CN116139181B - 一种含益生菌益生元的组合物及其在制备缓解妇科炎症制剂中的应用 - Google Patents

一种含益生菌益生元的组合物及其在制备缓解妇科炎症制剂中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种含益生菌益生元的组合物及其在制备缓解妇科炎症制剂中的应用。基于该组合物开发的凝胶产品利于增强阴道免疫力，提高自我修护能力，维持阴道内菌群和酸碱平衡，能发挥缓解妇科炎症的作用。本发明提供的含益生菌益生元的组合物，按重量份计，所述组合物包括灭活唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)0.01～0.03份、灭活格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)0.01～0.03份、脱乙酰壳多糖0.10～0.50份、茯苓提取物0.001～0.010份和半乳糖阿拉伯聚糖0.20～0.80份。

Description

一种含益生菌益生元的组合物及其在制备缓解妇科炎症制剂 中的应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，特别涉及一种含益生菌益生元的组合物及其在制备缓解妇科炎症制剂中的应用。
背景技术
妇科炎症是指生殖器官出现炎症，究其根本是由于菌群失衡导致的。阴道菌群平衡对女性的生殖健康具有重要的意义，健康女性的阴道黏膜定植有100种菌，涵盖了多种益生菌和条件致病菌。其中典型的益生菌包括乳酸杆菌、双歧杆菌、消化球菌、拟杆菌、葡萄球菌等益生菌，约占阴道菌群总量60％，致病菌主要是金黄色葡萄球菌、白色念珠菌、滴虫、霉菌、阴道加德纳菌、淋球菌、淋病奈瑟菌等。
有研究表明，99％的健康女性阴道中都含有乳酸杆菌，其中70％的乳酸杆菌都是阴道内的优势定植菌。乳酸杆菌在维持阴道内环境稳态的过程中发挥着重要作用，可分解阴道内糖原产生乳酸、过氧化氢和细菌素，维持阴道内酸性环境。正常情况下阴道内pH在3.8～4.2左右，可抵抗病原体侵袭，保持阴道内环境稳定。乳酸杆菌数量降低会引起阴道pH值上升、酸性减弱，进而造成阴道加德纳菌、类杆菌等致病菌群大量增殖，引发不同程度的妇科炎症。
常见的临床治疗妇科炎症主要采用抗生素疗法、洗液冲洗疗法、中药提取物疗法和益生菌疗法，但四种治疗方式都存在不同的弊端。
(一)抗生素疗法：常见的抗生素有甲硝唑和替硝唑，主要是通过杀灭阴道内所有的细菌达到治疗效果，使用抗生素治疗后，菌群平衡被破坏，自我修护时间较长，更有甚者会因为治疗不当丧失自我调节能力。长期使用抗生素也会造成某种致病菌产生耐药性，从而病情反反复复，难以根治。由于患者的个体差异性，还会存在一定的过敏风险，严重时可能导致休克或死亡。如“CN201310473234.3甲硝唑阴道膨胀栓及其制备方法和检测方法”，公开了使用甲硝唑为原料制备阴道消毒胀栓，该专利虽然可以短期内具有杀菌效果，但是强调的“疗效好”有一定的争议，甲硝唑治疗易复发，对患者的身心健康产生不利影响；
(二)洗液冲洗疗法：市面上的洗液主要是通过冲洗阴道来达到杀菌作用，洗液中的表面活性剂大多都是中性或是偏碱性，使阴道pH值升高，打破正常菌群平衡和酸性环境，从而降低阴道的抵抗力。而且洗液的刺激性较大，容易伤害黏膜和皮肤，所以女性每日只需清水清洗即可，不必过度清洁。如“CN201610709030.9一种杀菌修护清洗剂、制备方法及其应用”，公开了一种添加5-15％表面活性剂的杀菌修护清洗剂，高添加量必然会对阴道pH值产生影响，破坏酸碱平衡，长期使用容易复发；
