CN116162565B - 一株乌头白绢病生防芽孢杆菌jy-7-2l及其应用 - Google Patents

一株乌头白绢病生防芽孢杆菌jy-7-2l及其应用 Download PDF

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Abstract

本发明中公开了一株乌头白绢病生防芽孢杆菌JY‑7‑2L，所述芽孢杆菌JY‑7‑2L于2022年7月18日保藏于广东省微生物保藏中心，保藏编号为GDMCCNo.62630。本发明公开的芽孢杆菌JY‑7‑2L能显著抑制白绢病病原菌菌丝生长、菌核形成和萌发，产蛋白质降解酶、葡聚糖降解酶和纤维素降解酶且抗逆性强。本发明同时公开了芽孢杆菌JY‑7‑2L在防治乌头白绢病中的应用。本发明所提供的芽孢杆菌JY‑7‑2L对乌头白绢病有明显的抑制作用，其抑制效果优于商业化的芽孢杆菌剂，可应用于乌头白绢病的防治；本发明的应用方法属于生物防治的范畴，内生菌因定殖在植物体内，不会对药材品质造成影响，避免了农药滥用导致的环境污染、病原菌耐药性等问题，在中药材病害防治方面具有广阔的应用前景。

Description

一株乌头白绢病生防芽孢杆菌JY-7-2L及其应用
技术领域
本发明涉及生防细菌技术领域，尤其涉及一株乌头白绢病生防芽孢杆菌JY-7-2L及其应用。
背景技术
土传病害严重威胁作物生产，随着全球气候变暖，土传病害将是世界未来几十年面临的重大挑战。随着人口增加与大健康产业的发展，国内外对中药材的需求正日益增加。土传病害在中药材种植中普遍存在，大宗中药材如三七、乌头、人参、贝母等的产量均受土传真菌病害如白绢病、根腐病的严重制约。土传病害的严重程度随着中药材种植年限的增加而增加，是中药材连作障碍的主要原因之一，是限制中药材绿色可持续发展的重要瓶颈。然而目前生产上大多缺乏抗病药材品种，土传病害的防治仍以施用化学农药为主，造成环境污染、病原菌耐药性及农残超标等一系列问题。中药材土传病害绿色防控关系国民健康医药基础，亟待解决。
乌头(Aconitum carmichaelii Debx)为毛茛科乌头属药用植物，其子根加工品称附子是我国40种名贵大宗中药材之一，除满足国内需求，川产道地(四川江油)附子还远销俄罗斯、美国、英国等国家，国际国内对附子需求量仍在逐年增加。生产上，乌头采用块根无性繁种。由于抗病品种的缺乏且种植模式单一，土壤中病原菌不断积累，土传病害是制约乌头产量与品质的重要限制因素，其中以白绢病对乌头产量和品质影响最为严重。乌头白绢病的致病菌为齐整小核菌(Sclerotium rolfsii)，属半知菌亚门，无孢目，有性型为罗氏阿太菌(Athelia rolfsii)。该菌主要侵染乌头茎与母根连接部位，染菌后根茎部逐渐腐烂，叶片逐渐萎蔫下垂青枯，地上部逐渐倒伏枯死，染病植株上常有辐射状白色丝绢状菌丝体，染病植株一般绝产。据报道，2020年四川江油的乌头白绢病发病率高达50％，严重地块甚至绝收。目前乌头土传白绢病的防治以化学农药为主，但造成环境污染、重金属超标及病原菌耐药性等问题，乌头白绢病的绿色防治迫在眉睫。
生物防治因其高效经济且绿色环保等特性成为了土传病害绿色防治的研究热点。生防材料(菌)的筛选是生物防治的关键。植物内生菌因定殖在植物体内，与植物形成长期的协同共进化关系，成为植物抵御病原菌侵染不可或缺的重要屏障，是生防材料的重要资源库。植物内生细菌，如放线菌、假单胞菌、芽孢杆菌等在土传病害的防治方面发挥着重要作用，已在小麦、甜菜、番茄等作物上推广应用。但生防内生菌在同样面临土传病害威胁的中药材如乌头的应用却未见报道。为此，以乌头内生菌为切入点筛选高效生防菌株并开发菌剂，为乌头白绢病的绿色防治提供专性生防资源，对中药材产业绿色可持续发展及中医药大健康具有重要意义。