酶突变体及其应用
CN113604413B (zh) 一种重组菌株及制备方法与应用
CN116640810A (zh) 一种赖氨酸生产方法、突变体及重组微生物与应用
CN113667627B (zh) 一种提高l-谷氨酸生产效率的谷氨酸棒杆菌的构建及应用
CN116640751A (zh) 天冬氨酸铵离子裂合酶突变体及其应用
CN115612681A (zh) 蛋白突变体、重组菌及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination