CN116148466A - 用于类风湿关节炎诊断的多血清标志物组合 - Google Patents
用于类风湿关节炎诊断的多血清标志物组合 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了用于类风湿关节炎诊断的多血清标志物组合,属于生物检测技术领域。本发明提供了可溶性清道夫受体‑A(SR‑A)联合抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和/或类风湿因子(RF)作为类风湿关节炎的诊断标志物在制备类风湿性关节炎诊断试剂中的应用。利用SR‑A与抗CCP抗体联合诊断RA、SR‑A与RF联合诊断RA以及SR‑A、RF与抗CCP抗体联合诊断RA,均可提高RA诊断敏感性。本发明为RA的早期诊断提供了有效的新方法,有助于RA的早期识别和预测,从而改善预后,同时减少不可逆的关节损伤。
Description
技术领域
本发明属于生物检测技术领域,具体涉及用于类风湿关节炎诊断的多血清标志物组合。
背景技术
类风湿性关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种以慢性、进行性、侵袭性关节炎为主要表现的自身免疫性疾病,未经治疗者 3 年致残率高达75%。流行病学研究显示,在全球RA的患病率为0.5%~1%,在中国RA的患病率为0.28%。RA患者的病程发展具有个体差异,如果未及时进行早期规范的治疗,病情会逐渐发展最终导致关节畸形、功能丧失。
RA的早期诊断对治疗和预后至关重要,早期干预可减缓关节破坏以阻止其不可逆的畸形或残疾。然而,目前由美国风湿病学会(ACR)和欧洲抗风湿病联盟(EULAR)在2010年制定的用于RA诊断的分类标准仍有一定的局限性。类风湿因子(Rheumatoid factor,RF)和抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide antibodies,CCP)抗体是目前临床上常用的血清生物标志物,是ACR/ EULAR 2010分类标准的一部分。RF是一种针对IgG的Fc区的自身抗体,其敏感性和特异性分别为69%和85%。它缺乏疾病特异性,可能发生在5%的健康人、感染和其他自身免疫性疾病中。抗CCP抗体的敏感性和特异性分别为67%和95%,与其他抗体相比且具有较高的特异性,但敏感性有限,仍有约30%不能检测到抗CCP抗体。迄今,仍有待发现具有高敏感性和特异性的RA诊断工具。
发明内容
本发明的目的在于提供多血清标志物联合用于类风湿性关节炎的诊断,将新型生物标志物可溶性清道夫受体-A与临床常用的标志物联合用于RA的诊断,有利于提高临床诊断RA的准确性和敏感性。
本发明提供了可溶性清道夫受体-A(scavenger receptor-A,SR-A)联合抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide antibodies,CCP)抗体和/或类风湿因子(Rheumatoid factor,RF)作为类风湿关节炎的诊断标志物在制备类风湿性关节炎诊断试剂中的应用。
本发明还提供了一种类风湿性关节炎联合诊断试剂,所述类风湿性关节炎联合诊断试剂包括检测可溶性清道夫受体-A和抗CCP抗体表达量和/或含量的试剂。
本发明还提供了一种类风湿性关节炎联合诊断试剂,所述类风湿性关节炎联合诊断试剂包括检测可溶性清道夫受体-A和RF表达量和/或含量的试剂。
本发明还提供了一种类风湿性关节炎联合诊断试剂,所述类风湿性关节炎联合诊断试剂包括检测SR-A、RF和抗CCP抗体表达量和/或含量的试剂。
优选的,以体液为样本。
优选的,所述体液包括血清或关节液。
优选的,包括利用ELISA法检测样本中SR-A及抗CCP抗体的表达量和/或含量;
利用免疫比浊法测定样本中RF的表达量和/或含量。
本发明还提供了一种类风湿性关节炎早期诊断试剂盒,包括上述类风湿性关节炎联合诊断试剂。
优选的,利用ELISA方法检测样本中可溶性清道夫受体-A的含量>1.7024ng/mL时,认定为阳性;
或利用ELISA方法检测样本中抗CCP抗体含量>20U/mL时,认定为阳性;
或采用免疫比浊法测定样本中RF含量>20IU/mL时,认定为阳性。
有益效果:本发明提供了可溶性清道夫受体-A联合抗环瓜氨酸肽抗体和/或类风湿因子作为类风湿关节炎的诊断标志物在制备类风湿性关节炎诊断试剂中的应用,将新型生物标志物SR-A与临床常用的标志物RF和/或抗CCP抗体联合用于RA的诊断,有利于实现提高临床诊断RA的准确性和敏感性。