(三)中药提取物疗法：目前添加中草药提取物的外用药数不胜数，但一般使用的中草药提取物中有效成分用量较少，修复护理效果不理想，治疗时间长，给患者的心理额外增加负担。如“CN201910739266.0一种治疗霉菌性阴道炎的妇科凝胶制剂及其制备方法”中公开了一种添加大黄、金银花、蛇床子、黄连和苦豆子的妇科凝胶制剂，但其中的主要功效成分添加量用量较少，难以达到良好的杀菌效果。
(四)益生菌疗法：得益于当前对益生菌如火如荼的研究，市面上出现了许多治疗妇科炎症的益生菌产品，如“CN201610538135.2一种阴道益生菌凝胶及盛装凝胶的阴道益生菌填塞治疗器”，公开了一种添加益生菌活菌的凝胶产品，主要功效成分为乳酸杆菌和双歧杆菌。该专利中添加了益生菌活菌，但是活菌对保质期、保存条件有严格的要求，为了保持益生菌在贮存、使用过程中的活性，在益生菌活菌制剂中还需加入保护剂和稳定剂，增加生产成本的同时还会对阴道内部环境产生影响，而且活菌对于生存环境要求较高，在阴道内定植困难难以发挥益生作用。同时，该专利只限定益生菌为乳酸杆菌和双歧杆菌而没有限定具体的菌株，乳酸杆菌和双歧杆菌为大种属的益生菌，许多菌株非阴道原有有益优势菌，不限定菌株难以保证外加菌株对原有微生态环境的影响，因而可能出现外加益生菌菌株定植困难、恢复原有微生态环境的菌群平衡调节作用效果存疑等问题。
由上述对比及分析结果可知：(1)抗生素疗法易导致阴道内菌群失衡，自我修护时间长，自我调节能力差，有过敏、病菌耐药性及病情反复的风险；(2)洗液疗法刺激性较大，对阴道内酸碱平衡产生较大影响，破坏阴道免疫力；(3)中药疗法治疗时间长效果不明显；(4)现有益生菌活菌疗法原料及产品保存条件苛刻，保存成本高，效果不稳定。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种含益生菌益生元的组合物。基于该组合物开发的凝胶产品利于增强阴道免疫力，提高自我修护能力，维持阴道内菌群和酸碱平衡，能发挥缓解妇科炎症的作用。
本发明的另一目的在于，提供上述含益生菌益生元的组合物在制备缓解妇科炎症制剂中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：
一种含益生菌益生元的组合物，包括按质量份计的以下组分：
灭活唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)0.01～0.03份、灭活格氏乳杆菌(Lactobacillus gasseri)0.01～0.03份、脱乙酰壳多糖0.10～0.50份、茯苓提取物(Poriacocos extract)0.001～0.010份和半乳糖阿拉伯聚糖(Galactoarabinan)0.20～0.80份。
优选的，所述组合物包括按质量份计的以下组分：
灭活唾液乳杆菌0.02份、灭活格氏乳杆菌0.02份、脱乙酰壳多糖0.30份、茯苓提取物0.005份和半乳糖阿拉伯聚糖0.5份。
所述的灭活唾液乳杆菌是将唾液乳杆菌在120～180℃烘箱处理50～90min得到。
所述的灭活格氏乳杆菌是将格氏乳杆菌在120～180℃烘箱处理50～90min得到。
所述的茯苓提取物是将茯苓粉用氢氧化钠水溶液提取得到的提取液经干燥得到。
所述茯苓提取物的制备方法包括如下步骤：
将20～80目茯苓粉与0.3～0.9mol/L氢氧化钠水溶液在料液比(g/mL)1:10～1:50、提取温度35℃～45℃的条件下提取1.5h～4h，所得提取液经冷冻干燥得到茯苓提取物。
一种含益生菌益生元的凝胶产品，含有上述含益生菌益生元的组合物。
一种含益生菌益生元的凝胶产品的制备方法，包括如下步骤：