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术中存在的用于乌头白绢病的生防微生物较少的问题，提供一株乌头白绢病生防芽孢杆菌JY-7-2L，能显著抑制乌头白绢病病原菌菌丝生长、菌核形成和萌发，同时具有产蛋白质降解酶、纤维素降解酶和葡聚糖降解酶的能力，且对温度、pH、盐浓度及抗生素具有一定的耐受性；以芽孢杆菌JY-7-2L为材料研制的微生物菌肥，可有效降低乌头白绢病发病率。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：一株乌头白绢病生防芽孢杆菌JY-7-2L，所述芽孢杆菌JY-7-2L于2022年7月18日保藏于广东省微生物保藏中心，保藏编号为GDMCC No.62630。
优选地，所述芽孢杆菌JY-7-2L的16S rRNA基因序列如SEQ ID No.1所示；所述芽孢杆菌JY-7-2L的gyrA基因序列如SEQ ID No.2所示。
本发明同时提供上述芽孢杆菌JY-7-2L在防治乌头白绢病中的应用。
优选地，所述芽孢杆菌JY-7-2L的应用形式为芽孢杆菌JY-7-2L的菌悬液、发酵液、无细胞发酵滤液、挥发性气体或菌肥。
本发明还提供了一种生防菌肥，包含上述芽孢杆菌JY-7-2L，所述生防菌肥的制备方法为：将芽孢杆菌JY-7-2L发酵液按50L/吨的量接种到鸡粪堆肥进行固体发酵，发酵过程中每天翻堆1次，发酵5-7d后结束，使芽孢杆菌JY-7-2L达到1×109CFU/g以上，获得JY-7-2L生防菌肥。
优选地，所述芽孢杆菌JY-7-2L发酵液的制备方法为：将芽孢杆菌JY-7-2L单菌落接种到1LLB液体培养基，28℃，170rpm/min培养一周，溶液含菌大于5×109CFU/mL时获得发酵液。
本发明所具有的有益效果：本发明所提供的芽孢杆菌JY-7-2L对乌头白绢病病原菌有明显的抑制作用，可应用于乌头白绢病的防治，减少乌头白绢病的发生；而且本发明的应用方法属于生物防治的范畴，内生菌因定殖在植物体内，不会对药材品质造成影响，避免了农药的滥用导致的环境污染，可以有效提高附子品质，在乌头等中药材病害防治方面具有广阔的发展前景。
附图说明
图1是实施例1中菌株JY-7-2L在LB培养基上的菌落形态图；
图2是实施例1中菌株JY-7-2L在平板上对白绢病病原菌的拮抗效果图，A和B分别为平板对峙试验的对照组和试验组；
图3是实施例1中菌株JY-7-2L在乌头切片上对白绢病病原菌的拮抗效果图，A和B分别为乌头切片试验的对照组和试验组；
图4是实施例2中菌株JY-7-2L基于16S rRNA基因构建的系统发育树；
图5是实施例3中菌株JY-7-2L基于gyrA基因构建的系统发育树；
图6是实施例4中菌株JY-7-2L无细胞发酵滤液对白绢病病原菌菌丝生长的抑制效果，A和B分别为对照组和试验组；
图7是实施例4中菌株JY-7-2L无细胞发酵滤液对白绢病病原菌菌核萌发的抑制效果图。A-D依次为对照组白绢病病原菌菌核在48h、72h、96h、120h时的萌发情况；E-H依次为在48h、72h、96h、120h时JY-7-2L无细胞发酵滤液对白绢病病原菌菌核萌发的抑制情况；
图8是实施例4中菌株JY-7-2L挥发性气体对白绢病病原菌菌丝生长的抑制效果，A和B分别为对照组和试验组；
图9是实施例5中菌株JY-7-2L产蛋白质降解酶、葡聚糖降解酶和纤维素降解酶能力测定的效果图，A-C依次为JY-7-2L在蛋白质降解酶培养基、葡聚糖降解酶培养基和纤维素降解酶培养基产生降解圈的效果图；
图10是实施例7中菌株JY-7-2L发酵液对乌头白绢病的抑制效果；
图11是实施例8中JY-7-2L菌肥对乌头白绢病的抑制效果。
本发明中的芽孢杆菌JY-7-2L保藏于广东省微生物保藏中心(GDMCC)，地址为中国广东省广州市越秀区先烈中路100号，保藏日期为2022年7月18日，保藏编号为GDMCCNo.62630，分类命名为Bacillus subtilis JY-7-2L。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1芽孢杆菌JY-7-2L的分离和筛选