本发明提供了三种联合诊断方案,即方案一:SR-A、抗CCP抗体;方案二:SR-A、RF、抗CCP抗体;方案三:SR-A、RF。经实施例验证,方案一中SR-A与抗CCP抗体联合诊断RA的敏感性和特异性分别为78%和94%,可在保持高特异性的情况下,将抗CCP抗体诊断RA的敏感性提高11%;方案二中SR-A、RF与抗CCP抗体联合诊断RA的敏感性和特异性分别为80%和85%,可在保持较好的特异性的情况下,将抗CCP抗体诊断RA的敏感性提高13%;方案三中SR-A与RF联合诊断RA的敏感性和特异性分别为73%和86%;具有较好的补充诊断价值。综上,本发明提供了三种不同的联合诊断方案,优选为方案一,其次为方案二,再者为方案三。不同的联合诊断方案为RA的早期诊断提供了有效的新方法,有助于RA的早期识别和预测,从而改善预后,同时减少不可逆的关节损伤。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动性的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为SR-A和抗CCP抗体联合诊断RA的AROC(Covariate-adjusted receiveroperating characteristic curve)曲线;
图2为SR-A、抗CCP抗体和RF联合诊断RA的AROC曲线;
图3为SR-A和RF联合诊断RA的AROC曲线。
具体实施方式
本发明提供了可溶性清道夫受体-A(scavenger receptor-A,SR-A)联合抗环瓜氨酸肽(cyclic citrullinated peptide antibodies,CCP)抗体和/或类风湿因子(Rheumatoid factor,RF)作为类风湿关节炎的诊断标志物在制备类风湿性关节炎诊断试剂中的应用。
在本发明实施例中,在505例血清样本中,经证实SR-A水平升高对诊断RA具有很好的临床应用价值,其敏感性和特异性分别为56%和96%,因此可将SR-A作为新的检测RA的生物标志物。
本发明优选将上述SR-A与其他的常见RA检测标志物进行联合诊断,如①SR-A和抗CCP抗体联合诊断,②SR-A和RF联合诊断,③SR-A、RF和抗CCP抗体联合诊断。本发明基于所述联合诊断的标志物进行RA诊断时,任一标志物诊断为阳性,即认定为RA。
本发明还基于上述联合诊断标志物,制备了三种类风湿性关节炎联合诊断试剂,所述类风湿性关节炎联合诊断试剂包括检测上述三种联合诊断标志物的表达量和/或含量的试剂。
本发明所述三种SR-A联合诊断试剂,优选均以体液为样本,更优选包括血清或关节液。本发明对所述样本中相应标志物的表达量和/或含量的检测方法并没有特殊限定,如mRNA、DNA或蛋白质测定等均可,实施例中优选利用ELISA法检测样本中SR-A及抗CCP抗体的表达量和/或含量;利用免疫比浊法测定样本中RF的表达量和/或含量。
本发明还提供了一种类风湿性关节炎早期诊断试剂盒,包括上述类风湿性关节炎联合诊断试剂。
本发明所述早期诊断试剂盒,包含三套检测方法,即SR-A联合RF、SR-A联合抗CCP抗体以及SR-A联合RF和抗CCP抗体。在本发明中,基于上述三种中的任一种检测方法进行检测时,只需要其中一个标志物检测阳性,即认定为RA。在本发明实施例中,优选利用ELISA方法检测样本中SR-A的含量>1.7024ng/mL时,认定为阳性;或利用ELISA方法检测样本中抗CCP抗体含量>20U/mL时,认定为阳性;或采用免疫比浊法测定样本中RF含量>20IU/mL时,认定为阳性。
为了进一步说明本发明,下面结合附图和实施例对本发明提供的用于类风湿关节炎诊断的多血清标志物组合进行详细地描述,但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
505份血清样本(血清样本收集及相关临床检测均由北京大学人民医院完成),所有血清由北京大学人民医院风湿免疫科自2013年至2019年收集。该研究获得了北京大学人民医院研究伦理委员会的审核批准,包括:215份RA患者血清,45份系统性红斑狼疮(SLE)患者血清,30份干燥综合征(SS)患者血清,36份骨关节炎(OA)患者血清,179份健康人血清。RA患者符合2010年ACR和EULAR的RA诊断标准,SLE、SS和OA患者符合各自的诊断或分类标准。