(1)将0.01～0.03重量份灭活唾液乳杆菌、0.01～0.03重量份灭活格氏乳杆菌、0.10～0.50重量份脱乙酰壳多糖和0.001～0.010重量份茯苓提取物溶于100重量份水中，搅拌均匀；
(2)然后向步骤(1)所得溶液中加入0.20～0.80重量份半乳糖阿拉伯聚糖，搅拌均匀，获得含益生菌益生元的组合物溶液。
(3)向步骤(2)所得溶液中添加凝胶基质，加热搅拌后即得所述凝胶产品。
步骤(2)所述的凝胶基质为卡波姆。
步骤(2)所述的凝胶基质的添加量为0.2wt％～0.5wt％。
所述的含益生菌益生元的组合物及含益生菌益生元的凝胶产品在制备用于缓解妇科炎症的制剂中应用。
所述的含益生菌益生元的组合物在制备抑菌产品中的应用。
所述抑菌产品对引起妇科炎症的病原菌具有抑制作用，所述病原菌包括白假丝酵母菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌。
本发明提供的技术方案具有如下有益效果：
本发明提供一种含益生菌益生元的组合物，与现有技术相比，其优势在于本发明提供的组合物，采用特定配比的灭活唾液乳杆菌、灭活格氏乳杆菌、脱乙酰壳多糖、茯苓提取物和半乳糖阿拉伯聚糖组合而成，各组分之间相互配合作用，能起到很好的妇科炎症缓解作用，同时对引起临床常见的阴道炎的病原菌例如白假丝酵母(Candida albicans)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠埃希菌(Escherichia coli)等的过度生长具有显著抑制作用，还能促进乳酸杆菌的生长，帮助乳酸杆菌重新成为优势菌群。
本发明的组合物中引入特定的灭活格氏乳杆菌和灭活唾液乳杆菌，本发明人发现通过引入这两种灭活菌有助于提高特异性免疫、抑制炎症反应和增强粘附能力，同时两种灭活菌还可以为阴道内同种属的格氏乳杆菌和唾液乳杆菌提供营养成分，有助于阴道内原有益生菌快速增殖，重新成为阴道优势菌，从而达到维持阴道内菌群平衡和酸碱平衡，增强自我修护能力，帮助阴道进行自我调节的作用；同时配合使用脱乙酰壳多糖、茯苓提取物和半乳糖阿拉伯聚糖，所形成的组合物不仅能对引起妇科炎症的病原菌(特别是白假丝酵母菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌)的过度生长起到抑制作用，同时抑制炎症因子的表达，起到缓解炎症作用；配合使用半乳糖阿拉伯聚糖，为阴道内的原有益生菌的生长提供能量，各组分配合达到协同抗菌、消炎、促进阴道菌群平衡生物作用，还能提高抗体水平，降低感染风险。
本发明产品原料易保存，较使用活菌产品效果稳定；各组分为天然来源原料，对粘膜刺激性小，利于维持修护阴道内环境。
附图说明
图1为实验一中实施例1和空白对照组中对大肠埃希菌的抑制作用结果图；该结果为对菌液稀释10000倍的菌落计数对比结果。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
下面实施方案中若未注明具体试验条件，则通常按照常规试验条件或按照试剂公司所建议的试验条件。所使用的材料、试剂等，若无特殊说明，均为从商业途径得到的试剂和材料。
实验材料：
1.菌株：唾液乳杆菌购自丰华生物科技股份有限公司；格氏乳杆菌购自上海交大昂立股份有限公司；白假丝酵母菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和嗜酸乳杆菌均购自广东省微生物菌种保藏中心；
2.培养基原料：麦芽琼脂培养基、MRS肉汤、蛋白胨、胰蛋白胨、酵母提取物、牛肉浸膏和琼脂均购自广东环凯微生物科技有限公司；氯化钠购自天津大茂化学试剂厂；明胶购自上海国药试剂有限公司；维生素E购自源叶生物有限公司。