1、乌头内生细菌的分离
本实施例中的乌头植株取自四川省江油市青莲镇邀月村乌头种植地。
具体步骤包括：(1)从健康乌头植株上取下根(主要为附子)、茎、叶，在自来水下反复冲洗干净，注意不要造成物理性伤口，用吸水纸吸干水分。
(2)在超净工作台内先用75％乙醇浸泡1min，然后用无菌水浸泡1min，接着用2％NaClO(有效Cl含量)浸泡5min，无菌水清洗5次，每次浸泡2min并轻微震荡。洗去最后一次清洗液50μL涂布于LB固体培养基，28℃培养一周，观察是否有菌落生长，以检测表面消毒的效果。
(3)表面消毒后，将样品用无菌粉碎机粉碎，并接种于LB固体培养基，28℃暗培养。3d后选取样品组织周围长出的细菌菌落于LB固体培养基进行纯化，最终选取到一个乳白色、不透明、形状不整齐菌体，命名为JY-7-2L(如附图1所示)。3次纯化后检测菌株纯度并用25％甘油保藏于-80℃冰箱。
2、乌头内生细菌与病原菌的平板对峙试验
挑取菌株JY-7-2L的单菌落于LB液体培养基培养至对数生长期，调节菌悬液OD600＝0.2备用；将白绢病病原菌菌饼(直径2mm)接种于PDA固体培养基中心，距病原菌菌饼2.0cm处接种菌株JY-7-2L的菌悬液10μL(OD600＝0.2)，28℃暗培养3d后统计病原菌菌落直径大小，并计算抑菌率(％)＝(对照组病原菌菌落直径-试验组病原菌菌落直径)/对照组病原菌菌落直径×100。结果如附图2所示，图2-A为单接种病原菌的对照处理；图2-B为接种菌株JY-7-2L菌悬液和病原菌的试验组，结果表明，菌株JY-7-2L在平板上对白绢病病原菌的生长具有显著的抑制效果，其对病原菌抑制率为66.63％。
3、乌头内生细菌与病原菌的切片对峙试验
将乌头根部切成1cm厚的圆形薄片，对其进行表面消毒。
挑取菌株JY-7-2L的单菌落于LB液体培养基培养至对数生长期，调节菌悬液OD600＝0.2备用；将10μL菌株JY-7-2L的菌悬液均匀接种于乌头切片表面，风干后，再将白绢病病原菌菌饼(直径2mm)接种于乌头切片中心，28℃暗培养3d后统计病原菌菌落直径，并计算抑菌率(％)＝(对照组病原菌菌落直径-试验组病原菌菌落直径)/对照组病原菌菌落直径×100。结果如附图3所示，图3-A为单接种病原菌的对照处理；图3-B为接种菌株JY-7-2L菌悬液和病原菌的试验组，图3-A和图3-B对比显示，JY-7-2L在乌头切片上对白绢病病原菌的生长具有抑制效果，其对病原菌菌丝生长抑制率为67.92％。
实施例2菌株JY-7-2L的16S rRNA基因鉴定
(1)采用GUTC法提取实施例1中分离筛选得到的菌株JY-7-2L的总DNA，并用1％的琼脂糖凝胶电泳检查DNA的浓度。
(2)采用通用引物27F(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1492R(5’-TACCTTGTTACGACTT-3’)进行16S rDNAPCR扩增，PCR扩增体系为：2×mix 12.5μL，10μmoL/mL的27F 1μL，10μmoL/mL的1492R 1μL，DNA 1μL，ddH2O 9.5μL。PCR扩增条件：94℃预变性5min；94℃变性30s，50℃退火30s，72℃延伸2min，30个循环；72℃总延伸10min。扩增产物用1％的琼脂糖凝胶检测，电泳电压80V，80min。
(3)PCR产物送至北京擎科生物科技有限公司测序，所得序列在NCBI数据库进行比对，根据比对结果选取参比菌株，利用MEGA7.0软件构建系统发育树(图4)，明确其分类地位。
(4)菌株JY-7-2L的16S rRNA基因序列如SEQ ID NO:1所示。系统发育树结果显示，JY-7-2L与Bacillus subtilis JCM_1465聚为一个分支，相似度达到100％，判定为枯草芽孢杆菌。