方案一:将SR-A与抗CCP抗体联合用于RA诊断。本研究队列中SR-A的敏感性和特异性分别为56%和96%,抗CCP的敏感性和特异性分别为67%和98%。SR-A与抗CCP抗体联合诊断RA的敏感性和特异性分别为78%和94%,可在保持高特异性的情况下,将抗CCP抗体诊断RA的敏感性提高11%。协变量调整ROC分析结果如图1所示,调整年龄和性别后SR-A和抗CCP抗体的ROC曲线下面积(AAUC)分别为0.82和0.90,SR-A联合抗CCP抗体后AAUC仍可以保持在0.90。
方案二:将SR-A、 RF与抗CCP抗体三者联合用于RA诊断。本研究队列中SR-A的敏感性和特异性分别为56%和96%;RF的敏感性和特异性分别为65%和88%;抗CCP的敏感性和特异性分别为67%和98%。SR-A与RF、抗CCP抗体联合诊断RA的敏感性和特异性分别为80%和85%,可在保持较高特异性的情况下,将抗CCP抗体诊断RA的敏感性提高13%。协变量调整ROC分析结果如图3所示,调整年龄和性别后SR-A、RF和抗CCP抗体的ROC曲线下面积(AAUC)分别为0.82、0.73和0.90,SR-A联合抗CCP抗体后AAUC仍可以保持在0.90。
方案三:将SR-A与RF联合用于RA诊断。本研究队列中SR-A的敏感性和特异性分别为56%和96%,RF的敏感性和特异性分别为65%和88%。SR-A与RF联合诊断RA的敏感性和特异性分别为73%和86%。协变量调整ROC分析结果如图2所示,调整年龄和性别后SR-A和RF的ROC曲线下面积(AAUC)分别为0.82和0.73,SR-A联合RF后AAUC为0.83。
对比例:分别以SR-A、抗CCP抗体以及RF的任意一种以及任意两种的组合作为标志物进行类风湿性关节炎的诊断标志物,评价其敏感性和特异性,结果如表4所示,并不是任何几种标志物的组合对于类风湿关节炎的诊断效果都好于单个标志物,而是特定的标志物组合才具有更好的诊断效能。
综上可知,本发明提供了三种不同的联合诊断方案,优选为方案一,SR-A联合抗CCP抗体用于RA诊断时可以取得更好的诊断效能;其次为方案二,SR-A、 RF与抗CCP抗体三者联合用于RA诊断;再者为方案三,将SR-A与RF联合用于RA诊断。不同的联合诊断方案为RA的早期诊断提供了有效的新方法,有助于RA的早期识别和预测,从而改善预后,同时减少不可逆的关节损伤。
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述,但它仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部实施例,人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例,这些实施例都属于本发明保护范围。
Claims (9)
1.可溶性清道夫受体-A联合抗环瓜氨酸肽抗体和/或类风湿因子作为类风湿关节炎的诊断标志物在制备类风湿性关节炎诊断试剂中的应用。
2.一种类风湿性关节炎联合诊断试剂,其特征在于,所述类风湿性关节炎联合诊断试剂包括检测可溶性清道夫受体-A和抗环瓜氨酸肽抗体表达量和/或含量的试剂。
3.一种类风湿性关节炎联合诊断试剂,其特征在于,所述类风湿性关节炎联合诊断试剂包括检测可溶性清道夫受体-A和类风湿因子表达量和/或含量的试剂。
4.一种类风湿性关节炎联合诊断试剂,其特征在于,所述类风湿性关节炎联合诊断试剂包括检测可溶性清道夫受体-A、类风湿因子和抗环瓜氨酸肽抗体表达量和/或含量的试剂。
5.根据权利要求2~4任一项所述类风湿性关节炎联合诊断试剂,其特征在于,以体液为样本。
6.根据权利要求5所述类风湿性关节炎联合诊断试剂,其特征在于,所述体液包括血清或关节液。
7.根据权利要求5所述类风湿性关节炎联合诊断试剂,其特征在于,包括利用ELISA法检测样本中可溶性清道夫受体-A及抗环瓜氨酸肽抗体的表达量和/或含量;
利用免疫比浊法测定样本中类风湿因子的表达量和/或含量。
8.一种类风湿性关节炎早期诊断试剂盒,其特征在于,包括权利要求2~7任一项所述类风湿性关节炎联合诊断试剂。
9.根据权利要求8所述类风湿性关节炎早期诊断试剂盒,其特征在于,利用ELISA方法检测样本中可溶性清道夫受体-A的含量>1.7024ng/mL时,认定为阳性;
或利用ELISA方法检测样本中抗环瓜氨酸肽抗体含量>20U/mL时,认定为阳性;
或采用免疫比浊法测定样本中类风湿因子含量>20IU/mL时,认定为阳性。
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