3.培养基配制：(1)麦芽琼脂培养基：称取40g麦芽琼脂培养基，加入1L蒸馏水，于121℃下灭菌20min备用；(2)营养琼脂培养基：称取10g蛋白胨、5g牛肉浸膏、5g氯化钠和15g琼脂，除琼脂外其他成分溶于1L蒸馏水中，调节pH至7.2～7.4，加入琼脂，加热溶解，于121℃下灭菌20min备用；(3)胰蛋白胨培养基：称取10g胰蛋白胨、5g酵母提取物、10g氯化钠和15g琼脂，除琼脂外其他成分溶解于1L蒸馏水中，调节pH至7.0，加入琼脂，加热溶解，于121℃灭菌20min备用；(4)MRS液体培养基：称取54g MRS肉汤，加入1L蒸馏水，于121℃下灭菌20min备用；(5)MRS固体培养基：称取54g MRS肉汤，20g琼脂，加入1L蒸馏水，于121℃下灭菌20min备用。
实施例1
一种益生菌益生元的组合物由下述重量份的原料构成：灭活唾液乳杆菌0.01份、灭活格氏乳杆菌0.01份、脱乙酰壳多糖0.10份、茯苓提取物0.001份和半乳糖阿拉伯聚糖0.20份。
其中，灭活唾液乳杆菌和灭活格氏乳杆菌按照如下方法得到：将唾液乳杆菌和格氏乳杆菌在120℃烘箱处理50min得到灭活唾液乳杆菌和灭活格氏乳杆菌；
茯苓提取物按照如下方法得到：将20目茯苓粉与0.3mol/L氢氧化钠水溶液在料液比1:10，提取温度为35℃条件下提取1.5h，滤液冷冻干燥得到茯苓提取物。
基于上述益生菌益生元的组合物制备凝胶产品的步骤包括：
(1)将灭活唾液乳杆菌、灭活格氏乳杆菌、脱乙酰壳多糖和茯苓提取物溶于100重量份水中，搅拌均匀得溶液A；
(2)然后向溶液A中加入半乳糖阿拉伯聚糖，搅拌均匀即得一种含益生菌益生元的组合物溶液。
(3)向上述溶液中添加0.2wt％卡波姆，60℃搅拌至呈浅黄色透明啫喱状，即得一种含益生菌益生元的组合物的妇科凝胶。
实施例2
一种益生菌益生元的组合物由下述重量份的原料构成：灭活唾液乳杆菌0.02份、灭活格氏乳杆菌0.02份、脱乙酰壳多糖0.30份、茯苓提取物0.005份和半乳糖阿拉伯聚糖0.50份。
其中，灭活唾液乳杆菌和灭活格氏乳杆菌按照如下方法得到：将唾液乳杆菌和格氏乳杆菌在150℃烘箱处理60min得到灭活唾液乳杆菌和灭活格氏乳杆菌；
茯苓提取物按照如下方法得到：将50目茯苓粉与0.6mol/L氢氧化钠水溶液在料液比1:30，提取温度为40℃条件下提取2h，滤液冷冻干燥得到茯苓提取物。
基于上述益生菌益生元的组合物制备凝胶产品的步骤包括：
(1)将灭活唾液乳杆菌、灭活格氏乳杆菌、脱乙酰壳多糖和茯苓提取物溶于100重量份水中，搅拌均匀得溶液A；
(2)然后向溶液A中加入半乳糖阿拉伯聚糖搅拌均匀即得一种含益生菌益生元的组合物溶液。
(3)向上述溶液中添加0.4wt％卡波姆，60℃搅拌至呈浅黄色透明啫喱状，即得一种含益生菌益生元的组合物的妇科凝胶。
实施例3
一种益生菌益生元的组合物由下述重量份的原料构成：灭活唾液乳杆菌0.03份、灭活格氏乳杆菌0.03份、脱乙酰壳多糖0.50份、茯苓提取物0.01份和半乳糖阿拉伯聚糖0.80份。
其中，灭活唾液乳杆菌和灭活格氏乳杆菌按照如下方法得到：将唾液乳杆菌和格氏乳杆菌在180℃烘箱处理90min得到灭活唾液乳杆菌和灭活格氏乳杆菌；
茯苓提取物按照如下方法得到：将80目茯苓粉与0.9mol/L氢氧化钠水溶液在料液比1:50，提取温度为45℃条件下提取4h，滤液冷冻干燥得到茯苓提取物。
基于上述益生菌益生元的组合物制备凝胶产品的步骤包括：
(1)将灭活唾液乳杆菌、灭活格氏乳杆菌、脱乙酰壳多糖和茯苓提取物溶于100重量份水中，搅拌均匀得溶液A；
(2)然后向溶液A中加入半乳糖阿拉伯聚糖，搅拌均匀即得一种含益生菌益生元的组合物溶液。
(3)向上述溶液中添加0.5wt％卡波姆，60℃搅拌至呈浅黄色透明啫喱状，即得一种含益生菌益生元的组合物的妇科凝胶。