实施例3菌株JY-7-2L的gyrA基因鉴定
(1)采用GUTC法提取实施例1中分离筛选得到的菌株JY-7-2L的总DNA，并用1％的琼脂糖凝胶电泳检查DNA的质量。
(2)采用引物F(5’-CAGTCAGGAAATGCGTACGTCCTT-3’)和R(5’-CAAGGTAATGCTCCAGGCATTGCT-3’)进行gyrA基因PCR扩增，PCR扩增体系为：2×mix 12.5μL，10μmoL/mL的gyrA引物F 1μL，10μmoL/mL的gyrA引物R 1μL，DNA 1μL，ddH2O 9.5μL。PCR扩增条件：95℃预变性5min；94℃变性45s，60℃退火30s，74℃延伸90s，30个循环；74℃总延伸8min。扩增产物用1％的琼脂糖凝胶检测，电泳电压80V，120min。
(3)PCR产物送至北京擎科生物科技有限公司测序，所得序列在NCBI数据库进行比对，根据比对结果选取参比菌株，利用MEGA7.0软件构建系统发育树(如附图5)，明确其分类地位。
(4)菌株JY-7-2L gyrA基因序列如SEQ ID NO:2所示。系统发育结果显示，JY-7-2L与Bacillus subtilis ATCC 6633聚为一个分支，相似度为98.50％，判定为枯草芽孢杆菌。
实施例4菌株JY-7-2L无细胞发酵滤液对乌头白绢病病原菌生长的抑制作用
1、菌株JY-7-2L对乌头白绢病病原菌菌丝生长和菌核形成的抑制作用
(1)病原菌接种材料：将乌头白绢病病株活化接种到PDA固体培养基上，25℃培养4d备用，使用时用刀片划成长2mm的正方形菌饼。
(2)无细胞发酵滤液：用竹签挑取实施例1筛选的JY-7-2L单菌落至装有50mL LB液体培养基的100mL三角瓶中，然后用已灭菌的棉花塞和报纸封口，在28℃、160rpm/min摇床培养3d后4℃、11000rpm/min离心15min并上清液，用0.22μm无菌针头过滤器将上清液过滤除菌制成无细胞发酵滤液。
(3)将无细胞发酵滤液与PDA培养基按1:4比例混合后按每板25mL制成平板，对照组不混合滤液；待培养基冷却后接种病原菌菌饼于平板中央，设3组重复；25℃恒温培养箱中培养，3d后测定病原菌菌落直径，216h时记录白绢病病原菌产生的菌核数。结果如附图6所示，JY-7-2L发酵滤液处理72h的病原菌直径为2.33±1.22cm，对照组病原菌直径为8.5±0.00cm(图6)。JY-7-2L发酵滤液处理后病原菌形成48.0±25.29个菌核，而对照组形成的菌核数达430.67±18.61个，二者达到极显著差异(p<0.01)，以上数据充分说明JY-7-2L无细胞发酵滤液可以显著(p<0.05)抑制病原菌菌丝生长和菌核的形成。
2、菌株JY-7-2L无细胞发酵滤液对乌头白绢病病原菌菌核萌发的抑制作用
(1)菌核制备：将白绢病病原菌接种于PDA固体培养基上，25℃培养10d后搜集成熟菌核。
(2)操作步骤：将无细胞发酵滤液与PDA培养基按1:4比例混合后制作平板；待培养基冷却后将病原菌菌核接种于平板上，每皿12粒，设3组重复；25℃恒温培养箱中培养，2d后每24h记录菌核萌发数，共观察4d。结果如附图7所示，图7中A-D依次为对照组白绢病病原菌菌核在48h、72h、96h、120h时的萌发情况；E-H依次为在48h、72h、96h、120h时JY-7-2L无细胞发酵滤液对白绢病病原菌菌核萌发的情况。结果显示，对照组菌核于48h全部萌发，JY-7-2L无细胞发酵液处理的菌核直至120h仍没有萌发，二者达到极显著差异(p<0.01)，说明JY-7-2L无细胞发酵液对白绢病病原菌核萌发具有显著抑制作用。
3、JY-7-2L挥发性气体对乌头白绢病病原菌生长的抑制作用