对照例1和实施例2相比，没有加入灭活格氏乳杆菌
一种益生菌益生元的组合物由下述重量份的原料构成：灭活唾液乳杆菌0.02份、脱乙酰壳多糖0.30份、茯苓提取物0.005份和半乳糖阿拉伯聚糖0.50份。
其中，灭活唾液乳杆菌按照如下方法得到：将唾液乳杆菌在150℃烘箱处理60min得到灭活唾液乳杆菌；
茯苓提取物按照如下方法得到：将50目茯苓粉与0.6mol/L氢氧化钠水溶液在料液比1:30，提取温度为40℃条件下提取2h，滤液冷冻干燥得到茯苓提取物。
基于上述益生菌益生元的组合物制备凝胶产品的步骤包括：
(1)将灭活唾液乳杆菌、脱乙酰壳多糖和茯苓提取物溶于100重量份水中，搅拌均匀得溶液A；
(2)然后向溶液A中加入半乳糖阿拉伯聚糖搅拌均匀即得一种含益生菌益生元的组合物溶液。
(3)向上述溶液中添加0.4wt％卡波姆，60℃搅拌至呈浅黄色透明啫喱状，即得一种含益生菌益生元的组合物的妇科凝胶。
对照例2和实施例2相比没有加入灭活唾液乳杆菌
一种益生菌益生元的组合物由下述重量份的原料构成：灭活格氏乳杆菌0.02份、脱乙酰壳多糖0.30份、茯苓提取物0.005份和半乳糖阿拉伯聚糖0.50份。
其中，灭活格氏乳杆菌按照如下方法得到：将格氏乳杆菌在150℃烘箱处理60min得到灭活格氏乳杆菌；
茯苓提取物按照如下方法得到：将50目茯苓粉与0.6mol/L氢氧化钠水溶液在料液比1:30，提取温度为40℃条件下提取2h，滤液冷冻干燥得到茯苓提取物。
基于上述益生菌益生元的组合物制备凝胶产品的步骤包括：
(1)将灭活格氏乳杆菌、脱乙酰壳多糖和茯苓提取物溶于100重量份水中，搅拌均匀得溶液A；
(2)然后向溶液A中加入半乳糖阿拉伯聚糖搅拌均匀即得一种含益生菌益生元的组合物溶液。
(3)向上述溶液中添加0.4wt％卡波姆，60℃搅拌至呈浅黄色透明啫喱状，即得一种含益生菌益生元的组合物的妇科凝胶。
对照例3和实施例2相比，没有加入脱乙酰壳多糖
一种益生菌益生元的组合物由下述重量份的原料构成：灭活唾液乳杆菌0.02份、灭活格氏乳杆菌0.02份、茯苓提取物0.005份和半乳糖阿拉伯聚糖0.50份。
其中，灭活唾液乳杆菌和灭活格氏乳杆菌按照如下方法得到：将唾液乳杆菌和格氏乳杆菌在150℃烘箱处理60min得到灭活唾液乳杆菌和灭活格氏乳杆菌；
茯苓提取物按照如下方法得到：将50目茯苓粉与0.6mol/L氢氧化钠水溶液在料液比1:30，提取温度为40℃条件下提取2h，滤液冷冻干燥得到茯苓提取物。
基于上述益生菌益生元的组合物制备凝胶产品的步骤包括：
(1)将灭活唾液乳杆菌、灭活格氏乳杆菌和茯苓提取物溶于100重量份水中，搅拌均匀得溶液A；
(2)然后向溶液A中加入半乳糖阿拉伯聚糖搅拌均匀即得一种含益生菌益生元的组合物。
(3)向上述溶液中添加0.4wt％卡波姆，60℃搅拌至呈浅黄色透明啫喱状，即得一种含益生菌益生元的组合物的妇科凝胶。
对照例4
参考专利CN201710812600.1制作含活性益生菌的妇科凝胶包囊。
(1)将益生菌干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和嗜酸乳杆菌按照活菌数比例1:1:1:1混合，在MRS液体培养基37℃培养。当培养液pH达到4.5时，停止发酵，此时益生菌菌液中活菌数为1×1010CFU/mL；
(2)将明胶和水按照质量比9:91混合，加热搅拌使明胶完全溶解，获得明胶溶液，将其冷却至40℃，然后与步骤(1)得到的活性益生菌菌液按照质量比1:1混合均匀；
(3)将1wt％琼脂、2wt％明胶、1wt％维生素E溶于水中，加热搅拌使体系完全溶解，获得的囊膜胶液制成厚度为0.3mm的外层囊膜；