通过平板划线的方式将实施例1分离筛选的JY-7-2L接种到LB固体培养基，28℃培养4d直至菌苔长满整个平板备用。将2mm病原菌菌饼接种于另一个相同尺寸的PDA固体培养基中央，两个平板上下相扣(LB平板在上，PDA平板在下)形成密闭空间，用Parafilm将两个平板密封固定，对照组为空白LB固体平板，3组重复，28℃培养3d后测定病原菌菌落直径。结果如图8所示，JY-7-2L处理的病原菌菌落直径为3.60±1.62cm，对照组病原菌菌落直径为8.50±0.00cm，表明JY-7-2L产生的挥发性气体对病原菌生长有一定的抑制效果。(图8)
实施例5菌株JY-7-2L产蛋白质降解酶、葡聚糖降解酶和纤维素降解酶的能力
蛋白质降解酶培养基：胰蛋白胨5g，酵母粉2.5g，葡萄糖1g，脱脂牛奶7％，琼脂粉15g，蒸馏水1000mL。
葡聚糖降解酶培养基：K2HPO4 1g，酵母粉5g，蛋白胨10g，刚果红0.4g，葡聚糖5g，MgSO4·7H2O 0.1g，琼脂粉15g，蒸馏水1000mL。
纤维素降解酶培养基：羧甲基纤维素钠10g，蛋白胨10g，NaCl 10g，酵母粉5g，琼脂粉15g，蒸馏水1000mL。
将实施例1分离筛选出的菌株JY-7-2L制作成菌悬液，用竹签将菌悬液分别接种到上述3种培养基上，28℃培养5d后，葡聚糖降解酶培养基和纤维素降解酶培养基需用1g/L的刚果红染液染色，15min后用1mol/L的氯化钠溶液脱色，观察菌落周围是否产生降解圈，并分别测量菌落和降解圈的直径。结果如附图9所示，图9中A-C依次为JY-7-2L在蛋白质降解酶培养基、葡聚糖降解酶培养基和纤维素降解酶培养基产生降解圈的效果图；结果表明JY-7-2L能产生蛋白酶、葡聚糖酶和纤维素降解酶，其降解圈直径分别为3.20±0.10cm，3.55±0.02cm和3.34±0.03cm。
实施例6菌株JY-7-2L对温度、pH、盐浓度以及抗生素的耐受性
本实施例使用实施例1分离筛选出的菌株JY-7-2L为供试菌株。
(1)温度：将供试菌株菌悬液点接种于LB平板，分别于4℃、28℃、37℃和65℃热激处理30min后于28℃培养箱恒温培养4d，观察记录菌落生长情况。结果发现，JY-7-2L在上述温度范围的LB培养基均能生长。
(2)pH：将供试菌株菌悬液分别接种于pH为4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0、10.0、11.0的LB培养基，28℃恒温培养4d，观察记录菌落生长情况。结果表明，JY-7-2L在上述pH范围的LB培养基均能生长。
(3)NaCl浓度：将供试菌株菌悬液分别接种于NaCl浓度为1％、2％、3％、4％、5％的LB培养基，以NaCl浓度0.5％为对照，28℃恒温培养4d，观察记录菌落生长情况。结果表明，JY-7-2L在添加上述6个浓度NaCl的LB培养基均能生长。
(4)抗生素及浓度：将供试菌株分别接种于含有硫酸链霉素(Streptomycinsulphate)、硫酸新霉素(Neomycin sulfate)、硫酸卡那霉素(Kanamycin sulfate)浓度为25mg/L、50mg/L、100mg/L、200mg/L、500mg/L的LB培养基，以接种无抗生素LB培养基为对照，28℃恒温培养4d，观察记录菌落生长情况。结果表明，JY-7-2L在含25、50mg/L硫酸链霉素的培养基中可以生长，在含有硫酸新霉素、硫酸卡那霉素的培养基中不能生长。
实施例7菌株JY-7-2L发酵液对乌头白绢病的田间防治效果
试验地点：四川省广元市青川县金家村(乌头种源基地)。该试验地常年种植乌头，种植历史在10年以上。在前期调查中发现，乌头白绢病发病严重。
试验方法：挑取实施例1分离筛选出的JY-7-2L单菌落接入液体LB培养基，28℃170rpm/min培养7d，浓度大于1×109CFU/mL。设置2组处理，分为接菌液处理和不接菌液的空白对照处理，每组处理设置3个重复，每个重复40株植株。于2021年7月30日往乌头根部注射10mL菌液，一个月后进行第二次接菌处理。收获时统计乌头白绢病发病株数，计算乌头白绢病发病率。发病率＝发病株数/总株数×100％，生防率＝(对照组发病率-试验组发病率)/对照组发病率×100％。种源基地的乌头一般不做修根处理。