(4)将步骤(2)得到的含活性益生菌菌液的内包凝胶灌装到步骤(3)制备的外层囊膜中，制得球形或椭球形的凝胶包囊颗粒，即得到妇用阴道活性益生菌凝胶包囊。
对照例5和对照例4相比，40℃放置1个月
参考专利CN201710812600.1制作含活性益生菌的妇科凝胶包囊。
(1)将益生菌干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和嗜酸乳杆菌按照活菌数比例1:1:1:1混合，在MRS液体培养基37℃培养。当培养液pH达到4.5时，停止发酵，此时益生菌菌液中活菌数为1×1010CFU/mL；
(2)将明胶和水按照质量比9:91混合，加热搅拌使明胶完全溶解，获得明胶溶液，将其冷却至40℃，然后与步骤(1)得到的活性益生菌菌液按照质量比1:1混合均匀；
(3)将1wt％琼脂、2wt％明胶、1wt％维生素E溶于水中，加热搅拌使体系完全溶解，获得的囊膜胶液制成厚度为0.3mm的外层囊膜；
(4)将步骤(2)得到的含活性益生菌菌液的内包凝胶灌装到步骤(3)制备的外层囊膜中，制得球形或椭球形的凝胶包囊颗粒，即得到妇用阴道活性益生菌凝胶包囊。
(5)将所得妇用阴道活性益生菌凝胶包囊在40℃条件下放置1个月即可。
对照例6和实施例1相比，40℃放置1个月
一种益生菌益生元的组合物由下述重量份的原料构成：灭活唾液乳杆菌0.02份、脱乙酰壳多糖0.30份、茯苓提取物0.005份和半乳糖阿拉伯聚糖0.50份。
其中，灭活唾液乳杆菌按照如下方法得到：将唾液乳杆菌在150℃烘箱处理60min得到灭活唾液乳杆菌；
茯苓提取物按照如下方法得到：将50目茯苓粉与0.6mol/L氢氧化钠水溶液在料液比1:30，提取温度为40℃条件下提取2h，滤液冷冻干燥得到茯苓提取物。
基于上述益生菌益生元的组合物制备凝胶产品的步骤包括：
(1)将灭活唾液乳杆菌、脱乙酰壳多糖和茯苓提取物溶于100重量份水中，搅拌均匀得溶液A；
(2)然后向溶液A中加入半乳糖阿拉伯聚糖搅拌均匀即得一种含益生菌益生元的组合物溶液。
(3)向上述溶液中添加0.4wt％卡波姆，60℃搅拌至呈浅黄色透明啫喱状，即得一种含益生菌益生元的组合物的妇科凝胶。
(4)将所得一种含益生菌益生元的组合物的妇科凝胶在40℃条件下放置1个月即可。
测试例1组合物的应用功效验证
乳酸杆菌的分离与纯化：用无菌棉拭子取健康女性阴道侧壁上1/3分泌物，涂布在MRS固体培养基上，37℃厌氧培养48h。挑取单菌落，MRS液体培养基37℃，150rpm/min厌氧培养24h后，4℃，4000rpm/min离心10min，取上清液备用。
临床常见的阴道炎大多由白假丝酵母(Candida albicans)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、大肠埃希菌(Escherichia coli)等病原菌过度生长引起，所以选取白假丝酵母菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌为实验菌种。将白假丝酵母菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌分别于麦芽琼脂培养基、营养琼脂培养基和胰蛋白胨培养基37℃培养24h，无菌水清洗三遍，调整为1×108CFU/mL备用。
乳酸杆菌分别与白假丝酵母菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌按体积比2∶1混合，分别加入实施例1-3和对照例1-6的样品(其中此处所用实施例1-3、对照例1-3和对照例6的样品为不添加卡波姆的组合物溶液，对照例4-5中只取益生菌菌液)，共培养4h。随后取样加入到麦芽琼脂培养基、营养琼脂培养基、胰蛋白胨培养基和MRS固体培养基中，37℃培养24h，对应观察各样品组培养液中白假丝酵母菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、乳酸杆菌的生长情况。空白对照为乳酸杆菌分别与白假丝酵母菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌按2∶1体积混合共培养4h，随后取样加入到麦芽琼脂培养基、营养琼脂培养基、胰蛋白胨培养基和MRS固体培养基中，37℃培养24h，实验结果如表1和图1所示。
表1.乳酸杆菌与病原菌共培养后各菌群数量情况
注：a，p＜0.05(与空白对照对比)；b，p＜0.05(与对照例1对比)；c，p＜0.05(与对照例2对比)；d，p＜0.05(与对照例3对比)；e，p＜0.05(与对照例4对比)；f，p＜0.05(与对照例5对比)；g，p＜0.05(与对照例6对比)。
由上述实验可知，乳酸杆菌与白假丝酵母、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和试验样品共培养后，与空白对照相比，添加实施例1-3组合物的菌液中白假丝酵母、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌数量显著下降，乳酸杆菌数量明显提高；添加对照例1-3组合物的菌液中白假丝酵母、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌数量显著性减少，乳酸杆菌数量显著性增多，但与实施例1-3相比，抑菌能力明显较差，且对乳酸杆菌数量的提高幅度明显弱于实施例1-3；相比于空白对照，添加对照例4益生菌菌液的菌液中抑菌效果显著，乳酸杆菌数量显著性增加，但抑菌效果和乳酸杆菌数量与实施例1-3、对照例1-3仍有较大差距。对照例5与对照例4相比，白假丝酵母菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌数量明显增加，乳酸杆菌数量显著性降低，说明加速试验后干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和嗜酸乳杆菌活性降低，抑菌效果下降，对乳酸杆菌数量的影响减少。对照例6相对于实施例1，白假丝酵母菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌和乳酸杆菌数量无显著性变化，说明加速试验对于实施例1的抑菌效果和乳酸杆菌的影响较小，可忽略。由实验结果可见，本发明组合物中所添加的组分之间存在紧密的配合作用，缺一不可，否则对抑菌效果和对乳酸杆菌数量的提升效果产生消极影响；高温加速试验后并未对该发明组合物的抑菌效果产生影响。
综上所述，本发明组合物对白假丝酵母、金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌生长具有显著的抑制作用，同时能促进乳酸杆菌的生长，帮助乳酸杆菌重新成为优势菌群。且灭活格氏乳杆菌和灭活唾液乳杆菌较干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、罗伊氏乳杆菌和嗜酸乳杆菌稳定性更好，使用效果更佳。
测试例2
针对于缓解阴道炎的测试，我们招募了50名20-50岁常年被阴道炎困扰的女性志愿者，分五组，每组志愿者人数为10人。其中3组分别使用实施例1-3，2组采用对照例1和对照例4进行试用。使用方法：睡前用清水冲洗外阴，人体平躺，将实施例样品凝胶用注射器缓缓推进阴道，一次性推入凝胶，每天一次，七天为一个周期，使用两个周期后，停用两个月后回访阴道炎复发率，具体结果如下表：