统计结果显示，接菌处理的乌头白绢病发病率为30.00％，不接菌处理的乌头白绢病发病率为48.13％，接菌处理的病害发生率降低18.13％，JY-7-2L发酵液对乌头白绢病的生防率达到37.66％(图10)。
实施例8 JY-7-2L菌肥对乌头白绢病的田间防治效果
1、JY-7-2L菌肥的制作
发酵液制备：将实施例1分离筛选出的菌株JY-7-2L单菌落接种到1L LB液体培养基，液体发酵一周(培养温度28℃，摇床震荡速度170rpm/min)，含菌大于5×109CFU/mL时获得发酵液。
生防菌肥制备：将发酵液按50L/吨的量接种到鸡粪堆肥进行固体发酵，发酵过程中每天翻堆1次，发酵5-7d后结束，使芽孢杆菌达到1×109CFU/g以上，获得JY-7-2L生防菌肥。
2、JY-7-2L菌肥的应用
试验地点：四川省绵阳市西南科技大学青义校区试验基地。
试验方法：
对照组：不接菌处理
处理组一：乌头种植前，采用JY-7-2L菌肥进行拌种，乌头修根后，往乌头根部施入10g JY-7-2L菌肥；
处理组二：乌头种植前，采用商业化的枯草芽孢杆菌菌剂进行拌种；乌头修根后，往乌头根部施入枯草芽孢杆菌菌剂10mL。
每组处理设置6组重复，每组重复种植30株健康乌头植株。收获时统计乌头白绢病发病株数，计算乌头白绢病发病率和生防率。发病率＝发病株数/总株数×100％，生防率＝(对照组发病率-试验组发病率)/对照组发病率×100％。
试验结果：统计发现，对照组乌头白绢病的发病率为6.39％，处理组一乌头白绢病的发病率为2.67％，JY-7-2L微生物菌肥对乌头白绢病的生防率达到58.23％，具有显著的抑制效果；处理组二乌头白绢病的发病率为5.00％，对乌头白绢病没有显著的抑制效果，乌头内生枯草芽孢杆菌JY-7-2L相较于外源的枯草芽孢杆菌对乌头白绢病有更好的防治效果(图11)。(注：不同小写字母表示在p<0.05水平下，差异显著)
综上，本发明中的芽孢杆菌JY-7-2L能显著抑制乌头白绢病病原菌菌丝生长、菌核形成和核萌发，其可产生蛋白质降解酶、葡聚糖降解酶和纤维素降解酶且抗逆性强，JY-7-2L发酵液和菌肥在田间条件下能显著降低乌头白绢病发病率，对乌头白绢病的田间防治具有非常好的效果。
本发明的说明书和附图被认为是说明性的而非限制性的，在本发明基础上，本领域技术人员根据所公开的技术内容，不需要创造性的劳动就可以对其中一些技术特征做出一些替换和变形，均在本发明的保护范围内。

Claims (5)

1.一株乌头白绢病生防芽孢杆菌JY-7-2L，其特征在于，所述芽孢杆菌(Bacillus subtilis)JY-7-2L于2022年7月18日保藏于广东省微生物保藏中心，保藏编号为GDMCCNo.62630。
2.如权利要求1所述的芽孢杆菌JY-7-2L在防治乌头白绢病中的应用。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述芽孢杆菌JY-7-2L的应用形式为芽孢杆菌JY-7-2L的菌悬液、发酵液、无细胞发酵滤液或菌肥。
4.一种生防菌肥，其特征在于，包含如权利要求1所述的芽孢杆菌JY-7-2L，所述生防菌肥的制备方法为：将芽孢杆菌JY-7-2L发酵液按50L/吨的量接种到鸡粪堆肥进行固体发酵，发酵过程中每天翻堆1次，发酵5-7d后结束，使芽孢杆菌JY-7-2L达到1×109CFU/g以上，获得JY-7-2L生防菌肥。
5.根据权利要求4所述的一种生防菌肥，其特征在于，所述芽孢杆菌JY-7-2L发酵液的制备方法为：将芽孢杆菌JY-7-2L单菌落接种到1L LB培养基中，28℃，170rpm/min培养一周，溶液含菌大于5×109CFU/mL时获得发酵液。
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