表2
参与测试的志愿者普遍具有白带异常、外阴瘙痒、灼热并伴有异味的症状，阴道分泌物的湿涂片中可检出经线索细胞，镜检得知患有不同程度阴道炎。使用实施例1-3后，见效率高达100％，白带变透明，呈蛋清样或白色糊状，无异味，量少，且试用过程无明显不适合感，两个月后回访均反馈没有复发；对照例1在试用完两个周期后，8人反馈有明显改善，有2人反馈改善作用不明显，在试用完两个月后，有2个症状改善的试用者反馈阴道炎症有复发；试用对照例4两周后，有5人反馈有明显改善，见效率为50％，另外5人仍被白带异常、瘙痒异味困扰，在试用完2个月后，有3个症状改善的试用者出现阴道炎症复发症状。综上分析，实施例1、2、3实验品具有明显的改善阴道炎症作用，有效率高、复发率低。
本领域技术人员可以理解，在本说明书的教导之下，可对本发明做出一些修改或调整。这些修改或调整也应当在本发明权利要求所限定的范围之内。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种缓解妇科炎症的含益生菌益生元的组合物，其特征在于是由以下质量份计的组分组成：
灭活唾液乳杆菌0.01～0.03份、灭活格氏乳杆菌0.01～0.03份、脱乙酰壳多糖0.30份、茯苓提取物0.005份和半乳糖阿拉伯聚糖0.50份；
所述的灭活唾液乳杆菌是将唾液乳杆菌在120～180℃烘箱处理50～90min得到；
所述的灭活格氏乳杆菌是将格氏乳杆菌在120～180℃烘箱处理50～90min得到；
所述的茯苓提取物是将茯苓粉用氢氧化钠水溶液提取得到的提取液经干燥得到。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于所述组合物是由以下质量份计的组分组成：
灭活唾液乳杆菌0.02份、灭活格氏乳杆菌0.02份、脱乙酰壳多糖0.30份、茯苓提取物0.005份和半乳糖阿拉伯聚糖0.5份。
3.一种缓解妇科炎症的含益生菌益生元的凝胶产品，其特征在于是由权利要求1～2任一所述含益生菌益生元的组合物制成。
4.一种缓解妇科炎症的含益生菌益生元的凝胶产品的制备方法，其特征在于包括如下步骤：
（1）将0.01～0.03重量份灭活唾液乳杆菌、0.01～0.03重量份灭活格氏乳杆菌、0.10～0.50重量份脱乙酰壳多糖和0.001～0.010重量份茯苓提取物溶于100重量份水中，搅拌均匀；
（2）然后向步骤（1）所得溶液中加入0.20～0.80重量份半乳糖阿拉伯聚糖，搅拌均匀，获得含益生菌益生元的组合物溶液；
（3）向步骤（2）所得溶液中添加凝胶基质，加热搅拌后即得；
所述的茯苓提取物是将茯苓粉用氢氧化钠水溶液提取得到的提取液经干燥得到。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于：
步骤（3）所述的凝胶基质为卡波姆；
步骤（3）所述的凝胶基质的添加量为0.2wt%～0.5wt%。
6.权利要求1～2任一所述的含益生菌益生元的组合物在制备用于缓解妇科炎症的制剂中的应用。
7.权利要求3所述的含益生菌益生元的凝胶产品在制备用于缓解妇科炎症的制剂中的应用。
8.权利要求1～2任一所述的含益生菌益生元的组合物在制备抑菌产品中的应用。
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微生态调节剂在治疗细菌性阴道病中的作用和展望;于敏, 霍继明;中国微生态学杂志;第17卷(第04期);311-314 *

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